KR100933766B1

KR100933766B1 - 기름 종자 단백질 분리물의 연속 제조 방법

Info

Publication number: KR100933766B1
Application number: KR1020047007750A
Authority: KR
Inventors: 바커래리디.; 그린브렌트에버리트; 레이주
Original assignee: 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션
Priority date: 2001-11-20
Filing date: 2002-11-20
Publication date: 2009-12-24
Also published as: AU2002342482A2; ES2315413T3; PT1450621E; JP4406286B2; KR20050044564A; AU2002342482B2; US20080319171A1; AU2002342482A1; CN1615083A; US7625588B2; RU2314705C2; EP1450621B1; RU2004118486A; JP2005509428A; CN100334963C; US20040039174A1; CA2467746C; BR0214313B1; MXPA04004731A; US20070015910A1

Abstract

기름 종자 단백질이 계속적으로 기름 종자 밀에서 추출되고 그 얻어진 단백질 용액이 바람직하게는 적어도 약 200g/L의 단백질 함량까지 계속적으로 농축되고 농축된 단백질 용액이 약 15℃ 이하의 온도를 가지는 찬물과 계속적으로 혼합되어, 상층액이 용기를 넘쳐 흐르는 동안 침전용기에 침전되어 단백질 미셀 덩어리(PPM)를 제공하는 단백질 미셀을 형성하는 공정에 의해, 기름 종자 단백질 분리물, 특히, 캐놀라 단백질 분리물이 바람직하게는 적어도 약 100중량%(N x 6.25)의 고순도 수준에서 기름 종자 밀들로부터 연속적으로 생산된다. PMM은, 소망의 정도로 응집될 때, 상층액으로부터 분리되어 건조될 수 있다. 상층액은 처리되어 부가적인 기름 종자 단백질 분리물을 회수할 수 있다.

단백질 미셀 덩어리, 캐놀라 종자

Description

기름 종자 단백질 분리물의 연속 제조 방법{Continuous process for production of oil seed protein isolate}

본 발명은 기름 종자 단백질 분리물의 제조를 위한 개선된 방법에 관한 것이다. 본 출원은 2001.11.20에 출원된 미국특허 가출원 제60/331,646호 및 2002.5.30에 출원된 미국특허 가출원 제60/383,809호를 35 USC 119(e)에 의해 우선권을 주장한다.

이 출원의 양수인에게 양도되며 그것의 개시내용이 참조로 통합되는 미국 특허 제5,844,086호 및 제6,005,076호("머레이Ⅱ")에는, 상당한 지방 함량을 가지며, 그런 함량을 가지는 캐놀라 기름 종자 밀을 포함한 기름 종자 밀로부터 단백질 분리물들의 분리를 위한 공정이 개시되어 있다. 이 공정에 포함된 단계들은 기름 종자 밀로부터 단백질 재료를 용해하고 또한 밀의 지방을 용해하는 단계와 얻어진 단백질 수용액에서 지방을 제거하는 단계를 포함한다. 단백질 수용액은 지방제거단계 전 또는 후에 잔여 기름 종자 밀로부터 분리될 수 있다. 그 후, 지방이 제거된 단백질 용액이 이온강도를 실질적으로 일정하게 유지하면서 단백질 농축을 증가시키기 위해 농축된 다음, 농축된 단백질 용액이 추가의 지방제거단계로 처리된다. 다음, 농축된 단백질 용액은 희석되어 고농도로 응집된 단백질 분자들을 미셀 형태의 분리된 단백질 액적(droplets)과 같은 구름 덩어리로 형성되게 한다. 단백질 미셀들은 침전하도록 방치되어 "단백질 미셀 덩어리" 또는 PPM이라고 불리는 응집되며, 유착되며, 농밀한 비정질의, 끈적거리는 글루텐 유사 단백질 분리물 덩어리를 형성하고, 이는 잔류한 수상으로부터 분리되어 건조된다.

단백질 분리물은 건조 무게를 기준으로(켈달 N x 6.25에 의해 결정된 것과 같이), 적어도 약 90중량%의 단백질 함량을 가지고, 실질적으로 변성되지 않고(시차 주사열계량법에 의해 결정되는 것과 같이), 낮은 잔여 지방 함량을 가진다. 여기서 사용되는 용어 "단백질 함량"은 건조 무게를 기준으로 표현된 단백질 분리물에서의 단백질 양을 말한다. 건조된 단백질 분리물로서 회수되는 기름 종자 밀로부터 추출된 단백질의 비율로 환산하면, 이 공정을 사용하여 얻어지는 단백질 분리물의 수율은 일반적으로 40중량% 보다 작고, 전형적으로 약 20중량% 정도이다.

상술된 특허들에 개시된 공정은 미국특허 제4,208,323호(Murray IB)에 개시된 것과 같이, 기름 종자를 포함한 다양한 단백질 원료들로부터 단백질 분리물을 형성하기 위한 공정에 관한 개선과 변형으로서 개발되었다. 미국특허 제4,208,323호가 발행되었을 때인 1980년에 (상업적으로)입수가능한 기름 종자 밀은 캐놀라기름 종자 밀의 지방오염수준을 가지지 않고, 결과로서, 미국특허 제4,208,323호의 공정은 머레이Ⅱ공정에 따라 가공된 현재의 기름 종자 밀로부터, 90%이상의 단백질 함량을 가지는 단백질 재료를 생산할 수 없었다. 출발물질로서 평지씨(캐놀라)밀을 사용하여 수행된 어떠한 구체적인 실험도 미국특허 제4,208,303호에 설명되지 않았다.

미국특허 제4,208,323호는 PMM을 형성하기 위한 희석 전에 농축단계를 도입함으로써 미국특허 제4,169090호 및 제4,285,862호(머레이 IA)에 개시된 공정에 관한 개량법으로서 고안되었다. 후자의 단계는 머레이 IA 공정에 대해 단백질 분리물의 수율을 약 20중량% 개선시키는데 기여하였다.

전부가 이 출원의 양수인에게 양도되고 그 개시내용이 참조로 통합된 2001.5.4에 출원된 미국특허출원 제60/288,415호, 2001.10.5에 출원된 미국특허출원 제60/326,987호, 2001.11.7에 출원된 미국특허출원 제60/331,066호, 2001.11.26에 출원된 제60/333,494호, 2002.4.24에 출원된 60/374,801호 및 2002.5.3에 출원된 10/133,391호에는, 기름 종자들에 적용하여, 기름 종자들로부터 추출되어 단백질 분리물로서 회수된 단백질의 비율로 환산하여 향상된 수율의 건조되고 분리된 단백질생성물을 얻고 N x 6.25의 켈달질소(N)전환율에서 고순도의, 대체로 적어도 약 100중량%의 단백질 분리물을 얻는 것과 같이, 이들 종래기술인 단백질 분리공정에 관한 개량법이 또한 기술되어 있다. 여기서 사용된 바와 같이, 단백질 함량은 건조 무게를 기초로 결정된다. 이 공정은 캐놀라 단백질 분리물을 생산하기 위해 특별히 이용되었다.

