KR102123627B1 - 복수의 발효 공정을 이용한 피부회복용 뮤신복합추출물 제조 방법 - Google Patents

복수의 발효 공정을 이용한 피부회복용 뮤신복합추출물 제조 방법 Download PDF

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Abstract

복수의 발효 공정을 이용한 뮤신복합추출물 제조방법이 개시된다. 본 발명의 다양한 실시예에 따른 뮤신복합추출물 제조 방법은 달팽이를 오존 처리하는 단계; 오존 처리된 달팽이를 제1군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 1차 발효하는 단계; 및 상기 1차 발효된 달팽이를 제2군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 2차 발효하는 단계를 포함하며, 상기 1차 발효단계와 상기 2차 발효단계에서 사용되는 효소는 서로 다른 효소인 것을 특징으로 할 수 있다.

Description

복수의 발효 공정을 이용한 피부회복용 뮤신복합추출물 제조 방법{METHOD FOR MANUFACTURING MUCIN COMPELX EXTRACT FOR SKIN RECOVERY BASED ON MULTIPLE FERMENTATION PROCESSES}
본 발명의 다양한 실시예는 달팽이로부터 고함량의 흡수율이 높은 뮤신 성분을 추출 및 제조하는 방법에 관한 것이다.
최근, '이너 뷰티(inner beauty)'라는 단어가 등장하고 있다. 이너 뷰티란, 내부에서부터 건강한 피부를 가꾼다는 뜻으로 먹는 화장품을 통틀어 이르는 말이다. 이너 뷰티의 원료로는 키토산, 견과류 등의 자연재료가 사용되고 있으며, 특히 최근에는 마, 장어, 달팽이 등으로부터 추출되는 뮤신을 이용한 제품이 알려지고 있다.
달팽이의 주성분인 뮤코다당단백 및 콘드로이친 황산 성분(뮤코다당체)은 성인병 치료, 성장발육 촉진 및 피부의 노화방지, 자양강장, 강정, 미백, 미용 등에 효과가 있으며, 동의보감 등에서도 그 효능이 언급되어 있다. 이러한 뮤코다당단백 및 콘드로이친 황상 성분을 포함하는 뮤신 성분은 화장품, 식품, 건강즙 또는 엑기스 등의 다양한 원료로 활용이 가능하다.
이와 관련하여 국내공개특허 제1995-0002741호(1995.02.16 공개)에서는 달팽이로부터 추출한 뮤신성분을 이용하여 화장품을 제조하는 방법에 대해 개시하고 있다.
그러나, 해당 특허문헌에서는 달팽이를 단순히 삶거나 찌는 방법으로 달팽이 엑기스를 제조함으로써 핵심 성분이 열로 인해 손상되고, 수분 증발과 함께 뮤코다당단백 성분이 증발되기 때문에 수율 저하 및 이에 따른 원가 상승의 한계점이 있었다.
뮤코다당단백 성분의 뮤신은 세포간 재생정보 전달자 역할을 하며, 피부 진피층 성장인자 및 섬유아세포 증진 기능을 가지고 있는 성분으로 알려져 있다. 이러한 메커니즘은 깊은 주름이나 화상 치료 등을 위한 세포 치료의 한가지 방법으로 다양한 SCI급 논문에서 대조군 대비 피부회복 속도가 현저하게 빨라지는 것을 확인할 수 있다.
본 발명의 다양한 실시예는 식용 달팽이로부터 높은 효율과 흡수율이 높은 뮤신 복합 추출물을 추출하는 방법의 제공을 그 목적으로 한다.
