KR101161368B1

KR101161368B1 - 보베리아 바시아나 ｋｋ5 균주 및 이를 이용하여 진딧물을 방제하는 방법

Info

Publication number: KR101161368B1
Application number: KR1020080138735A
Authority: KR
Inventors: 김근
Original assignee: 수원대학교산학협력단
Priority date: 2008-12-31
Filing date: 2008-12-31
Publication date: 2012-07-02
Also published as: KR20100080107A

Abstract

본 발명의 일 구체예는 진딧물 특히 복숭아 혹진딧물(Myzus persicae)에 대해 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) KK5 균주에 관한 것이다.

보베리아 바시아나, 복숭아 혹진딧물

Description

보베리아 바시아나 ＫＫ5 균주 및 이를 이용하여 진딧물을 방제하는 방법{Beauveria bassiana KK5 strain and a method for controlling aphid using the same strain}

본 발명의 일 구체예는 진딧물에 대해 살충력을 나타내는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) KK5 균주, 그의 포자를 생산하는 방법 및 상기 균주 또는 그의 포자를 사용하여 진딧물을 방제하는 방법에 관한 것이다.

현재 국내외에서 여러 종의 진딧물 방제를 위해 많은 연구와 노력을 기울이고 있다. 그러나, 진딧물은 번식력이 매우 높고 빠른 유전적인 약제 내성의 발현에 의해 방제하기 어려운 해충으로 남아 있다. 또한, 진딧물은 작물 바이러스를 매개로 하므로 실질적으로 다루기 어려운 해충 중의 하나이다. 어떤 경우에는 그을음 병을 유발하기 때문에 농작물의 상품성을 급격히 하락시킬 수 있다.

진딧물 중에서도, 복숭아 혹진딧물은 복숭아 나무, 살구나무, 자두 나무, 벚나무, 귤나무 등을 기주로 하는 진딧물의 하나이다. 복숭아 혹진딧물은 주로 신초나 새로 나온 잎에서 흡즙하여 잎을 세로로 말아 위축시키며, 신초의 생장을 억제한다. 5월 중순 이후에는 여름 숙주인 담배, 오이, 고추 등으로 이동하여 피해가 확산되는 경우가 많다. 복숭아 혹진딧물의 생활사를 야외에서 조사한 결과, 월동란은 3월 하순 - 4월 상순에 부화하며, 부화율은 95% 정도로 알려져 있다. 5월 상순과 중순에 겨울 숙주로 이동하여 11월 상순과 중순 사이에 월동란을 낳는다. 1년간 빠른 개체군은 23세대, 늦은 개체군은 9세대를 영위할 수 있다. 성숙 기간은 약 10.8일, 생식 기간은 약 15.8일, 수명은 28.5일이며, 모두 봄과 가을에는 상기 언급한 기간을 따르고, 여름에는 더 짧은 경향을 나타내어 생활사가 매우 짧다. 또한 암컷 한 마리당 총 산자수는 약 50마리, 최대 산자수는 118마리였으며, 1일 평균 산자수는 3.2마리이었고, 1일 최다 산자수는 13마리로 번식력도 매우 높다(한국응용곤충학회지, 1977년, 139-144p).

복숭아 혹진딧물을 포함하는 진딧물의 방제를 위해, 접촉에 의해 진딧물에 침입하는 곰팡이를 사용하여 진딧물과 같은 흡즙성 곤충을 방제하기 위한 미생물 농약이 연구되고 있다. 곰팡이를 사용하는 살충제는 살포된 포자가 곤충체에 접촉, 발아, 침입하는 살충성 기작으로 작용한다. 그러나, 포자가 곤충체에 접촉함에 있어서 환경에 영향을 많이 받을 수 있고 포자가 살충 효과를 발현하는데 오랜 시간이 걸릴 수 있다는 문제점이 있다. 따라서, 복숭아 혹진딧물을 포함하는 진딧물에 대해 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타낼 수 있는 새로운 균주의 발견이 요구된다. 또한, 살충 효과가 확인된 균주의 상용화를 위해서는 균주로부터 포자의 생산을 최적화할 수 있는 균주의 배양 조건 및 포자 회수 조건에 대한 연구가 추가로 필요하다.

본 발명은 진딧물 특히 복숭아 혹진딧물에 대해 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나 균주, 이의 포자를 생산하는 방법 및 상기 균주 또는 그의 포자를 사용하여 진딧물을 방제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일 구체예는 보베리아 바시아나 KK5 신규 균주를 제공한다.

