KR100743979B1

KR100743979B1 - 만성 신부전 치료의 약물 및 그 조제방법

Info

Publication number: KR100743979B1
Application number: KR1020047001842A
Authority: KR
Inventors: 강 왕; 시아오웨이
Original assignee: 지앙수 카니온 파마수티컬 씨오., 엘티디.
Priority date: 2001-08-06
Filing date: 2002-07-23
Publication date: 2007-08-01
Also published as: WO2003013560A1; KR20040044190A; CN1335168A; CN1119164C; US20040265397A1; US7311930B2

Abstract

본 발명은 일종 만성 신부전 치료의 약물 및 그 조제방법을 공개한다. 본 발명약물은 주요하게 하수오, 토사자, 태자삼, 창출, 구기자, 회우슬로 구성되었다. 본 발명약물은 흡수가 빠르고 치료효과가 좋으며 유효성분의 함량이 놓고 복용이 편리한 특징이 있다.

Description

만성 신부전 치료의 약물 및 그 조제방법{Herbal composition for treatment of chronic renal failure and method to produce thereof}

본 발명은 약물 및 그 조제방법과 관련된다. 특히 만성 신부전(chronic renal failure. CRF) 치료의 약물 및 그 제조방법과 관련이 된 것이다.

만성 신부전은 원발 혹은 속발성 신장질병 및 신사구의 지속적인 파손으로 나타나는 신장배설 기능, 내환경 온정, 내분비 기능 등 장애를 특징으로 하는 임상 중병이다. 만성 신부전은 인류의 건강에 엄중한 영향을 가져다 주고 사망을 초래하는 흔히 볼 수 있는 질병 중의 한가지이다. 북아메리카주, 서부 유럽 및 호주의 통계에 따르면 매년 매 백만인당 만성 신부전의 발병자수는 100명 내지 150명에 달하며, 요독증(uremia)단계의 환자수는 점차 상승세를 보이고 있다. 미국 근년의 조사자료에 의하면 지난 10년간 말기 신장병 환자수의 매년 상승율(growth rate)은 9%에 달하고 발명율은 200/100 만인구에 달하며 2000년에 요독증 환자의 총수는 25만명을 초과할 것으로 추측하고 있다. 중국의 역학(Epidemiology) 연구자료에 의하면 만성 신부전 환자의 매년 사망률(death rate)은 매 백만인구당 67.6명이며, 인구 총 사망률의 10%를 차지한다. 만성 신부전에 있어서 비록 장기적 투석과 신장이식(renal transplantation) 등 치료수단이 존재하지만 만성 신부전의 조기, 중기의 치료문제를 해결하지는 못하며, 게다가 치료비용이 높아 나라와 환자가정에 심한 경제부담을 가져댜 준다. 전세계 범위내에서 오직 20%의 지역만이 투석설비가 갖추어져 있으며 중국에서 투석치료를 받을 수 있는 환자는 겨우 종말기 신장병 환자의 1.0%에 달하고, 신장이식 치료를 받을 수 있는 환자는 더욱 적다. 따라서 만성 신부전 치료를 위한 투석 이외의 수단 또는 약물연구는 이미 현재 신장볍 치료학 연구의 중심 프로젝트로 되고 있다.

근년에 국내외 학자들은 만성 신부전 신장조직의 지속적 파손 메커니즘(Mechanism)에 대해 많은 연구를 해왔다. 만성 신부전 치료에 있어서 투석 이외의 수단으로 국외에서는 일부분 화학구조가 명확하고 성분이 간단한 약물을 개발했는데, 예를 들면 신령(필수 아미노산과 케토산, essential amino acies & Ketoacid), 안시오텐신 전환효소(angiotensin converting enzyme, ACE) 억제제, 활성비타민 D3, 적혈구생성 자극인자(erythropoiesis stimulating factor, ESF)등이 있다. 이런 약물들은 비싼 가격 및 단지 부분증상만을 완화시키는 제한된 효능으로 국내에서 널리 사용되지 못하고 있다. 안시오텐신 전환효소 억제제는 만성 신부전의 신장조직 섬유화를 효과적으로 억제할 수 있지만 개체차이가 비교적 크고 부작용이 비교적 크다. 중국내에서 보도된 만성 신부전에 대해 치료작용을 가진 중성약들로는 단일성분인 보신강편(保腎康片)과 생대황을 군약(君藥)으로 거사(祛邪)의 효능을 가진 요독청(尿毒淸)충제가 있다. 본 발명자의 관점에 의하면 만성 신부전의 발명 메커니즘은 주요로 신원(腎元)허약과 습탁(濕濯)이 체류한 것이다. 신원허약은 신기(腎氣), 신음(腎陰), 신양(腎陽) 모두가 부족한 것을 가르키며, 습탁체류는 신원허약으로 인한 여러가지 대사 노폐물이 체내에 남아 있는 것을 가리킨다. 신원허약은 발병의 본(本)이고, 습탁체류는 발병의 표(標)이다. 그러므로 본병은 허(虛)로 인한 실증이며, 대부분이 본허표실증(本虛標實症)에 속한다. 현재 중국내에는 아직 신원을 보호하고 신음과 신양을 조절하며 평보평사(平補平瀉), 부정설탁(扶正泄濁) 효능의 약물이 개발되지 않았다.

만성 신부전은 임상에서 흔히 볼 수 있는 위급 중병이다. 발병율은 점차 상승세를 보이고 있으며 사망률은 인구 총 사망률의 10%를 차지한다. 치료하기 어렵고 현재 사용되고 있는 투석과 신장이식은 비용이 크고 신장 래원이 결핍하고 합병증이 많은 등의 원인으로 보급되기에 어렵다. 그러므로 효과적인 중성양의 연제는 현재 의약계의 공동으로 되는 노력방향이라 할 수 있다.

본 발명의 목적은 아래의 기술을 통해 실현된다.

본 발명 약물의 주요한 약재 구성은 아래와 같다.

하수오(何首烏) 100 ~ 600중량분 토사자(兎絲子) 100 ~ 600중량분

태자삼(太子蔘) 100 ~ 600중량분 삽주(창출) 100 ~ 600중량분

구기자(枸杞子) 100 ~ 600중량분 회우슬(懷牛膝) 100 ~ 600중량분

본 발명 약물 조합에는 또 아래와 같은 약재를 첨가할 수 있다.

택란(澤蘭) 100 ~ 600중량분 적작(赤芍) 100 ~ 600중량분

복령(茯笭) 100 ~ 600중량분 택사(澤瀉) 100 ~ 600중량분

차전자(車前子) 100 ~ 600중량분 대황(大黃) 100 ~ 600중량분

본 발명 약물의 조제방법은 다음과 같다.

제하수오(制何首烏), 제대황(制大黃) 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 침출법(percolation)에 따라 60~90% 알코올을 용제로 담가서 삼침액을 수집하며 알코올을 회수한 후 농축하여 유동엑기스를 얻는다.

창출 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 2~8 배의 물로 2~8시간 담궈 수증기 증류의 방법으로 휘발유를 얻는다. 증류한 후의 찌꺼기와 약액은 따로 보존한다. 휘발유를 60~90%알코올에 용해한 후 교질연마방법에 따라 휘발유와 β-사이클로덱스트린(β-cyclodextrin)의 비율을 1 : 4~10로, β-사이클로덱스트린과 물의 비율은 1 : 1~3로 연마 포접한 후, 페이스트(paste)를 얻는다. 페이스트를 건조, 분쇄하여 크라드레트 화합물(clathrate compound, 포접 화합물)을 얻는다.

구기자, 복령을 함께 6~10배량의 물로 1~3차 달인다. 매차 1~3시간 달여 약액을 합한 후 농축, 원심하여 원심액을 얻는다.

창출의 증류 후 찌꺼기와 약액을 기타 약재와 함께 6~10배량의 물로 1~3차, 매차 1~2시간 달인 후 약액을 합하여 여과한다. 여과액을 농축한 후 실온으로 식혀 알코올 함량이 50~70% 달하게 첨가한다. 정치시켜 상청액을 수집한 후 알코올을 회수한다. 하수오와 대황의 유동엑기스, 구기자와 복령의 추출 원심액과 합한 후 농축, 감압건조하여 미세가루로 분쇄한다. 부형제(accessories)를 첨가하여 제립한 후 휘발유 β-사이클로덱스트린 크라드레트 화합물과 혼합하여 임상에서 응용할 수 있는 약물조합물을 만든다.

본 발명 약물 중의 하수오는 또 제하수오를 사용할 수도 있다. 본 발명 약불 중의 창출은 또 제창출을 사용할 수도 있다. 본 발명 약물중의 대황은 또 제대황을 사용할 수 있다.

본 발명 방법을 사용하여 조제한 타블렛(tablet)의 질량공제 검별방법은 다음과 같다.

약품 5정을 미소가루로 연마한 후 30ml 클로로포름(chloroform)을 첨가하여 1시간 환류추출한다. 여과한 후 찌꺼기를 증발건조시켜 40ml 알코올을 첨가한 후, 1시간 환류추출한다. 여과한 후 여과액을 증발건조시켜 찌꺼기에 1ml 알코올을 첨가한 후 용해시켜 시험용액으로 한다. 같은 방법으로 1g 하수오 대조약재를 대조약재용액으로 만든다. 얇은 막 크로마토그래피(thin layer chromatography) 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔(silica-gel) G 박층판에 점찍는다. 100:17:13의 비율로 에틸 아세테이트(ethyl acetate) - 메탄올(methyl alcohol) - 물을 전개용매(developing solvent)로 전개간격이 10cm이 될 때까지 전개한 후 말린다. 365nm 자외선 램프(ultraviolet lamp) 아래서 관찰할 때 시험품의 그래피에 대조약재의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 형광반점(fluorescent speckle)이 나타난다.

약품 4정을 미소가루로 30ml 알코올을 첨가하여 30분간 환류추출한다. 여과한 후 여과액에 2ml 염산을 첨가하여 1시간 환류추출한 후 2ml로 농축한 후 5ml 물을 첨가하여 매차에 15ml 클로로포름으로 2차 추출한다. 추출액을 증발건조시켜 찌꺼기에 2ml 클로로프롬을 첨가한 후 용해시켜 시험용액으로 한다. 대조품 올레아놀산(oleanolic acid)에 메탄올을 첨가하여 1g/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔(silica-gel) G 박층판에 점찍는다. 1:1 비율의 클로로포름:아세톤(acetone)을 전개용매로 전개한 후 말린다. 10% 유산의 알코올시액을 분사(spurt)하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.

약품 4정을 미소가루로 연마한 후 20ml 싸이크로헥산(cyclohexan)을 첨가하여 초음파(ultrasound)로 20분 처리한 후 여과하여 여과액을 약 1m로 말려서 시험용액으로 한다. 같은 방법으로 2g 창출 대조약재를 대조약재용액으로 만든다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔(silica-gel) G 박층판에 점찍는다. 20:1비율의 싸이크로헥산:에틸 아세테이트를 전개용매로 전개한 후 말린다. 5% 디메틸아미노벤젠 포름알데히드(Dimethylaminobezene Formaldehyde)와 10% 유산의 알코올 시액을 분사하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.