전술한 미국특허출원 제60/288,415호, 제60/326,987호, 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에서 설명된 공정에서, 기름 종자 밀은 식품등급의 염수용액으로 추출된다. 색소흡착제로 초기 처리 후에, 얻어진 단백질 추출용액은 필요하다면 한외여과막을 사용하여 부피가 감소되어, 약 200g/L을 초과하는 단백질 함량을 가지는 농축된 단백질 용액을 제공한다. 농축된 단백질 용액은 그 후 찬물에 희석되어, 분리될 수 있는 흰 구름같은 단백질 미셀들로 형성된다. 상층액의 제거에 이어 침전된 점성의 끈적한 덩어리(PMM)가 건조된다.

상술된 공정의 한 실시예에서 그리고 출원번호 제60/326,987호, 제60/331,066호, 제60/333,494호, 60/374,801호 및 10/137,391호에서 구체적으로 설명된 바와 같이, PMM침전단계로부터의 상층액은 젖은 PMM 및 상층액으로부터 건조된 단백질을 포함하는 단백질 분리물을 제거하도록 처리된다. 이 공정은 초기에 한외여과막들을 사용해 상층액을 농축하며, 젖은 PMM과 농축된 상층액을 혼합하고 혼합물을 건조시킴으로써 이루어질 수 있다. 얻어진 캐놀라 단백질 분리물은 적어도 약 90중량%, 바람직하게는 적어도 약 100중량%의 고순도 단백질(N x 6.25)을 가진다.

상술된, 특히 특허출원 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에서 구체적으로 설명된 공정의 다른 실시예에서, PMM침전단계로부터의 상층액은 상층액으로부터 단백질을 회수하기 위해 처리된다. 이 공정은 초기에 한외여과막들을 사용하여 초기의 상층액을 농축시키고 그 농축물을 건조시키는 것에 의해 이루어질 수 있다. 얻어진 캐놀라 단백질 분리물은 적어도 약 90중량%, 바람직하게는 적어도 약 100중량%의 고순도 단백질(N x 6.25)을 가진다.

이 출원의 양수인에게 양도되고 그 개시내용이 참조로 통합된 2001.12.13에 출원된 미국특허출원 제60/339,350호 및 2002.6.25에 출원된 미국특허출원 제60/391,046호에는, 캐놀라기름 종자 밀로부터 향상된 수준의 단백질이 약 100℃이하의 온도에서 탈용매화된 밀을 사용하는 것에 의해 이루어지는 공정이 개시되어 있다. 이런 밀은 본 발명의 공정을 위해 출발물질이 될 수 있다.

이 출원의 양수인에게 양도되고 그 개시내용이 참조로 통합된 2002.8.8에 출원된 미국특허출원 제60/401,782호에는, 흔히 "백색 플레이크"로 또는 간혹 "잔류물"로 알려진 잔류량의 기름을 제거하기 위해, 캐놀라기름 종자의 용매추출로부터 진류밀로부터 캐놀라 단백질 분리물을 회수하는 것이 설명되어 있다.

기름 종자 단백질 분리물의 형성 공정이 연속 기준으로 수행된다면 현저한 이점들이 생긴다는 것이 밝혀져 있다. 초기단백질추출단계는 상술한 특허와 특허출원들에 기재된 회분처리보다는 연속 방식으로 수행된다면, 동일하거나 더 높은 수준의 단백질 추출에 대해 시간이 현저히 감소될 수 있고 현저히 높은 온도가 이 추출단계에서 사용될 수 있다. 또한, 연속작업에서 오염의 기회가 적어서, 높은 제품 품질을 이끌 수 있고 공정은 더욱 소형의 설비로 수행될 수 있다.

여기서 개시된 연속작업은 머레이Ⅰ 및 머레이Ⅱ 특허에 기재된 농축과 희석조건들을 사용하여 달성될 수 있으나, 바람직하게는 거기에 개시된 이점을 위해, 본 발명에서 설명되는 연속공정은 상술한 미국특허출원 제60/288,415호, 제60/326,987호, 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에 기재된 농축 및 희석 조건들 하에서 바람직하게 이루어질 수 있다.

본 발명에 따르면, 단백질 분리물을 제조하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 적어도 약 5℃의 온도에서 기름 종자 밀을 계속적으로 추출하여 기름 종자 밀의 단백질을 용해하고 약 5 내지 약 6.8의 pH를 가지는 단백질 수용액을 형성하는 단계, (b) 잔여 기름 종자 밀로부터 상기 수용성 단백질 용액을 연속적으로 분리하는 단계, (c) 선택적 막 조작을 통해 상기 수용성 단백질 용액을 연속적으로 전달하여, 실질적으로 일정한 이온강도를 유지하면서, 적어도 약 50 g/L인 상기 수용성 단백질 용액의 단백질농도를 증가시켜 농축된 단백질 용액을 공급하는 단계, (d) 상기 농축된 단백질 용액을 약 15℃이하의 온도를 가지는 찬물과 연속적으로 혼합하여 수상 내 단백질미셀의 형성을 야기하는 단계, (e) 상층액이 용기에서 넘치게 하면서 침전용기에 얻어진 혼합물을 계속적으로 흐르게 하는 단계, (f) 소정량의 무정형이고, 끈적끈적하며, 아교질의 글루텐과 같은 단백질 미셀 덩어리가 침전용기에 모여질 때까지 용기로부터 상층액이 계속해 넘치도록 하면서 단백질 미셀들이 침전용기에 계속적으로 침전되도록 하는 단계, 및 (g) 켈달질소 x 6.25에 의해 결정되는 것과 같이, 적어도 약 90중량%, 바람직하게는 적어도 약 100중량%의 단백질 함량을 가지는 단백질 미셀 덩어리를 침전용기로부터 회수하는 단계를 포함한다.

단백질 미셀 덩어리 형태의 단백질 분리 생성품은 여기서 "글루텐과 같은"이라고 설명된다. 이 설명은 분리물의 외관과 느낌이 활성밀(vital meal)글루텐의 그것들과 유사하다는 것을 나타내기 위해 의도된 것이지, 글루텐에 대한 화학적으로 일치함을 나타내기 위해 의도된 것은 아니다.

이 방법의 하나의 실시예에서, 침전단계로부터의 상층액은 일괄적으로, 반 연속적으로 또는 연속적으로 농축되고 이 농축된 상층액은 건조되어 건조 무게를 기준으로, 적어도 약 90중량%(N x 6.25)의 단백질 함량을 가진 단백질 분리물을 제공한다.