또한, 본 발명의 일 구체예는 보베리아 바시아나 KK5 신규 균주의 포자를 생산하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명의 일 구체예는 보베리아 바시아나 KK5 신규 균주 또는 이의 포자를 사용하여 진딧물을 방제하는 방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명의 일 구체예는 진딧물에 대해 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) 균주 KK5(KACC 93068P)를 제공한다.

상기 진딧물은 복숭아 혹진딧물(Beauveria bassiana), 조팝나무 진딧물(Aphis citricola Van der Goot), 목화 진딧물(Aphis gossypii Grover), 귤소리 진딧물(Toxoptera citricidus Kirkaldy), 딱총나무 수염 진딧물(Acyrthosiphon magnoliae Essig et Kuwana) 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 진딧물은 예를 들면 복숭아 혹진딧물이 될 수 있다.

본 발명의 보베리아 바시아나 균주 KK5 균주는 국내에서 채집되었고 진딧물을 포함하는 곤충의 사체로부터 분리될 수 있다. 본 발명의 보베리아 바시아나 KK5 균주는 포테이토 덱스트로스 아가(potato dextrose agar, PDA), 또는 사부로드 덱스트로스 아가(sabouraud dextrose agar) 배지에서 주로 생육하는 배양적 특성을 가질 수 있다. 상기 PDA 배지는 포테이토 스타치 4, 덱스트로스 20, 아가 15 g/L를 포함할 수 있지만, 이들 성분에 제한되는 것은 아니다. 상기 사브로드 덱스트로스 아가 배지는 펩토미콜(peptomycol) 10, 글루코스 40, 아가 15 g/L를 포함할 수 있지만, 이들 성분에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 보베리아 바시아나 균주 KK5 균주의 형성된 콜로니는 지름 0.5-2.0 cm로 분말 상태의 미백색이었으며, 콜로니 뒷면은 노란색을 띄는 형태적 특성을 가질 수 있다. 본 발명의 보베리아 바시아나 KK5 균주의 분생포자는 투명하고 구형으로 크기가 2.0-3.0 ㎛이었다. 분생자병(conidiophore)는 둥글거나 플라스크 모양을 하며 여러 개의 분생자병이 모여 군집을 이루고 분생자가 부착되어 있는 레이키스(rachis)는 지그재그(zig-zg) 모양으로 발생하였다.

본 발명의 보베리아 바시아나 균주 KK5 균주는 25℃ 및 pH 5.5에서 최적 생육 조건을 가질 수 있다. 본 발명의 보베리아 바시아나 균주 KK5 균주는 호기성 균으로, 동결시켜 보존할 수 있다.

본 발명자는 국내의 여러 종류의 곤충 사체로부터 분리한 10개의 균주들 중 진딧물 예를 들면, 복숭아 혹진딧물에 대해 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나 균주를 동정하고, 보베리아 바시아나 KK5 균주로 명명하였으며, 2008년 12월 17일 국립농업과학원 농업유전자센터에 기탁하였다(수탁번호 KACC 93068P).

본 발명의 균주 또는 이로부터 생성된 포자는 복숭아 혹진딧물에 처리되었을 때 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타낼 수 있다. 특히, 레카니실리움 레카니(Lecanicillium lecanii) 41185보다 복숭아 혹진딧물에 대해 단 기간에 더 뛰어난 살충 효과를 나타내었다. 하기 표 1에서 살핀 바와 같이, 반수치사시간(LT₅₀)이 다른 균주에 비해 월등히 짧은 레카니실리움 레카니 41185 균주는 복숭아 혹진딧물과 목화 진딧물에 살충 효과가 높다고 알려져 있다.

<표 1>(Keun Kim, J. of Bioscience and Bioengineering 104:498-505).