또한, 본 발명의 다양한 실시예를 통해 제조된 뮤신복합추출물을 통해 섭취 및 도포 기반의 피부 회복 속도를 높이는 것에 관한 기능성 효능 효과 연구 및 건강기능식품 원료 개발 등이 진행될 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제들은 이상에서 언급된 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상술한 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다양한 실시예에 따른 뮤신복합추출물 제조 방법은 달팽이를 오존 처리하는 단계; 오존 처리된 달팽이를 제1군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 1차 발효하는 단계; 및 상기 1차 발효된 달팽이를 제2군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 2차 발효하는 단계를 포함하며, 상기 1차 발효단계와 상기 2차 발효단계에서 사용되는 효소는 서로 다른 효소인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 제1군 효소는 Escherichia coli, Propionibacterium, Pediococcus, HE(Hericium erinaceum Mycelium), Lactococcus, Streptococcus 및 Saccharomyces cerevisiae인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 제2군 효소는 Ent. Faecium, Breve, Longum, Leuconostoc mesenteroides, Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum, Enterobacter, Klebsiella, Lactobacillus plantarum 및 Escherichia coli인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 1차 발효 단계는, 상기 달팽이를 고체배양하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 고체배양 단계는, 1차 효소가 혼합된 달팽이 시료에 수크로스(sucrose)를 혼합하여 20~50℃ 온도로 10~20일간 배양하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 배양된 달팽이 시료를 60~70℃의 온도에서 8~12시간 동안 건조시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 2차 발효 단계는, (a)상기 1차 발효된 달팽이에 상기 제2군 효소 중 적어도 하나의 효소 및 증류수를 혼합시키는 단계; 및 (b)혼합된 달팽이 시료를 25~40℃로 5~10일동안 발효시키는 단계를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 2차 발효 단계는, (c)발효된 달팽이 시료를 90~120℃의 온도에서 3~10분 동안 멸균하는 단계를 더 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 2차 발효 단계는, (d)멸균된 달팽이 시료를 30℃ 이하로 냉각시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 2차 발효 단계는, (e)냉각된 달팽이 시료를 400~1000mesh의 크기로 여과하는 단계; 및 (f)상기 여과된 달팽이 시료를 농축하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 실시예에 따르면, 보다 높은 효율로 달팽이의 뮤신 복합 추출물을 추출할 수 있기 때문에 식품이나 화장품 또는 다양한 제품의 기능성 원료로써 보다 경제적이고 효율적으로 활용이 가능하다.
또한, 본 발명의 실시예에 따라 추출된 뮤신 성분은 보관이 용이하고 추가적인 기능성 연구 활용에 용이한 제형으로 가공이 가능하다.
나아가, 본 발명의 실시예에 따라 추출된 뮤신 성분 분자는 발효 공정에 의해 분해되어 보다 높은 신체 흡수율을 가지게 된다.
본 발명의 효과들은 이상에서 언급된 효과로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
도 1 내지 도 3은 본 발명의 실시예에 따른 달팽이 뮤신추출 방법의 흐름도이다.
도 4는 발효 공정에 따른 달팽이 추출 성분을 비교한 실험데이터이다.
도 5는 뮤신복합추출물이 함유된 음료 섭취 후 피부 테스트 결과이다.
본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 "포함한다(comprises)" 및/또는 "포함하는(comprising)"은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. 명세서 전체에 걸쳐 동일한 도면 부호는 동일한 구성 요소를 지칭하며, "및/또는"은 언급된 구성요소들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 비록 "제1", "제2" 등이 다양한 구성요소들을 서술하기 위해서 사용되나, 이들 구성요소들은 이들 용어에 의해 제한되지 않음은 물론이다. 이들 용어들은 단지 하나의 구성요소를 다른 구성요소와 구별하기 위하여 사용하는 것이다. 따라서, 이하에서 언급되는 제1 구성요소는 본 발명의 기술적 사상 내에서 제2 구성요소일 수도 있음은 물론이다.
본 문서에서 언급되는 '뮤신복합추출물'은 뮤신(Mucin) 또는 뮤신을 포함하는 당단백체와 같은 복합체를 지칭하는 것으로 해석될 수 있다. 본 문서에서 '뮤신복합추출물'은 '뮤신 성분'으로 대체 표기될 수 있다.
도 1 내지 도 3은 본 발명의 실시예에 따른 달팽이 뮤신복합추출물 수득 방법의 흐름도이다.
일 실시예에 따르면, 달팽이 뮤신복합추출물 제조 방법은 달팽이 오존처리 단계(S101), 1차 발효 단계(S103) 및 2차 발효 단계(S105)를 포함할 수 있다. 이러한 도 1에서 개시하는 각 단계들은 적어도 일부가 생략되거나 상호 순서가 변경되어 진행될 수 있다.
먼저, 달팽이 오존처리 단계(S101)에서는 오존 램프와 같은 오존처리부를 통해 소정 용량의 달팽이에 대해서 일정 파장 영역의 자외선이 조사될 수 있다. 이러한 오존처리부는 특정 파장 예컨대, 100nm 내지 500nm 파장 대역의 자외선이 조사될 수 있도록 조성될 수 있으나 본 발명의 실시예에서 오존처리의 형태 또는 오존 램프의 특정 파장 영역을 한정하는 것은 아니다.
이러한 오존이 가진 강한 산화 분해 작용에 의해 달팽이에 포함된 미생물이 정화되어 살균 처리될 수 있다.
한편, 이러한 오존처리 단계 이전에 달팽이에 대한 선별 작업, 세척 및 분쇄 작업 등이 이루어질 수 있다. 다만, 달팽이의 대한 분쇄 작업이 반드시 선행되어야 하는 것은 아니며, 달팽이의 분쇄 작업은 오존처리 단계 이전뿐만 아니라 이후의 특정 시점에서 이루어진 것 또한 가능하다.