이 방법의 다른 실시예에서, 침전단계에서 상층액은 일괄적으로, 반 연속적으로 또는 연속적으로 농축되고, 얻어진 농축된 상층액은 건조단계 전에 단백질 미셀 덩어리와 혼합되며, 얻어진 혼합물은 건조되어 건조무게 기준으로 적어도 약 90중량%(N x 6.25)의 단백질 함량을 가진 단백질 분리물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 침전 단계로부터의 상층액이 일괄적으로, 반 연속적으로 또는 연속적으로 농축되고, 얻어진 농축된 상층액의 일부분만이 건조단계 전에 적어도 단백질 미셀 덩어리의 일부분과 혼합되어, 건조무게 기준으로 적어도 약 90중량%(N x 6.25)의 단백질 함량을 가지는 본 발명에 따른 다른 새로운 단백질 분리물을 제공한다.

본 발명의 방법에 따라 생산되는 단백질 분리물은 가공식품들의 단백질 강화, 기름의 유화작용, 구운 식품들에서의 체형성제(body former) 및 가스를 포집하는 제품에 발포제와 같이 단백질 분리물의 종래의 응용들에 사용될 수 있다. 또한, 단백질 분리물은 고기 등에 유용한 단백질 섬유로 형성될 수 있고, 달걀의 흰자가 결합제로 사용되는 식품에 달걀 흰자의 대체물 또는 증량제(extender)로 사용될 수 있다. 캐놀라 단백질 분리물은 영양보충제로서 사용될 수 있다. 캐놀라 단백질 분리물의 다른 용도는 애완용 동물의 식품, 동물사료, 산업 및 화장품용 및 개인적인 치료제품용이다.

도 1은 본 발명의 하나의 실시예에 따른 기름 종자 단백질 분리물을 생산하기 위한 연속적인 공정의 개략적인 흐름도이다.

발명의 전반적인 설명

본 발명의 방법의 초기 단계는 기름 종자 밀, 특히, 캐놀라밀에서의 단백질 물질을 용해하는 단계를 포함하지만, 이 방법은 콩, 전통적인 평지씨, 전통적인 아마, 리놀라, 해바라기 및 겨자기름 종자 밀과 같은 다른 기름 종자 밀들에 적용될 수 있다. 본 발명은 저온 탈용매된 밀인 캐놀라 종자 밀에 관해 더욱 상세히 설명된다.

캐놀라 종자 밀로부터 회수된 단백질재료는 캐놀라 종자 또는 다른 기름 종자에서 자연적으로 발생되는 단백질일 수 있거나, 유전자조작에 의해 변형되었으나 천연단백질의 특징적인 소수성과 극성을 가지는 단백질이어도 좋다. 캐놀라밀은 예를 들어 고온 헥산추출 또는 냉오일압출법으로 발생하는 변성되지 않는 단백질의 다양한 수준을 가진 캐놀라밀로부터 캐놀라기름을 제거한 어떤 캐놀라밀일 수 있다. 캐놀라기름 종자는 평지씨 또는 기름 종자평지로도 알려져 있다.

염 용액은 단백질 용해에 사용되고, 비록 염화칼륨과 같은 단백질추출에 적절한 다른 염이 사용될 수도 있지만, 염은 일반적으로 염화나트륨이다. 염 용액은 적어도 약 0.10, 바람직하게는 적어도 약 0.15의 이온강도를 가져서 충분한 양의 단백질이 용해될 수 있게 한다. 염 용액의 이온강도가 증가하면, 초기 원재료에서 단백질 용해의 정도가 최대값이 될 때까지 증가한다. 그 이후의 이온강도의 증가는 용해된 총 단백질을 증가시키지 않는다. 최대의 단백질 용해를 일으키는 식품등급염 용액의 이온강도는 관계된 염과 선택된 단백질 원료에 따라 다양하다.

이온강도를 증가시킴으로써 단백질 침전을 위해 더 많은 희석정도가 필요하다는 관점에서, 약 0.8 보다 작은, 더욱 바람직하게는 약 0.15 내지 약 0.6의 이온강도 값을 이용하는 것이 대체로 바람직하다.

총체적으로 높은 제품 수율을 얻기 위해, 원재료로부터 가능한 한 많은 단백질을 실질적으로 추출하기 위한 용해가 이루어지도록, 바람직하게는 염용해단계는 일반적으로 약 10분의 시간 내에 신속히 이루어진다. 용해는 바람직하게는 약 35℃ 이상 일반적으로 약 65℃까지 상승된 온도에서 이루어진다.

염수용액과 기름 종자 밀은 약 5 내지 약 6.8의 자연적인 pH를 가져서 단백질 분리물이 이하에서 더욱 상세히 설명되는 바와 같이, 미셀루트에 의해 형성될 수 있도록 한다. 단백질 분리물의 최대 수율을 위한 최적의 pH값은 선택된 단백질 원재료에 따라 다양하다.

pH범위의 한계 부근에서는, 단백질 분리물 형성은 미셀루트를 통해서 부분적으로만 일어나고 pH범위의 다른 부분에서 얻을 수 있는 것보다 낮은 수율이다. 이런 이유 때문에, 약 5.3 내지 약 6.2의 pH값이 바람직하다.

염 용액의 pH는 필요에 따라, 어떠한 편리한 산, 일반적으로 염산 또는 어떠한 편리한 염기, 일반적으로 수산화나트륨을 사용하는 것에 의해 추출단계에서 사용하기 위해 약 5 내지 약 6.8의 범위 내에서 어떠한 소망의 값으로 조정될 수 있다.

용해 단계동안 염 용액 내 단백질 원재료의 농도는 광범위하게 변화될 수 있다. 전형적인 농도값은 약 5 내지 약 15% w/v이다.

염수용액으로 단백질을 추출하는 단계는 캐놀라 밀에 존재하는 지방을 용해하여 지방이 물 상태가 되도록 하는 부가적인 효과를 가진다.

추출단계로부터 얻어진 단백질 용액은 일반적으로 약 5 내지 40g/L, 바람직하게는 약 10 내지 약 30g/L의 단백질 농도를 가진다.

기름 종자 밀로부터의 단백질 추출은 기름 종자 밀과 식품등급염 용액의 혼합물을 상술한 파라미터에 따라 소망의 추출을 하기에 충분한 체류시간 동안 일정길이를 가지는 도관을 통해 일정유속으로 통과시키는 단계와, 기름 종자 밀로부터 연속적인 단백질 추출을 이루는 어떠한 편리한 방법으로 수행된다.