균주	LT₅₀(day)
균주	Myzus persicae	Aphis gossypii
Lecanicillium lecanii 41185	1.58	1.40
Lecanicillium lecanii 6543	2.43	1.50
Lecanicillium lecanii 6541	2.38	1.49
Lecanicillium fusisporum 4078	4.24	1.60
Cordyceps scarabaeicola J94	4.78	2.50
Paecilomyces farinosus J301	3.06	2.81
Beauveria bassiana J57	4.75	2.70
Paecilomyces fumosoroseus J50	4.11	1.97
Paecilomyces farinosus J302	4.58	5.47
Paecilomyces farinosus J67	3.75	2.16
Nomuraea rileyi J125	4.80	2.18
Metarhizium anisopliae J88	5.66	1.64

본 발명의 균주와 레카니실리움 레카니 41185 균주를 동일한 포자 농도로 복숭아 혹진딧물에 처리하여 살충력을 비교하였다. 본 발명의 균주는 포자 처리 후 3일 내지 5일 이내에 진딧물 살충율이 급격하게 증가하였고, 포자 처리 후 5일이 되 었을 때에는 살충율이 100%에 도달하였다. 그러나, 레카니실리움 레카니 41185 균주는 포자를 처리한 후 6일이 되었을 때야 비로소 살충율이 100%에 도달하였다. 또한, 포자를 처리한 후 3일 내지 5일 이내에 나타난 살충율도 본 발명의 균주보다 훨씬 더 낮았다. 복숭아 혹진딧물은 성숙 기간은 약 10.8일, 생식 기간은 약 15.8일, 수명은 28.5일이고, 여름에는 더 짧은 경향을 나타낸다고 알려져 있다. 특히, 암컷 한 마리당 총 산자수는 약 50마리, 최대 산자수는 118마리였으며, 1일 평균 산자수는 3.2마리이었고, 1일 최다 산자수는 13마리로 높다고 알려져 있다(한국응용곤충학회지, 1977년, 139-144p). 또한, 곰팡이의 포자를 이용한 살충제는 살포된 포자가 충체에 접촉, 발아 및 침입하는 살충성 기작을 갖고 있어, 환경에 영향을 많이 받고 또한 효과 발현이 늦다는 문제점이 있다. 따라서, 포자를 처리한 후 단기간 내에 살충 효과를 나타낼 뿐만 아니라 더 짧은 시간에 100% 살충율에 도달할 수 있는 본 발명의 균주는 복숭아 혹진딧물에 대한 뛰어난 방제 효과를 갖는 미생물로 사용될 수 있다.

본 발명의 일 구체예는 보베리아 바시아나 균주를 배양하여 보베리아 바시아나 균주의 포자를 생산하는 방법을 제공한다. 구체적으로, 보베리아 바시아나 균주의 포자를 생산하는 방법은 보베리아 바시아나 균주의 접종균을 고체 배양 배지에서 배양하여 보베리아 바시아나 균주의 포자를 생산하는 단계를 포함할 수 있다.

고체 배양 배지는 PDA 배지, 기질로 쌀을 포함하는 배지 또는 기질로 밀기울을 포함하는 배지를 사용할 수 있지만, 이들에 제한되는 것은 아니다. 고체 배양 배지의 기질로는 백미(white rice), 현미(brown rice), 왕겨, 밀기울, 미강 또는 부서진 백미 등을 사용할 수 있다. 고체 배양 배지의 기질은 배지에 대해 60-77%로 첨가될 수 있다. 예를 들면 밀기울을 사용할 수 있다. 특히 고체 배양 배지의 기질로 백미를 사용하였을 때 포자 생산량은 2.69g 포자/백미 100g이었고, 밀기울을 사용하였을 때 포자 생산량은 6.0g 포자/밀기울 100g이 되었다.

고체 배양 배지의 수분 함량은 23-40%, 예를 들면 30%로 할 수 있다. 고체 배양 배지에서 배양 온도는 23-30℃, 예를 들면 25℃로 할 수 있다. 고체 배양 배지에서의 배양의 최적 배양 용기는 비닐 주머니(통풍구 3.6 cm)로 할 수 있다.

보베리아 바시아나 균주의 접종균을 고체 배양 배지에서 배양하는 단계는 23-30℃에서 10-14일 동안 수행될 수 있다.

고체 배양 배지에 사용할 접종균은 보베리아 바시아나 균주를 액체 배양 배지에서 배양시켜 얻을 수 있지만, 이들에 제한되는 것은 아니다. 상기 액체 배양 배지는 보베리아 바시아나 균주를 배양할 때 통상적으로 사용되는 액체 배양 배지를 포함할 수 있다. 2% 농도의 쌀겨를 포함하는 액체 배양 배지에서 2일 동안 배양시킨 보베리아 바시아나 균주의 접종균을 사용할 수 있다. 또는 예를 들면, 고체 배양 배지에 접종시킬 접종균은 액체 배양 배지에 밀기울을 포함시키고 2일 동안 배양시킨 것을 사용할 수 있다. 또는 예를 들면, 액체 배양 배지는 옥수수 가루 3%, 미강 2%, 콘 스티프 분말 2%로 구성될 수 있다.

