KR101311993B1 - 측면 이동되는 면역크로마토그라피법에 의한 검체 분석 - Google Patents

측면 이동되는 면역크로마토그라피법에 의한 검체 분석 Download PDF

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Abstract

본 발명은 액상 샘플내 검체를 분석하기 위한 장치에 관한 것이다. 본 발명의 장치는 기준 모세관 작용 방향으로 측면 이동되며, 액상 샘플의 주입 영역(3) 및 상기 주입 영역의 하류에 위치하는 검체-검출 영역(5)을 포함하는 모세관 작용 수단(1); 습윤시 모세관 작용에 의하여 모세관 작용 수단(1)내에서 기준 방향으로 자유로이 이동되는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약(4); 검출 영역에 고정화된 제2 검체-특이적 결합 시약(6)을 포함한다. 본 발명은 상기 검출 영역(5)이 고정화된 상태로 상기 제2 특이적인 결합 시약(6)과 떨어져 위치하는 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하는 것을 특징으로 한다.
액상 샘플, 분석 장치, 마커, 검체-특이적 결합 시약

Description

측면 이동되는 면역크로마토그라피법에 의한 검체 분석{ANALYTE ASSAYING BY MEANS OF IMMUNOCHROMATOGRAPHY WITH LATERAL MIGRATION}
본 발명은 측면 이동되는 면역 크로마토그라피 장치에 관한 것으로서, 상기 장치는 액상 샘플내 검체를 샌드위치 테스트 및 경합 테스트를 사용하여 동시 분석할 수 있다.
측면 이동 되는 면역 크로마토그라피 장치는 예를 들어 유럽 특허 0284232호에 개시되어 있다. 이들 장치는 기공성 고체 지지대 형태의 모세관 작용 수단을 가지며, 샘플과 시약이 모세관 작용에 의해 그 내부를 이동한다. 이들 장치는 동결건조, 건조 또는 탈수된 형태의 제1 지지 영역, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 검체-특이적 결합 시약, 및 검체-특이적 포획 시약이 고정화된 검출 영역을 포함하는 기공성 고체(또는 면역 크로마토그라피) 지지대를 포함하거나 통합하고 있다. 상기 검체-특이적 결합 시약은 건조된 경우 이동하지 못하고, 습윤시 고체지지대에서 이동하게 된다. 따라서, 고체 지지대가 액상 샘플과 접촉하는 경우, 상기 액상 샘플은 지지대내에서 모세관 작용에 의해 이동되고 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 검체-특이적 결합 시약을 이동시킨다. 샘플 및 검체-특이적 결합 시약은 고체 지지대내에서 모세관 작용에 의해 검체-특이적 포획 시약을 고정화하고 있는 검출 영역까지 이동된다.
WO 2004/088320호는 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 결합 시약이 액상 형태로 즉석으로 첨가되는 고체상에서의 면역 크로마토그라피 방법을 개시하고 있다.
이 장치는 통상적으로 샌드위치 테스트 또는 경합 테스트에 의해 검체의 검출이 가능하다.
샌드위치 테스트에서, 마킹(표시)된 결합 시약이 검체와 결합하고, 검체는 포획 시약에 의해 고체 지지대 상에 고정화된다. 샘플내 검체의 존재 또는 비존재는 포획 시약의 수준에서 가시적인 또는 측정 가능한 시그널의 존재 또는 비존재에 의해 측정된다.
경합 테스트에서, 검체 및 결합 시약은 경쟁적으로 포획 시약과 결합한다. 샘플내 검체의 존재 유무는 포획 시약의 수준에서 가시적인 또는 측정 가능한 시그널의 존재 유무에 의해 측정된다.
특허 EP 0291194호, EP 0560411호 및 EP 0560410호는 액상 샘플을 주입하는 개구부 및 결과를 판독하기 위한 관찰 창을 구비하는 케이스내에 면역 크로마토그라피 고체 지지대의 오직 일 부분이 포함되어 있는 장치를 개시하고 있다.
특허 EP 1091808호는 기공성 고체 지지대가 수개의 부분으로 포함되고, 샘플을 더욱 잘 수집하기 위하여 이동 가능한 액상 샘플용 포획 수단들을 구비한 개선된 장치를 개시한다.
이들 장치들은 가정용으로 그리고 단일 용법으로 사용될 수 있도록 되어 있 다. 실제 이들 장치는 모든 시약들이 장치내 통합되거나 포함되어 있어 조작이 거의 필요하지 않아 사용하기 쉽고 신속하다.
그러나 이러한 고체상에서의 면역 크로마토그라피 테스트들은 샘플내 검체의 양을 측정할 수 없다.
또한, 샌드위치 테스트에서, 몇몇 검체에 대해서 "후크(hook) 효과"가 관찰되었다. "후크 효과"는 면역학적 테스트에서 매우 잘 알려져 있는 바람직하지 못한 현상이다. 이는 검체가 샘플내 매우 고농도로 존재할 때 발생한다. 이러한 후크 효과는 위음성 결과를 초래하여, 샘플내 검체가 존재하지 않는 것으로 잘못된 결론을 도출한다.
샌드위치-형태의 면역학적 분석에서 후크 효과를 나타내는 검체들은 가우스 커브 타입의 시그널/농도 커브를 갖는다(도 1 참조). 도 1은 일정 시간의 결과 판독시 하나의 주어진 시그널(S)이 두 개의 가능한 검체 농도(C1 및 C2), 즉 하나는 낮은(약한, C1) 농도 및 다른 하나는 높은(강한, C2) 농도에 해당함을 보여준다.
경합을 이용한 분석용 시그널/농도 커브를 도 2에 도시하였다. 경합 테스트에서, 분석되는 검체의 두 상이한 각각의 농도(C1 및 C2)에 대하여 두개의 상이한 시그널(S1 및 S2)가 얻어진다.
그러나, 경합 시험은 검체가 상대적으로 낮은 농도로 존재하는 경우 시그널이 소멸되는 문제가 있다.
이러한 샌드위치 및 경합 테스트의 문제점을 해결하기 위해 통상적으로 채택되는 방법은 액상 샘플을 희석 시리즈로 하여 검체를 분석하는 것이다. 그러나 희 석 시리즈의 사용은 가정용으로는 적당하지 않다. 또한, 각 샘플들을 다른 희석 농도에서 수회 테스트하여야 하므로, 부가적인 조작이 필요하고, 단일 사용 테스트 장치의 소모가 증가하는 문제가 있다.
특허 문헌 DE 10054093호는 각각 샌드위치-타입 테스트 및 경합-타입 테스트로 사용되도록 두 개의 구별되거나 독립적인 부분으로 구성된 면역-여과 장치를 제안하고 있다. 이 장치에서는 형광 마커에 콘쥬게이트된 특이적 결합 시약이 검체와 즉석에서 혼합된다. 이후 얻어진 혼합물을 두 부분으로 나눈다. 첫 부분은 샌드위치 부분 내로 여과되고, 고정화된 제2 결합 시약과 반응하여 고정화되며, 두 번째 부분은 장치의 경합 부분 내로 여과되고, 포획 시약과 반응하며, 이때 포획 시약은 고정화되어 있으며 검체와 동일하거나 검체의 아날로그이다. 얻어진 각각의 형광 시그널로부터 검체를 측정할 수 있다.
