KR100650962B1

KR100650962B1 - 질소산화물합성효소(nos)의기능저하에의해유발되는질환의예방또는치료제

Info

Publication number: KR100650962B1
Application number: KR1019980703140A
Authority: KR
Inventors: 다까후미 이시하라; 요시하루 가나야마; 미끼오 오까무라; 주니찌 요시까와; 하루오 신따꾸
Original assignee: 다이이치 아스비오파마 가부시키가이샤
Priority date: 1996-08-30
Filing date: 1997-08-29
Publication date: 2007-07-18
Also published as: DE69725721T2; DE69725721T3; EP0908182A4; JP2009132723A; EP0908182B2; WO1998008516A1; EP0908182B1; ES2210562T3; US20060009458A1; DE69725721D1; US7820667B2; ATE252385T1; KR19990067189A; KR20060094988A; US20030232835A1; ES2210562T5; EP0908182A1

Abstract

유효 성분으로서 하기 화학식 I 로 표시되는 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 염을 함유하는, NOS 의 기능 저하에 의해 유발되는 질환을 효능있게 예방 또는 치료할 수 있는 치료제 :

[화학식 I]

[식 중, R¹ 및 R² 는 각각 수소원자를 나타내거나, R¹ 및 R² 가 함께 하나의 단일 결합을 나타내며, R¹ 및 R² 가 수소원자를 나타내는 경우에는 R³ 는 -CH(0H)CH(OH)CH₃, -CH(OCOCH₃)CH(OCOCH₃)CH₃, -CH₃, -CH₂OH 또는 페닐기를 나타내고, R¹ 및 R² 가 함께 하나의 단일 결합을 나타내는 경우에는 R³ 는 -C0CH(OH)CH₃ 를 나타낸다].

Description

질소 산화물 합성효소 (ＮＯＳ) 의 기능 저하에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료제 {PREVENTIVES OR REMEDIES FOR DISEASES INDUCED BY HYPOFUNCTION OF NITRIC OXIDE SYNTHASE(NOS)}

본 발명은 화학식Ⅰ :

[화학식 I]

[식 중, R¹ 및 R² 는 각각 수소원자를 나타내거나 또는 함께 하나의 단일 결합을 나타내며, R¹ 및 R² 가 수소원자를 나타내는 경우에는 R³ 는 -CH(0H)CH(OH)CH₃, -CH(OCOCH₃)CH(OCOCH₃)CH₃, -CH₃, -CH₂OH 또는 페닐기를 나타내고, R¹ 및 R² 가 함께 하나의 단일 결합을 나타내는 경우에는 R³ 는 -C0CH(OH)CH₃ 를 나타낸다]

로 표시되는 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 하는, NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환을 예방 및/또는 치료하기 위한 약제에 관한 것이다.

혈관내피는 혈관수축이나 혈전 형성에 중요한 역할을 다하는 장이라고 알려져 있었지만, 1980년 초에 내피유래 이완인자 (endothelium-derived relaxing factor : EDRF) 의 존재가 보고되었다. 그 후 1987년에 EDRF 의 본체가 일산화질소 (NO) 인 것이 증명되었다. NO 는 L-아르기닌이 산화되어 NG-히드록실-L-아르기닌에서 L-시트룰린이 될 때까지 생산되고 이 반응은 NO 합성효소 (NOsynthase : NOS) 라는 효소에 의해 촉매된다. 또 NOS 는 혈관내피, 신경계, 신장, 혈소판, 심근, 민무늬근 등 폭넓게 존재하고, 생산되는 NO 는 매우 다채로운 작용을 갖고 있기 때문에 전신의 순환조절에서 중요한 역할을 다한다. NO 의 생산저하가 보이는 질환으로는 고혈압, 고지혈증, 동맥경화, 허혈성 심질환, 심부전, 혈전증 등의 순환기 질환, 천식, 만성폐색성 폐질환, 폐고혈압, ARDS 등의 호흡기 질환, 간 장해, 간 경변, 위장점막장해, 비후성 유문협착증, 췌염 등의 소화기 질환, 뇌허혈, 뇌경색, 뇌순환부전, 노년성 치매 등의 뇌혈관 장해, 신장 장해, 임포텐스 등의 신장·비뇨기 질환, 임신중독증 등의 산부인과 질환, 기타 감염증·면역질환, 당뇨병, 열상 등 그 밖의 약제성에 NO 의 생산저하가 보이는 질병이 수많이 알려져 있다. 또 NOS 에 대해서는 그 유전자가 클로닝되고 구조해석이 행해졌다. 그 결과, NOS 유전자에는 보 (補) 효소로서 카르모듈린 (CaM), 플라빈, NADPH 의 결합부위에 첨가하여 본 발명의 유효성분인 화학식 I 의 화합물에 함유되는 (6R)-L-에리스로-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린 (이하 「BH4」 라 함) 의 결합부위가 존재하는 것이 판명되었다. 또 BH4 가 실제적으로 NOS 의 기능제어에 관여하는 것도 시사되어 있다.

한편, 실험동물에 NOS 저해약을 정맥주사하면 혈압이 상승하는 것이 보고되어 있다 (Sakuma I.et al. Circ. Res. 70 : 607-611, 1992). 추가로 DOCA-식염고혈압 래트, SHR-SP 래트, Dahl-S 래트, Goldblatt 고혈압 래트 등의 고혈압 모델 동물에서 내인성 NO 의 생산이 저하되고 있다는 보고가 있다.

그러나 이들 모델계의 NO 의 생산저하의 원인은 밝혀지지 않았다. 또 고혈압 모델 동물로 빈번히 이용되는 고혈압 자연발증 래트 (SHR) 는, NO 의 생성은 오히려 항진되고 있다는 보고도 많다 (Dominizak AF 등, Hypertension 25 : 1202-1211, 1995). SHR 의 경우에는 고혈압 상태에 대해 NO 를 과잉으로 방출하여 혈압을 저하시키고자 하기 때문에, NO 의 작용이 불충분한 상태라고 생각할 수도 있다 (Nava E 등, Circulation 92: I-347, 1995). 즉 종래 고혈압에 대한 NO 의 관련성이 지적되어 있지만, NOS 의 활성과 고혈압의 관련은 반드시 밝혀져 있지 않았다. 또 고혈압의 혈관이완 반응의 저하에는 아직 그 본태가 불명확한 내피 유래 과분극 인자 (EDHF) 반응의 저하나 내피유래 혈관물질 (EDCF) 의 증가가 관여되어 있을 가능성도 남아 있다.

이와 같이 종래 NO 의 혈관이완 작용 및 BH4 에 의한 NOS 기능제어에 대해서는 어느 정도 지견을 얻을 수 있었다. 그러나 NO 의 생산저하의 원인 및 NOS 의 활성과 고혈압의 관련은 밝혀지지 않았고, 처음부터 고혈압과 생체내의 BH4 의 관계는 물론 BH4 의 강압작용에 대해서는 전혀 알려져 있지 않았다.