보베리아 바시아나 균주는 국내에서 채집되었고 진딧물을 포함하는 곤충의 사체로부터 분리될 수 있다.

실례로, 고체 배양 배지에 접종할 접종균을 준비하기 위하여 보베리아 바시아나 균사체를 백금니로 포테이토 덱스트로스 아가(PDA, Difco)의 표면 전체에 접종하고 25℃에서 2주일 동안 배양하였다. 포자 용액을 만들기 위하여, 0.02% Tween 80 수용액을 상기 PDA 배지 위의 균사체와 포자 위에 붓고, 유리 하키(hockey) 봉으로 문지른 후 포자 용액을 피펫으로 수거하였다. 포자 개수는 현미경 하에서 haemocytometer(Superior, Marienfeeld, 독일)로 계수한 후, 0.02% Tween 80 수용액으로 5 x 10⁶ 포자/ml가 되도록 희석하였다. 1 ml의 포자 용액을 다시 250 ml 플라스크 내의 50 ml의 액체 배지에 접종하였다. 액체 배지는 미강 2%, 옥수수 가루 3%, 콘 시티프 분말 2%, pH 5.2로 구성하였고, 25℃ 회전식 배양기에서 200 rpm으로 2일 동안 배양하였고, 이 배양액을 고체 배양 배지에 접종할 접종균으로 사용하였다. 고체 배양 배지(쌀, 부서진 쌀 또는 밀기울을 포함)는 증류수, 0.1 M NaH₂PO₄로 배지내 수분 함량과 pH를 조정한 후 121℃에서 25분 동안 스팀 멸균하였다. 이들 멸균된 고체 배양 배지에 10%의 액체 배양에서 얻은 접종균을 1 g의 고체 배지 당 10⁷ 포자가 되도록 접종하였고, 이 접종된 고체 배양 배지는 25℃에서 상대 습도(RH) 50-70%로 10-14일 동안 고체 배양(solid state fermentation)하여 포자(aerial conidia)를 생산할 수 있다.

상기 보베리아 바시아나 균주의 포자를 생산하는 방법은 생성된 포자를 회수하는 단계를 더 포함할 수 있다. 생성된 포자를 회수하는 단계는 수작업 체(hand-sieve), 기계적인 체 진동기(sieve-vibrator), 또는 포자를 기계적으로 자동 회수 시켜 주는 포자 수확기(conidia-harvestor)를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면 포자 수확기를 사용하여 포자를 회수할 수 있다. 체 진동기로 포자를 회수할 때 진동폭이 클수록 포자 회수율이 높을 수 있다. 체 진동기의 진동폭을 0.1-3.0 mm, 예를 들면 2.5 mm로 할 수 있고, 진동 처리 시간은 1-5분, 예를 들면 3분으로 할 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예는 보베리아 바시아나 KK5 신규 균주의 포자를 작물에 접촉시켜 진딧물을 방제하는 방법을 제공한다. 상기 진딧물은 복숭아 혹진딧물, 조팝나무 진딧물, 목화 진딧물, 귤소리 진딧물, 딱총나무 수염 진딧물 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 방법은 균주의 포자 그 자체를 작물에 접촉하도록 적용하거나 또는 미생물 농약에서 통상적으로 사용되는 액체에 첨가하여 작물에 접촉하도록 적용할 수 있다. 상기 작물은 고추, 배추, 복숭아, 사과, 상추, 오이, 청경채, 파프리카 등을 포함할 수 있다. 작물에 적용되는 균주 또는 포자의 양은 작물의 종류, 균주 또는 포자를 접촉시킬 때의 기후 조건 등에 따라 변경시킬 수 있다. 예를 들면, 1 x 10⁷ 포자/ml - 1 x 10⁸ 포자/ml의 함량으로 적용할 수 있다.

