KR101380140B1

KR101380140B1 - 트리아세틸-3-히드록실페닐아데노신 및 혈지조절에 대한 용도

Info

Publication number: KR101380140B1
Application number: KR1020117021795A
Authority: KR
Inventors: 하이보 주; 쑹 우; 링화 하오; 카이 취; 핑 주; 싱 왕; 웨이 리
Original assignee: 인스티투트 오브 마타리아 메디카, 차이니즈 아카데미 오브 메디칼 사이언스
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2009-03-10
Publication date: 2014-04-01
Also published as: EP2407474B1; ES2435620T3; CN101874036A; EP2407474A4; IL215080A; US20120053143A1; KR20110117257A; EP2407474A1; CN101712709A; IL215080A0; JP5698682B2; CN101874036B; US8435962B2; JP2012519714A; DK2407474T3; WO2010040286A1

Abstract

본 발명에서는 구조식(Ⅰ)의 트리에틸아세틸-3-히드록실페닐아데노신과 제조방법 및 그 약물조합물의 용도에 대하여 설명하였다. 구체적으로 말하면 한가지 새로운 화합물인 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신을 공개하였다. 상술한 화합물의 제조방법으로는 이노신을 원료로 하여 아세트산 무수물의 아세틸화, 염화티오닐의 염화치환반응 및 3-염산아닐린의 치환 방응을 거쳐 얻었다. 또한 트리에틸아세틸-3-히드록실페닐아데노신을 함유한 약물조합물도 공개하였다. 상술한 약물조합물의 제제에는 정제, 캡슐제, 환제, 주사제, 지효성제제, 방출조절제 혹은 기타 미립자투약계 등이 있다. 본 발명의 화합물은 고지질혈증에 대하여 예방과/혹은 치료 작용이 있으며 혈지를 활성화시키는 작용이 선명하고 부작용이 작으며 체내에서의 대사가 느린 등 우점이 있다.

Description

트리아세틸-3-히드록실페닐아데노신 및 혈지조절에 대한 용도{Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine and its use for regulating blood fat}

본 발명의 내용에는 트리아세틸-3-히드록실페닐아데노신 화합물 및 그 제조방법, 본 화합물을 함유한 기타 약제 조성물, 그리고 고지질혈증에 관한 약물의 치료방법과 용도가 포함되어 있는데 본 발명은 의약기술 영역에 속한다.

대량의 기초연구 재료와 임상실험에서 증명하다시피 고지질혈증에는 과콜레스테롤혈증, 과트라이글리세라이드혈증 그리고 복합성고지질혈증이 포함되는데 이는 뇌졸증, 관동맥성심장병, 심근경색, 급성심장사 등을 일으키는 중요한 위험인자에 속한다. 그외, 고지질혈증은 고혈압, 당분내성이상증세 및 당뇨병의 중요한 원인요소이기도 하다. 고지질혈증은 또한 지방간, 간경화, 췌장염, 안저출혈, 실명, 주위혈관병변 및 고요산혈증의 원인이기도 하다.

현재 임상에서 응용되고 있는 혈지(blood fat)를 조절하는 약물에는 콜레스테롤생합성효소억제제를 대표로 하는 스타틴류가 있는데 이는 HMG-CoA환원효소를 억제하여 체내의 콜레스테롤의 내인성 합성을 감소시켜 저밀도 지질단백콜레스테롤(LDL-C)의 래원을 감소시키는 작용을 한다. 동시에 간세포 표면의 LDL 수용체의 표달을 증가 혹은 격활시켜 혈액 중의 LDL의 함량을 감소시키는 작용을 한다. 그외, 혈지를 조절하는 약물에는 또 피브레이트류 약물이 있는데 이는 과산화소체증식체활성화수용체(PPARs) 전사인자를 격활시켜 트라이글리세라이드의 수평을 감소하는 작용을 한다. 상술한 두가지 부류의 약물은 목전 혈지를 조절하는 약물의 주류로서 임상효과가 선명하고 약물 복용량이 적으며 생물학적 이용도가 높다. 그러나 간손상과 횡문근융해증 등 엄중한 불량반응을 일으키는데 이는 스타틴류와 피브레이트류 약물의 제일 엄중한 안전성 문제에 속한다.