또는, 추출공정은 기름 종자 밀과 염 용액의 혼합을 계속적으로 공급하고 단백질 수용액이 계속적으로 제거되는 교반탱크에서 이루어질 수 있다. 또한, 공정은 연속적인 방법과 동등한 반연속적인 방법으로 이루어질 수 있고 여기서, 단백질 수용액이 제2혼합용기로부터 아래에서 설명되는 잔여밀분리단계에 계속적으로 공급되면서, 추출이 이루어지는 제1혼합용기 내에 기름 종자 밀과 염 용액의 혼합물을 공급하여 단백질 수용액을 형성한다. 단백질 수용액이 제1용기에 형성되고 단백질 수용액이 제2용기에서 없어질 때, 그 후, 제2용기는 제1용기가 되거나 그 반대이다.

다음, 추출단계에서로부터 얻어진 수상은 진공여과의 사용과 같은 어떠한 편리한 방법으로 잔여 캐놀라 밀로부터 분리되고, 이후 잔여밀을 제거하기 위해 원심분리 및/또는 여과될 수 있다. 분리된 잔여 밀은 폐기를 위해 건조될 수 있다.

최종적인 단백질 분리물의 색깔은 분말 활성 탄소 또는 기타 안료흡착제를 분리된 단백질 수용액과 혼합하고, 이어서 편리하게는 여과에 의해 흡착제를 제거하여 단백질 용액을 제공하는 것에 의해, 밝은 색상 및 덜 강한 황색의 관점에서 개선될 수 있다. 분리된 단백질 수용액의 정용여과도 색소제거를 위해 사용될 수 있다.

이런 색소제거단계는 어떠한 적합한 안료흡착제를 사용하여, 분리된 단백질 수용액이 일반적으로 대기온도인 어떠한 편리한 조건 하에서 수행될 수 있다. 분말 활성탄소에 대해, 약 0.025 내지 약 5w/v, 바람직하게는 약 0.05 내지 약 2w/v의 양이 사용될 수 있다.

본발명의 출원인에게 양도되고, 그 개시내용이 참고문헌으로서 포함된 미국특허 제5,884,006호 및 제6,005,076호에 개시된 바와 같이, 캐놀라 종자 밀은 상당한 양의 지방을 포함하고, 그 후, 분리된 단백질 수용액과 농축된 단백질 수용액에 대해, 거기서 상술된 지방제거단계들이 이루어질 것이다. 색깔개선단계가 수행되는 경우, 이러한 단계는 제1지방제거단계 후에 이루어질 것이다.

기름 종자 밀을 염수용액으로 추출하는 것에 대한 대안으로, 물만의 사용이 염수용액보다 기름 종자 밀에서 단백질을 덜 추출하기는 하지만, 이러한 추출은 물만을 사용해 이루어질 수 있다. 이런 대안이 사용되는 경우, 염은 농축단계동안 용액에 단백질을 유지하기 위해 상술된 농도로 잔여 기름 종자 밀로부터 분리된 후 단백질 용액에 추가된다. 색소제거단계 및/또는 제1지방제거단계가 수행될 때, 염은 일반적으로 이런 동작을 완성한 후 추가된다.

다른 대안적인 공정은 약 pH 6.8 이상, 일반적으로 약 9.9까지의 상대적으로 높은 pH값에서, 염 용액으로 기름 종자 밀을 추출하는 것이다. 염 용액의 pH는 염화나트륨수용액과 같이 어떤 편리한 염기의 사용에 의해 알칼리성 값의 pH로 조정할 수 있다. 또는 기름 종자 밀은 약 pH5 이하, 일반적으로 약 pH3 까지의 상대적으로 낮은 pH에서, 염 수용액으로 추출될 수 있다. 이 염수용액의 pH는 염산과 같은 어떤 편리한 산의 사용에 의해 산성 값의 pH로 조정될 수 있다. 이 대안이 사용되는 경우, 기름 종자 밀 추출단계로부터 얻어진 수상은 진공여과의 사용과 같은 어떠한 편리한 방법으로 잔여 캐놀라 밀로부터 분리되고, 이후 잔여밀을 제거하기 위해 원심분리 및/또는 여과될 수 있다. 분리된 잔여 밀은 폐기를 위해 건조될 수 있다.

그 후, 높은 또는 낮은 pH 추출단계로부터 얻은 단백질 수용액은 이하에서 설명되는 바와 같은 추후의 공정 전에, 상술한 바와 같이, 약 5 내지 약 6.8, 바람직하게는 약 5.3 내지 약 6.2의 범위로 pH가 조정된다. 이런 pH조정은 염산과 같은 어떤 편리한 산 또는 염화나트륨과 같은 어떤 편리한 염기가 적절히 사용되어 이루어진다.

그 후, 단백질 수용액은 실질적으로 일정하게 이온강도를 유지하면서, 단백질 농도를 증가시키기 위해 농축된다. 이런 농축은 적어도 약 50g/L의 단백질 농도을 가지는 농축된 단백질 용액을 제공하도록 이루어질 수 있다. 상술한 미국특허출원 제60/288,415호, 제60/326,987호, 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에 설명된 바와 같이, 단백질 분리물의 개선된 수율을 얻기 위해, 이러한 농축은 바람직하게는 적어도 약 200g/L, 더욱 상세하게는 적어도 약 250g/L의 단백질 농도를 가지는 농축된 단백질 용액을 제공하도록 이루어진다.

농축단계는, 서로 다른 막재료와 구성에 따라, 약 3000 내지 약 50,000 달톤과 같은 적절한 분획 분자량을 가지고, 단백질 수용액이 막들을 통과함에 따라 소정의 농축정도의 단백질 수용액을 허용하도록 하는 크기인, 속이 빈 섬유막 또는 나선형으로 감겨진 막과 같은 막을 사용하여 한외여과와 같은 어떤 편리한 선택적인 막기술을 사용하는 것과 같이 연속적인 공정과 일치하는 어떤 편리한 방법에 의해 이루어질 수 있다.

이 농축단계는 어떤 편리한 온도, 일반적으로 약 20℃ 내지 약 60℃에서 소망의 농축정도를 이루기 위한 시간동안 이루어질 수 있다. 어떤 정도로 사용되는 온도와 다른 조건들은 이 용액에서의 농축에 사용되는 막장비, 및 용액의 소망의 단백질 농도에 달려있다.

잘 알려진 바와 같이, 한외여과 및 유사한 선택적인 막기술들은 고분자량종이 막을 통과하는 것을 방지하면서 저분자량종이 막을 통과하도록 한다. 저분자량종은 식품등급염의 이온종 뿐만 아니라 단백질의 어떤 저분자량형태와 탄수화물, 색소 및 항-영양 인자와 같이 원재료로부터 추출된 저분자량재료도 포함한다. 오염물이 서로 다른 막재료와 구성들에 따라 통과되도록 하면서 막의 분자량범위가 용액에서 충분한 단백질 비율의 보유를 보증하기 위해 일반적으로 선택된다.