약품 5정에 30ml 메탄올을 첨가하여 30분간 환류추출한다. 여과한 후 여과액을 증발건조시켜 찌꺼기에 15ml 물을 첨가한 후 용해시켜 매차 15ml 부틸의 불포화 용액으로 2차 추출한다. 추출액을 합한한 후 건조시켜 지꺼기에 메탄올을 첨가하여 1m로 용해시켜 시험용액으로 한다. 대조품 파에오니프로린(paeoniflorin)에 메탄올을 첨가하여 1g/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔(silica-gel) G 박층판에 점찍는다. 40:5:10:0.2 비율의 클로로포름:에틸아세테이트:메탄올:개미산(formic acid)을 전개용매로 전개한 후 말린다. 10%유산의 알코올 시액을 분사하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.

본 발명 방법을 사용하여 제조한 타블렛(tablet)의 질량공제 함량측정검측방법은 다음과 같다.

약품 10정을 취해 코팅(coating)을 제거한 후 중량을 정밀측정한다. 미소가루로 연마한 후 1g을 취해 250ml 용적의 둥근 밑 플라스크(round-bottormed flask)에 넣은 후 2.5mol/L 유산용액 25ml를 첨가한다. 거기에 또 40ml 클로로포름을 첨가한 후 항온수조(general water bath)에서 4시간 환류시켜 클로로포름층을 분리한다. 남은 용액에 또 40ml 클로로포름을 첨가하여 계속 3시간 환류시켜 클로로포름층을 분리한다. 남은 용액에 또 클로로포름을 첨가하여 매차 10ml로 3차 추출을 한다. 추출액을 합하여 물로 중성이 되게 씻은 후 클로로포름을 회수한다. 찌꺼기는 메탄올을 첨가하여 5ml로 용해시킨 후 시험품용액으로 한다. 대조품 에모딘(emodin)에 메탄올을 첨가하여 0.1mg/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법(중국약전 1995년 출판 1부 부록 VIB)에 따라 시험품용액 5㎕과 대조품용액 2㎕, 8㎕을 각기 취해 같은 실리카겔(silica-gel) G 박층판에 점찍는다. 벤젠-에틸 아세테이트-메탄올-포름산-물(3:1:0.2:0.05:0.5)의 윗층 용액을 전개용매로 전개간격이 10cm 될 때까지 전개한 후 말린다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법(중국약전 1995년 출판 1부 부록 VIB) 얇은 막 스캔(scan)방법에 따라 스캔한다.(파장: λ_S = 435nm, λ_R= 600nm) 시험품의 흡수도 스코어(score)과 대조폼의 흡수도 스코어를 측정계산한다.

본 제품 매 타블렛(tablet)의 에모딘(C₁₅H₁₀O₅) 함량은 0.07mg이상 이어야 한다. 매일 3차 복용하며 매차에 4정 복용한다.

[실시예1] : 본 발명 약물 타블렛의 만성 신부전 치료효과에 관한 임상연구

임상연구는 본 발명 약물 타블렛의 치료를 받은 52명 만성 신부전 환자와 신강녕(腎康寧) 타블렛의 치료를 받은 16명 만성 신부전 환자의 치료효과를 비교하여, 본 발명 약물의 임상효과, 안정성, 부작용에 대해 전면적인 평가를 하였다.

1.1 환자선택

환자이 연령은 18~79세, 평균 42.4±17.8세이다. 남성환자는 32명, 여성환자는 36명, 남여환자수의 비례는 1:1.12이다. 본 임상연구실험에 합격된 환자수는 모두 68명, 치료군환자가 52명, 대조군환자가 16명이다.

두 군의 성별조성 비례에는 현저한 차이가 없으며(P>0.1), 표1을 참조한다.

두 군의 연령조성 비레에는 현저한 차이가 있다.(P<0.01) 치료군의 노인환자수 조성비례는 대조군보다 훨씬 더 크며, 표2를 참조한다.

두 군의 치료시간은 현저한 차이가 없으며(P>0.1), 표1을 참조한다.

두 군의 증상 스코어(score)을 비교할 때, 현저한 차이가 없으며(P>0.1), 표1을 참조한다.

두 군의 환자의 질병 단계를 비교할 때 현저한 차이가 있다.(P<0.01) 치료군의 뇨질소혈액 단계와 요독증 단계의 환자수 조성비례는 대조군보다 훨씬 더 크며, 표3을 참조한다.

1.2 진단표준

1.2.1 서의 진단표준

(1) 환자는 만성 신장염의 병력이 있다.

(2) 만성 신부전의 임상징후와 대사문란이 있다.

(3) 혈청크레아티닌(serum creatinine:SCr)이 133μmol/L을 초과한다.

만성 신부전은 징후에 따라 아래와 같은 네 단계로 나눈다.

제1단계(신부전의 보상단계) : 신사구여과율(glomerular filtration rate, GFR)이 50~80ml/분, 혈청크레아티닌(SCr)이 133~177μmol/L.

제2단계(신부전의 실보상단계) : 신사구여과율이 50~20ml/분, 혈청크레아티닌이 178~442μmol/L.

제3단계(신부전단계) : 신사구여과율이 20~10ml/분, 혈청크레아티닌이 443~707μmol/L.

제4단계(요독증단계) : 신사구여과율<10ml/분, 혈청크레아티닌>707μmol/L.

표1 : 두 군의 성별, 치료기간, 증상 스코어 비교

군	환자수	인수(명)		치료기간(개월)	증상스코어
군	환자수	남성	여성	치료기간(개월)	증상스코어
치료군	52	24	28	19.88±27.26	45.43±10.94
대조군	16	8	8	18.69±11.64	42.88±4.5

두 군 환자의 성별, 치료기간, 증상스코어에 현저한 차이가 없어(P>0.1), 비교성을 가진다.

표2 : 두 군 환자의 연령조성비례 비교

군	환자수	18-30세(%)	31-60세(%)	61-80세(%)
치료군	52	8(15.3)	25(48.1)*	21(41.2)*
대조군	16	3(18.3)	11(68.8)*	2(3.8)*

두 군의 연령조성 비례(X² 분석) *P<0.01이 설명하다시피 대조군 31-60세 환자의 비례는 치료군보다 훨씬 크고(P<0.01), 치료군 61-80세 환자의 비례는 치료군보다 훨씬 크다.(P<0.01)

표3 : 두 군 환자의 질병 단계 비교

군	환자수	보상단계(%)	뇨질소혈액단계(%)	요독증단계(%)
치료군	52	7(13.46)	24(46.15)	21(40.38)
대조군	16	10(62.5)	5(31.25)*	1(6.25)

두 군 환자의 질병단계를 비교(X² 분석)할 때 현저한 차이가 있다.(P<0.01) 치료군의 뇨질소혈액 단계와 요독증 단계의 환자수 조성비례는 대조군보다 훨씬 더 크고, 대조군의 보상단계환자수 비례는 치료군보다 훨씬 더 크다. 모두가 통계학적 의미를 가진다.(P<0.01)

1.2.2 중의 변증 표준

중화전국중의학회 제3차 중의신병학회에서 통과한 《만성신부전증의변증분형표준》즉, 《증약신약요독증치료의임상연구지도원칙》 변증분형표준의 기음양허(氣陰兩虛) 겸 습탁(濕濁)증에 의거한다.

비신기음양허(碑腎氣陰兩虛)증:

면색소호, 기단핍력(氣短乏力), 허리와 다리가 시큰하고 나른하며, 피부가 건조하고, 구건진조(口乾唇藻)하며 물을 많이 마시지 않는다. 혹은 수족심열(手足心熱), 대변이 무르거나 되며, 소변의 양이 적고 노랗거나 야뇨청장(夜尿淸長), 설담(舌淡), 치흔(齒痕)이 있으며 맥은 가늘고 무겁다.

습탁(濕濁)증:

오심구토, 납소(納少)복창, 신중권태, 설태가 두텁다.

1.3 적합표준

1.3.1 진단표준에 따라 만성 신부전으로 진단된 환자

1.3.2 자원적으로 여러가지 필수검사를 받을 수 있으며, 치료효과 판단에 유리한 환자.

1.3.3 18세이상, 79세이하의 만성 신장염 병력이 있고 신부전으로 명확히 판단받은 환자.

1.4 아래와 같은 상황이 존재하는 환자는 불합격환자로써 실험에 참가할 수 없다.

1.4.1 이미 복막투석 혹은 혈액투석을 진행한 환자.

1.4.2 임심 또는 수유기 환자

1.4.3 기타 장기의 엄중한 질병을 합병한 환자, 예를 들면 심혈관, 간장, 조혈기능 등의 엄중한 일차성 질병을 합병한 환자.

1.4.4 적합표준에 부합되지 않고, 요구에 따라 약을 복용하지 않았거나, 효과를 판단할 수 없거나, 혹은 자료가 완전하지 않는 등 여러가지 원인으로 치료효과와 안전성에 대해 판단을 내릴 수 없는 환자.

1.5 제거 표준

1.5.1 약물복용과정에서 부작용이 없었지만 기타의 추측하지 못했던 원인으로 치료를 중단한 환자.

1.5.2 엄중한 부작용으로 반드시 약물복용중단이 필요한 환자. 이런 환자에 한해서는 실험을 끝마칠 때 제거환자비례이 통계가 필요하며, 그 원인에 대한 분석을 진행해야 한다.

1.6 연구방법

1.6.1 분군, 복용방법과 치료시간

시험군 52명 환자는 본 발명약물을 복용한다. 본 약물에는 주요로, 제하수오 100~600중량부, 토사자 100~600중량부, 태자삼 100~600중량부, 회우슬100~600중량부 , 창출 100~600중량부, 구기자 100~600중량부등 약재가 포함되어 있다. (연운강강연제약유한책임회사에서 제공, 배치번호(batch number)는 9808127) 매일 3차, 매차 4정 연속 2개월 복용한다.

대조군 16명 환자는 신강녕 티브릿을 복용한다. 주요로 황기, 단부편(radix aconiti lateralis preparata), 월참(月參), 복령, 택사, 참마, 익모초 등 약재가 포함되어 있다. 효능은 익기온신(益氣溫腎), 활혈삼습(活血渗濕)이며, 주요로 만성 신장염과 만성 신부전을 치료한다.(항주정대청춘보제약유한회사에서 제공, 중국위생부약품표준은 1992년 WS-B-1153-92). 매일 3차, 매차 5정 연속 2개월 복용한다.

1.6.2 주요관찰지표

(1) 주요증상관찰 : 주요로 기음양허, 습탁내운의 징후증상을 관찰한다. 매주에 한번씩 기록하며 정도에 따라 중(重), 중(中), 경(輕), 무(无)로 나누어 각각 6, 4, 2, 0점으로 기록한다.

(2) 부작용관찰 : 주요로 약물복용 후 환자에 나타나는 부작용을 관찰한다.

(3) 주요관찰지표

치료효과 관측지표 : 요소질소(urea nitrogen), 혈청크레아티닌(SCr), 혈중 뇨산(serum uric acid, Ua), 이산화탄소 결합력(CO₂-CP); 혈 전해질(electrolyte)검사, 혈액검사, 혈압; 24시간 뇨단백정량(24hUpro), 뇨액검사; 뇨크레아티닌(Urine Creatinine), 혈과 뇨의 삼투압(osmotic pressure)검사, 양측 신장의 B-형초음파(B-mode ultrasound)검사

안정성 관측지표 : 혈, 뇨, 대변검사; 간장, 신장기능; 심전도(ECG); 흉부촬영(x-ray Chest)

1.6.3 치료효과 판단표준

1987년 전국신부전보수치료방법전문학술회의에서 규정한 표준을 참고한다.

