KR100711861B1 - 심혈관질환을 치료하거나 예방하기 위한 피토스테롤 또는 피토스타놀과 아스코르브산의 결합체 및 그 용도 - Google Patents

심혈관질환을 치료하거나 예방하기 위한 피토스테롤 또는 피토스타놀과 아스코르브산의 결합체 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

새로운 피토스테롤 및/또는 피토스타놀 유도체와 그의 염은 구조식(Ⅰ), (Ⅱ), (Ⅲ)으로 나타내지며, 상기식에서, R은 피토스테롤 또는 피토스타놀 잔기이며 R2는 아스코르브산으로부터 유도되고 R3는 수소 또는 임의의 금속, 알칼리토금속, 또는 알칼리금속이다. 이들 유도체는 심혈관질환 및 동맥경화증과 고지혈증을 포함하여 그의 수반되는 상태를 치료하고 예방하는데 효과적이다.
피토스테롤, 피토스타놀, 아스코르브산, 심혈관질환`

Description

심혈관질환을 치료하거나 예방하기 위한 피토스테롤 또는 피토스타놀과 아스코르브산의 결합체 및 그 용도{Conjugates of phytosterol or phytostanol with ascorbic acid and use thereof in treating or preventing cardiovascular disease}
본 발명은 심혈관 질환과 기타 질병을 치료 및 예방하는데 있어서의 피토스테롤(phytosterols)과 피토스타놀(phytostanols) 및 이들의 용도에 관한 것이다.
최근 과학적 기술적 진보가 삶의 질을 향상시키고 수명을 연장 하는데 도움을 주는 반면, 동맥 경화증의 예방, 심혈관 질환(CVD)의 근본적인 원인은 충분하게 해결되지 않았다. 동맥경화증은 식습관과 생활방식과 같은 환경적 인자와 유전적 인자의 상호작용으로 발생하는 퇴행성 과정이다. 최근 보고에서는 동맥계 내의 플라크 위치에 따라, 혈관에 동맥경화성 플라크를 형성하여 심근, 뇌 또는 사지에 혈액공급을 궁극적으로 차단함으로써 콜레스테롤이 동맥경화증의 원인이 되는 것으로나타났다(1,2). 개략적으로 사람의 총 혈청 콜레스테롤이 1% 감소되면 관상동맥 질환의 위험은 2% 감소하는 것으로 나타났다(3). 통계적으로, 평균 혈청 콜레스테롤의 10%(예컨대 6.0mmol/L몰에서 5.3mmol/L로) 감소되면 연간 미국내 100,000 사망자를 방지할 수 있다고 한다(4).
스테롤은 천연산출 화합물로서 중요한 세포기능을 수행한다. 피토스테롤, 예컨대, 식물내 캄페스테롤, 스티그마스테롤과 베타-시토스테롤, 균류내 에르고스테롤과 동물내 콜레스테롤은 각각의 세포유형에서 세포막과 하부세포막의 일차적 구성요소이다. 인간의 피토스테롤의 음식 공급원은 식물원료 즉, 채소 및 식물오일에서 얻는다. 통상적인 서양식 식사에서 예상되는 일일 피토스테롤 함량은 매일 약 500 밀리그램을 제공하는 채식주의자 식사와 대조적으로 대략 60-80 밀리그램이다.
피토스테롤은 사람을 비롯한 많은 포유동물 종에 주입될 때 혈청 콜레스테롤 양을 감소시키기 때문에 매우 주목 받고 있다. 정확한 작용기전은 알려지지 않았지만, 콜레스테롤과 피토스테롤간의 관계는 부분적으로 각각의 화학식간의 유사성(분자의 측쇄에서 생기는 차이) 때문인 것으로 나타났다. 피토스테롤이 미셀 상으로부터 콜레스테롤을 대체함으로써 콜레스테롤 흡수 과정에서 그의 흡수를 감소시키거나 또는 수용체 및/또는 부형제 부위와 경쟁하는 것으로 추정된다.
40년전의 한 보고서에 의하면, 혈청 콜레스테롤을 약 9%까지 낮추는 것으로 밝혀진 Cytellin™이라 불리는 톨유로 제조한(이후 대두유로부터 제조함) 스테롤 제제를 엘리 릴리(Eli Lilly)가 판매하였다(5). 이후 혈장 지방 및 지단백 농도에 대한 시토스테롤 제제의 효과(6) 및 혈청 콜레스테롤에 대한 대두유와 톨유 공급원으로부터 제조된 시토스테롤과 캄페스테롤의 효과(7)에 대한 다양한 연구들이 보고되었다. 혈청 콜레스테롤를 저하시키는데 매우 효과적인 것으로 밝혀진 피토스테롤 조성물은 쿠트니 등의 미국특허 번호 제5,770,749호에 개시되어 있으며, 70중량% 이하의 베타 시토스테롤과 10중량% 이상의 캄페스테롤과 시그마스테롤(베타-시토스타놀)로 구성된다. 본 발명에서 피토스테롤 구성요소간에 약간의 상승효과가 있어서 앞서 얻어진 것보다 나은 콜레스테롤-저하 효과를 제공함을 주목해야 한다.
피토스테롤의 잇점에도 불구하고, 심혈관 질환(CDV)과 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 동맥경화증, 고혈압, 혈전증같은 질환의 치료뿐만 아니라 제Ⅱ형 당뇨병, 치매, 암 및 노화와 같은 다른 질환의 치료에 있어서 피토스테롤의 투여 및 음식, 약제 및 기타 전달 부형제내로의 이들의 결합은, 이들의 높은 소수성(즉, 이들은 물에 대한 용해도가 좋지 않음)때문에 복잡하다. 피토스테롤의 투여 형태(예를들면, 결정, 현탁액, 과립)가 혈청 콜레스테롤 양을 저하시키는데 영향을 미치는지에 대한 연구가 행해지고 있다. 피토스테롤이 매우 소수성기 때문에, 소화관의 미셀 상에서 적절히 용해되지 않아 콜레스테롤 흡수를 효과적으로 차단할 수 없다. 오일과 지방은 자유 피토스테롤을 제한적으로 소량으로 용해 시킬 수 있다. 용해된 피토스테롤만이 콜레스테롤의 흡수를 억제하므로 변형이 필요하다.
초기 연구는 용해도를 향상시키기 위해 피토스테롤을 갈거나 분쇄하는데 중점을 두었다(엘리 릴리의 미국특허 번호 제3,881,005호 및 제4,195,084호). 또한, 용해도를 향상시키기 위해 피토스테롤의 에스테르화에 주목하였다. 독일 특허 제 2035069(1971년 1월28일)(미국특허 번호 제3,751,569호와 유사)는 쿠킹 오일에 피토스테롤 지방산 에스테르의 부가를 개시한다. 에스테르화는 촉매로 과염소산을 사용하여 유리 스테롤과 무수물 지방산에 실시된다. 이 방법의 주요한 결점은 비 식용 촉매와 시약을 사용하는 것이다.
David E. Mitchell Medical Reserch Institute의 미국특허 번호 제4,588,717호는 피토스테롤의 지방산 에스테르로 구성되는 비타민 보충제를 개시하는 바, 상기 지방산 에스테르는 주요 탄소 사슬내의 약 18-20개 탄소로부터 형성된다.
삭제
Raision Tehtaat Oy AB의 미국특허 번호 제5,502,045호는 베타-시토스타놀 지방산 에스테르 혼합물의 제조를 개시한다. 이 특허는 용해가능하고 안정한 피토스타놀 전달계를 생성하는 것을 시도하고 있지만, 불포화 지방산 잔기의 산화로 이들 "지방산" 에스테르화 제품의 장기간 안정성에 몇가지 문제점이 있다.
따라서, 구강으로 투여될 수 있고, 추가 변형없이 전달 부형제내로 결합될 수 있는 안정한 수용성 피토스테롤/피토스타놀 유도체의 제공이 필요하나 지금까지 만족스럽게 이루어지지 않았다.
본 발명의 목적은 상기 결점들을 제거하거나 경감시키는 것이다.
발명의 요약
본 발명은 하기 구조식을 갖는 피토스테롤 및/또는 피토스타놀과 아스코르브산, 그 염을 포함하는 신규한 유도체를 제공한다:
Figure 112001034001632-pct00001
상기 식에서,
R은 피토스테롤 또는 피토스타놀 잔기이며; R2는 아스코르브산으로부터 유도되고 R3는 수소 또는 임의의 금속. 알칼리 토금속 또는 알칼리금속이다.
본 발명은 상기 구조식을 갖는 신규한 유도체를 제조하는 방법을 또한 포함한다.
본 발명은 CVD 및 동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 고지질증, 고혈압, 혈전증을 포함하는 질환 및 제Ⅱ형 당뇨병, 치매, 알쯔하이머 질환, 노화 및 암과 같은 질환을 치료 또는 예방하기 위한 조성물 및 그의 약제학적 허용가능한 담체를 또한포함하며, 상기 조성물은 하나 이상의 상기 구조식을 갖는 하나 이상의 피토스테롤 및/또는 피토스타놀 및 아스코르브산의 유도체를 포함한다.
본 발명은 또한 상기 구조식을 갖는 피토스테롤 및/또는 피토스타놀 및 아스코르브산의 유도체로 보충된 식품, 음료 및 기능성 식품을 제공한다.