농축이 적어도 약 200g/L, 바람직하게는 적어도 약 250g/L의 단백질 함량을 가지고 농축단계에서 사용된 온도에 따라 농축된 단백질 수용액이 제공되도록 이루어질 때, 농축된 단백질 용액의 점도를 증가시켜 이어지는 희석단계와 미셀형성을 촉진하기 위해, 농축된 단백질 용액은 약 20℃ 내지 약 60℃, 바람직하게는 약 25℃ 내지 약 35℃의 온도까지 데워진다. 농축된 단백질 용액은 농축된 단백질 용액의 온도가 찬물로 희석시 미셀형성을 허용하지 않는 온도 이상으로 가열되어서는 안된다.

필요하다면, 상술된 미국특허 제5,884,006호 및 제6,005,076호에 개시된 바와 같이, 농축된 단백질 용액은 추가적인 지방제거공정으로 처리될 수 있다.

다음, 농축단계 및 선택적인 지방제거 단계로부터 얻어진 농축된 단백질 용액은 소망의 희석정도를 달성하기 위해 요구되는 부피를 가진 찬물과 함께 농축된 단백질 용액을 혼합함으로써 희석되어 미셀형성이 이루어진다. 미셀루트에 의해 얻어질 수 있는 소망의 단백질 비율 및 상층액으로부터의 비율에 따라, 희석의 정도가 다양하게 될 수 있다. 일반적으로 희석 수준이 높아질수록, 더 높은 비율의 캐놀라 단백질이 수상 내에 잔존한다. 미셀루트에 의해 최고의 단백질 비율을 제공하는 것이 요망될 때, 농축된 단백질 용액은 약 15배, 더욱 바람직하게는 약 10배 이하보다 작게 희석된다.

희석용 물이 T형 관의 다른 입구로 공급되어 관에서 혼합되면서, 농축된 단백질 용액을 T형 관의 하나의 입구로 계속적으로 통과시키는 것에 의해 희석공정이 수행될 수 있다. 희석용 물은 소망하는 희석정도로 되기 위해 충분한 비율로 T형 관에 공급된다. 희석용 물은 약 15℃, 일반적으로는 약 3℃ 내지 약 15℃, 바람직하게는 약 10℃ 보다 작은 온도를 가지는데, 사용된 희석비율에서 이러한 차가운 온도의 사용으로 향상된 수율의 단백질 미셀 형태의 단백질 분리물이 얻어질 수 있기 때문이다.

관 내의 농축된 단백질 용액과 희석용 물의 혼합은 단백질 미셀의 형성을 개시시키고, 이 혼합물은 T형 관의 출구로부터 침전용기에 계속적으로 공급되고, 이 침전용기가 가득찰 때, 이 침강용기로부터 상층액이 넘쳐 흐르도록 한다. 이 침전용기는 처음에는 찬물로 가득 채워지고 관의 출구로부터 유입되는 혼합물에 의해 점차 교체된다.

혼합물은 액체내의 난류가 미셀의 적절한 침전을 위해 최소화되는 방법으로 침전용기의 액체에 공급된다. 이 결과를 달성하기 위해, 혼합물은 출구로부터 침전용기의 액체 표면 아래의 T형 관까지 공급된다. 또한, 출구가 구성되고 조성되어 액체가 침전용기의 상부수준의 급진적인 방향으로 관에서 흐른다.

단백질 미셀들은 침전용기에 침전되어 모이고, 유착되고, 농밀한 무정형의 글루텐 같은 단백질 미셀 덩어리(PMM)를 형성하고 공정은 PMM의 소망의 양이 침전용기의 바닥에 모일 때까지 계속되고, 이 경우 모여진 PMM은 침전용기로부터 제거된다. 단백질 미셀 덩어리는 침전용기로부터 모여진 PMM의 제거 전에 덩어리의 액체함량을 감소시키기 위해 농축된다. 농축은 약 70중량%로부터 약 95중량%까지의 총 미셀 덩어리의 약 80중량% 단백질 미셀 덩어리의 수분함량을 무게로 일반적으로 약 50%의 값, 총 미셀 덩어리의 약 80중량%까지 감소시킬 수 있다. 이런 방법으로 단백질 미셀 덩어리의 수분함량을 감소시키는 것은 단백질 미셀 덩어리의 폐쇄된 염함량과 건조 분리된 염함량도 감소시킨다. 또는 침전단계는 계속적인 농축 하에서 이루어질 수 있다.

회수된 PMM는 스프레이건조, 냉동건조 또는 진공드럼건조와 같은 편리한 기술에 의해 건조형태로 건조되거나 수분함유한 형태로 사용될 수 있다. 건조된 PMM은 보통은 약 100 중량%을 초과하여(켈달 N x 6.25 (Kjeldahl N x 6.25)에 의해 계산된) 적어도 약 90 중량%의 높은 단백질 함량을 가지고 실질적으로 변성된다(차별적인 스캐닝 칼로리미터에 의해 결정된 것처럼). 지방성기름 종자 밀(fatty oil seed meal)로부터 분리된 건조된 PMM도 전술한 미국특허 5,844,086호 및 6,005,026호의 과정에서 사용되었을 때, 약 1 중량%이하였는데, 낮은 잔류의 지방함량을 가진다.

미국특허출원 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에서 특히 기술된 바와 같이, PMM 형성단계로부터의 상청액은 그것으로부터 더 단백질을 회수하기 위하여 처리될 수 있다. 그러한 절차는 상청액의 초기농축을 함유할 수 있다. 그러한 농축은 용액내에서 캐놀라단백질(canola protein)은 보유하면서 단백질원료물질로부터 추출된 염 및 다른 비단백질성 저분자량물질을 포함한 저분자량 종을 막을 통과하도록 허용하는 적당한 분획분자량 (cut-off)를 가진 막을 사용하는 한외여과(ultrafiltration)과 같은 편리한 선택적 막 기술을 이용하여 얻어질 수 있다. 서로 다른 막재료 및 구성을 가지고 약 3000에서 약 10,000의 분획분자량를 가진 한외여과막들이 사용될 수 있다. 비록 필요에 따라, 넘쳐흐르는 상청액의 수집된 부피에 대해 회분공정(batch procedure)이 사용될 수 있긴 하지만, 농축은 바람직하게는 연속적으로 넘쳐흐르는 상청액에 대해 연속적으로 수행된다. 그러한 연속 작업에서, 상청액이 막들을 통과함에 따라서 막들은 상청액의 바람직한 농축의 정도를 허용하는 크기를 갖는다.

이런 식으로, 상청액의 농축은 단백질 분리물을 회수하기 위해 건조되는데 요구되는 액체부피 및 건조에 요구되는 에너지를 또한 줄일 수 있다. 상청액은 일반적으로 건조전에 약 100에서 약 400g/L까지, 바람직하게는 약 200에서 약 300 g/L까지의 단백질 농도까지 농축된다.

