KR101223941B1 - Ｈｅｒ２의 도메인 ｉｉ에 결합하는 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물 - Google Patents

Ｈｅｒ２의 도메인 ｉｉ에 결합하는 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101223941B1
KR101223941B1 KR1020107019048A KR20107019048A KR101223941B1 KR 101223941 B1 KR101223941 B1 KR 101223941B1 KR 1020107019048 A KR1020107019048 A KR 1020107019048A KR 20107019048 A KR20107019048 A KR 20107019048A KR 101223941 B1 KR101223941 B1 KR 101223941B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
ser
val
leu
thr
Prior art date
Application number
KR1020107019048A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100110379A (ko
Inventor
리드 제이. 해리스
폴 에이. 모트치닉
Original Assignee
제넨테크, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40672664&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR101223941(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 제넨테크, 인크. filed Critical 제넨테크, 인크.
Publication of KR20100110379A publication Critical patent/KR20100110379A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101223941B1 publication Critical patent/KR101223941B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물을 기술한다. 또한 상기 조성물을 포함하는 제약 제제, 및 상기 조성물의 치료학적 용도도 개시한다.

Description

ＨＥＲ２의 도메인 ＩＩ에 결합하는 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물{COMPOSITION COMPRISING ANTIBODY THAT BINDS TO DOMAIN II OF HER2 AND ACIDIC VARIANTS THEREOF}
관련 출원
본 출원은 미국 가특허 출원 번호 제61/024825호(2008년 1월 30일 출원) (본 개시 내용 전문이 본원에서 참고로 인용된다)의 이점을 주장한다.
본 발명의 기술분아
본 발명은 HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 조성물을 포함하는 제약 제제, 및 상기 조성물의 치료학적 용도에 관한 것이다.
HER2 항체
수용체 티로신 키나제의 HER 패밀리는 세포 성장, 분화 및 생존의 중요한 매개 인자이다. 수용체 패밀리로는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR, ErbB1, 또는 HER1), HER2 (ErbB2 또는 p185 neu ), HER3 (ErbB3) 및 HER4 (ErbB4 또는 tyro2)를 포함하는 4개의 특유한 멤버를 포함한다.
erbB1 유전자에 의해 코딩되는 EGFR은 인간 악성 종양의 원인으로서 관련되었다. 특히, EGFR의 발현 증가는 유방암, 방광암, 폐암, 두부암, 경부암 및 위암 및 아교모세포종에서 관찰되었다. 증가된 EGFR 수용체 발현은 동일한 종양 세포에 의한 EGFR 리간드인 형질전환 성장 인자 알파 (TGF-α)의 생산 증가와 종종 연관되어, 자가분비 자극 경로에 의한 수용체 활성화를 야기한다 (문헌 [Baselga and Mendelsohn, Pharmac . Ther. 64:127-154 (1994)]). EGFR 또는 그의 리간드인 TGF-α 및 EGF에 대한 모노클로날 항체가 상기 악성 종양의 치료시의 치료제로서 평가되었다. 예를 들어, 문헌 ([Baselga and Mendelsohn., 상기 문헌 동일]; [Masui et al. Cancer Research 44:1002-1007 (1984)]; 및 [Wu et al. J. Clin . Invest . 95:1897-1905 (1995)])을 참조할 수 있다.
HER 패밀리의 제2 멤버인 p185 neu 는 화학적으로 처리된 래트의 신경모세포종으로부터의 형질전환 유전자의 생성물로서 처음 확인되었다. neu 원발암유전자의 활성화 형태는 코딩된 단백질의 막횡단 영역에서의 점 돌연변이 (발린에서 글루탐산으로)로부터 기인한다. neu의 인간 상동체의 증폭이 유방암 및 난소암에서 관찰되고, 이것은 불량한 예후와 상호관련된다 (문헌 ([Slamon et al., Science, 235:177-182 (1987)]; [Slamon et al., Science, 244:707-712 (1989)]; 및 미국 특허 번호 제4,968,603호)). 현재까지, neu 원발암유전자에서의 것과 유사한 점 돌연변이는 인간 종양에서 보고된 바 없었다. HER2의 과다발현 (빈번하지만 유전자 증폭에 의해 일정하지 않다) 또한 위암종, 자궁내막암종, 타액선암종, 폐암종, 신장암종, 결장암종, 갑상선암종, 췌장암종, 및 방광암종을 비롯한 기타 다른 암종에서 관찰되었다. 특히, 문헌 (문헌 ([King et al., Science, 229:974 (1985)]; [Yokota et al., Lancet: 1:765-767 (1986)]; [Fukushige et al., Mol Cell Biol ., 6:955-958 (1986)]; [Guerin et al., Oncogene Res ., 3:21-31 (1988)]; [Cohen et al., Oncogene, 4:81-88 (1989)]; [Yonemura et al., Cancer Res ., 51 :1034 (1991)]; [Borst et al., Gynecol . Oncol, 38:364 (1990)]; [Weiner et al., Cancer Res., 50:421-425 (1990)]; [Kern et al., Cancer Res ., 50:5184 (1990)]; [Park et al., Cancer Res ., 49:6605 (1989)]; [Zhau et al., Mol. Carcinog., 3:254-257 (1990)]; [Aasland et al. Br . J. Cancer 57:358-363 (1988)]; [Williams et al. Pathobiology 59:46-52 (1991)]; 및 [McCann et al., Cancer, 65:88-92 (1990)])을 참조할 수 있다. HER2는 전립선암에서 과다발현될 수 있다 (문헌 ([Gu et al. Cancer Lett . 99:185-9 (1996)]; [Ross et al. Hum . Pathol . 28:827-33 (1997)]; [Ross et al. Cancer 79:2162-70 (1997)]; 및 [Sadasivan et al. J. Urol. 150:126-31 (1993)])).
래트 p185 neu 및 인간 HER2 단백질 생성물에 대한 항체가 설명된 바 있다. 드레빈(Drebin)과 그의 동료는 래트 neu 유전자 생성물인 p185 neu 에 대해 항체를 생성시켰다. 예를 들면, 문헌 ([Drebin et al., Cell 41 :695-706 (1985)]; [Myers et al., Meth . Enzym. 198:277-290 (1991)]; 및 WO94/22478)을 참조한다. 문헌 [Drebin et al., Oncogene 2:273-277 (1988)]에는 p185 neu 의 2개의 특유한 영역과 반응하는 항체의 혼합물이 누드 마우스 내로 이식된 neu-형질전환된 NIH-3T3 세포에 대해 상승적인 항-종양 효과를 야기한다고 보고된 바 있다 (또한 미국 특허 5,824,311 (1998년 10월 20일 등록) 참조).
문헌 [Hudziak et al., Mol. Cell. Biol. 9(3): 1165-1172 (1989)]에서는 인간 유방 종양 세포주 SK-BR-3을 사용하여 특징이 규명된 HER2 항체 패널의 생성이 기재되어 있다. 항체에 노출된 후에 SK-BR-3 세포의 상대적 세포 증식은 72시간 후에 단일층의 크리스탈 바이올렛 염색에 의해 측정하였다. 상기 분석을 사용하여, 세포 증식을 56％ 만큼 억제시킨 4D5로 불리는 항체를 사용함으로써 최대로 억제시켰다. 패널 내의 다른 항체는 상기 분석보다 더 낮은 수준으로 세포 증식을 감소시켰다. 항체 4D5는 추가로 HER2를 과다발현하는 유방 종양 세포주를 TNF-α의 세포독성 효과에 대해 감작시키는 것으로 밝혀졌다 (미국 특허 5,677,171 (1997년 10월 14일 등록) 참조). 문헌 [Hudziak et al]에서 논의된 HER2 항체는 하기 문헌에서 추가로 특징이 규명되었다: ([Fendly et al. Cancer Research 50: 1550-1558 (1990)]; [Kotts et al. In Vitro 26(3):59A (1990)]; [Sarup et al. Growth Regulation 1:72-82 (1991)]; [Shepard et al. J. Clin . Immunol . 11(3): 117-127 (1991)]; [Kumar et al. Mol. Cell. Biol. 11(2):979-986 (1991)]; [Lewis et al. Cancer Immunol . Immunother. 37:255-263 (1993)]; [Pietras et al. Oncogene 9: 1829-1838 (1994)]; [Vitetta et al. Cancer Research 54:5301-5309 (1994)]; [Sliwkowski et al. J. Biol. Chem. 269(20): 14661-14665 (1994)]; [Scott et al. J. Biol. Chem. 266:14300-5 (1991)]; [D'souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91 :7202-7206 (1994)]; [Lewis et al. Cancer Research 56: 1457-1465 (1996)]; 및 [Schaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997)]).
뮤린 HER2 항체 4D5의 재조합 인간화된 버전 (huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, 트라스투주맙 또는 허셉틴(HERCEPTIN)?; 미국 특허 번호 제5,821,337호)은 종래 항암 요법을 광범위하게 받은 바 있는, HER2를 과다발현하는 전이성 유방암 환자에서 임상적으로 활성을 띤다 (문헌 [Baselga et al., J. Clin . Oncol. 14:737-744 (1996)]). 트라스투주맙은 그의 종양이 HER2 단백질을 과다발현하는 전이성 유방암 환자의 치료에 대해서 1998년 9월 25일자로 식약청(Food and Drug Administration)으로부터 시판 승인을 받았다.
다양한 특성을 갖는 기타 다른 HER2 항체가 하기 문헌에 기재되어 있다: 문헌 [Tagliabue et al. Int. J. Cancer 47:933-937 (1991)]; [McKenzie et al. Oncogene 4:543-548 (1989)]; [Maier et al. Cancer Res. 51 :5361-5369 (1991)]; [Bacus et al. Molecular Carcinogenesis 3:350-362 (1990)]; [Stancovski et al. PNAS (USA) 88:8691-8695 (1991)]; [Bacus et al. Cancer Research 52:2580-2589 (1992)]; [Xu et al. Int. J. Cancer 53:401-408 (1993)]; WO94/00136; [Kasprzyk et al. Cancer Research 52:2771-2776 (1992)]; [Hancock et al. Cancer Res. 51:4575-4580 (1991)]; [Shawver et al. Cancer Res. 54:1367-1373 (1994)]; [Arteaga et al. Cancer Res. 54:3758-3765 (1994)]; [Harwerth et al. J. Biol. Chem. 267:15160-15167 (1992)]; 미국 특허 번호 제5,783,186호; 및 [Klapper et al. Oncogene 14:2099-2109 (1997)]).
상동성 스크리닝을 통해 2개의 다른 HER 수용체 패밀리 멤버인 HER3 (미국 특허 번호 제5,183,884호 및 제5,480,968호와 [Kraus et al. PNAS ( USA ) 86:9193-9197 (1989)]) 및 HER4 (유럽 특허 출원 번호 제599,274호; [Plowman et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 90:1746-1750 (1993)]; 및 [Plowman et al., Nature, 366:473-475 (1993)])를 확인하였다. 이들 두 수용체는 모두 적어도 몇몇 유방암 세포주에서 증가된 발현을 보인다.
HER 수용체는 일반적으로 세포에서 상이한 조합으로 발견되고, 이종이량체화가 다양한 HER 리간드에 대한 세포 반응의 다양성을 증가시키는 것으로 생각된다 (문헌 [Earp et al. Breast Cancer Research and Treatment 35: 115-132 (1995)]). EGFR에는 6개의 상이한 리간드인 표피 성장 인자 (EGF), 형질전환 성장 인자 알파 (TGF-α), 암피레굴린, 헤파린 결합 표피 성장 인자 (HB-EGF), 베타셀룰린 및 에피레굴린이 결합한다 (문헌 [Groenen et al. Growth Factors 11:235-257 (1994)]). 단일 유전자의 선택적 스플라이싱에 의해 생성된 헤레굴린 단백질의 패밀리는 HER3 및 HER4에 대한 리간드이다. 헤레굴린 패밀리는 알파, 베타 및 감마 헤레굴린 (문헌 ([Holmes et al., Science, 256:1205-1210 (1992)]; 미국 특허 번호 제5,641,869호; 및 [Schaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997)])); neu 분화 인자 (NDF), 아교세포 성장 인자 (GGF); 아세틸콜린 수용체 유도 활성 (ARIA); 및 감각 및 운동 뉴런 유도 인자 (SMDF)를 포함한다. 검토를 위해 하기 문헌을 참고한다: 문헌 ([Groenen et al. Growth Factors 11:235-257 (1994)]; [Lemke, G. Molec. & Cell . Neurosci. 7:247-262 (1996) 및 [Lee et al. Pharm . Rev. 47:51-85 (1995)]). 최근에 3개의 추가의 HER 리간드; 즉, HER3 또는 HER4에 결합하는 것으로 보고된 뉴레굴린-2 (NRG-2) (문헌 ([Chang et al. Nature 387:509-512 (1997)] 및 [Carraway et al. Nature 387:512-516 (1997)])); HER4에 결합하는 뉴레굴린-3 (문헌 [Zhang et al. PNAS ( USA ) 94(18):9562-7 (1997)]); 및 HER4에 결합하는 뉴레굴린-4 (문헌 [Harari et al. Oncogene 18:2681-89 (1999)])가 확인되었다. HB-EGF, 베타셀룰린 및 에피레굴린도 HER4에 결합한다.
EGF 및 TGFα는 HER2에 결합하지 않지만, EGF는 EGFR 및 HER2를 자극하여 이종이량체를 형성하고, 이것은 EGFR을 활성화시켜 이종이량체에서 HER2의 인산전달을 야기한다. 이량체화 및/또는 인산전달은 HER2 티로신 키나제를 활성화시키는 것으로 보인다 (문헌 [Earp et al., 상기 문헌 동일] 참조). 마찬가지로, HER3이 HER2와 공발현될 때, 활성 신호전달 복합체가 형성되고, HER2에 대한 항체는 상기 복합체를 붕괴시킬 수 있다 (문헌 [Sliwkowski et al., J. Biol . Chem., 269(20): 14661-14665 (1994)]). 추가로, HER3의 헤레굴린 (HRG)에 대한 친화성은 HER2와 공발현될 때 더 높은 친화 상태로 증가한다. 또한, HER2-HER3 단백질 복합체에 관해서는 문헌 ([Levi et al., Journal of Neuroscience 15:1329-1340 (1995)]; [Morrissey et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 92:1431-1435 (1995)]; 및 [Lewis et al., Cancer Res., 56:1457-1465 (1996)])을 참조한다. HER3과 유사하게, HER4는 HER2와 활성 신호전달 복합체를 형성한다 (문헌 [Carraway and Cantley, Cell 78:5-8 (1994)]).
HER 신호전달 경로를 표적하기 위한 목적으로, HER2와 기타 다른 HER 수용체와의 이량체화를 억제시킴으로써 리간드에 의해 유도되는 인산화와 활성화, 및 RAS 및 AKT 경로의 하류 활성화를 억제시키는 인간화된 항체로서의 rhuMAb 2C4 (페르투주맙(Pertuzumab))가 개발되었다. 고형 종양 치료용 단일 제제로서의 페르투주맙에 관한 제I상 임상 시험에서 진행성 난소암을 앓는 3명의 피험체를 페르투주맙으로 치료하였다. 1명은 지속되는 부분 반응을 나타내었고, 추가의 피험체는 15주 동안 안정적인 질환을 가졌다. 문헌 [Agus et al. Proc Am Soc Clin Oncol 22: 192, Abstract 771 (2003)].
항체 변이체 조성물
미국 특허 번호 제6,339,142호에는 항-HER2 항체 및 하나 이상의 그의 산성 변이체의 혼합물을 포함하고, 여기서 산성 변이체(들)의 양은 약 25％ 미만인 것인 HER2 항체 조성물이 기재되어 있다. 트라스투주맙이 예시적인 HER2 항체이다.
문헌 [Reid et al. Poster presented at Well Characterized Biotech Pharmaceuticals conference (January, 2003) "Effects of Cell Culture Process Changes on Humanized Antibody Characteristics"]에는 항체의 중쇄 상에 존재하는 VHS 신호 펩티드, N-말단 글루타민, 및 피로글루탐산의 조합으로 인해 N-말단이 불균일성을 지닌 익명의 인간화된 IgG1 항체 조성물이 기재되어 있다.
문헌 [Harris et al. "The Ideal Chromatographic Antibody Characterization Method" talk presented at the IBC Antibody Production Conference (February, 2002)]에는 인간화된 항-IgE 항체인 E25의 중쇄 상에 존재하는 VHS 연장부가 보고되어 있다.
문헌 [Rouse et al. Poster presented at WCBP "Top Down' Glycoprotein Characterization by High Resolution Mass Spectrometry and Its Application to Biopharmaceutical Development" (January 6-9, 2004)]에는 항체의 경쇄 상에 존재하는 -3AHS 또는 -2HS 신호 펩티드 잔기로 인한, N-말단이 불균일성을 지닌 모노클로날 항체 조성물이 기재되어 있다.
IBC 모임 (2000년 9월 개최)에서의 프리젠테이션 ("Strategic Use of Comparability Studies and Assays for Well Characterized Biologicals," Jill Porter)에서는 항체의 중쇄 상에 존재하는 3개의 추가의 아미노산 잔기를 갖는 후기에 용리된 형태의 제나팍스(ZENAPAX)™가 논의된 바 있다.
US2006/0018899에는 주요 종 페르투주맙 항체 및 아미노-말단 뿐만 아니라, 페르투주맙 항체의 기타 다른 변이체 형태를 포함하는 조성물이 기재되어 있다.
본 발명의 요약
제1 측면에 따라, 본 발명은 HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하고, 여기서 산성 변이체는 당화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 또는 비-환원형 변이체를 포함하는 것인 조성물에 관한 것이다. 바람직하게, 산성 변이체는 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함한다. 산성 변이체의 양이 약 25％ 미만인 것이 바람직하다.
또다른 측면에서, 본 발명은 각각 서열 번호 3 및 4의 경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열을 포함하는 주요 종 HER2 항체, 및 주요 종 HER2 항체의 산성 변이체를 포함하고, 여기서 산성 변이체는 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함하는 것인 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체 중에 조성물을 포함하는 제약 제제에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 암을 치료하는 데 유효한 양으로 제약 제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 HER2 양성 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본원 실시예에서 입증되는 바와 같이, 상기 방법과 관련하여 주요 종 항체와 산성 변이체는 본질적으로 동일한 약동학적 성질을 갖는 것이 바람직하다.
또다른 측면에서, 본 발명은 (1) HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체, 및 당화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체 또는 비-환원형 변이체를 포함하는 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물을 제조하는 단계; 및 (2) 조성물 중 산성 변이체를 평가하고, 그의 양이 약 25％ 미만인지를 확인하는 단계를 포함하는, 제약 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 산성 변이체는 이온 교환 크로마토그래피 (여기서, 조성물은 시알리다제로 처리된다), 도데실황산나트륨을을 이용한 환원형 모세관 전기영동 (CE-SDS), 비-환원형 CE-SDS, 보로네이트 크로마토그래피, 및 펩티드 지도화로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법에 의해 평가된다.
도 1은 HER2 단백질 구조의 개략도, 그의 세포외 도메인을 구성하는 도메인 I-IV에 대한 아미노산 서열 (각각 서열 번호: 19-22)을 제공한다.
도 2a 및 2b는 뮤린 모노클로날 항체 2C4의 경쇄 가변 (VL) (도 2a) 및 중쇄 가변 (VH) (도 2b) 도메인의 아미노산 서열 (각각 서열 번호: 1 및 2); 인간화된 2C4 버전 574의 VL 및 VH 도메인 (각각 서열 번호: 3 및 4), 및 인간 VL 및 VH 컨센서스 프레임워크 (hum κ1, 경쇄 카파 하위군 I; humIII, 중쇄 하위군 III) (각각 서열 번호: 5 및 6)의 정렬을 도시한 것이다. 별표는 인간화된 2C4 버전 574와 뮤린 모노클로날 항체 2C4 사이, 또는 인간화된 2C4 버전 574와 인간 프레임워크 사이의 차이를 나타낸다. 상보성 결정 영역 (CDR)은 괄호로 표시되어 있다.
도 3a 및 3b는 페르투주맙 경쇄 (서열 번호: 15) 및 중쇄 (서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 나타낸다. CDR은 굵은체로 표시되어 있다. 당질 부분이 중쇄의 Asn 299에 부착되어 있다.
도 4a 및 4b는 각각 무손상 아미노 말단 신호 펩티드 서열을 포함하는, 페르투주맙 경쇄 (서열 번호: 17) 및 중쇄 (서열 번호: 18)의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 5는 HER2의 이종이량체 결합 부위에 2C4가 결합하면 활성화된 EGFR 또는 HER3과의 이종이량체화는 이루어지지 않는다는 것으로 개략적으로 도시한다.
도 6은 MAPK 및 Akt 경로에 대한 HER2/HER3의 커플링을 도시한 것이다.
도 7은 트라스투주맙 및 페르투주맙의 활성을 비교한 것이다.
도 8a 및 8b는 트라스투주맙 경쇄 (서열 번호: 13) 및 중쇄 (서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 9a 및 9b는 변이체 페르투주맙 경쇄 서열 (서열 번호: 23) 및 변이체 페르투주맙 중쇄 서열 (서열 번호: 24)을 도시한다.
도 10은 양이온 교환 MP (주요 피크) 및 AV (산성 변이체)의 분리, 세포 배양, 회수, 및 PK (약동학적 성질) 평가 및 분석 시험에 대한 실험 디자인을 나타낸다. 신선한 배지 = 표준 배지; 소모 배지 = 12일 동안 세포 배양에 사용한 표준 배지, 세포는 원심분리에 의해 제거하였다. 용존 산소, pH, 및 기타 다른 파라미터는 제어하지 않았다.
도 11은 실시예 1로부터 얻은 전형적인 디오넥스 프로팩(DIONEX PROPAC)™ 양이온 교환 (CEX) 크로마토그램을 나타낸다.
도 12는 페르투주맙 출발 물질 및 CEX 분획에 대하여 분석한 것을 나타낸다. AV = 산성 변이체; MP = 주요 피크; 및 BV = 염기성 변이체.
도 13은 세포 배양 배지로 스파이킹되고, 12일 동안 인큐베이션된 주요 피크 (MP)의 CEX를 나타낸다.
도 14는 주요 피크 인큐베이션 조건을 설명한다.
도 15는 산성 변이체의 특징을 규명하는 방법을 요약한 것이다.
도 16은 실시예 1의 PK 연구에서 얻은 페르투주맙 농도 대 시간에 대한 것을 나타낸다.
도 17은 실시예 1의 PK 연구에서 얻은 곡선하 면적 (AUC) 및 기하 평균비를 제공한다.
바람직한 실시태양의 상세한 설명
I. 정의
본원에서 "주요 종 항체"라는 용어는 조성물 내의 정량적으로 우세한 항체 분자인 조성물 내의 항체 아미노산 서열 구조를 지칭한다. 바람직하게, 주요 종 항체는 HER2 항체, 예를 들어, HER2의 도메인 II에 결합하는 항체, HER 이량체화를 트라스투주맙보다 더 효과적으로 억제하는 항체, 및/또는 HER2의 이종이량체 결합 부위에 결합하는 항체이다. 본원에서 주요 종 항체에 관한 바람직한 실시태양은 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 아미노산 서열 및 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것, 가장 바람직한 것은 서열 번호: 15 및 16의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것 (페르투주맙)이다.
본원에서 "아미노산 서열 변이체" 항체는 주요 종 항체와는 다른 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 통상적으로, 아미노산 서열 변이체는 주요 종 항체와 적어도 약 70％의 상동성을 가질 것이고, 바람직하게는 이들은 주요 종 항체와 적어도 약 80％, 보다 바람직하게는 적어도 약 90％ 상동성을 가질 것이다. 아미노산 서열 변이체는 주요 종 항체의 천연 아미노산 서열 내 또는 그에 인접한 특정 위치에 치환, 결실 및/또는 부가를 갖는다. 본원에서 아미노산 서열 변이체의 예로는 산성 변이체 (예를 들어, 탈아미드화된 항체 변이체), 염기성 변이체, 그의 1 또는 2개의 경쇄 상에 아미노-말단 리더 연장부 (예를 들어, VHS-)를 갖는 항체, 그의 1 또는 2개의 중쇄 상에 C-말단 리신 잔기를 갖는 항체, 1개 이상의 산화된 메티오닌 잔기를 갖는 항체 등을 포함하고, 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열에 대한 변이의 조합을 포함한다.
"산성 변이체"는 주요 종 항체보다 더욱더 큰 산성을 띠는 주요 종 항체의 변이체이다. 산성 변이체는 주요 종 항체에 비하여 음성인 전하를 획득하였거나, 양성인 전하를 상실한 것이다. 그러한 산성 변이체는 전하에 따라 단백질을 분리하는 것인 분리 방법론, 예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 분석할 수 있다. 주요 종 항체의 산성 변이체는 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리될 때 주요 피크보다 더 빨리 용리된다.
"디설피드 환원된 변이체"는 유리 티올 형태로 화학적으로 환원이 된 1 초과의 디설피드-결합 시스테인(들)을 갖는다. 이런 변이체는 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해서, 또는 크기순으로 나타내는 방법론, 예를 들어, 실시예 1에 기술되어 있는 것과 같이, 도데실황산나트륨 (CE-SDS)을 이용한 모세관 전기영동에 의해 모니터할 수 있다. 본원에서, "비-환원형 변이체"는 디티오트레이톨과 같은 환원제로 처리함으로써 화학적으로 중쇄 및 경쇄로 환원될 수 있는, 주요 종 항체의 변이체이다. 그러한 변이체는 환원제로 조성물을 처리하고, 예를 들면, 하기 실시예 1에 기술되어 있는 기법을 사용하여 단백질 크기를 평가하는 방법론, 예를 들어, 도데실황산나트륨 (CE-SDS)을 이용한 모세관 전기영동을 이용함으로써 생성된 조성물을 평가함으로써 평가할 수 있다.
본원에서 "글리코실화 변이체" 항체는 그에 부착된 하나 이상의 당질 부분이 주요 종 항체에 부착된 하나 이상의 당질 부분과 상이한 것인 항체이다. 본원에서 글리코실화 변이체의 예는 G0 올리고당 구조 대신에 G1 또는 G2 올리고당 구조가 그의 Fc 영역에 부착된 항체, 그의 1 또는 2개의 경쇄에 1 또는 2개의 당질 부분이 부착된 항체, 항체의 1 또는 2개의 중쇄에 당질이 부착되지 않은 항체, 시알릴화된 항체 등과 상기와 같은 글리코실화 변경의 조합을 갖는 항체를 포함한다.
항체가 Fc 영역을 갖는 경우, 본원 도 14에 나타낸 것과 같은 올리고당 구조는 예를 들어, 잔기 299에서 항체의 1 또는 2개의 중쇄에 부착될 수 있다. 페르투주맙의 경우, G0이 주된 올리고당 구조이고, 예를 들어, G0-F, G-1, Man5, Man6, G1-1, G1(1-6), G1(1-3) 및 G2와 같은 다른 올리고당 구조는 페르투주맙 조성물에서 보다 적은 양으로 발견된다.
달리 명시하지 않는 한, 본원에서 "G1 올리고당 구조"는 G1(1-6) 및 G1(1-3) 구조를 포함한다.
본원의 목적을 위해, "시알릴화된 변이체"는 항체의 1 또는 2개의 중쇄에 부착된 하나 이상의 시알릴화된 당질 부분을 포함하는 주요 종 항체의 변이체이다. 시알릴화된 변이체는 예를 들어, 실시예에 기재되어 있는 바와 같이, 시알리다제로 처리하거나 처리하지 않은 조성물을 (예를 들면, 이온 교환 크로마토그래피에 의해서) 평가함으로써 확인할 수 있다.
"당화된 변이체"는 당, 예를 들어, 글루코스가 공유결합되어 있는 항체이다. (예를 들어, 세포 배양 배지 중에서) 글루코스를 단백질 중의 리신 잔기와 반응시킴으로써 상기와 같은 부가가 일어날 수 있다. 당화된 변이체는 중쇄 또는 경쇄의 질량 증가를 평가하는 질량 분광분석법에 의해 이루어지는 환원된 항체의 분석을 통해 확인할 수 있다. 당화된 변이체는 또한 하기 실시예 1에서 설명되는 바와 같이, 보로네이트 크로마토그래피에 의해 정량될 수 있다. 당화된 변이체는 글리코실화 변이체와는 상이하다.
"탈아미드화된" 항체는 그의 하나 이상의 아스파라긴 잔기가 예를 들어, 아스파르트산, 숙신이미드 또는 이소-아스파르트산으로 유도체화된 항체이다. 탈아미드화된 항체의 예로는 페르투주맙의 1 또는 2개의 중쇄 상에 있는 Asn-386 및/또는 Asn-391이 탈아미드화된 것인 페르투주맙 변이체가 있다.
본원에서 "아미노-말단 리더 연장 변이체"는 주요 종 항체의 임의의 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단에 존재하는 아미노-말단 리더 서열이 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는 주요 종 항체를 지칭한다. 예시적인 아미노-말단 리더 연장부는 항체 변이체의 하나 또는 둘다의 경쇄 상에 존재하는 3개의 아미노산 잔기, VHS를 포함하거나 그로 구성된다.
"상동성"은 아미노산 서열 변이체 중, 서열을 정렬하고, 필요한 경우에는 상동성 비율이 최대가 되도록 하기 위해 갭을 도입한 후에 관찰되는, 일치하는 잔기의 비율로서 정의된다. 정렬하는 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 주지되어 있다. 상기와 같은 한 컴퓨터 프로그램으로는 "Align 2"가 있는데, 이는 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.)가 프로그래밍한 프로그램으로서, 1991년 12월 10일자로 미국 저작권청(United States Copyright Office) (워싱턴 DC 20559 소재)에 사용자 문서로 파일링된 것이다.
본원의 목적을 위해, "양이온 교환 분석"은 2개 이상의 화합물을 포함하는 조성물이 양이온 교환기를 사용하여 전하차에 기초하여 분리되는 것인 임의의 방법을 지칭한다. 양이온 교환기는 일반적으로 공유결합되어 있는, 음전하를 띤 기를 포함한다. 바람직하게, 본원에서 양이온 교환기는 약한 양이온 교환기이고/거나, 디오넥스(Dionex)에 의해 판매되는 프로팩 WCX-10™ 양이온 교환 칼럼과 같이, 카르복실레이트 관능기를 포함한다.
"HER 수용체"는 HER 수용체 패밀리에 속하는 수용체 단백질 티로신 키나제이고, 이는 EGFR, HER2, HER3 및 HER4 수용체와, 추후에 동정될 상기 패밀리의 기타 다른 멤버를 포함한다. HER 수용체는 일반적으로 HER 리간드에 결합할 수 있는 세포외 도메인; 친유성 막횡단 도메인; 보존된 세포내 티로신 키나제 도메인; 및 인산화될 수 있는 티로신 잔기를 여러 개 갖는 카르복실 말단 신호전달 도메인을 포함할 것이다. 바람직하게는, HER 수용체는 천연 서열 인간 HER 수용체이다.
HER2의 세포외 도메인은 4개의 도메인: 도메인 I (약 1-195의 아미노산 잔기), 도메인 II (약 196-319의 아미노산 잔기), 도메인 III (약 320-488의 아미노산 잔기) 및 도메인 IV (약 489-630의 아미노산 잔기) (잔기 번호화는 신호 펩티드를 제외하고 이루어진 것이다)를 포함한다. 문헌 ([Garrett et al. Mol. Cell. 11: 495-505 (2003)], [Cho et al. Nature 421: 756-760 (2003)], [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)], 또는 [Plowman et al. Proc . Natl . Acad . Sci . 90:1746-1750 (1993)])을 참조한다. 또한 본원의 도 1도 참조한다.
용어 "ErbB1", "HER1", " 표피 성장 인자 수용체" 및 "EGFR"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 그의 천연적으로 발생된 돌연변이체 형태 (예를 들어, 문헌 [Humphrey et al. PNAS ( USA ) 87:4207-4211 (1990)]에 제시되어 있는 결실 돌연변이체 EGFR)를 비롯한, 예를 들면, 문헌 [Carpenter et al. Ann . Rev . Biochem. 56:881-914 (1987)]에 개시된 EGFR을 지칭한다. erbB1은 EGFR 단백질 생성물을 코딩하는 유전자를 지칭한다.
"ErbB2" 및 "HER2"라는 표현은 본원에서 상호 교환가능하게 사용되고, 예를 들면, 문헌 ([Semba et al., PNAS ( USA ) 82:6497-6501 (1985)] 및 [Yamamoto et al. Nature 319:230-234 (1986)])에 기재된 인간 HER2 단백질 (진뱅크(Genebank) 기탁 번호 X03363)을 지칭한다. 용어 "erbB2"는 인간 ErbB2를 코딩하는 유전자를 지칭하고, "neu"는 래트 p185 neu 를 코딩하는 유전자를 지칭한다. 바람직한 HER2는 천연 서열 인간 HER2이다.
"ErbB3" 및 "HER3"은 예를 들면, 미국 특허 번호 제5,183,884호 및 제5,480,968호 뿐만 아니라, 문헌 [Kraus et al. PNAS ( USA ) 86:9193-9197 (1989)]에 개시되어 있는 수용체 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에서 "ErbB4" 및 "HER4"라는 용어는 예를 들어, WO99/19488 (1999년 4월 22일 공개)에 개시된 그의 이소형을 비롯한, 예를 들면, 유럽 특허 출원 번호 제599,274호; [Plowman et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:1746-1750 (1993)]; 및 [Plowman et al., Nature, 366:473-475 (1993)]에 개시된 수용체 폴리펩티드를 지칭한다.
"HER 리간드"는 HER 수용체에 결합하고/하거나 그를 활성화시키는 폴리펩티드를 의미한다. 본원에서 특히 관심의 대상이 되는 HER 리간드는 천연 서열 인간 HER 리간드, 예를 들어, 표피 성장 인자 (EGF) (문헌 [Savage et al., J. Biol . Chem. 247:7612-7621 (1972)]); 형질전환 성장 인자 알파 (TGF-α) (문헌 [Marquardt et al., Science 223:1079-1082 (1984)]); 신경초종 또는 각질세포 자가분비 성장 인자[로도 알려진 암피레굴린 (문헌 ([Shoyab et al. Science 243:1074-1076 (1989)]; [Kimura et al. Nature 348:257-260 (1990)]; 및 [Cook et al. Mol . Cell . Biol. 11:2547-2557 (1991)])); 베타셀룰린 (문헌 ([Shing et al., Science 259:1604-1607 (1993)]; 및 [Sasada et al. Biochem . Biophys . Res . Commun. 190:1173 (1993)])); 헤파린-결합 표피 성장 인자 (HB-EGF) (문헌 [Higashiyama et al., Science 251:936-939 (1991)]); 에피레굴린 (문헌 ([Toyoda et al., J. Biol . Chem . 270:7495-7500 (1995)]; 및 [Komurasaki et al. Oncogene 15:2841-2848 (1997)])); 헤레굴린 (하기 참조); 뉴레굴린-2 (NRG-2) (문헌 [Carraway et al., Nature 387:512-516 (1997)]); 뉴레굴린-3 (NRG-3) (문헌 [Zhang et al., Proc . Natl . Acad. Sci . 94:9562-9567 (1997)]); 뉴레굴린-4 (NRG-4) (문헌 [Harari et al. Oncogene 18:2681-89 (1999)]) 또는 크립토 (CR-1) (문헌 [Kannan et al. J. Biol . Chem. 272(6):3330-3335 (1997)])이다. EGFR에 결합하는 HER 리간드로는 EGF, TGF-α, 암피레굴린, 베타셀룰린, HB-EGF 및 에피레굴린을 포함한다. HER3에 결합하는 HER 리간드로는 헤레굴린을 포함한다. HER4에 결합할 수 있는 HER 리간드로는 베타셀룰린, 에피레굴린, HB-EGF, NRG-2, NRG-3, NRG-4 및 헤레굴린을 포함한다.
본원에서 사용되는 "헤레굴린" (HRG)은 미국 특허 번호 제5,641,869호 또는 문헌 [Marchionni et al., Nature, 362:312-318 (1993)]에 개시된 바와 같은 헤레굴린 유전자 생성물에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 지칭한다. 헤레굴린의 예로는 헤레굴린-α, 헤레굴린-β1, 헤레굴린-β2 및 헤레굴린-β3 (문헌 [Holmes et al., Science, 256:1205-1210 (1992]); 및 미국 특허 번호 제5,641,869호); neu 분화 인자 (NDF) (문헌 [Peles et al. Cell 69: 205-216 (1992))]; 아세틸콜린 수용체-유도 활성 (ARIA) (문헌 [Falls et al. Cell 72:801-815 (1993)]); 아교세포 성장 인자 (GGF) (문헌 [Marchionni et al., Nature , 362:312-318 (1993)]); 감각 및 운동 뉴런 유도 인자 (SMDF) (문헌 [Ho et al. J. Biol . Chem . 270:14523-14532 (1995)]); γ-헤레굴린 (문헌 [Schaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997)])를 포함한다. 상기 용어는 천연 서열 HRG 폴리펩티드의 생물학적으로 활성인 단편 및/또는 아미노산 서열 변이체, 예를 들어, 그의 EGF-유사 도메인 단편 (예를 들어, HRGβ1177-244)을 포함한다.
본원에서 "HER 이량체"는 적어도 2개의 HER 수용체를 포함하는 비공유 회합된 이량체이다. 그러한 복합체는 2개 이상의 HER 수용체를 발현하는 세포가 HER 리간드에 노출될 때 형성될 수 있고, 면역침전에 의해 단리되고, 예를 들어, 문헌 [Sliwkowski et al., J. Biol . Chem., 269(20): 14661-14665 (1994)]에 기재된 바와 같이 SDS-PAGE에 의해 분석될 수 있다. 그러한 HER 이량체의 예로는 EGFR-HER2, HER2-HER3 및 HER3-HER4 이종이량체를 포함한다. 추가로, HER 이량체는 예를 들어, HER3, HER4 또는 EGFR과 같이 상이한 HER 수용체와 조합된 2개 이상의 HER2 수용체를 포함할 수 있다. 다른 단백질, 예를 들어, 사이토킨 수용체 서브유닛 (예를 들어, gp130)이 이량체와 회합할 수 있다.
HER2 상의 "이종이량체 결합 부위"는 그들이 함께 이량체를 형성할 때에 EGFR, HER3 또는 HER4의 세포외 도메인 중의 영역과 접촉하거나 접속하게 되는 HER2의 세포외 도메인 중의 영역을 지칭한다. 상기 영역은 HER2의 도메인 II에서 발견된다. 문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)].
"HER 활성화" 또는 "HER2 활성화"는 임의의 하나 이상의 HER 수용체 또는 HER2 수용체의 활성화 또는 인산화를 지칭한다. 일반적으로, HER 활성화는 신호 전달 (예를 들면, HER 수용체 또는 기질 폴리펩티드 내의 티로신 잔기를 인산화시키는 HER 수용체의 세포내 키나제 도메인에 의해 유도되는 신호 전달)을 야기한다. HER 활성화는 관심의 대상이 되는 HER 수용체를 포함하는 HER 이량체에의 HER 리간드 결합에 의해 매개될 수 있다. HER 이량체에의 HER 리간드 결합은 이량체 내의 하나 이상의 HER 수용체의 키나제 도메인을 활성화시킬 수 있고, 이에 의해 하나 이상의 HER 수용체 내의 티로신 잔기의 인산화 및/또는 추가의 기질 폴리펩티드(들), 예를 들어, Akt 또는 MAPK 세포내 키나제 내의 티로신 잔기를 인산화시킨다.
본원에서 "항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 적어도 2개의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 항체 단편을 포함한다.
본원에서 사용되는 바, "모노클로날 항체"라는 용어는 실질적으로 균질한 항체의 군집으로부터 수득한 항체를 나타내고, 즉, 군집을 구성하는 개별 항체들은 모노클로날 항체 생산시에 발생할 수 있는 가능한 변이체, 예를 들어, 본원에 기술되어 있는 변이체를 제외하고는 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 유도된다. 그의 특이성에 이외에도 모노클로날 항체는 기타 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는 점에서 유리하다. "모노클로날"이라는 수식어는 실질적으로 균질한 항체 군집으로부터 얻었다는 항체의 특징을 가리키는 것이며, 임의의 특정 방법에 의해 항체를 생산하여야 한다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 제4,816,567호 참조)에 의해 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들면, 문헌 ([Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)])에 기재된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본원에서 모노클로날 항체는 구체적으로 원하는 생물학적 활성을 보이는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지는 또다른 종으로부터 유래되거나 또다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 것인 "키메라" 항체 및 상기 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 번호 제4,816,567호; 및 [Morrison et al., Proc . Natl . Acad. Sci . USA , 81 :6851-6855 (1984)]). 본원에서 관심의 대상이 되는 키메라 항체는, 비-인간 영장류 (예를 들어, 구세계 원숭이(Old World Monkey), 유인원 등)로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는, "영장류화된" 항체를 포함한다.
"항체 단편"은 바람직하게는 그의 항원-결합 영역 또는 가변 영역을 포함하는 무손상 항체의 일부를 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편(들)으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