본 발명은 또한 하나 이상의 상기 구조식을 갖는 피토스테롤 및/또는 피토스타놀과 아스코르브산의 유도체를 동물에 투여 함으로써, 심혈관질환(CVD) 및 동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 고지질증, 고혈압, 혈전증을 포함하는 질환 및 제Ⅱ형 당뇨병, 치매, 알쯔하이머 질환, 노화, 암과 같은 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
상기 피토스테롤/피토스타놀/아스코르브산 유도체 및 그 염은 당해 기술분야에 공지된 비-변형 피토스테롤/스타놀 조성물에 비해 많은 이점을 갖는다. 특히, 물과 같은 수용액에서의 용해도가 향상되어 임의의 부가적인 개선 또는 변형없이 그 자체로 구강 투여가 가능한 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 유도체는 제조되어 사용될 수 있으며 또는 이들 "부형제"가 물-기재 인지 여부에 상관없이 식품, 음료, 약제 및 기능식품으로 쉽게 혼입될 수 있다. 이러한 향상된 용해도로 인해, 원하는 치료효과를 얻기 위해 유도체를 보다 적게 투여할 수 있다. 본 발명 유도체의 두번째 잇점은 혈청 콜레스테롤을 저하시키는데 있어 그리고 항- 산화제로서 피토스테롤/스타놀 성분 및 아스코르브산간에 부가적 또는 상승적 치료 효과가 있을 것이라는 것이다. 이들 효과 및 다른 중요한 잇점은 하기에 상세히 개시한다.
이하, 첨부 도면들을 참조하여 본 발명에 대해 자세히 설명하며 본 발명은 도면에 한정되지 않는다.
도 1은 피토스타놀-포스페이트-아스코르베이트 및 그 염을 제조하는 방법의 개략도이며;
도 2는 피토스타놀-카보네이트-아스코르베이트 및 그 염을 제조하는 방법의 개략도이며;
도 3은 피토스타놀-옥살레이트-아스코르베이트 및 그 염을 제조하는 방법의 개략도이며;
도 4는 콜레스테롤-주입된 apo E-KO 마우스에서 혈장 콜레스테롤 양에 대한 비토스테롤(Vitosterol)의 효과를 나타내는 그래프이며;
도 5는 콜레스테롤-주입된 apo E-KO 마우스에서 혈장 트리글리세라이드 양에 대한 비토스테롤의 효과를 나타내는 그래프이며;
도 6은 마우스 체중에 대한 비토스테롤의 효과를 나타내는 그래프이며;
도 7은 동맥경화성의 퍼센트에 대한 비토스테롤의 효과를 나타내는 그래프이다.
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피토스테롤/피토스타놀
본원에 사용된 용어 "피토스테롤"은 시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤. 브라시카스테롤, 데스모스테롤, 찰리노스테롤, 포리페라스테롤, 클리오나스테롤 및 천연 또는 합성된 형태 및 그 유도체 및 이성질체를 비롯하여 제한없이 모든 피토스테롤을 포함한다. 용어 "피토스타놀"은 모든 포화된 또는 수소화된 피토스테롤 및 천연 또는 합성된 형태 및 그 유도체 및 이성질체를 포함한다. 피토스테롤 및 피토스타놀에 대한 변형, 즉 측쇄를 포함하는 변형은 본 발명의 범위에 속하는 것을 이해해야 한다. 또한, 용어 "피토스테롤"이 달리 특정되지 않는 한, 피토스테롤과 피토스타놀이 호환적으로 사용될 수 있음을 이해해야 한다.
본 발명에 따른 유도체를 형성하기 위해 사용되는 피토스테롤과 피트스타놀은 다양한 천연 공급원으로부터 얻을 수 있다. 예를들면, 옥수수유 및 기타 식물성 오일, 맥아유, 콩 추출물, 쌀 추출물, 쌀겨, 평지씨유, 해바라기유, 참기름 및 생선(및 기타 해양 공급원) 오일을 처리함으로써 얻을 수 있다. 본 발명은 포리페라스테롤, 클리오나스테롤 및 천연 또는 합성된 형태 및 그 유도체 및 이성질체를 포함한다. 용어 "피토스타놀"은 모든 포화된 또는 수소화된 피토스테롤 및 천연 또는 합성된 형태 및 그 유도체 및 이성질체를 포함한다. 피토스테롤 및 피토스타놀에 대한 변형, 즉 측쇄를 포함하는 변형은 본 발명의 범위에 속하는 것을 이해해야 한다. 또한, 용어 "피토스테롤"이 달리 특정되지 않는 한, 피토스테롤과 피토스타놀이 호환적으로 사용될 수 있음을 이해해야 한다.
본 발명은 피토스테롤의 임의의 한가지 공급원에 제한되지 않는다. 미국특허 번호 제4,420,427호에서는 메탄올과 같은 용매를 사용하여 식물성 오일 슬러지로 부터 스테롤을 제조하는 것을 제시한다. 다르게는, 피토스테롤 및 피토스타놀은 본원에서 참고 문헌으로서 포함된 미국특허 번호 제5,770,749호에 개시된 바와 같이, 톨유 피치 또는 비누, 임업의 부산물로부터 얻을 수 있다.
바람직한 한 형태로서, 본 발명의 유도체는 천연적으로 유도되거나 또는 합성된 베타-시토스테롤, 캄페스타놀, 시토스타놀 및 캄페스테놀을 사용하여 형성될 수 있으며, 이렇게 형성된 이들 각각의 유도체는 투여되기 전에 다양한 비율로 조성물과 혼합될 수 있다. 다른 바람직한 형태로서, 본 발명의 유도체는 천연적으로 유도되거나 합성된 시토스타놀과 또는 천연적으로 유도되거나 합성된 캄페스타놀 또는 그 혼합물을 사용하여 형성될 수 있다.
R2
R2는 아스코르브산 또는 임의의 그 유도체를 포함한다. 피토스테롤 또는 피토스타놀 잔기가 아스코르브산에 화학적으로 결합된 새로운 화합물의 생성은 본 발명의 범위에 속한다. 용해도가 낮은 피토스테롤 잔기는, 새로운 유도체의 일부로서 수성 및 오일 및 지방과 같은 비-수성 매질에서 매우 빨리 용해된다. 따라서, 피토스테롤의 투여는 임의의 부가적인 변형없이 가능하게 되었다.
L-아스코르브산(보통 비타민C로 알려짐)은 영양물질의 중요한 부분이며 생리적 산화방지제로서 작용하는 것으로 인식되어져 왔다. 그러나, 아스코르브산은 대기중 산소와 극히 쉽게 반응하여 산화형 아스코르브산을 생성하며 비타민C 효능이 없는 화합물로 쉽게 분해되기 때문에 아주 불안정한 비타민이다. 본 발명의 새로운 화합물은 그러한 분해로부터 아스코르브산을 "보호"하는 것으로 여겨진다. 또한, 아스코르브산의 산화방지 효과 및 치료 효과는 피토스테롤 또는 피토스타놀을 사용하여 형성된 단일 화합물로서 상승적 또는 추가적으로 향상되는 것으로 여겨진다.
유도체 형성
a) 에스테르 형성
피토스테롤 및/또는 피토스타놀과 아스코르브산을 포함하는 신규한 구조를 형성할 수 있는 많은 방법이 있다. 일반적으로, 선택된 피토스테롤 또는 스타놀(또는 할로포스페이트, 할로카보네이트, 할로-옥살레이트 유도체) 및 아스코르브산은 "산" 잔기와 "알코올"(피토스테롤)의 축합을 허용하는 반응조건하에서 함께 혼합된다. 이들 조건은 산 성분과 알코올 성분이 직접적으로 또는 미네랄산, 황산, 인산, p-톨루엔술폰산과 같은 적당한 산 촉매의 존재하에서 반응하도록하는 Fisher 에스티르화 방법과 같은 다른 통상의 에스테르화 반응에서 사용된 조건과 동일하다. 에스테르화 반응에 일반적으로 사용되는 유기 용매는 디에틸 에테르, 테트라히드로퓨란 또는 벤젠, 톨루엔 또는 유사한 방향족 용매이고, 온도는 반응이 진행되는 동안 방응물의 반응성에 따라 실온에서 승온으로 변할 수 있다.
바람직한 구체예로서, 에스테르 유도체를 형성하는 방법은 적당한 반응조건하에서 아스코르브산 또는 그 유도체의 히드록실기를 에스테르(예컨데, 아세테이트 에스테르)또는 에테르(에컨대, 메틸 에테르)로서 "보호"하고 이어, 보호된 아스코르브산을 피토스테롤/피토스타놀 할로포스페이트, 할로카보네이트 또는 할로-옥살레이트와 축합시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 그러한 축합반응은 디에틸 에테르, 테트라히드로퓨란, 또는 벤젠 톨루엔 또는 유사한 방향족 용매와 같은 유기 용매에서 수행된다. 반응물의 성질과 반응성에 따라, 반응온도는 저온(-15℃)에서 승온으로 변할 수 있다.
