KR101326346B1

KR101326346B1 - 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR101326346B1
Application number: KR1020110058033A
Authority: KR
Inventors: 이준구; 김동명; 김덕훈; 최지은
Original assignee: 인타글리오주식회사
Priority date: 2011-06-15
Filing date: 2011-06-15
Publication date: 2013-11-12
Also published as: KR20120138506A

Abstract

개시된 본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법은 분쇄된 달팽이 나노분말을 초음파 추출하여 나노입자가 함유된 달팽이 나노추출물을 제조하는 단계(S110), 상기 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합하는 단계(S120) 및, 상기 유산균 배양배지에 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합균주인 유산균을 접종하고 발효시키는 단계(S130)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법{Cosmetic Compositions Comprising Fermented Snail And Manufacturing Method Thereof}

본 발명은 화장료 조성물 및 그 제조방법에 대한 것으로서, 달팽이 나노추출물을 유산균에 의하여 발효시켜 생성된 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

일반적으로, 화장품이란 보다 아름답고 싶어하는 인간의 욕구를 충족시키기 위해 고대부터 사용되어진 것이나, 근래 들어서는 산업화 및 공업화에 따른 공기의 오염과 자외선으로부터 인간의 피부를 보호하고 건강하게 유지하기 위해 필수적으로 사용되는 것이다. 따라서 화장품은 피부의 노화를 가능한 억제시켜 젊고 건강한 피부를 유지해 줄 수 있는 것이 좋은 제품으로 인정받고 있으며, 통상적으로 피부 노화를 억제시키기 위해 비타민 E, 비타민 C, 베타 카로틴 등 항산화 비타민과, 천연 항산화제로서 안토시아닌, 플라보노이드 등이 피부표면에 도포되는 방식의 화장품이 사용되고 있다. 또한 인간의 피부는 섭생에도 상당한 영향을 받기 때문에 피부에 좋은 음식이나 야채 혹은 과일을 위주로 하는 미용식, 녹차나 허브차 등의 미용차 등도 이용되고 있으며, 이 또한 근래 들어 화장품은 단지 바르는 것이 아니라 먹을 수도 있다는 의식을 가져오고 있다.

피부의 최외각층인 각질층은 피부의 수분증발 및 흡수 조절기능과 화학물질, 독성물질 및 세균 등의 외부물질의 침투에 대한 장벽기능을 가지고 있다. 각질층은 납작한 모양의 각질세포(keratinocyte)와 그 사이를 세포간 지질(intercelluler lipid)이 채우고 있으며 라멜라 형태를 이루고 있다. 피부의 각질층은 약 20%의 수분을 함유하고 있으며, 수분함량이 피부의 유연성, 윤택성을 결정하는 중요한 인자가 된다는 것이 잘 알려져 있다. 각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절되어지며, 피부 외용제에서 천연보습인자와 같이 안전하면서도 사용성이 우수하고 보습효과가 높은 물질의 개발이 화장품에서 중요한 연구과제 중 하나이다.

최근에는 각질층의 기능(경피흡수, 수분보유, 각질층 탈락)에 영향을 주는 요인이 각질 지질이라는 것이 밝혀져 이에 대한 연구도 활발히 진행되고 있다(Yasuhisa Nakayama, Skin moisturization and NMF, Science of Humectants, Fragrance J.,1988). 나이가 들어가면서 피부는 점차 그 고유의 기능이 저하되면서 노화 현상이 일어나며 그 대표적인 예가 주름 형성과 멜라닌 생성이다. 이러한 노화의 주원인으로서는 태양광에 의한 광노화이다. 태양광의 자외선에 의해 생성된 자유라디칼은 피부의 결합조직인 콜라겐과 엘라스틴의 산화적 절단을 촉진시키며, 결과적으로는 결합조직의 비정상적인 교차결합에 의한 주름형성을 유발한다. 또한 피부의 수분 보유능력에 가장 큰 역할을 하고 있는 히알루론산(Hyaluronic acid)의 절단 및 저분자량화를 촉진시켜 각질층의 수분보유능력을 감소시키는 한 원인이 되고 있다. 일반적으로 각질층의 수분이 10% 이하로 되는 경우에는 피부의 생리작용이 저하되어 피부가 본래의 기능을 잃게 되어 거칠어지게 되고, 각종 피부 트러블의 원인이 된다. 또한, 최근 생활환경과 식생활의 변화, 스트레스의 증가, 약품, 화장품 등 각종화합물질의 사용 및 성인형 아토피성 피부염의 증가로 피부가 거칠어지고 아크네 피부가 증가하는 등 피부 트러블을 호소하는 사람들이 늘어가고 피부가 민감해지는 경향을 보이고 있다. 특히 사회활동의 다변화와 복잡화로 물리적 정신적 스트레스로 인체의 면연력이 저하되고 이로 인해 아토피성 피부염과 같은 피부 알러지(Allergy)에 의한 여러 증상들이 나타나고 있다.