"무손상 항체"는 항원-결합 가변 영역 뿐만 아니라, 경쇄 불변 도메인 (CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 바람직하게, 무손상 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 갖고, 그의 1 또는 2개의 중쇄에 부착된 올리고당 구조를 포함한다.
항체 "효과기 기능"이란 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인한 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 포식작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다.
용어 "Fc 영역"은 본원에서 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하도록 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 대체로 위치 Cys226 또는 Pro230의 아미노산 잔기로부터 그의 카르복실-말단으로 연장되도록 규정된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 번호화 체계에 따른 잔기 447)은 예를 들어, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 공학처리에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 군집, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 군집, 및 K447 잔기가 존재하거나 존재하지 않는 항체들의 혼합물을 갖는 항체 군집을 포함할 수 있다.
본원에서 달리 명시하지 않는 한, 면역글로불린 중쇄 내의 잔기의 번호화는 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 EU 인덱스의 번호화이다. "문헌 [Kabat]에서와 같은 EU 인덱스"란 인간 IgG1 EU 항체의 잔기를 번호화한 것을 지칭한다.
그의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 무손상 항체는 상이한 "부류"로 지정될 수 있다. 무손상 항체에는 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 존재하며, 이중 몇몇은 "하위부류" (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 추가로 나누어질 수 있다. 상이한 부류의 항체에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불리운다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 입체형태는 주지되어 있다.
"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 Fc 수용체 (FcR)를 발현하는 비특이 세포독성 세포 (예를 들어, 자연살세포 (NK), 호중구 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식한 후, 이어서, 표적 세포를 용해시키는 것인 세포-매개 반응을 지칭한다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu . Rev . Immunol . 9:457-92 (1991)]의 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심의 대상이 되는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 번호 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재된 것과 같은 시험관내 ADCC 분석을 수행할 수 있다. 그러한 분석에 유용한 효과기 세포로는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연살세포 (NK)를 포함한다. 별법으로 또는 추가로 또는 추가로, 관심의 대상이 되는 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어, 문헌 [Clynes et al., PNAS ( USA ) 95:652-656 (1998)]에 개시된 동물 모델에서 평가할 수 있다.
"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고, 효과기 기능을 실행하는 백혈구이다. 바람직하게, 상기 세포는 적어도 FcγRIII을 발현하고, ADCC 효과기 기능을 실행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예로는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연살세포 (NK), 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함하며; PBMC 및 NK 세포가 바람직하다. 효과기 세포는 그의 천연 공급원으로부터, 예를 들어, 본원에 기술된 혈액 또는 PBMC로부터 단리될 수 있다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"이라는 용어는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술하기 위해 사용된다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체에 결합하는 것으로 (감마 수용체), 이는 FcγRI, FcγRII, 및 Fcγ RIII 하위부류로 이루어진 수용체와, 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 선택적으로 스플라이싱된 형태를 비롯한 것을 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하고, 이들은 그의 세포질 도메인이 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (리뷰를 위해 문헌 [M. in Daeron, Annu . Rev . Immunol . 15:203-234 (1997)]을 참조한다). FcR은 문헌 ([Ravetch and Kinet, Annu . Rev . Immunol. 9:457-92 (1991)]; [Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)]; 및 [de Haas et al., J. Lab . Clin . Med. 126:330-41 (1995)])에 리뷰되어 있다. 추후에 동정될 FcR을 비롯한, 기타 다른 FcR도 본원에서 "FcR"이라는 용어에 포함된다. 상기 용어는 또한 모체 IgG를 태아로 전달하는 것을 담당하는 신생아의 수용체인 FcRn을 포함한다 (문헌 ([Guyer et al., J. Immunol . 117:587 (1976)] 및 [Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)])).
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에서 표적을 용해시킬 수 있는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체계의 제1 성분 (C1q)을, 동족 항원과 복합체를 형성한 분자 (예를 들어, 항체)에 결합시킴으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 기재된 CDC 분석을 수행할 수 있다.
"천연 항체"는 보통 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 이루어진, 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 디설피드 공유 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 디설피드 결합 수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄마다 상이하다. 또한, 각각의 중쇄 및 경쇄는 일정하게 이격된 쇄내 디설피드 브릿지를 갖는다. 각각의 중쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인 (VH)에 이어서 많은 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인 (VL)을 갖고, 그의 다른 말단에 불변 도메인을 갖는다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 생각된다.
"가변"이라는 용어는 가변 도메인의 특정 부분이 항체들 사이에 서열이 크게 상이하다는 사실을 나타내고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에 걸쳐 균등하게 분포되지 않는다. 가변성은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인, 둘 모두에서 초가변 영역 으로 불리는 3개의 세그먼트에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 루프 연결부를 형성하고, 몇몇 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 주로 β-시트 입체형태를 취하는 4개의 FR을 각각 포함한다. 각 쇄내의 초가변 영역은 FR 영역에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고, 다른 쇄의 초가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위를 형성하는 데 기여한다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). 불변 도메인은 항체가 항원에 결합하는 것에 직접 관여하지 않고, 항체 의존성 세포 독성 (ADCC)에서 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다.
본원에서 사용될 때, "초가변 영역"이라는 용어는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예를 들어, 경쇄 가변 도메인 중 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 중 잔기 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]) 및/또는 "초가변 로프"로부터의 잔기 (예를 들어, 경쇄 가변 도메인 중 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 및 중쇄 가변 도메인 중 잔기 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); 문헌 [Chothia and Lesk J. Mol . Biol. 196:901-917 (1987)])를 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
항체를 파파인으로 분해하면 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는, "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편, 및 나머지 "Fc" 단편 (그의 명칭은 쉽게 결정화되는 그의 능력을 반영한다)이 생성된다. 펩신으로 처리하면 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원에 가교 결합할 수 있는 F(ab')2 단편이 생성된다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 상기 영역은 긴밀한 비공유 회합 상태의 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 상기 형태에서 각각의 가변 도메인의 3개의 초가변 영역은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상의 항원-결합 부위를 규정한다. 종합적으로, 6개의 초가변 영역이 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반부)도 전체 결합 부위보다 친화성은 더 낮기는 하지만, 항원을 인식하여 결합할 수 있는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 포함한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 몇개의 잔기가 부가된다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 하나의 유리 티올기를 함유하는 것인 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 한 쌍의 Fab' 단편으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.
임의의 척추동물 종으로부터 유래된 항체의 "경쇄"는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2개의 명백하게 구분되는 종류 중 하나로 배정될 수 있다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄로 존재한다. 바람직하게, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 요구되는 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 리뷰를 위해서, 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]를 참조한다. HER2 항체 scFv 단편은 WO93/16185; 미국 특허 번호 제5,571,894호; 및 미국 특허 번호 제5,587,458호에 기재되어 있다.
"디아바디"라는 용어는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편으로서, 상기 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 (VH-VL) 내의 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함하는 것인 작은 항체 단편을 지칭하는 것이다. 동일한 쇄 상의 2개의 도메인들 사이에 쌍을 형성하도록 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 형성하여 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아바디는 예를 들면, EP 404,097; WO93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 90:6444-6448 (1993)]에 보다 상세히 기재되어 있다.
비-인간 (예를 들면, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대체로, 인간화된 항체는 수여자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및/또는 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류의초가변 영역으로부터의 잔기로 대체된 것인 인간 면역글로불린 (수여자 항체)이다. 몇몇 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 추가로, 인간화된 항체는 수여자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선시키기 위해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것에 상응한다. 인간화된 항체는 또한 임의로 적어도 일부의 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 Fc를 포함할 것이다. 보다 상세한 설명을 위해, 문헌 ([Jones et al., Nature 321 :522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 [Presta, Curr . Op . Struct . Biol. 2:593-596 (1992)])을 참조한다.
인간화된 HER2 항체로는 미국 특허 5,821,337 (본원에서 참고로 명백하게 인용)의 표 3에 기재된 바와 같은, huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8 또는 트라스투주맙 (허셉틴?); 인간화된 520C9 (WO93/21319) 및 본원에 기술된 인간화된 2C4 항체를 포함한다.
본원의 목적을 위해, "트라스투주맙," "허셉틴?," 및 "huMAb4D5-8"은 각각 서열 번호: 13 및 14의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체를 나타낸다.
본원에서, "페르투주맙" 및 "rhuMAb 2C4"는 각각 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 및 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 항체를 나타낸다. 페르투주맙이 무손상 항체일 경우, 이는 각각 서열 번호: 15 및 16의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.
"네이키드 항체"는 예를 들어, 세포독성 부분 또는 방사성 표지와 같은 이종성 분자에 접합되지 않은 항체 (본원에서 정의된 바와 같은 항체)이다.
"단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인하고 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단학적 또는 치료학적 사용을 방해하는 물질로서, 이는 효소, 호르몬 및 기타 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의한 측정시, 항체의 95 중량％ 초과, 및 가장 바람직하게는 99 중량％ 초과 수준까지, (2) 회전식 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻는데 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시(Coomassie) 블루 또는 바람직하게는, 은 염색을 사용하여 환원 또는 비-환원 조건하에 SDS-PAGE에 의해 균질할 때까지 정제된다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 계내 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"트라스투주맙보다 더 효과적으로 HER 이량체화를 억제"시키는 HER2 항체는 트라스투주맙보다 더 효과적으로 (예를 들면, 적어도 약 2배 더 효과적으로) HER 이량체를 감소시키거나 제거하는 것이다. 바람직하게, 그러한 항체는 적어도 대략적으로는, 무손상 뮤린 모노클로날 항체 2C4, 뮤린 모노클로날 항체 2C4의 Fab 단편, 무손상 페르투주맙, 및 페르투주맙의 Fab 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체만큼 효과적으로 HER2 이량체화를 억제시킨다. 직접 HER 이량체를 연구하거나, 또는 HER 이량체화로부터 일어나는 HER 활성화, 또는 하류 신호전달을 평가함으로써, 및/또는 항체-HER2 결합 부위를 평가함으로써 등등의 방법으로 HER 이량체화 억제를 평가할 수 있다. 트라스투주맙보다 더 효과적으로 HER 이량체화를 억제시킬 수 있는 능력을 갖는 항체를 스크리닝하는 분석법은 문헌 ([Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)] 및 WO01/00245 (아담스 등(Adams et al))에 기재되어 있다. 단지 일례로서, HER 이량체 형성 억제 (예를 들어, 문헌 ([Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]의 도 1A-B; 및 WO01/00245) 참조); HER 이량체를 발현하는 세포의 HER 리간드 활성화 감소 (예를 들면, WO01/00245 및 문헌 ([Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]의 도 2A-B); HER 이량체를 발현하는 세포에의 HER 리간드 결합 차단 (예를 들면, WO01/00245, 및 문헌 ([Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]의 도 2E); HER 리간드의 존재 (또는 부재)하에서 HER 이량체를 발현하는 암 세포 (예를 들어, MCF7, MDA-MD-134, ZR-75-1, MD-MB-175, T-47D 세포)의 세포 성장 억제 (예를 들면, WO01/00245 및 문헌 [Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]의 도 3A-D); 하류 신호전달 억제 (예를 들면, HRG-의존성 AKT 인산화 억제, 또는 HRG- 또는 TGFα-의존성 MAPK 인산화 억제) (예를 들면, WO01/00245, 및 문헌 [Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]의 도 2C-D 참조)를 평가함으로써 HER 이량체화의 억제를 분석할 수 있다. 또한, 항체-HER2 결합 부위를 연구함으로써, 예를 들면, HER2에 결합한 항체의 구조 또는 모델, 예를 들어, 결정 구조를 평가함으로써 항체가 HER 이량체화를 억제시키는지 여부를 평가할 수 있다 (예를 들면, 문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)] 참조).
HER2 항체는 트라스투주맙보다 더 효과적으로 (예를 들면, 적어도 2배 더 효과적으로) "HRG-의존성 AKT 인산화"를 억제시키고/거나 "HRG- 또는 TGF-α-의존성 MAPK 인산화"를 억제시킬 수 있다 (예로서 문헌 [Agus et al. Cancer Cell 2: 127-137 (2002)] 및 WO01/00245 참조).
HER2 항체는 "HER2 외측 도메인(ectodomain) 절단을 억제하지 않는" 것일 수 있다 (문헌 [Molina et al. Cancer Res. 61:4744-4749 (2001)]).
HER2의 "이종이량체 결합 부위에 결합하는" HER2 항체는 도메인 II의 잔기에 결합하고 (임의로는 또한 HER2 세포외 도메인의 다른 도메인, 예를 들어, 도메인 I 및 III의 잔기에도 결합하고), HER2-EGFR, HER2-HER3 또는 HER2-HER4 이종이량체의 형성을 적어도 어느 정도 입체적으로 방해할 수 있다. 문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)]에는 RCSB 단백질 데이타 뱅크(RCSB Protein Data Bank) (ID 코드 IS78)에 기탁된 HER2-페르투주맙 결정 구조의 특징이 규명되어 있으며, 이는 HER2의 이종이량체 결합 부위에 결합하는 예시적인 항체를 제시하고 있다.
HER2의 "도메인 II에 결합하는" 항체는 도메인 II의 잔기 및 임의로는 HER2의 다른 도메인(들), 예를 들어, 도메인 I 및 III의 잔기에 결합한다.
본원에서 사용될 때, "성장 억제제"는 시험관내에서 또는 생체내에서 세포, 특히 HER을 발현하는 암세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 억제제는 S기에서 HER을 발현하는 세포의 비율을 유의적으로 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예로는 세포 주기 진행을 (S기 이외의 다른 시기에) 차단하는 물질, 예를 들어, G1 정지 및 M기 정지를 유도하는 물질을 포함한다. 전통적인 M기 차단제로는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산 및 토포 II 억제제, 예를 들어, 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 물질, 예를 들면, DNA 알킬화제, 예를 들어, 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 아라-C는 또한 S기 정지까지 이어질 수 있다. 추가의 정보는 문헌 [The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al., (WB Saunders: Philadelphia, 1995), 특히 p.13]에서 살펴볼 수 있다.
"성장 억제성" 항체의 예는 HER2에 결합하고, HER2를 과다발현하는 암세포의 성장을 억제하는 것이다. 바람직한 성장 억제성 HER2 항체는 세포 배양물 중에서 SK-BR-3 유방 종양 세포의 성장을 약 0.5 내지 30 ㎍/ml의 항체 농도에서 20％ 초과 만큼, 바람직하게는 50％ 초과 만큼 (예를 들어, 약 50％ 내지 약 100％ 만큼)으로 억제하는데, 여기서, 성장 억제는 SK-BR-3 세포를 항체 노출시킨지 6일이 경과한 후에 측정된 것이다 (미국 특허 번호 제5,677,171호 (1997년 10월 14일 등록) 참조). SK-BR-3 세포 성장 억제 분석은 상기 특허와 본원에서 하기에서 보다 상세하게 설명되어 있다. 바람직한 성장 억제성 항체는 뮤린 모노클로날 항체 4D5, 예를 들어, 트라스투주맙의 인간화된 변이체이다.
"세포자멸을 유도하는" 항체는 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 소포체의 팽창, 세포 단편화 및/또는 막 소포 (세포자멸체로 명명된다)의 형성에 의해 측정이 되는 바, 프로그래밍된 세포 사멸을 유도하는 항체이다. 세포는 보통 HER2 수용체를 과다발현하는 것이다. 바람직하게는, 세포는 종양 세포, 예를 들어, 유방, 난소, 위, 자궁내막, 타액선, 폐, 신장, 결장, 갑상선, 췌장 또는 방광 세포이다. 시험관내에서, 세포는 SK-BR-3, BT474, Calu 3 세포, MDA-MB-453, MDA-MB-361 또는 SKOV3 세포일 수 있다. 세포자멸과 관련된 세포성 이벤트를 평가하는 데에는 각종 방법이 이용될 수 있다. 예를 들어, 포스파티딜 세린 (PS) 전위는 아넥신 결합에 의해 측정할 수 있고; DNA 단편화는 DNA 래더링을 통해 평가될 수 있고; DNA 단편화와 함께 핵/염색질 응축은 저이배체 세포의 임의의 증가에 의해 평가될 수 있다. 바람직하게는, 세포자멸을 유도하는 항체는 BT474 세포를 사용한 아넥신 결합 분석 (하기 참조)에서 비처리 세포에 비해 아넥신 결합을 약 2 내지 50배, 바람직하게는 약 5 내지 50배, 가장 바람직하게는 약 10 내지 50배 유도하는 것이다. 세포자멸을 유도하는 HER2 항체의 예는 7C2 및 7F3이다.
"에피토프 2C4"는 항체 2C4가 결합하는 HER2의 세포외 도메인 내의 영역이다. 2C4 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 문헌 [Antibodies , A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 것과 같은 통상적인 교차-차단 분석을 수행할 수 있다. 별법으로, 에피토프 지도화는 항체가 HER2의 2C4 에피토프에 결합하는지 여부를 평가하기 위해 당업계에 공지된 방법을 사용함으로써 수행할 수 있고/거나, 항체가 HER2의 어떤 도메인(들)에 결합하는지를 알아보기 위해 항체-HER2 구조 (문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)])를 연구해 볼 수 있다. 에피토프 2C4는 HER2의 세포외 도메인 내의 도메인 II로부터의 잔기를 포함한다. 2C4 및 페르투주맙은 도메인 I, II 및 III의 연결부에서 HER2의 세포외 도메인에 결합한다. 문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)].
"에피토프 4D5"는 항체 4D5 (ATCC CRL 10463) 및 트라스투주맙이 결합하는 HER2의 세포외 도메인 내의 영역이다. 상기 에피토프는 HER2의 막횡단 도메인에 근접해 있고, HER2의 도메인 IV 내에 존재한다. 4D5 에피토프에 결합하는 항체에 대해 스크리닝하기 위해, 문헌 [Antibodies , A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 것과 같은 통상적인 교차-차단 분석을 수행할 수 있다. 별법으로, 에피토프 지도화는 항체가 HER2의 4D5 에피토프 (예를 들어, 도 1에서 대략 잔기 529 내지 대략 잔기 625 (잔기 529와 잔기 625 포함)의 영역 내의 임의의 하나 이상의 잔기)에 결합하는지 여부를 평가하기 위해 수행될 수 있다.
"에피토프 7C2/7F3"은 7C2 및/또는 7F3 항체 (각각 ATCC에 기탁, 하기 참조)가 결합하는 HER2의 세포외 도메인의 (도메인 I 내의) N 말단 영역이다. 7C2/7F3 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 예를 들어, 문헌 [Antibodies , A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 것과 같은 통상적인 교차-차단 분석을 수행할 수 있다. 별법으로, 에피토프 지도화는 항체가 HER2 상의 7C2/7F3 에피토프 (예를 들어, 도 1의 대략 잔기 22 내지 대략 잔기 53의 영역 내의 임의의 하나 이상의 잔기)에 결합하는지 여부를 확립하기 위해 수행할 수 있다.
"치료"는 치료적 처치 및 예방 또는 보호 조치, 둘 모두 지칭한다. 치료가 필요한 대상은 질환에 이미 걸린 대상과 질환이 예방되어야 할 대상을 포함한다. 따라서, 본원에서 치료하고자 하는 환자는 질환에 걸린 것으로 진단될 수 있거나 질환에 걸리기 쉽거나 취약할 수 있다.
"암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 병태를 지칭하거나 설명한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종 (속질모세포종 및 망막모세포종 포함), 육종 (지방육종 및 활막 세포 육종 포함), 신경내분비 종양 (카르시노이드 종양, 가스트린종, 및 섬세포암 포함), 중피종, 슈반세포종 (청신경종 포함), 수막종, 선암종, 흑색종 및 백혈병 또는 림프양 악성종양을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 그러한 암에 대한 보다 특정한 예로는 편평세포암 (예를 들어, 편평상피 세포암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포암종을 포함한 폐암, 복막의 암, 간세포암, 위장암을 포함한 위암(gastric cancer or stomach cancer), 췌장암, 아교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암(liver cancer), 방광암, 간암(hepatoma), 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁암종, 타액선암종, 신장암 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문암종, 음경암종, 고환암, 식도암, 담관의 종양 및 두경부암을 포함한다
"유효량"이라는 용어는 환자에서 질환을 치료하는 데 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 질환이 암일 경우, 약물의 유효량은 암세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 축소시키고; 주변 장기로의 암세포 침윤을 억제하고 (즉, 어느 정도는 속도를 늦추고, 바람직하게는 정지시키고); 종양 전이를 억제하고 (즉, 어느 정도는 속도를 늦추고, 바람직하게는 정지시키고); 종양 성장을 어느 정도 억제하고; 및/또는 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 약물이 존재하는 암세포의 성장을 억제하고/하거나 사멸시킬 수 있는 정도까지, 약물은 세포활동 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 유효량은 무진행 생존을 연장시켜 객관적인 반응 (부분 반응 PR 또는 완전 반응 CR 포함)을 유도하고, 전반적 생존기간을 증가시키고, 및/또는 하나 이상의 암 증상을 개선시킬 수 있다.
"HER2 양성 암"은 암 세포 표면에 HER2 단백질이 존재하는 세포를 포함하는 암이다.
HER 수용체를 "과다발현"하는 암은 동일한 조직 유형의 비암성 세포와 비교하여 유의적으로 더 높은 수준으로 HER 수용체, 예를 들어, HER2를 암 세포 표면에 갖고 있는 것인 암이다. 그러한 과다발현은 유전자 증폭에 의해서나, 또는 전사 또는 번역 증가에 의해서 일어날 수 있다. HER 수용체 과다발현은 (예를 들어, 면역조직화학적 분석법: IHC를 통해) 세포 표면 상에 존재하는 HER 단백질의 수준 증가를 평가함으로써 진단 또는 예후적 분석법으로 측정할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 예를 들어, 형광 계내 혼성화 (FISH; WO98/45479 (1998년 10월 공개) 참조), 써던 블롯팅 또는 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 기법, 예를 들면, 실시간 정량적 PCR (RT-PCR)을 통해 세포에서 HER-코딩 핵산의 수준을 측정할 수 있다. 또한, 예를 들어, 혈청과 같은 생체액 중에서 탈락된 항원 (예를 들어, HER 세포외 도메인)을 측정함으로써 HER 수용체 과다발현을 연구할 수 있다 (예를 들어, (미국 특허 번호 제4,933,294호 (1990년 6월 12일 등록); WO91/05264 (1991년 4월 18일 공개); 미국 특허 5,401,638 (1995년 3월 28일 등록); 및 문헌 [Sias et al. J. Immunol. Methods 132: 73-80 (1990)]) 참조). 상기 분석 이외에, 다양한 생체내 분석이 당업계의 숙련인에게 이용될 수 있다. 예를 들어, 검출가능한 표지, 예를 들어, 방사성 동위원소로 임의로 표지된 항체에 환자 신체 내의 세포를 노출시킬 수 있고, 예를 들어, 방사성에 대한 외부 스캐닝에 의해 또는 이전에 항체에 노출된 환자로부터 채취한 생검을 분석함으로써 환자의 세포에 대한 항체의 결합을 평가할 수 있다.
반대로, "HER2 수용체를 과다발현하지 않는" 암은 동일한 조직 유형의 비암성 세포와 비교하여 정상 수준의 HER2 수용체 단백질보다 더 높은 수준으로 발현하지는 않는 것이다.
HER 리간드를 과다발현하는 암은 동일한 조직 유형의 비암성 세포와 비교하여 유의적으로 더 높은 수준으로 리간드를 생산하는 것인 암이다. 그러한 과다발현은 유전자 증폭에 의해서나, 또는 전사 또는 번역 증가에 의해서 일어날 수 있다. HER 리간드 과다발현은 환자에서, 예를 들어, 종양 생검에서 리간드 (또는 그를 코딩하는 핵산)의 수준을 평가함으로써, 또는 예를 들면, 상기 기술된 바와 같은 IHC, FISH, 써던 블롯팅, PCR 또는 생체내 분석법과 같은 다양한 진단 분석법에 의해서 진단학적으로 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "세포독성제"라는 용어는 세포의 기능을 억제하거나 막고/거나, 세포를 파괴시키는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제, 및 독소, 예를 들어, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소, 및 그의 단편 및/또는 변이체를 포함하는 것으로 한다.
"화학요법제"는 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예로는 알킬화제, 예를 들어, 티오테파 및 사이클로스포스파미드 (사이톡산(CYTOXAN?)); 알킬 설포네이트, 예를 들면, 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예를 들면, 벤조도파, 카르보쿠온, 메트우레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올로멜라민 포함); 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀(MARINOL)?); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (하이캄틴(HYCAMTIN)?) 포함), CPT-11 (이리노테칸, 캄프토자(CAMPTOSAR)?), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴 및 9-아미노캄프토테신); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신; (합성 유사체 KW2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예를 들면, 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예를 들면, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예를 들면, 에네디인 항생제 (예를 들면, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들면, 문헌 [Agnew, Chem Intl . Ed . Engl ., 33: 183-186 (1994)] 참조); 디네미신 (디네미신 A 포함); 에스페라미신; 뿐만 아니라, 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색단백질 에네디인 항생 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)?, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사 (독실(DOXIL)?), 리포좀 독소루비신 TLC D-99 (미오체트(MYOCET)?), 페길화된 리포좀 독소루비신 (카엘릭스(CAELYX)?), 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예를 들면, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물질, 예를 들면, 메토트렉세이트, 겜시타빈 (겜자르(GEMZAR)?), 테가푸르 (우프토랄(UFTORAL)?), 카페시타빈 (젤로다(XELODA))?), 에포틸론 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예를 들면, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예를 들면, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들면, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 항-아드레날, 예를 들면, 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제, 예를 들면, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드, 예를 들면, 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미토크산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소크산트론; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK? 다당류 복합체 (오레곤주 유진 소재의 JHS 내쳐럴 프로덕츠(JHS Natural Products)); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리콜테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)?), 파클리탁셀 (아브락산(ABRAXANE)™)의 알부민-공학처리된 나노입자 제제 및 독세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)?); 클로란부실; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 제제, 예를 들면, 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 튜불린 중합에 의한 미세관 형성을 억제하는 빈카 (빈블라스틴(벨반(VELBAN)?), 빈크리스틴 (온코빈(ONCOVIN)?), 빈데신 (엘디신(ELDISINE)?, 필데신(FILDESIN)?), 및 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)?) 포함); 에토포사이드 (VP-16); 이포스파미드; 미토크산트론; 류코보빈; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포아이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예를 들면, 레티노산 (벡사로텐 (타르그레틴(TARGRETIN)?) 포함); 비스포스포네이트, 예를 들어, 클로드로네이트 (예를 들어, 보네포스(BONEFOS)? 또는 오스타크 (OSTAC)?), 에티드로네이트 (디드로칼(DIDROCAL)?), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타(ZOMETA)?), 알렌드로네이트 (포사막스(FOSAMAX)?), 팔미드로네이트 (아레디아(AREDIA)?), 틸루드로네이트 (스켈리드(SKELID)?), 또는 리세드로네이트 (악토넬(ACTONEL)?); 및 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적인 세포 증식과 연관되는 신호 전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R); 백신, 예를 들면, 테라토프(THERATOPE)? 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들어, 아로백틴(ALLOVECTIN)? 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)? 백신, 및 박시드(VAXID)? 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (예를 들어, 루르토테칸(LURTOTECAN)?); rmRH (예를 들어, 아바렐릭스(ABARELIX)?); BAY439006 (소라페닙; 바이엘(Bayer)); SU-11248 (화이자 (Pfizer)); 페리포신, COX-2 억제제 (예를 들면, 셀레콕시브 또는 에토리콕시브), 프로테오좀 억제제 (예를 들면, PS341); 보르테조밉 (벨케이드(VELCADE)?); CCI-779; 티피파르닙 (R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제, 예를 들면, 오블리메르센 나트륨 (게나센스(GENASENSE)?); 픽산트론; EGFR 억제제 (하기의 정의 참조); 티로신 키나제 억제제 (하기의 정의 참조); 및 상기 임의의 물질의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 및 상기 물질의 2개 이상의 조합물, 예를 들면, CHOP (사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 플레드니솔론의 조합 요법의 약어) 및 FOLFOX (5-FU 및 류코보빈과 조합한 옥살리플라틴 (엘록사틴(ELOXATIN)™)을 사용한 치료 요법의 약어)를 포함한다.
종양에 미치는 호르몬의 효과를 조절, 또는 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제, 예를 들어, 혼합된 효능제/길항제 프로필을 갖는 항-에스트로겐, 예를 들어, 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)?), 4-하이드록시타목시펜, 토레미펜 (파레스톤(FARESTON)?); 이독시펜, 드롤록시펜, 랄록시펜 (에비스타(EVISTA)?), 트리옥시펜, 케옥시펜, 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절 인자 (SERM), 예를 들면, SERM3; 효능제 특성이 없는 순수한 항-에스트로겐, 예를 들면, 풀베스트란트 (파스로덱스(FASLODEX)?), 및 EM800 (에스트로겐 수용체 (ER) 이량체화를 차단하고, DNA 결합을 억제하고, ER 전환을 증가시키고, 및/또는 ER 수준을 억제할 수 있는 물질); 아로마타제 억제제, 예를 들면, 스테로이드성 아로마타제 억제제, 예를 들어, 예를 들면, 포르메스탄 및 엑세메스탄 (아로마신(AROMASIN)?), 및 비스테로이드성 아로마타제 억제제, 예를 들면, 아나스트라졸 (아리미덱스(ARIMIDEX)?), 레트로졸 (페마라(FEMARA)?) 및 아미노글루테티미드, 및 다른 아로마타제 억제제, 예를 들면, 보로졸 (리비소르(RIVISOR)?), 메게스트롤 아세테이트 (메가세(MEGASE)?), 파드로졸, 이미다졸; 황체 형성 호르몬-방출 호르몬 효능제, 예를 들면, 류프롤리드 (루프론(LUPRON)? 및 엘리가르드(ELIGARD)?), 고세렐린, 부세렐린 및 트립테렐린; 성 스테로이드, 예를 들면, 프로게스틴, 예를 들면, 메게스트롤 아세테이트 및 메드록시프로게스테론 아세테이트, 에스트로겐, 예를 들면, 디에틸스틸베스트롤 및 프레마린, 및 안드로겐/레티노이드, 예를 들어, 플루옥시메스테론, 모든 트랜스레티온산 및 펜레티니드; 오나프리스톤; 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향-조절인자 (ERD); 항-안드로겐, 예를 들면, 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 테스토락톤; 및 상기 임의의 물질의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 및 상기 2개 이상의 물질의 조합물 또한 상기 정의에 포함된다.
