CN109718257A - 一种桑黄子实体提取物及其在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种桑黄子实体提取物及其在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用,属于医药技术领域,所述桑黄子实体提取物通过以下方法制备获得:1)将桑黄子实体与乙醇水溶液混合浸泡后,超声提取,获得提取液;2)浓缩所述提取液获得浸膏;3)用水溶解所述浸膏后,与氯仿混合,进行萃取、浓缩,获得桑黄子实体提取物。所述桑黄子实体提取物能够用于制备治疗慢性肾衰竭药物,并且治疗效果好,所述桑黄子实体提取物可以降低尿素氮和血肌酐,并且所述尿素氮和血肌酐的降低在统计学上具有非常显著的差异;所述桑黄子实体提取物的毒副作用小、成本低。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,尤其涉及一种桑黄子实体提取物及其在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。
背景技术
慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)是指各种肾脏疾病引起的缓慢进行性肾功能损害,由于肾单位和肾功能不可逆地丧失,导致以代谢产物和毒素潴溜,水、电解质和酸碱平衡紊乱以及内分泌失调,最后导致尿毒症和肾功能完全丧失,引起一系列临床症状和生化、内分泌等代谢紊乱组成的临床综合征。从原发病起病到肾功能不全的开始,间隔时间可为数年到十余年。慢性肾功能衰竭是肾功能不全的严重阶段。在慢性肾衰竭的治疗上,目前主要采取内科疗法(如控制原发病、调节酸碱平衡及水、电解质紊乱等)、透析疗法及肾脏移植等。这些疗法可以改善临床症状,减轻患者的痛苦,提高其生活质量,但同时还存在着许多难以克服的问题:如内科疗法尚难以彻底阻断病理进展,且副作用大;透析只能解决肾脏的部分代谢问题,尚不能较好改善肾脏的内分泌功能;肾移植的肾源有限,且免疫排斥现象一时还难以解决。加之透析疗法和肾脏移植费用昂贵,使众多患者望而却步。
慢性肾衰的病因主要有糖尿病肾病、高血压、肾小动脉硬化、原发性与继发性肾小球肾炎、肾小管间质病变(慢性肾盂肾炎、慢性尿酸性肾病、梗阻性肾病、药物性肾病等)、肾血管病变、遗传性肾病(如多囊肾、遗传性肾炎)等。
目前,对慢性肾衰竭的治疗,西药有爱西特(药用活性炭);中药有尿毒清颗粒、肾衰宁、血肌酐片等。西药虽然有一定的疗效,但毒副作用大,复发率高等缺点,如爱西特在初期是有效的,但后期反而会使病情加重,血肌酐、尿素氮居高不下,出现难以控制的症状,最终会发展为尿毒症。中医药在防病治病方面有着独到之处。慢性肾衰竭属于祖国医学中水肿、癃闭、关格等范畴,病机为本虚标实,治当扶正祛邪、标本兼顾。虽然透析或肾移植是慢性肾衰竭患者终末期生存的治疗手段,但是在慢性肾衰竭的早、中期,在治疗原发病的基础上,采用行之有效的药物治疗措施以有效地阻止或延缓慢性肾衰竭进展是一个较为理想的方法。研究表明中药对慢性肾衰竭早、中期患者可有效地阻止或延缓肾功能的进行性恶化,延缓慢性肾衰竭的发展。目前使用的单味中药(大黄、冬虫夏草等)或复方中药(尿毒清颗粒、肾衰宁、百令胶囊等)在治疗慢性肾衰竭方面显示着独特的疗效,有着巨大的发展潜力。从中药中寻找活性强、作用持久、低毒能减轻或延缓慢性肾衰竭进展的新药物,对治疗慢性肾衰竭药物开发具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种桑黄子实体提取物及其在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。
为了实现上述发明目的,本发明提供了以下技术方案:
一种桑黄子实体提取物,通过以下方法制备获得:
1)将桑黄子实体在50~90倍体积的乙醇水溶液中浸泡后,超声提取,获得提取液;
2)浓缩步骤1)中所述提取液获得浸膏;
3)用水溶解所述浸膏后,与氯仿混合,进行萃取、浓缩,获得桑黄子实体提取物。
优选的,步骤1)中所述乙醇水溶液的体积浓度为80~90%。
优选的,步骤1)中所述浸泡的时间为30~40h。
优选的,步骤1)中所述超声提取的频率为60~70KHz;所述超声提取的次数为1~3次,每次超声提取的时间为25~35min。
本发明提供了所述的桑黄子实体提取物在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。
本发明提供了一种治疗慢性肾衰竭药物,所述治疗慢性肾衰竭药物包括所述的桑黄子实体提取物和药学上可接受的辅料。