또 많은 산업화된 나라에서는 심혈관 질환은 가장 많은 사망원인이 되고 있다. 이제까지도 혈압강하제, 고지혈증용제, 이뇨제, 혈관확장제, 항혈소판약 등 여러 약물이 임상에 사용되고 있지만, 그 많은 것은 혈압, 콜레스테롤 등의 지표의 개선을 목표로 한 것으로 발증의 예방, 악화·진행의 억제, 장기예후의 관점에서는 미해결된 부분이 많다. 근래, 이상의 질환에 관한 혈관질환에 대한 분자 레벨에서의 규명으로 내피세포를 처음으로 하는 혈관을 치료의 장으로 하는 치료전략이 고려되고 있으며, 거기에서의 EDRF 의 본체인 NO 의 생산제어 또는 항산화작용을 갖는 물질의 적용이 가장 기대되는 치료법의 하나로 제창되고 있다 (Gibbons, G.H., Dzau, V.J., Science. Vol.272, 689-693, 1996년). 그러나 아직 이 치료전략을 만족시키는 약제나 치료법은 확립되어 있지 않다.

또한 종래부터 이런 질병 중 협심증이나 심부전 등의 치료에 외인성인 NO 공여제로 황산제 (니트로글리세린 제제 등) 가 유효하게 되어 있지만, 장기 연용시에는 내성이라는 문제를 안고 있다. 즉 황산제로부터 NO 을 생산하는 데에는 티올기 (SH 기) 가 불가피하며 황산제의 장기연용으로 이 SH 기가 고갈되어 버린다. 그리고 NO 발생에는 대사효소를 필요로 하고 또 반응도중에 니트로소티올 등 다른 NO 관련물질이 생겨 장기사용시에 다른 생체내 물질의 발란스를 깨뜨리는 것이라고 생각된다. 또 β 차단약이나 K⁺ 채널 개구약의 성질을 모두 갖고 있는 새로운 타입의 NO 공여제도 개발되어 있지만, 이들도 상기 NO 공여제의 영역을 벗어나는 것은 아니다. 따라서 발병의 예방, 악화·진행의 억제, 장기예후의 관점에서 내인성 NO 기능을 유지 부활시켜 내피세포기능을 개선하는 것이 가장 이상적인 치료법이라고 생각된다.

이 관점에서 생체내에서 자발적인 NO 의 생산을 행하는 것, 즉 NOS 의 활성화를 도모하는 것이 가장 우수한 방법이라고 생각되며, 지금까지 NOS 의 기질인 L-아르기닌의 효과가 이하의 질환 등에서 검토되어 왔다. 예컨대 고혈압 (Higashi,Y. 등, Hypertension 1995, 25, 898-902), 협심증 (Egashira, K. 등, Circulation 1996, 94, 130-134), 심부전 (Rector T.S. 등, Circulation 1996, 93, 2135-2141) 등의 질환이다.

그러나 아세틸콜린에 의한 내피의존성 혈관확장반응의 저하, 기초적 및 엔도세린 수용체 (ETB) 자극에 의한 신장 NO 의 생산이 저하되는 모델 (Hirata Y, Hayakawa H, Omata M 등 : Circulation 1995:91:1229-1235) 로 잘 알려져 있는, DOCA 식염고혈압 래트에서 L-아르기닌 장기 투여로 내피의존성 혈관확장반응과 신장 NO 생산은 회복되지만 그 효과는 부분적이라고 보고되어 있다 (Hayakawa H, Hirata Y, Omata M 등 : Hypertension 1994:23:752-756). 또한 고혈압 환자에 대해 L-아르기닌 투여를 행하면 정상인끼리 혈압저하가 일어나지만, 정상인에게서 보이는 신장혈류의 증대, 여과분획의 저하, 신장혈관저항의 감약이 보이지 않고, 혈중 cGMP 는 고혈압환자에 유의하게 저하된다고 보고되어 있다 (Higashi Y. Ohshima T, Kajiyama G 등 : Hypertension 1996:25:898-902). 이들은 L-아르기닌이라는 기질의 많고 적음에 의하지 않는 신장 순환에 있어서의 NO 생산부전이 있는 것, 나아가서는 단순히 NOS 의 효소로서의 활성이 저하되고 있을 뿐이 아니라는 것을 시사하고 있다. 즉 L-아르기닌-NO 계의 순환조절에 대한 관여, 내피의존성 혈관확장반응 저하의 기서로 기질인 L-아르기닌의 이용장해 또는 부족 등으로는 설명할 수 없고, NOS 의 활성 또는 양적 변화 등에 대해 추가 검토를 요하는 상황이다.

또한 고혈압 치료의 목적은 고혈압에서 기인하는 심혈관계의 합병증을 예방하여 환자의 생명을 연장하고 또 충실한 생활을 보내게 하는 데에 있다. 이를 위해서는 생애에 걸친 장기적인 혈압의 관리가 필요하고, 감염, 비만의 시정, 운동요법 등의 일반요법의 기초상에 강압약에 의한 약물요법이 장기간 걸쳐 행해지게 된다.

현재로서는 티아자이드(thiazide)계 이뇨약, β 차단약, Ca 길항약, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 저해약, α1 차단약이 주된 강압제로 치료에 이용되고 있다. 그러나 이들 약물은 이하에 나타낸 바와 같은 바람직한 강압제로서의 조건을 모두 만족시킨다고는 할 수 없고 각각 일장일단이 있다고 생각된다.

바람직한 강압제로서의 조건이란

1. 작용이 온화하고 효과가 안정적이다.

2. 사용초기의 부작용이 적다.

3. 순환동태, 장기기능으로의 영향이 바람직한 방향으로 작용한다.

4. 장기 연용시 심혈관계에 대한 위험인자에 악영향이 없고 오히려 개선시킨다.

5. 치료에 대한 환자의 컴플라이언스를 잘 한다.

6. 여러 가지 합병증, 우발증에 따른 사용금기가 없다.

7. 치료로 더 충실한 생활을 기대할 수 있다.

구체적으로는 현재 사용되고 있는 강압제에는 이하와 같은 문제점이 있다.

티아자이드계 이뇨약으로는 염분제한을 지키기 어려운 경우나 체액이 고이는 경향이 있는 경우에는 좋은 적응이 되지만, 내당능이상, 고요산혈증, 신장기능장해, 고지혈증, 저K혈증을 보이는 환자에게 투여하는 것은 피하는 쪽이 낫다고 되어 있다.

