KR101270736B1

KR101270736B1 - 한방추출물을 유효성분으로 하는 소양증 개선용 조성물

Info

Publication number: KR101270736B1
Application number: KR1020100044636A
Authority: KR
Inventors: 정원철; 김재현; 김지은; 함경식; 방미애; 응웬지용
Original assignee: (주) 메디플랜
Priority date: 2010-05-12
Filing date: 2010-05-12
Publication date: 2013-06-03
Also published as: KR20110125087A

Abstract

본 발명은, 지황, 석창포, 황백, 고삼, 죽엽, 자초, 편축, 목근피, 관동화, 장군피 및 목과 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 조성물에 관한 것으로서, 피부면역조절을 유도하여 피부소양증의 개선 효과를 가진다. 또한, 본 발명은　항염증 효과, 수분 보습 효과 및 주름개선의 효과를 가지며 지방산대사(LTB₄) 및 히스타민(histamine)과 관련되는 소양증모델에서 소양증에 효과가 있는 것으로 임상학적으로 증명되었고, 면역학적으로는 Th1 cytokine의 생산량을 증가시킴으로써 소양증개선효과를 보였다.

Description

한방추출물을 유효성분으로 하는 소양증 개선용 조성물{A COMPOSITION COMPRISING EXTRACT FROM HERBAL FOR IMPROVING PRURITUS}

본 발명은, 지황, 석창포, 황백, 고삼, 죽엽, 자초, 편축, 목근피, 관동화, 장군피 및 목과 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선효과를 갖는 조성물에 관한 것이다.

세계적으로 환경의 급격한 변화와 사회의 다양 복잡화로 인해 피부질환의 발생이 급격한 증가를 보이고 있으며 사회경제적 발전에 부응하여 삶의 질의 향상과 피부질환에 대한 관심의 고조는 새로운 기능성 화장품에 대한 요구를 증가시키고 있다. 또한, 세계적으로 소양증에 보편적인 치료방법이 없어 안전하고 효과가 좋은 제품이 필요한 실정이다. 지금까지 소양증 치료는 주로 스테로이드 제재를 사용하였으나, 부작용 때문에 사용이 제한되어 있으므로 안전한 소양증 개선제 개발이 필요한 실정이다.

가려움증이란 긁고 싶어하는 불쾌감을 유발하는 피부의 상태를 일컫는 것으로 가벼운 접촉, 온도변화, 스트레스 등의 자극이나 화학적, 물리적, 전기적인 자극으로도 유발할 수 있다. 또한 아토피, 건선, 접촉성 피부염과 같은 피부 질환자나 민감성 피부 보유자에게 동반되는 증상이다. 이와 같이 긁고 싶은 충동을 일으키는 독특한 감각인 소양증(pruritus, or itch: 搔痒症) 혹 가려움증은 피부에만 나타나는 전신질환(systemic disease)으로 발진이 없이 몹시 가려운 만성피부병이며, 긁어서 2차적으로 세균 감염으로 인한 습진과 유사한 병리상태를 나타낸다. 벌레에 물리는 것과 같이 대부분의 가려움은 원인이 분명하고 그 증상 또한 짧은 시간 내에 쉽게 사라지지만 만성 소양증의 경우, 가려움으로 인한 고통은 정상적인 생활에 지장을 주는 것을 넘어 때로는 정신적 장애의 원인이 된다. 가려움증(소양증, pruritus)은 전 세계 인구의 약 5%가 고생하고 있는 것으로 알려져 있으며 20세-30세 사이가 가장 심하게 나타나고, 여성보다 남성에게 더 많이 발생하는 것으로 알려져 있다(Shimer et al., 2000). 소양증 환자 중 25%는 황달(jaundice), 50%는 신장투석(renal dialysis)을 하는 사람에게서 나타나는 것으로 보고되었다. 또, 피부 소양증은 가려움증이 주 증상으로 홍반, 부종, 삼출물이 나타나는 만성질환이다(홍창의 등, 1994).