다음으로, 달팽이에 대한 1차 발효 단계(S103)가 진행된다.
도 2를 참조하면, 1차 발효 단계(S103)에서는 고체 배양단계(S201) 및 건조 단계(S203)가 포함된다.
고체 배양이란 미생물이나 동식물의 세포 등을 고형 배지 위에서 기르는 공정으로서, 달팽이의 세포가 계속적으로 분열을 할 수 있도록 한다.
이를 위해, 제1군 효소들 중 적어도 하나의 효소와 수크로스(sucrose)를 혼합하여 달팽이 시료를 배양하는데 사용될 수 있다. 일 실시에에 따르면, 제1군 효소는 Escherichia coli, Propionibacterium, Pediococcus, HE(Hericium erinaceum Mycelium), Lactococcus, Streptococcus 및 Saccharomyces cerevisiae를 포함할 수 있다. 이러한 제1군 효소는 실험적인 방법에 의해 달팽이로부터 유효 아미노산 성분이 추출되는 가장 최적의 효소들로 포함되었다.
일 실시예에 따르면, 상기 제1군 효소는 대략 5~15%(v/v)의 농도로 증류수와 혼합된 상태로 사용될 수 있으며, 혼합 용액은 20~50℃의 온도에서 10~30일간 배양될 수 있다.
상기 고체 배양단계(S201)가 완료되면, 건조 단계(S203)가 진행된다.
일 실시예에 따르면, 건조 단계에서는 배양된 달팽이 시료를 60~70℃의 온도에서 8~12시간 동안 건조시킬 수 있다. 이에 의해, 배양된 달팽이 시료의 잔류물이 제거되면서 1차 발효 추출물이 수득된다.
도 2에서의 각 단계는 반드시 1차 발효 단계(S103)에 포함되어야 하는 것은 아니다. 다양한 실시예에 따르면, 도 2에서의 고체배양 단계(S201) 및 건조 단계(S203)는 1차 발효 단계(S103)와 적어도 일부가 별도의 공정으로서 이루어질 수 있다.
다음으로, 1차 발효 추출물에 대하여 2차 발효 단계(S105)가 진행된다.
도 3을 참조하면, 2차 발효 단계(S105)는 혼합 단계(S301), 멸균 단계(S303), 냉각 단계(S305), 여과 및 농축 단계(S307)를 포함할 수 있다.
혼합 단계(S301)에서는 제2군 효소 중 적어도 하나가 증류수에 희석되어 1차 발효 추출물에 혼합된다. 일 실시예에 따르면, 1L의 증류수를 기준으로 제2군 효소에서 선택된 적어도 하나의 효소를 10%(v/v)의 농도로 혼합한 뒤, 이를 상기 1차 발효 추출물과 다시 혼합시킬 수 있다.
일 실시예에 따르면, 제2군 효소는 Ent. Faecium, Breve, Longum, Leuconostoc mesenteroides, Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum, Enterobacter, Klebsiella, Lactobacillus plantarum 및 Escherichia coli을 포함할 수 있다. 이러한 제2군 효소는 실험적인 방법에 의해 달팽이로부터 유효 아미노산 성분이 추출되는 가장 최적의 효소들로 포함되었다.
다음으로, 상기 1차 발효 추출물, 제2군 효소 중 적어도 하나, 그리고 증류수가 혼합된 시료는 저온 배양기(예: B.O.D incubator)에서 25~40℃의 온도로 5~10일 동안 발효될 수 있다.
그런 다음, 발효된 달팽이 시료를 멸균하는 단계(S303)가 진행된다. 이러한 멸균 단계는 예컨대, 90~120℃의 온도에서 3~10분 동안 멸균될 수 있다.
멸균된 달팽이 시료는 30℃ 이하의 온도에서 냉각된 후(S307), 400~1000mesh의 크기로 여과되어 농축된다. 이에 의해, 달팽이의 2차 발효 추출물이 생성된다.
상기 도 3에서 개시된 멸균 단계(S303), 냉각 단계(S305), 여과 및 농축 단계(S307)는 제2군 효소에 의한 발효 단계(S301)와 함께 2차 발효의 구체적인 공정으로 개시되어 있지만, 다양한 실시예에 따르면 상기 S303, S305 및 S307 단계는 S301 단계와 별도의 독립된 단계로 구성될 수도 있다.