(1) 현효 : ①증상이 현저히 나아지거나 사라짐. ②내생 크레아티닌 청소율(creatinine clearance)의 증가가 30%이상. ③혈청 크레아티닌의 감소가 30%이상 또는 정상범위로 회복.

위의 ①항은 필수적이고 나머지 ②③항은 하나만 갖추면 즉시 판단할 수 있다.

(2) 유효 : ①증상이 나아지거나 사라짐. ②내생 크레아티닌 청소율의 증가가 20%이상. ③혈청 크레아티닌의 감소가 20%이상. ④치료전후 혈청크레아티닌의 대수(logarithm) 또는 역수를 선형회귀곡선(linear regression equation)으로 분석한 결과 슬로프(slope)가 뚜렷한 통계적 의미를 가짐.

(3) 온정 : ①증상에 차도가 있음. ②내생 크레아티닌 청소율의 증가가 20%미만. ③혈청 크레아티닌의 감소가 20%미만. ④치료전후 혈청크레아티닌의 대수 또는 역수를 선형회귀곡선으로 분석한 결과 슬로프가 통계적 의미를 가짐.

위의 ①항은 필수적이고 나머지항은 하나만 갖추면 즉시 판단할 수 있다.

(4) 무효 : 현효, 유효, 온정의 판단표준에 부합되지 않는 환자.

1.6.4 중의 기음양허, 습탁내운의 징후증상에 대한 치료효과의 판단표준

(1) 현효 : 중의 증상스코어가 75 - 100% 감소된다.

(2) 유효 : 중의 증상스코어가 35 - 74% 감소된다.

(3) 무효 : 중의 증상스코어의 감소가 34%에 달하지 못한다.

표4 : 두 군 환자의 치료효과 비교

군	환자수	현효(%)	유효(%)	온정(%)	무효(%)	총유효(%)
치료군	52	14(26.9)	27(51.9)	3(5.7)	8(15.4)	41(78.8)
대조군	16	1(6.25)	3(18.75)	4(25)	8(40)	4(25)

설명 : 두 군의 치료효과 비교(radit 분석) : P<0.01

표4에서 알수있다시피 치료군의 총유효율은 78.8%이며, 대조군 총유효율의 25%보다 훨씬 높다. 두 군 총유효율의 차이는 통계학적으로 현저한 의미를 가진다.(P<0.01)

2.2 주요 치료효과의 검측지표

(1) BUN과 SCr

표5, 6을 참조한다.

표5 : 두 군 BUN의 검측결과 및 치료시간과의 관계(X±S)mmol/L

군	환자수	복용전	복용후
군	환자수	복용전	1개월	2개월
치료군	52	19.10±10.44	18.30±9.23	15.737±8.85*
대조군	16	9.81±2.49	9.27±1.59	9.39±2.06

설명 : 치료전후의 비교(t 분석) *P<0.05;

표5가 설명하다 싶이 치료군 약물은 환자의 혈액뇨질소(BUN)를 현저히 하강시킨다. 효과 시작시간은 보통 복용 후 2개월 정도이며 통계적 의미를 지닌다.(P<0.05) 따라서 본 발명약물의 만성 신부전 치료시간을 2개월로 추측한다. 대조군의 혈액뇨질소는 치료전후 뚜렷한 변화가 없다(p>0.05).

표6 : 두 군 SCr 검측결과 및 치료시간과의 관계 (X±S)μmol/L

군	환자수	복용전	복용후
군	환자수	복용전	1개월	2개월
치료군	52	535.96±374.58	487.76±329.85	408.02±303.32*
대조군	16	180.73±60.27	189.91±61.48	198.78±74.35

설명 : 치료전후의 비교(t 분석) *P<0.05;

표6이 설명하다싶이 치료군 약물은 복용후 1개월부터 환자의 혈청크레아티닌(SCr)을 하강시키며 2개월 후의 하강은 현저한 통계적 의미를 가진다.(P<0.05) 따라서 본 발명약물의 만성 신부전 치료시간을 2개월로 추측한다. 대조군의 혈청크레아티닌(SCr)은 치료전후 뚜렷한 변화가 없다(p>0.05).

(2) 이산화탄소 결합력, 혈중 뇨산, 혈청칼륨

표7을 참조한다.

표 7: 두 군의 치료전후 CO₂-cp, Ua, K 검측결과 비교(X±S)mmol/L

군	환자수	CO₂-cp		Ua		K
군	환자수	복용전	복용후	복용전	복용후	복용전	복용후
치료군	52	20.67±4.79	22.0±4.72	480.39±169.78	468.77±154.85	4.41±0.73	4.36±0.51
대조군	16	23.01±2.85	24.52±3.34	323.43±82.97	326.76±99.78	4.46±0.56	4.46±0.67

표7이 설명하다시피 두군 치료전후 CO₂-cp, Ua, K 의 검측결과에는 뚜렷한 변화가 없다.(P>0.05)

(3) 적혈구(RBA), 헤로글로빈(Hemoglobin, Hb), 혈장 알부민(Albumin, ALB)

표8을 참조한다.

표 8 : 두 군의 치료전후 RBC, Hb, ALB 검측결과 비교(X±S)

군	환자수	RBC(×10¹²/L)		Hb(g/L)		ALB(g/L)
군	환자수	복용전	복용후	복용전	복용후	복용전	복용후
치료군	52	3.28±1.09	3.33±1.11	94.23±33.42	94.95±38.77	34.58±8.64	34.84±6.16
대조군	16	3.88±0.80	3.85±0.75	121.88±22.11	122.93±20.91	34.09±5.75	35.34±5.51

표8이 설명하다시피 두군 치료전후 RBC, Hb, ALB의 검측결과에는 뚜렷한 변화가 없다.(P>0.05)

(4) Ucr, 24h Upro정량

표9를 참조한다.

표 9 : 두 군의 치료전후 Ucr, 24h Upro정량 검측결과(X±S)

군	환자수	Ucr(μmol/L)		24h Upro정량(g/d)
군	환자수	복용전	복용후	복용전	복용후
치료군	30	4349.09±1734.85	5832.08±1452.39**	1.38±0.57	1.27±0.25
대조군	16	4470.92±1047.38	4504.71±1258.69	1.33±0.62	1.17±0.63

설명 : 군내의 치료전후 비교(t 분석) **P<0.01

표9가 설명하다시피 치료군 약물은 뇨크레아티닌을 현저히 제고시키며 통계적 의미를 지닌다.(P<0.01). 대조군의 뇨크레아티닌은 치료전후 뚜렷한 변화가 없다.(P>0.05) 두군 치료전후의 24시간 뇨단백정량에는 뚜렷한 변화가 없다(P>0.05).

(5) 혈과 뇨액의 삼투압

표 10을 참조한다.

표10 : 두군의 치료전후 혈과 뇨액의 삼투압 비교

군	환자수	혈액삼투압		뇨액삼투압
군	환자수	복용전	복용후	복용전	복용후
치료군	30	286±45.58	474±137.52**	321.06±90.77	423.50±95.87**
대조군	16	293±52.58	344.20±92.34*	451.63±187.96	462.25±140.27

설명 : 군내의 치료전후 비교(t 분석) *P<0.05, **P<0.01

표10에서 설명하다시피 치료군 약물은 혈과 뇨액의 삼투압을 현저히 제고시키며 통계적 의미를 가진다.(P<0.01) 대조군 약물도 혈액 삼투압을 현저히 제고시키며 통계적 의미를 가진다.(P<0.05)

(6) 증상점수의 변화

표11을 참조한다.

표11 : 두 군의 치료전후 증상점수 비교

군	환자수	복용전	복용후
치료군	52	42.875±4.52	23.02±0.022**△
대조군	16	41.025±4.31	30.04±1.68*

설명 : 치료전후 비교(t분석) : *P<0.05; **P<0.01;

치료후 두 군의 비교(t분석) : △P<0.05;

표11이 설명하다시피 두군 약물은 모두 주요 증상을 현저히 개선시킬 수 있다. (P<0.05 또는 P<0.01). 치료군의 증상개선의 치료효과 점수는 대조군보다 훨씬 높다.(P<0.05)

2.3 안정성 관찰

본 임상연구증 두군의 환자는 약물을 복용하는 과정에서 증상 혹은 징후의 뚜렷한 부작용을 드러내지 않았다. 설립한 안전성 지표, 예를 들면 ECG, 간기능, X-RAY등 검사결과에 이상이 나타나지 않았다.

3. 임상연구결과에 대한 토론과 결론

본 발명약물의 만성 신부전 치료효과를 놓고 볼 때, 총유효율은 78.8%, 현효율은 26.9%이다. 대조군의 총유효율은 25%, 현효율은 6.25%이다. 치료군의 현효율과 총유효율은 대조군에 비해 훨씬 높으며 통계학적 분석결과 모두가 아주 현저한 차이를 가진다.(p<0.01)

본 발명약물은 약성이 평화롭고 보기불체(補氣不滯)하며, 자신(滋腎)하지만 역하지 않고, 온양(溫陽)하지만 건조하지 않다. 거사(祛邪)하지만 상정(傷正)하지 않고 평보평사(平補平瀉)함으로써 인체를 점차 조절하여 만성 신부전의 발전속도를 지연하는 목표를 실현한다. 본 발명약물은 복통, 설사, 납소(納少) 등 반응이 없으므로 장기적으로 사용할 수 있어 만성 신부전을 해결하는 안전유효의 중성약이다. 2개월간 치료의 현효율은 26.9%이고, 총유효율은 78.8%이며 온정성은 5.7%이여서 진일보 연구할 가치를 가진다.

[실시예2]

1. 본 발명 약물이 아데닌으로 인한 큰 쥐 CRF에 대한 실험 치료작용

1.1 실험모델(model) 제작

수컷 SD큰쥐를 일주일간 적응성적인 사양을 걸친 후 2%의 아데닌을 250mg/kg/일 경구투여(gavage)시킨다. 동시에 정상대조 용도의 다른 10마리 수컷 큰쥐에게 같은 체적의 증류수를 경구투여시킨다. 연속 4주일간 투여한 후 아데닌모델큰쥐는 체중을 달고 안와로부터 피를 취득해 혈액뇨질소(BUN)와 혈청크레아티닌(SCr)를 측정하며 BUN의 범위가 20.00~32.00mmol이고 Cr의 범위가 86.00~136.00μmol/L인 60마리의 모형쥐를 골라서 BUN, Cr의 범위에 따라 임의로 다섯군으로 나눈 후 약물 치료를 시작한다.

1.2 분군 및 약물용량

(1) 정상대조군 : 10마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 1차, 매차 10mg/kg의 증류수를 투여한다.

(2) 모델대조군 : 12마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 1차, 매차 10mg/kg의 증류수를 투여한다.

(3) 본 발명약물의 고 용량군 : 12마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 본 발명약물을 43.3g/kg투여한다. 이 약물용량은 인체 용량의 42배이다. 매일2차씩, 매차 10.8g/ml의 약물 서스펜션(suspension)을 투여한다.

(4) 본 발명약물의 중 용량군 : 12마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 본 발명약물을 21.65g/kg투여한다. 이 약물용량은 인체 용량의 21배이다. 매일 1차씩, 매차 10.8g/ml의 약물 서스펜션을 투여한다.

(5) 본 발명약물의 저 용량군 : 12마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 본 발명약물을 10.83g/kg투여한다. 이 약물용량은 인체 용량의 10.5배이다. 매일 1차씩, 매차 5.4g/ml의 약물 서스펜션을 투여한다.

