KR100981407B1

KR100981407B1 - 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균복합체를 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100981407B1
Application number: KR1020080030969A
Authority: KR
Inventors: 안기웅; 조병기; 최민희
Original assignee: (주)더페이스샵
Priority date: 2008-04-02
Filing date: 2008-04-02
Publication date: 2010-09-10
Also published as: KR20090105491A

Abstract

본 발명은 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 연잎 추출물 40 ∼ 80중량%, 지부자 추출물 10 ∼ 50중량% 및 지골피 추출물 10 ∼ 50중량%를 혼합한 천연항균 복합체를 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 ~ 20.0중량%를 함유시켜 화장료 조성물을 제조함으로써 그람음성 세균과 양성 세균 및 효모와 곰팡이에 매우 우수한 항균 활성을 나타내고, 항균 스펙트럼이 넓어 방부능력이 우수하며, 제형의 안정성에 영향을 주지 않고 피부 자극도 거의 없는 효과가 있다.

연잎 추출물, 지부자 추출물, 지골피 추출물, 항균, 화장료, 조성물

Description

연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물{The cosmetic composition containing the natural antibiotic-complex consisted of the nelumbo nucifera leaf extracts, Kochia scoparia extracts and Lycium chinense extracts}

본 발명은 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 연잎 추출물 40 ∼ 80중량%, 지부자 추출물 10 ∼ 50중량% 및 지골피 추출물 10 ∼ 50중량%를 혼합한 천연항균 복합체를 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 ~ 20.0중량%를 함유시켜 화장료 조성물을 제조함으로써 그람음성 세균과 양성 세균 및 효모와 곰팡이에 매우 우수한 항균 활성을 나타내고, 항균 스펙트럼이 넓어 방부능력이 우수하며, 제형의 안정성에 영향을 주지 않고 피부 자극도 거의 없는 효과가 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

화장품에는 물을 포함하여 다양한 영양분을 포함하고 있으므로 세균이나 진균에 의한 오염이 일어나기 쉽다. 화장품의 미생물 오염이 주는 부정적인 측면은 두 가지로 요약할 수 있는데 첫 번째는 소비자의 건강에 미치는 위험성이고, 두 번 째는 상품 가치의 하락이다. 화장품은 대부분 사용방법이 피부에 도포하는 특징을 가지고 있으므로 미생물이 오염된 제품을 피부에 도포할 경우 상처를 통해 유입된 미생물로 인해 염증이나 피부 트러블이 발생할 수 있다. 특히, 병원성 미생물이 오염되었을 경우에는 건강에 심각한 문제를 일으킬 수도 있다. 그 외 곰팡이나 세균이 증식된 제품은 변취나 유화의 파괴, 제품 pH 변화로 인한 제품 성상의 변화를 유발하여 상품의 가치를 하락시키는 결과를 가져온다. 이와 같은 이유로 화장품은 그 제형의 특성에 따라 적합한 수준의 방부시스템이 설정되어야 한다. 화장품에 사용할 수 있는 방부제는 각 나라 마다 차이가 있는데 국내의 경우 식품의약품안전청 고시에 의해 화장품에 사용 가능한 방부제 종류 및 배합한도가 지정되어 있다(화장품법 제4조 3항, 제9조 및 제13조 6항, 식약청 고시 2000-27호).

이러한 방부효과를 갖는 방부제로는 대부분은 제조가 쉽고 원가가 싸며 대량생산이 용이한 인공적으로 합성한 물질이 주를 이루고 있다. 이러한 방부제 중 대표적인 화장품 방부제로는 파라옥시안식향산에스텔류인 메틸 파라벤(Metyl Paraben), 에틸 파라벤(Ethyl Paraben), 프로필 파라벤(Propyl Paraben), 부틸 파라벤(Butyl Paraben) 등과 쿼터늄-15(Quaternium-15), 이미다졸리디닐 우레아(Imidazolidinyl Urea) 디아졸리디닐 우레아(Diazolidinyl Urea), 페녹시에탄올(Phenoxyethanol), 염화벤잘코늄(Benzalkonium Chloride), 글루콘산 클로로헥시딘(chlorohexidine gluconic acid) 및 트리클로산(Trichlosan) 등의 화학 방부제를 들 수 있다. 그러나, 이러한 화학 방부제들은 미생물의 생육을 저해하여 화장품에 안정성을 부여하지만, 동시에 사용자의 피부에 자극을 유발시키는 원인이 되기도 한다. 대표적인 예로 포르말린 유리형 방부제를 들 수 있는데, 디아졸리디닐우레아와, 이미다졸리디닐 우레아를 포함한 포르말린 유리형 방부제는 최근 전 세계적으로 안전성에 대한 재검토가 이루어져 그 사용이 감소추세에 있으며 두발 세정용 제품 및 몇몇 워시오프 제품으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 또한, 일본을 포함한 몇몇 국가에서는 사용이 금지되거나 그 사용을 엄격히 제어하고 있다. 이러한 포르말린 유리형 방부제는 구조 중에 포함된 포르말린 그룹이 시간 경과에 따라 서서히 유리하는 것으로 알려져 있으며, 이렇게 유리된 포르말린은 피부 자극을 유발할 뿐만 아니라, 암을 유발할 가능성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.