서방의 제약회사에서 개발한 신약의 패턴과 비교할 경우, 우리 나라에서는 약효가 특출한 전통 중초약으로부터 새로운 혈지를 조절하는 선도화합물을 많이 발견하는데 이는 우리 나라의 국정에 맞는 새로운 약물연구의 패턴이라고 볼 수가 있다. 수많은 중초약의 성분 중에는 혈지조절에 약효가 있으며 불량반응이 상대적으로 적고 응용전경이 좋은 성분들이 많이 있다. 예를 들면 산사중에 함유된 트리터펜 성분은 체내의 콜레스테롤의 합성을 억제하며 콜레스테롤을 재빨리 없애는 작용을 한다. 대황, 결명자 그리고 하수오 중에는 안트라퀴논이라는 활성성분이 있는데 이는 장운동을 촉진시키고 콜레스테롤의 대사를 증가하는 작용을 한다. 택사의 혈지를 낮추는 작용은 택사에 함유한 트리터펜 화합물과 연관이 있는데 이는 콜레스테롤의 내인성 대사를 문란시키는 작용을 한다. 단삼의 단삼캅소체외모형에서 방영될 수 있는 바 단삼은 콜레스테롤의 합성을 억제하는 작용을 한다. 적작은 담즙산의 배설을 증가시키며 돌외에 포함된 돌외사포닌은 혈액 중의 LDL-C와 총 콜레스테롤 그리고 트리글리세리드의 수평을 감소하여 HDL-C의 수평을 증가하는 작용을 한다.

본 발명에서 해결할 주요 기술문제는 하나의 새로운 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신 화합물이다.

본 발명에서 해결할 또다른 하나의 기술문제는 일종의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신 화합물의 제조방법이다.

본 발명에서 해결할 다른 하나의 기술문제는 일종의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신을 함유한 약제 조성물이다.

본 발명에서 해결할 새로운 하나의 기술문제는 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신의 고지질혈증에 대한 예방 혹은 치료작용을 일으키는 약물 제조에서의 용도이다.

이상의 기술문제를 해결하기 위하여 본 발명에서는 아래와 같은 기술방안을 채용하였다.

본 발명의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신의 구조식(Ⅰ)은 아래와 같다.

본 발명의 다른 한 방면인 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신의 제조방법은 아래와 같다.

첫 단계: 이노신을 유기용매와 혼합한 다음 아세트산 무수물을 방울방울 떨어뜨려 반응시킨 후 2',3',5'-트리-O-아세틸이노신을 얻는다.

두번째 단계: 2',3',5'-트리-O-아세틸이노신과 SOCl₂를 반응시켜 2',3',5'-트리-O-아세틸-6-클로로아데노신을 얻는다.

세번째 단계: 2',3',5'-트리-O-아세틸-6-클로로아데노신 원료와 3-아미노페놀을 유기용매 중에서 반응시킨 후 순화정제 과정을 거쳐 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신을 얻는다.

기중 R는 3-히드록실페닐이다.

첫 단계에서 제기된 유기용매는 피리딘을 사용하였고 아세트산 무수물의 온도는 -5~5℃, 아세트산 무수물을 다 떨어뜨린 다음 온도를 20~30℃까지 상승시켰다.

두번째 반응은 트리에틸아민이 존재한 조건하에서 진행되였다.

세번째 반응의 순화정제 과정은 컬럼 크로마토그래피를 사용하였는데 용리제는 초산에틸과 석유에테르를 사용하였고 사용 비율은 2:1이다.