(4) 양성약물 대조군 : 12마리 수컷 SD큰쥐에게 매일 신강녕 타블렛을 10.83g/kg투여한다. 이 약물용량은 인체 용량의 22.4배이다. 매일 1차씩, 매차 5.19g/ml의 약물 서스펜션을 투여한다.

본 발명약물의 고, 중, 저 용량의 비례는 4:2:1이다.

1.3 약물 투여시간

연속 6주간 투여한다.

1.4 검측지표

(1) 약물투여전 및 투여후 매주에 한번씩 체중을 측정한다.

(2) 약물투여전 및 투여후 3주, 6주만에 안와로부터 피를 취득해 혈청 BUN, Cr, TP, ALB, Hb를 측정한다.

(3) 약물투여를 끝마친 후 쥐를 죽이고 육안으로 신장형태구조를 관찰하며 신장무게를 달아 신장지수(단측의 신장무게mg/체중g)를 계산한다.

(4) 매군에서 번호가 작은데서 큰데로 4마리 쥐를 선택해 신장조직의 HE염색, PAS염색, Masson염색을 진행하며 이에 대해 광학현미경관찰을 실시한다.

(5) 매군의 2개 샘플에 한해서는 얇은 절편을 제작하여 전자현미경관찰을 실시한다.

병리조직학검사는 남경군구총병원 해방군신장병연구소에서 책임지고 완성하였다.

2. 본 발명 약물이 5/6 신장절제로 인한 큰쥐 CRF에 대한 실험 치료작용

2.1 실험모델제작

80마리의 수컷 SD큰쥐를 일주일간 사양관찰한 후 그중 70마리에 대해 5/6신장절제술을 진행한다. 수술은 두차례를 걸쳐 완성된다. 큰 쥐를 2% 펜토바르비탈나트륨(sudium pentobarbital)으로 마취한 후 일반절차로 피부소독을 진행한다. 측복부절개로 좌측 신장을 노출하여 신근막을 분리시킨다. 이어서 신속히 좌측 신장의 상, 하극 신실질을 절제한다. 절제한 부분은 좌측 신장의 2/3를 차지한다. 일주후에 우측 신장을 전부 절제한다. 수술과정에서 부신(adrenal glands)을 조심해서 분리해야 하며 손상을 방지해야 한다. 수술후에는 겔필름해면으로 남은 신장을 감싸며 압력으로 지혈한다. 전부의 수술과정은 한사람이 완성한다. 무균조건하에서 수술을 진행하고 수술후에는 페니실린을 연속 4주간 주사하여 감염을 예방해야 한다. 나머지 10마리는 정상대조로 한다. 제2차 수술 4주후에 모든 쥐의 체중을 측량하며 안와로부터 피를 취득해 혈액 BUN, Cr 를 측정하고 BUN과 Cr의 범위에 따라 임의로 다섯군으로 나눈다.

2.2 분군 및 약물용량

1.2와 같다.

2.3 약물투여시간

큰 쥐의 제2차 수술 후 4주만에 실험모델제조가 성공한 후로부터 시작해 연속 6주간 약물을 경구투여한다.

2.4 검측지표

1.3과 같다.

병리조직학검사는 남경의과대학병리형태연구소에서 완성하였다.

실험결과

1. 본 발명약물이 아데닌으로 인한 큰쥐 CRF에 대한 실험 치료작용

1.1 체중변화와 일반상황

표12 : 본 발명약물이 아데닌으로 인한 CRF큰쥐의 체중에 대한 영향

(g, X±S)

군	용량(g/k)	치료전체중	치료후체중
군	용량(g/k)	치료전체중	2주	4주	6주
정상대조군	-	164.20±10.91	230.00±22.36	295.50±12.12*	373.50±24.73**
모델대조군	-	170.83±10.62	194.44±15.29	248.13±7.04△	305.00±17.73△△
본 발명약물	43.30	169.58±8.91	216.25±13.51	274.17±14.43	369.10±41.50**
본 발명약물	21.65	166.67±12.67	208.00±12.95	266.50±12.70	336.00±24.36*
본 발명약물	10.83	170.00±11.48	207.50±7.83	263.75±8.82	322.08±17.25△
양성약물대조군	10.38	170.83±10.62	207.50±2.63	259.44±7.68	314.00±41.35△

* 모델대조군과 비교 p<0.05; ** 모델대조군과 비교 p<0.01

△ 정상대조군과 비교 p<0.05; △△ 정상대조군과 비교 p<0.01

큰 쥐에게 아데닌을 투여한 후 체중증가가 지연되고 심지어 일부 쥐의 체중은 오히려 하강세를 보였다. 그 밖에 큰 쥐의 식량이 줄고 모발이 건조하며 정신이 피곤해보이고 귀바퀴 및 꼬리의 색깔이 창백해지는 등 현상을 관찰할 수 있었다. 치료군의 쥐도 모델대조군과 비슷한 증상을 나타냈지만 그 정도가 가볍다. 치료군 큰 쥐의 체중증가는 모델대조군보다 컸으며 그 중에서도 고용량군이 가장 뚜렷하고 고, 중용량군 큰 쥐의 체중은 모델대조군보다 현저히 컸다.(각기 p<0.01, p<0.05) 양성약물대조군의 체중증가는 치료군에 비해 느리다.

시험과정에서 모델대조군과 양성약물대조군에서 각기 4마리의 쥐가 사망했으며 존 발명약물 중용량에서 2마리가 사망했다. 본 발명약물 중용량군에서 1마리가 약물투여실수로 사망된 이외에 기타 사망예는 해부학검사에서 커다란 신장 혹은 희고 큰 신장을 관찰할 수 있었다. 기타 장기에는 이상이 없었다.

1.2 신장 중량

표13 : 본 발명약물이 아데닌으로 인한 CRF 큰쥐의 신장 index

(단축의 신장무게/체중)에 대한 영향

군	용량(g/kg)	동물(마리)	체중(g, X±S)	신중(단측)(g, X±S)	신장 index(mg/g체중, X±S)
정상대조군	-	10	373.50±24.73**	1.08±0.2	2.85±0.41**
모델대조군	-	8	305.00±17.73△△	4.60±1.08△△	15.22±4.22△△
본 발명약물	43.30	12	369.10±41.50**	4.53±0.77△△	12.26±1.60*△△
본 발명약물	21.65	10	336.00±24.36*	4.32±0.28△△	12.94±1.54△△
본 발명약물	10.83	12	322.08±17.25△	4.48±0.56△△	14.08±2.17△△
양성약물대조군	10.38	8	314.00±41.35△	4.11±0.46△△	13.38±2.46△△

* 모델대조군과 비교 p<0.05; ** 모델대조군과 비교 p<0.01

△ 정상대조군과 비교 p<0.05; △△ 정상대조군과 비교 p<0.01

큰 쥐에게 아데닌을 투여한 후 신장중량이 뚜렷이 커졌으며 정상대조군과 비교할 때 P<0.01. 본 발명약물 치료군의 신장지수는 모델대조군에 비해 작으며 그 중에서도 고용량군이 가장 뚜렷하다(P<0.05). 그러나 정상대조군에 비교할 때 여전히 크다.

1.3 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌

표14 : 본 발명약물이 아데닌으로 인한 CRF큰쥐의 혈액뇨질소에 대한 영향

군	용량(g/kg 체중)	BUN(mmol/L, X±S)
군	용량(g/kg 체중)	치료전	3주	6주
정상대조군	-	9.97±0.77**△△(10)	8.50±1.14**△△(10)	8.16±1.44**△△(10)
모델대조군	-	28.24±5.57(12)	24.46±2.41(9)	19.41±2.61(8)
본 발명약물	43.30	28.63±5.93(12)	19.41±2.88*(12)	9.02±1.17**△△(12)
본 발명약물	21.65	28.95±5.17(12)	19.95±2.76*(10)	11.45±2.13**△△(10)
본 발명약물	10.83	27.68±7.11(12)	19.71±1.92*(12)	15.52±3.47*△(12)
양성약물대조군	10.38	26.61±6.02(12)	24.48±3.55(9)	20.15±5.31(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05; ** 모델대조군과 비교 p<0.01

△ 양성약물대조군과 비교 p<0.05; △△ 양성약물대조군과 비교 p<0.01

표15 : 본 발명약물이 아데닌으로 인한

CRF큰쥐의 혈청크레아티닌에 대한 영향

군	용량(g/kg 체중)	Cr(mmol/L, X±S)
군	용량(g/kg 체중)	치료전	3주	6주
정상대조군	-	72.57±6.73**△△(10)	69.80±5.56**△△(10)	70.79±3.40**△△(10)
모델대조군	-	91.45±23.66(12)	98.88±7.64(9)	103.95±18.08(8)
본 발명약물	43.30	88.59±30.26(12)	83.63±10.42*(12)	70.02±20.69**△△(12)
본 발명약물	21.65	87.88±27.55(12)	85.65±6.89*(10)	64.65±8.08**△△(10)
본 발명약물	10.83	94.28±38.28(12)	78.34±9.65*(12)	51.18±14.43**△(12)
양성약물대조군	10.38	94.92±29.71(12)	94.08±6.13(9)	92.93±22.08*(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05; ** 모델대조군과 비교 p<0.01

표14, 15에서 설명하다시피 큰쥐에게 아데닌을 4주간 투여한 후 혈액종 BUN, SCr의 함량이 높아지고 CRF를 형성한다. 본 발명약물로 6주간 치료한 후 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌의 수치는 모델대조군과 양성약물대조군에 비해 훨씬 낮아지고 현저한 통계적 차이를 가진다.(P<0.01) 이것은 본 발명약물이 CRF 큰쥐의 신장기능을 개선함을 설명한다.

1.4 헤모글로빈과 혈장프로테인

표16 : 본 발명약물이 아데닌으로 인한 CRF 큰쥐의 헤모글로빈과

토털 프로테인 및 알부민에 대한 영향

군	용량(g/kg 체중)	Hb(g/L, X±S)		TP(g/L, X±S)		ALB(g/L, X±S)
군	용량(g/kg 체중)	치료전	치료후	치료전	치료후	치료전	치료후
정상대조군	-	164.60±5.40**△△(10)	165.00±5.40**△△(10)	79.09±3.61**△△(10)	74.60±5.70**△△(10)	57.12±2.99**△△(10)	54.53±4.72**△△(10)
모델대조군	-	131.85±8.35(12)	124.88±7.32(8)	56.63±12.58(12)	42.63±3.54**△△(8)	34.72±5.87(12)	31.10±4.85(8)
본 발명약물	43.30	142.91±9.54(12)	170.25±9.58**△△(12)	66.12±14.65(12)	57.25±3.55**△△(12)	37.73±8.42(12)	38.69±2.09*(12)
본 발명약물	21.65	136.62±6.32(12)	168.60±13.29**△△(10)	58.94±10.94(12)	55.65±4.23**△△(10)	34.21±6.73(12)	37.71±2.67*(10)
본 발명약물	10.83	138.78±7.22(12)	157.08±6.56**△△(12)	55.80±11.40(12)	49.83±5.56(12)	34.25±7.34(12)	35.73±4.37*(12)
양성약물대조군	10.38	137.24±8.68(12)	135.13±19.52(8)	56.94±9.18(12)	45.54±6.82(8)	34.62±7.24(12)	33.93±4.77(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05; ** 모델대조군과 비교 p<0.01

△△ 양성약물대조군과 비교 p<0.01

표 16이 설명하다시피 실험모델의 헤모글로빈 및 혈장 프로테인의 함량은 정상대조군보다 훨씬 낮다. 본 발명약물로 6주간 치료한 후 큰쥐 헤모글로빈의 함량은 모델대조군과 양성약물대조군에 비해 훨씬 높아진다(p〈0.01). 이것을 본 발명약물이 CRF 큰쥐의 헤모글로빈 함량을 제고할 수 있음을 설명한다.