또한, 기존의 화학 방부제로서 가장 안전하며 화장품, 의약품에 범용적으로 사용되는 파라벤류의 방부제들조차 피부알러지(Andrea Counti등, Contact Dermatitis, 1997, 37, 35-36.)와 환경호르몬으로서의 가능성(Edwin 등, Toxicology and Applied Pharmacology, 1998, 153, 12-19.) 및 내성균 유발이라는 문제점을 가지고 있다. 뿐만 아니라 허용된 기준내의 사용도 불신되고 있고 지속적인 체내 축적으로 인한 만성 독성, 돌연변이 유발 등의 새로운 문제 가능성이 대두되고 있다(신동화, 식품과학과 산업, 1990, 23(4) 68-72).

상기한 바와 같이 이러한 화학 방부제의 부작용은 사용자로 하여금 제품에 대한 신뢰도를 저하시켜 궁극적으로는 화장품 및 미용제품에 대한 소비자의 불만요인으로 작용하고 있는 실정이다. 따라서, 가급적 화장료에서 방부제의 함량을 줄이고, 합성 방부제를 사용하지 않는 무방부제 시스템에 대한 활발한 연구가 진행되고 있으며, 또한, 기존의 화학 방부제가 가지는 부작용을 해결하고 제품의 안전성을 위해 피부에 대한 저자극성 및 독성과 내성이 없는 천연 방부제의 필요성이 대두되고 있다.

현재까지 천연 항균성 물질에 대한 연구로는 알카로이드(alkaloid), 플라보노이드(flavonoid), 피토알렉신(phytoalexin), 항균펩타이드 및 유기산과 지방산 등의 항균성이 보고되었으며, 주 기작이 산의 pH에 의한 효과 및 킬레이트(chelate)에 의한 효과에 의한 것으로 추정되고 있다(EI-shenawy, MA등, J. Food Protec., 1989, 52(11), 771-778 ) (Bizri, JN 등, J. Food Science, 1994, 59(1), 130-135). 그러나, 이러한 천연 항균성 원료 중 향신료, 한약재 등의 일부는 너무 짙은 색상 및 원료취가 강한 특성이 있어 미려한 제품의 성상이 요구되는 화장품에 사용이 제한적이거나 부적합한 특징이 있으며, 일부 원료의 경우, 화장품의 점도를 저하시키고, 유화 시스템에 영향을 미쳐 화장품 원료로서 사용하는데 어려움이 있다. 또한, 화학 방부제에 비해 좁은 항균스펙트럼을 가지며, 식물 추출물에 포함된 항균 활성 성분이 화학 방부제에 비해, 열, 빛, 산소 등에 대한 물리화학적 안정성이 매우 낮은 경우가 많아, 유통기간 중 항균활성 성분이 분해되어 소비자의 실제 사용 시엔 충분한 방부활성을 제공할 수 없는 문제점을 가지고 있는 등 천연 물질로서의 한계성으로 인해 대부분이 상용화되지 못하고 있는 실정이다.

상용화된 천연항균제로는 편백 추출물인 희노키티올(Hinokitiol), 목련 추출물인 메그노놀(Megnonol), 자몽종자추출물(DF-100) 등이 개발되었으나, 대부분 경제성 및 항균스펙트럼, 사용범위의 제한성 등의 문제점으로 인해 보다 진보된 천연항균제가 필요한 실정이다.