소양증을 2차적 임상증상으로 동반하는 내부 장기 질환으로는 만성 신부전증(renal pruritus), 간장 질환, 내분비질환(endocrine pruritus: 당뇨병, 갑상선 기능항진증: idiopathic generalized pruritus), 악성질환(related to malignancy), 혈액질환(hematologic pruritus: 철 결핍성 빈혈, 진성 혈구 증가증), 정신성 질환, 약물복용 등이 있다. 혈액내의 높은 농도 담즙산은 소양증 유도기질(pruritogenic sudstrate)인 오피오이드(opioids) 농도를 증가시켜 가려움증을 유발시키고, 철 결핍성 빈혈의 경우, 혈액을 순환하는 호염구(basophils)와 비만세포를 증가시킴으로써 혈액형 소양증(hematologic pruritus)을 발생시킨다. 또한, 갑상선 기능 항진증의 경우, 활성형 키닌(kinins)을 증가시켜 가려움증의 역치(itch threshold)를 감소시킴으로써 가려움증을 유발한다. 이상과 같이 내부 장기 질환으로 발병하는 소양증의 경우 발병질환의 치료와 함께 증상이 사라지나, 대부분의 소양증의 경우 발병 원인을 명확하게 알지 못한다. 소양증(가려움증)은 많은 피부 질환과 관계된 증상으로 매우 고통스럽다. 특히, 최근 아토피 피부염이 증가하는데 아토피에 소양증이 동반하여 상황을 더욱 악화시킨다. 그러나 소양증에 대한 많은 연구에도 불구하고 일반적으로 받아들여지는 치료법이 아직 없다.

한편, 최근 가려움증의 신호전달과정이 일부 밝혀져 신호전달과정의 조절을 통해 소양증의 치료를 시도하고 있다. 소양증의 발생기전에 대한 연구는 아직 미비한 실정으로, 최근 연구에 의하면 가려움증은 두뇌로 신호전달이 될 때 중추신경계(central nervous system, CNS)를 통하게 되는데 중추신경계로부터 고통(pain)과 가려움의 신호전달과정을 보유하면서 서로 억제하는 것으로 밝혀지고 있다. 그러므로 가려움증을 느낄 때 고통(예: 긁기)을 가하면 가려움이 완화된다. 그러나 가렵다고 긁으면 가려움증을 일으키는 물질이 더욱 증가하여 가려움에 더욱 민감하게 되는 악순환이 반복된다. PPAR-γ는 피부에서 각질형성세포의 생장과 분화, 피지세포의 분화조절, 지질대사 조절, 상처치료, 염증반응, 피지생산, 멜라닌 합성 등 많은 반응에 관여하는데, 특히 표피 각질형성세포의 분화와 지질대사를 조절하여 정상적인 표피층형성을 유도함으로써 표피의 항상성 유지에 중요한 역할을 한다.

소양증 신호전달과정에는 프로테이나아제-활성화 수용체(proteinase-activated receptor, PAR)가 중요한 역할을 한다는 것이 밝혀졌고, 이후에 G-단백질을 거쳐 포스파티딜이노시톨 이인산염(phosphatidylinositol diphosphate)과 다이아실글라이세롤(diacylglycerol), 단백질 키나아제 C를 포함하는 신호전달과정이 밝혀졌다. 이 후에 대뇌 해마 신경 세포막위의 캡사이신 수용체(transient receptor potential vanilloid type 1, TRPV1)로 신호전달이 되고 TRPV1에 의해 더욱 가려움에 민감하게 되는 것이 밝혀졌다. 소양증 신호전달체계에 대한 최초연구는 양서류의 밤베신 유사 단백질 수용체(Bombesin-like peptide receptor)와 높은 유사성(homology)을 가지는 GRPR (Gastrin-Releasing Peptide Receptor)이 설치류가려움증을 일으키는 물질로 확인되었다(Yan-Gang Sun et al., 2007). 최근 들어 이러한 가려움에 대한 신경생리학적 접근 및 면역학적 연구가 활발히 진행되어 가려움은 C-섬유 말단의 신경감수기를 통해 구심신경으로 전달되며, C-섬유 말단에서 분비되는 pruritogen으로써 P물질, CGRP은 각각의 수용체와 결합하여 가려움을 유발하는 것으로 알려지고 있다(Kuraish et al., J. Pharmacol Exp. Ther. pp270-275, 1998). 또한, 이들 pruritogen은 비만세포(mast cell)를 활성화시켜 히스타민을 방출시킨다(Morohashi et al., Arch. Dermatol. Res. pp418-421, 2000).