이 장치는 본질적으로 검체 정량의 민감성이나 정확성을 개선하지 못하는데, 각 단위 테스트가 특이적 결합 시약의 초기 농도와 관련되어 작용하기 때문이다.
문헌 US 2005/0112729(특히 문단 63 및 청구항 제1항 참조)은 검체 및 마킹된 제1 특이적 결합 시약 간의 복합체를 측정하는 장치가 개시되었으며, 이들 장치는 모세관 작용 수단; 모세관 작용 수단의 소위 경합 영역으로서, 고정화되고, 리간드와 복합체를 형성하며, 또한 마킹된 제2 검체-특이적 결합 시약; 모세관 작용 수단의 소위 검출 영역으로서, 고정화되고, 상기 복합체 및 모세관 작용 수단상에서 상기 복합체의 순환에 의해 경합 영역에 위치되거나 탈복합화될 수 있는 표시된 리간드 양쪽에 결합할 수 있는 포획 시약을 포함한다.
검체의 분석은 경합 및 검출 영역에서 얻어진 시그널로부터 이루어진다.
이러한 형태의 테스트는 실행이 너무 복잡해서, 오직 검체의 고정밀 정량을 위해서만 정당화될 수 있다.
본 발명은 상기 전술된 장치들의 단점을 해결하기 위한 것이다. 특히 본 발명은 어떠한 상황에서도, 즉 검체의 초기 농도와 관계없이, 특히 초기 농도가 상대적으로 매우 높거나 상대적으로 매우 낮은 경우에도, 충분한 정도의 신뢰성 및/또는 정확도로 검체를 정량할 수 있는 테스트 장치 및 상기 장치의 사용 방법을 제공한다.
본 발명은 도 3에 참고로 도시한 바와 같이, 액상 샘플내 검체 정량을 위한 장치에 관한 것으로서, 상기 장치는
- 기준 모세관 작용 방향(reference capillary action direction; 2)으로 측면 이동(lateral migration)되며, 액상 샘플의 주입 영역(deposit area; 3) 및 상기 주입 영역의 하류(downstream)에 위치하는 검체-검출 영역(5)을 포함하는 모세관 작용 수단(1),
- 습윤(wet)시 모세관 작용에 의하여 상기 전술한 모세관 작용 수단(1) 내에서 기준 방향을 따라 자유로이 이동되는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약(4),
- 검출 영역(5)에 고정화된 제2 검체-특이적 결합 시약(6)을 포함하고,
상기 검출 영역(5)은 고정화된 상태로 상기 제2 특이적 결합 시약(6)과 떨어져 위치하는 검체 또는 검체 아날로그를 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 장치는 도 3에 참고로 도시한 바와 같이 바람직하게 하기의 하나 이상의 부가적인 특징을 단독 또는 조합하여 가진다:
- 본 장치는 액상 샘플 포획 부재(liquid sample capture member)을 가질 수 있으며, 상기 부재는 샘플이 주입 영역내로 순환되도록 하기 위한 것이며, 모세관 작용 수단과 독립되고 상기 주입 영역과 접촉할 수 있다.
- 모세관 작용 수단(1)은 그 위에 또는 그 내에 건조되고 및 자유로운 상태인 제1 결합 시약을 주입하는 영역(4)을 포함할 수 있다; 이러한 제1 결합 시약의 주입 영역은 샘플 주입 영역과 통합되거나, 또는 샘플 주입 영역의 하류에 위치될 수 있으나, 검출 영역(5)의 상류(upstream)에 위치된다.
- 상기 검출 영역(5)에서, 검체(7) 또는 검체의 아날로그는 제2 특이적 결합 시약의 상류 또는 하류에 위치한다.
- 제2 특이적 결합 시약(6), 및/또는 검체(7) 또는 검체의 아날로그는 예를 들면 상기 기준 방향의 횡단선을 따라 모세관 작용 수단상에 위치한다.
- 상기 모세관 작용 수단은 검출 영역(5)의 하류에 대조 영역(C)을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "모세관 작용 수단"은 측면 이동(즉, 모세관 작용을 위해 사용되는 모세관 물질의 두께에 수직으로)에 의해 연속적인 모세관 작용 단위를 구성하거나, 그러한 작용단위로서 작용하는 모든 수단을 지칭한다. 이러한 모세관 작용 수단 중 하나로서, 단일하고 동일한 모세관 또는 기공 물질로 만들어지거나 또는 모세관 작용 방향을 따라 한 부재 또는 물질에서 다른 부재 또는 물질로 모세관 순환이 연속적으로 이루어질 수 있도록 서로 중첩되는 등으로 배열된 수개의 상이한 모세관 부재 또는 물질로 제조된, 모세관 작용의 방향 및/또는 경로(측면 이동)에 따른 장방형 지지대(oblong support) 등을 예시할 수 있다.
이러한 형태의 모세관 작용 수단은 한쪽 말단에 수납되거나 주입된 모든 액체가 이러한 수단의 다른 말단을 향하도록 모세관 작용 방향 및/또는 경로를 결정한다.
본 발명에 따라 고려되는 모세관, 또는 측면 이동에 의한 면역 크로마토그라피 작용은 액체가 기공성의 여과 물질의 두께를 통과하는 면역-여과 기술에서 시행되는 것과는 구별된다.
본 발명에 따라 고려되는 검체 또는 검체 아날로그는 상기 제1 및 제2 결합 시약이외의 제3 시약을 구성한다. 이러한 제3 시약은 적합한 수단에 의해 검출 영역내에 고정 또는 고정화된다. 이러한 모세관 작용 수단 상의 제3 시약은 다른 모든 물질들을 배제하고 오직 상기 제1 특이적 결합 시약과 특이적으로 반응할 수 있다. 특히 일단 모세관 작용 수단에 위치되면 어떤 다른 물질 또는 시약 예를 들면 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 시약 등과는 복합화되지 않는다.
이러한 형태의 장치는 도 3을 참고하여, 하기 정의된 방법 또는 사용 형태에 따라 시행된다:
- 액상 샘플을 모세관 작용 수단의 주입 영역내 주입하는 단계,
- 상기 액상 샘플이 모세관 작용에 의해 검출 영역(5)으로 이동하기에 충분한 시간 동안 방치하는 단계,
- 검체와 복합화된 특이적 결합 시약(4)이 제2 특이적 결합 시약(6)에 부착하여 수득되는 제1 시그널 및, 복합화되지 않은 제1 결합 시약이 검체(7) 또는 검체 아날로그에 부착하여 수득되는 제2 시그널을 상기 검출 영역에서 검출하는 단계,
- 상기 제1 시그널 및 제2 시그널로부터 검체를 측정하는 단계.
바람직하게, 본 발명에 따르면 상기 제1 결합 시약(4)의 양은 액상 샘플 내 존재하는 검체의 양, 또는 상기 액상 샘플 내 존재하는 제1 결합시약의 복합화 부위의 수보다 크다.
정성적 모드에서, 낮은 검체 농도는 제1 시그널의 부존재 및 제2 시그널의 존재에 의해 검출되고; 높은 검체 농도는 양 시그널의 부존재에 의해 검출된다. 정상적인 검체 농도는 제1 시그널 및 제2 시그널의 존재에 의해 검출된다.