항균펩타이드도 병용효과를 위한 대안으로서 많은 연구가 진행되었지만(Giacometti A 등, J. Antimicrob. Chemother 2000, 46(5), 807-811), 이들은 물리화학적 성질상 펩타이드이기 때문에 열에 비교적 약하며, 특히 자연계에 널리 존재하는 단백질 분해효소에 매우 취약하기 때문에 범용적으로 사용하기에는 한계가 있다. 더구나, 이들은 작용 기작 상 세균과 진균 및 동물세포에 대한 선택성이 결여되어 있어 의약품으로 사용하기에도 한계가 있으며, 제조과정에 있어서도 미생물 배양 및 이를 분리 정제하여 생산해야 하기 때문에 제조단가가 비교적 고가일 수 밖에 없다(Lee JH 등, Protein. Expr. Purif, 1998 Feb; 12(1), 53-60).

특허 제10-0481637호에서 테트라아세틸파이토스핑고신, 펜틸렌 글라이콜(Hydrolite-<25> 5), 폴리글리세릴-2라우레이트/글리세릴카프레이트/폴리글리세릴-10라우레이트, 자몽 종자 추출물, 동충하초 추출물을 각 처방에 맞게 첨가한 것으로 특징으로 하는 무방부제 화장품 조성물을 개시하고 있으나, 자몽 종자 추출물 및 동충하초 추출물을 제외하고는 화학 합성원료를 이용한 무방부제 화장품 조성물로서 피부 자극 유발 가능성이 있으며, 테트라아세틸파이토스핑고신 등의 경우는 용해도가 매우 낮은 특성이 있어 다양한 형태의 제형이 요구되는 화장품에 대한 적용이 제한되는 등의 문제점이 있다.

또한, 특허출원 제10-2001-0006372호에서 키토올리고당 착화합물과 황금추출물을 포함하는 천연항균제에 관한 기술을 개시하고 있으나, 상기 천연항균제는 기존 천연항균제와 마찬가지로 안정성이 저하되고, 그람음성세균에 비해 그람양성균이 더 효과적이고 진균류에 대해서는 비교적 약한 항균력을 보이며 세포벽 내에 키 토산을 함유한 속에 대해서는 미미한 항균 활성을 나타내는 등 좁은 항균스펙트럼을 가지므로 사용범위에 제한성이 따를 뿐만 아니라 제형상의 문제점으로 인하여 상용화에 많은 어려움을 가지고 있다(Riccardo M등, Antimicrobial Society and Chemotheraphy, 1990, 34, 2019-2023).

뿐만 아니라, 특허출원 제10-2004-0080717호에서 방부 및 항균 활성을 갖는 키토산 및 자몽 종자 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 개시하고 있으나, 자몽 종자 추출물 및 키토산의 경우, 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 등의 그람음성세균에 약한 항균활성을 나타내며, 키토산의 강한 양전하로 인해 화장품에 대한 적용이 제한되는 등의 문제점이 있어 다양한 형태의 화장품에 적용이 어려운 실정이다.

따라서, 본 발명의 목적은 기존의 화학 방부제가 가지는 부작용을 해결하고, 기존 천연 항균제 등의 화장품 원료로서의 문제점을 해결하며, 그람음성 세균 및 그람양성 세균, 곰팡이와 효모를 포함한 진균류에 대해 매우 우수한 항균 활성을 나타내고, 항균 스펙트럼이 넓어 화장료에 대한 방부능력이 우수하며, 제형의 안정성에 영향을 거의 주지 않고 피부 자극이 없는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적 뿐만 아니라 용이하게 표출되는 다른 목적들을 달성하기 위하여 본 발명에서는 연잎 추출물 40 ∼ 80중량%, 지부자 추출물 10 ∼ 50중량% 및 지골피 추출물 10 ∼ 50중량%를 혼합한 천연항균 복합체를 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 ~ 20.0중량%를 함유시켜 화장료 조성물을 제조함으로써 그람음성 세균과 양성 세균 및 효모와 곰팡이에 매우 우수한 항균 활성을 나타내고, 항균 스펙트럼이 넓어 방부능력이 우수하며, 제형의 안정성에 영향을 주지 않고 피부 자극도 거의 없는 화장료 조성물을 얻을 수 있었다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 그람음성 세균과 양성 세균 및 효모와 곰팡이에 매우 우수한 항균 활성을 나타내고, 항균 스펙트럼이 넓어 방부능력이 우수하며, 제형의 안정성에 영향을 주지 않고 피부 자극도 거의 없는 효과가 있었다.