전술한 도 1 내지 도 3의 실시예들에 의해 추출된 유효 성분이 도 4에서 도시된다. 도시되는 바와 같이, 유효 아미노산의 성분이 뮤신 추출의 일반공정(발효 공정을 전혀 거치지 않은 공정) 대비 1차 발효와 2차 발효를 거침으로써 더욱 높아지는 것을 확인할 수 있다. 이 경우, 1차 발효에서 사용된 효소와 2차 발효에서 사용된 효소는 서로 다른 효소이다.
이 경우, 도 4의 데이터에서 비교되는 일반 공정은 다음과 같이 진행될 수 있다.
생후 5개월된 아카티나퓨리카 달팽이 1.000g을 세척 후 300~500mesh의 크기로 분쇄하여 오존 램프에 의해 소정 시간 동안 오존처리를 진행한다. 다음으로, 오존처리된 달팽이를 열수 장치를 통해 열수 처리하여 달팽이 시료로부터 뮤신복합추출물을 수득한다.
열수 추출 공정은 직접 압력 방식 또는 간접 압력의 장치에서 이루어질 수 내부의 압력 및 온도 조건을 제어할 수 있는 압출기와 같은 장치에서 이루어질 수 있다. 열수 처리단계는 100~130℃의 온도에서 9~16시간 동안 진행되며, 10,000Pa 이상 40,000Pa의 압력에서 이루어진다.
열수 추출 공정 이후에는 추가적으로 이물질을 제거하기 위한 필터 여과 공정이 진행될 수 있으며, 추출된 뮤신복합추출물을 제품에 따라 대응되는 용기에 충진된 후 품질검사가 이루어질 수 있다.
다음은 1차 및 2차 발효 공정을 포함하는 각각의 실시예이다.
<실시예 1>
생후 5개월된 아카티나퓨리카 달팽이 1.000g를 세척 후 300~500mesh의 크기로 분쇄하여 오존 램프에 의해 약 15동안 오존처리를 진행하였다. 오존 처리된 달팽이에 Escherichia coli, Propionibacterium, Pediococcus, HE(Hericium erinaceum Mycelium), Lactococcus, Streptococcus 및 Saccharomyces cerevisiae 중 적어도 하나 이상으로 선택하거나 교반된 15cc의 용액과 20g의 수크로스(sucrose)에 혼합시켰다. 이 경우, 이때, 15cc의 발효 용액은 증류수에 10%(v/v)의 농도로 희석된 상태이다. 혼합된 용액은 25℃의 온도에서 20일간 고체 배지에서 배양된다. 그런 다음, 배양된 달팽이 시료를 65℃의 온도에서 10시간동안 건조시킴으로써 뮤신복합추출물을 포함하는 1차 발효 추출물을 수득하였다.
<실시예 2>
위 실시예 1에서 수득된 1차 발효 추출물에 대해서 Ent. Faecium, Breve, Longum, Leuconostoc mesenteroides, Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum, Enterobacter, Klebsiella, Lactobacillus plantarum 및 Escherichia coli 중 적어도 하나 이상으로 선택하거나 교반된 15cc의 용액을 혼합시켰다. 이때, 15cc의 발효 용액은 1L의 증슈루에 10%(v/v)의 농도로 희석된 상태이며, 혼합된 용액은 저온 배양기(B.O.D incubator)에서 30℃의 온도로 5일 동안 발효하였다. 그런 다음, 발효된 용액을 100℃의 온도에서 5분동안 멸균하고, 멸균된 용액을 20℃의 온도에서 냉각한 후 500mesh의 크기로 여과하여 농축함으로써 2차 발효 추출물을 수득하였다.
상기와 같은 실시예 1 및 실시예 2에 의해서 도 4와 같은 실험데이터가 추출되었다. 도 4의 A는 제1군 효소와 제2군 효소 각각을 각각의 발효 단계에서 수차례 선택교반하면서 얻은 실험데이터이고, 도 4의 B는 제1군 효소에서 특정 효소만 1차 발효 효소로 이용하고, 제2군 효소에서 3개의 효소를 2차 발효 효소로 이용한 결과이다.
전술한 실시예들에서 유효 아미노산은 Aspanic Acid, Glutanic Acid, Serine, Glycine, Histidine, Arginine, Threonine, Proline, Tyrosine, Valine, Methonine, Cysteine, Leucin, Phenylalanine, Asparagine, Lysine, Tryptephane이 도출되었다.
또한, 전술한 실시예들에서 달팽이 오존 단계 이전에 일반 공정에서 기술한 세척, 분쇄, 열수 처리 등이 선행되어 진행될 수 있다.
<실험예>
아래 실험예는 30, 40, 50대 여성 30명을 대상으로 뮤신복합추출물 섭취를 통한 피부 개선 효과 자체테스트 결과이다.