유리하게, 본 발명에 따른 장치 및/또는 방법은 샘플내 검체가 매우 낮은 농도로 또는 매우 진하게 농축된 경우에도 위 양성 또는 위 음성 결과를 수득함없이 분석할 수 있다. 또한 놀랍게도 본 발명에 따른 장치 및 방법은 검체의 정량적인 분석이 가능하다.
본 발명에 따른 장치 및/또는 방법은 임신 호르몬(hCG), C-반응성 단백질, 알부민 등과 같은 후크 효과를 많이 나타내는 검체의 분석에 특히 적합하다.
따라서, 본 발명은 액상 샘플내 검체를 분석하는 장치에 관한 것으로, 본 발명의 장치는
모세관 작용 방향(2)으로,
a) 샘플을 주입하거나 수납하는 영역(3);
b) 습윤시 모세관 작용에 의하여 상기 모세관 작용 수단(1)내에 자유로이 이동하는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 검체-특이적 결합 시약;
c) 검체 검출 영역(5);을 포함하는 모세관 작용 수단(1)을 포함하고,
상기 검체 검출 영역(5)은 모세관 작용 방향(2)으로 연속적으로 한편으로는 제2의 고정화된 검체-특이적 결합 시약(6), 및 다른 한편으로 고정화된 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하며; 상기 제1 검체-특이적 결합 시약(4) 및 제2 검체-특이적 결합 시약(6)는 샌드위치 테스트에 의하여 액상 샘플내 검체를 분석하고, 한편 제1 검체-특이적 결합 시약(4) 및 고정화된 검체(7), 또는 검체 아날로그는 경합 테스트에 의해 액상 샘플내 검체를 분석할 수 있게 한다.
일 실시형태에 있어서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약(4)은 지지대상에 건조 상태로 위치되며, 따라서 본 발명은 모세관 작용 방향(2)으로,
a) 샘플을 주입하는 영역(3);
b) 건조된 상태로 위치되며, 습윤시 상기 모세관 작용 수단(1) 내에서 자유로이 이동되는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약(4);
c) 검체 검출 영역(5);을 포함하는 모세관 작용 수단(1)을 포함하고,
상기 검체 검출 영역(5)은 모세관 작용 방향(2)으로 연속적으로 제2의 고정화된 검체-특이적 결합 시약(6), 및 고정화된 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하며; 상기 제1 검체-특이적 결합 시약(4) 및 제2 검체-특이적 결합 시약(6)는 샌드위치 테스트에 의하여 액상 샘플내 검체를 분석하고, 반면 제1 검체-특이적 결합 시약(4) 및 고정화된 검체(7), 또는 검체 아날로그는 경합 테스트에 의해 액상 샘플내 검체를 분석할 수 있게 한다.
다른 실시형태에 있어서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약(4)은 액상 형태의 시약으로 즉석에서 추가된다.
상기 "액상 형태의 시약"은 결합 시약이 용액 또는 현탁액으로 된 모든 시약을 지칭한다. 액상 형태의 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 결합 시약의 제조는 문헌에 기재된 기술에 따라 이루어진다. 통상 콘쥬게이트된 결합 시약은 완충된 식염수내 용액 또는 현탁액이다. 이 용액은 또한 안정화제 또는 항박테리아제 또는 항진균제와 같은 기타 화합물을 포함할 수 있다. 상기 안정화제는 예를 들면 소혈청알부민(BSA) 및 카세인 등을 포함한다.
본 발명에 따른 일부 방법에서, 액상 샘플이 예를 들어 혈장, 혈청 또는 전혈인 경우 희석제(thinner)을 사용할 수 있다. 이러한 희석제는 고체 지지대내에서 샘플 및 마킹된 결합 시약을 끌고 이동한다. 통상적으로 이러한 희석제는 완충된 식염수로 제조되며, 계면활성제 또는 반응에 필요한 기타 다른 성분들을 포함할 수 있다.
바람직하게, 제1 검체-특이적 결합 시약(4)은 특이적 마커와 콘쥬게이트된다.
바람직하게, 모세관 작용 수단(1)은 경성 지지대에 고정된 크로마토그라피 테스트 스트립이다.
바람직한 일 실시형태에서, 상기 모세관 작용 수단(1)은 검출 영역(5)을 관찰할 수 있는 하나 이상의 관찰 창(9)을 구비한 그리핑 지지대(gripping support; 8)내에 통합된다.
본 발명에서 "결합 시약"은 검체 또는 검체와 경쟁하는 포획 시약과 특이적으로 결합할 수 있는 성질을 갖는 화학적, 생화학적 또는 생물학적 물질을 지칭한다.
상기 "결합" 및 "결합하는"은 공유 결합과 같은 강한 결합 또는 항원/항체 결합 또는 아비딘/스트렙타비딘 형태의 약한 결합 모두를 지칭한다.
결합 시약은 예를 들면, 항체, 항원 또는 핵산이다.
경합 테스트에서, 상기 결합 시약은 고체상 내에 존재하고, 검체 그 자체 또는 적합한 검체의 아날로그에 고정된다. "적합한 검체의 아날로그"는 검체와 경합하여 제1 검체-특이적 결합 시약과 특이적으로 결합하는 물질을 지칭한다.
샌드위치-타입 테스트에서, 제1의 마킹된 결합 시약은 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 항-검체(anti-analyte)이며, 예를 들면 마커에 콘쥬게이트된 검체 특이적 항체이다.
샌드위치-타입 테스트에서, 제2 결합 시약은 검체와 특이적으로 결합한다. 따라서 제2의 마킹된 결합 시약 또한 항-검체이며, 예를 들면 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 검체 특이적 항체이다.
"가시적인 및/또는 측정가능한 마커"는 예를 들면 형광, 착색, 동위원소의 존재, 또는 자기적 시그널과 같은 시그널의 방출로 인하여 육안으로 또는 장치의 도움을 받아 직접 또는 간접적으로 검출할 수 있게 하는 모든 표시 방법을 지칭한다. 예를 들면 특히 콜로이드 금, 또는 형광물질, 착색 라텍스 입자, 형광 라텍스 입자 및 아비딘 및 스트렙타비딘과 콘쥬게이트된 입자 등과 같은 특이적으로 착색된 마커들을 들 수 있다.
또한 본 발명은
모세관 작용 방향(2)으로,
a) 샘플을 주입하거나 수납하는 영역(3);
b) 습윤시 모세관 작용에 의하여 모세관 작용 수단(1)내에 자유로이 이동되는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체(4);
c) 검체 검출 영역(5);을 포함하는 모세관 작용 수단(1)을 포함하고,
상기 검체 검출 영역(5)은 모세관 작용 방향(2)으로 연속적으로 한편으로는 제2의 고정화된 검체-특이적 항체(6), 및 다른 한편으로 고정화된 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하며; 상기 제1 검체-특이적 항체(4) 및 제2 검체-특이적 항체(6)는 샌드위치 테스트에 의하여 액상 샘플내 검체를 분석하고, 한편 제1 검체-특이적 항체(4) 및 고정화된 검체(7), 또는 검체 아날로그는 경합 테스트에 의해 액상 샘플내 검체를 분석할 수 있게 한다.