본 발명에 따른 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물은 연잎 추출물 40 ∼ 80중량%, 지부자 추출물 10 ∼ 50중량% 및 지골피 추출물 10 ∼ 50중량%를 혼합한 천연항균 복합체를 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 ~ 20.0중량% 함유하는 것으로 특징지워진다.

본 발명에서 사용되는 연잎은 미나리아재비목 수련과의 여러해살이 수초로서 연(Nelumbo nucifera)이라고도 하고, 비타민 C와 비타민 B₁₂ 및 아스파라긴, 아르기닌, 티로신 같은 아미노산이 함유되어 있어 피로회복 및 피부미용 개선작용 등에 효과가 있음은 물론 로에메린(roemerine)과 누시페린(nuciferine) 성분의 진통 진정작용이 있어 신경과민이나 스트레스 등에 효과가 있고, 민간에서는 폐렴, 기관지천식, 임질, 강장, 소화불량 뿐만 아니라 뱀과 독벌레에 물렸을 때 사용하는 것으로 알려져 왔다.

연잎은 가능한 6월 초순부터 10월 중순에 채취하게 되는데 통상 연잎은 6월 초순에 나기 시작해서 10월 중순이 되면 연잎이 퇴색하기 때문에 가능한 그 전에 채취하여 사용한다. 본 발명에서 사용되는 연잎은, 하엽(荷葉)이라고도 하며 약리적인 작용으로는 설사, 두통과 어지럼증, 토혈, 코피 등 출혈증, 산후 어혈치료, 야뇨증에 쓰이고 있으며, 각종 독성물질에 대한 중화작용을 한다. 특히, 흡연자에게는 니코틴을 제거시켜 주는 해독작용이 있다. 또한, 일반적으로 연잎은 해독효과와 함께 피를 맑게 해주며, 지혈작용, 항균작용과 혈압저하 작용이 있는 것으로 알려져 있고 특히, 동의보감에서는 연잎의 꼭지를 특별히 하비(荷鼻)라 부르며 이 부 분이 임신한 여성의 태를 편안하게 해주고 나쁜 피를 없애주는 효과가 있다고 일러준다. 연잎을 이용한 차로는 중국 고래의 감비차(減肥茶)(연잎, 율무, 산사자, 진피 등 함유)가 있는데, 다이어트와 피부미용에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

지부자(Kochia scoparia)는 명아주과의 쌍떡잎식물로 댑싸리, 낙추자, 천두자라 불리며 원산지는 유럽 및 아시아다. 일년초로 줄기가 단단하고 높이는 1M 내외이며, 줄기는 처음에 녹색이었다가 붉게 된다. 잎은 피침형 혹은 선상피침형으로 어긋나게 자라고 양끝이 좁고 가장자리가 밋밋하고 3개의 맥이 있으며 길이는2 ~ 5cm, 폭은 2 ~ 8mm로 긴 털이 나 있다. 꽃은 7 ~ 8월에 연한 녹색으로 피는데, 대가 없는 꽃이 잎겨드랑이에 몇 개씩 모여 달리고 꽃 밑에 포(苞)가 있으며, 윗부분의 잎이 포처럼 작아지므로 전체가 수상꽃차례[穗狀花序]로 된다. 양성화(兩性花)와 암꽃이 같이 달리고 꽃받침은 꽃이 핀 다음 자라서 열매를 둘러싸며 뒤쪽의 것은 날개같이 된다. 수술은 5개이고 씨방은 넓은 달걀 모양이다.

식물체는 마른 다음 빗자루를 만들고 종자는 약용으로 사용하는데 한방에서 과실을 지부자(地膚子) 혹은 천두자(千頭子), 낙추자라 하며, 성질은 차고(寒) 맛이 쓰며(苦) 독이 없어 8월과 9월에 씨를 받아 그늘에서 말린 것을 강장약으로 음위, 수종, 흉통, 동통, 치습, 보약, 적리, 임질, 이뇨, 방광염, 오줌소태, 악창, 명목, 과실중독, 변비 등에 약재로 사용하고 항균작용이 있어 각종 염증과 습진과 창독, 옴, 버짐 등에도 효과가 있다. 또한, 댑싸리 잎은 지부엽(地膚葉)이라 하여 음력 4월과 5월에 뜯어 복용하면 장위(腸胃)를 수렴하여 설사를 멈추고, 악창의 독을 풀어 주며, 눈을 씻으면 눈에 열이 있으면서 잘 보지 못하는 것과 밤눈증(雀盲) 이 있으면서 깔깔하고(澁) 아픈 것을 낫게 한다고 한다.