체내에서 가려움증의 원인 혹은 악화시키는 물질로는 프로티에스(protease), 류코트리엔(leucotrien), 사이토킨(cytokine) 등이 밝혀진 바 있다. 아세틸콜린(Acetylcholine)은 히스타민 민감성(histamine-sensitive) 및 히스타민 비민감성(histamine-insensitive)과 상관없이 C-파이버(C-fibres)에서 가벼운 가려움증을 유발하는 신경전달물질이다. 특히 아토피 피부염 환자의 경우 히스타민보다는 아세틸콜린에 민감하게 반응하나 정상인에게는 통증을 유발한다. 세로토닌(5-hydroxytryptamine, 5HT)은 말초신경계(PNS)와 중추신경계(CNS)에 각각 작용하여 가려움증의 유발이 가능한 물질이다. 세로토닌이 말초신경계에서는 비만세포를 자극하여 히스타민을 방출시킴으로써 가려움증을 형성하고, 중추신경계에서는 진통신경전달물질계(opioid neurotransmitter system)를 통한 방식으로 가려움증을 형성한다. 5-HT₃-수용체 길항제는 외부에 주사하여 가려움증을 일으키는 외인성 오피오이드(opioid)와 반응하여 가려움증을 경감시킨다.

가려움을 유발하는 염증매개인자인 P물질은 피부세포에서 분비되는 신경전달물질(neurotransmitter)로써, 피부의 신경섬유를 직접 자극하거나 비만세포(mast cell)의 히스타민(histamine) 분비를 촉진해서 피부에서 가려움을 느끼게 한다.

신경펩타이드(Neuropeptides)는 감각 신경의 제2형 PAR-2 (type-2 proteinase- activated receptors)활성화에 의해 감염신경에서 유리되고, 이때 호중구와 비만세포에 존재하는 tryptase의해 PAR-2가 활성화되어 감염에 의해 손상된 C-파이버에서 히스타민, CGRP 및　substance P (neurokinin 1)을 유리시켜 가려움증을 유발한다(Brain　et al., 2000; Steinhoff et al., 2000).

프로스타글라딘(Prostaglandin) D2는 가려움을 억제시키는 물질로 알려졌는데 동물실험에 의해 긁기를 할 때 피부조직의 PGD2 농도가 감소되었으며, 이 물질을 생성하는 효소 COX-1도 활성이 떨어진다고 밝혀졌다. 이는 우리가 긁을 때 왜 가려움이 없어지는지를 설명해준다.

봄베신(Bombesin)을 쥐에 투여하면 쥐들은 털을 손질하는 행태 (grooming behavior)를 보이는데 과거에는 이런 행동이 가려움증에 대한 반응이 아니라 원치 않는 자극에 대해 스트레스를 해소하려는 행동으로 이해하였으나 최근에 봄베신 단백질 수용체와 유사한 단백질을 척수에 주입할 때 소양증을 보인다고 보고되었다.

건조한 피부의 경우 비정상적인 각질세포의 세포분열, 피하지방 및 피부조직학적 변화, 사이토킨 농도 및 히스타민의 함량이 증가하여 소양증 발생이 증가한다는 보고가 있다. 피부의 보습력은 pH에 의해 차이가 나며, 자연 보습인자는 아미노산, PCA(pyrrolidone carboxylic acid), UCA(urocanic acid), mineral 등의 혼합체로 기능성 소재를 섭취한 후 보습효과가 향상되었다고 보고되었다.

과민성 피부염의 경우, 가려움은 항히스타민제에 의해서 억제되지 않지만 면역억제제인 사이클로스포린 A에 의해서 억제된다는 보고로 보아 가려움의 발생엔 자가면역 이상도 관여한다고 볼 수 있다. 사이클로스포린(Cyclosporine) A와 같은 사이클로필린 저해제는 진균 대사산물로 IL-2 전사 시작을 차단하여 T세포 활성화를 방해함으로써 면역억제 효과를, 사이클로스포린은 칼슘 및 칼모듈린(calmodulin) 의존성 단백 인산효소인 칼시네우린과 결합한 사이클로폴린을 저해하여 면역억제효과를 내는 것으로 확인되었다.

서양의학의 경우 기존의 경구용 항히스타민제, 국소용 스테로이드 외에도 경구용 스테로이드, 항생제, 항바이러스제, 항진균제, 탈감작용법, 생균제, 경구용 면역억제제, 국소용 면역억제제, 광선치료 등의 다양한 치료법을 개발하여 임상에 응용하고자 노력하고 있으나, 그 치료 효과가 일시적이거나 제한적으로 가려움증의 종류에 따라 특이성을 나타낸다. 또한, 국소 부신피질 호르몬을 장기간 사용하는 경우, 피부 위축, 혈관 확장, 색소 탈실 및 팽창 선조의 발생 등 다양한 피부 부작용을 야기한다고 보고되었다. 또한, 소양증의 발생기전에는 히스타민, 키닌, 프로테아제, 프로스타글란딘 E 등의 화학물질의 농도 변화와 상관 관계가 있으며, 원인을 알지 못하는 소양증의 치료제로 사용되는 코스티코스테로이드(corticosteroid)제제는 염증반응에 의한 소양증에 전신적 또는 국소적으로 사용하나, 부작용을 염두에 두어 급성이거나 심한 경우에 한하여 단기간 사용한다. 소양증에 사용되는 내복 치료제로 항히스타민제제와 페놀성 화합물이 포함된 약제가 사용되나 부작용과 독성을 나타낸다.