일 실시형태에서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체(4)는 지지대상에 건조 상태로 위치되며, 따라서 본 발명은 모세관 작용 방향(2)으로,
a) 샘플을 주입하거나 수납하는 영역(3);
b) 건조된 상태로 위치되며 습윤시 모세관 작용에 의해 모세관 작용 수단(1) 내에 자유로이 이동되는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체(4);
c) 검체 검출 영역(5);을 포함하는 모세관 작용 수단(1)을 포함하고,
상기 검체 검출 영역(5)은 모세관 작용 방향(2)으로 연속적으로 한편으로 제2의 고정화된 검체-특이적 항체(6), 및 다른 한편으로 고정화된 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하며; 상기 제1 검체-특이적 항체(4) 및 제2 검체-특이적 항체(6)는 샌드위치 테스트에 의하여 액상 샘플내 검체를 분석하고, 한편 제1 검체-특이적 항체(4) 및 고정화된 검체(7), 또는 검체 아날로그는 경합 테스트에 의해 액상 샘플내 검체를 분석할 수 있게 한다.
다른 실시형태에 있어서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체(4)는 액상 형태의 시약으로 즉석에서 추가된다.
바람직하게, 제1 검체-특이적 항체(4)는 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된다.
바람직하게, 모세관 작용 수단(1)은 경성 지지대에 고정된 크로마토그라피 테스트 스트립이다.
바람직한 일 실시형태에서, 상기 모세관 작용 수단(1)은 검출 영역(5)을 관찰할 수 있는 최소한 하나의 관찰 창(9)을 구비한 그리핑 지지대(8)내에 통합된다.
본 발명은 또한 상기 정의된 장치를 시행하여 액상 샘플내 검체를 분석하기 위한 방법에 관한 것으로서, 하기 단계를 포함한다:
a) 하나 이상의 주입 또는 수납 영역, 검출 영역, 및 상기 검출 영역에 고정화된 하나 이상의 포획 시약을 구비하는 하나 이상의 모세관 작용 수단을 구비하는 단계,
b) 모세관 작용 수단의 주입 영역내에 개별적으로 액상 샘플을 한번 이상 주입하는 단계,
c) 상기 액상 샘플이 모세관 작용에 의해 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 특이적 결합 시약을 포함하고 있는 영역내로 이동하기에 충분한 시간동안 방치하는 단계,
d) 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 특이적 결합 시약 및 상기 액상 샘플이 모세관 작용에 의해 검출 영역으로 이동하기에 충분한 시간동안 방치하는 단계,
e) 상기 검출 영역에서 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 특이적 결합 시약이 고정된 정도를 관찰하여, 샌드위치 테스트 및 경합 테스트에 의해 동시에 검체를 측정하는 단계.
일 실시형태에서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 결합 시약은 기공성의 고체 지지대 내 또는 위에 건조되고 자유로운 상태로 주입된다.
일 실시형태에서, 상기 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 특이적 결합 시약은 검체와 동시에 또는 검체를 주입하기 전에, 또는 그 후에 액체 시약 형태로 즉석에서 가한다.
일 실시형태에서, 액상의 희석제가 기공성 고체 지지대상에 추가되거나 주입된다.
상기 방법의 일 실시 형태에서, 상기 a) 단계에서 검출 영역은 두 개 이상의 포획 시약을 포함할 수 있고, 이 중 하나는 고정화된 검체 또는 검체의 아날로그이고, 다른 하나는 고정화된 검체-특이적 결합 시약이다.
"포획 시약(capture reagent)"은 검체 또는 검체의 아날로그와 특이적으로 결합하는 성질을 갖는 화학적, 생화학적 또는 생물학적 물질을 의미한다.
경합 테스트의 경우, 포획 시약은 제1 결합 시약과도 결합한다. 검체 및 포획시약은 통상적으로 리간드/항리간드, 항원/항체, DNA/RNA, 또는 DNA/DNA 쌍을 형성한다. 따라서, 검체가 항원 또는 햅텐인 경우, 포획 시약은 예를 들면 검체 특이적 항체이다. 검체가 항체인 경우 포획 시약은 항체 또는 검체를 인식하는 특이적인 항체에 의해 인식되는 항원이다. 검체가 핵산인 경우, 포획 시약은 예를 들면 상보적인 DNA 프로브이다.
고정화된 포획 시약은 예를 들면 검체와 강한 친화성을 갖는 다클론 또는 단클론 항체이며, 보다 바람직하게는 단클론 항체이다.
민감성을 증강시키기 위하여, 예를 들면 간접적 검출을 위해 본 분야에 공지되어 있는 기술에 따른 표시 항체, 예를 들면 비오티닐 항체들을 사용하여 아비딘-비오틴 및 스트렙타비딘-비오틴 결합체 형성을 통해 간접적으로 검출할 수 있다.
이러한 비오티닐화된 표시 항체는 민감성을 증가시키기 위해 미리 검출 영역내 테스트-라인상에 직접 위치되거나, 또는 제1 특이적 항체와 함께 위치되고 유출되며 고정되어 검체 및 항체의 접촉 시간을 증가시키고, 예를 들면 고정화 부위의 수의 증가에 의해 민감성을 증가시킬 수 있다.
검체-특이적 포획 시약은 본 분야에 공지된 기술에 따라 고체 지지대상에 고정화된다. 이러한 포획 시약은 습윤시 이동되지 않도록 고정화된다. 이러한 고정은 예를 들면 흡수 또는 공유 결합에 의해 이루어진다.
"항-검체"는 검체 또는 검체와 경합하여 포획시약과 특이적으로 결합하는 성질을 갖는, 예를 들면 항체, 항원 또는 핵산 등의 화학적, 생화학적, 또는 생물학적 물질을 지칭한다.
본 발명에 따르면, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 액상 샘플내 검체를 측정하는 방법에 관한 것이다:
a) 전술한 장치를 제공하는 단계;
b) 상기 a) 단계의 장치내 모세관 작용 수단(1)의 주입 또는 수납 영역(3) 내에 액상 샘플을 주입하는 단계;
c) 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 특이적 항체(4) 및 상기 액상 샘플이 모세관 작용에 의해 주입 또는 수납 영역(3)에서 검출 영역(5)으로 이동하기에 충분한 시간 동안 방치하는 단계,
d) 상기 검출 영역에서 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 특이적 결합 시약(4)이 상기 검출 영역(5)내 고정된 정도를 관찰하여 샌드위치 테스트 및 경합 테스트에 의해 동시에 검체를 측정하는 단계.
바람직한 일 실시예에서, 상기 b) 단계에서 액상 샘플과 희석제를 상기 a)단계의 장치의 모세관 작용 수단(1)의 주입 또는 수납 영역(3)에 주입한다.
"검체"는 샘플내 검출하고자 하는 모든 화학적, 생화학적 또는 생물학적 물질을 지칭한다. 본 발명에 따른 장치 및 방법에 의해 검출되는 검체로는 특히 단백질, 펩티드, 항체, 호르몬, 스테로이드, 병원체 또는 암 세포에서 유래된 항원, 박테리아, 바이러스 또는 기생충과 같은 병원체, 핵산(DNA 또는 RNA), 치료 화합물, 약물 또는 항생제 등을 들 수 있다.