1.5 병리형태학 변화

(1) 일반적 병리형태의 변화

a. 신장의 대체적인 변화

실험모델군 동물의 신장은 창황색을 띠고 종창되었으며 표면이 매끄럽고 비드(beed)형을 나타낸다. 절단면도 창황색을 띠고 많고 크기가 다른 마이크로포(micropore) 구조를 보여준다. 신피질은 약간 두껍고 색깔이 연하며 수질과의 경계가 모호하다. 여러 치료군의 신장체적은 좀 작으며 색깔은 황갈색을 띤다.

b. 광학현미경 관찰

정상대조군: 신사구모세혈관환(ansa)이 개방되고 메산지움 세포(mesangial cell)와 기질에 증식이 없으며 콩팥세관(renal tubule) 및 신장간질의 괴사, 섬유화가 없고 간세포가 균일하게 분포되어 있고 신사구, 콩팥세관 및 간질조직의 형태가 대체로 정상적이다.

모델대조군: 신사구모세혈관환의 개방이 좋지 못하고 낭벽이 두터워 지고 낭밖은 섬유화가 뚜렷하다. 콩팥세관 간질은 병변의 정도가 심하고 납작한 상피세포가 미만성 분포를 나타냈다. 소수의 콩팥세관이 재생을 보이고 일부는 막이 없이 캡슐형으로 확장되었으며 안에는 세포원주(cast)가 있고 이따금 석회화도 존재한다. 간질부분이 훨씬 넓어지고 섬유화 정도가 심하며 간질안에 분포되어 있다. 간질에 벽세포가 침투되고 동맥혈관벽이 두텁다.

본 발명약물의 고 용량군: 콩팥세관 간질 병변의 정도가 모델대조군보다 가벼우며 피질과 간질의 경계처 콩팥세관은 소수의 공포(vacuoles)변성, 소량의 프로테인 원주, 간질섬유화 및 약간의 세포침투가 존재한다. 신사구에는 뚜렷한 변화가 없다. 모델대조군과 양성약물 대조군에 비교할 때 고 용량군의 병변은 정도가 가볍다.

본 발명약물의 중 용량군: 신사구모세혈관환(ansa)이 잘 개방되어 있고 메산지움(mesangium)에 증식이 없으며 개별적으로 벽층 상피조직의 증식이 존재한다. 콩팥세관과 간질 병변의 정도가 심하지 않으며 간질에 섬유화 및 세포침투가 존재한다. 모델대조군과 양성약물 대조군에 비교할 때 중 용량군의 병변은 정도가 훨씬 가볍다.

본 발명약물의 저 용량군: 신사구에 가끔 부분구역의 메산지움 증식이 있으며 소수 신사구 낭벽이 두터워 지고 낭밖은 섬유화되어 있다. 콩팥세관과 상피세포가 납작해지고 일부는 막이 없고 관강내에는 소량의 세포원주(cast)가 있으며 간질부분은 훨씬 넓어지고 섬유화가 존재하며 소수의 침투세포가 미만성으로 분포되었다. 모델대조군과 양성약물 대조군에 비교할 때 저 용량군의 병변은 정도가 훨씬 가볍다.

양성약물 대조군: 신사구 부분구역에 메산지움의 증식이 있으며 비교적 많은 신사구가 낭벽이 두터워 지고 낭밖은 섬유화가 뚜렷하다. 간질에 중등 혹은 심한 정도의 섬유화가 존재하여 비교적 많은 침투세포가 미만성으로 분포되었다. 간질부분이 넓어지고 콩팥세관 및 간질의 병변이 심하다. 신사구 상피세포가 납작해지고 소수 관강내에는 세포원주(cast)가 있으며 동맥관벽이 두텁다.

(2) 신장 미세구조의 변화

정상대조군: 신사구 모세혈관이 개방되고 관강에는 소량의 적혈구가 있으며 혈관벽에는 소공세포가 깔려있고 종창과 증식이 없다. 기질이 고르로우며 치밀성 복합물의 증착이 존재하지 않는다. 기질의 두께는 약 110-160nm(정상)이다. 상피세포에 종창과 공포의 변성이 없으며 다리돌기(foot process)가 뚜렷하다. 메산지움구역의 확대가 없고 메산지움세포의 증생, 기질의 증가, 치밀복합물의 증착이 없다. 신사구 상피세포에 뚜렷한 변화가 없다. 총적으로 정상적인 신장조직에 속한다.

모델대조군: 신사구 상피세포가 종창하고 세포질속에는 대량의 리소솜이 포함되어 있다. 콩팥세관내에 대량의 결정체가 존재하며 상피세포 및 간질속에도 대량의 결정체가 존재한다. 간질에는 림파세포가 침투되고 섬유세포 및 아교섬유의 증식이 뚜렷하고 소수 콩팥소관의 기질은 엷어지거나 혹은 단편화 되었다. 부분 신사구 모세혈관 관강은 좁아지거나 혹은 폐색되었으며 상피세포가 증식하거나 간막이 수축되었다. 메산지움세포 및 기질에는 명확한 변화가 없다.

본 발명약물의 고 용량군: 신사구 상피세포의 세포질속에는 대량의 리소솜과 크기가 다른 공포가 함유되어 있다. 소수의 상피세포에는 세포질결정체가 존재하며 미세융털이 종창되고 간질에는 임파세포가 침투되었다. 간질결정체 및 섬유세포의 증식은 모델대조군에 비해 정도가 가볍다. 신사구의 모세혈관 관강은 개방되었으며 내피세포, 상피세포 및 간막에는 명확한 변화가 없다. 메산지움세포 및 기질에는 증식이 없다.

본 발명약물의 중 용량군 : 소수의 신사구 상피세포가 종창되고 부분 미세융털이 종창되어 사라졌으며 핵이질염색질이 많아지고 농축되는 추세를 보였다. 간질에는 임파세포가 침투되고 소량의 간질결정체가 존재한다. 신사구 모세혈관 관강은 개방되었으며 내피세포 증식이 뚜렷하지 않고 간막은 두께가 두터워 지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않다. 메산지움구역은 확대가 없고 뚜렷한 메산지움세포 및 기질의 증식이 없다.

본 발명약물의 저 용량군: 신사구 상피세포의 세포질 속에는 중등량의 리소솜이 함유되어 있고 소수 콩팥세관의 상피세포핵은 불규칙적이고 핵이질염색질이 훨씬 많아지고 집괴되었으며 농축세를 보였다. 세포질에는 크기가 다른 공포가 함유되고 간질에는 소량의 임파세포가 침투되었다. 신사구 모세혈관 관강은 개방되었으며 부분 내피세포는 종착되었다. 간막은 두께가 두터워 지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않으며 부분구역의 상피세포는 증식, 종착, 다리돌기융합 등을 보였다. 메산지움구역은 확대가 없고 뚜렷한 메산지움세포 및 기질의 증식이 없다.

양성약물 대조군: 신사구 상피세포의 세포질속에 리소솜함량이 훨씬 많아지고 부분 상피세포에는 결정체가 증착되었다. 소수 콩팥세관의 상피세포는 퇴화, 괴사, 탈락되거나 기막수축을 보였으며 크기가 다른 공포가 함유되어 있었다. 간질에는 임파세포가 침투되고 결정체가 증착되었다. 신사구 모세혈관 관강은 개방되었으며 소수 모세혈관 내피세포는 증식되었다. 간막은 두께가 두터워 지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않으며 메산지움세포 및 기질에는 뚜렷한 증식이 없다.

광학현미경과 전자현미경 관찰을 통해 알 수 있다시피 아데닌의 실험모델 동물은 콩팥세관의 변성, 괴사 및 간질의 섬유화를 나태냈으며 신소구의 병변은 상대적으로 가볍다. 본 발명약물의 치료군은 병변정도가 모델대조군이나 양성약물대조군에 비해 가볍다. 따라서 본 발명약물은 아데닌으로 인한 콩팥세관의 확장과 간질의 섬유화에 대해 비교적 좋은 억재작용과 콩팥세관 상피세포의 복구와 미토콘드리아(mitochondria)의 증생에 대한 촉진작용이 있음을 설명해 준다.

2. 본 발명 약물이 5/6신장절제로 인한 큰쥐 CRF에 대한 실험치료작용

2.1 일반상황과 체중변화 및 신장지수

표 17 본 발명약물이 5/6 신장절제 큰쥐의 체중 및 신장지수에 대한 영향

군	용량(g/kg체중)	체중(g, X±S)	신중(g, X±S)	신장 지수(mg/g체중, X±S)
정상대조군	-	419.20±54.09(10)	1.21±0.12(10)	2.85±0.27(10)
모델대조군	-	294.86±17.41(8)	2.21±0.48(8)	7.46±1.40(8)
본 발명약물	43.30	335.63±38.06*△(9)	2.01±0.48(9)	6.21±2.28(9)
본 발명약물	21.65	349.60±41.80*△(8)	2.48±0.42(8)	7.21±1.82(8)
본 발명약물	10.83	302.82±38.63(9)	2.33±0.23(9)	7.78±0.93
양성약물대조군	10.38	288.16±18.41(8)	2.11±0.16(8)	7.36±90.76(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05;

△ 양성약물대조군과 비교 p〈0.05

큰쥐는 5-6신장조직을 절제한 후 점차 식량이 줄고 모발이 건조하고 광택이 사라지며 귀바퀴 및 꼬리의 색깔이 창백해지고 시간에 따라 증상이 심해졌다. 체중증가는 느리고 정상대조군에 비교할 때 훨씬 적다. 검측에 따르면 제2차 절제후 4주에 신부전 모델은 이미 형성되었다. 본 발명약물은 투여한 후 고 용량군의 체중증가는 모델대조군과 양성약물대조군에 비해 훨씬 더 크다(p〈0.05). 치료 6주일 후 큰쥐를 죽이고 남은 신장을 관찰할 때 신장은 치료전보다 훨씬 커졌다. 고, 중 용량 치료군의 신장지수는 모델대조군과 정상대조군에 비해 작으나 현저한 차이는 없었다.

시험과정에서 모델대조군과 본 발명약물 중용량군 및 양성약물 대조군에서 각기 2마리의 쥐가 사망했으며 본 발명약물 고,저용량군에서 각기 1마리가 사망했다. 사망동물은 해부학검사에서 굳고 종창된 갈색의 신장을 관찰할 수 있었다. 기타 장기에는 이상이 없었다.