따라서, 천연 유래 제품은 막연히 부작용이 없을 것이란 가정 하에 광범위하게 퍼지고 있으나 그에 대한 과학적 근거가 충분히 제시되지 못하고 있는 실정이다. 특히　상당수의 치료법이 특정식물이나 여러 종의 식물추출물을 근거로 한 경우가 많은데 이는 식물체 중 상당수가 항염증 효과를 나타내는 성분이나 면역조절 효과를 나타내는 성분을 갖고 있는데에 기인한다. 가려움의 개선 효과가 있는 한약 소재로는 고삼(Sophora flavescens)의 뿌리, 명아주과 댑싸리(Kochia Scoparia Schard), 미나리과에 속하는 갯 미나리인 벌사상자(Cnidium monnieri)의 열매, 백당나무, 오가피열매 및 잣 등이 알려져 있다.

소양증을 동반하는 아토피 피부염이나 건선은 다양한 염증반응과 동시에 면역이상을 수반하기 때문에 면역조절이나 항염증 중 한 가지에 뛰어난 물질보다는 면역계를 조절하면서 동시에 항염증 효과가 있는 천연물질이 치료효과를 나타낼 가능성이 매우 클 것으로 여겨지고 있다. 한의계 역시 수많은 한의서에 기재된 방대한 처방과 본초의 효과를 증명하는 연구가 진행되는 실정이나 피부염 환자의 유병률은 점차 증가하는 추세이며, 한약복용을 통한 긍정적인 치료 효과를 얻을 수 있음이 보고된 바(남봉수 등 2000; 신상호 등, 2007; Koh et al., 2006) 있다. 그러나, 한약의 특성상 경제적 부담이 비교적 크고, 또한 특유의 맛과 향 등으로 인해 복용하기 힘들어 하는 경우가 있기 때문에 장기간 한약 투여를 하기는 현실적으로 어려운 경우가 많다. 이러한 부분을 보완할 수 있는 방법으로 적극적인 외용제사용을 우선적으로 생각할 수 있다.

본 발명에서는 소양증의 외치법에 대한 선행연구들을 조사, 검토하고 다양한 처방과 본초의 효과를 정리하여 소양증 개선효과가 기대되는 약초를 이용하여 한방수를 개발하고 이의 기능을 조사하였다. 또한, 본 발명은 종래의 피부 외용제 조성물에 인체에 안전한 천연식물인 지황, 석창포, 황백, 고삼, 죽엽, 자초, 편축, 목근피, 관동화, 장군피 및 목과 등으로부터 얻은 특정 식물추출을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로 피부질환에 공통적으로 나타나는 심한 가려움증(소양증)과 염증 및 발진 등의 증상의 피부면역상태 개선효과를 연구하여 유효한 소양증 개선효과를 갖는 한방기능성화장수를 개발하고 동물실험을 통하여 제품의 소양증개선효과를 검증하고자 하였다.

본 발명은, 스테로이드, 항히스타민제들의 문제점을 극복하고, 인체 안전성이 우수하며 가려움증의 억제 및 완화에 효과가 있는 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강기능식품을 제공하는데 그 목적이 있다.

이와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명은, 인체에 안전한 천연식물인 지황, 석창포, 황백, 고삼, 죽엽, 자초, 편축, 목근피, 관동화, 장군피 및 목과 등으로부터 얻은 특정 식물추출 혼합물을 배합한 한방화장수로서 가려움증(소양증)과 염증 및 발진 등의 증상의 피부면역상태 개선, 피부 보습 및 주름개선에 유효한 효과를 가진다.