"검출하다" 및 "측정하다"등은 샘플내 검체의 존재 또는 부존재를 결정하는 것 뿐 아니라, 샘플내 검체를 측정하고 및 정량화하는 모든 것을 지칭한다. 실제, 본 발명에 따른 장치 및 방법에 의해 정량적인 또는 반정량적인 측정이 가능하다.
본 발명의 바람직한 일 실시형태에서, 검체는 hCG(융모 성선자극호르몬; choriogonadotropin hormone), C-반응성 단백질 또는 알부민이다.
"액상 샘플"은 검체가 용액 또는 현탁액상으로 존재하는 샘플을 말한다. 이러한 액상 샘플은 특히 생물학적 유체 또는 체액이다. 액상 샘플은 또한 생물학적 유체 또는 체액에서 직접 또는 간접적으로 수득된다. 샘플은 고체 샘플의 약체 추출물일 수 있다.
통상적으로, 액체 샘플은 뇨, 전혈(whole blood), 혈장 또는 혈청이다.
본 발명에 따른 일부 방법에서, 상기 액상 샘플이 예를 들어 혈장, 혈청 또는 전혈인 경우 희석제가 사용된다. 희석제는 샘플과 함께 기공성 고체 지지대상에 위치된다. 또는 상기 희석제는 샘플을 주입하기 전후에 상기 기공성 고체 지지대상에 위치된다. 희석제는 기공성 고체 지지대에서 샘플과 마킹된 결합 시약을 끌고 이동하거나, 또는 그 이동을 촉진시키면서 이동한다. 통상적으로 희석제는 완충된 식염수로 제조되고; 계면 활성제 또는 반응에 필요한 기타 다른 요소들을 포함한다.
"모세관 작용 수단"은 단순 모세관 작용에 의해 액체가 이동될 수 있는 기공성 고체 지지대를 지칭한다. 이 지지대의 기공성으로 인해 액체 또는 습윤된 샘플 및/또는 시약은 모세관 작용에 의해 이동된다(또는 측면 이동). 이러한 모세관 작용 수단은 측면 이동되는 모든 면역 크로마토그라피 기술에 광범위하게 사용되고 있다.
본 발명에 따른 면역 크로마토그라피 장치에서 시행되는 모세관 작용 수단은 본 분야에서 잘 알려져 있다(EP 0284232호 참조). 예로서, 이들 모세관 작용 수단은 셀룰로스, 나일론, 니트로셀룰로스, 폴리에틸렌 또는 유리 섬유(glass fiber) 등과 같은 다양한 면역 크로마토그라피 지지대로 제조될 수 있다.
모세관 작용 수단은 하나 또는 수개의 구별되는 부분으로 제조될 수 있다. 지지대의 각종 부분은 상이한 물질로 제조될 수 있다. 모세관 작용 수단이 상이한 물질 또는 상이한 부분으로 만들어지는 경우, 이들 부재는 모세관 작용 수단내에서 모세관 순환이 연속적으로 이루어지도록 위치된다.
통상적으로 모세관 작용 수단은 모세관 작용 방향에 따라 장방형 기공성 고체 지지대로 제조된다. 바람직하게 본 발명에 따른 장치의 모세관 작용 수단은 면역 크로마토그라피 테스트 스트립 형태의 기공성 고체 지지대를 포함한다. 모세관 작용 수단은 예를 들면 수개의 충적되거나 중첩되는 테스트 스트립으로 제조된 면역 크로마토그라피 테스트 스트립의 형태로 존재한다.
본 발명에 따른 장치는 예를 들면 경성 지지대에 고정된 크로마토그라피 테스트 스트립으로 제조된다. 경성 지지대는 판지, 플라스틱 코팅된 판지, 또는 가장 바람직하게는 플라스틱 물질과 같은 다양한 물질로 제조될 수 있다. 바람직하게 경성 지지대는 폴리스티렌으로 제조된다.
모세관 작용 수단은 샘플 주입 또는 수납 영역 및 샘플 검출 영역을 포함한다. 주입 영역 및 검출 영역은 모세관 작용 수단과 구별되며 별개이다. 이들 영역은 주입 또는 수납 영역에서 모세관 작용 방향을 따라 검출 영역까지 모세관 작용의 연속성이 확보되도록 위치된다. 통상적으로 주입 영역 및 검출 영역은 각각 모세관 작용 수단의 대향하는 두 말단에 해당된다. 모세관 작용 수단은 따라서, 예를 들면 모세관 작용 방향을 따라 주입 영역 및 검출 영역을 각각 형성하는 근위 말단 및 원위 말단을 갖는 장방형 고체 지지대로 제조된다.
이러한 영역들은 예를 들면 단일 물질로 제조된 동일한 스트립상에 존재할 수 있다. 바람직하게, 특정 기공성 물질이 모세관 작용 수단의 각 영역에 사용된다. 예를 들어 기공성 흡수성 물질은 샘플 주입 영역으로 사용될 수 있다. 실제로, 모세관 작용 수단의 주입 영역은 뇨와 접촉하도록 의도되거나 액상 샘플을 수납하도록 되어 있다. 따라서, 적합한 흡수성 물질을 선택할 수 있다. 이러한 물질들은 본 분야에 잘 알려져 있다. 다른 흡수성 물질이 제1 특이적 결합 시약을 수납하는 영역 및/또는 검출 영역에 사용될 수 있다.
모세관 작용 수단의 샘플 주입 영역은 흡수성 물질내 포획 부재들과 협동할 수 있다. 이러한 포획 부재들은 예를 들어 뇨 등과 직접 접촉할 수 있다. WO 00/00288에 개시된 바와 같이 포획 부재들은 두 위치 즉 모세관 작용 수단과 일정 거리에 있는 액상 샘플 수집 위치 및 모세관 작용 수단의 주입 영역과 연속적으로 또는 모세관 작용에 의해 접촉하는 위치 사이를 이동할 수 있다.
모세관 작용 수단은 예를 들면 가시적인 및/또는 검출가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체를 가질 수 있다. 이 항체는 모세관 작용 수단에 건조된 상태로 위치되고 습윤시 모세관 작용에 의해 자유로이 이동한다. 이 제1 검체-특이적 항체는 샘플 주입 또는 수납 영역내 국재화될 수 있다. 또는 제1 항체는 건조된 상태로 샘플 주입 또는 수납 영역의 하류에 위치됨으로써 샘플 주입에 따른 세척 효과에 의한 시약 소실을 피할 수 있다. 따라서, 액상 샘플은 모세관 작용 수단의 주입 영역내에 주입되고, 이후 이 샘플은 모세관 작용에 의해 모세관 작용 수단을 통해 이동되며, 마커에 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체를 이동시킨다.
바람직하게 모세관 작용 수단은 그리핑 지지대내로 포함된다. 그리핑 지지대는 모세관 작용 수단을 용이하게 조작할 수 있게 하며, 특히 수분으로부터 모세관 작용 수단을 보호한다.
그리핑 지지대는 모세관 작용 수단을 부분적으로 또는 전체로 둘러싸고 있다.