지골피(학명 Lycium chinense)는 구기자 나무의 뿌리 껍질을 건조시킨 것으로 땅속에 들어 있고 근피를 벗기면 뼈만 남아 있는다 하여 붙여진 이름이다. 구기자는 쌍떡잎 식물 통화식물목 가지과의 낙엽 관목으로 높이는 1 ~ 2m정도이나 다른 물체에 기대어 자란 것은 4m에 이르기도 한다. 줄기는 비스듬히 자라고 끝이 밑으로 처진다. 흔히 가시가 있으나, 없는 것도 있고 잔가지는 노란빛을 띤 회색이고 털이 없다. 잎은 어긋나는데 여러 개가 뭉쳐나고 넓은 달걀 모양 또는 달걀 모양 바소꼴이다. 6 ~ 9월에 자줏빛 꽃이 1 ~ 4개 잎겨드랑이에서 나와 피고 화관은 종 모양으로 5갈래로 갈라지며 끝이 뾰족하다. 열매는 장과로 달걀모양 또는 타원형으로 8 ~ 9월에 붉게 익는다.

한방에서는 가을에 열매와 뿌리를 채취하여 햇볕에 말려 쓰는데 열매를 말린 것을 구기자라 하고 뿌리껍질을 말린 것을 지골피라 한다. 지골피의 생김새는 관상 또는 조각 모양으로 바깥 면은 황색, 회갈색이고 안쪽 면은 회색이며 껍질은 비늘 모양으로 벗겨지기 쉽다.

지골피는 성질이 달고 심심하고 차서 위(上)에서는 폐열(肺熱)을 쳐서 咳喘을 치료하고 아래(下)에서는 신열(腎熱)을 쳐서 골증(骨蒸)을 치료한다. 본초강목에서는 구기잎은 상초의 객열(客熱)을 없애고 지골피는 하초(下焦)의 허혈(虛血)을 내리게 한다고 기재되어 있다. 약리 작용은 심혈관계통의 혈압강하작용, 혈당강하작용이 보고되어있고, 몸이 허약하여 생기는 식은땀, 해수, 천식, 토혈, 코피, 소변출혈, 고혈당, 고혈에 좋으며 신경통, 두통, 어깨통증, 근육통, 요통, 허리와 무 릎의 무력감이 있는 경우에 사용한다.

본 발명에서 사용되는 연잎, 지부자, 지골피 추출물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등과 같은 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름 또는 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득할 수 있다.

한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출 용매 뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물 뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다.　예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에서 연잎 추출물, 지부자 추출물 및 지골피 추출물은 각각 40 ∼ 80중량%, 10 ∼ 50중량% 및 10 ∼ 50중량%를 혼합하여 사용하는 것이 효과적이며, 연잎 추출물이 40중량% 미만으로 사용될 경우에는 그람양성균 및 대장균 등과 같은 그람음성균에 대한 항균 효과가 미약한 단점이 있고, 80중량% 를 초과할 경우에는 녹농균 및 사상균에 대한 항균 효과가 저하되는 단점이 있다.

뿐만 아니라, 지부자 추출물이 10중량% 미만으로 사용될 경우에는 사상균에 대한 항균 효과가 미약한 문제점이 있고, 40중량%를 초과할 경우에는 그람양성균 및 대장균 등과 같은 그람음성균에 대한 항균 효과가 미약한 단점이 있으며, 지골피 추출물이 10중량% 미만으로 사용될 경우에는 녹농균에 대한 항균 효과가 미약한 문제점이 있고, 40중량%를 초과할 경우에는 그람양성균, 그람음성균 및 사상균에 대한 항균 효과가 미약한 단점이 있다.