본 발명의 또다른 하나의 내용은 약제 유효량을 함유한 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신 화합물과 약학적으로 허용가능한 운반체를 포함하였다. 이 약제 조성물은 본 영역에서 공인된 방법을 통하여 제조하였는데 본 발명의 화합물을 한가지 혹은 여러가지의 약학적으로 허용되는 고체 혹은 액체 부형제와/혹은 보조제를 결합시켜 사람과 동물에 모두 사용가능한 임의의 제제로 제조하였다. 본 발명의 화합물이 약제 조성물에서 차지하는 함량은 보통 0.1-95중량%이다.

본 발명의 화합물 혹은 본 발명의 화합물을 함유한 약제 조성물은 단위 투여량의 형식으로 투여되는데 투여 경로에는 장내 혹은 비장내 투여방식, 예를 들면 구강복용, 정맥주사, 근육주사, 피하주사, 비강, 구강점막, 안구, 페와 호흡도, 피부, 음도, 직장 등을 통한 투여방식이 있다.

약물의 제제에는 액체제제, 고체제제 혹은 반고체제제가 있다. 액체제제에는 용액제(참용액과 교질용액), 유제(O/W형, W/O형과 복합유), 혼탁액, 주사액(액체주사제와 분말주사제), 점안제, 점비제, 세제와 도찰제 등이 있다. 고체제제에는 정제(보통정, 장용정, 함약정, 분산정, 저작정, 발포정, 구강붕해정), 캡슐(하드캡슐, 소프트캡슐과 장용캡슐), 과립제, 산제, 펠렛제, 환제, 좌약, 막제, 패치, 기무제, 분말제, 분무제 등이 있다. 반고체제제에는 연고제, 젤리제, 습포제 등이 있다.

본 발명의 화합물은 보통 제제로 제조될 수도 있고 지효성제제, 방출조절제, 표적지향제 혹은 기타 미립자투약계로 제조될 수도 있다.

본 발명의 화합물을 정제로 제조하기 위해서는 본 영역에서 광범위하게 사용되는 각종 부형제를 사용할 수 있다. 이러한 부형제에는 희석제, 접합제, 습윤제, 붕해제, 윤활제, 조류제가 포함된다. 희석제에는 녹말, 덱스트린, 자당, 포도당, 유당, 만니톨, 솔비톨, 자일리톨, 미정질셀룰로오스, 류산칼슘, 인산수소칼슘, 탄산칼슘 등이 있고 습윤제에는 물, 에틸알콜, 이소프로필알콜이 있으며 접합제에는 녹말풀, 덱스트린, 당시럽, 꿀, 포도당용액, 미정질셀룰로오스, 아카시아풀, 젤라틴풀, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 아크릴수지, 카보머, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌글리콜 등이 있다. 붕해제에는 드라이스타치, 미정질셀룰로오스, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 크로스 폴리비닐피롤리돈, 크로스 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 카복시메틸스타치나트륨, 탄산수소나트륨, 구연산, 폴리옥시에틸렌솔비톨지방산에스테르, 도데실황산나트륨 등이 있고 윤활제와 조류제에는 탤컴파우더, 이산화규소, 경지산염, 타르타르산, 유동 파라핀, 폴리에틸렌글리콜 등이 있다.

상술한 정제를 진일보 코팅정으로 제조할 수도 있는데 례를 들면 당코팅정, 박막코팅정, 장용해코팅정 혹은 이중정과 다층정 등이 있다.