2.2 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌

표 18 본 발명약물이 5/6 신장절제큰쥐의 신장기능에 대한 영향

군	용량(g/kg체중)	BUN(mmol/L, X±S)		SCr(μmol/L, X±S)
군	용량(g/kg체중)	치료전	치료후	치료전	치료후
정상대조군	-	9.97±0.07(10)	8.16±1.44(10)	72.57±6.73(10)	70.79±3.04(10)
모델대조군	-	16.81±2.46(10)	23.12±6.97(8)	98.63±6.61(10)	108.83±12.60(8)
본 발명약물	43.30	17.42±1.47(10)	19.59±4.25(9)	98.28±7.56(10)	85.90±7.75*△(9)
본 발명약물	21.65	16.93±1.41(10)	19.63±3.27(8)	99.59±8.32(10)	89.34±4.99*△(8)
본 발명약물	10.83	18.20±4.01(10)	22.96±3.81(9)	101.06±13.45(10)	98.29±10.79(9)
양성약물대조군	10.38	17.06±2.20(10)	20.27±5.45(8)	96.67±8.86(10)	97.54±8.78(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05;

△ 양성약물대조군과 비교 p〈0.05

치료전 여러 모델군 큰쥐의 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌의 함량은 정상대조군에 비해 훨씬 높으며(p〈0.01), 대조군사이에는 현저한 차이가 없다(p〉0.05). 6주간 치료한 후 모델대조군의 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌의 수치는 갈수록 상승세를 나태냈으나 본 발명약물의 고,중 용량군은 모델대조군과 비교할 때 갈수록 높아지는 혈액뇨질소와 혈청크레아테닌의 수치를 현저히 억제할 수 있었다(p〈0.05).

2.3 헤모글로빈과 혈장프로테인

표 19 본 발명약물이 5/6 신장절제 큰쥐의 헤모글로빈과

토털 프로테인 및 알부민에 대한 영향

군	용량(g/kg 체중)	Hb(g/L, X±S)		TP(g/L, X±S)		ALB(g/L, X±S)
군	용량(g/kg 체중)	치료전	치료후	치료전	치료후	치료전	치료후
정상대조군	-	164.70±5.42(10)	165.00±5.40(10)	79.09±3.61(10)	74.60±5.70(10)	57.12±2.99(10)	50.50±2.64(10)
모델대조군	-	133.02±5.26(10)	143.75±6.32(8)	64.24±7.22(10)	58.63±3.78(8)	38.64±4.46(8)	34.63±3.11(8)
본 발명약물	43.30	130.70±5.59(10)	151.00±10.54*△(9)	66.77±2.08(10)	64.56±5.15*△(9)	50.46±3.89(10)	43.11±4.31*△(9)
본 발명약물	21.65	134.12±3.50(10)	148.88±11.01*△(8)	71.09±3.69(10)	63.75±6.11*△(8)	47.75±7.76(10)	44.13±6.73*△(8)
본 발명약물	10.83	130.27±4.36(10)	144.89±19.70(9)	69.55±6.86(10)	61.44±5.77(9)	43.06±6.67	38.90±5.06(9)
양성약물대조군	10.38	128.75±7.34(10)	128.00±11.55(8)	67.31±3.93(10)	56.63±6.93(8)	50.67±4.40(10)	36.50±3.07(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05

△ 양성약물대조군과 비교 P<0.05

여러 모델군 큰쥐의 헤모글로빈과 토털 프로테인의 함량은 정상대조군에 비해 훨씬 낮다. 치료 후 본 발명약물의 고, 중 용량군은 모델대조군 및 양성약물대조군과 비교할 때 헤모글로빈과 토털 프로테인의 함량이 훨씬 높으며 모델대조군 및 양성약물대조군과 현저한 차이를 가진다(p〈0.05).

2.4 혈지변화

표 20 : 본 발명약물이 5/6 신장절제 큰쥐의 혈지에 대한 영향

군	용량(g/kg체중)	콜레스테롤(mmol/L, X±S)		트리글리세리드(mmol/L, X±S)
군	용량(g/kg체중)	치료전	치료후	치료전	치료후
정상대조군	-	1.93±0.13(10)	1.62±0.12(10)	0.86±0.07(10)	0.84±0.16(10)
모델대조군	-	3.11±0.24(10)	5.15±0.35(8)	0.85±0.09(10)	3.55±0.47(8)
본 발명약물	43.30	3.10±0.16(10)	3.94±0.45*(9)	0.98±0.14(10)	2.56±0.41(9)
본 발명약물	21.65	3.34±0.29(10)	4.09±0.39(8)	1.22±0.19(10)	2.48±0.59(8)
본 발명약물	10.83	3.17±0.24(10)	4.90±0.58(9)	1.02±0.09(10)	2.49±0.37(9)
양성약물대조군	10.38	3.29±0.19(10)	4.11±0.73(8)	0.85±0.14(10)	3.15±0.24(8)

* 모델대조군과 비교 p<0.05;

여러 모델군 큰쥐의 혈장 콜레스테롤 함량은 정상대조군에 비해 훨씬 높다(p〈0.05). 치료후 본 발명약물의 고 용량군은 모델대조군과 비교할 때 콜레스테롤의 함량이 훨씬 낮다(p〈0.05). 기타 치료군의 콜레스테롤과 트리글리세리드의 함량은 모델대조군과 비교할 때 현저한 차이가 없다(p〉0.05).

2.5 병리형태학 관찰

(1) 일반적 병리형태의 변화

a. 신장의 대체적인 변화

실험모델군 동물의 신장형태는 불규칙적이고 종창되었으며 회황색을 띠고 비교적 굳으며 절단면의 신피질과 신수질의 경계가 명확치 못하다. 여러 치료군의 신장종창은 병리대조군과 비교할 때 부동정도로 나아지고 색깔은 깊어져 황갈색 띠었다.

b. 신사구의 변화

광학현미경 아래서 관찰한 신사구는 병변이 고르지 않고 보상적으로 확대된 신사구와 정도 부동한 메산지움세포와 기질의 증생 및 모세혈관폐쇄를 관찰할 수 있으며 Bowman's capsule 융합과 ground-glass opacity 등 여러형태의 신사구를 관찰 할 수 있다. purkerson 등의 병변신사구조직학분급방법에 쫓아 여러 시험군 동물의 각 등급 신사구가 점하는 백분율을 계산할 수 있다.

표21 : 본 발명약물이 5/6 신장절제큰쥐의

신사구 병리변화에 대한 영향(%)(X±S)

군	용량(g/kg체중)	확장된신사구	0급	Ⅰ급	Ⅱ급	Ⅲ급	Ⅳ급
정상대조군	-	3.00±0.70	90.36±1.40	6.64±1.70	0	0	0
모델대조군	-	32.80±0.90	9.30±2.40	11.20±3.60	13.60±0.78	20.90±0.80	12.20±3.10
본 발명약물	43.30	13.40±0.50**△	22.30±0.56	24.60±1.70	19.80±0.44	11.30±2.80	8.60±2.70
본 발명약물	21.65	17.90±0.20*△	16.90±2.40	20.30±0.80	20.40±0.98	14.70±1.70	9.80±1.32
본 발명약물	10.83	28.40±0.40	13.80±0.80	10.60±2.80	14.80±0.86	20.60±1.80	11.80±0.87
양성약물대조군	10.38	12.40±0.76	11.80±2.80	15.60±0.49	18.60±2.50	12.00±0.17

* 모델대조군과 비교 p<0.05 ** 모델대조군과 비교 p<0.01

△ 양성약물대조군과 비교 P<0.05

여러 실험군 신사구 병변의 비교에서 여러 모델 동물군의 확장된 신사구 수치는 정상 대조군에 비해 훨씬 크다(p<0.01). 그러나 본 발명약물 중, 고 용량군의 확장된 신사구수치는 모델대조군 혹은 양성약물대조군에 비해 훨씬 적다(p<0.05 혹은 p<0.01). 모델대조군의 Ⅲ급이상 병변의 비례는 본 발명약물의 중,고 용량군보다 크다. 본 발명약물 중,고 용량군의 신사구 병리형태는 0급, Ⅰ급, Ⅱ급을 위주로 하며 기타 실험군과 비교할 때 현저한 차이를 가진다(p<0.05). Ⅳ급병변은 여러 모델군에서 접하는 비례가 크지 않다. 여러 모델군 신사구 메산지움구역의 기질 및 세포는 정도 부동하게 많아지고 일부 신사구는 구역적인 경화, 신사구 낭벽의 부착 및 신사구 전체의 경화가 나타나고 부분 경화된 신사구의 모세혈관은 관강이 무너지거나 좁아지고 혹은 폐쇄되었다. 본 발명약물의 중,고 용량군은 기타 실험에 비해 위에서 언급한 병변이 가볍다. 따라서 본 발명약물은 신장의 지나친 비대와 경화를 경감시킬 수 있다.

c. 콩팥세관과 간질의 변화

여러 모델군의 콩팥세관은 확장되거나 상피세포가 위축,변성,괴사 및 탈락되었다. 신간질은 정도 부동하게 섬유화되거나 혹은 염세포가 침투되었다. 본 발명약물의 치료군은 위에서 언급한 병변을 정도부동하게 경감시킨다. 상세한 결과는 표 22를 참조한다.

표22 : 본 발명약물이 5/6 신장절제큰쥐의 콩팥세관

병리변화에 대한 영향(%)(X±S)

군	용량(g/kg체중)	0급	Ⅰ급	Ⅱ급	Ⅲ급
정상대조군	-	92.30±0.27	6.80±1.10	0	0
모델대조군	-	5.00±0.86	14.80±0.79	36.10±1.86	44.80±2.40
본 발명약물	43.30	20.00±0.71	53.20±0.29	14.80±0.88	13.10±0.76
본 발명약물	21.65	15.00±0.88	52.30±0.90	21.50±1.30	22.80±1.68
본 발명약물	10.83	14.70±0.77	21.20±0.85	32.10±0.90	41.20±2.50
양성약물대조군	10.38	15.20±0.34	31.80±0.96	26.50±1.75	20.60±0.38

여러 모델군 콩팥세관의 손상은 뚜렷하며 정상대조군과 비교할 때 현저한 차이가 있다(p<0.01). 본 발명약물 중,고 용량치료군의 병변은 상대적으로 가볍고 병변은 Ⅰ급을 위주로 하며 기타 여러 모델군과 비교할 때 현저한 차이를 가진다(p<0.05).

표 23 : 본 발명약물이 5/6 신장절제큰쥐의 신간질

병리변화에 대한 영향(%)(X±S)

군	용량(g/kg체중)	0급	Ⅰ급	Ⅱ급	Ⅲ급
정상대조군	-	86.80±0.34	13.20±3.20	0	0
모델대조군	-	4.86±0.22	24.80±0.17	56.70±1.10	13.70±1.80
본 발명약물	43.30	15.40±2.67	48.80±2.20	30.20±1.10	5.60±2.40
본 발명약물	21.65	11.30±0.28	34.80±0.88	43.70±1.52	10.20±0.97
본 발명약물	10.83	9.20±0.34	31.40±1.20	52.20±0.90	8.20±0.97
양성약물대조군	10.38	10.80±2.56	24.70±2.80	53.20±1.80	11.30±0.88

여러 모델군 신간질의 섬유화는 뚜렷하며 정상대조군과 비교할 때 현저한 차이가 있다(p<0.01). 여러실험군의 병변은 Ⅰ급,Ⅱ급을 위주로 하고 본 발명약물 고 용량치료군의 병변은 Ⅰ급을 위주로 하며 기타 여러 모델군과 비교할 때 현저한 차이를 가진다(p<0.05).

(2) 신장 미세구조의 변화

정상대조군: 신사구 모세혈관이 개방되고 관강에는 소량의 적혈구가 있으며 혈관관벽에는 소공세포가 깔려있고 종창과 증식이 없다. 기질이 고르며 치밀성 복합물의 증착이 존재하지 않는다. 기질의 두께는 약 110-160 nm(정상)이다. 상피세포에 종창과 공포의 변성이 없으며 다리돌기(foot process)가 뚜렷하다. 메산지움구역의 확대가 없고 메산지움세포의 증생, 지질의 증가, 치밀복합물의 증착이 없다. 신사구 상피세포에 뚜렷한 변화가 없다. 총적으로 정상적인 신장조직에 속한다.