현재 널리 사용되고 있는 보습제 및 피부 보호제로는 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜과 같은 폴리올류, 아미노산, 피롤리돈 카르본산염, 젖산염과 같은 천연보습인자, 히알루론산염, 키토산 등의 생체 고분자물질 등이 있다. 이들 중 몇몇은 비록 우수한 보습력을 나타내지만 합성된 화합물이거나 수입에 의존하는 물질이기 때문에 적정량 이상 사용되었을 경우에는 피부자극이나 생산 비용의 증가로 그 사용에 한계가 있다. 또한 건강한 피부를 가꾸기 위해서 피부에 충분한 영향을 공급해 주어야함에도 불구하고 피부 표면에 도포하는 기존 화장품은 흡수율이 낮아 항산화제의 체내흡수율이 낮아서 효과를 제대로 발휘할 수 없는 문제점이 있다.

본 발명은 상기와 같은 점을 감안하여 안출된 것으로서, 입자가 작아서 피부흡수율이 뛰어나고, 보습효과, 피부장벽효과, 항산화 효과 및 미백효과가 뛰어난 유산균으로 발효된 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 제공되는 본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물은 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합하고 유산균을 접종 및 발효시켜 생성된 나노발효산물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

여기서 상기 유산균은 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)인 것이 바람직하다.

또한 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나의 제형을 갖는 것이 좋다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 제공되는 본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법은 분쇄된 달팽이 나노분말을 초음파 추출하여 나노입자가 함유된 달팽이 나노추출물을 제조하는 단계(S110), 상기 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합하는 단계(S120) 및, 상기 유산균 배양배지에 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합균주인 유산균을 접종하고 발효시키는 단계(S130)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

여기서 상기 유산균의 배양시의 온도는 보통 25℃ 내지 40℃, 바람직하게는 35℃ 내지 40℃ 이고, 배양시간은 7시간 내지 40시간이며, 상기 유산균은 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용되는 것이 좋다.

또한 상기 나노입자는 100 ~ 500nm 범위의 균질화된 입자인 것이 바람직하다.

상기 나노 추출물은 유산균 배양배지 대비 1 내지 2 중량%가 포함된 것이 좋다.

본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법에 의하면, 입자가 작아서 피부흡수율이 뛰어나 사용편의성이 증대되었고,

보습효과, 피부장벽효과, 항산화 효과 및 미백효과가 종래 화장료 조성물보다 뛰어난 장점이 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시 예에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법을 나타낸 순서도이다.

본 발명의 상기와 같은 목적, 특징 및 다른 장점들은 첨부도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 예를 상세히 설명함으로써 더욱 명백해질 것이다. 이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시 예에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법을 상세히 설명하기로 한다. 본 명세서를 위해서, 도면에서의 동일한 참조번호들은 달리 지시하지 않는 한 동일한 구성부분을 나타낸다.

본 명세서에서 "유산균을 이용하여 발효"란 유산균을 이용하여 원재료를 물리적, 화학적인 방법으로 변성 또는 변형시키는 것을 말하며, 자연하에서는 몇 만년이 걸려야 바뀔 수 있는 것을 단 며칠 또는 몇 개월 만에 원하는 결과물을 얻을 수 있는 분해 과정을 의미한다. 특히 본 발명에서 유산균을 이용한 발효는 외형은 바뀌지 않고 원재료 속에 함유되어 있는 약성이나 성분만을 유산균이 선택적으로 찾아내 섭취하여 배출하는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합하고 유산균을 접종 및 발효시켜 생성된 나노발효산물을 포함한다.

달팽이는 그 성분이 단백질, 지방, 당질, 철분, 비타민 B, 비타민 B2, 칼슘, 콘드로이친으로 이루어지며, 일반적으로 널리 알려진 구전 사실로써 피부미용과 강장작용(强腸作用, 허약체질개선), 강정작용(强精作用, 정력보강), 변비에 효능이 있다고 알려져 있다. 또한 '동의보감'에 따르면 달팽이는 성질이 한랭하고 맛이 짜고 독이 약간 있으며, 적풍(賊風)괘벽원질탈항(脫肛) 등에 효과가 있다고 하였다. 그 외 한방에서 강장, 피부미용, 당뇨, 결핵, 탈항, 소종, 해독, 강정, 신경질환, 빈혈, 중풍, 변비, 치질 등에 효과가 있다고 한다. 그리고 근래에 와서 '간의 독성 해소' 및 '노화 방지'등에도 효능이 있음이 밝혀진 바 있는 성분은 '콘드로이친(Chondroitin)'이라 하여 약의 성분으로도 사용되고 있어 최근 들어 크게 각광받고 있다.

콘드로이친 성분의 가장 대표적인 생리작용을 보면, 칼슘 이온에 대한 친화성과 성장 과정에 있는 뼈의 끝부분에 많이 분포하여 칼슘침착에 의한 뼈형성에 중요한 역할을 하고, 상처 재생, 세포 간 조직의 부활에 관여하며, 피부 기능의 일부를 담당하여 바이러스나 세균에 대한 감염 방지의 역할과, 통증의 원인이 되는 유해 아민을 중화시키는 기능 그리고 세포외액의 전해질이나 물의 이동과 유지에 큰 역할을 하고 히아루론산과 더불어 콘드로이친 단백 복합체로써의 유지성 발휘, 세포에 적절한 수분을 주고 여러 가지 생리 현상을 원활하게 수행하는 기능을 갖고 있다. 또한 콘드로이친은 생체 내의 세포 간조직이나 신경 및 연골 조직을 이루는 구성성분으로 주로 단백질과 결합하여 프로테오글리칸(proteoglycan)의 형태로 존재하고 있다. 콘드로이친은 연령이 증가함에 따라 감소하며, 특히 20대 이후부터는 급격히 콘드로이친이 부족하게 되어 각 생체조직세포의 손상을 초래하게 되고 연결조직이 약화되어 노화를 일으키게 된다. 특히 뼈에서 콘드로이친이 부족하면 골다공증이 오며 피부에서 콘드로이친이 부족하면 피부탄력성이 약해서 노화현상이 발생한다. 그리고 연골에서 콘드로이친이 부족하면 연골이 퇴화되어 관절 등에 이상을 초래한다.