본 발명의 균주 또는 이로부터 생성된 포자는 복숭아 혹진딧물에 대해 단기간에 뛰어난 살충 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명의 포자 생산 방법은 살충력이 확인된 균주의 포자 생산을 증가시켜 균주의 상용화를 가능하게 할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예

방법 1. 균주 분리 및 포자 생산

국내에서 채집한 여러 종류의 곤충 사체를 2% 소듐 히드로클로라이드로 소독한 후, PDA 배지 상에 포자를 떨어뜨려 10일간 배양한 후 분리하였다

분리한 10개의 균주는 보베리아 바시아나 균주로 확인되었다.

분리한 10개의 균주의 균사체와 포자를 0.05% 트윈 80에 10% 글리세롤을 함유하는 용액에 넣고 -80℃에서 보관하였다. 녹인 균주 용액을 PDA(potato dextrose agar, Difco) 배지에 접종하고 25℃에서 2주일 동안 배양하였다. 얻은 배양물을 PDA 고체 배지(포테이토 스타치 4, 덱스트로스 20, 아가 15 g/L) 위에 넣고 0.02% 트윈 80 수용액을 부은 다음, 유리 하키(hocky) 봉으로 문지른 후 포자 용액을 피펫으로 수거하였다. 포자 개수를 현미경 하에서 haemocytometer(Superior, Marienfeel, 독일)로 계수한 후, 5 x 10⁶ 포자/ml가 되도록 0.02% 트윈 80 수용액으로 희석하여 포자 용액을 만들었다. 포자 용액 1 ml를 250 ml 플라스크 내의 50 ml의 액체 배양 배지(옥수수 가루 3%, 미강 2%, 콘 스티프 분말 2%, pH 5.2)에 접종하였다. 회전식 배양기에서 200 rpm으로 25℃에서 2-9일 동안 배양시켰다. 접종 후 2일부터 24시간 간격으로 haemocytometer로 포자의 개수를 계수하였다.

얻은 접종균을 121℃에서 25분 동안 멸균시킨 고체 배양 배지(고체 배양 기질: 백미, 부서진 백미 또는 밀기울 70%, 증류수, 0.1M NaH₂PO₄)에 1g의 고체 배양 배지 당 10⁷ 포자가 되도록 접종하였다. 접종된 고체 배양 배지를 25℃에서 상대 습도 50-70%로 1일-14일 동안 배양하여 포자를 생성하였다. 포자가 배양된 고체 배양 배지를 35℃에서 24시간 동안 건조시켰다(수분 함량 10%). 얻은 건조된 기질을 수작업 체로서 1차로 450㎛, 2차로 125㎛의 체로 걸러 포자를 회수하였다.

방법 2. 복숭아 혹진딧물 살충 효과 및 균주 선별

분리한 10개 균주로부터 상기 방법에 따라 얻은 포자를 0.02% 트윈 80 수용액에 용해시켰다. 얻은 포자 용액을 복숭아 혹진딧물이 있는 배추(Chinese cabbage)의 뒷면에 25℃ 및 75% 상대 습도 조건 하에서 처리하였다. 처리된 포자의 농도는 1 x 10⁷개 포자/ml이었다. 양성 대조군으로 레카니실리움 레카니 41185 균주에 대해서도 동일한 방법으로 처리하였다. 음성 대조군으로 0.02% 트윈 80을 동일한 방법으로 처리하였다. 표 2와 도 1은 포자를 처리한 후 경과한 시간에 따른 복숭아 혹진딧물의 살충율을 나타낸 것이다.

<표 2> 포자를 처리한 후 경과한 시간에 따른 복숭아 혹진딧물 살충율(%)

균주	포자 처리 후 경과 일수
균주	1일	2일	3일	4일	5일	6일	7일	8일
대조군	0	0	0	0	0	0	0	0
레카니실리움 레카니 41185	0.00	12.50	54.17	65.22	82.61	100.00	100.00	100.00
보베리아 바시아나 KK2	0.00	12.50	20.83	34.78	69.57	73.91	78.26	81.82
보베리아 바시아나 KK3	0.00	20.83	29.17	39.13	43.48	47.83	52.17	50.00
보베리아 바시아나 KK4	4.00	0.00	33.33	30.43	39.13	43.48	60.87	72.73
보베리아 바시아나 KK5	12.00	25.00	58.33	86.96	100	100	100	100
보베리아 바시아나 KK6	24.00	20.83	41.67	47.83	60.87	69.57	52.17	59.09
보베리아 바시아나 KK7	4.00	20.83	33.33	56.52	65.22	73.91	86.96	90.91
보베리아 바시아나 KK8	0.00	12.50	29.17	43.48	65.22	69.57	73.91	72.73
보베리아 바시아나 KK9	0.00	0.00	8.33	30.43	30.43	34.78	52.17	81.82
보베리아 바시아나 KK10	8.00	12.50	29.17	47.83	78.26	82.61	82.61	86.36
보베리아 바시아나 KK11	8.00	4.17	33.33	34.78	47.83	52.17	52.17	54.55
보베리아 바시아나 57	0.00	20.83	45.83	52.17	65.22	65.22	78.26	77.27