도 1은 "보호된" 아스코르브산의 형성(a 단계), 중간 클로로포스페이트/스타놀 유도체(b 단계) 형성 및 축합반응(c 또는 d 단계의 양자택일)하여 구조식Ⅰ을 토대로 한 발명의 새로운 유도체 중 하나: 피토스타놀-포스페이트-아스코르베이트(구조식 6으로 표기)를 생성하는 것을 나타내는 개략도이다.
보다 상세하게, 도 1에 표시된 방법은 하기와 같다: 아스코르브산은 5,6-이소프로필리덴-아스코르브산(구조식 2)의 형성에 의해 분해로부터 초기에 보호된다.이는 적당한 반응 조건(하기 실시예 1에 언급)하에서 아세톤을 아스코르브산 및 황산 또는 염산과 같은 산 촉매와 혼합함으로써 이루어질 수 있다. 피토스타놀 클로로포스페이트(구조식 4)는 톨루엔 및 피리딘(지방족 및 방향족 아민과 같은 질소 염기가 사용될 수 있지만)에서 피토스타놀 용액을 형성하고 상기 용액을 포스포러스 옥시클로리드와 같은 인 유도체로 처리함으로써 제조된다. 모액의 여과 및 농축후 이렇게 형성된 잔류물은 피토스타놀 클로로포스페이트(구조식 4)이다. 이어, 이를 5.6-이소프로필리덴-아스코르브산과 혼합하고, 에탄올 및 HCL과 같은 적당한 알코올을 부가한 후(단계 d) 농축시킨다. 다르게는, 피리딘/THF를 부가할 수 있으며(단계 c), 생성물을 농축시킨다. 최종 세척 및 건조(단계 e)후, 단계 c 또는 d에서 생성된 새로운 생성물은 피토스타놀-포스페이트-아스코르베이트(구조식 6)이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 형태로서, 아스코르브산은 히드록실 부위에서 5,6-이소프로필리덴-아스코르브산이 아니라 에스테르(예를들어 아세테이트, 포스페이트 등)로서 보호된다. 이어, 에스테르는 피토스테롤 또는 피토스타놀과 축합된 후 공지된 에스테르화 방법을 사용하여 상술한 바와 같이 유도되어 궁극적으로 본 발명의 구조식을 생성한다. 아스코르브산의 모노 및 디포스페이트의 형성은 문헌에 자세히 개시되어 있다. 참고문헌으로 본 명세서에 첨부된 Kato 등의 미국특허 번호 제4,939,128호는 아스코르브산의 인산 에스테르의 형성을 개시한다. 유사하게, 참고문헌으로 본 명세서에 첨부된 Dobler 등의 미국특허 번호 제4,999,437호는 아스코르브산-2-포스페이트의 제조를 기술한다. 상기 문헌에서 삼차 아민의 존재하에서 포스포릴화 아스코르브산 또는 아스코르브산 유도체와 POCl3의 중심 반응(독일 공개공보 DOS2,719,303에 개시됨)은 반응 용액에 마그네슘 화합물, 바람직하게는 마그네슘 화합물 수용액을 첨가함으로써 개선된다. 임의의 이들 공지된 아스코르브산 유도체는 본 발명의 범위에서 사용될 수 있다.
도 2는 "보호된" 아스코르브산의 형성(단계 a), 중간 클로로카보네이트/스타놀 유도체의 형성(단계 b) 및 축합반응(임의적 단계 c 또는 d)하여 구조식 9(10도 동일)의, 구조식 Ⅱ를 토대로 하는 본 발명의 새로운 유도체 중 하나인 피토스타놀-카보네이트-아스코르베이트 생성을 나타내는 개략도이다. 이들 클로로카보네이트 유도체는 도 1에서 상술한 동일한 방법에 의해 제조 될 수 있지만 포스포러스 옥시클로리드는 포스겐으로 대체된다(도 2의 단계 b에 도시됨).
도 3은 "보호된" 아스코르브산의 형성(단계 a), 중간 클로로-옥살레이트/스타놀 유도체의 형성(단계 b) 및 축합반응(임의적 단계 c 또는 d)하여 신규한 구조식 13(14도 동일)의, 구조식 Ⅲ를 토대로 하는 본 발명의 새로운 유도체 중 하나인 피토스타놀-옥살레이트-아스코르베이트(구조식 14로 나타냄) 생성을 나타내는 개략도이다. 이들 클로로-옥살레이트 유도체는 도 1에서 상술한 동일한 방법에 의해 제조할 수 있지만 포스포러스 옥시클로리드는 옥살일 클로리드로 대체된다(도 3의 단계 b에 도시됨).
b) 염 형성
본 발명은 피토스테롤 또는 피토스타놀 및 아스코르브산을 포함하는 모체 구조식(예를들어, 도 1의 구조식 5와 6, 도 2의 구조식 9와 10, 도 3의 구조식 13과 14로 나타낸 구조식)뿐만 아니라 그 염도 포함한다. 이들 염은 대응하는 모체 화합물보다 훨씬 수용성이므로 생체내 및 실험실내 이들의 효능 및 평가는 더욱더 향상된다.
본 발명 유도체의 염 형성은 모체 화합물을 염기(예를들어, 소듐 메톡시드 또는 다른 금속 알콕시드)로 처리하여 대응하는 알칼리 금속 염을 형성함으로써 쉽게 실시될 수 있다. 칼슘, 마그네슘, 망간, 구리, 아연 등의 다른 금속 염은 모체 화합물을 적절한 금속 알콕시드와 반응시킴으로써 생성할 수 있다. 구조식 Ⅰ과 관련하여, R3는 수소(모체 화합물)또는 임의 금속, 알칼리 토금속 또는 알칼리금속(염)를 나타낸다.
c) 촉매(수소화) 및 화학적 방법에 의한 환원
경우에 따라, 본 발명의 피토스테롤 유도체 또는 그 구성 잔기(피토스테롤 또는 아스코르브산)는 유도체 형성 전후에 수소화하되거나 포화될 수 있다. 이형환식 고리 계를 부분적으로 또는 완전히 환원된 유사체로 수소화하는 것은 잘 공지된 방법이다. 예를들어, 아스코르브산 고리를 대응하는 디히드로 유사체로의 촉매 및/또는 화학적 환원은 수소 및 백금, 팔라듐 또는 라니 니켈과 같은 금속 촉매하에서 쉽게 이루어질 수 있다. 일반적으로, 이러한 환원은 에탄올, 에틸 아세테이트 또는 유사한 매질과 같은 유기용매에서 대기압 또는 저압하에서(3-5psi)의 실온 또는 약간 승온에서 실시된다.
그러한 고리 계의 화학적 환원은 소듐 보로히드리드, 리튬 알루미늄 히드리드 및 그들의 유사체와 같은 "히드리드" 시약에 의한 환원을 포함한다. 일반적으로 이러한 환원은 에틸 에테르, 테트라히드로퓨란, 디옥산 또는 벤젠, 톨루엔 또는 유사한 방향족 용매를 포함하는 무수물 불활성 매질에서 실온 내지 환류 온도에서 실시된다.
유사한 촉매적 또는 화학적 방법은 본 발명의 모든 피토스테롤 유사체에 적용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 그 범위내에 완전히 또는 부분적으로 환원된 모든 유도체을 포함하며, 여기에서 아스코르브산 고리는 부분적으로 또는 완전히 환원되며 및/또는 피토스테롤 잔기는 완전히 또는 부분적으로 수소화된다.
유도체
본 발명은 하기 구조식으로 나타내지는 피토스테롤 및/또는 피토스타놀 및 아스코르브산을 포함하는 모든 유도체 및 그 염을 포함한다:
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상기식에서, R은 피토스테롤 또는 피토스타놀 잔기이며; R2는 아스코르브산으로부터 유도되며, R3는 수소 또는 임의 금속, 알칼리 토금속 또는 알칼리 금속이다. 보다 바람직하게, 본 발명은 도 1-3의 구조식 5,6,7,9,10,11,13, 14 및 15로 도시된 바와 같이, 모든 할로포스페이트, 할로카보네이트 및 할로옥살레이트/피토스타놀/아스코르베이트 유도체를 포함한다. 그러나, 이들 구조식은 구조식 Ⅰ,Ⅱ 및 Ⅲ에 속하는 많은 새로운 유도체중에서 유일하게 선택된 것임을 명백히 이해해야 한다. 또한, 소듐 염이 구조식 7, 11 및 15에 도시되어 있지만, 상술한 바와 같이 다른 염들은 본 발명의 범위내에 포함됨을 이해해야 한다.
유도체와 HMG-코엔자임A 환원효소 억제제의 결합
다른 구체예로서, 본 발명의 유도체는 투여전에 콜레스테롤 합성을 억제하는 하나 이상의 물질 또는 화합물과 결합될 수 있다. 이들 화합물은 3-히드록실-3-메틸 글루타릴-코엔자임-A(HMG-CoA) 환원효소 억제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이들 콜레스테롤 합성-제한 화합물과 본 발명의 피토스테롤 유도체와의 결합은 상승적이며 "전신적 또는 장내" 및 "외인성" 효과를 개시하여 지속한다.