투약단위를 캡슐로 제조하기 위하여 유효성분인 본 발명 화합물과 희석제, 조류제를 혼합한 후 혼합물은 직접 하드캡슐 혹은 소프트캡슐 중에 넣어서 제조할 수도 있다. 또한 본 발명의 화합물을 먼저 희석제, 접합제, 붕해제와 함께 혼합하여 과립 혹은 미완으로 제조한 다음 다시 하드캡슐 혹은 소프트캡슐에 넣어서 제조할 수도 있다. 본 발명의 화합물의 정제에서 사용될 수 있는 각종 희석제, 접합제, 습윤제, 붕해제, 조류제의 품종이 본 발명의 캡슐제의 제조에도 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물을 주사제로 제조하기 위하여 물, 에틸알콜, 이소프로필알콜, 말론알데히드 혹은 이들의 혼합물을 용매로 하고 적당양의 본 영역에서 사용되는 증용제, 용해촉진제, pH조절제, 삼투압조절제를 넣어서 제조될 수 있다. 증용제 혹은 용해촉진제에는 폴록사머, 레시틴, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린 등이 있고 pH조절제에는 인산염, 초산염, 염산, 수산화나트륨 등이 있다. 삼투압조절제에는 염화나트륨, 만니톨, 포도당, 인산염, 초산염 등이 있다. 만약에 동결건조주사제로 제조할 경우에는 만니톨, 포도당 등을 지탱제로 더 넣을 수도 있다.

그외, 만약 수요된다면 약물제제에 적당한 양의 착색제, 방부제, 향료, 교미제 혹은 기타 첨가제를 더 넣을 수도 있다. 본 발명의 약제 조성물에는 기타 종류의 혈지를 조절하는 작용이 있는 약물도 포함된다.

본 발명의 또다른 방면에서는 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신의 고지질혈증에 대한 예방/혹은 치료작용을 일으키는 약제 응용분야를 포함하는데 혈지조절에 대한 활성이 명확하고 약물 독성과 부작용이 적으며 체내의 대사를 지연시키는 작용이 있다.

약물의 목적에 도달하기 위하여, 그리고 치료작용을 증가시키기 위하여 본 발명의 약물 혹은 약제 조성물은 임의의 공인된 투여경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물의 약제 조성물의 투여량은 예방 혹은 질병에 대한 치료성질과 엄중정도, 그리고 환자 혹은 동물의 개체정황에 따라서 투여 경로와 제제 등에는 큰 범위내에서의 변화가 있을 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물의 하루동안 수요되는 적합한 투여량 범위는 0.001-150mg/kg인데 우선으로 0.1-100mg/kg, 더 우선으로 1-60mg/kg, 제일 우선으로는 2-30mg/kg을 사용한다. 상술한 투여량은 한개 혹은 몇개의 용량 단위로 나누어서 투여될 수 있는데 이는 의사의 임상경험이나 기타 치료수단과의 결합정황에 따라서 다를수 있다.

본 발명의 화합물 혹은 조합물은 단독으로 복용될 수도 있고 기타 치료약물 혹은 같은 병에 적용되는 기타 약물과 병용하여 사용될 수도 있다. 본 발명의 화합물과 기타 치료약물이 협동작용을 일으킬 때 반드시 실제정황에 근거하여 투여량을 조절하여야 한다.

아래의 실시예를 통하여 진일보 본 발명에 대하여 설명하였다. 그러나 본 발명이 아래의 제한을 받는다는 뜻은 아님을 밝힌다.

¹H-NMR이 모든 정황하에서 일치한 구조를 반영하였다. 특징화학적이동(δ)은 테트라메틸모노실레인 자기장보다 낮은 백만분으로 표시하였는데 그중 경상적으로 사용되는 간략어로 주요한 피크를 명명하였다. 례를 들면 s,싱글피크; d,이중피크; t,삼중피크; q,사중피크; m,다중피크; br,브로드피크; dd,쌍이중피크로 표시하였다. 질량스펙트럼(m/z)은 이온화기법(ESI)으로 기록하였다. 흔히 사용되는 용매는 아래의 간략어로 표시하였다. DMSO,다이메틸설폭사이드.

실시예 1:

2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신(WS070117)의 합성

첫 단계: 5.36g의 이노신을 25mL의 피리딘과 혼합한 다음 0℃의 빙욕조건하에서 아세트산 무수물 16mL을 방울방울 떨어뜨린 후 실온에서 6시간 반응시키고 TLC방법으로 반응의 종지여부를 검측한다. 감압증발법으로 대부분의 피리딘을 증발한 후 냉각시키고, 물을 첨가하여 흡인여과한 다음 수세정을 거쳐 백색의 고체(트리-O-아세틸이노신) 7.55g을 얻는다.