β 차단약은 젊은이나 빈맥경향이 있는 경우에는 적당한 투여대상이 되지만, 기관지 천식이나 만성폐색성 폐질환을 수반하고 있는 환자나 말초동맥에 폐색성의 병변을 갖고 있는 환자, 레이노 증상을 갖고 있는 환자에게는 사용하는 것을 피하는 쪽이 무난하다고 생각된다. 또 인슐린 분비에도 영향을 주기 때문에 당뇨병을 합병한 고혈압 질환자에게도 사용하기 어렵다는 결점이 있다.

Ca 길항약의 부작용으로는, 디히드로피리딘 유도체에서는 혈관확장작용에 따른 안면홍조, 두통이 있으며, 강한 강압작용에 따른 저혈압, 현기증, 반사성 교감신경긴장에 따른 빈맥, 동계를 발생시킨다.

ACE 저해약의 부작용으로는, 기립성 저혈압, 마른기침, 혈관성 부종, 고K혈증 등이 있다. 주로 신장에서 배설되기 때문에 신장 기능 장해예에서는 용량과 고K혈증에 주의해야한다. 또 태아에 대한 장해가 보고되고 임산부에 대한 투여금기도 있다.

α1 차단약에서는 기립성 저혈압 등의 부작용을 초래하지 않도록 주의할 필요가 있다.

이와 같이 고혈압 치료약으로는 여러 가지 작용을 갖는 약제가 수많이 존재하지만, 부작용이나 장기연용의 안정성, 또 QOL 의 개선이라는 점에서는 아직 모두를 충분히 만족시킨 약제는 존재하지 않는다는 것이 현상이다. 덧붙여서 고혈압 치료는, 그 제 1 목표로 되어 있는 고혈압의 장기장해의 진전을 예방하여 심부전이나 신장부전, 뇌졸중 등의 발증이나 그것에 의한 사망률을 감소시키는 데에 있으며, 확실히 강압약 요법에 의해 심부전이나 뇌졸중의 사망률은 개선한 것으로 되어 있으나, 고혈압에 의한 신장 부전의 환자의 증가는 저지되어 있지 않다. 또 급성 또는 만성 사구체 신장염 등에서는 사구체 장해가 원인이 되어 고혈압이 일어나게 된다. 고혈압을 갖고 있는 만성 사구체 신장염에서는 예후가 나쁘고, 고혈압의 존재는 독립된 만성 사구체 신장염의 예후증악인자이기도 한 것이 밝혀져 있다. 그러나 만성 사구체 신장염에 따른 고혈압의 치료는 확립되어 있지 않다.

이상과 같이 매우 바람직한 조건을 갖춘 치료약이 요망되며 특히 신장 보호작용도 함께 갖춘 약제의 개발이 절실히 요망되고 있다.

또 본 발명의 치료제의 유효성분인 화학식 I 의 화합물은 공지화합물로, 악성 고페닐알라닌 혈증, 조울병, 파킨슨병, 그밖의 치료약으로서의 용도가 알려져 있다. 예컨대 일본 공개특허공보 소59-25323호, 공개특허공보 소59-76086 호, 공개특허공보 소61-277618 호, 공개특허공보 소63-267781 호를 참조.

도 1 은 대조군 (-○-), DOCA 군 (-△-) 및 BH4 를 경구 투여한 DOCA-식염 고혈압 래트 (DOCA＋BH4 군, -□-) 의 혈압의 시간경과변화를 나타낸다.

도 2 은 대조군 (-○-), DOCA 군 (-△-) 및 BH4 를 경구 투여한 DOCA-식염 고혈압 래트 (DOCA＋BH4 군, -□-) 의 오줌내 NO₂/NO₃ 의 시간경과변화를 나타낸다.

도 3 은 대조군 (-○-), DOCA 군 (-△-) 및 BH4 를 경구 투여한 DOCA-식염 고혈압 래트 (DOCA＋BH4 군, -□-) 의 오줌내 BP 의 시간경과변화를 나타낸다.

도 4 는 E-NOS mRNA 의 신장조직에서의 발현을 측정한 결과를 나타낸다.

도 5 는 대조군 (-●-), DOCA 군 (-△-) 및 BH4 를 경구 투여한 DOCA-식염 SHR (DOCA＋BH4 군, -□-) 의 혈압의 시간경과변화를 나타낸다.

도 6 은 대조군 (-●-), DOCA 군 (-△-) 및 BH4 를 경구 투여한 DOCA-식염 SHR (DOCA＋BH4 군, -□-) 의 오줌내 BP 의 시간경과변화를 나타낸다.

도 7 은 신장조직 표본내에서 보이는 병리학적 소견을 나타내며 왼쪽부터 대조군, DOCA 군 및 DOCA＋BH4 군에 대해 각각 괴사성 사구체염 및 괴사성 혈관염의 출현빈도를 나타낸다.

본 발명은 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환에 대해 내인성 NO 생산저하 억제작용 및 내피세포기능 조절작용으로 순환동태, 장기기능을 개선시키고, 모든 합병증의 진전을 억제하여 환자의 일상생활질을 높이기 위해, 부작용없이 안정적인 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은 여러 검토 결과 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환에서는 BH4 레벨도 저하시키는 것이 아닌지라는 가설을 세웠다. 그래서 DOCA-식염 고열압 래트 및 DOCA-식염 SHR 에 대한 BH4 의 투여를 시험하였다. 그 결과, 당해 DOCA-식염 고혈압 래트에서는 실제적으로 BH4 레벨이, 더 놀라울정도로 NOS 발현 레벨도 저하되어 있는 것을 알고 BH4 의 투여에 따라 내인성 NO 생산저하 억제작용에 따른 생리적으로 매우 자연스러운 우수한 혈압상승 억제효과를 얻을 수 있다는 것을 발견하였다. 또 DOCA-식염 SHR 에서도 실제적으로 BH4 레벨이 저하되어 있는 것을 알 수 있고, 또 병리조직학적으로 괴사성 사구체염 및 괴사성 혈관염을 알 수 있으며, BH4 의 투여에 따라 혈압상승 억제효과와 함께 내피세포기능 조절작용에 따른 상기 병리조직학적 소견의 현저한 개선효과를 얻을 수 있는 것을 발견하고 BH4 가 NOS 의 기능부활작용을 갖는다는 지견을 얻어 본 발명을 완성시키는 데에 이르렀다. 즉 본 발명은 BH4 류 제제에 의한 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환의 효과적인 치료에 관한 것이다.

본 발명은 화학식 I :

[화학식 I]

로 표시되는 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 하는, NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환을 예방 및/또는 치료하기 위한 약제이다.