도 1은 균주의 포자 처리 후 경과 시간에 따른 복숭아 혹진딧물 살충율을 나타낸 것이다. 표 2와 도 1에 의할 때, 보베리아 바시니아 KK5 균주는 포자 처리 후 3일 내지 5일 사이에 복숭아 혹진딧물에 대한 살충 효과가 급격히 증가하였고, 5일 이내에 100%의 살충 효과를 나타내었다. 반면에, 양성 대조군인 레카니실리움 레카니 41185 균주는 3일 내지 5일 사이에 살충 효과가 보베리아 바시니아 KK5 균주에 비하여 낮았다. 또한, 포자를 처리하고 6일 후에 100% 살충 효과에 도달하였다. 따라서, 보베리아 바시니아 KK5 균주는 종래 복숭아 혹진딧물에 대해 살충 효과가 높다고 알려져 있는 레카니실리움 레카니 41185 균주에 비하여 단기간에 뛰어난 살충 효과를 얻을 수 있다. 본 발명자는 보베리아 바시니아 KK5 균주를 2008년 12월 17일 국립농업과학원 농업유전자센터에 기탁하였고, 2008년 12월 18일 수탁번호 KACC 93068P을 받았다.

방법 3. 보베리아 바시니아 KK5 균주의 포자 생산 최적화

(1) 포자 생산의 최적화를 위한 고체 배양 조건

포자 생산은 2 단계를 거친다. 1 단계에서 액체 배양을 한 후, 2 단계에서 이 액체 배양균을 고체 배지에서 접종하고 배양하여 포자를 생산한다. 포자 생산용 고체 배지에 접종할 접종균을 액체 배양으로 제조하기 위해서, 액체 배양 배지로 미강 2%, 옥수수 가루 3%, 콘 스티프 분말 2%의 혼합물(미강 혼합물) 또는 PDB(potato dextrose broth)를 포함하는 배지에서 서로 다른 시간 동안 배양시킨 균주 배양액을 고체 배지에 접종하고 배양한 다음 생성된 포자 분말의 함량을 측정하였다. 도 2는 미강 2%, 옥수수 가루 3%, 콘 스티프 분말 2%의 혼합물(미강 혼합물) 또는 PDB를 포함하는 배양액을 접종한 고체 배지로부터 생성된 포자 분말 함량을 나타낸 것이다. 미강 2%, 옥수수 가루 3%, 콘 스티프 분말 2%의 혼합물(미강 혼합물)을 포함하는 액체 배양 배지에서 2일 동안 배양시킨 균주를 고체 배양 배지 접종균으로 사용하였을 때 고체 배지에서 가장 많은 포자량을 생산하였다.

상기 방법 1에서 고체 배양 배지의 수분 함량(moisture content, MC)을 23%, 26%, 30% 또는 40%로 변화시켰을 때, 배양 경과 시간에 따라 생성된 포자 개수를 확인하였다. 도 3은 고체 배양 배지의 수분 함량을 23%, 26%, 30% 또는 40%로 변화시켰을 때 생성된 포자 개수를 나타낸 것이다. 수분 함량을 30%로 하였을 때, 포자가 최대로 생산되었다.

상기 방법 1에서 고체 배양 온도를 25℃, 27℃ 또는 30℃로 변화시켰을 때, 배양 경과 시간에 따라 생성된 포자 개수를 확인하였다. 도 4는 고체 배양 온도를 25℃, 27℃ 또는 30℃로 변화시켰을 때, 생성된 포자 개수를 나타낸 것이다. 고체 배양 온도를 27℃로 하였을 때, 포자가 최대로 생산되었다.