두번째 단계: 상술한 생성물 5.5g에 50mL의 다이클로로메티인과 1mL의 DMF를 혼합한 후 40℃까지 온도를 상승시킨 후 3.3g의 SOCl₂를 함유한 CHCl₂액을 방울방울 떨어뜨린 후 역류시킨다. 6시간 후에 TLC방법으로 반응의 종지여부를 검측한다. 반응용액을 다이클로로메테인으로 희석한 후 포화탄산수소나트륨 용액으로 두번 씻어내고 다시 포화류화나트륨으로 두번 씻은후 무수류산나트륨으로 건조시킨다. 마지막에 감압증발방법으로 용매를 증발시킨 후 트리-O-아세틸-6-클로로아데노신 5.4g을 얻는다.

세번째 단계: 상술한 트리-O-아세틸-6-클로로아데노신 5.4g과 3-아미노페놀 4.28g에 무수에티알콜 30mL, 트리에틸아민 3.96g을 혼합한 후 60℃에서 8시간 반응한 후 용매를 증발시키고 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 순화정제하였다. 용리제는 초산에틸과 석유에테르를 사용하였고 사용 비율은 2:1이다. 마지막에 백색의 고체 1.51g을 얻었다.

약리학 실험

실시예 2:

WS070117 약물이 고지질혈증모형 랫트 혈지수평에 대한 영향

방법:

2.1 모형의 건립과 실험소조

동물을 사양요구에 따라 1주일간 사양한 다음 모형을 건립한다. 정상적인 대조조 외에 모든 랫트는 고지방 사료를 4주일간 먹인 후 꼬리를 통하여 채혈하여 혈청콜레스테롤(TC)과 트리글리세리드(TG)의 함량을 측정한다. 상술한 함량과 체중에 근거하여 임의로 6개의 소조로 나누는데 모형대조조, 양성대조약 심바스타틴정조(2 mg/kg), 양성대조약 페노피브레이트조(50 mg/kg), WS070117고용량조(12 mg/kg), WS070117 중용량조(6 mg/kg), WS070117 저용량조(3 mg/kg) 등이 있으며 매조에 20마리씩이다.

2.2 약물투여

각조의 랫트들은 모형건립 4주후부터 매일 위내투여방식으로 하루에 한번씩 약물을 투여한다. 정상적인 대조조와 모형대조조는 동일한 체적의 증류수(10ml/kg)를 투여한다.

2.3 각항 지표의 검측

랫트에게 연속 4주 동안 약물투여한 후 12시간 동안 금식하고 45 mg/kg의 펜토바르비탈나트륨을 복강주사하여 마취시킨다. 다시 100 U/kg 체중단위의 헤파린을 미정맥주사한 후 15분후에 복부주동맥을 거쳐 피를 뽑고 혈청을 분리한 후 테스트 설명서 요구에 따라 혈청속의 TC, TG, 고밀도지질단백콜레스테롤(HDL-C), 저밀도지질단백콜레스테롤(LDL-C), 알라닌아미노전이효소(ALT), 유리된 지방산(FFA)의 함량을 측정한다. 또한 간 또는 복부후벽의 지방을 취하여 중량을 측정한 후 간지수 및 지방지수를 구해낸다. 일부분의 간조직은 호모제네이트를 만들어 테스트의 설명서에 따라 호모제네이트 중 함유한 수퍼옥시드디스무타아제(SOD)와 말론알데히드(MDA)의 함량을 측정한다. 나머지 동물들의 투약은 정지하며 고지방 사료는 계속 투여한다. 2주일 후 안구정맥채혈을 통하여 혈청속의 TC, TG의 함량을 측정한다.