그러나, 연잎 추출물, 지부자 추출물 및 지골피 추출물을 각각 40 ∼ 80중량%, 10 ∼ 50중량% 및 10 ∼ 50중량%를 혼합하여 사용할 경우에는 그람양성균, 그람음성균 및 효모와 사상균에 대한 항균 효과의 시너지 효과가 있었다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 추출물을 전체 화장료 조성물에 대하여 0.001 내지 20.0중량%를 함유하는 것이 바람직하고, 0.001중량% 미만으로 사용될 경우에는 화장료 조성물의 실질적인 항균효과를 기대하기 어려우며, 20.0중량%를 초과하여 사용될 경우에는 제형상 및 제품의 안정성에 영향을 미치며 초과투입에 따른 상승 효과가 적어 경제적이지 못하다.

더욱 바람직하기로는 본 발명의 화장료 조성물이 상기 추출물을 0.01 내지 10.0중량%, 더더욱 바람직하게는 0.1 내지 5.0 중량%를 포함하는 것이 좋다.

상기 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우 더, 에센스, 팩 등 그 제형에 있어 특별히 한정되지 않고 화장료의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 제조될 수 있다.

다음의 제조예, 실시예, 비교예 및 실험예는 본 발명을 더욱 상세히 설명하는 것이지만, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

제조예 1: 연잎 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 연잎 500g에 10배 양의 증류수를 가하여 85℃에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물을 원심분리 및 여과, 농축하고 동결건조하여 수득한 연잎 추출물을 냉장실에 보관하면서 시료로 사용하였다.

제조예 2: 지부자 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 지부자 500g에 10배 양의 증류수를 가하여 85℃에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물을 원심분리 및 여과, 농축하고 동결건조하여 수득한 지부자 추출물을 냉장실에 보관하면서 시료로 사용하였다.

제조예 3: 지골피 추출물의 제조

경동시장에서 구입한 지골피 500g에 10배 양의 증류수를 가하여 85℃에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물을 원심분리 및 여과, 농축하고 동결건조하여 수득한 지골피 추출물을 냉장실에 보관하면서 시료로 사용하였다.

제조예 4: 천연항균복합체의 제조

경동시장에서 구입한 연잎 300g, 지부자 100g, 지골피 100g에 10배 양의 증류수를 가하여 85℃에서 3시간 환류냉각 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물을 원심분리 및 여과, 농축하고 동결건조하여 수득한 천연항균복합체 추출물을 냉장실에 보관하면서 시료로 사용하였다.

실험예 1: 항균력 측정 실험

본 발명의 추출물들에 대한 항균력을 알아보기 위해 최소 저해 농도 (Minimum Inhibitory Concentration, MIC)를 다음과 같이 측정하였고, 균주는 그람양성균으로 포도상구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538P), 그람음성균으로 대장균(Escherichia coli ATCC 8739)과 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), 효모로는 캔디다(Candida albicans ATCC 10231), 사상균으로 흑국균(Aspergillus niger ATCC 22343)을 사용하였다. 세균용 배지로는 트립틱 소이 브로스(Tryptic soy broth : Difco 사)를 사용하였고, 효모용 배지로는 YPD (Difco 사)를 사용하였으며, 사상균용 배지로는 포테이토 덱스트로스 아가(Potato dextrose agar : Difco 사)를 사용하였다. 일반 세균은 트립틱 소이 브로스에 균을 접종하여 37℃ 진탕 배양기에서 24시간 배양 후, OD 600nm 값으로 농도를 측정한 뒤 최종농도 10⁷CFU/ml로 상기 추출물들이 10 ~ 1000ppm 함유된 배지에 접종하였다. 그런 다음 37℃, 200rpm으로 16 ~ 18시간 배양한 뒤 육안으로 탁도를 파악하여 최소저해농도를 구하였다. 효모는 30℃에서 배양하였고 상기와 같은 방법으로 수행하였다. 사상균은 PDA 배지에 도말하여 28℃에서 4 ~ 5일간 배양한 뒤 포자를 회수하여 헤마시토메 터(Heamacytometer)를 사용하여 수를 측정하고 멸균된 식염수로 세척 한 후, 각 샘플이 농도별로 포함된 배지에 1 ×10²이 되도록 도말한 뒤 28℃에서 48시간 이상 배양하였다. 배양 후 접종된 균이 증식되지 않는 최소 시료농도를 최소생육저해농도(MIC)로 기록하여 항균력을 측정하였다. 결과는 표 1에 기재하였다.