그리핑 지지대는 판지, 플라스틱 코팅된 판지, 또는 더욱 바람직하게 플라스틱 물질과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 바람직하게 그리핑 지지대는 경성의 불침투성 물질로 제조된다. 이러한 손에 질 수 있는 지지대 또는 케이스는 특히 특허 EP 0291194호, EP 0560411호, EP 0560410호 및 EP 1091808호에 개시되어 있다.
그리핑 지지대는 통상 케이스의 형태로 되어 있다.
본 발명의 일 실시형태에서, 모세관 작용 수단은 액상 샘플을 수납하기 위한 샘플 주입 영역 또는 수납 영역을 포함하며, 이들은 그리핑 지지대에서 돌출되어 있다.
본 발명의 다른 실시형태에서, 그리핑 지지대 또는 케이스는 액상 샘플을 주입하기 위한 하나 이상의 개구부를 포함한다.
통상적으로, 그리핑 지지대는 또한 모세관 작용 수단의 검출 영역을 관찰하기 위한 하나 이상의 관찰 창을 구비한다.
액상 샘플내 검체의 분석을 가능하게 하는 본 발명에 따른 방법을 시행하는데 사용되는 시약은 본 기술분야에 잘 공지되어 있다.
가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체는 건조된 상태로 모세관 작용 수단 내 또는 그 위에 위치되나, 습윤시 모세관 작용에 의해 자유로이 이동한다.
제2 검체-특이적 항체는 모세관 작용 수단의 검출 영역내에 영구적으로 고정화되어 있다.
"검체 특이적 항체"는 항원/항체 타입의 결합으로 검체와 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 통상 검체에 강한 친화성을 갖는 다클론 또는 단클론 항체를 사용한다. 바람직하게는 단클론 항체를 사용한다.
제2 검체 특이적 항체는 본 분야에 공지된 기술에 의해 모세관 작용 수단의 검출 영역에 고정화된다.
제2 검체 특이적 항체는 습윤시 이동되지 않도록 고정된다. 이러한 고정화는 예를 들면 흡수나 공유 결합에 의해 이루어진다.
제1 및 제2 항체는 검체와 각각 그리고 특이적으로 결합하며, 예를 들면 검체와 동일 또는 상이한 두개의 에피토프 부위에 결합한다.
본 발명의 장치의 제1 및 제2 항체는 샌드위치 테스트를 통해 액상 샘플내 검체를 측정할 수 있게 한다.
또한 본 발명에 따른 장치는 검체 그 자체 또는 검체의 아날로그를 포함하며, 모세관 작용 수단의 검출 영역내 고정화한 상태로 포함된다.
검체 또는 검체의 아날로그는 본 기술 분야에 공지된 기술에 의해 모세관 작용 수단의 검출 영역내 고정화된다. 검체 또는 검체의 아날로그는 습윤시 이동되지 않도록 고정화된다. 이러한 고정화는 예를 들면 흡수나 공유 결합에 의해 이루어진다.
이러한 검출 영역내 제2 시약은 검체 그 자체 또는 적합한 검체 아날로그이다. "적합한 검체 아날로그"는 검체와 경합하여, 제1 결합 시약 또는 검체 특이적 항체와 특이적으로 결합하는 물질을 지칭한다.
일 실시형태에서, 한편으로는 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체 특이적 항체 및 다른 한편으로 모세관 작용 수단의 검출 영역에 고정화된 검체, 또는 검체 아날로그에 의해 경합 테스트를 통하여 액상 샘플내 검체의 검출을 가능하다. 바람직하게 제2 검체-특이적 항체는 모세관 작용 방향에서 검체 또는 검체 아날로그의 상류에 위치된다.
습윤시 자유로이 이동하는 가시적인 및/또는 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 제1 검체-특이적 항체는 샌드위치 테스트 및 경합 테스트 양자에 의한 측정 또는 이로부터의 결과를 직접적으로 관찰할 수 있게 한다. 가시적인 마커는 모세관 작용 수단의 검출 영역에 농축되는 경우 육안에 의해 직접 관찰될 수 있다. 마커는 육안으로 또는 측정 장치의 도움으로 직접 측정될 수 있다. 이러한 측정은 다른 부가적인 조작을 할 필요없이 직접 관찰로 수행된다.
바람직하게 본 발명에 따른 장치는 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 검체 특이적 항체를 포함한다.
본 발명에 사용된 마커는 시그널을 방출하기 때문에 육안으로 직접 또는 장치의 도움을 받아 간접적으로 검출할 수 있으며, 상기 시그널은 예를 들면 형광, 착색, 동위원소의 존재, 자기적 시그널 등이다.
예를 들면 물에 불용성인 소입자로 된 착색 또는 형광 입자 마커를 들 수 있고, 이들은 액체상에서 현탁액, 분산액 또는 졸을 형성할 수 있다.
입자 마커는 본 분야에 잘 공지되어 있다. 특이 잘 알려져 있는 착색 또는 형광 입자 마커로는 콜로이드 금, 착색 라텍스 입자, 형광 라텍스 입자 및 아비딘 또는 스트렙타비딘 등에 콘쥬게이트된 입자를 들 수 있다.
육안으로 직접 관찰가능한 마커 중 하나는 데스트란-타입 마커(Hansen T.M., IVD Technology 4, 35-40. 2003)이다. 이 결합 시약은 이후 형광 발색단(flurophore)를 갖고 있는 덱스트란 사슬(폴리사카라이드 유도체)에 콘쥬게이트된다.
결합 시약은 본 기술분야에 잘 알려진 기술에 의해 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된다.
본 발명의 바람직한 일 실시형태에서, 모세관 작용 수단의 검출 영역은 모세관 작용방향으로, 제2 검체 특이적 항체의 하류, 검체 또는 검체 아날로그의 하류에 배열된 제3 시약을 포함한다. 이 제3 시약은 양성 대조로 작용하여 액상 샘플이 모세관 작용에 의하여 효과적으로 모세관 작용 수단의 주입 영역에서 검출 영역으로 이동하였는지를 보증한다.
제3 시약은 모세관 작용 수단의 검출 영역내에 영구적으로 고정화되어 있다.
이는 예를 들면 마커에 콘쥬게이트된 제1 검체 특이적 항체에 결합할 수 있는 항체를 사용할 수 있다. 이경우 이 제3 시약은 마커에 콘쥬게이트된 제1 검체 특이적 항체가 모세관 작용 수단의 검출 영역으로 이동했는지를 검증할 수 있다. 또는 제3 시약은 검체와는 관계없이 단순히 액상 샘플이 검출 영역까지 모세관 작용에 의해 이동되었는지 검증할 수 있게 하는 것일 수 있다.
이하, 본 발명은 도면과 실시예를 통해 더욱 자세히 설명된다. 그러나 하기 도면과 실시예는 본 발명을 제한하는 것이 아니다.