본 발명에서 달팽이 나노추출물의 발효에 사용되는 유산균은 글루코오스(glucose) 등 당류를 분해하여 젖산(lactic acid)을 생성하는 세균이다. 젖산발효에 의해 생성되는 젖산에 의해서 병원균과 유해세균의 생육이 저지되는 성질을 유제품, 김치류, 양조식품 등의 식품제조에 이용한다. 또한 포유류의 장내에 서식하여 잡균에 의한 이상발효를 방지하여 정장제로도 이용되는 세균이다. 그람양성균이고, 통성혐기성 또는 혐기성이며, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토코쿠스(Streptococcus)속, 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 엔테르콕커스(Entercoccus)속, 락토콕커스(Lactococcus)속, 페디오콕커스(Pediococcus)속 등 여러 종류가 알려져 있다.

본 발명에서 사용하고자 하는 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus)속과 비피도박테리움(Bifidobacterium)속이다.

락토바실러스(Lactobacillus) 균종의 분류는 유산발효형식과 발육온도에 의하여 여러그룹으로 대별되는데, 이 중 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)는 호기성 젖산균으로 사람 및 모든 포유류와 그 밖의 동물의 장에 존재하며, 버터 우유의 제조나 장내 자가중독의 치료에 사용된다. 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis)는 DL-젖산을 생성하고, 이것은 우유 속에 존재하여 버터, 치즈 제조에 사용되며 낙농용 젖산균으로서 가장 중요한 균종이다. 락토바실러스 크레모리스(Lactobacillus cremoris)은 젖산균 스타터(Lactic bacteria starter)로서, 치즈생산에 널리 이용되는 호모 발효균이다. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)은 정상 유산발효를 하는 균종으로 15℃에서 발육가능하고 글루콘산(gluconic acid)을 자화한다. 상기 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)와 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)은 열에 안정한 박테리오신을 생산할 수 있는 세균으로서 본 발명에서 주로 사용될 수 있다. 상기 유산균은 바람직하게는 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용될 수 있다.

비피도박테리움(Bifidobacterium)속은 최근까지 락토바실러스(Lactobacillu s)의 제 1 균종인 락토바실러스 비피더스(Lactobacillus Bifidus)로 분류되었는데 비피더스(Bifidus)의 발효형식이 락토바실러스(Lactobacillus)의 발효형식과 다르고 또 균형태, 영양요구, DNA 염기 조성비 등 많은 성상도 락토바실러스(Lactobacillus)와 다르기 때문에 현재는 비피도박테리움(Bifidobacterium)으로 독립되어 분류되었다. 특히 당분해양식이나 DNA 상동성에 의해서 다수의 균종으로 분류되고 이들 균종 중에서 식품제조에 이용되는 것은 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve) 이다. 또한 미강분해능이 우수하고 박테리오신의 생산능이 우수한 것은 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로서 본 발명에서 주로 사용될 수 있다. 상기 유산균은 바람직하게는 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용될 수 있다.

도 1에 나타난 본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법을 살펴보면, 분쇄된 달팽이 나노분말을 초음파 추출하여 나노입자가 함유된 달팽이 나노추출물을 제조하는 단계(S110), 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합하는 단계(S120) 및 유산균 배양배지에 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합균주인 유산균을 접종하고 발효시키는 단계(S130)로 구성된다.

단계 S110에서, 달팽이 나노추출물은 달팽이를 나노분쇄기(Nanomil,Simbex.Co.,Ltd,German)로 분쇄한 다음 초음파추출에 의하여 제조되는 것이 바람직하며, 나노입자의 크기는 100 ~ 500nm 범위의 균질화된 입자인 것이 좋다. 단계 S110에서는 유산균 배양 배지에 첨가하기 위하여 나노추출물을 제조한다. 나노추출물을 제조하기 위해서는 달팽이의 분말 제조 후 식품 재료의 나노 입자화를 시키는 것이 바람직하며, 분말 제조는 나노분쇄기(Nanomil,Simbex.Co .,Ltd,German)를 이용하여 물리적으로 분쇄함으로써 이루어진다. 달팽이의 나노분말은 당업계에 공지된 통상적인 식품 재료의 나노 입자화 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 초임계유체 추출공정을 이용할 수 있다. 초임계유체 추출공정은 다른 추출공정에 비하여 입자 내에 독성용매나 계면활성제가 없는 관계로 의약품, 식품, 화장품 등에 널리 사용될 수 있으며, RESS(Rapid Expansion of Supercritical Solutions), GAS(Gas Anti-Solvent), SAS(Supercritical fluid Anti-Solvent), ASES(Aerosol Solvent Extraction System), SEDS(Solution Enhanced Dispersion by Supercritical Fluids), PGSS(Particles from Gas Saturated Solutions), RPSS(Reactive Precipitaion in Supercritical Solution) 방법을 사용한다.

상기 단계 S120에서는 유산균의 발효를 위하여 달팽이 나노추출물을 유산균 배양배지에 혼합한다. 유산균 배양배지는 당업계에 공지된 통상의 배지를 사용할 수 있으나, 사용하는 균주의 요구조건을 적절하게 만족시켜야 한다. 상기 배지는 다양한 탄소원, 질소원 및 미량원소 성분을 포함한다. 사용될 수 있는 탄소원의 예에는 포도당, 자당, 유당, 과당, 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유와 같은 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리셀롤 및 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 탄소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 질소원의 예에는, 펩톤, 효모 추출물, 육즙, 맥아추출물, 옥수수 침지액, 및 대두밀과 같은 유기 질소원 및 요소, 황산암모늄, 염화암모늄, 인산암모늄, 탄산암모늄 및 질산암모늄과 같은 무기 질소원이 포함된다. 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 상기 배지에는 인원으로서, 인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨 및 대응되는 소듐-함유 염이 포함될 수 있다. 또한 황산마그네슘, 황산망간 또는 황산철과 같은 금속염을 포함할 수 있다. 그 외에, 아세트산 나트륨, 스트르산 이암모늄, 염화칼슘, 아미노산, 비타민 및 적절한 전구체 등이 포함될 수 있다. 배양 중에 수산화암모늄, 수산화칼륨, 암모니아, 인산 및 황산과 같은 화합물을 적절한 방식으로 첨가하여 pH를 조정할 수 있다. 바람직하게는 유산균 배양배지로 MRS 배지 또는 변형된 MRS 배지를 사용할 수 있다. 유산균의 배양 및 발효는 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 과정은 당업자라면 선택되는 균주에 따라 용이하게 조정하여 사용할 수 있음은 물론이다.

또한 배양 중에는 지방산 폴리글리콜 에스테르와 같은 소포체를 사용하여 기포 생성을 억제할 수 있다. 또한, 호기상태를 유지하기 위하여, 산소 또는 산소-함유 기체(예, 공기)를 주입할 수 있다. 유산균의 배양시의 온도는 보통 25℃ 내지 40℃, 바람직하게는 35℃ 내지 40℃ 이며, 7시간 내지 40시간 동안 배양하는 것이 바람직하고, 유산균은 바람직하게는 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용될 수 있다.

이러한 유산균을 이용한 발효에 의하여, 크기가 커서 피부로 흡수할 수 없는 고분자를 유산균의 작용으로 저분자로 분해하며 분해과정 중 유산균의 각종 효소들에 의하여 유효성분의 활성도를 높이고 미량 성분에 대해서는 획득 수율을 높이는 효과도 있다. 또한 농약, 중금속 등의 독성물질을 분해 또는 불활성화시켜 피부에 유해가 되는 요소를 제거시킬 수 있다. 발효과정을 거치면 유산균은 달팽이 나노추출물을 구성하고 있는 분자를 미세하게 분해하고 소화한 뒤 배설하게 되는데 이때 나오는 물질이 대상물질, 즉 추출물에 해당한다. 본 발명의 발효과정은 저온에서 이루어지므로 유산균을 이용하면 기존의 열수 추출이나 진공 추출 등에서 야기되는 성분의 손실이나 변성이 전혀 없이, 실온에서 원료의 외형은 전혀 손상시키지 않고 유효성분만을 효과적으로 추출해 낼 수 있다.

단계 S130에서, 발효란 미생물이 유기물을 분해하면서 변화시키는 전체적인 과정을 통칭하는 것으로서, 이러한 발효과정을 통해서 미생물이 생약 원료 속에 함유되어 있는 유효성분만을 선택적으로 찾아내어 섭취한 뒤 배설하여 대사물질을 만들어내는데 이러한 대사물질을 발효액(추출액)이라 한다.

유산균 발효를 위한 유산균은 당업계에 공지된 것을 단독 또는 조합하여 제한없이 사용할 수 있으나, 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)와 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로서 본 발명에서 주로 사용될 수 있다. 상기 유산균은 바람직하게는 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용될 수 있다. 바람직하게는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)와 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)의 혼합 균주일 수 있다.

유산균의 배양 및 발효는 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 과정은 당업자라면 선택되는 균주에 따라 용이하게 조정하여 사용할 수 있다. 이러한 다양한 방법은 다양한 문헌에 개시되어 있다. 세포의성장방식에 따라 현탁배양과 부착배양을 배양방법에 따라 회분식과 유가식 및 연속배양식의 방법으로 구분된다. 또한 배양 중에는 지방산 폴리글리콜 에스테르와 같은 소포체를 사용하여 기포 생성을 억제할 수 있다. 또한 호기상태를 유지하기 위하여, 산소 또는 산소-함유 기체(예, 공기)를 주입할 수도 있다. 배양시의 온도는 보통 25℃ 내지 40℃, 바람직하게는 35℃ 내지 40℃ 이고, 배양시간은 7시간 내지 40시간 동안 배양할 수 있다. 상기 달팽이 나노추출물은 유산균 배양배지 대비 1 중량% 내지 2 중량% 가 함유된 것이 좋다.

배양 종료 후에 배양물과 균체를 분리하기 위해 원심분리(contrifugation) 또는 여과(filtration)과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 당업자가 필요에 따라 수행할 수 있다. 이때, 균체의 제거는 통상적인 균체의 제거를 위한 방법을 통해 유산균 균체가 실질적으로 제거된 것을 나타낸다.

상기의 제조방법으로 형성된 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나의 제형을 갖는 것이 좋다.

[실험방법]

1. 발효에 사용된 유산균주

달팽이 발효에 사용된 유산균 혼합균주는 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합배양액을 사용하여 MRS 배지에 2회 계대배양한 것을 사용하였다.

2. 달팽이 발효물의 제조방법

달팽이 나노추출물을 MRS 배지를 기반으로 한 배지에 첨가하여 고압살균기로 92℃에서 10분간 살균하였다. 살균이 끝난 시료는 42℃로 냉각한 후 유산균 혼합균주를 2% 접종하고 42℃의 항온기에서 15시간 발효하면서 3시간 간격으로 시료를 채취하여 당과 유기산농도, 산도를 측정하였다.

3. 달팽이 발효물의 분석

1) 당과 유기산 농도 측정

달팽이 발효물 중 당과 유기산 농도의 분석은 다음 방법을 이용하였다. 달팽이 발효물을 5g 채취하여 12% TCA 용액을 1mL 첨가하고 원심분리기를 사용하여 5min 동안 원심분리하였다. 분리된 상등액을 채취하여 0.2 ㎛ 멤브레인 필터를 사용하여 거른 후 HPLC 시스템(600E Multisolvent DeliverySystem; Waters Associates, USA)을 사용하여 당과 유기산 농도를 분석하였다. 당 농도 분석시, "Waters 410 differential refractometer(RI detector)"를 사용하고, 컬럼은 "YMC PackTM Polyamine Ⅱ column", "YMC PackTM Polyamine Ⅱ guard column"을 사용하였으며 Quaternary pump를 사용하여 1.0ml/min의 유속으로 40분간 분석하였다. 유기산 농도 분석시, "Waters 486 tunable absorbance detector"를 사용하여 220nm에서 측정하였으며, 컬럼은 "PrevailTM organic acid 5u column", "PrevailTM organic acid 5u guard column"을 사용하였다. 또한 Quaternary pump를 사용하여 1.0ml/min의 유속으로 20분간 분석하였다.

2) 산도 측정

달팽이 발효물의 적정산도는 Richmond 의 방법(Richmond, M.L., Barfuss, D. L., Harte, B. R., Gray, J.I., Stine, C.M.1982. Separation of carbohydrates in dairy products by high performance liquid chromatograpy. J. Dairy Sci.65: 1394-1400)의 방법에 따라 측정하였다.

4. 실험결과

1) 당과 유기산 함량 측정 결과

달팽이 나노추출물을 첨가하여 달팽이 발효물의 제조 시 배양 후 6시간째 발효물에 함유된 몇가지 당과 유기산 함량을 HPLC로 측정하여 표 1과 같은 결과를 얻었다. 표 1의 LH는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)를 실험 균주로 사용한 발효물이고, LP는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 실험균주로 사용한 발효물이며, BG는 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)을 실험균주로 사용한 발효물이다.

표 1을 살펴보면 LH에서는 포도당 1.0g/ℓ, 젖당 2.5g/ℓ, 포름산 7.2g/ℓ, 락트산 12.0g/ℓ, 아세트산 6.0g/ℓ가 검출되었고, LP에서는 포도당 3.0g/ℓ, 젖당 2.8g/ℓ, 포름산 2.7g/ℓ, 락트산 18.0g/ℓ, 아세트산 12.0g/ℓ가 검출되었으며, BG에서는 포도당 2.3g/ℓ, 젖당 3.4g/ℓ, 포름산 3.1g/ℓ, 락트산 7.0g/ℓ, 아세트산 13.2g/ℓ가 검출되었다. 상기의 유산균에 의한 당과 유기산의 생산량 증가는 발효물의 기능성과 밀접한 관계가 있는 것을 나타내고, 달팽이 나노추출물을 MRS 배지에서 발효시켰을 때 유산균에 의해 포도당, 젖당, 포름산, 락트산, 아세트산의 양이 크게 증가됨으로써 달팽이 나노추출물의 첨가에 의하여 우수한 유산균의 발효촉진효과가 나타남을 알 수 있다.

<표 1>

2) 산도 측정 결과

달팽이 나노추출물을 MRS 배지에 15시간 동안 배양하면서 pH를 측정한 결과는 표 2와 같다. 표 2를 살펴보면, LH에서는 pH 2.97, BG에서는 pH 1.69 의 산도가 측정되었는데 이 수치는 강한 산성을 나타내는 것으로서 적정산도의 증가를 나타낸다. 따라서 달팽이 나노추출물의 첨가에 의하여 우수한 유산균의 발효촉진효과가 나타남을 알 수 있다.