본 발명의 유도체의 작용기전은 확실하지 않지만, 콜레스테롤의 양은 담즙 장세포와 간세포간의 연결을 분리하는 "담즙 우회" 라는 과정을 통해 저하된다. 장내 콜레스테롤 생성은 증가할 것이나, 콜레스테롤은 담즙내에서 방출되어 장세포를 통해 재흡수되지 않는다. 상기의 작용기전이 장내 콜레스테롤 합성 및 담즙 콜레스테롤 분비의 저하이므로, 임의의 콜레스테롤 합성 제한 화합물은 이들 유도체와 협력하여 작용할 것이다. 콜레스테롤 합성이 감소됨에 따라, 피토스테롤/콜레스테롤 장내 비율은 증가하여 콜레스테롤 흡수를 감소시키고 장세포 왕복 작용기전을 통한 피토스테롤 운반을 증가시킨다. 본 발명의 피토스테롤 유도체와 스타틴과 같은 콜레스테롤 합성을 제한하는 화합물간의 상승적 공동-효과의 발견은 결정적으로 중요한 바, 이는 상기 화합물의 투여량이 본 발명의 유도체와 함께 투여될 때 상당히 감소될 수 있기 때문이다. 로바스타틴과 같은 스타틴에 대한 중요한 부작용이 존재하므로, 본 발명의 유도체와 상승작용에 의해 제공된 투여량 감소는 주목할 만한 것으로 최근 밝혀졌다. 본 발명의 유도체와 결합될 수 있는 다른 스타틴의 예로는 아토르바스타틴(Lipitor™), 수퍼스타틴, 심바스타틴(Zocor™) 및 프라바스타틴(Pravachol™)을 포함한다.
신규한 피토스테롤 유사체의 잠재적 잇점
아스코르브산이 피토스테롤 잔기에 부착된 본 발명의 새로운 유도체는 그러한 부착없이 피토스테롤/피토스타놀의 사용과 비교할 때 많은 식이요법 및 치료 효과를 제공한다. 우선, 새로운 유도체의 용해성은 수용액 및 오일과 지방 같은 비-수성 매질 모두에서 크게 향상되었다. 이 뛰어난 용해성으로, 효과적인 식이요법 및 치료 투여량 및 부수적인 비용이 감소될 수 있다. 두번째로, 심혈관질환 및 동맥경화증과 고지혈증을 비롯한 그 기본적인 질환뿐 아니라, 암, 노화, 치매 및 알쯔하이머질환과 같은 병리학적으로 산화적 손상을 갖는 질환들을 치료 또는 예방하는데 피토스테롤 잔기와 아스코르브산간에 하나의 구조로 결합되었을때, 상승적 또는 부가적 효과가 있을 것이라는 것이다. 세번째로, 이들 유도체의 형성은 분해를 제거하는 한편, 아스코르브산의 충분한 가능성이 실현되게 한다. 네번째로, 이들 유도체는 예를들어, 압출기와 음식 가공기에서 추가로 처리될 때 필수적인 열 안정성(산화와 가수분해에 안정성)이다.
전달계
상기 유도체가 동물, 특히 인간에게 직접적으로 그리고 임의의 추가 변형 없이 투여될 수 있음은 본 발명의 범위내에서 충분히 이해되었지만, 전달을 향상시키고 이들 유도체가 첨가된 식품, 음료, 약제, 기능식품등을 통해 고르게 분포되도록 추가 단계를 취할 수 있다. 그러나, 이들 단계는 선택적임을 이해되어야 한다. 이러한 향상은 다음과 같은 적절한 수단에 의해 성취될 수 있다: 유도체를 용해시키거나 분산시켜서 에멀젼, 용액 및 분산액 또는 자기-유화계를 형성; 동결건조, 분무건조, 조절된 침전 또는 이들의 조합; 고형 분산액, 현탁액, 수화된 지질계를 형성; 시클로덱스트린과 봉입 복합물 형성; 및 향수성물질(hydrotopes) 및 담즙산과 이들의 유도체와의 배합물 사용.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 각각의 기법을 하기에 개시한다.
에멀젼
에멀젼은 오일 및 물과 같은 두개 비혼화성 상으로 구성되는 미세하게 분할된 또는 콜로이드성 분산액으로, 이중 하나(내부적 또는 불연속 상)는 다른 하나(외부적 또는 불연속 상)내에 물방울로 분산된다. 그러므로, 오일내-물 에멀젼은 내부 상으로서 오일과 불연속 또는 외부 상으로서 물로 구성되며, 물내-오일 에멀젼은 그 반대이다. 표준 에멀젼, 마이크로에멀젼 및 자기-유화(위액 또는 장액과 같은 교반된 수성 체액에 노출시 유화되는)되는 이들 유화계를 포함하는 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체를 포함하는 매우 다양한 유화계가 형성될 수 있다.
일반적으로, 에멸젼은 오일 및 수성 상, 유화제, 에멀젼 안정화제 및 경우에 따라 방부제, 향미제, pH 조절제 및 완충액, 킬레이트제, 항발포제, 삼투성 조절제 및 산화방지제를 포함할 수 있다. 적절한 유화제(여기서 괄호안 숫자는 바람직한 HLB 값을 나타낸다)는 알코올 에테르 술페이트, 알킬 술페이트(30-40), 비누(12-20) 및 술포숙시네이트와 같은 음이온 계면활성제; 사차 암모늄 화합물과 같은 양이온 계면활성제; 알킬 벤젠 유도체와 같은 쯔비터이온 계면활성제; 지방 아민 술페이트, 이지방 트리에탄올아민 유도체(16-17)와 같은 양성 계면활성제; 및 비이온 계면활성제, 예컨데 지방족 또는 시클로지방족 알코올, 포화 지방산 및 알킬페놀과 같은 폴리글리콜 에테르 유도체, 폴리프로필렌 글리콜과 알킬 프로필렌 글리콜으로의 수용성 폴리에틸렌옥시 첨가 생성물, 노닐페놀 폴리에톡시에탄올, 카스터 오일 폴리글리콜 에테르, 폴리프로필렌/폴리에틸렌 옥시드 첨가 생성물, 트리부틸페녹시-폴리에톡시에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 옥틸페녹시-폴리에톡시에탄올, 라놀린 알코올, 폴리옥시에틸레이트화(POE) 알킬 페놀(12-13), POE 지방 아미드, POE 지방 알코올 에테르, POE 지방 아민, POE 지방 에스테르, 폴록사머(7-19), POE 글리콜 모노에테르(13-16), 폴리소르베이트(17-19) 및 소르비탄 에스테르(2-9). 다른 유화제들도 마찬가지로 적절하므로, 이 리스트가 전부는 아니다.
적절한 에멀젼 안정화제는 친액성 콜로이드, 예컨대 다당류, 아카시아, 한천, 알긴산, 카라기난, 구아 검, 카라야 검, 트라가칸스, 크산탄 검; 양성 화합물(예컨데 젤라틴)과 합성 또는 반-합성 폴리머(예컨데 카르보머 수지, 셀룰로오스 에테르 및 에스테르, 카르복시메틸 시틴, 폴리에틸렌 글리콜-n(에틸렌 옥시드 폴리머 H(OCH2CH2)nOH); 미세하게 분할된 고형물, 예컨데 점토(아타풀기트, 벤토니트, 헥토리트, 카올린, 마그네슘 알루미늄 실리케이트 및 몬트모릴로니트), 미세결정 셀룰로오스 옥시드 및 히드록시드(예컨대, 알루미늄 히드록시드, 마그네슘 히드록시드 및 실리카); 및 시보탁틱 프로모터/젤라틴(아미노산, 펩티드, 단백질 레시틴 및 다른 포스포리피드 및 폴록사머를 포함)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
에멀젼의 형성에 사용되는 적절한 산화방지제는 킬레이트제, 예컨데 시트르산, EDTA, 페닐알라닌, 인산, 타르타르산 및 트립토판; 적당하게 산화된 화합물, 에컨대 아스코르브산, 나트륨 비설피트 및 나트륨 설피트; 수용성 사슬 종결제, 예컨데 티올 및 지용성 사슬 종결제, 예컨데 알킬 갈레이트, 아스코르빌 팔미테이트, t-부틸 히드로퀴논, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 히드로퀴논, 노르디 히드로구아이아렉트산 및 알파-토코페롤을 포함한다. 적절한 방부제, pH 조절제 및 완충제, 킬레이트화제, 삼투압제, 착색제 및 향미제는 "현탁액"에서 후술하지만, 에멀젼의 형성에 있어서 동일하게 적용가능하다.
일반적인 에멀젼 제조는 다음과 같다: 두개 상(오일 및 물)을 개별적으로 적절한 온도로 가열하는 바, 고체 또는 반-고체 오일의 두가지 경우에는 모두 동일하게 최고 용융 성분의 용융점보다 높은 5-10℃로 가열하거나 또는 오일 상이 액체일 경우 통상 실험에서 측정된 적절한 온도로 가열한다. 수용성 성분은 수성 상에서 용해되고, 오일-용해성 성분은 오일 상에서 용해된다. 오일내-물 에멀젼을 만들기 위해, 오일 상을 수성상내로 세게 혼합시켜 적절한 분산액을 만들고 생성물은 교반하면서 조절된 속도로 냉각시킨다. 물내 오일 에멀젼은 그 반대 방법으로, 즉 수성 상을 오일 상에 부가한다. 친수성 콜로이드가 에멀젼 안정화제로서 유화계의 일부일 때, 콜로이드를 수성 상에 부가하기 전에 수성 상 보다는 오일 상내로 부가하는 상 전환 기법이 사용될 수 있다. 임의의 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체의 사용에서, 이들 유도체를 가열 전에 오일 상에 부가하는 것이 바람직하다.