본 명세서에서 NOS 의 기능저하란, 혈관내피, 신경계, 신장, 혈소판, 심근, 민무늬근 등 폭넓게 존재하는 NOS 가 어떤 이유로 발현이 감소하고, 또는 발현은 하더라도 이들 세포의 기능저하에 따라 NOS 활성이 발휘되지 않는 것을 의미한다. NOS 의 기능저하의 전형예는 내인성 NO 의 레벨 저하이다. NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환이란, NOS 기능저하가 원인이 되어 발병하는 질환, NOS 의 기능저하가 병상을 악화시키는 질환, NOS 의 기능저하가 치유를 지연시키는 질환 등을 포함하며, 예컨대 고혈압, 고지혈증, 동맥경화, 관혈관연축, 허혈성 심질환, 심부전, 혈전증, 폐고혈압, 뇌순환부전, 뇌혈관연축, 사구체 신장염, 만성신장부전, 당뇨병, 수술후 재협착, 아카라시아, 문맥압항진증, 간 장해, 위장점막장해, 비후성 유문협착증, 장염, 임포텐스, 망맥락막증 등에서 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 경우를 들 수 있다.

BH4 는 이들 질환을 갖고 있는 환자에게 투여되었을 때 체내에서의 NOS 의 생산을 자극하거나 또는 저하된 내피세포의 기능을 회복시킴으로써 NOS 의 기능을 정상화시켜 이들 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.

따라서, 본 발명의 치료 또는 예방대상은 BH4 에 의한 NOS 의 기능부활작용으로 처치할 수 있는 질환이다.

본 발명의 유효성분인 화학식 I 로 표시되는 화합물에는 다음것 및 이들의 약학적으로 허용되는 염이 함유된다 :

(6R)-L-에리스로-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린(BH4)

(6R,S)-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린

1',2'-디아세틸-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린

세피아프테린

6-메틸-5,6,7,8-테트라히드로프테린

6-히드록시메틸-5,6,7,8-테트라히드로프테린

6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로프테린

이상의 화합물에서 바람직한 화합물은 5,6,7,8-테트라히드로비오프테린류 또는 그 염으로, 추가로 그 중에서도 가장 바람직한 화합물은 BH4 또는 그 염이다.

본 발명에서 유효성분으로 사용되는 화학식 I 로 표시되는 화합물은 공지화합물이다. 예컨대 일본 공개특허공보 소59-25323 호, 공개특허공보 소59-76086 호, 공개특허공보 소61-277618 호, 공개특허공보 소63-267781 호 참조. 이들은 적당한 염으로 사용해도 되고, 그와 같은 염으로는 약리적으로 무독성인 산, 예컨대 염산, 인산, 황산, 붕산 등의 광산 및 아세트산, 포름산, 말레인산, 푸말산, 메실산 등의 유기산과의 염이 예시된다.

본 발명의 약제는 상기 질환에 유효하다. 예컨대 고혈압에 있어서는 본태성 고혈압뿐 아니라 과격한 경과로 신장, 망막 등의 소동맥벽의 괴사를 초래시키는 악성 고혈압이나 신장 장해를 수반하는 신장성 고혈압도 대상이 된다. 구체적으로는 본태성 고혈압, 신장성 고혈압, 신장혈관성 고혈압, 임신 고혈압, 노년성 고혈압, 부신장성 고혈압 모두에 유효하다.

본 발명의 치유제는 화학식 I 로 표시되는 화합물을 일반적인 의약제제에 사용되는 담체와 통상방법에 따라 경구, 직장 또는 비경장 (정맥내, 골수액내로의 투여를 포함함) 투여에 의한 제제형태로 함으로써 제조된다.

이들 의약제제에 사용되는 담체로는 사용되는 제형에 의하지만, 일반적으로 부형제, 결합제, 붕해제 등을 들 수 있다.

부형제의 대표적인 예로는 전분, 유당, 백당, 포도당, 만니톨, 셀룰로오스 등이 있으며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈, 전분, 백당, 히드록시프로필셀룰로오스, 아라비아고무 등이 있다. 또 붕해제의 예로는 전분, 한천, 젤라틴 가루, 셀룰로오스, CMC 등이 있으나, 일반적으로 사용되고 있는 부형제, 결합제, 붕해제이어도 된다.

본 발명의 치유제는 바람직하게는 상기 담체 이외에 유효성분을 안정화시키기 위한 산화방지제를 함유한다. 산화방지제는 의학제제에 일반적으로 사용되고 있는 것에서 적절하게 선택되고 예컨대 아스코르빈산, N-아세틸시스테인, L-시스테인, dl-α-토코페롤, 천연 토코페롤 등을 들 수 있다. 사용하는 양은 활성성분 (1종 또는 그 이상) 을 안정화시키는 양이면 되지만, 일반적으로는 활성성분 1 에 대해 중량으로 0.2 내지 2.0 이 바람직하다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 각각 소정량의 활성성분 (1 종 또는 그 이상) 을 함유하는 정제, 설하정 (舌下錠), 캡슐제, 분말, 산제, 과립제 또는 세립제로 또는 시럽, 에멀젼 또는 돈복제 (頓服劑) 와 같은 비수성액중의 현탁액으로 제공할 수 있다.

예컨대 과립제는 활성성분 (1 종 또는 그 이상) 과 1 종 또는 그 이상의 상기 담체, 산화방지제 등의 보조성분을 균일하게 혼합해서 조립 (造粒) 하고 체를 사용하여 메쉬를 정돈함으로써 제공된다. 정제는 활성성분 (1 종 또는 그 이상) 을 경우에 따라 1 종 또는 그 이상의 보조성분과 함께 압축 또는 성형으로 제조할 수 있다. 캡슐제는 활성성분 (1 종 또는 그 이상) 을 경우에 따라 1 종 또는 그 이상의 보조성분과 균일하게 혼합한 분말 또는 과립을 적당한 캡슐에 충전기 등을 사용하여 충전하여 제조한다. 직장 투여용 제제는 카카오 오일 등의 관용 담체를 사용하고 좌약으로 제공할 수 있다. 비경장 투여용 제제는 살균질소 정화용기 내에 활성성분 (1 종 또는 그 이상) 을 건조 고체로 밀봉하여 제공할 수 있다. 이 건조 고체제제는 비경장 투여시에 소정량의 무균수에 분산 또는 용해시켜 환자에게 투여할 수 있다.

이들 제제의 제조에서는 유효성분 및 통상적인 담체 이외에 상기 산화방지제를 첨가시켜 제제하는 것이 바람직하고, 또 원하는 바에 따라 완충제, 풍미부여제, 표면활성제, 증점제, 윤활제, 활택제 등에서 선택된 1 종 또는 그 이상의 보조성분을 추가로 함유해도 된다.

활성성분, 즉 화학식 I 로 표시되는 화합물의 투여량은 투여경로, 처치된 병상 및 처치를 받는 환자에 따라 바뀌는 것은 물론이지만, 최종적으로 의사의 진단에 맡겨진다.