모델대조군: 신사구의 부분 모세혈관 관강은 내피세포의 증식, 종창으로 인해 완전 혹은 부분적인 폐쇄를 나타냈다. 부분 모세혈관 관강의 내피세포는 종창되고 미세융털형태를 갖추었으며 간막은 두께가 두터워지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않다. 상피세포의 병변은 비교적 뚜렷하며 주요로 종창과 공포화 변성, 다리돌기의 광범한 융합 및 세포질의 리보솜 증가를 관찰 할 수 있다. 메산지움구역은 확대되고 메산지움세포와 기질의 증식이 뚜렷하며 부분 구역에서는 지질을 삼킨 포말세포의 침투를 관찰 할 수 있다. 콩팥세관은 괴사가 없으나 상피세포의 종창과 변성이 있으며 리보솜증가가 뚜렷하다.

본 발명약물의 고 용량군: 신사구의 모세혈관 관강은 개방되고 소수의 내피세포는 증식, 종창되었으며 부분 관강은 좁아졌다. 간막은 두께가 두터워 지거나 치밀 복합물의 증착이 없다. 소수의 상피세포는 종창과 공포화 변성 및 약간의 미세융털화를 관찰 할 수 있다. 메산지움구역의 확대가 없고 메산지움세포의 증생, 기질의 증가 및 치밀 복합물의 증착이 없다. 상피세포에는 괴사가 없다. 고 용량군의 신사구와 콩팥세관 및 기질 병변은 모델대조군과 양성약물대조군에 비교해 그 정도가 훨씬 가볍다.

본 발명 약물의 중 용량군: 부분 신사구 모세혈관의 관강은 개방되고 일부의 모세혈관 관강은 내피세포의 증식, 종창으로 인해 관강아 좁아지거나 불완전 폐쇄되었다. 소수의 내피세포는 공포화 변성되었다. 간막은 두께가 두터워지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않다. 상피세포는 종창, 공포화 변성, 다리돌기의 광범한 융합을 보였으며 세포질에는 리보솜의 증가가 뚜렷하다. 메산지움구역이 확대되고 메산지움기질이 증가되고 일부구역의 메산지움세포는 증생되었다. 콩팥세관의 병변은 정도가 가볍다. 중 용량군의 병변은 모델대조군에 비교할 때 그 정도가 가볍다.

본 발명약물의 저 용량군: 신사구 모세혈관의 관강은 개방되고 일부의 모세혈관 내피세포는 종창, 공포화 변성, 및 미세융털화를 나타냈다. 대부분 모세혈관의 내피세포에는 뚜렷한 변화가 없다. 간막은 두께가 두터워지거나 치밀복합물의 증착이 뚜렷하지 않다. 대다수 상피세포는 정상적이며 소수가 종창, 약간의 미세융털화 및 부분 다리돌기의 융합을 보였다. 메산지움구역에는 뚜렷한 변화가 없으며 일부구역의 메산지움세포는 증생되었다. 콩팥세관의 상피세포에는 소량의 리보솜이 존재한다. 병변의 정도는 모델대조군 보다 가볍다.

양성약물 대조군: 신사구 모세혈관의 관강은 개방되고 일부의 모세혈관 관강은 내페세포의 종창으로 인해 관강이 좁아졌다. 모세혈관 관강에는 중성백혈구와 림파세포가 흔히 보였고 모세혈관 및 간막은 두께가 두터워지거나 치밀 복합물의 증착이 뚜렷하지 않다. 상피세포는 종창, 다리돌기의 융합, 부분 미세융털화 및 리보솜의 증가를 나타냈다. 일부 메산지움구역이 확대되고 메산지움기질이 뚜렷이 증생되었다. 콩팥세관의 병변은 정도가 가볍고 괴사가 없다.

관찰을 통해 알 수 있다시피 본 발명 약물치료군 특히 고 용량군은 모델동물의 신장 미세구조 병변을 뚜렷이 개선할 수 있다.

실험 결론: 본 발명약물의 고,중,저 용량을 아데닌으로 인한 CRF큰쥐에게 연속 6주간 투여했을 때 본 발명 약물의 모델큰쥐의 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌 수치에 대한 하강작용은 모델대조군 및 양성약물대조군에 비해 훨씬 강하며(P<0.01, P<0.05) 동시에 헤모글로빈과 토털 프로테인을 개선 할 수 있다. 본 발명약물은 아데닌으로 인한 모델동물의 콩팥세관 확장과 간질의 섬유화를 뚜렷이 억제할 수 있으며 콩팥세관 상피세포의 복구와 미토콘드리아의 증생에 대해 촉진작용이 있다.

큰쥐의 5/6 신장을 절제했을 때 수술후 제4주에 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌의 수치는 정상대조군에 비해 훨씬 높고(P<0.05), 동시에 헤모글로빈과 토털 프로테인의 함량은 적어진다. 병리형태학의 표현은 신장 중량의 증가이고 광학현미경 하에서는 신사구의 보상적 확대와 기질증생 등 변화를 위주로 하며 그 밖에 콩팥세관의 손상, 괴사 및 관강폐쇄와 신간질섬유화를 관찰 할 수 있다. 전자현미경 하에서는 신사구 모세혈관의 관강이 좁아지거나 내피세포의 종창, 증식 및 미세융털화와 다리돌기의 융합 그리고 메산지움구역의 확대와 메산지움기질의 증식, 콩팥샌관의 손상 등 병변을 관찰 할 수 있다. 이는 신사구경화의 병리에 부합된다. 따라서 본 모델 동물은 만성 신부전에 속한다. 본 발명약물의 고,중,저 용량을 CRF큰쥐에게 연속 6주간 투여했을 때 본 발명 약물은 모델큰쥐의 BUN,SCr 수치를 뚜렷이 하강시킬 수있으며 약물의 치료작용은 모델대조군 및 양성약물대조군에 비해 훨씬 강하다(BUN의 비교 P<0.01, 고용량군의 SCr과 두 대조군의 비교 P<0.05). 약물은 동시에 헤모글로빈의 함량을 제고시킬 수 있다(P<0.05). 병리관찰에서 알 수 있다시피 본 발명 약물은 신사구의 경화와 신간질의 과도 비대를 경감시키고 메신지움세포와 기질의 증식을 억제하며 신사구의 경화와 신간질의 섬유화를 경감시킬 수 있다.

총적으로, 아데닌과 5/6신장절제술에 의한 CRF모델큰쥐에 대한 약물효과학 연구를 통해 본 발명약물이 만성 신부전 큰쥐의 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌 함량을 현저히 하강시키고 헤모글로빈과 토털 프로테인의 함량을 제고시킴을 알 수 있다. 본 발명약물의 고,중,저 용량군에 대한 량효(약물의 용량과 효과지간의 관계)연구결과에 따르면 중 용량군의 효과가 제일 좋고 다음은 차례로 고 용량군과 저 용량군이다. 약물이 효과를 발생하는 메커니즘은 신사구 손상은 경감시키고 신사구 경화를 억제하며 신간질 손상에 대한 개선 및 복구에 관련된다.

실시예1:

제하수오 400g 토사자 200g 태자삼 600g

제창출 120g 구기자 400g 회우슬 400g

택란 400g 적작 400g 복령 600g

택사 400g 차전자 600g 제대황 240g

제하수오, 제대황 약재를 굵은 가루로 분쇄한후 70% 알코올을 용제로 24시간 담근후 2ml/min의 속도로 삼침하여 약 5.12L의 삼침액을 수집하며 알코올을 회수한후 농축하여 유동액기스를 얻는다.

창출 약재를 굵은 가루로 분쇄한후 5배의 물로 4시간 담근후 수증기 증류의 방법으로 휘발유를 얻는다. 증류한 후의 찌꺼기와 약액은 따로 보존한다. 휘발유를 적당한 량의 알코올에 용해한 후 교질 연마방법에 따라 휘발유와 β-사이클로덱스트린(β -cyclodextrin)의 비례를 1:8로, β-사이클로덱스트린과 물의 비례를 1:2로 연마한다. 연마 표면의 간격은 5μm이고 연마속도는 3000회/분이다. 15분간 연마한후 포접하여 페이스트(paste)를 얻는다. 페이스트를 40℃에서 건조, 분쇄하여 크라드레트 화화물을 얻는다.

구기자와 복령을 함께 8배량의 물로 3차 달인다. 매차 2시간 달여 약액을 합한 후 80℃에서 상대밀도가 1.10 될 때까지 농축한후 원심하여 원심액을 얻는다.

창출의 증류후 찌꺼기와 약액을 토사자, 회우슬, 택란, 적작, 복령, 택사, 차전자와 함께 8배량의 물로 2차, 매차 2시간 달인후 약액을 합하여 여과한다. 여과액을 80℃에서 상대밀도가 1.15 될 때까지 농축한후 실온으로 식혀 알코올 함량이 65%에 달하게 첨가한다. 24시간 정치시켜 상청액을 수집한후 알코올을 회수한다. 제하수오와 제대황의 유동액기스, 구기자와 복령의 추출 원심액과 합한 후 80℃에서 상대밀도가 1.30 될 때까지 농축한다. 80℃, 0.09 MPa 진공도에서 감압건조하여 미세가루로 분쇄한다. 부형제(accesories)를 첨가하여 제립한후 휘발유- β-사이클로덱스트린 크라드레트 화합물과 혼합하여 타블렛 1000정을 만든다. 매정의 생약 함량은 4.76g이며 코팅한 후에 얻을 수 있다.

실시예 2:

하수오 500g 토사자 250g 태자삼 600g

창출 150g 구기자 500g 회우슬 500g

하수오 약재를 굵은 가루로 분쇄한후 70% 알코올을 용재로 24시간 담근후 2ml/min의 속도로 삼침하여 약 5.12L의 삼침액을 수집하며 알코올을 회수한후 농축하여 유동액기스를 얻는다.

창출 약재를 굵은 가루로 분쇄한후 5배의 물로 4시간 담근후 수증기 증류의 밥법으로 휘발유를 얻는다. 증류한 후의 찌꺼기와 약액은 따로 보존한다.

구기자를 9배의 물로 3차 달인다. 매차 2시간 달여 약액을 합한후 80℃에서 상대밀도가 1.10될때까지 농축한 후 원심하여 원심액을 얻는다.

창출의 증류후 찌꺼기와 약액을 토사자, 회우슬, 택란, 적작, 복령, 택사, 차전자와 함께 8배량의 물로 2차, 매차 2시간 달인후 약액을 합하여 여과한다. 여과액을 80℃에서 상대밀도가 1.15 될 때까지 농축한후 실온으로 식혀 알코올을 함량이 65%에 달하게 첨가한다. 24시간 정치시켜 상청액을 수집한후 알코올을 회수한다. 하수오의 유동액기스, 구기자의 추출 원심액과 합한 후 80℃에서 상대밀도가 1.30될때까지 농축한다. 80℃, 0.09 MPa 진공도에서 감압건조하여 미세가루로 분쇄한다. 상용 부형제를 첨가한후 휘발유와 혼합하여 캡슐 1000알을 만든다. 매알의 생약 함량은 2.5g이다.

실시예 3:

제하수오 500g 토사자 200g 태자삼 300g

제창출 100g 구기자 400g 회우슬 400g

택란 200g 적작 200g 복령 300g

택사 200g 차전자 300g 제대황 100g

위의 약재를 일반적 기술방법으로 캡슐 1000알 만든다.