본원에서 사용되는 바, "EGFR-표적화 약물"이라는 용어는 EGFR에 결합하고, 임의로는 EGFR 활성화를 억제하는 치료제를 지칭한다. 그러한 제제이 예로는 EGFR에 결합하는 항체 및 소분자를 포함한다. EGFR에 결합하는 항체의 예로는 MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (미국 특허 번호 제4,943,533호 (멘델손(Mendelsohn) 등) 참조) 및 그의 변이체, 예를 들어, 키메라화된 225 (C225 또는 세툭시맙(Cetuximab); 에르부틱스(ERBUTIX)?) 및 재형성된 인간 225 (H225) (WO96/40210, (임클론 시스템 인크.(Imclone Systems Inc.) 참조); IMC-11F8, EGFR-표적화된, 전체 인간 항체 (임클론); II형 돌연변이체 EGFR에 결합하는 항체 (미국 특허 번호 제5,212,290)호; EGFR에 결합하는 인간화된 및 키메라 항체 (미국 특허 번호 제5,891,996호 기재); 및 EGFR에 결합하는 인간 항체, 예를 들어, ABX-EGF 또는 파니투무맙 (WO98/50433 (앱제닉스(Abgenix)/암젠(Amgen)) 참조); EMD 55900 (문헌 [Stragliotto et al. Eur . J. Cancer 32A:636-640 (1996)]); EGFR 결합에 대하여 EGF 및 TGF-알파, 둘 모두와 경쟁하는, EGFR에 대한, 인간화된 EGFR 항체인 EMD7200 (마투주맙(matuzumab)) (EMD/머크(Merck)); 인간 EGFR 항체, HuMax-EGFR (GenMab); E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 및 E7.6.3으로서 알려져 있는 전체 인간 항체 (US 6,235,883에 기재); MDX-447 (메다렉스 인크.(Medarex Inc)); 및 mAb 806 또는 인간화된 mAb 806 (문헌 [Johns et al., J. Biol . Chem. 279(29):30375-30384 (2004)]). 항-EGFR 항체는 세포독성제와 접합함으로써 면역접합체를 형성할 수 있다 (예를 들어, EP659,439A2 (머카 패턴튼 게엠베하(Merck Patent GmbH)) 참조). EGFR 길항제로는 소분자, 예를 들어, 미국 특허 번호 제5,616,582호, 제5,457,105호, 제5,475,001호, 제5,654,307호, 제5,679,683호, 제6,084,095호, 제6,265,410호, 제6,455,534호, 제6,521,620호, 제6,596,726호, 제6,713,484호, 제5,770,599호, 제6,140,332호, 제5,866,572호, 제6,399,602호, 제6,344,459호, 제6,602,863호, 제6,391,874호, 제6,344,455호, 제5,760,041호, 제6,002,008호, 및 제5,747,498호 뿐만 아니라, 하기 PCT 공보: WO98/14451, WO98/50038, WO99/09016, 및 WO99/24037에 기재되어 있는 화합물을 포함한다. 특정의 소분자 EGFR 길항제로는 OSI-774 (CP-358774, 엘로티닙, 타세바(TARCEVA)? (제넨테크(Genentech)/OSI 파마슈티칼스(OSI Pharmaceuticals)); PD 183805 (CI 1033, 2-프로펜아미드, N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리닐)프로폭시]-6-퀴나졸리닐]-, 디하이드로클로라이드, 화이자 인크(Pfizer Inc.)); ZD 1839, 게피티닙 (이레사(IRESSA)?) 4-(3'-클로로-4'-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린, (아스트라제네카(AstraZeneca))); ZM 105180 ((6-아미노-4-(3-메틸페닐-아미노)-퀴나졸린, 제네카(Zeneca)); BIBX-1382 (N8-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-N2-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 베링거 인겔하임(Boehringer Ingelheim)); PKI-166 ((R)-4-[4-[(1-페닐에틸)아미노]-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀); (R)-6-(4-하이드록시페닐)-4-[(1-페닐에틸)아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘); CL-387785 (N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-6-퀴나졸리닐]-2-부틴아미드); EKB-569 (N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-3-시아노-7-에톡시-6-퀴놀리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드) (와이어쓰(Wyeth)); AG1478 (수겐(Sugen)); AG1571 (SU 5271; 수겐); 이중 EGFR/HER2 티로신 키나제 억제제, 예를 들어, 라파티닙 (GW 572016 또는 N-[3-클로로-4-[(3-플루오로페닐)메톡시]페닐] 6[5[[[2메틸설포닐)에틸]아미노]메틸]-2-푸라닐]-4-퀴나졸린아민; 글락소 스미스클라인(Glaxo SmithKline)) 또는 시아노구아니딘 퀴나졸린 및 시아노아미딘 퀴나졸라민 유도체를 포함한다.
"티로신 키나제 억제제"는 티로신 키나제, 예를 들어, HER 수용체의 티로신 키나제 활성을 억제시키는 분자이다. 그러한 억제제의 예로는 상기 문단에서 언급된 EGFR-표적화 약물; 소분자 HER2 티로신 키나제 억제제, 예를 들어, TAK165 (다께다(Takeda)로부터 이용가능); 경구용의, ErbB2 수용체 티로신 키나제의 선택적 억제제인 CP-724,714 (화이자 및 OSI); 이중 HER 억제제, 예를 들어, 우선적으로 EGFR에 결합하지만, HER2 및 EGFR을 과다발현하는 세포, 둘 모두를 억제시키는 EKB-569 (와이어쓰로부터 이용가능); 경구용의, HER2 및 EGFR 티로신 키나제 억제제인 라파티닙 (GW572016; (글락소 스미스클라인으로부터 이용가능); PKI-166 (노파르티스(Novartis)로부터 이용가능); 범용-HER 억제제, 예를 들어, 카네르티닙 (CI-1033; 파마시아(Pharmacia)); Raf-1 억제제, 예를 들어, Raf-1 신호전달을 억제시키는 안티센스제 ISIS-5132 (ISIS 파마슈티칼스(ISIS Pharmaceuticals)로부터 이용가능); 비-HER 표적화 TK 억제제, 예를 들어, 이마티닙 메실레이트 (GLEEVACc) (글락소로부터 이용가능); MAPK 세포외 조절된 키나제 I 억제제 CI-1040 (파마시아로부터 이용가능); 퀴나졸린, 예를 들면, PD 153035, 4-(3-클로로아닐리노) 퀴나졸린; 피리도피리미딘; 피리미도피리미딘; 피롤로피리미딘, 예를 들면, CGP 59326, CGP 60261 및 CGP 62706; 피라졸로피리미딘, 4-(페닐아미노)-7H-피롤로[2,3-d] 피리미딘; 쿠르쿠민 (디페룰로일 메탄, 4,5-비스 (4-플루오로아닐리노)프탈이미드); 니트로티오펜 부위를 포함하는 티르포스틴; PD-0183805 (워너-램버트(Warner Lambert)); 안티센스 분자 (예를 들면, HER-코딩 핵산에 결합하는 것); 퀴녹살린 (미국 특허 번호 제5,804,396호); 트리포스틴 (미국 특허 번호 제5,804,396호); ZD6474 (아스트라 제네카); PTK-787 (노파르티스/쉐링 아게 (Schering AG)); 범용-HER 억제제, 예를 들어, CI-1033 (화이자); 아피니탁 (ISIS 3521; Isis/릴리(Lilly)); 이마티닙 메실레이트 (글리벡(Gleevac); 노파르티스); PKI 166 (노파르티스); GW2016 (글락소 스미스클라인); CI-1033 (화이자); EKB-569 (와이어쓰); 세막시닙 (수겐); ZD6474 (아스트라제네카); PTK-787 (노파르티스/쉐링 아게); INC-1C11 (임클론); 시아노구아니딘 퀴나졸린 및 시아노아미딘 퀴나졸라민 유도체; 또는 하기 특허 공개문헌: 미국 특허 번호 제5,804,396호; WO99/09016 (아메리칸 시아나미드(American Cyanamid)); WO98/43960 (아메리칸 시아나미드); WO97/38983 (워너-램버트); WO99/06378 (워너-램버트); WO99/06396 (워너-램버트); WO96/30347 (화이자, 인크); WO96/33978 (제네카); WO96/3397 (제네카); WO96/33980 (제네카); 및 US2005/0101617 중 어느 것에 기재되어 있는 것을 포함한다.
"항-혈관형성제"는 혈관 발생을 어느 정도로 차단 또는 방해하는 화합물을 지칭한다. 항-혈관신생 인자는 예를 들면, 혈관신생 촉진에 관여하는 성장 인자 또는 성장 인자 수용체에 결합하는 소분자 또는 항체일 수 있다. 본원에서 바람직한 항-혈관형성 인자는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 결합하는 항체, 예를 들면, 베바시주맙 (아바스틴 (AVASTIN)?)이다.
"사이토카인"이라는 용어는 세포간 매개자로서 또다른 세포에 대해 작용하는 한 세포 군집에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반 명칭이다. 상기 사이토카인의 예로는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이 있다. 사이토카인에는 성장 호르몬, 예를 들면, 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 프로릴랙신; 당단백질 호르몬, 예를 들면, 난포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH) 및 황체 형성 호르몬 (LH); 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-α 및 -β; 뮬러관 억제 물질; 마우스 고나도트로핀-회합 펩티드; 인히빈; 악티빈; 혈관내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자, 예를 들면, NGF-β; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF), 예를 들면, TGF-α 및 TGF-β; 인슐린- 유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론, 예를 들면, 인터페론-α, -β 및 -γ; 콜로니 자극 인자 (CSF), 예를 들면, 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터루킨 (IL), 예를 들면, IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자, 예를 들면, TNF-α 또는 TNF-β; 및 LIF 및 키트 리간드 (KL)를 포함하는 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에서 사용되는 바, 사이토카인이라는 용어는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적으로 활성인 등가물을 포함한다.
II . HER2 항체 변이체 조성물
본 발명은 적어도 부분적으로는 특정 HER2 항체 조성물에 관한 것이다. 바람직하게, HER2 항체 (주요 종 HER2 항체 및 그의 항체 변이체 중 어느 것 또는 그 둘 모두)는 HER2의 도메인 II에 결합하고, 트라스투주맙보다 더 효과적으로 HER 이량체화를 억제시키고, 및/또는 HER2의 이종이량체 결합 부위에 결합하는 것이다. 본원에서 주요 종 항체에 관한 바람직한 실시태양은 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 및 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것, 및 가장 바람직하게는, 서열 번호: 15 및 16의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것 (페르투주맙)이다.
본원의 조성물은 HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하고, 여기서 산성 변이체는 1, 2, 또는 3개의 당화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함하는 것인 조성물을 포함한다. 조성물 중 산성 변이체는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함할 수 있다. 바람직하게, 조성물 중 산성 변이체 모두의 총량은 약 25％ 미만이다. 하나의 실시태양에서, 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체가 조성물 중 산성 변이체의 적어도 약 75-80％를 구성한다.
본 발명은 추가로 각각 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열을 포함하는 주요 종 HER2 항체, 및 주요 종 항체의 산성 변이체를 포함하고, 여기서 산성 변이체는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함하는 것인, 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 (1) HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체, 및 당화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 또는 비-환원형 변이체를 비롯한, 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물을 제조하는 단계; 및 (2) 조성물 중 산성 변이체를 평가하고, 그의 양이 약 25％ 미만인지를 확인하는 단계를 포함하는, 제약 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 방법은 단계 (2) 이전, 그 동안, 또는 그 이후에 상기 조성물을 제약상 허용되는 담체와 함께 조합하는 것에 주시한다. 하나의 실시태양에서, 단계 (2)에서 평가하는 조성물은 제약상 허용되는 담체 중에 존재하는 것이다.
하나의 실시태양에서, (조성물의 약 25％ 미만을 구성하는) 산성 변이체의 적어도 약 75 내지 80％는 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체로부터 선택된다.
산성 변이체는 다양한 방법에 의해 평가될 수 있지만, 바람직하게 그러한 방법은, (예를 들어, 시알릴화된 변이체를 평가하기 위한) 조성물을 이온 교환 크로마토그래피 (IEC) 이전, 이후, 및/또는 그를 수행하는 동안에 시알리다제로 처리하는 것인 이온 교환 크로마토그래피 (IEC), (예를 들어, 디설피드 환원된 변이체를 평가하기 위한) 환원형 CE-SDS, (예를 들어, 비-환원형 변이체를 평가하기 위한) 비-환원형 CE-SDS, (예를 들어, 당화된 변이체를 평가하기 위한) 보로네이트 크로마토그래피, 및 (예를 들어, 탈아미드화된 변이체를 평가하기 위한) 펩티드 지도화 중 1, 2, 3, 4, 또는 5개를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 전체 산성 변이체는 (예를 들면, 디오넥스 프로팩™ WCX-10 크로마토그래피 칼럼을 사용하여) 예를 들면, 약한 양이온 교환기 및/또는 카르복실레이트 관능기를 갖는 양이온 교환기를 사용하는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가한다. 상기 크로마토그래피에 대한 하나의 실시태양에서, 크로마토그래피 조건은 20 mM BisTris의 완충액 A (pH 6.0); 20 mM BisTris의 완충액 B, 200 mM NaCl (pH 6.0); 및 1.0 mL/분의 0.5％ 완충액 B 구배를 포함한다.
조성물은 임의로 아미노-말단 리더 연장 변이체를 포함한다. 바람직하게, 아미노-말단 리더 연장부는 항체 변이체의 경쇄 상에 (예를 들어, 항체 변이체의 1 또는 2개의 경쇄 상에) 존재한다. 주요 종 HER2 항체 또는 항체 변이체는 무손상 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 단편의 Fab)일 수 있지만, 두가지 모두가 무손상 항체인 것이 바람직하다. 본원에서 항체 변이체는 그의 임의의 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄 상에 아미노-말단 리더 연장부를 포함한다. 바람직하게, 아미노-말단 리더 연장부는 항체의 1 또는 2개의 경쇄 상에 존재한다. 아미노-말단 리더 연장부는 바람직하게 VHS-를 포함하거나 그로 구성된다. 조성물 중 아미노-말단 리더 연장부의 존재는 N-말단 서열 분석, 전하 불균일성 분석 (예를 들어, 양이온 교환 크로마토그래피 또는 모세관 대역 전기영동), 질량 분광분석법 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는 각종 분석 기법에 의해 검출될 수 있다. 조성물 내의 항체 변이체의 양의 범위는 일반적으로 변이체를 검출하는 데 사용된 임의의 분석 (바람직하게는 양이온 교환 분석)의 검출 한계를 구성하는 양 내지 주요 종 항체의 양보다 적은 양이다. 일반적으로, 조성물 내의 약 20％ 이하 (예를 들어, 약 1％ 내지 약 15％, 예를 들어, 5％ 내지 약 15％, 및 바람직하게 약 8％ 내지 약 12％)의 항체 분자가 아미노-말단 리더 연장부를 포함한다. 상기 비율의 양은 바람직하게는 양이온 교환 분석을 사용하여 측정한다.
항체의 하나의 중쇄 또는 두개의 중쇄 모두 상에 C-말단 리신 잔기를 포함하는 항체 (그러한 항체 변이체는 약 1％ 내지 약 20％의 양으로 존재할 수 있다), 하나 이상의 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 항체 (예를 들면, 산화된 met-254를 포함하는 페르투주맙) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 주요 종 항체 및/또는 변이체의 추가의 아미노산 서열 변경이 주시된다.
또한, 상기 논의된 시알릴화된 변이체 이외에도, 주요 종 항체 또는 변이체는 글리코실화 변이를 포함할 수 있는데, 그의 비제한적인 예로는 G1 또는 G2 올리고당 구조가 그의 Fc 영역에 부착된 항체, 당질 부분이 그의 경쇄에 부착된 항체 (예를 들어, 1 또는 2개의 당질 부분, 예를 들어, 글루코스 또는 갈락토스가 항체의 1 또는 2개의 경쇄에, 예를 들면, 하나 이상의 리신 잔기에 부착된 항체), 1 또는 2개의 비-글리코실화된 중쇄를 포함하는 항체를 포함한다.
임의로, 항체는 1 또는 2개의 경쇄를 포함하고, 여기서 경쇄 중 어느 하나 또는 그 둘 모두는 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함한다 (이는 예를 들면, 본원에 개시된 변이체와 같은, 그의 변이체를 포함한다). 항체는 추가로 1 또는 2개의 중쇄를 포함하고, 여기서 중쇄 중 어느 하나 또는 그 둘 모두는 서열 번호: 16 또는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함한다 (이는 예를 들면, 본원에 개시된 변이체와 같은, 그의 변이체를 포함한다).
조성물은 유전공학적으로 처리된 세포주, 예를 들어 HER2 항체를 발현하는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포주로부터 회수할 수 있거나, 또는 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다.
III . HER2 항체 생산
본 발명에 따라 사용되는 항체의 생산을 위한 예시적인 기법을 이어서 설명한다. 항체 생산을 위해 사용되는 HER2 항원은 예를 들어, 원하는 에피토프를 포함하는, HER2의 세포외 도메인의 가용성 형태 또는 그의 일부일 수 있다. 별법으로, 그의 세포 표면에서 HER2를 발현하는 세포 (예를 들어, HER2를 과다발현하도록 형질전환된 NIH-3T3 세포; 또는 암종 세포주, 예를 들어, SK-BR-3 세포 (문헌 ([Stancovski et al. PNAS ( USA ) 88:8691-8695 (1991)] 참조)를 사용하여 항체를 생성시킬 수 있다. 항체 생성에 유용한 다른 형태의 HER2는 당업자에게는 자명할 것이다.
(i) 모노클로날 항체
모노클로날 항체는 실질적으로 균질한 항체의 군집으로부터 수득하고, 즉, 군집을 구성하는 개별 항체들은 모노클로날 항체 생산시에 발생할 수 있는 가능한 변이체, 예를 들어, 본원에 기술되어 있는 변이체를 제외하고는 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합한다. 따라서, "모노클로날"이라는 수식어는 별개의 항체들의 혼합물이 아닌 항체의 특징을 가리킨다.
예를 들면, 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature 256:495 (1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허 번호 제4,816,567호)에 의해 제조할 수 있다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들어, 햄스터를 본원 상기에 기술된 바와 같이 면역화시켜, 면역화를 위해 사용된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유도한다. 별법으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 적합한 융합제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 림프구를 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]).
이와 같이 제조한 하이브리도마 세포를, 바람직하게는 융합되지 않은 모체 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 물질을 하나 이상 포함하는 적합한 배양 배지에 시딩하고 성장시킨다. 예를 들면, 모체 골수종 세포에 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍되어 있는 경우, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 일반적으로 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함할 것이고, 이들 물질은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 억제시킬 것이다.
바람직한 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체 생성 세포에 의한 항체의 안정적인 고수준 생성을 지지하고, 배지, 예를 들어, HAT 배지에 민감한 세포이다. 이 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예를 들면, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재의 솔크 인스티튜트 셀 디스트 리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 이용가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양, 및 미국 메릴랜드주 로크빌 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection))으로부터 이용가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포로부터 유래된 것이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주 또한 인간 모노클로날 항체 생성을 위해 설명된 바 있다 (문헌 ([Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)]; 및 [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)])).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 항원에 대한 모노클로날 항체의 생성에 대해 분석된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전법에 의해, 또는 시험관내 결합 분석법, 예를 들면, 방사성 면역 분석법 (RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA)에 의해 측정한다.
모노클로날 항체의 결합 친화도는 예를 들면, 문헌 [Munson et al., Anal . Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐챠드(Scatchard) 분석에 의해 측정할 수 있다.
원하는 특이성, 친화성 및/또는 활성을 갖는 항체를 생성하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 클론을 제한 희석 방법에 의해 서브클로닝하고, 표준 방법 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies : Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)])에 의해 성장시킬 수 있다. 상기 목적에 적합한 배지는 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장시킬 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 종래의 항체 정제 방법, 예를 들면, 단백질 A-세파로스, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 쉽게 단리되고, 통상적인 방법을 사용하여 (예를 들면, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 서열 분석된다. 하이브리도마 세포는 상기 DNA의 바람직한 공급원으로서 작용한다. 일단 단리된 DNA는 발현 벡터에 삽입된 후, 이어서 이 벡터는, 다른 경우에는 항체 단백질을 생성하지 않는 숙주 세포, 예를 들어 E. 콜라이(E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포로 형질감염됨으로써 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체가 합성되게 된다. 항체를 코딩하는 DNA의 세균에서의 재조합 발현에 관한 리뷰 논문으로는 문헌 ([Skerra et al., Curr . Opinion in Immunol ., 5: 256-262 (1993)] 및 [Plueckthun, Immunol . Revs ., 130: 151-188 (1992)])을 포함한다.
추가의 실시태양에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 문헌 [McCafferty et al., Nature, 348: 552-554 (1990)]에 기재된 기법을 이용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 문헌 ([Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol . Biol., 222: 581-597 (1991)])에는 각각 파지 라이브러리를 사용한 뮤린 및 인간 항체의 단리에 대해서 기재되어 있다. 후속 공개문헌에는 쇄 셔플링에 의한 고친화성 (nM 범위) 인간 항체의 생성 (문헌 [Marks et al., Bio / Technology , 10: 779-783 (1992)]), 및 매우 큰 파지 라이브러리의 작제를 위한 전략법으로서 조합 감염 및 생체내 재조합 (문헌 [Waterhouse et al., Nuc . Acids . Res ., 21: 2265-2266 (1993)])이 기재되어 있다. 따라서, 이러한 기법은 모노클로날 항체를 단리시키기 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기법의 실행가능한 대안이다.
또한, DNA는 예를 들면, 상동성 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 (미국 특허 번호 제4,816,567호; [Morrison, et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81: 6851 (1984)]), 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코팅 서열 모두 또는 그 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유결합시킴으로써 변형시킬 수 있다.
전형적으로, 상기 비-면역글로불린 폴리펩티드가 항체의 불변 도메인을 대신하여 치환되거나, 항체의 한 항원-결합 부위의 가변 도메인을 대신하여 치환됨으로써 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체가 생성된다.
( ii ) 인간화된 항체
비-인간 항체를 인간화하기 위한 방법은 당업계에 기술되어 있다. 바람직하게는, 인간화된 항체는 비-인간 공급원으로부터 그에 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 일반적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취한 "유입" 잔기로서 종종 언급된다. 인간화는 본질적으로 윈터 (Winter)와 동료등의 방법 (문헌 ([Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature , 332:323-327 (1988)]; [Verhoeyen et al., Science , 239: 1534-1536 (1988)]))에 따라 인간 항체의 상응하는 서열을 초가변 영역 서열로 치환시킴으로써 수행될 수 있다. 따라서, 상기 "인간화된" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 작은 도메인이 비-인간 종으로부터의 것에 상응하는 로 치환된 키메라 항체 (미국 특허 번호 제4,816,567호)이다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로 몇몇 초가변 영역 잔기 및 가능하게는 몇몇 FR 잔기가 설치류 항체의 유사 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다.
인간화된 항체 제조에 사용되는 경쇄 및 중쇄 모두의 인간 가변 도메인을 선택하는 것은 항원성을 감소시키는 데 매우 중요하다. 소위 "최적 맞춤" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열은 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝된다. 이어서, 설치류에 가장 근접한 인간 서열이 인간화된 항체에 대한 인간 프레임워크 영역 (FR)으로서 허용된다 (문헌 ([Sims et al., J. Immunol ., 151 :2296 (1993)]; [Chothia et al., J. Mol . Biol ., 196:901 (1987)])). 또다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래한 특정 프레임워크 영역을 이용한다. 동일한 프레임워크가 수개의 상이한 인간화된 항체에 대해 사용될 수 있다 (문헌 ([Carter et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA , 89:4285 (1992)]; [Presta et al., J. Immunol, 151:2623 (1993)])).
항체는 항원에 대한 높은 친화도 및 기타 다른 바람직한 생물학적 특성을 보유하면서 인간화되는 것이 더욱 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위한 바람직한 방법에 따르면, 인간화된 항체는 모체 서열 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 이용한 모체 서열 및 각종 개념상의 인간화된 생성물의 분석 과정에 의해 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델은 보편적으로 입수가능하고, 당업자에게 잘 알려져 있다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체형태 구조를 도시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 상기 디스플레이를 조사함으로써 후보 면역글로불린 서열이 기능을 발휘하는 데 있어서 잔기의 가능한 역할을 분석할 수 있고, 즉, 후보 면역글로불린이 그의 항원에 결합할 수 있는 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수여자 서열 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어 원하는 항체 특징, 예를 들면, 표적 항원(들)에 대한 친화성 증가를 달성할 수 있다. 일반적으로는, 초가변 영역 잔기가 항원 결합에 대해 영향을 미치는 것에 있어서 직접적이면서도 가장 실질적으로 관여한다.
미국 특허 번호 제6,949,245호에는 HER2에 결합하여 HER 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 예시적인 인간화된 HER2 항체의 생산에 관해 기재되어 있다. 본원에서 특히 관심의 대상이 되는 인간화된 항체는 본질적으로 무손상 뮤린 모노클로날 항체 2C4 (또는 그의 Fab 단편) 만큼 효과적으로 MAPK의 EGF, TGF-α 및/또는 HRG 매개 활성화를 차단하고/하거나, 무손상 뮤린 모노클로날 항체 2C4 (또는 그의 Fab 단편) 만큼 효과적으로 HER2에 결합한다. 본원에서 인간화된 항체는 예를 들면, 인간 중쇄 가변 도메인에 도입된 비인간 초가변 영역 잔기를 포함할 수 있고, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에 제시된 가변 도메인 번호화 체계를 사용하여 69H, 71H 및 73H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 프레임워크 영역 (FR) 치환을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 인간화된 항체는 위치 69H, 71H 및 73H 중 두개의 위치 또는 모든 위치에 FR 치환을 포함한다.
본원에서 관심의 대상이 되는 예시적인 인간화된 항체는 예를 들면, 변형이 본질적으로 항체의 친화성을 유지 또는 개선시키는 것인 CDR 잔기의 아미노산 변형을 임의로 포함하는, 중쇄 가변 상보성 결정 잔기 GFTFTDYTMX (여기서, X는 바람직하게 D 또는 S이다) (서열 번호: 7); DVNPNSGGSIYNQRFKG (서열 번호: 8); 및/또는 NLGPSFYFDY (서열 번호: 9)를 포함한다. 예를 들면, 관심의 대상이 되는 항체 변이체는 상기 중쇄 가변 CDR 서열에 약 1 내지 약 7개 또는 약 5개의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체는 예를 들어, 하기 기술하는 바와 같이 친화도 성숙에 의해 제조될 수 있다. 가장 바람직한 인간화된 항체는 서열 4의 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
인간화된 항체는 예를 들어, 중쇄 가변 도메인 CDR 잔기 이외에도, 경쇄 가변 상보성 결정 잔기 KASQDVSIGVA (서열 번호: 10); SASYX1X2X3 (여기서, X1은 바람직하게는 R 또는 L이고, X2는 바람직하게는 Y 또는 E이고, X3은 바람직하게는 T 또는 S이다) (서열 번호: 11); 및/또는 QQYYIYPYT (서열 번호: 12)를 포함할 수 있다. 그러한 인간화된 항체는 예를 들면, 변형이 본질적으로 항체의 친화성을 유지 또는 개선시키는 것인 상기 CDR 잔기의 아미노산 변형을 임의로 포함한다. 예를 들면, 관심의 대상이 되는 항체 변이체는 상기 경쇄 가변 CDR 서열에 약 1 내지 약 7개 또는 약 5개의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체는 예를 들어, 하기 기술하는 바와 같이 친화도 성숙에 의해 제조될 수 있다. 가장 바람직한 인간화된 항체는 서열 3의 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 본 출원은 HER2에 결합하고 HER 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 친화도 성숙 항체에 주시한다. 모체 항체는 인간 항체 또는 인간화된 항체, 예를 들면, 각각 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 서열 및/또는 중쇄 가변 서열을 포함하는 항체 (즉, 변이체 574)일 수 있다. 친화도 성숙 항체는 바람직하게는 무손상 뮤린 2C4 또는 무손상 변이체 574보다 훨씬 우수한 친화도 (예를 들면, HER2-세포외 도메인 (ECD) ELISA로 평가시에, 예를 들면, 약 2배 또는 약 4배 내지 약 100배 또는 약 1000배 개선된 친화도)로 HER2 수용체에 결합한다. 치환을 위한 예시적인 중쇄 가변 CDR 잔기로는 H28, H30, H34, H35, H64, H96, H99, 또는 2개 이상의 잔기 (예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 상기 잔기)의 조합을 포함한다. 변경을 위한 경쇄 가변 CDR 잔기의 예로는 L28, L50, L53, L56, L91, L92, L93, L94, L96, L97 또는 2개 이상의 잔기 (예를 들면, 2 내지 3, 4, 5개 또는 약 10개 이하의 상기 잔기)의 조합을 포함한다.
인간화된 항체 또는 친화도 성숙 항체의 다양한 형태도 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체 또는 친화도 성숙 항체는 면역접합체를 생성시키기 위해서 하나 이상의 세포독성제(들)와 임의로 접합된 항체 단편, 예를 들면, Fab일 수 있다. 별법으로, 인간화된 항체 또는 친화도 성숙 항체는 무손상 항체, 예를 들면, 무손상 IgG1 항체일 수 있다.
( iii ) 인간 항체
인간화에 대한 대안으로서, 인간 항체를 생성할 수 있다. 현재는 예를 들면, 면역화시킬 때 내인성 면역글로불린 생성의 부재하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성시킬 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)을 생성시킬 수 있다. 예를 들면, 키메라 및 생식 세포 돌연변이체 마우스의 항체 중쇄 연결 영역 (JH) 유전자의 동종접합성 결실로 인해 내인성 항체 생산이 완전히 억제된다고 기술된 바 있다. 상기 생식 세포 돌연변이체 마우스에서 인간 생식 세포 면역글로불린 유전자 어레이의 전이를 통해 항원 시험 접종시 인간 항체가 생성될 것이다. 예를 들면, 문헌 ([Jakobovits et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 90:2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993)]; [Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; 및 미국 특허 번호 제5,591,669호, 제5,589,369호, 및 제5,545,807호)를 참조한다.
별법으로, 파지 디스플레이 기술 (문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)])을 사용하여 면역화되지 않은 공여자로부터 얻은 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내에서 생성할 수 있다. 이러한 기법에 따라, 항체 V 도메인 유전자는 섬유상 박테리오파지, 예를 들면, M13 또는 fd의 메이저(major) 또는 마이너(minor) 코트 단백질 유전자 내로 프레임 내에서 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상에 기능적 항체 단편으로서 디스플레이된다. 섬유상 입자는 파지 게놈의 싱글 스트랜드 DNA 카피를 포함하기 때문에, 항체의 기능적 특성에 기초한 선택을 통해서도 상기 특성을 보이는 항체를 코딩하는 유전자를 선택할 수 있다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성 중 일부를 모방한다. 파지 디스플레이는 다양한 포맷으로 수행될 수 있다; 그의 리뷰를 위해서는, 예를 들면, 문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)]을 참조한다. V-유전자 세그먼트에 대한 수개의 공급원이 파지 디스플레이를 위해 사용될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)]에서는 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 무작위 조합형 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 단리시켰다. 비면역화된 인간 공여자로부터의 V 유전자 레퍼토리를 작제할 수 있고, 다양한 항원 어레이 (자가-항원 포함)에 대한 항체는 본질적으로 문헌 ([Marks et al., J. Mol . Biol. 222:581-597 (1991)], 또는 [Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)])에 기재된 기술에 따라 단리될 수 있다. 또한 미국 특허 번호 제5,565,332호 및 제5,573,905호를 참조한다.
인간 항체는 또한 시험관내에서 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (미국 특허 5,567,610 및 5,229,275 참조).
인간 HER2 항체는 미국 특허 번호 제5,772,997호 (1998년 6월 30일 등록) 및 WO97/00271 (1997년 1월 3일 공개)에 기재되어 있다.
( iv ) 항체 단편
항체 단편의 생산하는 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이러한 단편은 무손상 항체의 단백분해성 소화를 통해 유래되었다 (예를 들어, 문헌 ([Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)]; 및 [Brennan et al., Science, 229:81 (1985)]) 참조). 그러나, 이들 단편은 현재 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. 예를 들면, 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 별법으로, Fab'-SH 단편은 E. 콜라이로부터 직접 회수되고, 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Bio / Technology 10:163-167 (1992)]). 또다른 접근법에 따라, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기법은 숙련된 실무자에게 자명할 것이다. 다른 실시태양에서, 선택되는 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO93/16185; 미국 특허 번호 제5,571,894호; 및 미국 특허 번호 제5,587,458호를 참조한다. 항체 단편은 또한 예를 들면, 미국 특허 5,641,870에 기재된 바와 같은, "선형 항체"일 수 있다. 상기 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.
(v) 이중특이적 항체
이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이적 항체는 HER2 단백질의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 상기 항체는 HER2 결합 부위를 EGFR, HER3 및/또는 HER4에 대한 결합 부위(들)와 조합할 수 있다. 별법으로, HER2 아암(arm)은 세포 방어 기전이 HER2 발현 세포에 집중될 수 있도록 백혈구 상의 촉발 분자, 예를 들면, T-세포 수용체 분자 (예를 들어, CD2 또는 CD3), 또는 IgG 에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예를 들면, FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 HER2 발현 세포에 위치시키는 데 사용될 수 있다. 이들 항체는 HER2 결합 아암, 및 세포독성제 (예를 들면, 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)에 결합하는 아암을 갖는다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예, F(ab')2 이중특이적 항체)로서 제조될 수 있다.
WO96/16673에는 이중특이적 HER2/FcγRIII 항체가 기재되어 있고, 미국 특허 번호 제5,837,234호에는 이중특이적 HER2/FcγRI 항체 IDM1 (Osidem)이 개시되어 있다. 이중특이적 HER2/Fcα 항체는 WO98/02463에 제시되어 있다. 미국 특허 번호 제5,821,337호에는 이중특이적 HER2/CD3 항체가 교시되어 있다. MDX-210은 이중특이적 HER2-FcγRIII Ab이다.
이중특이적 항체를 제조하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적인 제조는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공발현에 기초하는데, 여기서, 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (문헌 [Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)]). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위적인 조합으로 인해 이들 하이브리도마 (쿼드로마(quadroma))는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 인 혼합물을 생산하게 되는데, 이중 단 하나만이 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 보통 친화도 크로마토그래피 단계에 의해 수행되는 정확한 분자의 정제는 다소 성가신 작업이 될 수 있고, 생성물의 수율은 낮다. 유사한 방법이 WO93/08829 및 문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
상이한 접근법에 따라, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인 (항체-항원 결합 부위)을 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합시킨다. 힌지의 적어도 일부, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과 융합시키는 것이 바람직하다. 융합체의 적어도 하나에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제 1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및, 필요한 경우 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 별개의 발현 벡터 내에 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 공형질감염시킨다. 이는 작제하는 데 사용된 3개의 폴리펩티드 쇄가 불균등한 비율일 때 최적의 수율을 제공하는 실시태양에서 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 큰 탄력성을 제공한다. 그러나, 적어도 2개의 폴리펩티드 쇄가 균등한 비율로 발현될 때 고수율을 나타내거나, 또는 상기 비가 특히 중요하지 않을 경우, 하나의 발현 벡터 내에 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 쇄의 코딩 서열을 삽입할 수 있다.