농축된 상청액은 스프레이건조, 동결건조 또는 진공드럼건조와 같은 편리한 방식으로 건조 형태로 건조되어, 최소한 약 90 중량%, 바락직하게는 최소한 약 100 중량%(N x 6.25)의 단백질 함량을 가진 캐놀라단백질 분리물을 공급할 수 있고, 실질적으로 비변성된다(시차주사열량계에 의해 결정된 바와 같이).

택일적으로, 전술한 미국특허출원 제 60,326,987호, 제60/331,066호, 제60/333,494호, 제60/374,801호 및 제10/137,391호에서 기술된 바와 같이, 농축된 상청액은 PMM와 혼합되고, 얻어진 혼합물은 건조되어, 최소한 약 90 중량%, 바락직하게는 최소한 약 100 중량%(N x 6.25)의 단백질 함량을 가지고 실직적으로 비변성된(시차주사열량계에 의해 결정된 바와 같이) 캐놀라단백질 분리물을 또한 공급할 수 있다.

농축된 상청액의 일부분만을 PMM의 일부분과 혼합하고, 얻어진 혼합물을 건조하는 다른 택일적인 공정에서, 농축된 상청액의 나머지는 어떠한 나머지 PMM과 같이 건조될 수 있다. 또, 건조된 PMM 및 건조된 상청액도 상기 언급한 것처럼, 바람직한 상대적 비율에서 건조혼합될 수 있다.

바람직한 실시예의 설명

도 1을 참조하면, 본발명의 한 실시예의 플로우 시트(flow sheet)가 도식적으로 기술되어 있다. 캐놀라기름 종자 밀 및 수성 추출 배지들은 라인(10) 및 (12)에 의해 각각 블렌더(14)에 공급되고 여기서 기름 종자 밀 및 수성 추출 배지들은 혼합되고 혼합물은 라인(16)에 의해 혼합파이프(18)로 통과된다. 혼합파이프(18)에서, 기름 종자 밀은 추출되고 수용성 단백질 용액이 형성된다. 수용성 단백질 용액 및 잔류 기름 종자 밀의 슬러리(slurry)는 라인(20)에 의해, 잔류기름 종자 밀의 분리를 위한 진공필터벨트 (22)로 통과되고, 잔류기름 종자 밀은 라인(24)에 의해 제거된다. 수용성 단백질 용액은 그리고 나서 라인(26)에 의해 정제공정(28)으로 가고 거기서 수용성 단백질 용액은 원심분리되고 라인(30)에 의해 회수되는 미세물(fines)들을 제거하기 위해 여과된다.

정제된 수용성 단백질 용액은 라인(32)에 의해서 바람직한 정도의 수용성 단백질 용액의 농도를 제공하기 위한 크기로 된 한외여과막(34)으로 펌프되어, 라인(36) 내 미투과물(retentate)로서 농축된 단백질 용액을 생산하고, 투과액(permeate)은 라인(38)에 의해 회수된다. 농축된 단백질 용액은 혼합 티(mixing tee)(40)의 유입구로 투입되고, 원하는 정도의 희석도를 얻기에 위한 충분한 부피로 라인(42)에 의해 찬물이 공급됨과 함께 . 얻어진 용액은 단백질 미셀(micellar) 덩어리를 침강시키도록 하는 침강탱크(settling tank)(46)로 라인공급된다. 침강용기(46)에서 침강된 단백질미셀(micellar)덩어리는 때때로 라인(48)에 의해 제거되고 건조된 캐놀라단백질 분리물(52)를 얻기 위해 스프레이건조기(50)를 통과한다.

침강탱크로부터의 상청액은 라인(54)에 의해 제거되고 라인 (60)에 의해 제거되는 투과액(permeate)과 함께 라인(58)에서 미투과물로서 농축된 단백질 용액을 생산하기 위해 한외여과막(52)을 통과하여 펌프된다. 농축된 단백질 용액은 더 건조된 캐놀라단백질 분리물(64)을 얻기 위하여 스프레이건조기(62)를 통과하게 된다.

선택적으로, 라인(58)에서 농축된 단백질 용액은 혼합되기전에 단백질 미셀(micellar) 덩어리와 함께 혼합되도록 라인 (66)에 의해 통과될 수 있고 스프레이드라이기 (50)에서 건조되어진다.

실시예

실시예 1

이 실시예는 본발명의 한 실시예에 따라 캐놀라단백질 분리물의 생산을 위한 연속공정을 기술한다.

200g의 캐놀라밀(meal)을 50℃에서 0.15M의 염화나트륨용액 1350ml( 15% w/v )에 첨가시켰다. 얻어진 혼합물을 튜브에서 혼합물의 5분의 총 체류시간을 줄수 있는 충분한 길이의 튜브를 통해 통과시켰다. 튜브에서 나간 추출물의 분석 결과 20.5 g/L의 단백질 함량을 나타내었다. 대조적으로, 회분 모드에서는, 15% w/v의 캐놀라밀 용액의 염용해 (0.15 M NaCl)는 24℃에서 30분의 혼합후에 18.3 g/l의 단백질 함량을 얻었다.(Run BW-AH014-H29-01A)

296 g/l의 단백질 함량을 가진 8리터의 농축된 미투과물을 실시예 2에서 기술된 것처럼 회분공정에 의해 제조하였다. (BW-AH014-H29-01A 참조) 농축된 미투과물을 30℃의 온도에서,64 ml/분의 속도로 T모양 연결 파이프의 유입구로 펌프하여, T모양 연결 파이프의 다른 유입구로 펌프되는 4℃의 물과 함께 혼합하여, 1:10 비율의 희석액을 공급하였다. T모양 연결기는 두 흐름들을 혼합하고 하얗고 혼탁한 단백질미셀의 형성을 야기하기 위한 장치로서 사용되었다. 혼합물을 이후 T모양 연결파이프 유입구로부터, 4℃의 물로 채워져 있는 50리터의 침강용기로 통과시키고, 거기서 혼합물은 침강용기의 혼탁도를 최소화하도록 고안되어진 방출구를 통해 파이프를 빠져나갔다. 용기를 일정한 부피로 유지하면서 상청액을 침강용기의 상단으로부터 제거하였다. 이 시스템을 2시간동안 가동시켰다.

미투과물/물 혼합물이 침강용기로 흘러감에 따라 미셀과 상청액사이에서 경계층이 형성되기 시작하였다. 이 층은 첫 한시간 동안 용기 내에서 상층으로 이동하고, 이후 침강하기 시작하였다. 동시에, 침전된 점착성의 끈적거리는 덩어리(PMM) 층이 침강용기바닥에서 보였다. 공정이 진행됨에 따라, PMM층은 부피가 꾸준히 증가하였다. 침강하는 미셀과 상청액 사이의 경계층은 미투과물/물 유입구와 대략 같은 수준에서 머물렀다. 침강용기를 빠져나간 상청액은 투명하였고, 제거된 상청액에서 가시적인 미셀들은 없었다.