최소생육저해농도(MIC)

	MIC (ppm)
	S. aureus	E. coli	P. aeruginosa	C. albicans	A. niger
연잎 추출물	25	50	400	200	600
지부자 추출물	100	200	400	>1000	500
지골피 추출물	200	200	100	>1000	>1000
천연항균복합체	25	50	150	300	500

상기 표 1로부터 알 수 있는 바와 같이 연잎 추출물의 경우, S. aureus와 E. coli에 대해 50ppm 이하의 농도에서도 우수한 항균력을 나타냈으나 P. aeruginosa에 대해서는 상대적으로 약한 항균력을 나타내었다. 또한, C. albicans에 대해서도 우수한 항균력을 나타내었다.

지부자 추출물의 경우 세 추출물 중에 A. niger에 대해 가장 좋은 항균력을 보이는 것으로 나타났고, 지골피 추출물의 경우 P. aeruginosa에 우수한 항균력을 나타낸 반면, C. albicans와 A. niger에는 상기 농도에서 항균력을 보이지 않았다.

coli, P. aeruginosa 모두에 매우 우수한 항균력을 나타내었을 뿐만 아니라, C. albicans, A. niger에도 강한 항균력을 나타내었다.

제조예 5

본 발명의 천연 항균 복합체를 함유하는 화장료의 방부력 시험을 행하기 위해 하기 표 2에 기재된 조성에 따라 실시예 및 비교예 1 ∼ 5를 제조하였다.

성분	실시예 (중량%)	비교예 1 (중량%)	비교예 2 (중량%)	비교예 3 (중량%)	비교예 4 (중량%)	비교예 5 (중량%)
바셀린	7.0	7.0	7.0	7.0	7.0	7.0
유동파라핀	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
밀납	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
폴리솔베이트-60	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
스쿠알렌	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0
글리세린	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
카르복시비닐폴리머	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페롤아세테이트	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
연잎 추출물	-	0.5	-	-	-	-
지부자 추출물	-	-	0.5	-	-	-
지골피 추출물	-	-	-	0.5	-	-
천연항균복합체	0.5	-	-	-	-	-
메틸파라벤	-	-	-	-	0.2	-
향	미량	미량	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량

실험예 2: 방부력 시험

실시예와 비교예 1 ~ 4에 대한 방부력 시험을 미국화장품공업협회(Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, 이하 CTFA)의 Microbiology Guidelines의 시험법을 사용하여 행하였다.

사용한 균주로는 그람양성균으로 포도상구균(S. aureus ATCC 6538), 그람음성균으로 대장균(E. coli ATCC 8739), 녹농균(P. aeruginosa ATCC 9027), 효모로는 캔디다(C. albicans ATCC 10231), 사상균으로 흑국균(A. niger ATCC 16404)을 사용하였다. 실시예와 비교예들이 10g씩 담겨져 있는 병에 세균 3종(E. coli, P. aeruginosa, S. aureus)과 진균 2종(C. albicans, A. niger) 혼합현탁액을 각각 1×10⁶cfu/g, 1×10⁵cfu/g이 되도록 접종한 다음, 25℃에서 보관 후 7일, 14일, 28일 간격으로 무균 조작 하에서 1g의 샘플을 채취하여 희석액으로 적절히 희석하고 세균은 뉴트리언트 아가(Nutrient agar : Difco 사), 진균은 포테이토 덱스트로스 아가(potato dextrose agar : Difoc 사) 배지에 깔아 각각 35, 25℃에서 24 ~ 72 h 배양 후 계수하였고, 그 결과를 하기 표 3에 기재하였다.

		미생물 방부력
		D7	D14	D28
실시예	세균감소율 (%)	100.0000	100.0000	100.0000
실시예	진균감소율 (%)	100.0000	100.0000	100.0000
비교예 1	세균감소율 (%)	98.4885	99.1210	99.8626
비교예 1	진균감소율 (%)	100.0000	100.0000	100.0000
비교예 2	세균감소율 (%)	97.6969	98.4514	98.9857
비교예 2	진균감소율 (%)	82.7143	85.4158	90.2323
비교예 3	세균감소율 (%)	98.5750	98.7247	99.2540
비교예 3	진균감소율 (%)	15.7143	18.5714	17.1510
비교예 4	세균감소율 (%)	99.9050	99.9242	99.9840
비교예 4	진균감소율 (%)	98.1714	99.2458	100.0000