도 1은, 한방화장수의 COX-2 억제활성에 관한 것이다.
도 2는, 한방화장수의 LOX-5 효소활성 억제활성에 관한 것이다.
도 3은, 한방화장수의 플라보노이드(Flavonoid) 함량에 관한 것이다.
도 4는, 한방화장수의 수렴효과에 관한 것이다.
도 5는, 한방화장수의 엘라스타제(Elastase) 저해활성에 관한 것이다.
도 6은, LTB₄유도 가려움증 모델에서 시간에 따른 소양빈도에 관한 것이다.
도 7은, LTB₄유도 가려움증 모델에서 총 소양횟수에 관한 것이다.
도 8은, LTB₄유도 가려움증 모델에서 피부배양액의 IL-6농도에 미치는 영향에 관한 것이다.
도 9는, LTB₄유도 가려움증 모델에서 혈장 INF-γ농도에 미치는 영향에 관한 것이다.
도 10은, compound 48/80 유도 가려움증 모델에서 시간에 따른 소양빈도에 관한 것이다.
도 11은, compound 48/80 유도 가려움증 모델에서 총 소양횟수에 관한 것이다.
도 12는, compound 48/80 유도 가려움증 모델에서 혈장 IL-4농도에 관한 것이다.
도 13은, compound 48/80 유도 가려움증 모델에서 혈장 INF-γ농도에 미치는 영향에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1. 재료의 준비

1-1. 시료의 준비

　본 발명을 위하여 소양증 및 피부 건강에 관련이 있는 한방소재를 고서 등의 문헌 및 논문 등의 자료 수집을 통하여 총 11종을 선별하였다(표 1). 실험에 사용한 약재들은 한약사랑 및 남도생약 영농조합 법인에서 건조 상태로 구입하여 냉동보관하며 사용하였다. 본 연구에 사용된 유기 용매는 1등급 및 특등급을 사용하였으며, 기능성 검증에 사용한 시약들은 모두 생화학 등급(Biochemical grade) 이상의 것을 사용하였다.

한약명 ( Herbal name )	생약명 ( Scientific name )
고　 삼	Sophora flanescens
관동화	Tussilago farfara L.
목　 과	Chaenomeles sinensis 　 Koehne.
목근피	Gossampinus malabarica
석창포	Acori Graminei Rhizoma (Acorus gramineus Sol. ex Aiton)
지　 황	Rehmanniae Radix (Rehmannia glutinosa (Gaertner) Liboschitz)
죽　 엽	Bamboo Leaf
자　 초	Lithospermum erythrirhizon Sieb. et Zucc.
장군피	Rhus chinensis MILL (Rhus javanica L.)
편　 축	Polygonum aviculare L.
황　 백	Phellodendri Cortex

1-2. 시료의 추출

　문헌을 통하여 선별된 약재들은 증류수 및 70% 알콜을 이용하여 실온에서 반복 추출하였다. 즉, 죽엽 및 지황의 경우 약초 무게 그램당 증류수를 100배 가하여 실온에서 2일간 침지 시키는 방법으로 2회 반복 추출하였으며, 죽엽 및 지황을 제외한 나머지 약재들은 각 약재 무게의 그램당 70% 알콜을 4배 가하여 실온에서 2일간 침지 시키는 방법으로 3회 반복 추출하였다. 각 약재들의 추출액은 공극크기(Pore size) 5㎛ 종이여과지(Advantec, No.5)를 이용하여 감압 여과하여, 70% 알콜 추출물은 감압농축기(Eyela, Japan)로 농축한 다음 완전히 건고하였으며, 물 추출물은 동결건조 후 냉동보관하며 사용하였다.

1-3. 한방 화장수의 제조

본 발명을 위하여 제조된 한방화장수는 유연화장수를 기본 제형으로 하여 그에 소양증 개선 효과를 가지는 11종의 선별된 한약재를 상기와 동일한 방법으로 추출한 다음 이들 추출액을 혼합하여 공극크기 0.2㎛ 여과지를 이용하여 감압 여과하여 한방화장수를 제조하였다.

실시예 2. 한방화장수의 기능성 확인

2-1. 소양증 효과

소양증 효과는 항염증 효과와 관련이 있고, 항염증 효과는 한방화장수의 우수한 항산화 효과에 의해 일부 설명될 수 있다. 본 발명에서는 항산화 작용 이외의 한방화장수의 항염증 기작을 밝히고자 COX-2활성 억제 및 5-리폭시지나아제(5-lipoxygenase)의 활성을 억제하는 효과를 측정하였다.