침강기간후에 용기바닥으로부터 제거된 PMM는 29.8 중량% 고체함량을 가졌고 미투과물에서 49 중량% 의 단백질을 나타내었다.

대조적으로, 회분방식에서는, 30℃의 온도에서 283 g/L의 단백질 함량을 가진 40리터의 농축된 미투과물을 1:10으로 4℃ 수돗물로 희석시키고 미셀은 1시간동안 침강하도록 방치시켰다. 용기 바닥으로부터 회수된 PMM는 36.2 중량% 고체함량을 가지고 미투과물에서 42 중량%의 단백질을 나타내었다. (Run BW-AH014-I05-01A)(실시예 2 참조)

실시예 2

이 실시예는 선행하는 실시예에서 기술되어진 회분공정의 상세설명을 제공한다.

"a" kg의 농축된 캐놀라밀을 주위 온도에서 "b" L의 0.15 M NaCl 용액에 첨가하고, "c" 분동안 교반하여 "d" g/L의 단백질 함량을 가진 수용성 단백질 용액을 공급하였다. 잔여의 캐놀라밀을 제거하고 진공필터벨트에서 세척하였다. 얻어진 단백질 용액을 원심분리에 의해 정제하여 "e" g/L 단백질 함량을 가진 정제된 단백질 용액을 생산하였다.

단백질추출용액은 3000달톤의 분획분자량를 가진 막을 사용한 한외여과시스템에서 부피를 감소시켰다. 얻어진 농축된 단백질 용액은 "f" g/L 단백질 함량을 가졌다. 농축된 용액을 "g" ℃에서 4℃의 수돗물로 1:10 으로 희석시켰다. 백색 혼탁이 즉시 형성되었고, 침강되도록 방치시켰다. 상부 희석수를 제거하고, 침전된 첨착성의 끈적이는 덩어리를 건조시켰다. 생성물을 "h"로 명명하였다.

단백질 생성물의 서로 다른 샘플들에 대한 특정 파라미터 "a" 내지 "h"들을 다음 표 1에서 나타낸다.

H	a	b	c	d	e	f	g
BW-AH014-H29-01A	1200	8000	30	18.3	14.7	296	(1)
BW-AH0147-I05-01A	1200	8000	30	19.0	14.2	283	36.8

표 1에서 (1)은 입수할 수 없음

실시예 3

이 실시예는 겨자(mustard), 비-GMO 캐놀라, 높은 유리식산 평지씨(high euricic acid rapeseed:H.E.A.R.), 백색 플레이크 캐놀라밀 및 냉압착 캐놀라밀에 대한 연속공정의 연속추출단계의 적용을 설명한다.

기름 종자 밀들을 55℃, 0.15 M NaCl용액의 분리된 500ml 부분표본(aliquot) 에 첨가하여 다음 농도들을 갖는 혼합물들을 제공하였다:

- 겨자, 높은 유리식산 평지씨(high euricic acid rapeseed ), 및 비-GMO 캐놀라: 15% w/v

- 백색 플레이크 및 냉압착 캐놀라밀 : 10%w/v

혼합물들을 파이프 내 5분의 추출시간을 허용하는 길이를 갖는 파이프를 통해 펌프하였다. 샘플들은 파이프를 빠져나가자마자 단백질 함량에 대해 분석되었다.

결과들은 다음 표 2에서 나타난다.

기름 종자 밀	추출액의 단백질 함량
겨자	27.3 mg/ml
H.E.A.R.	12.0 mg/ml
비-GMO 캐놀라:	10.7 mg/ml
백색 플레이크	23.0 mg/ml
냉압착 캐놀라밀	21.1 mg/ml

실시예 4

이 실시예들은 겨자, 비-GMO 캐놀라, 높은 유리식산 평지씨(high euricic acid rapeseed), 백색 플레이크 캐놀라밀 및 냉압착 캐놀라밀에 대한 연속공정의 연속희석단계의 적용을 나타낸다.

기름 종자 밀들의 추출은 각각의 기름 종자 밀에 대해 30분의 혼합시간으로 실온에서 0.15 NaCl 용액 내에서 실행되었다. 이 종자의 농도들은 하얀플레이크 및 냉압착 캐놀라밀에 대해서는 10% w/v이고 H.E.A.R., 비-GMO 캐놀라밀 및 겨자밀에 대해서는 15%w/v였다. 30분의 혼합시간 후에, 고체재료는 10분동안 10,000 xg에서의 원심분리에 의해 단백질 용액추출로부터 분리되었다. 단백질 용액들을 진공필터기구상에서 와트만(Whatman) #4 필터종이들을 통해 여과시킴으로써 더욱 정제시켰다.

각각의 정제된 것은 물 및 혼입된 저분자량 물질은 투과막을 통해 통과시키면서 용해성 단백질은 보유하기에 충분한 MWCO막을 사용한 아미콘 미니 교반-셀(Amicon mini stirred-cell)농축시스템 상에서 농축되었다. 각각의 단백질 용액은 200mg/ml이상으로 농축되게 된다.
농축 이후, 미투과물들은 두 개의 연동식 펌프 및 t-모양 연결기를 사용하여 연속방식에서 희석된다. 펌프속도들은 제 1 펌프보다 10배 빠른 속도에서 제 1 펌프가 액체를 이동시키도록 조정되어, 물 대 미투물의 희석비가 10:1인 희석비를 제공하였다. 펌프들을 동시에 작동시작시키고 미투과물 및 물들을 t 모양의 연결기를 통해 공통 라인으로 펌핑시켜, 여기서 이들이 혼합되고 미셀형성이 시작되었다.

얻어진 용액들은 이후 침강탱크로 통과시키고, 여기서 침전물들은 침강되도록 방치되었다. 침강된 PMM의 펠릿(pellet)들을 수집하고 동결건조시켜 형성된 각각의 PMM의 수율 및 단백질 함량을 계산하였다. 각각의 종자에 대해 얻어진 결과들을 이하 표 3 및 4에 나타내었다.

추출물들

기름 종자 밀	단백질 함량	추출액의 부피	단백질의 양
H.E.A.R.	11.7 mg/ml	800 ml	9.36 g
겨자	31.6 mg/ml	600 ml	19.0 g
비-GMO 캐놀라	6.9 mg/ml	1000 ml	6.9 g
백색 플레이크 캐놀라	18.0 mg/ml	900 ml	16.2 g
냉압착 캐놀라	16.4 mg/ml	1000 ml	16.4 g

PMM

기름 종자 밀	무게	단백질 함량⁽¹⁾	생산량⁽²⁾
H.E.A.R.	3.71 g	107 중량%	40 중량%
겨자	8.54 g	101 중량%	45 중량%
비-GMO 캐놀라	2.92 g	103 중량%	42 중량%
백색 플레이크 캐놀라	7.1 g	105 중량%	44 중량%
냉압착 캐놀라	6.94 g	100 중량%	42 중량%

주의:

(1) 단백질 함량은 켈달 질소 × 6.25(Kjeldahl nitrogen × 6.25)에 의해 결정된다. 모든 형성된 PMM산물들은 단백질 분리물들이었다.