실시예 4:

하수오 500g 토사자 200g 태자삼 300g

창출 100g 구기자 400g 회우슬 400g

택란 200g 적작 200g 복령 300g

택사 200g 차전자 300g 제대황 100g

위의 약재를 일반적 기술방법으로 구복액을 만든다.

본 발명약물은 흡수가 빠르고 치료효과가 좋으며 유효성분의 함량이 높고 복용이 편리하다.

Claims

하수오 100~600중량부, 토사자 100~600중량부, 태자삼 100~600중량부, 창출 100~600중량부, 구기자 100~600중량부, 회우슬 100~600중량부로 이루어진 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제1항에 있어서,

택란 100~600중량부, 적작 100~600중량부, 복령 100~600중량부, 택사 100~600중량부, 차전자 100~600중량부, 대황 100~600중량부를 더 첨가하는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제1항에 있어서,

약물조합물의 약재의 중량이, 하수오 500g, 토사자 250g, 태자삼 600g, 창출 150g, 구기자 500g, 회우슬 500g으로 이루어진 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제2항에 있어서,

약물조합물의 약재의 중량이, 하수오 400g, 토사자 200g, 태자삼 600g, 창출 120g, 구기자 400g, 회우슬 400g, 택란 400g, 적작 400g, 복령 600g, 택사 400g, 차전자 600g, 대황 240g으로 이루어진 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제2항에 있어서,

약물조합물의 약재의 중량이, 하수오 500g, 토사자 200g, 태자삼 300g, 창출 100g, 구기자 400g, 회우슬 400g, 택란 200g, 적작 200g, 복령 300g, 택사 200g, 차전자 300g, 대황 100g으로 이루어진 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 약물조합물 중의 하수오는 제하수오를 사용하는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 약물조합물 중의 창출은 제창출을 사용하는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 약물조합물 중의 대황은 제대황을 사용하는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
하수오, 대황 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 침출법(percolation)에 따라 60~90% 알코올을 용제로 담가서 삼침액을 수집하며 알코올을 회수한 후 농축하여 유동엑기스를 얻는다.

창출 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 2~8 배의 물로 2~8시간 담궈 수증기 증류의 방법으로 휘발유를 얻는다. 증류한 후의 찌꺼기와 약액은 따로 보존하고. 휘발유를 60~90%알코올에 용해한 후 교질연마방법에 따라 휘발유와 β-사이클로덱스트린(β-cyclodextrin)의 비율을 1 : 4~10로, β-사이클로덱스트린과 물의 비율은 1 : 1~3로 연마 포접한 후, 페이스트를 얻고. 페이스트를 건조, 분쇄하여 크라드레트 화합물(clathrate compound, 포접 화합물)을 얻는다.

구기자, 복령을 함께 6~10배량의 물로 1~3차 달이며, 매차 1~3시간 달여 약액을 합한 후 농축, 원심하여 원심액을 얻는다.

창출의 증류 후 찌꺼기와 약액을 태자삼, 토사자, 회우슬, 택란, 적작, 복령, 택사, 차전자와 함께 6~10배량의 물로 1~3차, 매차 1~2시간 달인 후 약액을 합하여 여과하고, 여과액을 농축한 후 실온으로 식혀 알코올 함량이 50~70% 달하게 첨가하며, 정치시켜 상청액을 수집한 후 알코올을 회수하여. 하수오와 대황의 유동엑기스, 구기자와 복령의 추출 원심액과 합병한 후 농축, 감압건조하여 미세가루로 분쇄한 뒤, 부형제(accessories)를 첨가하여 제립한 후 휘발유 β-사이클로덱스트린 크라드레트 화합물과 혼합하여 임상에서 응용할 수 있는 약물조합물을 만드는,

청구항 제2항의 약물조합물을 사용하여 약물조합물을 제조하는 방법.
제9항에 있어서,

하수오, 대황 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 70% 알코올을 용제로 24시간 담근후 2ml/min의 속도로 삼침액을 약 5.12L의 삼침액을 수집하며 알코올을 회수한 후 농축하여 유동엑기스(fluidextract)를 얻는다.

창출 약재를 굵은 가루로 분쇄한 후 5배의 물로 4시간 담근 후 수증기 증류의 방법으로 휘발유를 얻는다. 증류한 후의 찌꺼기와 약액은 따로 보존한다. 휘발유를 적당한 량의 알코올에 용해한 후 교질연마방법에 따라 휘발유와 β-사이클로덱스트린(β-cyclodextrin)의 비율을 1:8로, β-사이클로덱스트린과 물의 비율은 1:2로 연마한다. 연마표면의 간격은 5μm이고 연마속도는 3000회/분이다. 15분간 연마한 후 포접하여 페이스트를 얻는다. 페이스트를 40℃에서 건조, 분쇄하여 크라드레트 화합물을 얻는다.

구기자, 복령을 함께 8배량의 물로 3차 달이며, 매차 2시간 달여 약액을 합한 후 80℃에서 상대밀도가 1.10될 때까지 농축한 후 원심하여 원심액을 얻는다.

창출의 증류 후 찌꺼기와 약액을 태자삼, 토사자, 회우슬, 택란, 적작, 복령, 택사, 차전자와 함께 8배량의 물로 2차, 매차 2시간 달인 후 약액을 합하여 여과하고, 여과액을 80℃에서 상대밀도가 1.15될 때까지 농축한 후 실온으로 식혀 알코올 함량이 65%에 달하게 첨가한다. 24시간 정치시켜 상청액을 수집한 후 알코올을 회수한다. 하수오와 대황의 유동엑기스, 구기자와 복령의 추출 원심액과 합한 후 80℃에서 상대밀도가 1.30이 될 때까지 농축한다. 80℃, 0.09MPa 진공도에서 감압건조하여 미세가루로 분쇄한다. 부형제(accesories)를 첨가하여 제립한 후 휘발유 β-사이클로덱스트린 크라드레트 화합물과 혼합하여 임상에서 타블렛 1000정을 만든다. 매정의 생약 함량은 4.76g이며 코팅한 후에 얻을 수 있는,

청구항 제4항의 약물조합물을 사용하여 약물조합물을 제조하는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

약물조합물이 혈액뇨질소와 혈청크레아티닌 함량을 하강시키고 신사구 경화를 억제하며 신간질손상을 개선하고 복구시키는 것을 특징으로 하는 약물제조에서 응용되는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

약물조합물이 만성 신부전 치료의 약물제조에서 응용되는 것을 특징으로 하는 만성 신부전 치료의 약물조합물.
청구항 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 의하여 제조된 약물조합물 타블렛의 질량공제 함량측정검측방법;

약품 10정을 취해 코팅을 제거한 후 중량을 정밀측정한다. 미소가루로 연마한 후 1g을 취해 250ml 용적의 둥근 밑 플라스크에 넣은 후 2.5mol/L 유산용액 25ml를 첨가한다. 거기에 또 40ml 클로로포름을 첨가한 후 항온수조에서 4시간 환류시켜 클로로포름층을 분리한다. 남은 용액에 또 40ml 클로로포름을 첨가하여 계속 3시간 환류시켜 클로로포름층을 분리한다. 남은 용액에 또 클로로포름을 첨가하여 매차 10ml로 3차 추출을 한다. 추출액을 합하여 물로 중성이 되게 씻은 후 클로로포름을 회수한다. 찌꺼기는 메탄올을 첨가하여 5ml로 용해시킨 후 시험품용액으로 한다. 대조품 에모딘(emodin)에 메탄올을 첨가하여 0.1mg/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 시험품용액 5㎕과 대조품용액 2㎕, 8㎕을 각기 취해 같은 실리카겔 G 박층판에 점찍는다. 벤젠:에틸아세테이트:메탄올:개미산:물(3:1:0.2:0.05:0.5)의 윗층 용액을 전개용매로 전개간격이 10cm 될 때까지 전개한 후 말린다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법 얇은 막 스캔방법에 따라 스캔한다.(파장: λ_S = 435nm, λ_R= 600nm) 시험품의 흡수도 값과 대조품의 흡수도 값을 측정계산한다. 본 제품 매 타블렛의 에모딘 함량은 0.07mg이상 이어야 한다.
청구항 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 의하여 제조된 약물조합물 타블렛의 질량공제 검별방법;

약품 5정을 미소가루로 연마한 후 30㎖ 클로로포름(chloroform)을 첨가하여 1시간 환류추출한다. 여과한 후 찌꺼기를 증발건조시켜 40㎖ 알코올을 첨가한 후, 1시간 환류추출한다. 여과한 후 여과액을 증발건조 시켜 찌꺼기에 1㎖ 알코올을 첨가한 후 용해시켜 시험용액으로 한다. 같은 방법으로 1g 하수오 대조약재를 대조약재용액으로 만든다. 얇은 막 크로마토그래피(thin layer chromatography)시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔 G 박층판에 점찍는다. 100:17:13의 비율로 에틸 아세테이트-메탄올-물을 전개용매(developing solvent)로 전개간격이 10cm이 될 때까지 전개한 후 말린다. 365nm 자외선 램프아래서 관찰할 때 시험품의 그래피에 대조약재의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 형광반점(fluorescent speckle)이 나타난다.

약품 4정을 미소가루로 30ml 알코올을 첨가하여 30분간 환류추출한다. 여과한 후 여과액에 2ml 염산을 첨가하여 1시간 환류추출한 후 2ml로 농축한 후 5ml물을 첨가하여 매차에 15ml 클로로포름으로 2차 추출한다. 추출액을 증발건조시켜 찌꺼기에 2ml 클로로프롬을 첨가한 후 용해시켜 시험용액으로 한다. 대조품 올레아놀산에 메탄올을 첨가하여 1g/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔 G 박층판에 점찍는다. 1:1 비례의 클로로포름:아세톤을 전개용매로 전개한 후 말린다. 10%유산의 알코올시액을 분사(spurt)하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.

약품 4정을 미소가루로 연마한 후 20ml싸이크로헥산을 첨가하여 초음파로 20분처리한 후 여과하여 여과액을 약 1m로 말려서 시험용액으로 한다. 같은 방법으로 2g 창출 대조약재를 대조약재용액으로 만든다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔 G 박층판에 점찍는다. 20:1비율의 싸이크로헥산:에틸아세테이트를 전개용매로 전개한 후 말린다. 5% 디메틸아미노벤젠 포름알데히드와 10% 유산의 알코올 시액을 분사하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.

약품 5정에 30ml 메탄올을 첨가하여 30분간 환류추출한다. 여과한 후 여과액을 증발건조시켜 찌꺼기에 15ml 물을 첨가한 후 용해시켜 매차 15ml 부틸의 불포화 용액으로 2차 추출한다. 추출액을 합한 후 건조시켜 지꺼기에 메탄올을 첨가하여 1m로 용해시켜 시험용액으로 한다. 대조품 파에오니프로린(paeoniflorin)에 메탄올을 첨가하여 1g/1ml의 용액을 만들어 대조품용액으로 한다. 얇은 막 크로마토그래피 시험방법에 따라 위의 두 용액을 각기 5㎕ 취해 실리카겔 G 박층판에 점찍는다. 40:5:10:0.2 비율의 클로로포름:에틸아세테이트:메탄올:포름산을 전개용매로 전개한 후 말린다. 10%유산의 알코올 시액을 스퍼트하여 반점이 뚜렷이 나타날 때까지 열풍으로 분다. 시험품의 그래피에 대조품의 그래피와 비슷한 위치에 같은 색깔의 반점이 나타난다.