결과 1: 고지질혈증 랫트의 혈지에 대한 영향

결과에서 알 수 있는 바 랫트에게 고지방사료를 연속 투여한 후 혈청속의 TC, TG, LDL-C의 함량은 현저히 상승하였고 HDL/LDL의 수치는 감소되였으며 혈청속의 유리된 지방산의 함량은 상승하였다. 이는 고지질혈중 랫트의 모형이 성공적으로 복제되였다는 것을 설명한다. WS070117로 약물치료를 진행한 후 혈청중의 상승되였던 TC, TG, LDL-C의 함량이 현저히 감소되였고 HDL/LDL의 수치는 상승되였다. 이는 WS070117가 선명한 혈지조절 약효가 있다는 것을 설명한다. WS070117(6mg/kg)가 랫트의 유리된 지방산의 함량을 현저히 감소시켰다. (결과는 표 1에 표시된 바와 같다.)

표 1. WS070117가 고지질혈증의 랫트의 혈지에 대한 조절작용

정상대조조와 비교하였을 때 ^# P＜0.05，^## P＜0.01，^### P<0.001； 모형대조조와 비교하였을 때 ^* P＜0.05，^** P＜0.01，^*** P<0.001.

결과 2: 고지질혈증 랫트의 복부 후벽의 지방중량에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 랫트에게 연속으로 고지방 사료를 투여한 후 복부 후벽의 지방중량이 현저히 증가되였다. WS070117로 약물치료한 후 지방의 중량은 선명히 감소되였다. 이는 WS070117가 복부 후벽의 지방의 축적에 대하여 현저한 감소작용이 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 2에서 확인할 수 있다.)

표 2. WS070117로 약물치료한 후 고지질혈증 랫트의 복부 후벽의 지방중량에 대한 영향

정상대조조와 비교했을 때 ^# P＜0.05，^## P＜0.01，^### P<0.001； 모형대조조와 비교했을 때 ^* P＜0.05，^** P＜0.01，^*** P<0.001.

결과 3. 고지질혈증 랫트 간조직의 SOD, MDA 함량에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 고지질혈증 랫트 모형의 간조직의 MDA 함량은 현저히 증가되였고 SOD 활성은 감소되였다. 심바스타틴정, 페노피브레이트와WS070117로 약물치료한 후 랫트 간조직의 SOD 활성은 현저히 상승되였고 12 mg/kg 용량의 WS070117로 치료한 소조의 랫트 간조직의 MDA 함량은 선명히 감소되였다. 이는 항산화 작용이 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 3에서 확인할 수 있다.)

표 3. WS070117가 고지질혈증 랫트 간조직의 SOD, MDA 함량에 대한 영향

결과 4: 고지질혈증 랫트 간조직의 중량, 혈청속의 ALT 활성에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 랫트에세 연속 고지방의 사료를 투여한 후 혈청속 ALT의 활성은 모두 일정한 정도의 상승추세를 보였으나 통계학적 의의는 존재하지 않았다. 모형대조조 랫트의 간지수는 현저히 상승되였다. (결과는 표 4에서 확인할 수 있다.)

표 4. WS070117가 고지질혈증 랫트 간조직의 중량, 혈청속의 ALT 활성에 대한 영향

결과 5: 약물투여 정지 2주후 랫트의 혈지의 변화

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 랫트에게 약물투여 정지한 2주후 혈청의 TC 함량은 모형대조조에 비해 현저히 감소되었고 TG 함량은 선명한 상승추세를 보였다. 이는 WS070117의 혈지 조절작용은 약물투여 정지후 2주 이상 유지될 수 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 5에서 확인할 수 있다.)