<표 2>

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 실시예로써, 본 발명에 따라 제조된 달팽이 발효물을 함유한 모이스처라이징소프트너, 모이스처라이징세럼, 모이스처라이징에멀젼, 모이스처라이징크림, 모이스처라이징아이크림의 구성성분 및 제조공정을 살펴본다.

[실시예 1]

모이스처라이징소프트너는 A상으로써 DI-Water+Ferment Extract(정제수+달팽이발효추출물) 76.198%, EDTA-2Na(디소듐이디티에이) 0.05%, D,L-Panthenol(디엘판테놀) 0.10%, Aminocoat(아미노코트) 2.00%, Allantoin(알란토인) 0.10%, Glycerin(글리세린) 7.00%, Na-Hyaluronate(1%, 소듐하이알루로네이트) 3.00%, PCA-Na(2-피롤리돈-5-카르본산나트륨) 4.00%, 1,3-BG(부틸렌 글라이콜) 4.00%, Carbopol 941(카보머) 0.07%, Aronvis-M(아론비스) 0.05%가 포함되고, B상으로써 Ethanol(95%, 에탄올) 1.50%, Spectrastat 0.30%, Nikkol HCO-40 0.30%, DC 556 0.20%, FE 6014245 0.05%가 포함되며, C상으로써 T.E.A 0.07%, 복합식물추출물 1.00%, 카라멜 색소 0.012%가 포함된다. 상기 원료 들을 사용한 모이스처라이징소프트너의 제조공정을 살펴보면, 1) A상을 본가마에 넣고 완전용해하고, 2) 별도의 용해조에 B상을 용해한 후 본가마에 넣으며, 3) C상을 본가마에 넣고 완전용해함으로써 모이스처라이징소프트너를 제조한다.

[실시예 2]

모이스처라이징세럼는 A상으로써 DI-Water+Ferment Extract(정제수+달팽이발효추출물) 59.43%, EDTA-2Na(디소듐이디티에이) 0.05%, D,L-Panthenol(디엘판테놀) 0.10%, Aminocoat(아미노코트) 1.00%, PCA-Na(2-피롤리돈-5-카르본산나트륨) 3.00%, Glycerin(글리세린) 8.00%, Adenosine(아데노신) 0.04%, 1,3-BG(부틸렌 글라이콜) 10.00%, 유용성감초추출물 0.05%, Keltrol-F(켈트롤에프) 0.10%, Natrosol 250HR 0.26%가 포함되고, B상으로써 Squalane(스쿠알란) 1.50%, Grape seed oil(포도씨오일) 1.20%, Tegocare 450 1.30%, Abil EM 90(세틸디메티콘코폴리올) 0.50%, Nikkol HCO-40 0.60%, Spectrastat 0.30%, Neosil ES 8.00%, Sepigel 305 0.40%이포함되며, C상으로써 Na-Hyaluronate(1%, 소듐하이알루로네이트) 3.00%, FE 6014245 0.10%, 복합식물추출물 1.00%, 카라멜 색소 0.07%가 포함된다. 상기 원료 들을 사용한 모이스처라이징세럼의 제조공정을 살펴보면, 1) A상을 본가마에 넣고 완전용해하고, 2) 별도의 용해조에 B상을 용해한 후 본가마에 넣으며, 3) C상을 본가마에 넣고 완전용해함으로써 모이스처라이징세럼을 제조한다.

[실시예 3]

모이스처라이징에멀젼은 A상으로써 DI-Water+Ferment Extract(정제수+달팽이발효추출물) 57.53%, EDTA-2Na(디소듐이디티에이) 0.05%, D,L-Panthenol(디엘판테놀) 0.10%, Aminocoat(아미노코트) 2.00%, PCA-Na(2-피롤리돈-5-카르본산나트륨) 5.00%, Glycerin(글리세린) 7.00%, Adenosine(아데노신) 0.04%, 1,3-BG(부틸렌 글라이콜) 4.00%, 유용성감초추출물 0.05%, Carbopol 941(카보머) 0.04%, Aronvis-M(아론비스) 0.02%가 포함되고, B상으로써 Lanette O(세테아릴알코올) 1.50%, Montanov L(몬타왁스) 0.80%, Arlacel 165 1.50%, Tween 60V 0.80%, Spectrastat 0.30%, C E H 5.00%, Tegocare 450 0.70%, Olivoil Glutinate(올리브오일 글루티네이트) 0.80%, Shea Butter(시어버터) 1.50%, DC 200/100cs 0.50%, Vitamin E Acetate 0.10%, Nexbase 2008 FG 3.00%, Grape seed oil(포도씨오일) 1.50%가 포함되며, C상으로써 T.E.A 0.04%, Na-Hyaluronate(0.5%, 소듐하이알루로네이트) 2.00%, FE 6014245 0.12%, 달팽이추출물 3.00%, 복합식물추출물 1.00%, 카라멜 색소 0.01%가 포함된다. 상기 원료 들을 사용한 모이스처라이징에멀젼의 제조공정을 살펴보면, 1) A상을 본가마에 넣고 완전용해하고, 2) 별도의 용해조에 B상을 용해한 후 본가마에 넣으며, 3) C상을 본가마에 넣고 완전용해함으로써 모이스처라이징에멀젼을 제조한다.