표준 에멀젼보다 작은(10-100nm) 입자 크기를 특징으로 하고 "물, 오일 및 단일의 광학적 등방성이고 열역학적으로 안정한 액체인 친양쪽성 계"로 정의되는 마이크로에멀젼이 형성될 수 있으며, 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체를 포함한다. 바람직한 형태로서, 마이크로에멀젼은 계면활성제 또는 계면활성제 혼합물, 조-계면활성제(일반적으로 짧은사슬 알코올), 선택된 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체, 물 및 경우에 따라 다른 첨가제를 포함한다.
이 유화계는 본 발명의 유도체에 대한 전달계로서 몇가지 잇점을 가진다. 우선, 마이크로에멀젼은 표준 에멀젼을 형성하는데 필요로하는 세게 혼합하는 것 없이 자발적으로 생성되는 경향이 있다. 상업적 관점에서, 이는 제조과정을 단순화한다. 두번째로, 마이크로에멀젼은 미세방울의 작은 직경으로 인해 미세구조를 부수지 않고 미세여과 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 세번째로, 마이크로에멀젼은 열역학적으로 매우 안정하다. 네번째로, 마이크로에멀젼은 매우 중요한 높은 용해력을 갖기 때문에, 본 유도체의 용해도는 더욱 향상된다.
마이크로에멀젼을 형성하는데 사용하기에 적절한 계면활성제 또는 계면활성제 혼합물은 음이온성, 양이온성, 양쪽성 또는 비이온성일 수 있고, 1-20범위내, 보다 바람직하게는 2-6 및 8-17의 HLB(친수-친지방 균형)값을 가진다. 특히 바람직한 제제는 비-이온성 계면활성제로, 지방족 또는 시클로지방족 알코올, 포화지방산 및 알킬페놀의 폴리글리콜 에테르 유도체, 폴리프로필렌 글리콜과 알킬 프로필렌 글리콜으로의 수용성 폴리에틸렌옥시 첨가 생성물, 카스터 오일 폴리글리콜 에테르, 폴리프로필렌/폴리에틸렌 옥시드 첨가 생성물, 트리부틸페녹시-폴리에톡시에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 옥틸페녹시-폴리에톡시에탄올, 라놀린 알코올, 폴리옥시에틸레이트화(POE) 알킬 페놀(12-13), POE 지방 아미드, POE 지방 알코올 에테르, POE 지방 아민, POE 지방 에스테르, 폴록사머(7-19), POE 글리콜 모노에테르(13-16), 폴리소르베이트(17-19) 및 소르비탄 에스테르(2-9)로 구성되는 군으로부터 선택된다. 마이크로에멀젼을 제조하기 위한 많은 방법은 공지되어 있으며, 당업자에 의해 사용된다. 본 발명의 마이크로에멸젼을 형성하기 위한 바람직한 방법에서, 계면활성제, 조-계면활성제 및 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체(적당한 비율로 적합한 오일에 미리 용해)를 혼합한 다음 원하는 투명도의 유화계를 얻을때까지 물로 적정한다.
다른 바람직한 구체예로서, 피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체를 유화제 및 식용 계면활성제(9 참조)와 혼합함으로써 마이크로에멀젼을 형성할 수 있다.
용액 및 분산액
피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체는 적절한 오일 부형제내에 추가 부형제존재하에 또는 없이 용해되거나 분산될 수 있고, 이 형태로, 예를들어, 일반적인 식품에 사용, 양념할 때 및 동물 사료에 혼입하기 위해 사용된다.
적당한 용해제는 모든 식용 오일, 예컨데 식물오일, 해양오일(예컨데 생선 오일) 및 야채 오일, 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 토코페롤 등 및 이들의 혼합물을 포함한다.
자기-유화계
피토스테롤 또는 피토스타놀 유도체는 적절한 부형제, 예를들어, 계면활성제, 에멀젼 안정화제 등과 혼합되고 가열(필요하면), 냉각되어 수성 매질과 접촉시에 자연적인 에멀젼을 형성할 수 있는 반-고형 생성물을 형성할 수 있다. 이 반-고형 생성물은 두-조각 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐에서 여과 물질과 같은 많은 다른 형태로 사용될 수 있거나, 다른 전달계에 사용하기에 적합할 수 있다.
고형 분산액
본 발명에 따른 유도체의 용해도/분산성을 더 증가시키는 다른 수단은 고형 분산 계의 사용을 수반한다. 이들 분산액은 분자성 용액(공융물), 물리적 분산액 또는 둘의 조합물을 포함할 수 있다.
예를들어, 고형 분산액은 담체로서 수용성 폴리머를 사용하여 일반적으로 제조될 수 있다. 제한없이, 이들 담체는 단독으로 또는 조합하여 하기를 포함할 수 있다: 액체 등급 PEG's을 부가 또는 부가하지 않는 고체 등급 폴리에틸렌 글리콜(PEG's); 폴리비닐피롤리돈 또는 비닐 아세테이트 및 셀룰로오스 에테르 및 에스테르와 이들의 공중합체. 프로필렌 글리콜, 폴리올, 글리세롤등과 같은 글리세롤 계통의 부가적 구성요소 같은 다른 부형제가 이 분산액에 포함될 수 있다.
고형 분산액은 당해 기술과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 이들 방법은 제한 없이 하기 방법을 포함한다:
(a) 성분들을 용융시킨후 조절 냉각하여 고형화 및 이후 기계적 분쇄하여 적절한 분말을 생성한다. 다르게는, 용융 분산액을 분무 건조기내 냉각공기의 흐름으로 분무하여 고형입자를 형성하거나 압출기 및 스페로니저(spheroniser)를 통과하여 조절된 입자크기의 고형 덩어리를 형성할 수 있다. 또 다르게는, 용융 분산액을 두-조각 경질 젤라틴 캡슐에 직접적으로 채우며;
(b) 성분들을 적절한 용매계(유기, 혼합 유기, 유기-수성)에 용해시킨 후 대기압하이나 진공에서 증발시키고, 분무건조하고, 동결건조함으로써 용매를 제거하며; 및
삭제
(c) 성분들을 적당한 용매계에 용해시키고 이어, 이들 성분이 거의 또는 전혀 용해되지 않는 비혼화성 용매를 사용하여 이들을 용액으로부터 침전시키고, 여과하고, 용매를 제거하고, 건조시키고, 경우에 따라 분쇄하여 적절한 분말 형태를 제공한다.
현탁액
상기 유도체의 용해도 및/또는 분산성을 더 향상시키기 위해 사용될 수 있는 현탁액은 오일 또는 수성 외부 상(부형제)내에 분산된 고형, 아마도 미세하게 분할된 내부 상을 포함한다. 또한, 고형 내부 상은 현탁액과 에멀젼 모두에 공통된 성질을 갖는 전달계를 생성하는 동안에 상술한 바와 같이 에멀젼에 부가될 수 있다.
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당해 분야에서 상용되는 수많은 부형제는 본 발명 범위내에서 현탁액을 생성하는데 적절할 수 있다. 전형적으로, 현탁액은 오일 또는 수성 부형제, 분산된(현탁) 내부 상, 분산 및/또는 습윤제(계면활성제), pH조절제/완충제. 킬레이트화제, 산화방지제, 이온 강도를 조절하는 제제(삼투압제), 착색제, 향미제, 현탁액을 안정시키고 점도를 증가시키는 물질(현탁화제)및 방부제를 포함한다.
적당한 부형제는 물, 오일, 알코올, 폴리올, 피토스테롤 조성물이 부분적으로 용해성이거나 용해성이 아닌 다른 식용화합물 및 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적절한 분산제는 레시틴; 인지질; 비이온성 계면활성제, 예컨데 폴리소르베이트 65, 옥트옥시놀-9, 노녹시놀-10, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 40, 폴록사머 235, 폴리소르베이트 20 및 폴록사머 188; 음이온성 계면활성제, 예컨데 소듐 라우릴 술페이트 및 도큐세이트; 지방산; 지방산염; 다른 지방산 에스테르 및 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.
pH 조절을 위한 조절제/완충제는 시트르산 및 그 염, 타르타르산 및 그 염, 인산 및 그 염, 아세트산 및 그 염, 염산, 수산화 나트륨 및 중탄산나트륨을 포함한다. 적절한 킬레이트화제는 에데테이트(디소듐, 칼슘 디소듐 등), 시트르산 및 타르타르산을 포함한다. 적절한 산화방지제는 아스코르브산 및 그 염, 아스코르빌 팔미테이트, 토코페롤(특히 알파-토코페롤), 부틸화 히드록시톨루엔, 부틸화 히드록시아니솔, 소듐 비설피트 및 메타비설피트를 포함한다. 적절한 삼투압제는 일가, 이가 및 삼가 전해질, 단당류 및 이당류를 포함한다. 적절한 방부제는 파라벤(Me, Et, Pr, Bu 및 그 혼합물), 소르브산, 티메로살, 사차 암모늄염, 벤질 알코올, 벤조산, 클로르헥시딘 글루코네이트 및 페닐에탄올을 포함한다. 착색제 및 향미제는 원한다면 부가될 수 있으며 모든 천연, 천연-동일한 및 합성 변종중에서 선택 될 수 있다.