표 5. WS070117를 투여 정지한 후 고지질혈증 랫트 혈청속 혈지의 변화에 대한 영향

실시예 3

WS070117가 고지질혈증모형의 골든햄스터 혈지에 대한 영향

방법:

3.1 모형의 건립과 실험소조

동물을 사양요구에 따라 1주일간 사양한 다음 모형을 건립한다. 정상적인 대조조외에 모든 골든햄스터는 고지방 사료를 4주일간 먹인 후 꼬리를 통하여 채혈하여 혈청콜레스테롤(TC)과 트리글리세리드(TG)의 함량을 측정한다. 상술한 함량과 체중에 근거하여 임의로 6개의 소조로 나누는데 모형대조조, 양성대조약 심바스타틴정조(2 mg/kg), 양성대조약 페노피브레이트조(50 mg/kg), WS070117고용량조(12 mg/kg), WS070117 중용량조(6 mg/kg), WS070117 저용량조(3 mg/kg) 등이 있으며 매조에 12마리씩이다.

3.2 약물투여

각조의 골든햄스터는 모형건립 4주후부터 매일 위내투여방식으로 하루에 한번씩 약물을 투여한다. 정상적인 대조조와 모형대조조는 동일한 체적의 증류수(10ml/kg)를 투여한다.

3.3 각항 지표의 검측

골든햄스터에게 연속 4주 동안 약물투여한 후 매조에서 임의로 10마리씩 꺼내여 12시간 동안 금식하고 안구정맥채혈을 통하여 피를 뽑고 혈청을 분리한 후 테스트 설명서 요구에 따라 혈청속의 TC, TG, HDL-C, LDL-C의 함량을 측정한다. 또한 간 또는 복부후벽의 지방을 취하여 중량을 측정한 후 지방지수를 구해낸다. 일부분의 간조직은 호모제네이트를 만들어 테스트의 설명서에 따라 호모제네이트 중 함유한 SOD와 MDA의 함량을 측정한다. 나머지 동물들의 투약은 정지하며 고지방 사료는 계속 투여한다. 2주일 후 안구정맥채혈을 통하여 혈청속의 TC, TG의 함량을 측정한다.

결과 1: 고지질혈증 골든햄스터의 혈지에 대한 영향

결과에서 알 수 있는 바 골든햄스터에게 고지방사료를 연속 투여한 후 혈청속의 TC, TG, LDL-C의 함량은 현저히 상승하였고 HDL/LDL의 수치는 감소되였으며 혈청속의 유리된 지방산의 함량은 상승하였다. 이는 고지질혈중 골든햄스터의 모형이 성공적으로 복제되였다는 것을 설명한다. WS070117로 약물치료를 진행한 후 혈청중의 상승되였던 TC, TG, LDL-C의 함량이 현저히 감소되였고 HDL/LDL의 수치는 상승되였다. 이는 WS070117가 선명한 혈지조절 약효가 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 6에 표시된 바와 같다.)

표 6. WS070117가 고지질혈증의 골든햄스터의 혈지에 대한 조절작용

결과 2: 고지질혈증 골든햄스터의 복부 후벽의 지방중량에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 골든햄스터에게 연속으로 지방유제 혹은 고지방 사료를 투여한 후 복부 후벽의 지방중량이 현저히 증가되였다. WS070117로 약물치료한 후 지방의 중량은 선명히 감소되였다. 이는 WS070117가 복부 후벽의 지방의 축적에 대하여 현저한 감소작용이 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 7에서 확인할 수 있다.)

표 7. WS070117로 약물치료한 후 고지질혈증 골든햄스터의 복부 후벽의 지방중량에 대한 영향

결과 3. 고지질혈증 골든햄스터 간조직의 SOD, MDA 함량에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 고지질혈증 골든햄스터 모형의 간조직의 MDA 함량은 현저히 증가되였고 SOD 활성은 감소되였다. 심바스타틴정, 페노피브레이트와 WS070117로 약물치료한 후 랫트 간조직의 MDA 함량은 선명히 감소되였다. 이는 항산화 작용이 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 8에서 확인할 수 있다.)