도 1은 샌드위치 테스트를 통한 면역 분석에서 검체의 시그널/농도 곡선을 나타낸 것이고,
도 2는 경합 테스트를 통한 면역 분석에서 검체의 시그널/농도 곡선을 나타낸 것이고,
도 3은 본 발명에 따른 테스트를 통한 검체의 동시 분석용 장치를 나타낸 것이고,
도 4는 케이스내에 면역 크로마토그라피 테스트 스트립을 포함하는 본 발명에 따른 신속 테스트 장치를 나타낸 것이고,
도 5는 hCG 검출용 면역 크로마토그라피 테스트 스트립을 나타낸 것이고,
도 6은 검체 농도가 낮은 경우 도 5에 따른 테스트 결과를 도시한 것이고,
도 7은 검체 농도가 높은 경우 도 5에 따른 테스트 결과를 도시한 것이다.
도 1은 샌드위치 테스트를 통한 면역 분석에서 수득된 시그널/농도 곡선을 나타낸 것이다. 얻어진 곡선은 가우스 곡선 형태를 나타내며, 일정 시간의 결과 판독시, 주어진 하나의 시그널(S)이 두개의 가능한 검체 농도(C1 및 C2), 즉 하나는 낮은(약한, C1) 농도 및 다른 하나는 높은(강한, C2) 농도에 해당함을 보여준다.
도 2는 경합을 통한 분석용 시그널/농도 곡선을 나타낸 것이다. 분석되는 검체의 두 농도(C1 및 C2)에 대하여 두개의 상이한 시그널(S1 및 S2)가 얻어진다. 그러나 검체의 농도가 상대적으로 낮은 경우 시그널이 소멸됨을 볼 수 있다.
도 3은 본 발명에 따른 검체의 동시 분석용 장치를 도시한 것으로서, A)는 그리핑 지지대가 없는 상태의 장치를 도시한 것이고, B)는 그리핑 지지대를 포함하는 장치를 도시한 것이다.
도 3A는 모세관 작용 방향(2)으로
a) 제1 모세관 물질(20)상에 샘플의 주입 또는 수납 영역(3);
b) 습윤시 모세관 작용 수단(1)내에서 자유로이 이동하는, 가시적인 및/또는 측정가능한 마커에 콘쥬게이트된 제1 검체 특이적 항체(4); 여기에서, 마킹된 제1 항체는, 제1 모세관 물질(20)과 연속적으로 모세관 순환되는 제2 모세관 물질(21)상에 건조되고 자유로운 상태로 위치되어 있다.
c) 모세관 작용 방향(2)으로 연속적으로, 고정화된 제2 검체 특이적 항체(6) 및 고정화된 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하는 검체 검출 영역(5); 여기에서 제2 항체 및 검체(또는 검체 아날로그)는 제2 모세관 물질(21)과 연속적으로 모세관 순환되는 제3 모세관 물질상에 위치된다;을 포함하는 모세관 작용 수단(1)을 포함하는 장치를 도시한 것이다.
도 3B는 검출 영역(5)을 관찰할 수 있는 하나 이상의 관찰 창(9) 및 액상 샘플을 수집하거나 주입하거나 수납하기 위한 개구부(23)을 구비한 그리핑 지지대(8) 내로 통합된 모세관 작용 수단(1)을 보여준다.
실시예
임신 테스트(뇨에서 융모 성선자극호르몬(hCG)의 검출)
도 4는 본 발명에 따른 크로마토그라피 테스트 스트립이 삽입된 케이스 타입의 신속 테스트 장치의 외면도를 도시한 것이다.
테스트 스트립(1)은 유리 섬유(21)상에 위치하며 콜로이드 금으로 마킹되고 탈수된(콘쥬게이트된) 항 β-hCG 단클론 항체(4)를 포함하고 있다. 이 특정 마커는 샘플 웰(S)에 주입된 액상 샘플에 의해 용해되어, 테스트 스트립상에서 이동되어 차례로 고정된 항-hCG 다클론 항체를 포함하는 제1 영역(T1), 고정 hCG를 포함하는 제2 영역(T2), 및 다클론 고우트 항-마우스 면역글로불린 항체를 포함하는 제3 영역(C)과 접촉한다(도 5 참조).
주입된 샘플내에 hCG 호르몬이 없는 경우(또는 매우 저 농도로 존재하는 경우), 실질적으로 T1 영역에서는 어떠한 가시적인 반응이 일어나지 않는 반면, T2 및 C 영역에서는 선이 나타났다(도 6 참조).
샘플내 hCG 호르몬이 매우 고 농도로 존재하는 경우, T1 영역에서의 반응은 매우 약하거나 존재하지 않았으며(전술한 "후크" 효과 때문이다); T2 영역에서도 아무런 가시적인 반응이 일어나지 않으며(콜로이드 금으로 마킹된 항 β-hCG 항체의 거의 모두가 샘플내 검체(hCG)와 반응하여 더 이상 검체(또는 검체 아날로그)와 반응할 수 없기 때문이다); C 영역은 양성으로 나타났다(도 7 참조).
따라서, 본 시스템은 검체가 매우 낮은 농도로 존재하거나(2개의 양성 라인: T2 + C) 또는 매우 높은 농도로 존재하는 경우(하나의 양성 라인: C)에도 효과적으로 구별되는 결과를 판독할 수 있었다. 또한 라인은 상이한 위치(T1 또는 T2)에서 나타났다.
테스트의 가시적인 판독에 의해 샘플내 검체의 농도에 따라 검출 영역(T1, T2 및 C)에서 얻어진 결과를 하기 표 1에 요약하였다.
[표 1]
샘플내 hCG 농도에 따른 테스트의 가시적인 판독 결과
hCG 농도(mIU/ml)
 0
 5 50 00 .103 .104 05 .105
라인 T1 /- + + + + +
라인 T2 + + + + + + +
라인 C + + + + + + + + +
결과는 가시적으로 해석하는 이외에도, 기계를 사용한 판독도 가능하며, 이 경우 샘플을 미리 희석하거나 농도 범위로 사용할 필요없이 정량적 또는 반정량적인 검체 농도에 대한 결과를 얻을 수 있다. 실제 검출 영역에서 수득된 결과는 농도에 의존하여 상이하였으며, 이러한 상이성에 기초하여 캘리브래이션 또는 가시적인 관찰을 통해 검체 농도를 정량화할 수 있었다.