수화된 지질계
본 발명의 또 다른 구체예로서, 본 발명 유도체의 용해도/분산성은 리포좀과 다른 수화된 지질 상과 같은 인지질계의 형성에 의해, 생리적인 세포함유에 의해 향상될 수 있다. 이 함유는 공유결합을 형성하지 않고 분자를 포획하는 것을 말하며, 용해도 및 활성 성분의 차후 용해를 개선시키기 위해 널리 사용된다.
리포좀을 포함하여 수화된 지질계는 인지질, 예컨데 포스파티딜콜린(레시틴), 포스포디글리세리드 및 스핑고리피드, 글리코리피드 등과 같은 인지질을 포함하여 다양한 지질 및 지질 혼합물을 사용하여 제조될 수 있다. 인지질은 바람직하게는, 생성되는 지질계를 안정화하기 위해 전하를 갖는 물질, 예컨데 전하-함유 인지질, 지방산 및 이들의 칼륨 및 나트륨염과 함께 사용될 수 있다. 리포좀을 형성하는 전형적인 방법은 하기와 같다:
1) 유기용매(예컨데 클로로포름, 디클로메탄, 에테르, 또는 다른 알코올 또는 이들의 조합)에 지질 및 피토스테롤 또는 피토스타놀 또는 이들의 혼합물 및 토코트리에놀 성분을 분산한다. 하전된 종을 리포좀 형성시 차후 응집을 줄이기 위해 부가할 수 있다. 임의의 불포화 지질이 존재한다면, 이를 보호하기 위해 산화방지제(예컨데 아스코르빌 팔미테이트, 알파-토코페롤, 부틸화 히드록시톨루엔 및 부틸화 히드록시아니솔)가 부가될 수 있으며;
2) 소량의 불용성 성분을 제거하기 위해 혼합물을 여과하며;
3) 상기 성분의 상 분리가 일어나지 않게 하는 조건( 압력, 온도)하에서 용매를 제거하며;
4) 완충염, 킬레이트화제, 항냉동제 등을 비롯하여 용해된 용질을 함유하는 수성 매질에 노출 시킴으로써 "건조" 지질 혼합물을 수화하며;
5) 리포좀 입자 크기를 감소시키고 균질화, 압출과 같은 적당한 기술을 사용하여 층판성 상태를 변형한다.
당업자에게 공지된 수화된 지질을 생성하고 활성 성분으로 채우기 위한 임의의 방법은 본 발명의 범위내에서 사용될 수 있다. 예를들어, 리포좀을 제조하기 위한 적절한 방법이 참고문헌 10과 11에 개시되어 있다. 이들 방법의 변형은 미국특허번호 제5,096,629 호에 개시되어 있다.
미국특허 번호 제4,508,703호(본 명세서에 참고문헌으로 포함됨)는 양쪽성 지질 성분과 소수성 성분을 용해시켜 용액을 형성한 후 가스 흐름으로 용액을 입자화하여 분말 혼합물을 생성함으로써 리포좀을 제조하는 방법을 기술한다.
시클로덱스트린 복합체
시클로덱스트린은 글루코피라노스 서브유닛을 포함하고, 환상면의 실린더형 공간 배열을 갖는 환식 올리고사카리드의 종류이다. 이 그룹의 시판되는 구성요소는 6(알파-시클로덱스트린), 7(베타-시클로덱스트린) 및 8(감마-시클로덱스트린) 글루코피라노스 분자를 포함하는 바, 극성(친수성) 히드록실기는 구조식의 바깥쪽을 향하고, 비극성(친지질성) 골격 탄소와 에테르성 산소는 환상면의 내부구멍과 정열된다. 이 구멍은 함유 복합체를 형성하기 위해 비공유방식으로 결합하여 활성 성분(게스트 분자, 본원에서는 본 발명의 유도체)의 친지질 잔기를 수용할 수 있다.
시클로덱스트린 분자의 외부 히드록실 치환기는 변형되어 낮은 독성과 같은 다른 원하는 개선과 더불어 수성 매질에서 향상된 용해도를 갖는 유도체를 형성할 수 있다. 이러한 유도체의 예는 다음과 같다: 알킬화 유도체, 예컨데 2, 6-디메틸-베타-시클로덱스트린; 히드록실알킬화 유도체, 예컨데 히드록실프로필-베타-시클로덱스트린; 가지 유도체, 예컨데 디글리코실-베타-시클로덱스트린; 술포알킬 유도체, 예컨데 술포부틸에테르-베타-시클로덱스트린; 및 카르복시메틸화 유도체, 예컨데 카르복시 메틸-베타-시클로덱스트린. 당업자에게 공지된 다른 유형의 화학적 변형 또한 본 발명의 범위내에 포함된다.
시클로덱스트린 복합체는 종종 게스트 분자(본원에서 본 발명의 유도체)에 향상된 용해도, 분산성, 안정성(화학적, 물리적 및 미생물학적), 생체이용률 및 감소된 독성의 특성을 제공한다.
시클로덱스트린 복합체를 생성하기 위한 당해 분야에 공지된 많은 방법이 있다. 복합체는, 예를들어 하기의 기본 방법을 사용하여 생성될 수 있다: 가열하면서 또는 가열없이, 시클로덱스트린의 수성 또는 혼합된 수성-유기 용액내로 하나 이상의 유도체를 교반하며; 가열하면서 또는 가열 없이, 적당량의 수성, 유기 또는 혼합 수성-유기 액체를 부가하면서 적절한 장치에서 시클로덱스트린과 본 조성물을 반죽, 슬러리화 또는 혼합하며; 또는 적절한 혼합 장치를 사용하여 시클로덱스트린과 본 발명의 조성물을 물리적으로 혼합한다. 이렇게 형성된 함유 복합체의 분리는 공동-침전, 여과 및 건조; 압출성형/구형화 및 건조; 수분덩어리의 세분화 및 건조; 분무 건조; 동결건조 또는 시클로덱스트린 복합체를 형성하기 위해 사용된 방법에 따른 다른 적절한 다른 기법에 의해 가능하다. 분리된 고형 복합체를 기계적으로 분쇄하기 위한 부가적인 임의 단계가 사용될 수 있다.
이들 시클로덱스트린 복합체는 용해도와 용해율을 향상시키고 유도체의 안정성을 증가시킨다. 시클로덱스트린 복합체를 재검토하려면, 참고문헌 12를 참고한다.
담즙산염과 복합체 형성
본 발명의 유도체를 안정시키기 위해 적당히 배합된 담즙산, 이들의 염 및 접합 유도체를 사용하여 이들 조성물의 용해도 및 분산 특징을 향상시킬 수 있다.적당한 담즙 산의 예로는 콜산, 케노데옥시콜산, 데옥시콜산, 디히드로콜산 및 리토콜산을 포함한다. 적당한 담즙산 염의 예로는 소듐 콜레이트, 소듐 데옥시콜레이트 및 이들의 다른 염 형태를 포함한다. 접합된 담즙산염의 예로는 글리코케노데옥시콜산, 글리콜산, 타우로케노데옥시콜산, 타우로콜산, 타우로데옥시콜산 및 그의 염을 포함한다.
본 발명의 유도체의 용해도를 더 향상시키기 위한 적절한 계는 하나 이상의 유도체와 하나 이상의 담즙산, 염 또는 접합 담즙산으로 구성된다. 추가 물질을 부가하여 부가적인 용해도 능력을 갖는 배합물을 생성할 수 있다. 이들 물질은 인지질, 당지질 및 모노글리세리드를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이들 성분은 상술한 기법을 사용하여 적절한 분리 및 경우에 따라 입자크기 감소와 함께 적당한 용매 또는 담체 부형제의 사용에 의해 또는 고형 상으로 배합될 수 있다.
담즙산 및 이들의 유도체는 불쾌한 맛을 갖고 위 및 위-장관의 상부를 자극하므로, 당해 분야에 공지된 적절한 기법을 사용하여 장 피복을 고형 배합물 입자에 적용할 수 있다. 전형적인 장 피복은 특히, 셀룰로오즈 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로오즈 아세테이트 트리멜리테이트, 히드록시프로필메틸셀룰로오즈 프탈레이트, 히드록시프로필메틸셀룰로오즈 아세테이트 숙시네이트, 폴리비닐아세테이트 프탈레이트, 아크릴레이트 중합체 및 이들의 유도체(예컨데, Eudragit™계의 적절한 구성요소), 에틸셀룰로오즈 또는 이들의 조합을 포함한다. 부가적 부형제를 피복 배합물에 부가하여 막 기능을 개선하거나 피복 과정을 도울 수 있다(에컨데, 계면활성제, 가소제, 채널링제, 투과성 개선제 등). 피복 배합물 부형제는 수성 또는 유기계 또는 둘의 혼합물을 포함할 수 있다.