상기 방법 1에서 고체 배양 배지의 기질을 백미, 현미, 왕겨, 밀기울 또는 부서진 백미로 변화시켰을 때, 생성 포자 분말 함량을 측정하였다. 도 5는 고체 배양 배지의 기질에 따라 생성된 포자 분말 함량을 비교한 것이다. 고체 배양 배지로 밀기울을 사용하였을 때 가장 많은 포자량을 생산하였다.

(2) 포자 생산의 최적화를 위한 포자 회수 조건

상기 방법 1에서 수작업 체에 의해 포자를 회수하였을 때, 고체 배양 기질을 일반 쌀, 부서진 쌀, 또는 밀기울로 달리하여 포자 회수율을 측정하였다. 도 6은 고체 배양 기질에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다. 고체 배양 배지의 기질을 부서진 쌀로 하였을 때 가장 높은 포자 회수율을 나타내었고, 그 다음은 밀기울이었다. 밀기울의 경우는 원료 대비 생산 수율이 가장 높게 나타났다.

상기 방법 1에서 수작업 체 대신에 체 진동기를 사용하여 포자를 회수하였을 때, 진동폭과 처리 시간을 달리하여 포자 회수율을 측정하였다. 도 7과 도 8은 체 진동기의 진동폭과 처리 시간에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다. 최적 진동폭은 2.5mm로 나타났고, 최적 진동 처리 시간은 3분이었다.

상기 방법 1에서 고체 배양 기질로 일반 쌀 또는 부서진 쌀을 사용하고, 포자 회수 방법을 수작업 체 또는 체진동기로 달리하였을 때, 포자 회수율을 측정하였다. 도 9는 수작업 체 또는 체진동기에 따라 포자를 회수하였을 때 포자 회수율을 나타낸 것이다. 수작업 체와 체진동기 둘 다 부서진 쌀을 사용하였을 때 포자 회수율이 높았다.

상기 방법 1에서 고체 배양 기질로 일반쌀을 사용하고, 포자 회수 방법을 수 작업체, 체 진동기 또는 포자 수확기로 달리하였을 때, 포자 회수율을 측정하였다. 도 10은 포자 회수 방법에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다. 포자 수확기를 사용하였을 때 포자 회수율이 높았다.

도 1은 서로 다른 균주의 포자를 처리한 후 경과 시간에 따른 복숭아 혹진딧물 살충율을 나타낸 것이다.

도 2는 미강 혼합물(미강 2%, 옥수수 가루 3%, 콘 스티프 분말 2%의 혼합물) 또는 PDB를 포함하는 배양액을 접종한 고체 배지로부터 생성된 포자 분말 함량을 나타낸 것이다.

도 3은 고체 배양 배지의 수분 함량을 변화시켰을 때 생성된 포자 개수를 나타낸 것이다.

도 4는 고체 배양 온도를 변화시켰을 때 생성된 포자 개수를 나타낸 것이다.

도 5는 고체 배양 배지의 기질을 변화시켰을 때 생성된 포자 분말 함량을 비교한 것이다.

도 6은 고체 배양 기질을 변화시켰을 때 포자 수득율을 나타낸 것이다.

도 7은 체 진동기의 진동폭에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다.

도 8은 체 진동기의 처리 시간에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다.

도 9는 수작업 체 또는 체진동기에 따라 포자를 회수하였을 때 포자 회수율을 나타낸 것이다.

도 10은 포자 회수 방법에 따른 포자 회수율을 나타낸 것이다.

Claims

진딧물에 대해 살충 효과를 갖는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) KK5 균주 KACC 93068P.
제1항에 있어서, 상기 진딧물은 복숭아 혹진딧물(Myzus persicae)인 것인 보베리아 바시아나 KK5 균주 KACC 93068P.
보베리아 바시아나 균주의 접종균을 고체 배양 배지에서 배양하여 보베리아 바시아나 균주의 포자를 생산하는 단계를 포함하는 보베리아 바시아나 KK5 균주 KACC 93068P의 포자를 생산하는 방법.
제3항에 있어서, 상기 고체 배양 배지는 백미(white rice), 부서진 백미(broken white rice), 밀기울(wheat bran)을 포함하는 것인 방법.
제1항의 보베리아 바시아나 KK5 균주 KACC 93068P 또는 이의 포자를 작물에 접촉시켜 진딧물을 방제하는 방법.
제5항에 있어서, 상기 진딧물은 복숭아 혹진딧물인 것인 진딧물을 방제하는 방법.