상기 접근법의 바람직한 실시태양에서, 이중특이적 항체는 한쪽 아암에 제 1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 나머지 다른 쪽 아암에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2 결합 특이성을 제공하는)으로 구성된다. 오직 이중특이적 분자의 반쪽에만 면역글로불린 경쇄가 존재하면 분리 방법이 용이하기 때문에, 이러한 비대칭 구조가 원치않는 면역글로불린 쇄 조합물로부터 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 접근법은 WO94/04690에 개시되어 있다. 이중특이적 항체를 생성하는 추가의 상세한 내용에 대해서는 예를 들면, 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology , 121:210 (1986)]을 참조한다.
미국 특허 번호 제5,731,168호에 기재된 또다른 방법에 따라, 한쌍의 항체 분자들 사이의 계면을 공학처리하여 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 비율을 최대화시킬 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 상기 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄가 보다 더 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 교체된다. 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 교체함으로써 크기가 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 보상적 "캐비티(cavity)"가 제2 항체 분자의 계면 상에 형성되게 된다. 이는 기타 다른 원치 않는 최종 생성물, 예를 들면, 동종이량체에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키기 위한 기전을 제공한다.
이중특이적 항체는 가교 결합된 항체 또는 "이종접합체" 항체를 포함한다. 예를 들어, 이종접합체 내의 항체 중 하나는 아비딘에 커플링되고, 다른 하나는 비오틴에 커플링될 수 있다. 그러한 항체는 예를 들면, 면역계 세포를 원치 않는 세포에 표적화시키기 위해 (미국 특허 번호 제4,676,980호), 및 HIV 감염의 치료를 위해 (WO91/00360, WO92/200373 및 EP 03089) 제안되었다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 결합 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 적합한 가교 결합제는 당업계에 잘 알려져 있고, 많은 가교 결합 기법과 함께 미국 특허 번호 제4,676,980호에 개시되어 있다.
항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기법은 또한 문헌에 기재되어 있다. 예를 들면, 이중특이적 항체는 화학적 결합을 이용하여 제조될 수 있다. 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)]에는 무손상 항체가 단백분해적으로 절단하어 F(ab')2 단편을 생성하는 방법이 기재되어 있다. 이들 단편은 인접 디티올을 안정화시키고 분자간 디설피드 형성을 막기 위해 디티올 복합체 형성제인 아비소산나트륨의 존재하에 환원된다. 이어서 생성된 Fab' 단편은 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환된다. 이어서 Fab'-TNB 유도체 중 하나는 머캅토에틸아민으로 환원시켜 Fab'-티올로 재전환시키고, 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 물질로서 사용될 수 있다.
최근의 진보는 이중특이적 항체를 형성하도록 화학적으로 커플링될 수 있는 Fab'-SH 단편을 E. 콜라이로부터 직접적으로 회수하는 것을 용이하게 하였다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp . Med ., 175:217-225 (1992)]에는 완전 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산이 기재되어 있다. 각각의 Fab' 단편은 E. 콜라이로부터 개별적으로 분비되었고, 이중특이적 항체를 형성하도록 시험관내에서 화학 커플링되었다. 이렇게 형성된 이중특이적 항체는 HER2 수용체를 과다발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 뿐만 아니라, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 일으킬 수 있었다.
이중특이적 항체 단편을 재조합 세포 배양물로부터 직접 제조하고 단리시키기 위한 다양한 기법 또한 설명되었다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다 (문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드가 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성한 다음, 재산화되어 항체 이종이량체를 형성하였다. 본 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산에 이용될 수 있다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편 제조를 위한 대안적인 기전을 제공하였다. 이 단편은 동일한 쇄 상에 있는 2개의 도메인 사이의 쌍이 형성될 수 있도록 하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인은 또다른 단편의 상보적인 VL 및 VH 도메인과 쌍을 형성하고, 이에 의해 2개의 항원-결합 부위가 형성된다. 단일 쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하는 또다른 전략법 또한 보고된 바 있다. 문헌 [Gruber et al., J. Immunol ., 152:5368 (1994)]을 참조한다.
2가를 초과하는 항체가 주시된다. 예를 들면, 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다 (문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147:60 (1991)]).
( vi ) 기타 다른 아미노산 서열 변형
본원에 기술된 HER2 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 주시된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. HER2 항체의 아미노산 서열 변이체는 적절한 뉴클레오티드 변경을 HER2 항체 핵산 내로 도입하거나, 펩티드 합성에 의해 제조된다. 상기 변형은 예를 들면, HER2 항체의 아미노산 서열 내에 있는 잔기로부터의 결실 및/또는 상기 잔기로의 삽입 및/또는 상기 잔기의 치환을 포함한다. 단, 최종 작제물이 원하는 특성을 갖기만 한다면, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합을 수행하여 최종 구성체를 생성할 수 있다. 아미노산 변경은 또한 HER2 항체의 번역 후 프로세스, 예를 들면, 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변경시킬 수 있다.
돌연변이 유발에 대해 바람직한 위치인 HER2 항체의 특정 잔기 또는 영역을 확인하는 데 있어서 유용한 방법은 문헌 [Cunningham and Wells Science , 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같이, "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발법"으로 명명된다. 여기서, 표적 잔기들의 하나의 잔기 또는 하나의 군이 확인되었고 (예를 들어, arg, asp, his, lys 및 glu과 같은 하전된 잔기), HER2 항원과 아미노산의 상호작용에 영향을 주는 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 교체된다. 이어서, 치환에 대한 기능적 감수성을 나타내는 이들 아미노산 위치는 치환 부위에 또는 치환 부위 대신에 추가의 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 미리 결정되지만, 돌연변이 자체의 성질은 미리 결정될 필요는 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 분석하기 위해 ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이 유발을 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고, 발현된 HER2 항체 변이체는 원하는 활성에 대해 스크리닝한다.
아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 하나의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지인 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합 및 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 HER2 항체 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 항체를 포함한다. HER2 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 HER2 항체의 N- 또는 C-말단의 효소 (예를 들면, ADEPT를 위한), 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 대한 융합을 포함한다.
또다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 HER2 항체 분자의 적어도 하나의 아미노산 잔기가 상이한 잔기로 치환되어 있다. 치환 돌연변이 유발을 위한 가장 크게 관심의 대상이 되는 부위는 초가변 영역 또는 CDR을 포함하지만, FR 또는 Fc 영역의 변경 또한 주시된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 표제 하에 표 1에 제시되어 있다. 상기 치환을 통해 생물학적 활성이 변경된다면, 이때는 하기 표 1에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나, 아미노산 부류와 관련하여 하기에서 추가로 기재되어 있는 보다 더 큰 변화를 도입하고, 생성물을 스크리닝할 수 있다.
Figure 112010055445435-pct00001
항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어, 시트 또는 나선 입체형태로서의 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, (b) 표적 부위의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 것에 대한 그의 효과가 크게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 아미노산은 그의 측쇄의 특성의 유사성에 따라 하기와 같이 분류할 수 있다 (문헌 [A. L. Lehninger, in Biochemistry , second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)]):
(1) 비극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
(2) 비하전된 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
(3) 산성: Asp (D), Glu (E)
(4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His (H)
별법으로, 천연적으로 발생된 잔기는 공통된 측쇄 특성을 기초로 하여 하기와 같은 군으로 나누어질 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 상기 부류 중 하나를 구성하는 멤버를 다른 부류와 교환하는 것을 수반할 것이다.
HER2 항체의 적절한 입체형태를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 또한 분자의 산화적 안정성을 개선시키고 비정상적인 가교 결합을 막기 위해 일반적으로는 세린으로 치환될 수 있다. 반대로, 그의 안정성을 개선시키기 위해 시스테인 결합(들)이 항체에 부가될 수 있다 (특히 항체가 항체 단편, 예를 들면, Fv 단편인 경우에 그러하다).
특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모체 항체 (예를 들면, 인간화된 항체 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가 개발을 위해 선택된 생성되는 변이체(들)는 이들이 생성되는 모체 항체에 비해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 그러한 치환 변이체를 생성하기 위한 간편한 방법은 파지 디스플레이를 사용하는 친화도 성숙이다. 간략하면, 수개의 초가변 영역 부위 (예를 들면, 6-7개의 부위)를 돌연변이화시켜 각 부위에서 모든 가능한 아미노 치환을 생성한다. 이렇게 생성된 항체 변이체는 각 입자 내에 패키지된 M13의 유전자 III 산물에 대한 융합체로서 섬유상 파지 입자로부터 1가 양식으로 디스플레이된다. 이어서 파지-디스플레이된 변이체를 본원에 개시된 바와 같이 그들의 생물학적 활성 (예를 들면, 결합 친화도)에 대해 스크리닝한다. 변형을 위한 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 항원 결합에 유의적으로 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인하도록 알라닌 스캐닝 돌연변이를 수행할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 항체와 인간 HER2 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 상기 접촉 잔기 및 이웃 잔기가 본원에서 설명된 기법에 따른 치환을 위한 후보가 된다. 일단 상기 변이체가 생성되면, 변이체의 패널을 본원에 기재된 바와 같이 스크리닝시키고, 하나 이상의 관련 분석에서 우수한 특성을 갖는 항체를 추가 개발을 위해 선택할 수 있다.
항체의 또다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 원래 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 이러한 변경은 항체에서 발견되는 하나 이상의 당질 부분의 결실 및/또는 항체 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 의미한다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결로 이루어진다. N-연결이란 아스파라긴 잔기의 측쇄에 당질 부분이 부착되는 것을 지칭한다. 트리펩티드 서열, 즉, 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다)은 아스파라긴 측쇄에 당질 부분을 효소에 의해 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내의 이들 트리펩티드 서열 중 하나가 존재하면 잠재적으로 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화란 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌에 당, 즉, N-아세일갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중 하나가 부착된 것을 지칭하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신 또한 사용될 수 있다.
항체에 글리코실화 부위를 부가하는 것은 하나 이상의 상기한 트리펩티드 서열을 갖도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 간편하게 달성된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 또한 본래의 항체의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 부가하거나 치환시킴으로써도 변경이 이루어질 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 올리고당 구조는 변경될 수 있다. 예를 들면, 항체의 Fc 영역에 부착된 푸코스가 결핍된 성숙 당질 구조를 갖는 항체는 미국 특허 출원 번호 2003/0157108 A1 (프레스타, L(Presta, L.))에 기재되어 있다. 또한, US 2004/0093621 A1 (교와 학꼬 고교 가부시키가이샤(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)) 을 참조한다. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고당 구조에 이등분 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc)을 갖는 항체는 WO03/011878 (장-메레(Jean-Mairet) 등)과 미국 특허 번호 제6,602,684호 (우마나(Umana) 등)에 언급되어 있다. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고당 구조 내에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체는 WO97/30087 (파텔(Patel) 등)에 보고되어 있다. 또한, 그의 Fc 영역에 부착된 당질이 변경되어 있는 항체에 관하여 WO98/58964 (라주, S.(Raju, S.))와 WO99/22764 (라주, S.)를 참조한다. Fc 영역의 1 또는 2개의 중쇄에 부착된 상기와 같은 당질 구조를 갖는 주요 종 항체를 포함하는 항체 조성물이 본원에서 주시된다.
HER2 항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 상기 방법은 천연 공급원으로부터의 단리 (천연적으로 발생된 아미노산 서열 변이체의 경우) 또는 HER2 항체의 초기 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위 지정) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 카세트 돌연변이 유발에 의한 제조를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
(vii) 원하는 특성을 갖는 항체에 대한 스크리닝
항체를 생산하는 기법은 상기에 기술하였다. 원하는 경우, 특정의 생물학적 특성을 갖는 항체를 추가로 선택할 수 있다.
HER 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 항체를 확인하기 위해서, (예를 들면, 관심의 대상이 되는 HER 수용체가 그와 함께 HER 이종올리고머를 형성하는 또다른 HER 수용체와 함께) HER 수용체를 발현하는 세포에의 HER 리간드 결합을 차단하는 항체의 능력을 측정할 수 있다. 예를 들면, HER 이종올리고머의 HER 수용체를 천연적으로 발현하거나, 발현하도록 형질감염된 세포를 항체와 함께 인큐베이션시킨 후, 표지된 HER 리간드에 노출시킬 수 있다. 이어서, HER 이종올리고머의 HER 수용체에의 리간드 결합을 차단하는 HER2 항체의 능력을 평가할 수 있다.
예를 들면, HER2 항체에 의한 MCF7 유방 종양 세포주에의 HRG 결합의 억제는 본질적으로 WO01/00245에 기재되어 있는 바와 같이 24웰-플레이트 포맷으로 얼음 상에서 단층 MCF7 배양물을 사용하여 수행할 수 있다. HER2 모노클로날 항체를 각각의 웰에 첨가하고 30분 동안 인큐베이션시킬 수 있다. 이어서, 125I-표지된 rHRGβ1177-224 (25 pm)를 첨가하고, 4 내지 16시간 동안 계속 인큐베이션시킬 수 있다. 투여량 반응 곡선은 작성하여 관심의 대상이 되는 항체에 대한 IC50 값을 원하는 계산할 수 있다. 하나의 실시태양에서, HER 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 항체는 상기 분석에서 MCF7 세포에의 HRG 결합을 억제하기 위한 IC50이 약 50 nM 이하, 더욱 바람직하게는 10 nM 이하일 것이다. 항체가 항체 단편, 예를 들면, Fab 단편일 경우, 상기 분석에서 MCF7 세포에의 HRG 결합을 억제하기 위한 IC50은 예를 들면, 약 100 nM 이하, 더욱 바람직하게는 50 nM 이하일 수 있다.
별법으로 또는 추가로, HER 이종올리고머에 존재하는 HER 수용체의 HER 리간드 -자극된 티로신 인산화를 차단하는 HER2 항체의 능력을 평가할 수 있다. 예를 들면, HER 수용체를 내인성으로 발현하거나 발현하도록 형질감염된 세포를 항체와 함께 인큐베이션시킨 후, 항-포스포티로신 모노클로날 항체 (이는 임의로 검출가능한 표지와 접합되어 있다)를 사용하여 HER 리간드-의존성 티로신 인산화 활성에 대해 분석할 수 있다. 또한, HER 수용체 활성화 및 항체에 의한 상기 활성의 차단을 측정하기 위해 미국 특허 번호 제5,766,863호에 기재된 키나제 수용체 활성화 분석을 이용할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 하나의 실시태양에서, 본질적으로 WO01/00245에 기재된 바와 같이 MCF7 세포에서 p180 티로신 인산화의 HRG 자극을 억제하는 항체를 스크리닝할 수 있다. 예를 들면, MCF7 세포를 24웰 플레이트에 플레이팅할 수 있고, HER2에 대한 모노클로날 항체를 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션시킨 후, rHRGβ1177-244를 0.2 nM의 최종 농도로 각각의 웰에 첨가할 수 있고, 8분 동안 계속 인큐베이션시킬 수 있다. 배지를 각각의 웰로부터 흡인하고, 100 ㎕의 SDS 샘플 완충액 (5％ SDS, 25 mM DTT, 및 25 mM Tris-HCl (pH 6.8))을 첨가하여 반응을 정지시킬 수 있다. 각각의 샘플 (25㎕)을 4-12％ 구배 겔 (노벡스(Novex)) 상에서 전기영동시킨 후, 폴리비닐리덴 디플루오라이드 막에 전기이동에 의해 이송할 수 있다. 항포스포티로신 (1 ㎍/ml) 면역블롯을 현상할 수 있고, Mr 약 180,000에서 우세한 반응성 밴드의 강도를 반사 밀도계에 의해 정량할 수 있다. 선택된 항체는 바람직하게는 상기 분석에서 p180 티로신 인산화의 HRG 자극을 대조군의 약 0-35％까지 유의하게 억제할 것이다. 반사 밀도계에 의해 측정된 p180 티로신 인산화의 HRG 자극의 억제에 대한 투여량-반응 곡선은 작성할 수 있고, 관심의 대상이 되는 항체에 대한 IC50을 계산할 수 있다. 하나의 실시태양에서, HER 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 항체는 상기 분석에서 p180 티로신 인산화의 HRG 자극을 억제하기 위한 IC50이 약 50 nM 이하, 더욱 바람직하게는 10 nM 이하일 것이다. 항체가 항체 단편, 예를 들면, Fab 단편일 경우, 상기 분석에서 p180 티로신 인산화의 HRG 자극을 억제하기 위한 IC50은 예를 들면, 약 100 nM 이하, 더욱 바람직하게는 50 nM 이하일 수 있다.
또한, 예를 들면, 본질적으로 문헌 [Schaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997)]에 기재된 바와 같이 MDA-MB-175 세포에 대한 항체의 성장 억제 효과를 평가할 수 있다. 상기 분석에 따르면, MDA-MB-175 세포는 HER2 모노클로날 항체 (10 ㎍/mL)로 4일 동안 처리하여 크리스탈 바이올렛으로 염색할 수 있다. HER2 항체와의 인큐베이션은 모노클로날 항체 2C4에 의해 제시된 것과 유사한, 상기 세포주에 대한 성장 억제 효과를 나타낼 수 있다. 추가의 실시태양에서, 외인성 HRG는 상기 억제를 유의적으로 역전시키지는 않을 것이다. 바람직하게는, 항체는 외인성 HRG 의 존재 및 부재하인 둘 모두에 모노클로날 항체 4D5 보다 더 큰 정도로 (및 임의로 모노클로날 항체 7F3보다 더 큰 정도로) MDA-MB-175 세포의 세포 증식을 억제할 수 있을 것이다.
하나의 실시태양에서, 관심의 대상이 되는 HER2 항체는 WO01/00245에 기재된 바와 같은 공면역침전 실험에서 측정된 바, MCF7 및 SK-BR-3 세포, 둘 모두에서 모노클로날 항체 4D5 보다 실질적으로 더 효과적으로, 및 바람직하게는 모노클로날 항체 7F3보다 실질적으로 더 효과적으로 HER2와 HER3의 헤레굴린 의존성 회합을 차단할 수 있다.
성장 억제성 HER2 항체를 확인하기 위해, HER2를 과다발현하는 암세포의 성장을 억제하는 항체를 스크리닝할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 선택되는 성장 억제성 항체는 약 0.5 내지 30 ㎍/ml의 항체 농도에서 세포 배양물 중 SK-BR-3 세포의 성장을 약 20-100％ 만큼, 바람직하게는 약 50-100％ 만큼 억제시킬 수 있다. 상기 항체를 확인하기 위해, 미국 특허 번호 제5,677,171호에 기재된 SK-BR-3 분석법을 수행할 수 있다. 상기 분석법에 따르면, SK-BR-3 세포를 10％ 우태아 혈청, 글루타민 및 페니실린 스트렙토마이신으로 보충된, F12와 DMEM 배지의 1:1 혼합물 중에서 성장시킨다. SK-BR-3 세포를 35 mm 세포 배양 접시 (2 ml/35 mm 접시)에 20,000개의 세포로 플레이팅한다. 접시당 0.5 내지 30 ㎍/ml의 HER2 항체를 첨가한다. 6일 후에, 비처리 세포에 비교되는, 상기 세포의 수를 전자 쿨터(COULTER)™ 세포 계수기로 계수한다. SK-BR-3 세포의 성장을 약 20-100％ 만큼 또는 약 50-100％ 만큼 억제하는 상기 항체를 성장 억제성 항체로서 선택할 수 있다. 성장 억제성 항체, 예를 들면, 4D5 및 3E8의 스크리닝을 위한 분석에 대해서는 미국 특허 번호 제5,677,171호를 참조한다.
세포자멸을 유도하는 항체를 선택하기 위해서, BT474 세포를 사용한 아넥신 결합 분석법을 이용할 수 있다. BT474 세포를 배양하여 상기 문단에서 논의한 접시에 씨딩한다. 이어서, 배지를 제거하고, 신선한 배지를 단독으로 또는 10 ㎍/ml의 모노클로날 항체를 포함하는 배지로 교체한다. 3일간의 인큐베이션 기간이 경과한 후에, 단층을 PBS로 세척하고 트립신 처리하여 박리시켰다. 이어서, 세포를 원심분리하고, Ca2 + 결합 완충액에 재현탁시키고, 세포 사멸 분석에 대해 상기 논의된 튜브 내로 분취한다. 이어서, 튜브에 표지된 아넥신 (예를 들면, 아넥신 V-FTIC) (1 ㎍/ml)을 넣는다. 샘플은 FACSCAN™ 유식 세포측정기 및 FACSCONVERT™ CellQuest 소프트웨어 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))을 사용하여 분석할 수 있다. 대조군에 비해 통계적으로 유의한 수준의 아넥신 결합을 유도하는 상기 항체를 세포자멸 유도 항체로서 선택한다. 아넥신 결합 분석법 이외에, BT474 세포를 사용한 DNA 염색 분석법을 이용할 수 있다. 이 분석법을 수행하기 위해서, 위의 두 문단에 기재된 관심의 대상이 되는 항체로 처리된 BT474 세포를 9 ㎍/ml 훽스트(HOECHST) 33342™와 함께 2 hr 동안 37℃에서 인큐베이션시킨 후, MODFIT LT™ 소프트웨어 (베리티 소프트웨어 하우스(Verity Software House))를 사용하여 EPICS ELITE™ 유식 세포측정기 (쿨터 코포레이션(Coulter Corporation))로 분석한다. 비처리 세포 (100％ 이하의 세포자멸성 세포)보다 2배 이상 (바람직하게는 3배 이상)의 세포자멸성 세포의 비율 변화를 유도하는 항체를 상기 분석을 사용하여 세포자멸 유도성(proapoptotic) 항체로서 선택할 수 있다. 세포자멸을 유도하는 항체, 예를 들면, 7C2 및 7F3의 스크리닝을 위한 분석법에 대해서는 WO98/17797을 참조한다.
관심의 대상이 되는 항체에 의해 결합된 HER2 상의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해서, 예를 들면, 문헌 [Antibodies , A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 통상적인 교차-차단 분석을 수행하여 항체가 항체, 예를 들면, 2C4 또는 페르투주맙의 HER2에의 결합을 교차 차단하는지를 평가할 수 있다. 별법으로 또는 추가로, HER2의 어느 도메인(들)이 항체에 의해 결합되는지를 조사하기 위해 에피토프 지도화를 당업계에 공지된 방법에 의해 수행할 수 있고/있거나, 항체 HER2 구조를 조사할 수 있다 (문헌 [Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004)]).
( viii ) 면역접합체
본 발명은 또한 예를 들어, 화학요법제, 독소 (예를 들면, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 또는 효소적으로 활성인 독소 및 그의 단편 및 변이체 포함), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성 접합체)와 같은 세포독성제에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
상기 면역접합체 생성에 유용한 화학요법제는 상기 기술되어 있다. 항체 및 하나 이상의 소분자 독소, 예를 들면, 칼리케아미신, 메이탄신 (미국 특허 번호 제5,208,020호), 트리코텐 및 CC1065의 접합체도 또한 본원에서 주시된다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 항체는 하나 이상의 메이탄신 분자에 접합된다 (예를 들어, 항체 분자 1개당 약 1 내지 약 10개의 메이탄신 분자로 접합). 메이탄신은 예를 들면, May-SS-Me로 전환될 수 있고, 이는 May-SH3으로 환원되고 변형된 항체와 반응하여 (문헌 [Chari et al. Cancer Research 52:127-131 (1992))]) 메이탄시노이드-항체 면역접합체를 생성할 수 있다.
관심의 대상이 되는 다른 면역접합체는 하나 이상의 칼리케아미신 분자에 접합된 HER2 항체를 포함한다. 칼리케아미신 패밀리의 항생제는 피코몰 미만 농도에서 더블-스트랜드 DNA 절단을 생성시킬 수 있다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조 유사체는 γ1 I, α2 I, α3 I, N-아세틸-γ1 I, PSAG 및 θI 1을 포함하나, 이에 한정되지 않는다 (문헌 ([Hinman et al. Cancer Research 53:3336-3342 (1993)] 및 [Lode et al. Cancer Research 58:2925-2928 (1998)])). 또한, 미국 특허 번호 제5,714,586호; 제5,712,374호; 제5,264,586호; 및 제5,773,001호 (본원에서 참고로 명확하게 인용된다)를 참조한다.
사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 그의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 애루기노사 (Pseudomonas aeruginosa)로부터의 것), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알류리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 예를 들면, WO93/21232 (1993년 10월 28일 공개)를 참조한다.
본 발명은 추가로 핵산 분해 활성을 갖는 화합물 (예를 들어, 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레아제; DNase)과 항체 사이에 형성된 면역접합체를 주시한다.
다양한 방사성 동위원소가 방사성 접합된 HER2 항체 생산에 이용될 수 있다. 그 예로는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다.
항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이기능성 단백질 커플링제, 예를 들어, N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트, 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이기능성 유도체 (예를 들면, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르 (예를 들면, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데하이드 (예를 들면, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물 (예를 들면, 비스(p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예를 들면, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예를 들면, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 불소 화합물 (예를 들면, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al. Science 238: 1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)이 항체에 방사성 뉴클레오티드를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이팅제이다. WO94/11026을 참조한다. 링커는 세포에서 세포독성 약물이 쉽게 방출될 수 있도록 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 디메틸 링커 또는 디설피-함유 링커 (문헌 [Chari et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)])가 사용될 수 있다.
별법으로, HER2 항체 및 세포독성제를 포함하는 융합 단백질은 예를 들면, 재조합 기술 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다.
추가의 또다른 실시태양에서, 항체는, 항체-수용체 접합체를 환자에 투여한 후, 이어서 세정제를 사용하여 순환으로부터 비결합 접합체를 제거한 후, 세포독성제(예를 들어, 방사성 뉴클레오티드)에 접합된 "리간드" (예를 들어, 아비딘)를 투여하는 종양 프리타겟팅(pretargeting)에 사용하기 위해 "수용체" (스트렙트아비딘과 같은 것)에 접합될 수 있다.
( ix ) 기타 다른 항체 변형
본원에서는 항체의 기타 다른 변형도 주시된다. 예를 들어, 항체는 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체 중 하나에 연결될 수 있다. 또한, 항체는 예를 들면, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로에멀젼 중에서 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합화에 의해 제조되는 마이크로캡슐 (예를 들면, 각각 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐) 내에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16 th edition , Oslo, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
예를 들면, 항체의 항원-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 향상시키기 위해 효과기 기능에 관하여 본 발명의 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 별법으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)가 Fc 영역에 도입됨으로써 이 영역에서 쇄간 디설피드 결합이 형성될 수 있다. 이렇게 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다. 문헌 ([Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)] 및 [Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)])를 참조한다. 향상된 항-종양 활성을 갖는 동종이량체 항체는 또한 문헌 [Wolff et al. Cancer Research 53:2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종이기능성 가교결합제를 사용하여 제조될 수 있다. 별법으로, 이중 Fc 영역을 가고, 이로써, 보체 용해 및 ADCC 능력이 향상될 수 있는 것인 항체를 공학적으로 처리할 수 있다. 문헌 [Stevenson et al. Anti - Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)]을 참조한다.
WO00/42072 (프레스타, L)에는 인간 효과기 세포의 존재하에 개선된 ADCC 기능을 갖는 항체가 기재되어 있고, 여기서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 개선된 ADCC를 갖는 항체는 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에 치환을 포함한다. 바람직하게는, 변경된 Fc 영역은 상기 위치 중 1, 2 또는 3개의 위치에 치환을 포함하거나 상기 치환으로 구성된 인간 IgG1 Fc 영역이다.
변경된 C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 갖는 항체는 WO99/51642, 미국 특허 번호 제6,194,551 B1호, 미국 특허 번호 제6,242,195 B1호, 미국 특허 번호 제6,528,624 B1호 및 미국 특허 번호 제6,538,124호 (이더소기에(Idusogie) 등) 에 기재되어 있다. 항체는 그의 Fc 영역의 아미노산 위치 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333 및/또는 334 중 하나 이상의 위치에서의 아미노산 치환을 포함한다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들면, 미국 특허 5,739,277에 기재된 바와 같이 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편) 내로 도입시킬 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "샐비지 수용체 결합 에피토프"라는 용어는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는 IgG 분자 (예, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 나타낸다. 그의 Fc 영역에 치환을 갖고, 혈청 반감기가 증가된 항체가 또한 WO00/42072 (프레스타, L)에 기재되어 있다.
3개 이상의 (바람직하게는 4개) 기능성 항원 결합 부위를 갖는 공학처리된 항체 또한 주시된다 (미국 출원 번호 US2002/0004587 A1 (밀러(Miller) 등)).
본원에 개시된 HER2 항체는 또한 면역리포좀으로서 제제화될 수 있다. 항체를 함유하는 리포좀은 예를 들면, 문헌 ([Epstein et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 82:3688 (1985)]; [Hwang et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 77: 4030 (1980)]; 미국 특허 번호 제4,485,045호 및 제4,544,545호; 및 WO97/38731 (1997년 10월 23일 공개)]에 기재된 것과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포좀은 미국 특허 번호 제5,013,556호에 개시되어 있다.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하는 역상 증발법에 의해 생성할 수 있다. 리포좀은 원하는 직경을 갖는 리포좀을 수득하도록 규정된 공극 크기의 필터를 통해 압출된다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 디설피드 상호교환 반응을 통해 문헌 [Martin et al. J. Biol . Chem. 257: 286-288 (1982)]에 기재된 바와 같이 리포좀에 접합될 수 있다. 화학요법제는 임의로 리포좀 내에 함유된다. 문헌 [Gabizon et al. J. National Cancer Inst. 81(19)1484 (1989)]를 참조한다.
IV . 제약 제제
본 발명의 조성물의 치료학적 제제는 저장을 위해 본 조성물을 임의의 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16 th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 혼합함으로써 동결건조된 제제 또는 수용액의 형태로 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 용량 및 농도에서 수여자에게 무독성이고, 완충액, 예를 들면, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예를 들면, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레솔시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 다른 당질, 예를 들면, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예를 들면, EDTA; 당, 예를 들면, 수크로스, 만닛톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예를 들면, 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예를 들면, TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함한다. 동결건조된 HER2 항체 제제는 WO97/04801에 기재되어 있다. 본 조성물에 대해 특히 바람직한 제제는 US20006/088523에 기재되어 있다.
본원에서 제제는 또한 치료되는 특정 적응증에 대해 필요에 따라 1 초과의 활성 화합물을, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보성 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 예를 들면, EGFR, HER2 (예를 들어, HER2 상의 다른 에피토프에 결합하는 항체), HER3, HER4, 또는 혈관 내피 인자 (VEGF)에 결합하는 항체를 하나의 제제 중에 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 본 조성물은 추가로 화학요법제, 세포독성제, 사이토카인, 성장 억제제, 항-호르몬제, EGFR-표적화 약물, 항-혈관형성제, 티로신 키나제 억제제, 및/또는 심장보호제를 포함할 수 있다. 그러한 분자는 의도하는 목적에 유효한 양으로 조합되어 적절히 존재하게 된다.
활성 성분은 또한 예를 들면, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로에멀젼 중에서 각각 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합화에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 봉입될 수 있다. 그러한 기법은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지효성-방출 제제를 제조할 수 있다. 지효성-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하는데, 상기 매트릭스는 성형된 물품, 예를 들면, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지효성-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔 (예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 3,773,919), L-글루탐산과 γ 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들면, LUPRON DEPOT™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프로라이드 아세테이트로 이루어진 주사가능한 미세구) 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
생체내 투여에 사용될 제제는 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
V. HER2 항체 조성물을 사용한 치료
본 발명에 따라 HER2 항체는 암을 치료하는 데에 사용할 수 있다는 것에 주시된다. 암은 일반적으로 HER2 양성을 띨 것이며, 이에 본원에서의 HER2 항체는 암 세포에 결합할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 암는 소량의 HER3을 발현하거나 (예를 들어, 난소암), 증가된 HER2:HER3 비로 발현한다 (예를 들어, 난소암). 본 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 각종 암은 상기 정의부에 열거되어 있다.
본원에서 치료하고자 하는 암으로서 바람직한 것으로는 HER2 양성 유방암을 비롯한 유방암 (임의로 트라스투주맙 및 탁소이드, 예를 들어, 도세탁셀과 병용하여 치료, 및 유방암의 네오애주번트 요법 포함); 난소암 (백금-내성 및 백금-민감성 난소암 두가지 모두 포함) (예를 들면, US2006/0013819 참조); 폐암 (비소세포 폐암, NSCLC) (임의로 EGFR 억제제와 병용하여 치료 (예를 들면, US 2007/0020261 참조)); 결장직장암 등을 포함한다.