수향성 복합체
소수성(친지질성) 및 다른 분자와 함께 물 구조를 개시할 수 있는 화합물을 수향성 물질로 언급한다. 이들 화합물을 사용하여 유도체의 수성 용해도를 더욱 증가시킬 수 있다. 수향성 물질의 예로는 특히, 소듐 벤조에이트, 소듐 히드록시벤조에이트, 소듐 살리실레이트, 니코틴아미드, 소듐 니코틴에이트, 소듐 겐티세이트, 겐티스산, 에탄올아미드, 소듐 톨루에이트, 소듐 아미노벤조에이트, 소듐 안쓰라닐레이트, 소듐 부틸모노글리코술페이트, 레소르시놀 등을 포함한다.
수성, 유기 또는 둘의 조합인 적당한 액체 부형제에서 하나 이상의 유도체 및 수향성 물질 또는 이들의 혼합물을 혼합함으로써 원래 비-공유성인 복합체를 형성할 수 있다. 계면활성제, 폴리올, 이당류 등과 같은 부가적인 부형제를 첨가하여 복합체 형성을 촉진하거나 분산성을 도울 수 있다. 생성된 복합체는 당해 분야에 공지된 임의의 방법(공동-침전 및 건조, 액체 부형제의 증발, 분무건조, 동결건조등)에 의해 건조 분말로서 분리된다. 원한다면, 임의의 표준 기법에 의해 입자크기를 감소시킬 수 있다. 생성된 수향성 복합체는 부가적인 변형없이 사용될 수 있거나 또는 필요한 다른 배합물이나 부형제로 혼합될 수 있다.
사용방법
본 발명의 유도체는 추가 변형없이 동물, 특히 인간에게 직접 투여할 수 있거나 또는 상술한 바와 같이 상기 조성물의 용해도 및/또는 분산성을 더 향상시키도록 처리할 수 있다. 다르게는, 이들 용해도 및/또는 분산성 향상 방법중 임의의 하나와 결합하여 후술하는 바와 같이 본 유도체를 각종 부형제에 혼입하여 CVD 및 그에 기초하는 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 동맥경화증, 고혈압, 혈전증, 제Ⅱ형 당뇨병과 같은 관련질환뿐 아니라 치매, 노화, 암과 같은 상기 질병 진행의 일부로서 산화적 손상을 포함하는 다른 질환을 치료 및/또는 예방할 수 있다. CVD 또는 임의의 산화 관련 장애에 "아주 위험"하다고 여겨지는 집단에서, 본 발명의 유도체를 일차 ,이차 및 삼차 치료 프로그램에 사용하는 것을 심사숙고한다.
본 발명의 유도체를 여러가지 담체 또는 보조제와 혼합하여 직접 투여를 돕거나 상기 조성물을 식품, 음료, 기능식품 또는 약제로 혼입하는 것을 도울 수 있다. 상기 유도체를 전달하기 위한 여러가지 가능한 부형제를 평가하기 위해서, 하기 목록이 제공된다. 유도체의 투여량은 다른 인자들중에서 전달 방식, 환자 치수 및 상태, 이루어질 결과 및 식품 첨가제 및 의약 제제에서 당업자에게 공지된 다른 인자에 따라 달라질 것이다. 그러나, 일반적으로 본 발명의 유도체를 하루에 피토스테롤 및/또는 피토스타놀 6 그램이하를 함유하는 형태로 사람에게 투여하는 것이 바람직하다. 또한, 유도체의 매일 투여량을 더 많게 하여도, 과량이 정상 배설 통로로 간단하게 배출될 것이므로, 동물 숙주에 해롭지 않는다는 것을 인식해야 한다.
1) 약제학적 투여 형태
본 발명의 유도체는 각종 통상적인 약제 및 투여 형태, 예를들어 경구, 볼 또는 혀로 투여하기 위한 정제(플레인 및 피복된), 캡슐(경질 및 연질, 젤라틴, 부가적 피복을 하거나 또는 피복하지 않고), 분말, 과립(거품성 과립 포함), 펠렛, 미세입자, 용액(예컨데 미세르, 시럽, 엘릭시르 및 점적약), 로젠지, 패스틸, 앰플, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 연고, 크림, 좌제, 겔, 경피 패치 및 통상적 부형제 및/또는 희석제 및 안정화제와 함께 변형된 방출 투여 형태로 혼입될 수 있음은 본 발명의 범위에 해당됨을 고려해야 한다.
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상술한 바와 같이 적절한 투여 형태로 적용된 본 발명의 유도체는 경구, 주사(정맥내, 피하, 복막내로, 복강내, 피내 또는 근육내)에 의해, 국소적으로 또는 다른 방법으로 사람을 비롯하여 동물에게 투여될 수 있다. 정확한 작용기전은 분명하지 않지만, 본 발명의 유도체는 정맥내로 투여되어 혈청 콜레스테롤을 낮춘다. 특정 피토스테롤-기제 생성물은 장내 콜레스테롤 흡수 억제제로서의 역활 이외에, 담즙산 합성, 장세포 및 담즙성 콜레스테롤 분비, 담즙산 분비 및 효소 역학의 변화 및 신체내 다양한 구획간의 콜레스테롤 운송을 통한 콜레스테롤 항상성에 대한 전신적 효과를 가질수 있는 것으로 여겨진다(1998년 1월 15일자로 공고된 PCT/CA97/00474).
2)식품/음료/기능식품
본 발명의 또다른 형태에서 본 발명의 유도체는 하기를 포함하나 이에 한정되지 않는 식품, 음료, 기능식품으로 혼입될 수 있다:
1) 유제품- 예컨데, 치즈, 버터, 우유 및 기타 유제품 음료, 스프레드 및 유제품 혼합물, 아이스크림 및 요구르트;
2) 지방-기제 제품- 예컨데, 마아가린, 스프레드, 마요네즈, 쇼트닝, 쿠킹오일 및 튀김오일 및 드레싱;
3) 씨리얼 기제 제품- 이들 제품이 요리되거나, 구워지거나 또는 다르게 가공된 곡물(예를들어 빵, 파스타);
4) 과자류- 예컨데, 쵸콜렛, 사탕, 츄잉껌, 디저트, 비-유제품 토핑(예를들어 Cool Whip™), 샤베트, 아이싱 및 다른 충전제;
5) 음료- 알코올성, 비알코올성 및 콜라 및 다른 청량음료, 쥬스음료, 식이보충제 및 식사 대체 음료, 예컨데 상표 Boost™과 Ensure™로 판매되는 음료를 포함하며; 및
6) 기타 제품- 계란 및 계란 제품, 가공된 식품, 예컨데 수프, 예비-제조된 파스타 소스, 예비-형성된 식사 등을 포함한다.
본 발명의 유도체는 혼합, 주입, 주사, 블렌딩, 분산, 유화, 담금, 분무 및 반죽과 같은 기술에 의해 직접적으로 추가 변형 없이 식품, 기능식품 또는 음료에 혼입될 수 있다. 다르게는, 상기 유도체는 섭취전에 소비자에 의해 식품 또는 음료에 직접적으로 적용될 수 있다. 이들은 간단하고 경제적인 전달 방식이다.
실시예
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실시예 1--아스코르브산의 보호
오일(24%, 8.3g)을 아세톤(50ml)에 적가하였다. 아스코르브산(12g)을 0℃에서 상기 혼합물에 부가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 6시간동안 교반하였다. 수득한 결정체를 흡입하면서 여과하고, 여과된 케이크를 압축하여 건조하고 이어, 아세톤(30ml)으로 세척하였다. 생성물인 5,6-이소프로필리덴-아스코르브산(14g)을 수득하였다.
실시예 2--피토스타놀에의 부착
톨루엔(500ml)과 피리딘(25ml)중의 피토스타놀 혼합물(24g)(캄페스타놀: 36.4%; 시토스타놀: 62.3%)의 용액을 0℃에서 톨루엔(200ml)중의 포스포러스 옥시클로리드(9ml)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3시간동안 교반하였다. 피리딘 히드로클로리드를 여과하고, 모액을 농축하여 톨루엔을 회수하였다. 나머지를 건조 THF(100ml)에서 용해시키고, 건조 THF(400ml)중의 상기 제조된 보호 아스코르브산(14g)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 상기 교반을 실온에서 1시간동안 하였다. 용액을 농축하여 용매를 제거하였다. 에탄올(400ml) 및 3N HCL(200ml)을 부가하고, 상기 혼합물을 50℃로 30분 동안 가열 및 농축하였다. 에틸아세테이트(600ml)를 부가하고, 생성된 용액을 물(3X300ml)로 세척하고, 소듐 술페이트상에서 건조하고, 농축하여 백색 분말 22g을 생성물(피토스타놀-포스페이트-아스코르베이트)로 수득하였다.
실시예3--나트륨 염으로의 전환
상기 제조된 산(17g)을 에탄올(100ml)에 용해시키고, 에탄올(50ml)중의 소듐 메톡시드(2.7g) 용액을 교반하면서 실온에서 부가하였다. 상기 교반은 30분동안 유지하였다. 부가 후, 생성된 백색 케이크를 여과하고, 건조 및 중량을 측정하여 백색 분말20g(피토스타놀-포스페이트-아스코르베이트 소듐)을 제공하였다.