상기 표 3으로부터 알 수 있는 바와 같이 비교예 1의 경우, 진균은 7일만에 100.0000% 감소하여 매우 우수한 방부력을 나타내었으나 세균의 경우 98.4885%로 상대적으로 약한 방부력을 나타내었고, 특히, P. aeruginosa에 대해 취약한 방부력을 나타내었다. 비교예 2와 3의 경우 비교예 1 보다 세균과 진균 모두 매우 취약한 방부력을 나타낸 반면 실시예의 경우 세균과 진균 모두 접종 후 7일만에 100.0000% 감소를 보여 매우 우수한 방부력을 나타내었다.

실험예 3: 피부 첩포 시험 ( Patch Test )

본 발명의 천연 항균 복합체의 피부자극을 알아보기 위해 피부 첩포 실험을 실시하였다. 피검자 20명(평균연령 29세, 연령분포 23 - 39세)을 대상으로 상기 제조예 5의 실시예와 비교예 5를 사용하여 상박에 피부 첩포 실험을 하였다. 단, 건선, 습진, 기타 피부 병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외하였다.

우선 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시키고 준비된 시험물질을 15㎍씩 핀챔버(Finn chamber, 100x10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후, 시험대상자의 전박 안쪽 부위에 밀폐첩포 하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후, 펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후, 각각 1시간 및 24시간 후에 확대경(8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다.

피부반응은 국제접촉피부염연구회(ICDRG, International Contact Dermatitis Research Group)의 규정에 따라 판정하고, 하기식에 따라 평균피부반응도(mean response rate)를 구하였으며, 그 결과를 표 4에 기재하였다.

* 피부반응의 평가 기준 및 점수

기호	점수	평가기준
-	0	무반응
±	0.5	희미한 또는 가벼운 홍반
+	1	경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진
++	2	뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포
+++	3	심한 홍반 및 대수포, 가피형성

평균 피부 반응도(mean score) = (점수 × 반응 수 × 100 ×1/2) / [3(최대 점수) × 총피검자수(n)]

시험물질	1 시간 후			24 시간 후			반응도 (%)(n=20)
시험물질	±	+	++	±	+	++	0.83
실시예 1	2	-	-	-	-	-	0.83
비교예 5	2	-	-	-	-	-

상기 표 4로부터 본 발명의 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물(실시예)은 피부자극이 거의 없음을 알 수 있었다.

실험예 4: 제형의 안정성 시험

상기 본 발명의 천연항균 복합체를 함유하는 화장료에 대한 안정성 시험을 하기의 방법으로 실시하였다.

화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물의 실시예 및 비교예 1 ~ 4를 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하여　그 결과를 하기 표 5에 기재하였다.　이 때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.

0 : 변화없음

1 : 극히 조금 분리(변색)

2 : 조금 분리(변색)

3 : 조금 심하게 분리(변색)

4 :심하게 분리(변색)

5 : 극히 심하게 분리(변색).

구 분	제형의 안정성
	실시예		비교예 1		비교예 2		비교예 3		비교예 4
	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃
변색	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
변취	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
분리	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

표 5로부터 알 수 있는 바와 같이, 실시예와 비교예 1 ~ 4는 45℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정하였고 이는 천연항균복합체가 제형 내에서 안정한 상태로 존재함을 나타낸다.

상기 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 천연항균 복합체를 함유하는 항균 화장료를 조성하여 제시한다.　그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수(스킨로션)

하기 표 6에 기재된 조성으로 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
천연항균복합체	0.3
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 2. 영양화장수( 밀크로션 )

하기 표 7에 기재된 조성으로 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
천연항균복합체	0.3
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 3. 영양크림

하기 표 8에 기재된 조성으로 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
천연항균복합체	0.3
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 4. 마사지크림

하기 표 9에 기재된 조성으로 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
천연항균복합체	0.3
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 5. 팩

하기 표 10에 기재된 조성으로 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
천연항균복합체	0.3
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

Claims

연잎 추출물 40 ∼ 80중량%, 지부자 추출물 10 ∼ 50중량% 및 지골피 추출물 10 ∼ 50중량%를 혼합한 천연항균 복합체를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 천연항균 복합체는 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 ~ 20.0중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.