Claims (11)

  1. 하기를 포함하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치:
    - 액상 샘플 주입 영역(3) 및 상기 주입 영역의 하류에 위치하는 검체-검출 영역(5)을 포함하는, 기준 모세관 작용 방향으로 측면 이동을 위한 모세관 작용 수단(1), 여기서 상기 검체-검출 영역(5)은 제1 검출 영역 및 상기 제1 검출 영역의 하류에 위치하는 제2 검출 영역을 포함하는 것임;
    - 상기 액상 샘플 주입 영역내에 제1 검체-특이적 결합 시약(4)을 포함하는 영역, 여기서 상기 제1 검체-특이적 결합 시약(4)은 습윤시 모세관 작용에 의해 모세관 작용 수단(1)내에서 기준 모세관 작용 방향으로 자유로이 이동되는, 가시적인 마커, 측정가능한 마커 또는 가시적이고 측정가능한 마커와 콘쥬게이트된 것임; 및
    - 상기 제1 검출 영역에 고정화된 제2 검체-특이적 결합 시약(6), 여기서 상기 제2 검출 영역은 고정화된 상태로 상기 제2 검체-특이적 결합 시약(6)과 떨어져 하류에 위치하는 검체(7) 또는 검체 아날로그를 포함하고, 상기 제1 검출 영역은 액상 샘플내 검체를 샌드위치 분석에 의해 측정하도록 구성되고, 상기 제2 검출 영역은 액상 샘플내 검체를 경합 분석에 의해 측정하도록 구성된 것임.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 주입 영역내 샘플 흐름을 위하여, 상기 모세관 작용 수단과 독립되고 상기 주입 영역과 접촉할 수 있는 액상 샘플 포획 부재를 포함하는 것을 특징으로 하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 모세관 작용 수단(1)이 그 위에 또는 그 내에 건조되고 자유로운 상태인 제1 검체-특이적 결합 시약(4)의 주입 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 제1 검체-특이적 결합 시약의 주입 영역이 상기 액상 샘플 주입 영역(3)과 통합되거나, 또는 상기 액상 샘플 주입 영역(3)의 하류 및 검체-검출 영역(5)의 상류에 위치되는 것을 특징으로 하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서,
    상기 제2 검체-특이적 결합 시약(6), 및/또는 검체(7) 또는 검체의 아날로그가 기준 방향의 횡단선을 따라 모세관 작용 수단상에 위치되는 것을 특징으로 하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 모세관 작용 수단이 검체-검출 영역(5)의 하류에 대조 영역(C)을 포함하는 것을 특징으로 하는, 액상 샘플내 검체 측정 장치.
  8. 하기 단계를 포함하는, 제1항에 따른 액상 샘플내 검체 측정 장치를 실행하는 방법:
    - 액상 샘플을 모세관 작용 수단의 주입 영역(20)내에 위치시키는 단계;
    - 상기 액상 샘플이 모세관 작용에 의해 이동하기에 충분한 시간 동안 방치하는 단계;
    - 상기 검체-검출 영역에서, 검체와 복합화된 제1 검체-특이적 결합 시약(4)이 제2 검체-특이적 결합 시약에 부착되어 수득된 제1 시그널 및, 복합화되지 않은 제1 검체-특이적 결합 시약이 검체에 부착되어 수득된 제2 시그널을 검출하는 단계; 및
    - 상기 제1 시그널 및 제2 시그널로부터 검체의 존재를 측정하는 단계.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 제1 검체-특이적 결합 시약(4)의 양이 액상 샘플내 존재하는 검체 양 또는 상기 액상 샘플내 존재하는 복합화 부위의 수보다 큰 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 삭제
  11. 삭제
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1808696B1 (de) * 2006-01-14 2009-03-11 Roche Diagnostics GmbH Immunologisches Testelement mit verbesserter Kontrollzone
JP2008249339A (ja) * 2007-03-29 2008-10-16 Gc Corp 免疫クロマトグラフィー検査用具
SE533515C2 (sv) 2008-04-16 2010-10-12 Aamic Ab Analysförfarande för samtidig analys av flera analyter
JP2011158406A (ja) * 2010-02-03 2011-08-18 Sumitomo Bakelite Co Ltd ケーシング、ケーシングキットおよび検体採取キット
US9547004B2 (en) * 2011-03-09 2017-01-17 Abionic Sa Rapid quantification of biomolecules in a selectively functionalized nanofluidic biosensor and method thereof
FR2997194B1 (fr) 2012-10-24 2014-11-28 Milovan Stankov Dispositif pour la determination d'au moins un analyte susceptible d'etre contenu dans un echantillon liquide
US10890590B2 (en) 2012-09-27 2021-01-12 Ellume Limited Diagnostic devices and methods
CN105723220A (zh) * 2013-11-12 2016-06-29 光州科学技术院 能够测定广泛浓度范围的生物物质浓度的免疫层析条状传感器
WO2016115608A1 (en) * 2015-01-22 2016-07-28 Ellume Pty Ltd Diagnostic devices and methods for mitigating hook effect and use thereof
FR3038056B1 (fr) * 2015-06-25 2019-08-02 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Dispositif a flux lateral avec prelevement
CN106053794A (zh) * 2016-06-30 2016-10-26 厦门宝太生物科技有限公司 一种用于准确检测待测物的试剂卡、试剂盒和用途
KR102582297B1 (ko) 2017-05-19 2023-09-25 필립모리스 프로덕츠 에스.에이. 대상체의 흡연 상태를 구별하기 위한 진단 테스트
RU201487U1 (ru) * 2020-06-09 2020-12-17 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) Устройство для мультиплексного иммунохроматографического анализа патогенов вирусной и бактериальной природы с дополнительной стадией усиления сигнала
KR20240045314A (ko) 2021-08-18 2024-04-05 필립모리스 프로덕츠 에스.에이. 항체 및 이의 항원 결합 단편
WO2023237914A1 (es) * 2022-06-10 2023-12-14 Herane Vives Andres Kit y metodo para el automuestreo de cera de los oídos y para la medicion de biomarcadores in situ a partir de dicha cera de oidos

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050112779A1 (en) * 2003-11-21 2005-05-26 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Extension of the dynamic detection range of assay devices

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1303983C (en) 1987-03-27 1992-06-23 Robert W. Rosenstein Solid phase assay
EP1248112A3 (en) 1987-04-27 2004-08-25 Inverness Medical Switzerland GmbH Immunochromatographic specific binding assay device
US6664114B1 (en) * 1992-08-03 2003-12-16 Sapidyne Instruments, Inc. Solid phase assay for detection of ligands
GB2300914B (en) * 1995-04-28 1998-04-29 Tepnel Medical Ltd Analytical device
WO1997006439A1 (en) * 1995-08-09 1997-02-20 Quidel Corporation Test strip and method for one step lateral flow assay
PT1031036E (pt) * 1997-10-06 2008-08-20 Enterix Inc Aparelho e método para detecção de analito
FR2780317B1 (fr) 1998-06-30 2000-08-11 Vedalab Dispositif de determination d'un analyte dans un echantillon liquide
US6183972B1 (en) * 1998-07-27 2001-02-06 Bayer Corporation Method for the determination of analyte concentration in a lateral flow sandwich immunoassay exhibiting high-dose hook effect
JP2002122599A (ja) * 2000-10-17 2002-04-26 Nitto Denko Corp 免疫測定法
DE10054093B4 (de) * 2000-11-01 2006-02-09 peS Gesellschaft für medizinische Diagnose-Systeme mbH Verfahren zur Bestimmung der Antigenkonzentration in einer Probe mittels Fluoreszenzimmuntests
JP2002303629A (ja) * 2001-04-06 2002-10-18 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法
JP4768224B2 (ja) * 2001-09-10 2011-09-07 メソ スケイル テクノロジーズ，エルエルシー １つの試料について複数の測定を実施する方法及び装置
JP3920741B2 (ja) 2002-08-28 2007-05-30 森永乳業株式会社 物質の検出試薬及び検出方法
FR2853077B1 (fr) * 2003-03-28 2005-12-30 Vedalab Procedes immunochromatographiques en phase solide
US20050218464A1 (en) * 2004-03-18 2005-10-06 Holm-Kennedy James W Biochemical ultrasensitive charge sensing

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050112779A1 (en) * 2003-11-21 2005-05-26 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Extension of the dynamic detection range of assay devices

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Publication number Publication date
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