2-1-1. COX -2 억제능

염증을 동반하며 일부 면역계 이상을 동반하는 피부질환의 효과적인 관리를 위해서는, 높은 항염증 효과 및 면역조절 효과와 더불어 최소한의 부작용을 나타내는 치료물질을 사용하는 것이 필수적이다. 이러한 특성을 가지는 물질을 탐색하는 방법으로 싸이클로옥시게네이즈(CYCLO -OXYGENASE-2; COX-2)생산 억제능 실험, 보습효과실험을 이용하였다. 한방화장수는 농도 의존적 방식으로　COX-2활성억제능력을 보임으로 항염증 효과가 기대되는 것으로 사료된다(도 1).

2-1-2. LOX -5 억제능

　IL-8은 지질 매개체(lipid mediator) 5-리폭시지나아제를 활성화하여 류코트리엔 B₄(LTB₄)를 생성함으로써 호중구증가를 야기하는 것으로 알려져 있다(Frank et al ., 2005). 따라서, 가려움유도물질인 LTB₄합성억제능력을 LOX-5활성억제능력으로 조사한 결과, 농도 의존적 방식으로 억제됨을 확인하였다(도 2).

2-2. 수분보습효과

소양증 환자들은 대개 건조한 피부를 가지고 있으며, 가려움증이 가장 중요한 증상으로 긁게 되면 가려움증이 발진으로 이어지고 다시 가려움증을 야기한다. 피부가 만성적으로 건조하며 소양감이 심하고 반복적으로 재발되며, 각종 자극에 의해 쉽게 피부염이 유발된다. 적절한 관리를 하지 않으면 삼출을 동반한 홍반성 발진의 아급성 병변, 가죽과 같이 두꺼워진 태선화 된 만성병변으로 진행된다(안성구, 2007).

2-2-1. 플라보노이드( flavonoid) 함량 측정

항염증반응, 수렴효과 및 항산화능력과 양의 상관관계가 있는 플라보노이드 함량을 한방화장수에서 측정하였다. 플라보노이드들의 세포내 항염증작용기전으로는 에이코사노이드(eicosanoid) 생성효소인 시클로옥시게나제 (cyclo -oxygenase, COX) 및 리폭시지나아제(lipoxygenase, LOX)를 저해함으로써 나타낸다는 것이 정설로 알려져 있다(Ferrandiz et al ., 1990; Middleton et al ., 1992).

한방화장수의 플라보노이드 함량은 60ug/ml(quercentin당량)함유하고 있다(도 3). 플라보노이드는 COX-2 억제능, 수렴보습효과 및 항산화력과 양의 관계를 가짐으로써 피부건강기능성에 중요한 연구부분으로 여겨진다.

2-2-2. 수렴효과

수렴효과 작용의 실험에서는 헤모글로빈의 단백질이 추출물과 결합하는 정도에 따라서 수렴 효과 정도를 판단한다. 한방화장수를 이용한 수렴제 실험은 Lee등의 방법에 따라 측정할 수 있는데, 피부 단백질과 유사하고 시료를 쉽게 구할 수 있는 혈액단백질(Hemoglobin from Bovine, Sigma Co., USA)을 사용하고, 원심분리 용기에 각각의 한방화장수와 헤모글로빈용액을 1:1로 넣어서 진탕 혼합한 후 다시 원심분리하여 576nm에서 흡광도를 측정하여 수렴효과를 측정하였다. 한방화장수의 헤모글로빈 침전법으로 측정한 수렴효과는 농도 의존적 방식으로 나타났다(도 4).　

2-3.엘라스타제( Elastase) 저해 활성 평가

한방화장수의 다른 기능성을 조사하고자 0.2M Tris-HCl 버퍼(pH 8.0)에 1 유닛 엘라스타제(unit elastase)와 0.8mM N-suc-(ala)₃-p-니트로아닐라이드를 첨가하여 25℃에서 30분간 반응시킨 후 410nm에서 흡광도를 측정하여 기질로부터 생성되는 p-니트로아닐라이드의 양을 정량하였다. 비교구는 우솔릭산(ursolic acid)을 사용하였다.

한방화장수는 1㎎/㎖의 농도에서 52%의 엘라스타제 저해활성을 나타내어, 63.8%의 활성을 보인 우솔릭산과 비슷한 활성을 보였다(도 5).