优选的,所述治疗慢性肾衰竭药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂和口服液体制剂。
优选的,所述辅料包括阿拉伯树胶粉、乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸镁、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、琼脂、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸和甘露醇中的一种或多种。
本发明的有益效果:本发明提供的桑黄子实体提取物能够用于制备治疗慢性肾衰竭药物,并且治疗效果好,所述桑黄子实体提取物可以降低尿素氮和血肌酐,并且所述尿素氮和血肌酐的降低在统计学上具有非常显著的差异;所述桑黄子实体提取物的毒副作用小,所述桑黄子实体提取物采用的提取原料为桑黄子实体,原料和提取成本低,制备工艺简单,生产桑黄子实体所用的培养基原料为农林废弃物。
附图说明
图1为HE染色的肾组织病理组织变化图。
具体实施方式
本发明提供了一种桑黄子实体提取物,通过以下方法制备获得:1)将桑黄子实体在50~90倍体积的乙醇水溶液中浸泡后,超声提取,获得提取液;2)浓缩步骤1)中所述提取液获得浸膏;3)用水溶解所述浸膏后,与氯仿混合,进行萃取、浓缩,获得桑黄子实体提取物。
本发明将桑黄子实体在50~90倍体积的乙醇水溶液中浸泡后,超声提取,获得提取液;本发明对所述桑黄子实体的来源和规格没有特殊要求,采用常规的桑黄子实体即可。本发明中,所述乙醇水溶液的用量优选为60~80倍的桑黄子实体体积;所述乙醇水溶液的体积浓度优选为80~90%,更优选为82~88%;本发明中所述浸泡的时间优选为30~40h,更优选为32~38h,最优选为36h。本发明在所述浸泡后进行超声提取,所述超声提取的频率优选为60~70KHz,更优选为65KHz;所述超声提取的次数优选为1~3次,更优选为2次;每次超声提取的时间优选为15~45min,更优选为25~35min,最优选为30min。
本发明在获得所述提取液后,浓缩所述提取液获得浸膏;本发明中,所述浓缩优选为真空浓缩,所述真空浓缩的真空度优选为0.08~0.12MPa,更优选为0.10MPa,所述真空浓缩的时间优选为30~60min。
本发明在获得所述浸膏后,用水溶解所述浸膏,与氯仿混合,进行萃取、浓缩,获得桑黄子实体提取物。在本发明中,所述水优选为蒸馏水,所述水与浸膏的质量比优选为(1.2~2):1,更优选为1.5:1。本发明将用水溶解浸膏后的料液与氯仿混合,所述氯仿与料液的体积比优选为2.5:1.0;本发明中所述萃取的温度优选为70~80℃,更优选为72~78℃;本发明中,所述萃取的次数为1~3次,每一次萃取的时间优选为2.5~3.5h,更优选为3h。本发明在一次萃取结束后,优选的进行冷却后分离氯仿萃取液和水层,水层加入氯仿后进行再次萃取;本发明在所述萃取结束后,合并所有氯仿萃取液,然后浓缩获得桑黄子实体提取物。本发明中,所述浓缩的方法优选为蒸干。
本发明提供了所述的桑黄子实体提取物在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。利用本发明所述的方法提取获得的桑黄子实体提取物,能够用于制备治疗慢性肾衰竭药物。所述桑黄子实体提取物,能够降低两个衡量肾功能衰竭的重要指标尿素氮BUN和血肌酐Scr;促进体内的氮质化合物的排出,对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭有较好治疗作用。
本发明提供了一种治疗慢性肾衰竭药物,所述治疗慢性肾衰竭药物包括所述的桑黄子实体提取物和药学上可接受的辅料。本发明对所述治疗慢性肾衰竭药物的剂型没有有特殊要求,只要是本领域常规的药物剂型即可;在本发明具体实施过程中,所述药物剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂和口服液体制剂。本发明对所述治疗慢性肾衰竭药物的辅料没有特殊限定,优选的根据具体的剂型进行选择;在本发明具体实施过程中,所述辅料优选的包括阿拉伯树胶粉、乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸镁、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、琼脂、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸和甘露醇中的一种或多种。