또한 HER2 항체는 각종 비-악성 종양성 질환 또는 질병, 예를 들어, 자가면역 질환 (예를 들어, 건선); 자궁내막증; 공피증; 재협착; 폴립, 예를 들어, 결장 폴립, 후두 폴립 또는 위장관 폴립; 섬유선종; 호흡기 질환; 담낭염; 신경섬유종증; 다낭성 신장 질환; 염증성 질환; 건선 및 피부염을 비롯한 피부병; 혈관 질환; 혈관 상피 세포의 비정상적인 증식을 포함하는 병태; 위장 궤양; 메네트리에 병, 분비성 선종 또는 단백질 단백질 상실 증후군; 신장병; 혈관형성 병; 눈병, 예를 들어, 연령 관련 황반 변성, 추정 눈 히스토플라스마증 증후군, 증식성 당뇨 망막병, 망막 혈관화, 당뇨 망막병, 또는 연령 관련 황반 변성으로부터의 망막 혈관신생; 골 관련 병상, 예를 들어, 골관절염, 구루병 및 골다공증; 뇌 허혈 이벤트 이후의 손상; 섬유성 또는 부종 질환, 예를 들어, 간경화, 폐 섬유증, 카르시노이드증, 갑상선염, 전신성 과다점성 증후군, 오슬러 웨버-랑뒤 증후군, 만성 폐쇄성 폐 질환, 또는 화상, 외상, 방사선, 뇌졸증, 저산소증 또는 허혈 이후의 부종; 피부 과민 반응; 당뇨 망막병 및 당뇨 신장병; 길랭-바레 증후군; 이식편 대 숙주 질환 또는 이식 거부; 파제트병; 골 또는 관절 염증; 광노화 (예를 들어, 인간 피부의 UV 방사선에 의해 유발된 광노화); 양성 전립선 비대; 아데노바이러스, 한타바이러스, 보렐리아 버르조르페리(Borrelia burgdorferi), 예르시니아 종(Yersinia spp .), 및 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis)로부터 선택되는 특정의 미생물 감염; 혈소판 응집에 의해 유발되는 혈전증; 생식계 병태, 예를 들어, 자궁내막증, 난소 과다자극 증후군, 전자간증, 기능장애 자궁 출혈, 또는 불규칙과다월경; 윤활막염; 죽종; 급성 및 만성 신장병증 (증식성 사구체신염 및 당뇨-유도성 신장병); 습진; 비대 흉터 형성; 내독소성 쇼크 및 진균 감염; 가족성 선종성 폴립증; 신경변성 질환 (예를 들어, 알츠하이머병, AIDS-관련 치매, 파킨슨병, 근위축측삭경화증, 색소성 망막염, 척수근 위축증 및 소뇌 변성); 골수형성이상 증후군; 무형성빈혈; 허혈 손상; 폐, 신장 또는 간 섬유증; T-세포 매개 과민성 질환; 영아 비대 유문 협착; 요로 폐색 증후군; 건선 관절염; 및 하시모토 갑산선염을 치료하는데 에도 사용될 수 있다는 것이 주시된다. 본원의 요법에 대하여 바람직한 비-악성 적응증으로는 건선, 자궁내막증, 공피증, 혈관 질환 (예를 들어, 재협착, 관절경화증, 관상 동맥 질환, 또는 고혈압), 결장 폴립, 섬유선종 또는 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 기관지염, 기관지 확장증 또는 낭성 섬유증)을 포함한다.
HER2 항체를 사용한 치료를 통해 질환의 징후 또는 증상은 개선될 것이다. 예를 들면, 치료되는 질환이 암일 경우, 이러한 요법을 통해서 생존은 개선 (전반적 생존 및/또는 무진행 생존)될 것이고/거나, 객관적인 임상적 반응 (부분 또는 완전 반응)을 얻을 수 있다.
바람직하게, 투여되는 조성물 중의 HER2 항체는 네이키드 항체이다. 그러나, 투여되는 HER2 항체는 세포독성제와 접합될 수 있다. 바람직하게는, 그가 결합하는 면역접합체 및/또는 HER2 단백질은 세포에 의해 내재화되어, 그가 결합하는 암 세포를 사멸시키는 데 있어서 접합체의 치료학적 효능을 증가시킨다. 바람직한 실시태양에서, 세포독성제는 암 세포 내의 핵산을 표적으로 하거나 저해한다. 그러한 세포독성제의 예로는 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 리보뉴클레아제 및 DNA 엔도뉴클레아제를 포함한다.
HER2 항체는 공지의 방법에 따라, 예를 들면, 볼루스로서 또는 일정 시간에 걸친 연속 주입에 의한 정맥내 투여, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활액내, 경막내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해 인간 환자에게 투여된다. 항체 조성물을 정맥내 투여하는 것이 바람직하다.
질환의 예방 또는 치료를 위한 HER2 항체의 적절한 투여량은 상기 정의된 바와 같은, 치료하고자 하는 질환의 종류, 질환의 중증도 및 진행 상태, HER2 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 HER2 항체에 대한 반응, 및 주치의의 판단에 따라 달라질 것이다. HER2 항체는 적합하게는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. 예를 들면, 하나 이상의 별개의 투여에 의해 이루어지는, 또는 연속 주입인지는 상관없이, 질환의 종류와 중증도에 따라서, HER2 항체 약 1 ㎍/kg 내지 50 mg/kg (예를 들어, 0.1-20 mg/kg)이 환자에게 투여되는 초기 후보 투여량이다. 하나의 실시태양에서, HER2 항체에 대한 초기 주입 시간은 그 이후의 주입 시간보다는 길 수 있는데, 예를 들면, 초기 주입 시간이 대략 90분 일 경우, 그 이후의 주입 시간은 대략 30분일 수 있다 (초기 주입에 잘 견딜 경우). HER2 항체의 바람직한 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위가 될 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 그의 임의 조합) 중 하나 이상의 투여량이 환자에게 투여될 수 있다. 상기 투여량은 간헐적으로, 예를 들면, 매주 또는 매 3주마다 (예를 들어, 환자는 약 2 내지 약 20회, 예를 들어, 약 6회 HER2 항체를 투여받는다) 투여될 수 있다. 초기에는 고도의 부하량을 투여한 후, 이어서는 그보다 낮은 투여량으로 1회 이상 투여할 수 있다. 하나의 실시태양에서, HER2 항체는 대략 매 3주마다 대략 840 mg의 부하량으로 투여된 후, 대략 420 mg으로 투여된다. 또다른 실시태양에서, HER2 항체는 대략 매 3주마다 대략 1050 mg의 부하량으로 투여된 후, 대략 525 mg으로 투여된다.
기타 다른 치료제가 HER2 항체와 함께 병용될 수 있다. 그러한 병용 투여로는 별개의 제제 또는 단일 제약 제제를 사용한 공투여 또는 동시 투여, 및 임의의 순서로 연속 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 바람직하게는 2개의 (또는 모든) 활성제가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 시간 간격이 존재한다. 따라서, 기타 다른 치료제는 HER2 항체를 투여하기 이전에 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 본 실시태양에서, 기타 다른 치료제를 적어도 1회 투여하는 것과, HER2 항체를 적어도 1회 투여하는 것 사이의 시간 간격은 바람직하게는 약 1개월 이내, 가장 바람직하게는 약 2주 이내이다. 별법으로, 기타 다른 치료제 및 HER2 항체는 단일 제제 또는 별개 제제로 환자에게 동시에 투여된다.
HER2 항체와 조합될 수 있는 기타 다른 치료제의 예로는 화학요법제, 예를 들어, 항-대사물질, 예를 들어, 겜시타빈; 제2의 다른 HER2 항체 (예를 들면, 성장 억제성 HER2 항체, 예를 들어, 트라스투주맙, 또는 HER2를 과다발현하는 세포의 세포자멸을 유도하는 HER2 항체, 예를 들어, 7C2, 7F3 또는 그의 인간화된 변이체); 또다른 종양 관련 항원에 대한 제2 항체, 예를 들어, EGFR, HER3, HER4; 항-호르몬 화합물, 예를 들어, 항-에스트로겐 화합물, 예를 들어, 타목시펜, 또는 아로마타제 억제제; 심장보호제 (상기 요법과 관련된 임의의 심근 기능 장애를 예방하거나 감소시키는 심장 보호제); 사이토카인; EGFR-표적화 약물 (예를 들어, 엘로티닙, 게피티닙, 또는 세툭시맙); 항-혈관형성제 (특히, 상품명 아바스틴? 하에 제넨테크에 의해 시판되는 베바시주맙); 티로신 키나제 억제제; COX 억제제 (예를 들면, COX-1 또는 COX-2 억제제); 비-스테로이드성 항-염증성 약물, 셀레콕시브 (셀레브렉스(CELEBREX)?); 파르네실 트랜스퍼라제 억제제 (예를 들면, 존슨 앤 존슨(Johnson and Johnson)으로부터 이용가능한 티피파르닙/자르네스트라(ZARNESTRA)? 또는 쉐링-프라우(Schering-Plough)로부터 이용가능한 로나파르닙 SCH66336; 종양태아성 단백질 CA 125에 결합하는 항체, 예를 들면, 오레고보맙 (MoAb B43.13); HER2 백신 (예를 들면, HER2 AutoVac 백신 (파르멕시아(Pharmexia)), 또는 APC8024 단백질 백신 (덴드레온 (Dendreon)), 또는 HER2 펩티드 백신 (GSK/코릭사(Corixa)); 또다른 HER 표적화 요법 (예를 들어, 트라스투주맙, 세툭시맙, 게피티닙, 엘로티닙, CI1033, GW2016 등); Raf 및/또는 ras 억제제 (예를 들면, WO2003/86467 참조); 독실(Doxil); 토포테칸; 탁산; GW572016; TLK286; EMD-7200; 오심 치료용 의약, 예를 들면, 세로토닌 길항제, 스테로이드 또는 벤조디아제핀; 피부 발진의 예방 또는 치료 또는 표준 여드름 요법용 의약, 예를 들면, 국소 또는 경구 항생제; 체온 감소 의약, 예를 들면, 아세트아미노펜, 디펜히드라민 또는 메페리딘; 조혈 성장 인자 등 중 임의의 하나 이상을 포함한다.
상기 공투여되는 제제 중 어느 것에 대하여 적합한 투여량은 현재 사용되는 양이고, 상기 제제와 HER2 항체의 조합 작용 (시너지 작용)으로 인해 투여량은 감소될 수 있다. HER2 항체 조성물과 기타 다른 치료제의 조합물을 사용한 치료를 통해서 환자에게 시너지, 또는 추가적인 것 이상의 치료학적 이익을 얻을 수 있다.
화학요법제를 투여하는 경우, 일반적으로 그에 대하여 알려져 있는 투여량으로 투여되거나, 임의로는 화학요법제의 투여에 기인하여 일어날 수 있는 음성적 부작용 또는 약물의 조합 작용으로 인해 투여량은 감소될 수 있다. 그러한 화학요법제의 제조와 투약 스케줄은 제조사의 설명에 따라, 또는 당업자에 의해 실험적으로 결정된 바에 따라 사용될 수 있다. 화학요법에 대한 제조와 투약 스케줄 또한 문헌 [Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992)]에 기재되어 있다.
상기 치료 요법 이외에, 환자를 암세포의 수술적 제거 및/또는 방사선 요법에 적용할 수 있다.
VII . 물질의 기탁
다음 하이브리도마 세포주를 미국 20110-2209 버지니아주 매나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC)에 기탁하였다:
항체 명칭 ATCC 기탁 번호 기탁일
7C2 ATCC HB-12215 1996년 10월 17일
7F3 ATCC HB-12216 1996년 10월 17일
4D5 ATCC CRL 10463 1990년 5월 24일
2C4 ATCC HB-12697 1999년 4월 8일
본 발명의 추가의 상세한 설명은 하기 비제한적인 실시예로 설명된다. 명세서에서의 모든 인용문의 개시내용은 명백하게 본원에서 참고로 포함된다.
실시예 1
본 실시예는 HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 (페르투주맙) 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물의 특징을 규명하는 것을 설명한다.
페르투주맙은 인간 IgG1 (κ) 프레임워크에 기초하여 생성된, 재조합 인간화된 모노클로날 항체이다. 이는 2개의 중쇄 (448 잔기)와 2개의 경쇄 (214 잔기)를 포함한다. 2개의 중쇄는 2개의 쇄간 디설피드로 연결되어 있고, 각각의 경쇄는 하나의 쇄간 디설피드를 통해 중쇄에 부착되어 있다. 페르투주맙의 Fc 영역 중 2개의 중쇄의 Asn-299에는 N-연결된 글리코실화가 존재한다. 페르투주맙은 경쇄 (12개의 아미노산이 차이가 난다) 및 중쇄 (30개의 아미노산이 차이가 난다)의 에피토프 결합 영역에서 허셉틴? (트라스투주맙)과 차이를 보인다. 이러한 차이로 인해 페르투주맙은 HER2 수용체 상에 존재하는 완전히 다른 에피토프에 결합하게 된다. 페르투주맙이 인간 상피 세포 상에 존재하는 HER2 수용체에 결합함으로써 HER 수용체 패밀리의 기타 다른 멤버와 복합체를 형성하지 못하게 된다 (문헌 [Agus et al., Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]). 복합체 형성을 차단함으로써 페르투주맙은 복합체에 대한 리간드 (예를 들어, EGF 및 헤레굴린)의 성장-자극 효과를 막는다. 시험관내 실험을 통해 페르투주맙 및 페르투주맙-Fab, 두가지 모두 헤레굴린 (HRG)이 MCF7에 결합하는 것을 억제하고, HER2-HER3 복합체의 HRG-자극성 인산화는 페르투주맙 및 페르투주맙-Fab, 두가지 모두에 의해 억제될 수 있다는 것이 입증되었다 (문헌 [Agus et al., Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]). 추가로, 뮤린 전립선암 이종이식편 모델에서 페르투주맙 및 페르투주맙의 폴리에틸렌 글리콜 유도체화된 Fab에 의한 생체내의 종양 성장 억제는 유사한 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Agus et al., Cancer Cell 2: 127-137 (2002)]). 이러한 데이타는 항체의 Fc 영역이 종양 성장을 억제하는데 필요한 것은 아니며, 또한, 2가 및 Fc-매개 효과기 기능이 생체내 또는 시험관내 생물학적 활성에 필요한 것은 아니라는 것을 제안한다.
본 실시예에서는 양이온 교환 칼럼으로부터 페르투주맙의 주요 피크를 수집하고, 이를 세포 배양 배지 중에서 인큐베이션시키거나, 표준 항체 정제 가동법을 사용하여 프로세싱하였다. 산성 변이체는 주요 피크를 세포 배양 배지 성분과 인쿄베이션시켰을 때 형성되었다. 모노클로날 항체의 산성 변이체는 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리할 때 주요 피크보다 더 빨리 용리되는 원하는 생성물의 변형된 형태이다. 프로세스 이전 및 프로세스 이후의 변화에 있어서 산성 변이체의 양 및/또는 분포 상의 미세한 차이는 자주 관찰되었고, 이것이 생성물의 비교가능성을 입증하기 위한 도전 과제가 되었다. 정제 가동법은 산성 변이체를 형성하는데 별 효과가 없었다. 산성 변이체 분획 중에서 확인된 변이체로는 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드-환원된 변이체, 시알릴화된 변이체, 및 비-환원형 변이체를 포함한다. 총체적으로, 산성 변이체는 전체적으로 효능이 있었다.
특히, 본 연구의 목적은 세포 배양 및 회수 과정이 페르투주맙 산성 변이체 형성에 미치는 영향에 대해 더욱 잘 이해하기 위한 것이며, 페르투주맙의 우세한 산성 변이체의 특징을 규명하기 위한 것이며, 산성 변이체가 약동학적 성질 (PK)에 미치는 영향에 대해 평가하기 위한 것이다.
래트의 약동학적 성질 결과는, 산성 변이체 분획 및 주요 피크 분획에 대한 곡선하 면적이 페르투주맙 출발 물질과 등가였다 (각각 기하 평균비 0.96 및 0.95)는 것을 보여준다. 이러한 결과는, 비록 산성 변이체가 화학적으로는 주요 피크와는 상이하지만, 이들은 등가의 약동학적 성질을 갖는다는 것을 입증한다.
방법 및 결과
도 10은 양이온 교환 MP (주요 피크) 및 AV (산성 변이체)의 분리, 세포 배양, 회수, 및 PK (약동학적 성질) 평가 및 분석 시험에 대한 실험 디자인을 도시한다. 신선한 배지 = 표준 배지; 소모 배지 = 12일 동안 세포 배양에 사용한 표준 배지, 세포는 원심분리에 의해 제거하였다. 용존 산소, pH, 및 기타 다른 파라미터는 제어하지 않았다.
A. 주요 피크 및 산성 변이체 분리
페르투주맙의 전하 변이체를 하기 조건을 사용하여 4.0 x 250 mm 디오넥스 프로팩 WCX-10™ 양이온 교환 (CEX) 칼럼 상에서 분리하였다:
완충액 A: 20 mM BisTris (pH 6.0)
완충액 B: 20 mM BisTris, 200 mM NaCl (pH 6.0)
구배: 1.0 mL/분으로 전달되는 0.5％ B/분
칼럼 온도: 35℃
검출: 280 nm
도 11에 전형적인 크로마토그램이 제시되어 있다. AV (산성 변이체) 및 MP (주요 피크) 분획을 수집하였다.
효능과 단량체 함량은 페르투주맙 출발 물질, 주요 피크, 및 산성 변이체들간에 유사하였다 (도 12). 주요 피크 및 산성 변이체 CEX 분획의 순도는 CEX에 의한 순도 90％이라는 기준에 기초하여 이루어진 약동학적 성질 연구에서 허용되는 것으로 나타났다 (도 12).
B. 주요 피크 스파이킹 실험
도 10에 개략적으로 설명되어 있는 바와 같이, CEX에 의해 단리된 페르투주맙 주요 피크를 신선한 세포 배양 배지 또는 소모 세포 배양 배지 (무세포)로 스파이킹하고, 37℃에서 12일 동안 인큐베이션시켰다. 다양한 시점에서 샘플을 직접 CEX에 의해 분석하거나, 단백질 A에 의한 분리 후에 상기 분석을 하였다. 또한, 다양한 배지 성분, 예를 들어, 글루코스 및 펩톤을 포함하거나 포함하지 않는 배지(배지 +/- 다양한 배지 성분) 내로 주요 피크를 스파이킹하였다. 또한, 주요 피크를 표준 회수 가동법, 예를 들어, 단백질 A 크로마토그래피 (ProA), 낮은 pH 처리, 및 SP 세파로스 패스트 플로우 (SPFF: SP Sepharose Fast Flow)를 통해 다회에 걸쳐 프로세싱하고, CEX에 의해 분석하였다.
새로운 배지 또는 소모 배지 중에서 12시간 동안 인큐베이션된 주요 피크에 대한 CEX 프로필은 유사하였다 (도 13 및 14). 주요 피크는 인큐베이션 이후에 소모 배지에서보다 신선한 배지에서 더 많이 감소하였다. 각종 배지 성분을 제거한 것은 주요 피크 감소에 영향을 미쳤다. 인큐베이션된 샘플 중 주요 피크의 비율(％)은 단백질 A 분리를 하지 않는 경우와 그를 실행한 경우가 동일하였다. 완충액만으로 이루어진 배지에서 인큐베이션시켰을 때에는 주요 피크가 손실되었다.
배지로부터의 주요 피크의 단백질 A 분리는 CEX 프로필에 별 영향을 미치지 못하였는데, 이는 인큐베이션 동안 일어나는 변형이 단백질 A 결합 또는 용리에 영향을 미치지 못한다는 것을 입증하는 것이다. 회수 가동법은 CEX 주요 피크 비율(％)에 거의 영향을 미치지 못하거나, 전혀 영향을 미치지 못하였다.
C. 산성 변이체의 특지 규명
페르투주맙 출발 물질, 또는 세포 배양 배지에서 인큐베이션된 주요 피크로부터 CEX에 의해 페르투주맙 산성 변이체를 단리시켰다. 도 15에 열거되어 있는 방법에 의해서 단리된 산성 변이체를 분석하였다. 산성 변이체는 총 피크 면적의 21％를 포함하였고, 따라서, 약 80％ (21％ 중 17％)의 산성 변이체가 확인되었다. 탈아미드화된 형태는 정량할 수 없었다.
배지와 함께 인큐베이션된 주요 피크에 의해 생성된, 산성 변이체로 확인된 형태의 것은 페르투주맙 출발 물질에서 확인된 것과 동일하였다. 하기 형태의 것이 검출되었다: 시알릴화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 당화된 변이체, 비-환원형 변이체, 및 탈아미드화된 변이체. 환원 및 PNGase 처리 이후에 전자분무 이온화-질량 분광분석법 (ESI-MS)에 의해 고차 구조로 당화된 형태의 것을 확인하였다.
D. 약동학적 성질 ( PK ) 연구
아암 1개당 12마리의 래트로 이루어진 아암 3개 (산성 변이체, 주요 피크, 페르투주맙 출발 물질), 단일 정맥 (IV) 투여량 10 mg/kg. 35일 동안 광범위한 PK 샘플링을 수행하였다. 산성, 주요 피크, 및 페르투주맙 출발 물질 사이의 AUC의 기하 평균비 (0-14일째). 기하 평균비 = GM 샘플/GM IgG1 출발 물질. 페르투주맙 농도 대 시간 곡선은 페르투주맙 출발 물질, 산성 변이체, 및 주요 피크에 대해서 유사하였다 (도 16 및 17). 산성 변이체, 주요 피크, 및 페르투주맙 출발 물질 사이에는 노출 상의 어떤 유의적인 차이도 관찰되지 않았다. GMR은 약 1.0이고, 90％ CI는 0.80-1.25였다.
결론
다세포 배양 인자가 산성 변이체 형성에 원인이 되지만, 회수는 산성 변이체 형성에 별 영향을 미치지 못한 것으로 나타났다. 디설피드 환원형, 비-환원형, 시알릴화된, 당화, 및 탈아미드화된 변이체가 산성 분획 중에서 확인되었다. 페르투주맙 출발 물질로부터 단리된 산성 분획 및 CEX 주요 피크의 인큐베이션에 의해 생성된 산성 분획은 동일한 형태의 것을 함유하였다. 산성 변이체, 주요 피크, 및 페르투주맙 출발 물질은 동일한 약동학적 성질을 가졌다.
아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC) HB-12215 19961017 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC) HB-12216 19961017 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC) CRL10463 19900524 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC) HB-12697 19990408
Sequence Listing <110> GENENTECH, INC. HARRIS, REED J. MOTCHNIK, PAUL A. <120> COMPOSITION COMPRISING ANTIBODY THAT BINDS TO DOMAIN II OF HER2 AND ACIDIC VARIANTS THEREOF <130> P4169R1 WO <140> PCT/US2009/032220 <141> 2009-01-28 <150> US 61/024,825 <151> 2008-01-30 <160> 24 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His Lys Ile Met Ser Thr Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser 20 25 30 Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 95 100 105 Ile Lys <210> 2 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Arg Ser 65 70 75 Ser Arg Ile Val Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Phe Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser 20 25 30 Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 5 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys <210> 6 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val Gly Tyr Ser Leu 95 100 105 Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <220> <221> unsure <222> 10 <223> Xaa is preferrably D or S <400> 7 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Xaa 5 10 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 8 Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 9 Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 10 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <220> <221> unsure <222> 5 <223> Xaa is preferably R or L <220> <221> unsure <222> 6 <223> Xaa is preferably Y or E <220> <221> unsure <222> 7 <223> Xaa is preferably T or S <400> 11 Ser Ala Ser Tyr Xaa Xaa Xaa 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 12 Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr 5 <210> 13 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn 20 25 30 Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 110 115 120 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 140 145 150 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu 155 160 165 Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 170 175 180 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 185 190 195 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 200 205 210 Arg Gly Glu Cys <210> 14 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys 20 25 30 Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr 50 55 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr 95 100 105 Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 120 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 125 130 135 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 140 145 150 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 155 160 165 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 170 175 180 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 185 190 195 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 200 205 210 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 215 220 225 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 320 325 330 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 335 340 345 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 350 355 360 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 365 370 375 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 380 385 390 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 395 400 405 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 410 415 420 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 425 430 435 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser 20 25 30 Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 110 115 120 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 140 145 150 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu 155 160 165 Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 170 175 180 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 185 190 195 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 200 205 210 Arg Gly Glu Cys <210> 16 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 110 115 120 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 125 130 135 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 140 145 150 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 155 160 165 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 170 175 180 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 185 190 195 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 200 205 210 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 215 220 225 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 320 325 330 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 335 340 345 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 350 355 360 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 365 370 375 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 380 385 390 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 395 400 405 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 410 415 420 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 425 430 435 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 17 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 17 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr 1 5 10 15 Gly Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 20 25 30 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 50 55 60 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 65 70 75 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 80 85 90 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 95 100 105 Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 110 115 120 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 125 130 135 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 140 145 150 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 155 160 165 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 170 175 180 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 185 190 195 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 200 205 210 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 215 220 225 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 230 <210> 18 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 18 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr 1 5 10 15 Gly Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu 20 25 30 Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 35 40 45 Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro 50 55 60 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly 65 70 75 Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser 80 85 90 Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 95 100 105 Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly 110 115 120 Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 125 130 135 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 140 145 150 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 155 160 165 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 170 175 180 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 185 190 195 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 200 205 210 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 215 220 225 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 320 325 330 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 335 340 345 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 350 355 360 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 365 370 375 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 380 385 390 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 395 400 405 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 410 415 420 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 425 430 435 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 440 445 450 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 455 460 465 Pro Gly <210> 19 <211> 195 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala 1 5 10 15 Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly 20 25 30 Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr 35 40 45 Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly 50 55 60 Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln 65 70 75 Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 80 85 90 Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr 95 100 105 Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu 110 115 120 Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg 125 130 135 Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile 140 145 150 Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn 155 160 165 Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser 170 175 180 Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg 185 190 195 <210> 20 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro 1 5 10 15 Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro 20 25 30 Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly 35 40 45 Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp 50 55 60 Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly 65 70 75 Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp 80 85 90 Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val 95 100 105 Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro 110 115 120 Cys Ala Arg Val <210> 21 <211> 169 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val 1 5 10 15 Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala 35 40 45 Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu 50 55 60 Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro 65 70 75 Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile 80 85 90 Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln 95 100 105 Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu 110 115 120 Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe 125 130 135 Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln 140 145 150 Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly 155 160 165 Glu Gly Leu Ala <210> 22 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro 1 5 10 15 Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys 20 25 30 Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val 35 40 45 Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln 50 55 60 Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val 65 70 75 Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys 80 85 90 Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys 95 100 105 Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys 110 115 120 Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu 125 130 135 Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr 140 <210> 23 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 23 Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 1 5 10 15 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 20 25 30 Asp Val Ser Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly 50 55 60 Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 80 85 90 Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr 95 100 105 Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile 110 115 120 Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 125 130 135 Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 140 145 150 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser 155 160 165 Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 170 175 180 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 185 190 195 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 200 205 210 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 24 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is synthesized. <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr 20 25 30 Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr 50 55 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 110 115 120 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 125 130 135 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 140 145 150 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 155 160 165 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 170 175 180 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 185 190 195 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 200 205 210 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 215 220 225 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 320 325 330 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 335 340 345 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 350 355 360 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 365 370 375 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 380 385 390 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 395 400 405 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 410 415 420 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 425 430 435 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 440 445

Claims (27)

  1. HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하고, 여기서 산성 변이체는 주요 종 HER2 항체의 디설피드 환원된 변이체, 비-환원형 변이체 또는 모두를 포함하는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 산성 변이체가 주요 종 HER2 항체의 디설피드 환원된 변이체를 포함하는 것인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 산성 변이체가 주요 종 HER2 항체의 비-환원형 변이체를 포함하는 것인 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체 또는 시알릴화된 변이체를 추가로 포함하는 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체 및 비-환원형 변이체를 포함하는 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 산성 변이체의 양이 총 조성물의 약 25％ 미만인 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 주요 종 HER2 항체 및 산성 변이체가 모두 무손상 항체인 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 주요 종 HER2 항체가 각각 서열 번호: 3 및 4의 경쇄 가변 아미노산 서열 및 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 주요 종 HER2 항체가 각각 서열 번호: 15 및 16의 경쇄 아미노산 서열 및 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 주요 종 HER2 항체의 아미노-말단 리더 연장 변이체를 포함하는 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 아미노-말단 리더 연장부가 VHS-를 포함하는 것인 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 아미노-말단 리더 연장부가 VHS-로 구성된 것인 조성물.
  13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 주요 종 HER2 항체의 하나의 중쇄 또는 두개의 중쇄 모두 상에 C-말단 리신 잔기를 포함하는 항체 및 하나 이상의 산화된 메티오닌 잔기를 갖는 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 주요 종 HER2 항체의 아미노산 서열 변이체를 포함하는 조성물.
  14. 제약상 허용되는 담체 중 제1항 또는 제2항의 조성물을 포함하는 제약 제제.
  15. 제14항에 있어서, 환자에서 HER2 양성 암을 치료하기 위한 제약 제제.
  16. 제15항에 있어서, 암이 유방암, 난소암, 폐암 및 결장직장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 제제.
  17. 제14항에 있어서, 주요 종 HER2 항체 및 산성 변이체가 본질적으로 동일한 약동학적 성질을 갖는 것인 제약 제제.
  18. (1) HER2의 도메인 II에 결합하는 주요 종 HER2 항체, 및 디설피드 환원된 변이체, 비-환원형 변이체 또는 모두를 포함하는 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물을 제조하는 단계; 및 (2) 조성물 중 산성 변이체를 평가하고, 그의 양이 총 조성물의 약 25％ 미만인지를 확인하는 단계를 포함하는, 평가된 제약 조성물을 제조하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 조성물이 당화된 변이체, 탈아미드화된 변이체, 디설피드 환원된 변이체, 시알릴화된 변이체 및 비-환원형 변이체를 포함하는 것인 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 단계 (2)가 이온 교환 크로마토그래피 (여기서, 조성물은 시알리다제로 처리된다), 도데실황산나트륨을 이용한 환원형 모세관 전기영동 (CE-SDS), 비-환원형 CE-SDS, 보로네이트 크로마토그래피 및 펩티드 지도화로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법에 의해 산성 변이체를 평가하는 것을 포함하는 것인 방법.
  21. 제18항 또는 제19항에 있어서, 단계 (2)가 이온 교환 크로마토그래피에 의해 산성 변이체를 평가하는 것을 포함하는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 카르복실레이트 관능기를 갖는 양이온 교환기를 사용하는 양이온 교환 크로마토그래피를 포함하는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 크로마토그래피 조건이 20 mM BisTris의 완충액 A (pH 6.0); 20 mM BisTris의 완충액 B, 200 mM NaCl (pH 6.0); 및 1.0 mL/분의 0.5％ 완충액 B 구배를 포함하는 것인 방법.
  24. 제18항 또는 제19항에 있어서, 단계 (2) 이후의 조성물을 제약상 허용되는 담체와 조합하는 것을 포함하는 방법.
  25. 제18항 또는 제19항에 있어서, 단계 (2)에서 평가된 조성물이 제약상 허용되는 담체 중에 존재하는 것인 방법.
  26. 제18항 또는 제19항의 방법에 의해 제조된 조성물.
  27. 삭제
KR1020107019048A 2008-01-30 2009-01-28 Ｈｅｒ２의 도메인 ｉｉ에 결합하는 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물 KR101223941B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2482508P 2008-01-30 2008-01-30
US61/024,825 2008-01-30
PCT/US2009/032220 WO2009099829A1 (en) 2008-01-30 2009-01-28 Composition comprising antibody that binds to domain ii of her2 and acidic variants thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100110379A KR20100110379A (ko) 2010-10-12
KR101223941B1 true KR101223941B1 (ko) 2013-01-21

Family

ID=40672664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020107019048A KR101223941B1 (ko) 2008-01-30 2009-01-28 Ｈｅｒ２의 도메인 ｉｉ에 결합하는 항체 및 그의 산성 변이체를 포함하는 조성물

Country Status (37)

Country Link
US (7) US8652474B2 (ko)
EP (3) EP4119583A1 (ko)
JP (2) JP5933179B2 (ko)
KR (1) KR101223941B1 (ko)
CN (1) CN101981056B (ko)
AR (2) AR070276A1 (ko)
AU (1) AU2009210545C1 (ko)
BR (1) BRPI0905733B8 (ko)
CA (1) CA2711798C (ko)
CL (1) CL2009000178A1 (ko)
CO (1) CO6231039A2 (ko)
CR (2) CR11648A (ko)
CY (2) CY1120191T1 (ko)
DK (2) DK2238172T3 (ko)
EC (1) ECSP10010433A (ko)
ES (2) ES2882041T3 (ko)
HK (1) HK1151543A1 (ko)
HR (2) HRP20211469T1 (ko)
HU (2) HUE055108T2 (ko)
IL (2) IL206931A (ko)
LT (2) LT3401335T (ko)
MA (1) MA32099B1 (ko)
MX (1) MX2010008035A (ko)
MY (1) MY158560A (ko)
NO (1) NO2238172T3 (ko)
NZ (1) NZ586754A (ko)
PE (3) PE20140579A1 (ko)
PL (2) PL3401335T3 (ko)
PT (2) PT2238172T (ko)
RS (2) RS62085B1 (ko)
RU (3) RU2543664C2 (ko)
SG (1) SG190607A1 (ko)
SI (2) SI2238172T1 (ko)
TW (1) TWI472339B (ko)
UA (1) UA104585C2 (ko)
WO (1) WO2009099829A1 (ko)
ZA (1) ZA201004898B (ko)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2521140T3 (es) * 2004-07-22 2014-11-12 Genentech, Inc. Composición de anticuerpos de HER2
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
NZ590431A (en) * 2005-02-23 2012-08-31 Genentech Inc Extending time to disease progression or survival in cancer patients using a HER dimerization inhibitor
MX2009008981A (es) 2007-03-02 2009-09-02 Genentech Inc Prediccion de respuesta a un inhibidor her.
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
BRPI0812682A2 (pt) 2008-06-16 2010-06-22 Genentech Inc tratamento de cáncer de mama metastático
WO2011084496A1 (en) * 2009-12-16 2011-07-14 Abbott Biotherapeutics Corp. Anti-her2 antibodies and their uses
ES2796829T3 (es) 2009-12-18 2020-11-30 Csl Ltd Procedimiento de purificación de polipéptidos
US8609095B2 (en) * 2010-03-04 2013-12-17 Symphogen A/S Anti-HER2 antibodies and compositions
JP6320753B2 (ja) * 2010-05-27 2018-05-09 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２に対するモノクローナル抗体
JP6082344B2 (ja) 2010-05-27 2017-02-15 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２エピトープに対するモノクローナル抗体
CN110038135B (zh) 2011-03-17 2021-03-05 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
WO2012143524A2 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Genmab A/S Bispecific antibodies against her2 and cd3
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
PE20142363A1 (es) 2011-10-14 2015-01-30 Genentech Inc Usos y articulo de fabricacion que incluye el inhibidor de la dimerizacion de her2 pertuzumab
SG10201805291TA (en) 2011-10-27 2018-08-30 Genmab As Production of heterodimeric proteins
EP2793941A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
CA2883272A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
JP5993093B2 (ja) 2012-10-12 2016-09-14 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン類およびその複合体
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
NZ712035A (en) 2013-03-13 2019-06-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
NZ751877A (en) 2013-04-16 2020-04-24 Genentech Inc Pertuzumab variants and evaluation thereof
MX368177B (es) * 2013-05-06 2019-09-23 Sanofi Sa Proceso continuo de múltiples etapas para purificar anticuerpos.
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
US10434152B2 (en) * 2014-02-20 2019-10-08 Wayne State University HER2 antigenic polypeptide compositions, and methods for their use in treatment and prevention of carcinomas
WO2015138435A1 (en) 2014-03-11 2015-09-17 Molecular Templates, Inc. Proteins comprising binding regions, shiga toxin a subunit effector regions, and carboxy-terminal, endoplasmic reticulum localization signal motifs
CN106414503A (zh) 2014-03-11 2017-02-15 分子模板公司 包含邻近氨基酸端的志贺毒素a亚基效应子区和细胞靶向性免疫球蛋白型结合区的蛋白
MX2016014007A (es) 2014-04-25 2017-01-11 Genentech Inc Metodos para el tratamiento de cancer de mama temprano con trastuzumab-emtansina(mcc-dm1) y pertuzumab.
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
WO2016037644A1 (en) 2014-09-10 2016-03-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG11201701623UA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
RU2727663C2 (ru) 2014-09-17 2020-07-22 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
WO2016118707A1 (en) * 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
CN107614015A (zh) 2015-05-30 2018-01-19 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗her2阳性局部晚期或先前未治疗的转移性乳腺癌的方法
CN107849096B (zh) 2015-05-30 2022-05-24 分子模板公司 去免疫化的志贺毒素a亚基支架和包含它们的细胞靶向分子
KR20180030085A (ko) 2015-07-26 2018-03-21 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 시가 독소 a 서브유닛 작동체 및 cd8+ t-세포 에피토프를 포함하는 세포-표적화 분자
TWI780988B (zh) 2015-08-24 2022-10-11 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產權有限公司 生藥組成物
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
WO2017087280A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating her2-positive cancer
CN109641969A (zh) * 2016-01-08 2019-04-16 安口生物公司 用于分开单克隆抗体的同种型的方法
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
EP3241847A1 (en) * 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Her-2 binding antibodies
US20200023072A1 (en) 2016-10-11 2020-01-23 Medimmune Limited Antibody-drug conjugates with immune-mediated therapy agents
MX2019007801A (es) 2016-12-28 2019-10-30 Genentech Inc Tratamiento de cáncer avanzado con expresión de her2.
KR20240010538A (ko) 2017-01-17 2024-01-23 제넨테크, 인크. 피하 her 2 항체 제형
MX2019008538A (es) 2017-01-20 2019-11-05 Juno Therapeutics Gmbh Conjugados de superficie celular y composiciones y métodos celulares relacionados.
AU2018213194B2 (en) 2017-01-25 2023-01-12 Molecular Templates, Inc. Cell-targeting molecules comprising de-immunized, Shiga toxin A Subunit effectors and CD8+ T-cell epitopes
CN114984206A (zh) 2017-03-02 2022-09-02 基因泰克公司 Her2阳性乳腺癌的辅助治疗
WO2018200505A1 (en) 2017-04-24 2018-11-01 Genentech, Inc. Erbb2/her2 mutations in the transmbrane or juxtamembrane domain
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AU2019257343A1 (en) 2018-04-17 2020-09-10 Molecular Templates, Inc. HER2-targeting molecules comprising de-immunized, Shiga toxin A Subunit scaffolds
AU2019272838A1 (en) 2018-05-23 2020-11-26 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
WO2020084503A1 (en) * 2018-10-26 2020-04-30 Cadila Healthcare Limited A composition comprising antibody with reduced level of basic variants thereof
WO2020095866A1 (en) * 2018-11-05 2020-05-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Her2 s310f specific antigen-binding molecules
US11702482B2 (en) 2018-12-17 2023-07-18 Revitope Limited Twin immune cell engager
WO2021233853A1 (en) 2020-05-19 2021-11-25 F. Hoffmann-La Roche Ag The use of chelators for the prevention of visible particle formation in parenteral protein solutions
WO2022005499A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Genentech, Inc. Pertuzumab plus trastuzumab fixed dose combination
CN116133689A (zh) 2020-07-07 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 作为治疗性蛋白质制剂的稳定剂的替代表面活性剂
JP2023533813A (ja) 2020-07-14 2023-08-04 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 一定用量配合剤のアッセイ
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010043323A (ko) * 1998-05-06 2001-05-25 제넨테크, 인크. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법
KR20040082421A (ko) * 2002-02-11 2004-09-24 제넨테크, 인크. 빠른 항원 결합 속도를 갖는 항체 변이체
JP2005522514A (ja) 2002-04-10 2005-07-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ｈｅｒ２抗体改変体
KR20070038557A (ko) * 2004-07-22 2007-04-10 제넨테크, 인크. Ｈｅｒ２ 항체 조성물