예컨대 고혈압을 처치하는 데에 적당한 투여량은 0.1 ～ 50 ㎎/㎏ (체중)/일의 범위에 있고 대표적인 적합한 투여량은 0.5 ～ 10 ㎎/㎏ (체중)/일이다.

원하는 투여량은 상기 활성성분을 1일 1회 투여해도 되지만, 하루내에 적당한 간격으로 2 ～ 4 회 분할 투여해도 된다.

활성성분은 단독으로 그대로 다른 성분과 혼합하지 않고 투여할 수도 있으나, 투여량의 조절을 용이하게 하기 위한 이유 등에서 적용 환자에 따른 다른 활성성분을 의약제제로 투여할 수도 있다.

또 본 발명의 제제는 유효성분으로 화학식 I 로 표시되는 화합물과 함께 NOS 의 기질 또는 보효소 또는 보 (補) 인자의, 예컨대 L-아르기닌, 플라빈류 (예컨대, FAD, FMN 등) 및 칼슘으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 보조적 유효성분으로 함유해도 된다. 이들 유효성분의 혼합에 따라 화학식 I 로 표시되는 화합물의 단독 사용에 비해 한층 우수한 치유효과를 기대할 수 있다. 본 발명 제제중의 상기 각 성분의 비율은 특히 한정되어 있지 않지만, 예컨대 중량으로 화학식 I 로 표시되는 화합물의 1 에 대해 L-아르기닌, 플라빈류 및 칼슘으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 0.1 ～ 10 의 범위, 바람직하게는 0.5 ～ 2 의 범위로 할 수 있다.

이 혼합제제로 예컨대 고혈압을 치료할 때의 적당한 투여량은, 유효성분의 합계량으로 0.1 ～ 50 ㎎/㎏ (체중)/일의 범위에 있고, 바람직하게는 0.5 ～ 10 ㎎/㎏ (체중)/일이다.

치료시에 화학식 I 로 표시되는 화합물을 단독으로 유효성분으로 함유한 제제 및 다른 유효성분과 함께 함유한 제제의 선택은 연령, 증상 등에 따라 의사에 의해 적절하게 선택된다.

본 발명에 사용되는 활성성분은 (6R)-L-에리스로-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린(BH4) 및 그 염이 가장 바람직하지만, (6R,S)-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린, 1',2'-디아세틸-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린, 세피아프테린, 6-메틸-5,6,7,8-테트라히드로프테린, 6-히드록시메틸-5,6,7,8-테트라히드로프테린 또는 6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로프테린 및 이들 염 등의 유사화합물이어도 된다. 그러나 생체내에 존재하는 천연체인 BH4 가 바람직하다고는 말할 필요없다. 이 BH4·2 염산염의 래트에 대한 급성독성은 경구투여로 2 g/㎏ (체중) 이상이고, 거의 독성은 발견되지 않는다. 또 광학활성체가 아닌 (6R,S)-5,6,7,8-테트라히드로비오프테린도, 일본 공개특허공보 소59-25323 호의 파킨슨병의 치료에서도 알 수 있듯이 독성이 약해서 본 발명의 치료에 사용되는 것이 가능하다. 이들 이외의 화학식 I 에 속하는 화합물도 급성독성은 거의 발견되지 않는다.

이하의 실시예에 따라 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되어 있는 것은 아니다.

실시예 1 (과립제, 세립제)

폴리비닐피롤리돈 (콜리돈 30) 1부 (중량부) 를 멸균 정제수에 용해시키고 이것에 아스코르빈산 10부 및 L-시스테인·염산염 5부를 첨가시켜 균일한 용액으로 한 후 BH4·2 염산염 10부를 첨가시켜 균일하게 하였다.

이 용액을 부형제 (만니톨 또는 유당) 59부 및 붕해제 [콘스타치 또는 히드록시프로필셀룰로오스 (LH-22)] 15부에 첨가시켜 반죽, 조립, 건조시킨 후 체로 분별하였다.

실시예 2 (정제)

실시예 1 에서 제조한 활성성분의 균일용액에 유당 58부, 미결정 셀룰로오스 15부를 혼합한 후 추가로 스테아르산 마그네슘 1부를 첨가시켜 혼합 타정 (打錠) 하였다.

실시예 3 (캡슐제)

실시예 1 에서 제조한 제형의 것을 캡슐에 충전하였다. 단, 윤활제로 스테아르산 마그네슘을 0.2％ 첨가시켜 제제한 것을 사용하였다.

실시예 4 (주사용제)

BH4·2 염산염 1.5g

아스코르빈산 1.5g

L-시스테인·염산염 0.5g

만니톨 6.5g

상기 성분을 멸균 정제수에 용해시키고 100㎖ 로 하여 제균한 것을 1㎖ 또는 2㎖ 씩 바이얼 (vial) 또는 앰플 (ampule) 로 동결건조 밀봉하였다.

실시예 5 (주사용제)

BH4·2 염산염 2.0g 을 무산소에서 멸균 정제수에 용해시키고 100㎖ 로 한 용액을 제균하고 실시예 4 와 동일하게 밀봉하였다.

실시예 6 (좌약용제)

BH4·2 염산염 150 부

아스코르빈산 150 부

L-시스테인·염산염 50 부

상기 성분을 사용하여 균일한 분말로 한 것을 카카오 오일 9950부에 분산시켰다.

실시예 7 (과립제)

BH4·2 염산염 5 부

아스코르빈산 5 부

L-시스테인·염산염 2 부

상기 성분을 사용하여 균일한 용액으로 하였다.

한편, 만니톨 55 부, 폴리비닐피롤리돈 1 부, 히드록시프로필셀룰로오스 14부 및 L-아르기닌 또는 칼슘 5부를 균일하게 혼합한 것에 상기 용액을 첨가시키고 반죽, 조립, 건조시킨 후 체로 분별하였다.

실시예 8 (과립제)

BH4·2 염산염 5 부

아스코르빈산 5 부

L-시스테인·염산염 5 부

만니톨 52 부

폴리비닐피롤리돈 (콜리돈 30) 1 부

히드록시프로필셀룰로오스 (LH-22) 12 부

L-아르기닌 또는 칼슘 10 부

상기 성분을 사용하여 실시예 7 과 동일하게 조립하고 체로 분별하였다.

실시예 9 (과립제)

BH4·2 염산염 5 부

아스코르빈산 5 부

L-시스테인·염산염 2 부

상기 성분을 사용하여 균일한 용액으로 하였다.

한편, L-아르기닌 또는 칼슘 10부, 만니톨 50부, 폴리비닐피롤리돈 (콜리돈 30) 1부 및 히드록시프로필셀룰로오스 (LH-22) 9부를 균일하게 혼합한 것에 상기 용액을 반죽, 조립, 건조시킨 후 체로 분별하였다.

실시예 10

DOCA-식염 고혈압 래트의 작성

8 주된 Sprague-Dawley 래트 (Charles River 에서 입수) 에 한쪽 신장 (대조군을 제외함) 을 적출하였다. 그 후 이하의 세가지 실험군으로 나눠 비교검토하였다.

1) 음료수만 준 군 (대조군) 피험수 n＝3

2) 한쪽 신장을 적출한 일주일후부터 데옥시코르티코스테론 아세트산염 (deoxycorticosterone acetate : DOCA) 30 ㎎/㎏ 체중을 주 1 회 피하투여하고 1％ 식염수를 투여하면서 DOCA-식염 고혈압 래트를 제조한 군 (DOCA 군) n＝6

3) DOCA-식염 고혈압 래트에 BH4 (10 ㎎/㎏ 체중/일) 를 경구 투여한 군 (DOCA＋BH4 군) n＝5

각군을 실험완료 5주째까지 관찰하였다. 실험개시시, 2 주간후, 4 주간후, 5 주간후 (관찰완료시) 에 대사 케이지로 24 시간 오줌을 채취하였다. 관찰완료시 페노바르비탈 마취하에서 복부 대동맥에서 채혈, 그 후 신장을 생리 식염수로 관류후 적출하고 조직학적 및 면역조성학적 검토를 행하였다.

혈압측정

혈압은 tail-cuff 법에 의해 실험개시시, 2 주간후, 4 주간후, 5 주간후에 측정하였다.

오줌내 NO ₂ /NO ₃ 의 측정

Griess 법에 의거하여 Cyman Chemical Company 사의 Nitrate-Nitrite assay kit, kit No.780001 을 사용하여 측정하였다. 오줌내 NO₂/NO₃ 의 값이 클수록 NOS 의 활성이 높은 것을 의미한다.

오줌내 BP 측정

Fukushima and Nixon 의 방법 (Anal. Biochem. 102;176-188, 1980) 에 의거하여 HPLC 분석을 행하여 BH4 의 대사물인 비오프테린 (BP) 을 측정하였다. 오줌내 BP 값의 추이에 따라 BH4 투여의 영향을 고찰한다.

신장 조직 NOS 면역염색

적출한 신장 조직을 동결, 그 얇게 자른 조각 위에서, 신장 조직의 내피형 NOS (E-NOS) 및 뇌형 NOS (B-NOS) 의 발현을 각각에 특이적인 항체, 항 E-NOS 항체 및 항 B-NOS 항체 (Affinity Bioreagents 사에서 입수) 를 사용한 면역염색으로 검토하였다.

NOS mRNA 발현측정

a) 신장 조직으로부터의 전체 RNA 의 추출

신장 조직으로부터의 RNA 추출은 구아니듐·염화세슘 추출법으로 행하였다.

상세하게는 먼저 적출한 신장의 피질부분에서 소량의 조직을 채취하여 바로 융해용액 4M 구아니디늄티오시아네이트 (Guanidinium thiocyanate) 에 첨가시키고 유리/테플론호모지나이저로 파괴하였다. 이 세포융해용액을 5.7M 염화세슘 위에 중층하고 80,000 rpm 으로 2시간 원심한 후 그 후 침전물을 0.1％ 디에틸피로카보네이트 (DEP) 용액으로 용해시켰다. 여기에 2.5M 아세트산 암모늄과 에탄올을 첨가시키고 -20℃ 에서 1시간 침전시키고 이것을 10,000 rpm 으로 4℃, 20분간 원심하고 침전을 얻었다. 침전을 약 1 ㎍/㎕ 의 농도에 0.1％ DEP 용액으로 용해시키고 사용할 때까지 -20℃ 에서 유지하였다.

b) 역전사 효소 (RT) 반응

전체 RNA 에서 MoMLV 역전사 효소를 사용하여 cDNA 를 합성하였다.

상세하게는 전체 RNA, 프라이머, 버퍼, H2O 를 혼합한 시료를 95℃ 에서 2분간 가열한 후 빙냉하였다. 이어서 37℃ 에서 30분간 보온하고 프라이머를 RNA 로 가열 냉각하였다. 여기에 0.2M 디티오슬레이톨 (DTT), 5mM 데옥시리보누클레오티드 (dNTP) 혼합액, RNasin, MoMLV 역전사 효소를 첨가시키고 90℃ 에서 5분간 가열한 후 빙냉하고 반응을 정지시켰다.

c) PCR

RT 으로 수득된 cDNA 를 주형으로 PCR 를 행하였다. 상세하게는 검출목적인 E-NOS 및 내부 대조로 사용되는 말산 데히드로게나아제 (MDH) 에 대한 각각의 5‘측 프라이머, 3’측 프라이머, PCR 버퍼, 2.5mMdNTP 혼합액, TaqDNA 폴리멜라아제를 혼합하고 RT 반응액을 첨가하였다. 미네랄오일을 중층하고 원심후 자동 PCR 장치로 반응을 개시하였다. 1 사이클을 94℃ 30초, 50℃ 30초, 72℃ 30초로 하고 이것을 30 사이클 반복하여 PCR 산물을 수득하였다. 또한 E-NOS 검출 및 MDH 검출용에 사용된 프라이머는 Ujiie.K 등, Am.J.Physiol, 267(Renal Fluid Electrolyte Physiol.36) : F296-F302. 1994 에 따랐다. 구체적으로는 E-NOS 검출에 사용된 프라이머의 염기서열은 5‘측 프라이머 : TACGGAGCAGCAAATCCAC (서열번호 1), 3’측 프라이머 : CAGGCTGCAGTCCTTTGATC (서열번호 2) 이다. MDH 검출용에 사용된 프라이머의 염기서열은 5‘측 프라이머 : CAAGAAGCATGGCGTATACAACCC (서열번호3), 3’측 프라이머 : TTTCAGCTCAGGGATGGCCTCG (서열번호 4) 이다.

d) 폴리아크릴아미드겔 전기영동 및 서던 혼성화(hybridization)에 의한 NOS mRNA 발현의 측정

PCR 산물을 5％ 폴리아크릴아미드겔로 전기영동하고 서던 혼성화에 의한 NOS mRNA 발현의 측정을 행하였다.

상세하게는 먼저 PCR 반응액을 5％ 폴리아크릴아미드로 전기영동하고 영동 완료후 겔을 박막필터에 전사하였다. E-NOS 검출 및 MDH 검출을 위해, γ32P-ATP 로 5‘말단을 라벨한 프로브를 사용하여 박막필터 위에서 혼성화를 행하였다 (Ujiie.K. 등, 1994, 상술). E-NOS 검출용 프로브의 염기서열은 CTGGAACAATTTCCATCCG (서열번호 5) 이며, MDH 검출용 프로브의 염기서열은 TTTGTCTTCTCCCTGGTGGA (서열번호 6) 였다. 그 후 -70℃ 에서 수시간 자동 방사선 사진법(autoradiography)을 행하여 감광된 자동 방사선 사진법은 덴시토미터 (densitometer) 를 사용하여 해석을 행하였다. 결과를 표 4 에 나타낸다.

자동 방사선 사진법의 결과에 의거하여 E-NOSPCR 산물량을 하우스키핑 유전자인 MDHPCR 산물량으로 표준화하고 E-NOS 유전자 발현을 반정량화하였다.

통계

측정치는 평균±표준오차로 나타내고 군 사이의 통계는 two-wayANOVA 로 행하였다. 이하 p＜0.05 를 유의 수준으로 하였다.

혈압의 추이를 이하의 표 1 및 도 1 에 나타낸다. DOCA 군은 관찰 4주째에 고혈압을 보였다. DOCA 군의 혈압상승은 다른 2군에 비해 유의하였다. 이것에 대해 DOCA＋BH4 군에서는 관찰완료시까지 대조군과 마찬가지로 정상혈압에 머물었다.

혈압 (㎜Hg)

	개시시	2주	4주	5주
대조군	101.38(±7.12)	102.85(±11.07)	91.77(±7.88)	111.70(±10.10)
DOCA군	107.03(±2.04)	137.53(±4.63)	153.53(±7.71)	150.68(±3.35)
DOCA+BH4군	105.72(±5.63)	120.54(±6.57)	111.91(±7.52)	107.78(±7.93)

오줌내 NO₂/NO₃ 의 추이를 표 2 및 도 2 에 나타낸다. DOCA 군에서는 오줌내 NO₂/NO₃ 가 시간경과에 따라 감소하고 관찰완료시에는 측정감도 이하가 되었다. 이것에 대해 DOCA＋BH4 군에서는 증가하였다. DOCA 군에서의 감소는 다른 2군에 비해 유의하고, 대조군과 DOCA＋BH4 군에서는 유의한 차이는 보이지 않았다.

오줌내 NO₂/NO₃ (mmol/day)

	개시시	2주	4주	5주
대조군	2.91±0.09		1.51±0.79	4.54±0.32
DOCA군	3.11±1.09		0.34±0.34	측정감도이하
DOCA+BH4군	2.22±0.70		2.00±0.55	5.95±1.90

오줌내 BP 의 추이를 표 3 및 도 3 에 나타낸다. DOCA 군에서는 BP 가 시간경과에 따라 감소하였다. 이것에 대해 DOCA＋BH4 군에서는 BP 가 시간경과에 따라 증가하였다. DOCA 군에서의 감소는 다른 2군에 비해 유의하고 대조군과 DOCA＋BH4 군 사이에서는 유의한 차이는 보이지 않았다.

오줌내 BP (nmol/day)

	개시시	2주	4주	5주
대조군	26.76±3.01	21.71±0.61	27.79±2.03	34.96±0.96
DOCA군	23.77±0.77	19.49±2.52	15.93±3.46	19.25±1.96
DOCA+BH4군	21.87±0.60	35.58±3.74	52.60±13.13	34.26±4.08

체중은 표 4 에 나타낸 바와 같이 어떤 군에서도 시간경과에 따라 증가하고 3군 사이에서 유의한 차이를 보이지 않았다.

체중 (g)

	개시시	2주	4주	5주
대조군	390.67±18.49	433.33±21.49	456.00±21.63	458.00±20.43
DOCA군	376.00±3.69	399.67±19.44	430.33±20.08	435.67±23.34
DOCA+BH4군	383.40±10.83	386.40±12.84	431.20±13.31	446.80±15.81

면역염색의 결과, DOCA 군에서는 소혈관에서의 E-NOS, 머큘러·덴서 (macula densa) 에서의 B-NOS 의 발현 모두 감소하고 DOCA ＋ BH4 군에서는 이들 발현은 대조군과 동일하거나 약간 증강되게 관찰되었다.

(NOS mRNA 발현 측정결과)

측정 결과, 도 4 에 나타낸 바와 같이 DOCA＋BH4 군에서는 DOCA 군에 비해 E-NOS 의 mRNA 발현이 유의하게 증가되었다.

이상 DOCA-식염 고혈압 래트에서는 혈압상승과 오줌내 NO₂/NO₃ 의 감소, 신장조직 NOS 발현의 감소가 보이고 혈관 내피세포의 기능장해가 보였다. 그리고 당해 모델 래트에서는 오줌내 BP 가 감소하고 있는 것이 밝혀졌다. 한편, 경구투여한 BH4 에 의해 혈압상승이 억제되고 오줌내 NO₂/NO₃ 의 증가와 신장조직 NOS 의 발현 증가가 보였기 때문에 BH4 가 NOS 의 기능을 부활 (NOS 양 / NOS 활성의 제어) 시킴으로써 내인성 NO 생산저하에 따른 질환의 치료에 유용한 것을 알 수 있었다.

실시예 11

DOCA-식염 SHR 의 제조

8 주된 SHR (Charles River 에서 입수) 에 한쪽 신장 (대조군을 제외함) 을 적출하였다. 그 후 이하의 세 가지 실험군으로 나누어 비교검토하였다.

1) 음료수만 준 군 (대조군) 피험수 n＝8

2) 한쪽 신장을 적출한 일주일 후부터 데옥시코르티코스테론 아세트산염 (deoxycorticosterone acetate : DOCA) 30 ㎎/㎏ 체중을 주 1 회 피하투여하고 1％ 식염수를 투여하면서 DOCA-식염 SHR 을 제조한 군 (DOCA 군) n＝4

3) DOCA-식염 SHR 에 BH4 (10 ㎎/㎏ 체중/일) 를 경구 투여한 군 (DOCA＋BH4 군) n＝6

각 군을 실험완료 6주째까지 관찰하였다. 실험개시시, 2 주간후, 3 주간후, 4 주간후, 5 주간후, 6 주간후 (관찰완료시) 에 대사 케이지로 24 시간 오줌을 채취하였다. 관찰완료시에 페노바르비탈 마취하에서 복부 대동맥에서 채혈, 그 후 신장을 생리 식염수로 관류후 적출하고 조직학적 검토를 행하였다.

혈압측정

혈압은 tail-cuff 법에 의해 실험개시시, 2 주간후, 3 주간후, 4 주간후, 5 주간후, 6 주간후에 측정하였다.

오줌내 BP 측정

Fukushima and Nixon 의 방법에 의거하여 HPLC 분석을 행하여 BH4 의 대사물인 비오프테린 (BP) 을 측정하였다. 오줌내 BP 의 값의 추이에 따라 BH4 투여의 영향을 고찰한다.

병리조직학적 소견

6주후의 채뇨, 혈압측정을 종료한 후, 마취하에서 배를 열어 복부 대동맥으로부터 탈혈하고, 같은 부위에서 생리식염수를 주입, 관류를 행하였다. 적출된 신장을 10 ％ 포름알데히드 용액 중에 고정하고 파라핀을 묻은 후, 미크로톰으로 4 ㎛ 로 얇게 잘라 신장 조직 표본을 제조하였다. 헤마톡시린·에오딘 (HE) 염색 및 periodic acid-Shiff 염색을 하였다. 래트 신장 조직 표본 내에서 보이는 병리학적 소견, 즉 괴사성 사구체염, 및 괴사성 세동맥염의 출현 빈도를 비교검토하였다.

통계

측정치는 평균±표준오차로 나타내고 군 사이의 통계는 two-way ANOVA 에 의해 행하였다. 이하 p＜0.05 를 유의 수준으로 하였다.

혈압의 추이를 이하의 표 5 및 도 5 에 나타낸다. DOCA 군은 관찰 3주째에 현저한 고혈압을 보였다. DOCA 군의 혈압상승은 다른 2군에 비해 유의하였다. 이것에 대해 DOCA＋BH4 군에서는 관찰완료시까지 대조군과 동일한 레벨에 머물었다.

혈압 (㎜Hg)

	개시시	2주	3주	4주	5주	6주
대조군	129.44(±2.20)	119.44(±2.97)	143.83(±0.62)	151.20(±0.90)	158.01(±1.63)	161.91(±4.20)
DOCA군	132.00(±5.18)	132.88(±3.88)	162.28(±1.87)	169.83(±2.57)	182.98(±2.04)	178.10(±9.85)
DOCA+BH4군	130.22(±3.75)	133.60(±2.05)	143.63(±0.85)	150.90(±0.94)	159.30(±2.84)	162.95(±1.52)

오줌내 BP 의 추이를 표 6 및 도 6 에 나타낸다. DOCA 군에서는 오줌내 BP 가 시간경과에 따라 감소하였다. 이것에 대해 DOCA＋BH4 군에서는 BH4 가 시간경과에 따라 증가하였다. DOCA 군에서의 감소는 다른 2군에 비해 유의하고, 대조군과 DOCA＋BH4 군 사이에서는 유의한 차이는 보이지 않았다.

오줌내 BP4 (nmol/day)

	개시시	4주	6주
대조군	22.29±1.53	25.13±1.23	43.07±7.24
DOCA군	17.87±1.65	3.18±2.14	16.33±5.77
DOCA+BH4군	24.26±1.58	45.21±10.31	71.78±32.08

신장 조직 표본 내에서 보이는 병리조직학적 소견의 출현빈도를 표 7 및 도 7 에 나타낸다. DOCA 군에서는 괴사성 사구체염의 출현률과 괴사성 혈관염의 출현률이 다른 2 군에 비해 유의하게 높게 나타났다.

신장조직의 병리 소견 출현 빈도 백분률 (％)

	괴사성 사구체염	괴사성 혈관염
대조군	0.06±0.06	0.00±0.00
DOCA군	10.78±0.77	9.03±1.65
DOCA+BH4군	2.47±1.07	3.34±0.94

이상 DOCA-식염 SHR 에서는 혈압상승과 괴사성 사구체염과 괴사성 혈관염 등의 병리조직학적 소견이 보였다. 또 당해 모델 래트에서는 오줌내 BP 가 감소하고 있는 것이 밝혀졌다. 한편, 경구 투여한 BH4 에 의해 혈압상승이 억제되고 병리조직학적 소견의 현저한 개선이 보였기 때문에 BH4 이 NOS 의 기능을 부활시킴으로써 내피 세포기능의 저하에 따른 질환의 치료에 유용하다는 것을 알 수 있었다.

서열표

서열번호 : 1

서열 길이 : 19 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : TACGGAGCAG CAAATCCAC 19

서열번호 : 2

서열 길이 : 20 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : CAGGCTGCAG TCCTTTGATC 20

서열번호 : 3

서열 길이 : 24 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : CAAGAAGCAT GGCGTATACA ACCC 24

서열번호 : 4

서열 길이 : 22 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : TTTCAGCTCA GGGATGGCCT CG 22

서열번호 : 5

서열 길이 : 19 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : CTGGAACAAT TTCCATCCG 19

서열번호 : 6

서열 길이 : 20 염기쌍

서열 모양 : 핵산

사슬의 수 : 한 사슬

토폴로지 : 직쇄형

서열 종류 : 다른 핵산 합성 DNA

서열 : TTTGTCTTCT CCCTGGTGGA 20

이상 설명한 바와 같이 본 발명은 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환을 유효하게 예방 및/또는 개선하는 치료제를 제공하는 것이다. 또 본 발명의 치료제의 유효성분은 생체내에 원래 존재하는 특질이기 때문에 장기간 사용해도 부작용 등의 우려가 없다.

Claims

하기 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 하는 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료제로서,

상기 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환이 고혈압, 고지혈증, 동맥경화, 관혈관연축, 허혈성 심질환, 심부전, 혈전증, 폐고혈압, 뇌순환부전, 뇌혈관연축, 사구체 신장염, 만성신장부전, 당뇨병, 수술후 재협착, 아카라시아, 문맥압항진증, 간 장해, 위장점막장해, 비후성 유문협착증, 장염, 임포텐스 또는 망맥락막증인, 상기 예방 또는 치료제:

[화학식 I]

[식 중, R¹ 및 R² 는 각각 수소원자를 나타내거나 또는 함께 하나의 단일 결합을 나타내며, R¹ 및 R² 가 수소원자를 나타내는 경우에는 R³ 는 -CH(0H)CH(OH)CH₃, -CH(OCOCH₃)CH(OCOCH₃)CH₃, -CH₃, -CH₂OH 또는 페닐기를 나타내고, R¹ 및 R² 가 함께 하나의 단일 결합을 나타내는 경우에는 R³ 는 -C0CH(OH)CH₃ 를 나타냄].
제 1 항에 있어서, 상기 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환이 내인성 NO 생산저하를 수반하는 것인 예방 또는 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환이 내피 세포기능저하를 수반하는 것인 예방 또는 치료제.
제 1 항에 있어서, 상기 NOS 의 기능저하에 의해 유발되는 질환이 NOS 발현의 감소가 관여하는 것인 예방 또는 치료제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, R³ 가 L-에리스로-CH(OH)CH(OH)CH₃ 인 예방 또는 치료제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 고혈압의 예방 또는 치료제인 예방 또는 치료제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 신장 장해의 예방 또는 치료제인 예방 또는 치료제.
제 5 항에 있어서, 고혈압의 예방 또는 치료제인 예방 또는 치료제.
제 5 항에 있어서, 신장 장해의 예방 또는 치료제인 예방 또는 치료제.