실험목적
일반 화장품 도포 시, 오후가 되면 급격하게 피부 수분이 감소하며 건조함을 느낄 수 있는 현상에 대한 측정과 비교해 뮤신복합추출물로 지표성분 뮤코다당단백이 하루 700~1,000 mg 함유된 음료를 3개월 꾸준히 섭취하였을 때에 오후가 되어도 피부 수분이 유지되는지에 대한 정도와 피부톤(레드/옐로우), 모공, 피부결, 유분에 대한 개선 정도를 측정하였다.
일반 화장품 도포 시 시간대 별 피부 수분도 측정 내용
피부표면의 수분량 측정은 정전부하용량 계측 법 인 콘덴서 방식(capa citance measurement)에 근거한 Corneometer CM 825 PC(Courage-Khazaka Koln, Germany)를 사용하여 피부 표피의 수분 함유량을 토대로 이마와 볼 부위를 측정하였다. 피부 상태를 corneoneter라는 단위로 표시하며 AU(arbitrary units) 측정방법은 탐침을 측정 부위 피부표면에 밀착 접촉시킨 후 가볍게 누르면 나타나는 수치를 표시하였으며, 세안 직후 부터 12시간 경과 내용을 확인하였으며 이는 5일간 일한 시간대로 측정하였을 때의 평균 값을 기재하였다. 측정 결과는 아래 표 1과 같다.
Figure 112020002319696-pat00005
뮤신복합추출물이 함유된 음료 섭취 후 피부 테스트 결과
피부테스트기를 활용해 3개월 간 피부 톤, 모공, 결, 유분을 기준으로 측정하였으며, 지표성분 뮤코다당단백 700~1,000 mg 이 함유된 뮤신복합추출물 타입A와 타입B을 섭취하였다. 결과는 도 5와 같다.
전술한 실시예에 따른 초고압 열수 처리 및 발효 단계를 거친 뮤신 추출 방법에 의해, 보다 고효율의 향상된 흡수 성분을 가지도록 뮤신 성분이 추출될 수 있다.
이상, 첨부된 도면을 참조로 하여 본 발명의 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 제한적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (10)

  1. 뮤신복합추출물을 제조하는 방법으로서,
    달팽이를 소정의 압력으로 열수추출하여 달팽이 추출물을 수득하는 초고압 처리 단계;
    초고압 처리된 달팽이를 제1군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 1차 발효하는 단계; 및
    상기 1차 발효된 달팽이를 제2군 효소 중 적어도 하나의 효소를 이용하여 2차 발효하는 단계를 포함하며,
    상기 1차 발효단계와 상기 2차 발효단계에서 사용되는 효소는 서로 다른 효소이며,
    상기 초고압 처리 단계는, 9~16시간 동안 100~130℃의 온도로 진행되는 것을 특징으로 하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제1군 효소는 Escherichia coli, Propionibacterium, Pediococcus, HE(Hericium erinaceum Mycelium), Lactococcus, Streptococcus 및 Saccharomyces cerevisiae인 것을 특징으로 하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 제2군 효소는 Ent. Faecium, Breve, Longum, Leuconostoc mesenteroides, Saccharomyces cerevisiae, Clostridium butyricum, Enterobacter, Klebsiella, Lactobacillus plantarum 및 Escherichia coli인 것을 특징으로 하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 1차 발효 단계는,
    상기 달팽이를 고체배양하는 단계를 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 고체배양 단계는,
    1차 효소가 혼합된 달팽이 시료에 수크로스(sucrose)를 혼합하여 20~50℃ 온도로 10~20일간 배양하는 단계를 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  6. 제5항에 있어서,
    배양된 달팽이 시료를 60~70℃의 온도에서 8~12시간 동안 건조시키는 단계를 더 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 2차 발효 단계는,
    (a)상기 1차 발효된 달팽이에 상기 제2군 효소 중 적어도 하나의 효소 및 증류수를 혼합시키는 단계; 및
    (b)혼합된 달팽이 시료를 25~40℃로 5~10일동안 발효시키는 단계를 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 2차 발효 단계는,
    (c)발효된 달팽이 시료를 90~120℃의 온도에서 3~10분 동안 멸균하는 단계를 더 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 2차 발효 단계는,
    (d)멸균된 달팽이 시료를 30℃ 이하로 냉각시키는 단계를 더 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 2차 발효 단계는,
    (e)냉각된 달팽이 시료를 400~1000mesh의 크기로 여과하는 단계; 및
    (f)상기 여과된 달팽이 시료를 농축하는 단계를 더 포함하는, 뮤신복합추출물 제조방법.
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