표 8. WS070117가 고지질혈증 골든햄스터 간조직의 SOD, MDA 함량에 대한 영향

결과 4: 고지질혈증 골든햄스터의 간조직의 중량, 형청속의 ALT 활성에 대한 영향

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 골든햄스터에게 연속 지방유 혹은 고지방의 사료를 투여한 후 혈청속 ALT의 활성은 모두 일정한 정도의 상승추세를 보였으나 통계학적 의의는 존재하지 않았다. 모형대조조 랫트의 간지수는 현저히 상승되였다. 이는 WS070117가 골든햄스터의 혈청속의 ALT 활성에 일정한 감소추세가 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 9에서 확인할 수 있다.)

표 9. WS070117가 고지질혈증 랫트 간조직의 중량, 혈청속의 ALT 활성에 대한 영향

결과 5: 약물투여 정지 2주후 골든햄스터의 혈지의 변화

결과에서 볼 수 있는 바와 같이 골든햄스터에게 약물투여 정지한 2주후 혈청의 TC 와 TG 함량 모두 현저히 모형대조조에 비하여 하강하였다. 이는 WS070117의 혈지 조절작용은 약물투여 정지후 2주 이상 유지될 수 있다는 것을 설명한다. (결과는 표 10에서 확인할 수 있다.)

표 10. WS070117를 투여 정지한 후 고지질혈증 골든햄스터 혈청속 혈지의 변화에 대한 영향

이상의 결과들에서 알 수 있는 바 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신(WS070117)은 일종의 새로운 합성화합물이며 약효 실험을 통하여 증명된 바와 같이 WS070117는 고지질혈증의 랫트, 골든햄스터의 혈지를 조절해 주는 작용을 한다. 이는 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신(WS070117)가 실험형 고지질혈증에 대하여 치료작용이 있다는 것을 설명한다.

Claims

하기 구조식 (Ⅰ)의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신.
하기 단계를 특징으로 하는, 하기 구조식 (Ⅰ)의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신의 제조방법.

첫 단계: 이노신을 유기용매와 혼합한 다음 아세트산 무수물을 방울방울 떨어뜨려 반응시킨 후 2',3',5'-트리-O-아세틸이노신을 얻는다.
두번째 단계: 2',3',5'-트리-O-아세틸이노신과 SOCl₂를 반응시켜 2',3',5'-트리-O-아세틸-6-클로로아데노신을 얻는다.
세번째 단계: 2',3',5'-트리-O-아세틸-6-클로로아데노신 원료와 3-아미노페놀을 유기용매 중에서 반응시킨 후 순화정제 과정을 거쳐 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신을 얻는다.

기중 R는 3-히드록실페닐이다.
제2항에 있어서, 첫 단계에서 선택한 유기용매는 피리딘인 것을 특징으로 하는, 제조방법.
제2항에 있어서, 첫 단계중 아세트산 무수물의 온도는 -5~5℃, 아세트산 무수물을 다 떨어뜨린 다음 온도를 20~30℃까지 상승시킴을 특징으로 하는, 제조방법.
제2항에 있어서, 두번째 단계의 반응은 트리에틸아민의 존재하에 진행되는 것을 특징으로 하는, 제조방법.
제2항에 있어서, 세번째 반응 단계의 순화정제 과정은 컬럼 크로마토그래피를 사용하고, 이때 용리제는 초산에틸과 석유에테르를 사용하고 사용 비율은 2:1인 것을 특징으로 하는, 제조방법.
약제유효량의 구조식(Ⅰ)의 2',3',5'-트리-O-아세틸-N⁶-(3-히드록실페닐)아데노신 화합물과 약학적으로 허용가능한 운반체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 고지질혈증의 예방 또는 치료를 위한 약제 조성물.
제7항에 있어서, 혈지 (blood fat)를 조절하는 약효가 있는 기타 약물을 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제 조성물.
제7항 또는 제8항에 있어서, 조성물이 정제, 캡슐, 환제, 주사제, 지효성제제, 방출조절제 혹은 미립자투약계로 제형화됨을 특징으로 하는, 약제 조성물.
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