在本发明具体实施过程中,当所述药物为口服液体制剂时,所述辅料优选为阿拉伯树胶粉;所述阿拉伯树胶粉优选的以水溶液的状态应用,所述阿拉伯树胶粉水溶液的浓度优选为1~3g/mL,更优选为2g/mL。在本发明中,所述药物的用量以桑黄子实体的量计,优选为10g/kg/d;所述药物连续使用的时间优选为8~30d,更优选为12~24d。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
桑黄子实体10g,用80倍体积的80%的乙醇水溶液浸泡36h,超声提取2次,超声频率65KHz,每次30min。真空度0.1MP,时间50min浓缩得棕色膏状物。真空浓缩过程回收乙醇。膏状物用蒸馏水溶解,质量比例为膏状物:蒸馏水1:1.5,加入氯仿10mL在75℃的水浴中回流水解3h。冷却后取氯萃取液,水层再分别用10mL氯仿萃取2次,合并氯仿萃取液,蒸干得桑黄子实体提取物。
实施例2
桑黄子实体10g,用70倍体积的85%的乙醇水溶液浸泡35h,超声提取2次,超声频率65KHz,每次30min。真空度0.1MP,时间60min浓缩得棕色膏状物。真空浓缩过程回收乙醇。膏状物用蒸馏水溶解,质量比例为膏状物:蒸馏水1:1.5,加入氯仿10mL在80℃的水浴中回流水解3h。冷却后取氯萃取液,水层再分别用10mL氯仿萃取2次,合并氯仿萃取液,蒸干得桑黄子实体提取物。
实施例3
将实施例1中获得的桑黄子实体提取物用含2%的阿拉伯树胶粉的自来水(g/mL)配制呈口服液体制剂;桑黄子实体在口服液体制剂中的浓度为0.1~0.15g/mL。
实施例4
为了验证桑黄子实体提取物对慢性肾衰竭治疗的效果,采用腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭大鼠模型进行了药效学试验,各种试验情况如下:
1、实验药物
实施例1制备得到的桑黄子实体提取物,含2%的阿拉伯树胶粉的自来水(g/mL)配制,桑黄子实体提取物的浓度为0.1-0.15g/mL。
2、实验动物
雄性SD大鼠,体重190~210g,由第四军医大学动物中心提供。合格证号:陕医动字第08005.
3、实验仪器和试剂
ZH-B6型大鼠代谢笼(安徽淮北正华生物仪器有限公司);美特列-托利多十万分之一分析天平;腺嘌呤购于sigma公司(批号:A8626-5g,纯度≥99%)。
4、实验方法
(1)模型建立及药物治疗试验
雄性SD大鼠购置后适应环境一周,根据其体重、随机分为正常组、腺嘌呤模型组、腺嘌呤加桑黄子实体提取物治疗组,每组均为8只。实验期间动物自由饮水、摄食。实验开始后,正常组以自来水10mL/kg/d灌胃;腺嘌呤模型组仅以腺嘌呤200mg/kg/d灌胃;腺嘌呤加桑黄子实体提取物给药组,每天先以腺嘌呤200mg/kg/d灌胃,3h后,再以桑黄子实体提取物相当于10g/kg/d生药灌胃。所有动物于实验第12d、第24d置于代谢笼中,留取尿液进行蛋白测定,留尿后活杀取血及心、肝、肾等组织进行生化测定、重量变化及病检。定量测定桑黄提取物对腺嘌呤诱导大鼠慢性肾衰竭的血清生化指标、肾指数、肾体积及胸腺、肾上腺指数、主要脏器指数及血液学指标,并作统计学分析。
(2)检测方法
各种脏器用美特列-托利多十万分之一分析天平称量并记录。生化指标和血液学指标的测定委托西安医学院附属医院完成。
(3)药效计算
结果均以mean±S.E.表示,组间差异性比较采用单因素方差分析,t检验,P<0.05为有显著性差异,P<0.01为有非常显著性差异。
5、实验结果
(1)病理学分析
正常组:各动物肾脏大小适中、颜色鲜红、表面光滑。模型组:各动物肾脏明显肿大,体积增大、颜色苍白、表面凹凸不平,似人类的“大白肾”,个别动物肾体积较正常组可增大1倍以上。各肾均存在区域性肾单位萎缩、消失,纤维组织增生明显及炎细胞浸润。部分肾小管上皮细胞坏死、消失或扩张,甚至呈囊性。肾间质内肾小球数目明显减少,并可见大小不一、数量不等的棕褐色结晶或异物肉芽肿形成及粉染匀质的管型,见图1。上述病变与Yokozawa报道的类似。肾组织病理改变对照组肾小管间质基本正常,未见明显病变。模型组,实验10d时,肾小管扩张,间质单核细胞浸润、水肿,可见间质纤维组织灶性增生。20d时,肾小管扩张明显,肾小管上皮空泡或颗粒性变性,基底膜断裂,小管间质区域增宽,纤维化明显。30d时,大鼠肾脏肥大、颜色苍白、表面凹凸不平,呈细颗粒样。镜下均出现了典型的肾小管间质损害,单位视野肾小球、肾小管比重减少,间质比重增加,伴大量炎细胞浸润;肾脏内可见大量棕褐色结晶沉积,周围伴有间质纤维化改变;肾小管上皮细胞肿胀,肾小管坏死、灶状萎缩;部分肾小管有囊状扩张或代偿肥大,可见蛋白管形和细胞管形;肾小球病变相对较轻。桑黄提取物治疗组大鼠肾脏病理改变类似于模型组的改变,但各种病变程度都明显轻于模型组。由此可见,桑黄提取物对腺嘌呤诱导的CRF具有防治和促进肾组织的修复作用。