[실시예 4]

모이스처라이징크림은 A상으로써 DI-Water+Ferment Extract(정제수+달팽이발효추출물) 48.99%, EDTA-2Na(디소듐이디티에이) 0.04%, D,L-Panthenol(디엘판테놀) 0.08%, Glycerin(글리세린) 5.00%, Adenosine(아데노신) 0.04%, Uvinul MS-40 0.04%, DPG 0.05%, 1,3-BG(부틸렌 글라이콜) 13.00%, 유용성감초추출물 0.05%, Keltrol-F(켈트롤에프) 0.06%이 포함되고, B상으로써 Macadamia Nut Oil(마카다미아넛오일) 0.40%, Beeswax(비즈왁스) 2.10%, Lanette O(세테아릴알코올) 2.00%, Arlacel 60V 0.40%, Arlacel 165 1.40%, Tween 60V 0.80%, Spectrastat 0.30%, Nexbase 2008 FG 2.50%, Tegocare 450 1.00%, Olivoil Glutinate(올리브오일 글루티네이트) 1.20%, Shea Butter(시어버터) 1.60%, Vitamin E Acetate 0.10%, C E H 9.00%, KF 96(100cs) 1.00%, DC 556 0.70%, Neosil ES 7.00%가 포함되며, C상으로써 FE 6014245 0.12%, 복합식물추출물 1.00%, 카라멜 색소 0.03%가 포함된다. 상기 원료 들을 사용한 모이스처라이징크림의 제조공정을 살펴보면, 1) A상을 본가마에 넣고 완전용해하고, 2) 별도의 용해조에 B상을 용해한 후 본가마에 넣으며, 3) C상을 본가마에 넣고 완전용해함으로써 모이스처라이징크림을 제조한다.

[실시예 5]

모이스처라이징아이크림은 A상으로써 DI-Water+Ferment Extract(정제수+달팽이발효추출물) 46.10%, EDTA-2Na(디소듐이디티에이) 0.05%, Allantoin(알란토인) 0.10%, M-P 0.20%, Uvinul MS-40 0.05, Moist SS 14.00%, 1,3-BG(부틸렌 글라이콜) 3.00%, 유용성감초추출물 0.05%, Keltrol-F(켈트롤에프) 0.07%이 포함되고, B상으로써 Grape seed oil(포도씨오일) 1.20%, Beeswax(비즈왁스) 1.80%, Lanette O(세테아릴알코올) 2.50%, Arlacel 60V 0.40%, Arlacel 165 1.50%, Tween 60V 0.80%, C E H 9.00%, Nexbase 2008 FG 2.00%, Tegocare 450 0.50%, Lipoid S 75-3 0.50%, Olivoil Glutinate(올리브오일 글루티네이트) 1.70%, Shea Butter(시어버터) 1.60%, Vitamin E Acetate 0.30%, P-P 0.15%, Phenoxyethanol(페녹시에탄올) 0.15%, Neosil ES 9.00%가 포함되며, C상으로써 Forever-1w 0.24%, 복합식물추출물 1.00%, Adenosphere 2.00%, 카라멜 색소 0.04%가 포함된다. 상기 원료 들을 사용한 모이스처라이징아이크림의 제조공정을 살펴보면, 1) A상을 본가마에 넣고 완전용해하고, 2) 별도의 용해조에 B상을 용해한 후 본가마에 넣으며, 3) C상을 본가마에 넣고 완전용해함으로써 모이스처라이징아이크림을 제조한다.

[효능실험]

1. 프리라디칼 소거작용효과

프리라디칼은 활성산소를 의미하며 동식물의 체내 세포들의 대사과정에서 생성되는 산소화합물이다. 활성산소는 적당량이 있으면 세균이나 이물질으로부터 몸을 지키지만 너무 많이 발생하면 정상세포까지 무차별 공격하여 각종 질병과 노화의 주범이 된다. 또한 활성산소는 DNA의 유전정보를 파괴하고 세포막을 붕괴하며 비정상적인 세포단백질을 형성한다.

프리라디칼의 소거작용효과를 관찰하기 위하여 0.2mM 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl methanol 용액 0.5㎖에 여러 농도의 각각의 시료를 넣고 10% 에탄올 용액 1㎖을 첨가하여 섞은 다음 37℃에서 10분간 방치한 후 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 표 3은 농도에 따른 각각의 시료들에 대한 프리라디칼 억제율을 나타낸 것으로서, 시료 3중량 % 정도에서 최대능을 나타내었으며 다른 어떤 물질보다도 본 발명에 따른 시료 3이 프리라디컬 소거능이 우수함을 알 수 있다.

<표 3>

2. 자동산화 억제효과

본 실험은 자동산화가 잘되는 물질인 리놀산을 이용하여 자동산화를 억제하는 정도를 상호비교한 것이다. 8㎖ 캡튜브에 10mM 리놀산 용액 3㎖ 와 4㎎/㎖ 로 조정한 시료 0.075㎖ 를 첨가한 후 4℃에서 24시간 방치한다. 상기의 혼합액 0.1㎖ 를 75% 에탄올 4.7㎖ 에 첨가하여 교반한 후 30% 티오시안산암모늄 용액 0.1㎖ 와 20mM 염화제1철 0.1㎖ 를 첨가하여 3분간 방지한 후 발색시켜 500nm에서 흡수파장을 측정, 시료를 넣지 않은 대조군과 비교하여 항산화효과를 측정하였다. 리놀산 자동산화를 이용한 항산화효과 시험에서 본 발명에 따른 달팽이 발효추출물인 시료 3은 항산화효과가 좋은 비타민 C보다도 더 뛰어난 항산화효과를 가진 것으로 나타났다. 이 결과는 아래 표 4와 같다.

<표 4>

3. 피부미백효과

(1) 본 실험은 각각의 시료를 가지고 피부미백효과를 알아보기 위해 실험실 수준에서 관찰한 것이다. 본 실험에서 사용된 B16 멜라노마 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교평가하였다. 본 실험에 사용된 B16-F1 멜라노마 세포는 유전공학연구소로부터 분양받아 사용하였다.

B16 멜라노마 세포의 멜라닌 생합성 저해도 판별은 다음과 같이 행하였다. B16 멜라노마 세포를 4×10⁴cell/㎖ 의 농도로 10% 소태아혈청을 포함하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium(Gibco, USA))에 현탁시켰다. 현탁세포 5㎖ 를 조직배양 플라스크에 넣고 검정시료를 일정량 첨가시킨 후, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 4일간 배양 후 배양액의 색으로 멜라닌 생성 정도를 1차 판별하고, 세포를 인산완충액으로 씻은 후 트립신 처리하여 세포를 플라스크로부터 분리하였다. 평가법은 세포배양중에 아무것도 처리하지 않은 것과 각 시료를 처리했을 때의 검은 멜라닌 색소 분비 정도에 따라 색상이 변화되는 정도를 육안으로 관찰하여 상호 비교 평가하였다. 하기 표 5를 살펴보면, 달팽이 발효추출물인 시료 3을 처리한 경우 멜라닌 색소 분비의 저해율이 가장 높아서 미백효과가 뛰어남을 알 수 있다.

<표 5>

(2) 미백실험으로써 본 발명에 따른 달팽이 발효추출물이 포함된 시료(본 발명의 시료)와 경쟁사 제품 A, B를 실험자 20명(실험자 10명이 1개 그룹)의 얼굴에 도포하였다. 즉, 그룹군은 2개를 형성하여 각각의 그룹군 10명의 얼굴 오른쪽에는 1일 2회 연속 1개월간 본 발명의 시료를 도포하였다. 그리고 같은 방법으로 상기 그룹군 중 1개 그룹의 실험자 얼굴 왼쪽에 경쟁사 제품 A, 다른 그룹군의 실험자 얼굴 왼쪽에 경쟁사 제품 B를 도포하였다. 실험완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포부위 피부를 화상분석으로 얼굴색을 비교하여 어두운 색을 5, 중간색을 3, 밝은 색을 1로 정하고 평가하였다. 하기 표 6을 살펴보면, 본 발명의 시료가 경쟁사 제품 A, B보다 수치가 낮은 것으로 나타났고 그 미백효과가 뛰어남을 알 수 있다.

<표 6>

본 발명에 따른 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물 및 그 제조방법에 의하면, 입자가 작아서 피부흡수율이 뛰어나 사용편의성이 증대되었고, 보습효과, 피부장벽효과, 항산화 효과 및 미백효과가 종래 화장료 조성물보다 뛰어난 장점이 있다

이상에서 본 발명의 바람직한 실시 예에 대하여 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 실시 예에 한정되지 아니한다. 즉, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 첨부된 특허청구범위의 사상 및 범주를 일탈함이 없이 본 발명에 대한 다수의 변경 및 수정이 가능하며, 그러한 모든 적절한 변경 및 수정의 균등물들도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주되어야 할 것이다.

Claims

달팽이를 분쇄한 다음 초음파 추출하여 제조된 100 ~ 500nm 범위의 나노입자를 함유하는 달팽이 추출물을 유산균 배양배지에 혼합하고 유산균을 접종 및 발효시켜 생성된 발효산물을 포함하는 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 유산균은 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합균주인 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 조성물.
달팽이를 분쇄한 다음 초음파 추출하여 제조된 100 ~ 500nm 범위의 나노입자를 함유하는 달팽이 추출물을 제조하는 단계(S110);
상기 달팽이 추출물을 유산균 배양배지에 혼합하는 단계(S120); 및
상기 유산균 배양배지에 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)의 혼합균주인 유산균을 접종하고 발효시키는 단계(S130);를 포함하는 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법.
제 4 항에 있어서,
상기 유산균의 배양시의 온도는 25℃ 내지 40℃ 이고, 배양시간은 7시간 내지 40시간이며, 상기 유산균은 10¹⁰ ~ 10¹¹CFU/ml로 농축하여 사용되는 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법.
제 4 항에 있어서,
상기 나노입자는 100 ~ 500nm 범위의 균질화된 입자인 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법.
제 4 항에 있어서,
상기 달팽이 추출물은 유산균 배양배지 대비 1 내지 2 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 달팽이 발효물을 함유한 화장료 제조방법.