(2) 수율은 PMM로서 회수된 추출된 단백질의 비율로서 결정되었다.

Claims

(a) 5℃ 이상의 온도에서 연속적으로 기름 종자 밀을 추출하여 기름 종자 밀 내 단백질의 용해를 일으키고 5 내지 6.8의 pH를 가지는 수용성 단백질 용액을 형성하는 단계,

(b) 잔여 기름 종자 밀로부터 상기 수용성 단백질 용액을 연속적으로 분리하는 단계,

(c) 선택적 막 조작을 통해 상기 수용성 단백질 용액을 연속적으로 전달하여, 일정한 이온강도를 유지하면서, 수용성 단백질 용액의 단백질농도를 50 g/L 이상으로 증가시켜 농축된 단백질 용액을 공급하는 단계,

(d) 상기 농축된 단백질 용액을 15℃이하의 온도를 가지는 찬물과 연속적으로 혼합하여 수상 내 단백질미셀의 형성을 야기하는 단계,

(e) 상청액을 용기에서 넘쳐흐르게 하면서 상기 (d) 단계에서 얻어진 혼합물을 침강용기 안으로 연속적으로 흐르게 하는 단계,

(f) 소정 양의 무정형의, 끈적이는, 젤라틴성 단백질 미셀 덩어리가 상기 침강용기에서 축적되어질 때까지 상청액이 용기로부터 연속적으로 넘쳐흐르는 동안 상기 단백질미셀들을 침강용기에서 연속적으로 침강시키는 단계,

(g) 켈달법(Kjeldahl method)에 따라 켈달 질소 × 6.25에 의해 결정된 건조중량기준으로 90 중량% 이상의 단백질 함량을 가지는 상기 단백질 미셀 덩어리를, 침강용기로부터 회수하는 단계를 포함하는 단백질 분리물을 제조하기 위한 방법.
제1항에 있어서, 상기 연속적으로 추출하는 단계는,

(ⅰ) 5℃ 내지 65℃의 온도에서, 0.10 이상의 이온강도, 및 5 내지 6.8의 pH를 가지는 수용성 염 용액과 함께 기름 종자 밀을 연속적으로 혼합하여 혼합물을 형성하고,

(ⅱ) 10분까지의 시간 동안 5 내지 40g/L의 단백질 함량을 가지는 수용성 단백질 용액을 형성하기 위해 기름 종자 밀로부터 단백질을 추출하는 동안 파이프를 통해 상기 (i)의 혼합물을 연속적으로 운반하는 것에 의해 수행되는 방법.
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제1항에 있어서, 상기 추출단계가 0.10 이상의 이온강도 및 3 내지 5 또는 6.8 내지 9.9의 pH를 가지는 수용성 염 용액을 사용하여 실행되고, 잔여의 기름 종자 밀로부터 상기 수용성 단백질 용액의 분리 이후에, 수용성 단백질 용액의 pH 가 5 내지 6.8로 조정되는 방법.
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제1항에 있어서, 상기 기름 종자 밀은 캐놀라기름 종자 밀이고, 잔여의 캐놀라 종자 밀로부터 수용성 단백질 용액의 상기 분리 이후에, 수용성 단백질 용액을 색소제거단계로 연속적으로 처리시키는 방법.
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제1항에 있어서, 상기 기름 종자 밀을 연속적으로 물에 의해 추출하고, 연이어서, 얻어진 수용성 단백질 용액에 염을 연속적으로 첨가하여 0.10 이상의 이온강도를 가지는 수용성 단백질 용액을 제공하는 방법.
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제1, 2, 8, 11 또는 15항 중 어느 한 항에 있어서, 농축된 단백질 용액의 점성을 감소시키기 위해 25 내지 40℃의 온도까지 상기 농축된 단백질 용액이 데워지는 방법.
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제1, 2, 8, 11 또는 15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 농축된 단백질 용액을 상기 찬물과 연속적으로 혼합하여 15배이하로 농축된 단백질 용액의 희석액을 공급하는 방법.
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제1, 2, 8, 11 또는 15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 회수된 단백질 미셀 덩어리가 단백질성 분말로 건조되는 방법.
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제1, 2, 8, 11 또는 15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상청액으로부터 단백질 분리물을 회수하기 위해, 회분, 반연속 또는 연속적으로 상기 상청액을 처리하는 방법.
제25항에 있어서,

(a) 100 내지 400g/L의 단백질농도로 상청액을 농축하고, 이 농축된 상청액을 건조하여, 켈달법(Kjeldahl method)에 따라 켈달 질소 × 6.25에 의해 결정된 건조중량기준으로 90 중량% 이상의 단백질 함량을 가지는 단백질 분리물을 생산하는 것;

(b) 100 내지 400g/L의 단백질농도로 상청액을 농축하고, 농축된 상청액을 회수된 단백질 미셀 덩어리와 혼합하고, 이 혼합물을 건조하여, 켈달법(Kjeldahl method)에 따라 켈달 질소 × 6.25에 의해 결정된 건조중량기준으로 90 중량% 이상의 단백질 함량을 가지는 단백질을 얻는 것; 또는

(c) 100 내지 400g/L의 단백질농도로 넘쳐흐르는 상청액을 농축하고, 농축된 상청액의 일부분을 회수된 단백질 미셀 덩어리의 전부 또는 일부분과 혼합하고, 얻어진 혼합물을 건조하여, 켈달법(Kjeldahl method)에 따라 켈달 질소 × 6.25에 의해 결정된 건조중량기준으로 90 중량% 이상의 단백질 함량을 가지는 단백질을 얻는 것;

에 의해 단백질 분리물을 넘쳐흐르는 상청액으로부터 회수하는 방법.
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제1, 2, 8, 11 또는 15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기름 종자 밀은 캐놀라기름 종자 밀, 평지씨(rapeseed) 밀 또는 겨자씨 밀인 방법.
제1항에 있어서, 상기 단백질 미셀 덩어리가 켈달법(Kjeldahl method)에 따라 켈달 질소 × 6.25에 의해 결정된 건조중량기준으로 100 중량% 이상의 단백질 함량을 가지는 방법.
제1항에 있어서, 수용성 단백질 용액의 단백질농도를 200 g/L 이상으로 증가시키는 방법.
제2항에 있어서, 수용성 단백질 용액의 기름 종자 밀과의 연속적 혼합이 35℃ 이상의 온도에서 수행되는 방법.
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