실시예 3. 동물모델에서 소양증 억제 효과 ( LTB ₄ 유도 가려움증모델)

3-1. 재료의 준비

5-6주령이 된 수컷 ICR생쥐를 25±2℃, 08:00-20:00시 동안 조명을 비춰주는 조건에서 사육하였다. 물과 사료는 자유롭게 먹을 수 있게 하였다. 생쥐의 등 부위를 깨끗하게 제모한 후 제모가 끝나면 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다. 그리고 류코트리엔 B4(LTB₄) 0.03nmole/site 100μL를 등 부위에 주사하였고, 음성대조군으로 길항제인 ONO-4057(5-[2-(2-carboxyethyl) -3-(6(p-methoxyphenyl)-5E-hexenyl) oxypheoxyl] valeric acid) 0.03nmole/site를 100μL을 함께 주사하였다. 외용수의 양성대조군으로 증류수 100μL를 처리하였으며, 실험군으로는 한방화장수 100μL를 처리하였다.

3-2. 시간에 따른 소양횟수에 미치는 영향

LTB₄유도 가려움증 모델에서 시간에 따른 소양빈도를 조사한 결과, 가려움증 유발 40분경과 후, 실험군에서 유의적으로 감소하였다(도 6).

3-3. 한방화장수가 소양 횟수에 미치는 영향

LTB₄유도 가려움증 모델에서 총 소양횟수를 조사한 결과, 양성대조군에 비해 음성대조군의 소양횟수가 유의적으로 감소하였고 실험군은 음성대조군(NC)보다 유의적 감소하여 총 소양 횟수를 유의적으로 감소시켰다(도 7).

3-4. 한방화장수가 면역학적 인자에 미치는 영향

LTB₄유도 가려움증 모델에서 피부배양액의 IL-6농도는 양성대조군(PC)에서 가장 높았고 실험군은 음성대조군(NC)수준으로 유의적으로 감소하였다(도 8). 또한, 혈장 INF-γ농도는 실험군에서 유의적 증가하였다(도 9). 일반적으로 IFN-γ는 염증 및 가려움증에서 감소되는 Th1관련 사이토킨으로 간주되므로 한방화장수는 가려움에 효과가 있을 것으로 해석할 수 있다.

실시예 4. 동물모델에서 소양증 억제 효과 (히스타민 유도 가려움증모델)

비만세포의 탈과립제로 Compound48/80를 사용하여 히스타민 유리를 유도시킨 후 히스타민에 의해 반응하는 C-파이버(itch-specific fiber)를 자극하여 가려움증을 유발하는 가려움 동물 모델을 이용하여 소양횟수(가려움횟수), 소양빈도(가려움의 심한정도), 면역학적 인자(세포성 면역에 관여하는 INF-γ: 체액성 면역에 관여하는 Th2 관련 cytokine; IL-4)를 각각 측정하여 소양증 개선효과를 측정하였다.

4-1. 재료의 준비

11주령이 된 BALB/c(20-26g)생쥐의 등 부위를 깨끗하게 제모한 후, 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다. 그리고 compound 48/80 용액(μg/site) 100μL를 등 부위에 주사한 후, 음성대조군으로 길항제인 디펜하이드라민하이드로클로이드(Diahenhydramine hydrochloeide; St. Louis, MO, USA) 100μL을 구강 투여하였다. 외용수의 양성 처리군으로는 증류수 100μL를 처리하였으며, 실험군으로는 한방화장수 100μL를 처리하였다.

4-2. 한방화장수가 총 소양빈도에 미치는 영향

compound48/80유도 가려움모델에서 시간에 따른 소양빈도를 조사한 결과, 한방화장수 처리군의 소양빈도가 음성대조군(NC)수준의 빈도로 유의적으로 감소하였다(p<0.05)(도 10).

4-3. 한방화장수가 총 소양횟수에 미치는 영향

compound48/80유도 가려움모델에서 총 소양횟수를 조사한 결과 한방화장수 처리군이 음성대조군(NC) 수준으로 감소하였다(p<0.05)(도 11).

4-4. 한방화장수가 면역학적 인자에 미치는 영향

compound48/80유도 가려움모델에서 Th2관련 cytokine인 혈장의 IL-4농도에 미치는 영향을 조사한 결과, 양성대조군(PC)에 비해 음성대조군(NC)의 농도가 감소하였으며 한방화장수 처리군에서는 감소하는 경향을 보였다(도 12).

또한, compound48/80유도 가려움모델에서 혈장의 INF-γ 농도에 미치는 영향을 조사한 결과, 양성대조군(PC)에 비해 음성대조군(NC)의 농도가 유의적으로 감소하였다(도 13).

이하, 본 발명의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 함유하는 화장품조성물의 제형예를 설명하기로 한다.

제형예 1: 유연 화장수( 스킨 )의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물.............................1.0 중량%

1,3-부틸렌글리콜...........................5.2 중량%

올레일알코올...............................1.5 중량%

에탄올.....................................3.2 중량%

폴리솔베이트 20............................3.2 중량%

벤조페논-9.................................2.0 중량%

카르복실비닐폴리머.........................1.0 중량%

글리세린...................................3.5 중량%

향..............................................미량

방부제..........................................미량

정제수..........................................미량

제형예 2: 밀크로션의 제조

글리세린...................................5.1 중량%

프로필렌글리콜.............................4.2 중량%

토코페릴아세테이트.........................3.0 중량%

유동파라핀.................................4.6 중량%

트리에탄올아민.............................1.0 중량%

스쿠알란...................................3.1 중량%

마카다미아너트오일.........................2.5 중량%

폴리솔베이트 60............................1.6 중량%

솔비탄세스퀴롤레이트.......................1.6 중량%

프로필파라벤...............................0.6 중량%

카르복실비닐폴리머.........................1.5 중량%

향..............................................미량

방부제..........................................미량

정제수..........................................미량

제형예 3: 영양크림의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물.............................2.0 중량%

글리세린...................................4.0 중량%

바셀린.....................................3.5 중량%

트리에탄올아민.............................2.1 중량%

유동파라핀.................................5.3 중량%

스쿠알란...................................3.0 중량%

밀납.......................................2.6 중량%

토코페릴아세테이트.........................5.4 중량%

폴리솔베이트 60............................3.2 중량%

카르복실비닐폴리머.........................1.5 중량%

솔비탄세스퀴올레이트.......................3.1 중량%

향..............................................미량

방부제..........................................미량

정제수..........................................미량

제제예 4: 산제의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물................................ 300 mg

유당 .........................................100 mg

탈크 ..........................................10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 5: 정제의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물..................................50 mg

옥수수전분 ...................................100 mg

유당 ...................................100 mg

스테아린산 마그네슘..............................2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 6: 캅셀제의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물...................................50 mg

옥수수전분......................................100 mg

유당 ..........................................100 mg

스테아린산 마그네슘.............................. 2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 7: 주사제의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물....................................50 mg

주사용 멸균 증류수.................................적량

pH 조절제..........................................적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 8: 액제의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물....................................100 mg

이성화당............................................10 g

만니톨...............................................5 g

정제수..............................................적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 9: 건강 식품의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물................................. 1000 ㎎

비타민 혼합물......................................적량

비타민 A 아세테이트.............................. 70 ㎍

비타민 E....................................... 1.0 ㎎

비타민 B₁...................................... 0.13 ㎎

비타민 B₂...................................... 0.15 ㎎

비타민 B₆....................................... 0.5 ㎎

비타민 B₁₂.......................................0.2 ㎍

비타민 C.........................................10 ㎎

비오틴...........................................10 ㎍

니코틴산아미드..................................1.7 ㎎

엽산.............................................50 ㎍

판토텐산 칼슘...................................0.5 ㎎

무기질 혼합물.....................................적량

황산제1철..................................... 1.75 ㎎

산화아연...................................... 0.82 ㎎

탄산마그네슘...................................25.3 ㎎

제1인산칼륨..................................... 15 ㎎

제2인산칼슘..................................... 55 ㎎

구연산칼륨...................................... 90 ㎎

탄산칼슘....................................... 100 ㎎

염화마그네슘.................................. 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 10: 건강 음료의 제조

실시예 1의 고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물.................................1000 ㎎

구연산.........................................1000 ㎎

올리고당.........................................100 g

매실농축액.........................................2 g

타우린........................................... 1 g

정제수를 가하여 전체............................900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

지금까지 예시적인 실시 태양을 참조하여 본 발명을 기술하여 왔지만, 본 발명의 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명의 범주를 벗어나지 않고서도 다양한 변화를 실시할 수 있으며 그의 요소들을 등가물로 대체할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 또한, 본 발명의 본질적인 범주를 벗어나지 않고서도 많은 변형을 실시하여 특정 상황 및 재료를 본 발명의 교시내용에 채용할 수 있다. 따라서, 본 발명이 본 발명을 실시하는데 계획된 최상의 양식으로서 개시된 특정 실시 태양으로 국한되는 것이 아니며, 본 발명이 첨부된 특허청구의 범위에 속하는 모든 실시 태양을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 개선용 화장료 조성물.
고삼, 관동화, 목과, 목근피, 석창포, 지황, 죽엽, 자초, 장군피, 편축 및 황백 추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 예방 및 치료용 약학적 조성물.
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