실시예4--Apo-E 결핍 마우스에서 지질 함량과 동맥경화성 병변 크기에 대한 유도체의 효과
배경
비타민 C(Aldrich-Sigma에서 구입)를 베타-시토스테롤, 시토스타놀, 캄페스테롤 및 캄페스타놀("FCP-3P4"로 칭함)을 포함하는 피토스테롤/피토스타놀의 혼합물에 화학적으로 부착시켰다. 본 발명의 유도체(비토스테롤 또는 FCP-VP4)는 수용성이다. 비토스테롤 및 그 패어런츠 제제(3P4 및 비타민 C)의 효과는 콜레스테롤이 주입(0.2%w/w)된 수컷 apo E-KO 마우스에서 12주에 걸쳐서 연구하였다. 비토스테롤은 물(2%w/v)과 음식물(2%w/w)로 투여되었다.
목표
ㆍapo E-KO 마우스에서 비토스테롤의 지질-저하 효과를 실험
ㆍapo E-KO 마우스에서 비토스테롤의 항-동맥경화성 효과를 실험
구체적 목적
1. apo E-KO 마우스에서 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세리드에 대한 식사 또는 음료수 투여에 의한 비토스테롤의 효과를 실험한다.
2. 특히 음료수에서 비스테놀의 컴플라이언스 및 마우스의 체중에 대한 그 효과를 평가한다.
재료 및 방법
48마리 4주된 수컷 아포리포프로테인 E 녹아웃(apo E-KO) 마우스를 잭슨 실험실에서 구입하여 BC 아동병원 리서치 센터의 동물 시설에 두었다. 비토스테롤은 Fobes Medi-tech Inc.("FMI")에서 제조하였다. 비토스테롤, 피토스테롤(Fobes Batch # 98-694) 및 비타민 C(Aldrich-Sigma에서 구입)의 패어런트 재료는 FMI에서 제공하였다. 콜레스테롤을 시그마로부터 구입하고, 9%(w/w) 피코랩 마우스 음식물은 자메이슨 페트 푸드(Jameison's Pet Food distributor, Delta.BC.Laboratory chemicals)에서 구입하고 시약들은 상술한 바와 같이 제조하고 사용하였다(13-16).
실험 계획:
동물 및 식사: 본 발명자들의 이전 실험을 토대로 하여, 각각의 그룹에서 8마리 동물은 혈장 콜레스테롤 수치 및 동맥경화성 병변의 발달에 대한 중요한 치료 효과를 통계적으로 발견하기에 충분하다. 따라서, 후술하는 바와 같이, 48마리 수컷 apo E-KO 마우스를 비슷한 평균 혈장 콜레스테롤 수치 및 체중을 갖는 8마리씩 6개 그룹으로 나누었다. 마우스에게 14주 동안 실험적 식이를 제공하였다. 식이 제조는 이전에 공개된 방법(13-16)에 토대로 하여 실시하였다. 실험 마우스 그룹 및식이의 개요는 표 1에 제시되어 있다. 기준선에서 그리고 실험동안에 혈장 지질 수치를 측정하기 위해 마우스의 꼬리에서 피를 채취하였다. 연구의 마지막 단계에서, 마우스를 CO₂가스로 희생시키고, 심장에서 피를 채취하였다. 심장과 대동맥을 제거하고 동맥경화성 병변을 평가하기 위해 포르말린에 고정시켰다. 비타민 C 및 식물 스테롤 농도를 측정하기 위해, 동분량의 혈장을 BRI 실험실(BRI laborotory, Burnaby, BC)에 보냈다. 산화방지제를 측정하기 위해, 동분량의 혈장을 닥터 키트 실험실(Dr.Kitts laboratory, UBC)에 보냈다.
마우스의 실험 그룹 및 식이
그룹(수) 처리(식이유형)
1(8) 9%지방 & 0.15%(w/w) 콜레스테롤(MC)의 대조군 마우스 음식물
2(8) MC+2%(w/w)비토스테롤
3(8) 음료수내 MC+2%(w/v)비토스테롤
4(8) MC+1.3%피토스테롤(그룹 2에 준것과 같은 양)
5(8) MC+0.7%(w/w)비타민C(그룹 2에 준것과 같은 양)
6(8) MC+1.3%(w/w)피토스테롤 및 0.7%(w/w)비타민C (그룹 2에 준것과 같은 양)
생화학적 및 조직학적 평가: 전술한 바와 같이(13-16), 혈장 콜레스테롤 수치는 기준선에서 및 실험동안 4-6주 간격으로 및 실험의 마지막 단계에서 세인트 폴 병원의 임상 실험실에서 측정하였다. BRI에서 액체 크로마토그래피 기법을 사용하여 비타민 C 및 식물 스테롤 농도를 측정하는데 동분량의 혈장 샘플을 사용하였다. 전술한 바와 같이(13-14), 대동맥 분지 부분을 사용하여 동맥경화성 병변 발달을 평가하였다.
결과
A: 혈장 총 콜레스테롤 수치
도 4는 혈장 총 콜레스테롤 수치에 대한 비토스테롤과 그 패어런츠 제제의 효과를 나타낸다. 수용액 및 식이성 비토스테롤은 현저한 콜레스테롤 저하 효과를 갖는다. 이 현저한 효과는 연구 12주 동안 유지되었다.
B: 혈장 트리글리세리드
도 5는 혈장 트리글리세리드 수치에 대한 화합물의 효과를 나타낸다. 비토스테롤은 경미한 TG-저하 효과를 갖는다. 12주에서 비토스테롤의 트리글리세리드 효과는 줄어들었다.
C: 체중
도 6은 체중을 나타낸다. 식이성 비토스테롤 그룹에서 체중의 감소는 식이 제조에 기인한 것 같다. 체중 저하는 음식 섭취 및 식이 제조와 관련된 것으로 보인다.
D: 배설물 콜레스테롤 수치
예비 결과는 비토스테롤에 의한 콜레스테롤 흡수의 현저한 억제를 나타낸다. 결과는 하기와 같이 요약된다:
그룹 배설 콜레스테롤(%w/w)
대조군 0.12
식이성 비토스테롤 0.8
물 비토스테롤 0.7
3P4 0.2
E:동맥경화성 병변 크기
도 7은 FM-VP4가 대조군 그룹과 비교할 때 동맥경화성 병변 크기를 75%까지 감소시킴을 나타낸다. 처리 그룹은 하기 방식으로 번호를 매겼다.
병변크기 연구를 위한 마우스 실험 그룹 및 식이
그룹(수) 처리(식이유형)
1(8) 9%지방&0.2%(w/w)콜레스테롤(MC)의 대조군 마우스 음식물
2(8) MC+0.2% 콜레스테롤 + 2%(w/w)비토스테롤(즉, 음식으로)
3(8) MC+0.2% (w/w)콜레스테롤 + 1.2%(w/w)피토스테롤
4(8) MC+0.2% (w/w)콜레스테롤 + 0.5%(w/w)비타민C
5(8) MC+0.2% (w/w)콜레스테롤 +1.2% 피토스테롤 +0.5% 비타민C
6(8) MC+0.2% (w/w)콜레스테롤 +물내 2% 비토스테롤
결론
비토스테롤은 부가적인 트리글리세라이드-저하 효과와 함께 효과적인 콜레스테롤-저하 제제이다. 본 발명자들은 12주에 걸친 실험 동안에 어떠한 부작용도 관찰하지 못했다. 비토스테롤은 콜레스테롤 수치를 75%까지 그리고 트리글리세라이드 수피를 44%까지 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 이는 탁월한 결과이다. 또한, 동맥경화성 병변 크기에 대한 극적인 결과가 관찰되었다(대조군과 비교할 때 비토스테롤(새로운 유도체) 처리 그룹에서 71-86%감소).
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Claims (23)

  1. 피토스테롤 또는 피토스타놀과 아스코르브산으로 구성되고, 하기 구조식을 갖는 화합물 및 그의 모든 염:
    Figure 112005031622519-pct00015
    상기 식에서, R은 피토스테롤 또는 피토스타놀 잔기이며, R2는 아스코르브산기 또는 보호된 아스코르브산기이며 R3는 수소 또는 임의의 금속, 알칼리 토금속 또는 알칼리금속임.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 피토스테롤은 시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 데스모스테롤, 찰리노스테롤, 포리페라스테롤, 클리오나스테롤로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 피토스타놀은 모든 포화된 또는 수소화된 피토스테롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 화합물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 피토스타놀은 시토스타놀인 화합물.
  5. 제 1항에 있어서, R3는 칼슘, 마그네슘, 망간, 구리, 아연, 나트륨, 칼륨 및 리튬으로 구성되는 군으로부터 선택되는 화합물.
  6. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 심혈관질환 및 동맥경화증과 고지혈증을 비롯하여 그에 수반되는 상태를 치료하고 예방하기 위한 조성물.
  7. 제 6항에 있어서, 사람의 콜레스테롤 합성을 감소시키는 하나 이상의 제제를 부가적으로 포함하는 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 제제는 3-히드록시-3-메틸 글루타릴 코엔자임-A 환원효소 억제제인 조성물.
  9. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 식료품.
  10. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 음료.
  11. 제 6항에 있어서, 1 이상의 콜레스테롤 생합성 억제제를 부가적으로 포함하는 조성물.
  12. 제 11항에 있어서, 상기 콜레스테롤 생합성 억제제가 3-히드록실-3-메틸 글루타릴-코엔자임-A(HMG-CoA) 환원효소 억제제인 조성물.
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