Family Cites Families (199)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US533A (en) 1837-12-26 Truss for hermta
US4943A (en) 1847-01-26 Harness-buckle
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
EP0171407B1 (en) 1984-01-30 1993-11-18 Imperial Cancer Research Technology Limited Improvements relating to growth factors
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5401638A (en) 1986-06-04 1995-03-28 Oncogene Science, Inc. Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US4968603A (en) 1986-12-31 1990-11-06 The Regents Of The University Of California Determination of status in neoplastic disease
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
CA1339946C (en) 1987-03-31 1998-07-07 Michael J. Griffith Ultrapurification process for polypeptides
US5824311A (en) 1987-11-30 1998-10-20 Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of tumors with monoclonal antibodies against oncogene antigens
US5720937A (en) 1988-01-12 1998-02-24 Genentech, Inc. In vivo tumor detection assay
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
ES2106033T3 (es) 1989-05-19 1997-11-01 Genentech Inc Dominio extracelular de her2.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
CA2062795A1 (en) 1989-06-29 1990-12-30 Michael W. Fanger Bispecific reagents for aids therapy
DE69025946T2 (de) 1989-09-08 1996-10-17 Univ Duke Modifikationen der struktur des egf-rezeptor-gens in menschlichen glioma
WO1991005264A1 (en) 1989-09-29 1991-04-18 Oncogenetics Partners Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1992020373A1 (en) 1991-05-14 1992-11-26 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
IL101943A0 (en) 1991-05-24 1992-12-30 Genentech Inc Structure,production and use of heregulin
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
US5264586A (en) 1991-07-17 1993-11-23 The Scripps Research Institute Analogs of calicheamicin gamma1I, method of making and using the same
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
WO1994000136A1 (en) 1992-06-30 1994-01-06 Oncologix, Inc. A COMBINATION OF ANTI-erbB-2 MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHOD OF USING
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
ATE207080T1 (de) 1991-11-25 2001-11-15 Enzon Inc Multivalente antigen-bindende proteine
GB9300059D0 (en) 1992-01-20 1993-03-03 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
DE69333807T2 (de) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
ATE244763T1 (de) 1992-02-11 2003-07-15 Cell Genesys Inc Erzielen von homozygotem durch zielgerichtete genetische ereignisse
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
CA2140280A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Avi J. Ashkenazi Bispecific immunoadhesins
CA2149329C (en) 1992-11-13 2008-07-15 Darrell R. Anderson Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
CA2103323A1 (en) 1992-11-24 1994-05-25 Gregory D. Plowman Her4 human receptor tyrosine kinase
WO1994022478A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania PREVENTION OF TUMORS WITH MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST $i(NEU)
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
JPH09506250A (ja) 1993-11-23 1997-06-24 ジェネンテク，インコーポレイテッド Ｒｓｅと命名される蛋白チロシンキナーゼ
DE69428764T2 (de) 1993-12-24 2002-06-20 Merck Patent Gmbh Immunokonjugate
IL112249A (en) 1994-01-25 2001-11-25 Warner Lambert Co Pharmaceutical compositions containing di and tricyclic pyrimidine derivatives for inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family and some new such compounds
US5654307A (en) 1994-01-25 1997-08-05 Warner-Lambert Company Bicyclic compounds capable of inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5808110A (en) 1994-07-21 1998-09-15 Akzo Nobel Nv Cyclic ketone peroxide formulations
US5804396A (en) 1994-10-12 1998-09-08 Sugen, Inc. Assay for agents active in proliferative disorders
US6214388B1 (en) 1994-11-09 2001-04-10 The Regents Of The University Of California Immunoliposomes that optimize internalization into target cells
AU4289496A (en) 1994-12-02 1996-06-19 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
ATE205483T1 (de) 1995-03-30 2001-09-15 Pfizer Chinazolinderivate
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
GB9508565D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quiazoline derivative
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
AU6267896A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth oftumors
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
DE69638269D1 (de) 1995-06-14 2010-11-18 Univ California Hochaffine humane antikörper gegen tumorantigene
MX9800215A (es) 1995-07-06 1998-03-31 Novartis Ag Pirrolopirimidas y procesos para su preparacion.
IL122910A (en) 1995-07-27 2002-05-23 Genentech Inc Stable isotonic protein formulation that has undergone lyophilization
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
GB9603095D0 (en) 1996-02-14 1996-04-10 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
SI0892789T2 (sl) 1996-04-12 2010-03-31 Warner Lambert Co Ireverzibilni inhibitorji tirozin kinaz
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
DK0912559T3 (da) 1996-07-13 2003-03-10 Glaxo Group Ltd Kondenserede heterocykliske forbindelser som proteintyrosinkinaseinhibitorer
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
TR199901615T2 (en) 1996-10-18 1999-11-22 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antikorlar�.
EP0852951A1 (de) 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
SI0950067T1 (sl) 1996-11-27 2007-12-31 Genentech Inc Afinitetno čiščenje polipeptida na proteinskemA matriksu
US6002008A (en) 1997-04-03 1999-12-14 American Cyanamid Company Substituted 3-cyano quinolines
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
CA2288705C (en) 1997-05-06 2008-03-18 American Cyanamid Company Use of quinazoline compounds for the treatment of polycystic kidney disease
CA2293829C (en) 1997-06-24 2011-06-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
ZA986729B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitors of tyrosine kinases
ZA986732B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitiors of tyrosine kinases
TW436485B (en) 1997-08-01 2001-05-28 American Cyanamid Co Substituted quinazoline derivatives
AU9805398A (en) 1997-10-15 1999-05-03 Children's Medical Center Corporation Novel human egf receptors and use thereof
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
JP2001522802A (ja) 1997-11-06 2001-11-20 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 大腸ポリープを治療するためのチロシンキナーゼインヒビターとしてのキナゾリン誘導体の使用
ZA9811162B (en) 1997-12-12 2000-06-07 Genentech Inc Treatment with anti-ERBB2 antibodies.
DE69938923D1 (de) 1998-03-27 2008-07-31 Genentech Inc Synergie zwischen apo-2 ligand und antikörper gegen her-2
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
DE69942021D1 (de) 1998-04-20 2010-04-01 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
EP1308455B9 (en) * 1998-05-06 2006-06-14 Genentech, Inc. A composition comprising anti-HER2 antibodies
US6573043B1 (en) 1998-10-07 2003-06-03 Genentech, Inc. Tissue analysis and kits therefor
ES2188254T3 (es) 1998-11-19 2003-06-16 Warner Lambert Co N-(4-(3-chloro-4-fluoro-fenilamino)-7-(3-morfolin-4-il-propoxi)-quin azolin-6-il)-acrilamada, un inhibidor irreversible de tirosina quinasas.
PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2015-08-31 Genentech Inc Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
US7625859B1 (en) * 2000-02-16 2009-12-01 Oregon Health & Science University HER-2 binding antagonists
ATE415979T1 (de) 1999-05-14 2008-12-15 Genentech Inc Behandlung mit anti-erbb2 antikörpern
US20030086924A1 (en) 1999-06-25 2003-05-08 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
IL147017A0 (en) 1999-06-25 2002-08-14 Genentech Inc TREATING PROSTATE CANCER WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES
US20040013667A1 (en) 1999-06-25 2004-01-22 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
CN100340575C (zh) 1999-06-25 2007-10-03 杰南技术公司 人源化抗ErbB2抗体及其在制备药物中的应用
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
KR20110008112A (ko) 1999-08-27 2011-01-25 제넨테크, 인크. 항-ＥｒｂＢ2 항체 투여 치료 방법
US20200048362A1 (en) 2000-03-16 2020-02-13 Immunogen, Inc. Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
CN100390288C (zh) 2000-04-11 2008-05-28 杰南技术公司 多价抗体及其应用
KR20030007640A (ko) 2000-05-19 2003-01-23 제넨테크, 인크. ＥｒｂＢ 길항제에 의한 암 치료요법에 대한 효과적인반응의 가능성을 개선시키기 위한 유전자 검출 분석
US6984494B2 (en) 2000-08-15 2006-01-10 Genentech, Inc. Analytical method
CA2838062C (en) 2001-08-03 2015-12-22 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
EP1300146A1 (en) 2001-10-03 2003-04-09 Boehringer Ingelheim International GmbH Pharmaceutical composition for the treatment of animal mammary tumors
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003086467A1 (en) 2002-04-08 2003-10-23 Smithkline Beecham Corporation Cancer treatment method comprising administering an erb-family inhibitor and a raf and/or ras inhibitor
US7323479B2 (en) * 2002-05-17 2008-01-29 Celgene Corporation Methods for treatment and management of brain cancer using 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-methylisoindoline
NZ537660A (en) 2002-07-15 2008-12-24 Genentech Inc Methods for identifying tumors that are responsive to treatment with anti-ErbB2 antibodies
AU2003265994B2 (en) 2002-09-11 2010-04-01 Genentech, Inc. Protein purification
US7488823B2 (en) 2003-11-10 2009-02-10 Array Biopharma, Inc. Cyanoguanidines and cyanoamidines as ErbB2 and EGFR inhibitors
JP2006516117A (ja) 2002-11-21 2006-06-22 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体を用いた非悪性疾病または疾患の治療
WO2004098508A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Napro Biotherapeutics, Inc. Methods for production of non-disease causing hemoglobin by ex vivo oligonucleotide gene editing of human stem/progenitor cells
AU2004265253B2 (en) * 2003-07-28 2011-09-01 Genentech, Inc. Reducing protein A leaching during protein A affinity chromatography
WO2005099756A2 (en) 2004-04-08 2005-10-27 Agus David B ErbB ANTAGONISTS FOR PAIN THERAPY
CN102973947A (zh) 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
SV2006002143A (es) * 2004-06-16 2006-01-26 Genentech Inc Uso de un anticuerpo para el tratamiento del cancer resistente al platino
RU2367667C2 (ru) 2004-08-19 2009-09-20 Дженентек, Инк. Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
RU2007125644A (ru) 2004-12-07 2009-01-20 Дженентек Инк. (Us) Отбор пациентов для терапии ингибитором her
PL1846030T3 (pl) 2005-01-21 2019-05-31 Genentech Inc Ustalone dawkowanie przeciwciał her
NZ590431A (en) 2005-02-23 2012-08-31 Genentech Inc Extending time to disease progression or survival in cancer patients using a HER dimerization inhibitor
WO2006096861A2 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Genentech, Inc. METHODS FOR IDENTIFYING TUMORS RESPONSIVE TO TREATMENT WITH HER DIMERIZATION INHIBITORS (HDIs)
US20060212956A1 (en) 2005-03-14 2006-09-21 Genentech, Inc. Animal model of ligand activated HER2 expressing tumors
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
MY157955A (en) 2005-07-06 2016-08-30 Hoffmann La Roche Detection of a target antigen irrespective of the presence or absence of a corresponding therapeutic antibody
PE20070207A1 (es) 2005-07-22 2007-03-09 Genentech Inc Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her
US7700299B2 (en) 2005-08-12 2010-04-20 Hoffmann-La Roche Inc. Method for predicting the response to a treatment
TW200812615A (en) 2006-03-22 2008-03-16 Hoffmann La Roche Tumor therapy with an antibody for vascular endothelial growth factor and an antibody for human epithelial growth factor receptor type 2
JP2009539836A (ja) 2006-06-05 2009-11-19 ジェネンテック・インコーポレーテッド ＥＧＦまたはＴＧＦ−αのレベルの上昇が生じている癌患者の生存の延長
JP2010501498A (ja) 2006-08-21 2010-01-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｖｅｇｆ抗体による腫瘍治療
WO2008031531A1 (en) 2006-09-15 2008-03-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor therapy with a combination of anti-her2 antibodies
MX2009008981A (es) 2007-03-02 2009-09-02 Genentech Inc Prediccion de respuesta a un inhibidor her.
EP1997534A1 (en) 2007-05-31 2008-12-03 Pierre Fabre Medicament Cancer treatment combination therapy comprising vinflunine and trastuzumab
AU2008258859A1 (en) 2007-06-06 2008-12-11 F.Hoffmann-La Roche Ag Composition of a first non-labeled monoclonal antibody binding to a tumor antigen and a non-cross reactive second monoclonal antibody labeled with a NIR fluorescence label
SI2171090T1 (sl) 2007-06-08 2013-07-31 Genentech, Inc. Markerji genskega izraĹľanja tumorske odpornosti na HER2 inhibitorsko zdravljenje
US9551033B2 (en) 2007-06-08 2017-01-24 Genentech, Inc. Gene expression markers of tumor resistance to HER2 inhibitor treatment
MX354993B (es) 2007-07-09 2018-03-28 Genentech Inc Prevención de reducción de enlaces de disulfuro durante la producción recombinante de polipéptidos.
TWI471134B (zh) 2007-09-12 2015-02-01 Genentech Inc 肌醇磷脂３－激酶抑制劑化合物及化療劑之組合及使用方法
KR20150008503A (ko) 2007-10-30 2015-01-22 제넨테크, 인크. 양이온 교환 크로마토그래피에 의한 항체 정제
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
EP2260056A1 (en) 2008-03-06 2010-12-15 Genentech, Inc. Combination therapy with c-met and her antagonists
AR070865A1 (es) 2008-03-18 2010-05-12 Genentech Inc Combinaciones de un conjugado anticuerpo- farmaco anti- her2 y agentes quimioterapeuticos y los metodos de uso
US9235334B2 (en) 2008-05-09 2016-01-12 Genesis Industries, Llc Managing landbases and machine operations performed thereon
BRPI0812682A2 (pt) 2008-06-16 2010-06-22 Genentech Inc tratamento de cáncer de mama metastático
US8216997B2 (en) 2008-08-14 2012-07-10 Acceleron Pharma, Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators
WO2010136569A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Modulators for her2 signaling in her2 expressing patients with gastric cancer
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
JP2014502596A (ja) 2010-12-09 2014-02-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド パクリタキセルおよびトラスツズマブ−ｍｃｃ−ｄｍ１を用いたｈｅｒ２陽性癌の治療
JP6385060B2 (ja) 2011-03-07 2018-09-05 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 治療的に活性な抗体のインビボにおける選択
PE20142363A1 (es) 2011-10-14 2015-01-30 Genentech Inc Usos y articulo de fabricacion que incluye el inhibidor de la dimerizacion de her2 pertuzumab
US9376715B2 (en) 2011-12-09 2016-06-28 Roche Molecular Systems, Inc Methods for detecting mutations in the catalytic subunit of the phosphoinositol-3 kinase (PIK3CA) gene
EP2793941A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
KR101915942B1 (ko) 2012-06-08 2018-11-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료를 위한 포스포이노시타이드 3 키나제 억제제 화합물 및 화학치료제의 돌연변이체 선택성 및 조합물
CA2889298C (en) 2012-11-30 2024-01-02 Anton Belousov Identification of patients in need of pd-l1 inhibitor cotherapy
US9180185B2 (en) 2013-01-11 2015-11-10 Hoffman-La Roche Inc. Combination therapy of anti-HER3 antibodies
NZ751877A (en) 2013-04-16 2020-04-24 Genentech Inc Pertuzumab variants and evaluation thereof
MY182271A (en) 2013-11-13 2021-01-18 Pfizer Tumor necrosis factor-like ligand 1a specific antibodies and compositions and uses thereof
EP3083692B1 (en) 2013-12-17 2020-02-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating her2-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-her2 antibodies
MX2016014007A (es) 2014-04-25 2017-01-11 Genentech Inc Metodos para el tratamiento de cancer de mama temprano con trastuzumab-emtansina(mcc-dm1) y pertuzumab.
WO2017087280A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating her2-positive cancer
JP6807186B2 (ja) 2016-08-24 2021-01-06 日本板硝子株式会社 サイドガラス
WO2018085513A1 (en) 2016-11-04 2018-05-11 Genentech, Inc. Treatment of her2-positive breast cancer
MX2019007801A (es) 2016-12-28 2019-10-30 Genentech Inc Tratamiento de cáncer avanzado con expresión de her2.
KR20240010538A (ko) 2017-01-17 2024-01-23 제넨테크, 인크. 피하 her 2 항체 제형
CN114984206A (zh) 2017-03-02 2022-09-02 基因泰克公司 Her2阳性乳腺癌的辅助治疗
WO2018200505A1 (en) 2017-04-24 2018-11-01 Genentech, Inc. Erbb2/her2 mutations in the transmbrane or juxtamembrane domain
WO2019077053A1 (en) 2017-10-20 2019-04-25 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh PREPARATION AND STORAGE OF APPROPRIATE LIPOSOMAL RNA FORMULATIONS FOR THERAPY
WO2022005499A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Genentech, Inc. Pertuzumab plus trastuzumab fixed dose combination
JP2023533813A (ja) 2020-07-14 2023-08-04 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 一定用量配合剤のアッセイ

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010043323A (ko) * 1998-05-06 2001-05-25 제넨테크, 인크. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법
KR20040082421A (ko) * 2002-02-11 2004-09-24 제넨테크, 인크. 빠른 항원 결합 속도를 갖는 항체 변이체
JP2005522514A (ja) 2002-04-10 2005-07-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ｈｅｒ２抗体改変体
KR20070038557A (ko) * 2004-07-22 2007-04-10 제넨테크, 인크. Ｈｅｒ２ 항체 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY, 2005 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20140186867A1 (en) 2014-07-03
CR20150625A (es) 2016-02-29
UA104585C2 (ru) 2014-02-25
AR116860A2 (es) 2021-06-23
RU2015101975A3 (ko) 2018-09-07
US11597776B2 (en) 2023-03-07
CR11648A (es) 2010-10-05
US20230416401A1 (en) 2023-12-28
CL2009000178A1 (es) 2009-09-11
PT3401335T (pt) 2021-07-23
RU2543664C2 (ru) 2015-03-10
EP3401335B1 (en) 2021-06-30
CY1120191T1 (el) 2018-12-12
CO6231039A2 (es) 2010-12-20
IL206931A0 (en) 2010-12-30
ECSP10010433A (es) 2010-09-30
US20190322761A1 (en) 2019-10-24
JP2014141499A (ja) 2014-08-07
US20090202546A1 (en) 2009-08-13
AU2009210545B2 (en) 2013-09-26
MA32099B1 (fr) 2011-02-01
EP3401335A1 (en) 2018-11-14
CY1124500T1 (el) 2022-07-22
EP2238172B1 (en) 2018-02-21
DK2238172T3 (en) 2018-04-23
IL206931A (en) 2015-10-29
PE20140579A1 (es) 2014-05-08
PE20190906A1 (es) 2019-06-26
US20220363780A1 (en) 2022-11-17
SG190607A1 (en) 2013-06-28
MX2010008035A (es) 2010-08-23
MY158560A (en) 2016-10-14
PT2238172T (pt) 2018-05-15
CA2711798C (en) 2014-05-06
NZ586754A (en) 2012-08-31
US8652474B2 (en) 2014-02-18
ES2668680T3 (es) 2018-05-21
ZA201004898B (en) 2011-09-28
ES2882041T3 (es) 2021-12-01
AU2009210545C1 (en) 2019-01-17
BRPI0905733B8 (pt) 2021-05-25
RU2019134204A3 (ko) 2022-01-12
HRP20180666T1 (hr) 2018-06-01
BRPI0905733B1 (pt) 2020-09-24
DK3401335T3 (da) 2021-07-26
WO2009099829A1 (en) 2009-08-13
LT2238172T (lt) 2018-05-10
US11414498B2 (en) 2022-08-16
KR20100110379A (ko) 2010-10-12
RS62085B1 (sr) 2021-08-31
IL241361A (en) 2017-01-31
SI3401335T1 (sl) 2021-11-30
EP2238172A1 (en) 2010-10-13
LT3401335T (lt) 2021-09-10
AR070276A1 (es) 2010-03-25
RU2015101975A (ru) 2015-06-10
PL2238172T3 (pl) 2018-08-31
HUE037471T2 (hu) 2018-09-28
CA2711798A1 (en) 2009-08-13
PE20091352A1 (es) 2009-09-16
CN101981056A (zh) 2011-02-23
US20170174785A1 (en) 2017-06-22
JP5933179B2 (ja) 2016-06-08
HUE055108T2 (hu) 2021-11-29
AU2009210545A1 (en) 2009-08-13
JP2011511780A (ja) 2011-04-14
BRPI0905733A2 (pt) 2015-12-01
RU2010136029A (ru) 2012-03-10
US9181346B2 (en) 2015-11-10
TWI472339B (zh) 2015-02-11
HK1151543A1 (zh) 2012-02-03
HRP20211469T1 (hr) 2021-12-24
PL3401335T3 (pl) 2021-11-08
RU2019134204A (ru) 2021-04-26
EP4119583A1 (en) 2023-01-18
SI2238172T1 (en) 2018-05-31
IL241361A0 (en) 2015-11-30
CN101981056B (zh) 2016-02-10
RS57109B1 (sr) 2018-06-29
US20140186343A1 (en) 2014-07-03
TW200936162A (en) 2009-09-01
NO2238172T3 (ko) 2018-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11597776B2 (en) Composition comprising antibody that binds to domain II of HER2 and acidic variants thereof
US7879325B2 (en) HER2 antibody composition

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20151230

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20161229

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20171228

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181227

Year of fee payment: 7