(2)生化指标和血液学指标
模型组:从表1和2可见,血中尿素氮、血肌酐与正常组比较显著升高且存在统计学上的非常显著差异。血红细胞、血红蛋白、红细胞压积与正常组比较降低且存在显著的统计学差异,造成贫血状态。白细胞、总胆固醇和甘油三酯升高,均存在统计学上的非常显著差异(P<0.01)。
桑黄子实体提取物组:观察桑黄子实体提取物对此模型动物的生化指标的影响,结果见表1和2。从表1可见,两个衡量肾功能衰竭的重要指标尿素氮BUN、血肌酐Scr与模型组比较明显下降,存在统计学上的显著差异(P<0.01)。红细胞、血红蛋白、红细胞压积高于模型组且红细胞和血红蛋白与模型组比较存在统计学上显著的差异。治疗组的白细胞与模型组比较降低,但不存在统计学上的显著性差异。这些生化指标的变化说明桑黄子实体提取物能促进体内的氮质化合物的排出,对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭有较好治疗作用。
表1桑黄提取物对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的血清生化指标的影响
模型组与正常组比较:*P<0.05,**P<0.01;治疗组与模型组比较:ΔP<0.05,ΔΔP<0.01
表2桑黄提取物对腺嘌呤所致大鼠慢性肾衰竭的血液学指标的影响
分组 | 白细胞×10<sup>5</sup>/L | 红细胞×10<sup>12</sup>/L | 血红蛋白g/L | 红细胞压积% | 红细胞平均压积体积 |
正常组 | 14.2±5.4 | 7.0±0.4 | 150.9±8.7 | 42.4±2.6 | 60.3±1.1 |
模型组 | 27.6±11.6<sup>**</sup> | 6.2±0.6<sup>**</sup> | 135.0±0.64<sup>**</sup> | 36.2±3.8<sup>**</sup> | 57.9±2.2 |
治疗组 | 23.5±4.7 | 6.9±0.7<sup>**</sup> | 146.1±10.0<sup>*</sup> | 39.9±4.4 | 57.4±1.3 |
模型组与正常组比较:*P<0.05,**P<0.01;治疗组与模型组比较:ΔP<0.05,ΔΔP<0.01
由上述实施例可知,桑黄子实体提取物可以降低尿素氮和血肌酐且存在统计学上非常显著差异。桑黄子实体提取物能改善肾功能、减少腺嘌呤代谢产物对肾脏的病理性损害具有较好保护作用;可为临床提供一种新的治疗慢性肾衰竭的药物,具有广阔的应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种桑黄子实体提取物,其特征在于,通过以下方法制备获得:
1)将桑黄子实体在50~90倍体积的乙醇水溶液中浸泡后,超声提取,获得提取液;
2)浓缩步骤1)中所述提取液获得浸膏;
3)用水溶解所述浸膏后,与氯仿混合,进行萃取、浓缩,获得桑黄子实体提取物。
2.根据权利要求1所述的桑黄子实体提取物,其特征在于,步骤1)中所述乙醇水溶液的体积浓度为80~90%。
3.根据权利要求1或2所述的桑黄子实体提取物,其特征在于,步骤1)中所述浸泡的时间为30~40h。
4.根据权利要求1所述的桑黄子实体提取物,其特征在于,步骤1)中所述超声提取的频率为60~70KHz;所述超声提取的次数为1~3次,每次超声提取的时间为25~35min。
5.权利要求1~4任意一项所述的桑黄子实体提取物在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。
6.一种治疗慢性肾衰竭药物,其特征在于,所述治疗慢性肾衰竭药物包括权利要求1~4任意一项所述的桑黄子实体提取物和药学上可接受的辅料。
7.根据权利要求6所述的治疗慢性肾衰竭药物,其特征在于,所述治疗慢性肾衰竭药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂和口服液体制剂;所述辅料包括阿拉伯树胶粉、乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸镁、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、琼脂、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸和甘露醇中的一种或多种。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190507 |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |