KR100593286B1 - 신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 바이러스 항체 진단키트 - Google Patents

신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 바이러스 항체 진단키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신속 면역크로마토그라피법의 원리를 이용하여 개 디스템퍼 바이러스 항체를 정량적으로 검출할 수 있는 항체 진단키트에 관한 발명으로서, 더욱 상세하게는 개 디스템퍼 바이러스에 대한 특이적인 단클론 항체가 결합된 금 접합체와 개 디스템퍼 바이러스를 사용하여 신속 면역크로마토그라피법 원리로 진단키트를 제조하고, 검사 재료인 개의 혈액에서 개 디스템퍼 바이러스 항체 역가를 신속하게 측정하는 진단키트에 관한 발명이다.
이를 위하여 본 발명은, 개 디스템퍼 바이러스 정제와 단클론항체를 제조하는 공정, 나이트로셀룰로오스 멤브레인에 산양 항 개 IgG 항체를 흡착하는 공정, 단클론항체와 금 접합체를 결합시키고 골드 패드에 건조시키는 공정, 정제된 개 디스템퍼 바이러스를 검체 패드에 건조시키는 공정, 결합물들이 흡습되는 흡습 패드를 건조시키는 공정, 상기 공정 후 검사용 디바이스에 조립하는 공정로 이루어진 것에 특징이 있다.
개 디스템퍼 바이러스, 신속 면역크로마토그라피법, 항체 진단키트

Description

신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 바이러스 항체 진단키트{Kit for detecting canine distemper virus antibody using immunochromatography}
도 1은 본 발명에 따르는 진단키트를 촬영한 사진 단면도
도 2는 본 발명에 사용되는 진단키트의 구조도
도 3은 본 발명에 이용된 개 디스템퍼 바이러스 단클론 항체 western blot 사진
도 4는 본 발명에 따르는 진단키트의 검체 적용후의 반응 결과 예
〈도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명〉
1 : 검체패드 2 : 골드패드
3 : 대조선 1 4 : 검사선
5 : 대조선 2 6 : 흡습패드
7 : 디바이스
개 디스템퍼는 대표적인 개의 바이러스성 질환으로써 기원전 400년부터 알려 져 있었으나 그 원인체를 명백히 규명을 못하고 세균을 본 병의 원인체라고 여겨오다가 1905년 P. Plailaw 가 바이러스 분리에성공하고 1926년에 Dunkin 과 Laidlow가 본 바이러스의 성상에 관한 보고를 함으로써 병원체가 바이러스라는 것이 확정되었다. 디스템퍼 바이러스는 파라믹소바이러스과(Paramyxovirdae)의 모르비리바이러스속(morbilli- virus)에 속하며 바이러스입자는 RNA로 구성된 핵산으로서 직경 15 ～ 18mm 크기에 L, H, P, NP, F, M등의 단백질로 구성되어 있으며 이바이러스는 환축의 혈액, 뇌척수액, 림파절, 비장, 폐, 기관지, 뇌 등에 다량 함유하고 있으며 급성인 경우 비말, 안구 분비물, 타액, 뇨 등으로 배출되어 기도 감염및 접촉 감염으로 전파되고 있다.
감염 될 경우에는 본 병의 특이 치료법으로서 면역 혈청이나 감마글로블린의 혈청 요법이 응용되고 있다. 감염 초기에는 혈청 제제을 대량으로 사용하면 효과을 기대할 수 있지만 만족할 만한 기대는 못된다. 또한 증상이 다양하여 본 병의 조기 진단이 어렵기 때문에 치료보다는 예방을 우선이다.
본 병의 증상은 다양하기 때문에 임상적으로 진단으로 확진하기 어려우며 폐사체에 대해서는 육안적인 병변이 보이지 않기 때문에 확실한 진단은 실험실 검사에 의존한다.
항원검출법으로는 직접 바이러스를 검출하는 하는 방법과 도말표본에서의 봉입체 검출법 등이 있으며 최근에는 신속진단 항원검출 키트가 사용화되어 있다.
그러나, 항체역가 측정은 혈청중화시험 및 효소면역측정법이 있으나 혈청중화시험의 경우 세포를 이용할수 있는 실험실이 필요하며 시간도 5일 이상 소요되는 단점이 있다. 또한 효소면역측정법은 여러단계의 실험과정과 특별한 장비가 요구되기 때문에 동물병원에서 직접 바로 확인할 수는 없는 단점이 있다.
개 디스템퍼 바이러스의 예방을 위하여 일반적으로 개 디스템퍼 바이러스 백신을 6주령부터 3～4회 접종하게 된다. 그러나 백신 접종은 모체이행항체의 역가수준에 따라 백신의 효과가 0%에서 100%까지 다양하게 나타남으로, 백신 접종시기에 모체이행항체가가 혈청중화항체 역가로 1:80이하를 보일 때 백신을 접종하는 것이 가장 좋은 백신효과를 보일 수 있다.
개 디스템퍼 바이러스 감염의 진단으로는 가검 시료에 대한 디스템퍼 항원 신속진단법과 혈청중화항체 역가를 측정함으로써 가능하며, 확진을 위해서는 간접 형광 항체법과 바이러스의 분리, 전자 현미경적 관찰, 그리고 혈청 전환의 확인으로 가능하다.
최근에는 면역크로마토그라피법을 이용한 개 디스템퍼 바이러스 항원 검출법과 항체 측정을 위한 효소면역측정법이 개발되어 주로 동물 병원에서 개 디스템퍼 바이러스 감염 혹은 백신 접종전후의 항체가 검사를 위해 널리 이용되고 있다.
혈청학적 진단법으로는 현재까지 효소면역측정법, 혈청중화항체 반응법이 있다. 그러나 이러한 방법들은 특정장비가 필요함으로서 일반 동물병원 현장에서는 시행하기 힘든 시험법일 뿐만 아니라 검사 소요시간도 최소 4～5시간에서 7일까지 소요되는 불편한 점이 있다. 이러한 단점들은 동물병원에 내원한 개에 대한 즉각적인 검사결과가 나오지 않음으로서, 축주가 다시 내원해야 하는 문제점들을 가지고 있다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해소하기 위해 정제된 개 디스템퍼 바이러스 항원과 산양 항 개 IgG 항체를 이용하여 항체-항체-항원 indirect sandwich 방법을 이용하여 면역크로마토그라피 원리에 의해 혈액 중의 개 디스템퍼 바이러스 항체를 검출할 수 있도록 고안된 진단키트를 개발하여, 검사후 20분내에 검사선의 발색 정도로 개 디스템퍼 바이러스 항체의 존재 유무 및 항체 역가의 정도를 신속하고 손쉽게 판정 할 수 있도록 하였다.
본 발명품의 반응 원리는 아래와 같다.
개 디스템퍼 바이러스 항체가 함유된 검액(혈액 1㎕와 희석액 210㎕)을 검체 적용홀에 넣으면 검액 중의 개 디스템퍼 바이러스 항체가 검체 패드의 개 디스템퍼 바이러스 항원과 결합하고, 곧이어 금 입자가 부착된 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체와 반응하여 복합체를 형성한다. 결합물은 모세관 현상에 의해서 멤브레인 위를 이동하며 다시 멤브레인 위에 흡착된 산양 항 개 IgG항체와 반응하여 indirect sandwich 원리에 의해 항원-항체-멤브레인 항체의 복합체를 형성하며 이러한 경우 금입자의 색상에 의해 해당 위치에 보라색 밴드 (검사선/T) 가 형성된다. 검사선에서 반응하지 않은 돼지 IgG 금 입자는 발색 정도관리를 위해 산양 항 돼지 IgG 항체가 흡착된 대조선 위치 (대조선 1/C1 및 대조선 2/C2)에서 반응하여 서로 다른 발색정도의 보라색 밴드를 나타낸다.
즉, 검사하고자 하는 검액을 타원형의 검체 적용홀에 넣고 20분 후에 C1, T, C2 위치에 보라색 밴드가 나타났는지를 관찰한다. 모든 경우에 C1, C2위치에 서로 다른 발색정도의 보라색 선이 나타나야 하고 T 위치의 보라색 선의 발색 정도를 C1과 C2와 비교하여 항체가 유무와 항체 역가의 정도를 판정한다.
이와같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 개 디스템퍼 바이러스 정제와 단클론항체를 제조하는 단계, 나이트로셀룰로오스 멤브레인에 산양 항 개 IgG 항체를 흡착하는 단계, 단클론항체와 금 입자를 접합시키고 골드 패드에 건조시키는 단계, 정제된 개 디스템퍼 바이러스를 검체 패드에 건조시키는 단계, 결합물들이 흡습되는 흡습패드 건조시키는 단계, 상기 단계 후 검사용 디바이스에 조립하는 단계로 이루어진 것에 특징이 있다.
이 같은 면역크로마토그라피법의 특징은 기존의 다단계 면역측정법(multi-step immunoassay)에서 볼 수 있는 검체희석(sample dilution), 세척(washing) 및 효소(enzyme-conjugate)와 기질의 반응을 통한 발색 과정을 하나로 통합하여 일단계(one-step)으로 검사할 수 있는 편리성이 있다. 또한 검사결과를 특정한 장비를 사용하지 않고 판정할 수 있는 용이성 및 경제성, 검사 결과 판독의 신속성의 장점이 있다.
그 구체적인 방법은 먼저 개 디스템퍼 바이러스를 Vero 세포에서 증식시킨후 바이러스를 Affinitiy chromatography하여 순수분리 정제하였다. 이렇게 분리된 개 디스템퍼 바이러스는 개 디스템퍼 바이러스에 대한 단클론항체를 제조하는데 이용하였다. 산양 항 개 IgG항체는 개의 혈청중의 IgG를 Protein G로 정제한 후 산양에 4회 면역시킨후 산양혈액을 채혈하고 IgG를 다시 정제하여 산양 항 개 IgG항체를 제조하였다.
면역크로마토그라피법으로 진단하기 위해서는 나이트로 셀룰로우즈 멤브레인에 산양 항 개 IgG 항체를 정해진 위치에 흡착시키고 금입자에 개 디스템퍼 바이러스 단 클론항체를 접합시켜 금접합체패드에 건조시켰다.
검체를 적용하는 검체패드는 정제된 개 디스템퍼 바이러스를 적시고 건조시켜 제조하였다.
건조된 금접합체패드와 검체를 적용하는 패드를 중첩하여 나이트로셀룰로우즈 멤브레인 위에 덮고 반대편 위치에 흡습용 패드를 부착시켜 테스트용 스트립을 제조하였다.
도 1 은 본 발명의 진단키트 제조방법에 따라 제조된 진단용 스트립을 검체 적용 홀과 결과 표시창이 표시된 플라스틱 디바이스에 넣어 제조한 것이다.
본 발명에 따르는 진단 스트립의 제조에 사용할 수 있는 멤브레인은 통상의 진단스트립의 재료로 사용되는 것들을 이용할 수 있으며, 예를 들어 나이트로 셀룰로우즈, 셀룰로우즈, 셀룰로우즈 아세테이트, 폴리에틸렌 등의 각종 합성 중합체를 사용할 수 있다.
대조선 위치에는 산양 항 돼지 IgG를 흡착시켜 돼지 IgG가 흡착된 골드입자가 검체 중의 개 디스템퍼 바이러스 항체의 존재여부에 관계없이 항상 반응하여 보라색 밴드를 나타내게 하였다. 반응하지 않은 내용물은 흡습패드에 스며들어 검사창의 멤브레인은 깨끗한 흰색으로 나타나 형성된 밴드를 쉽게 판독할 수 있다. 즉, 검체 중에 개 디스템퍼 바이러스 항체가 일정량 이상 존재하면 그 양에 따라 정량 적으로 발색되게 된다.
이하 실시예를 통해 본 발명에 따르는 진단장치 및 그 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
[실시예 1] 개 디스템퍼 바이러스 정제 및 단클론항체 제조
1) 개 디스템퍼 바이러스의 배양 및 정제
개 디스템퍼 바이러스 정제를 위한 원 바이러스는 미국 ATCC에서 구입(VR-128, Lederle strain)하였으며, Vero 세포가 100% sheet 가 형성되었을 때 virus를 접종하였다.
바이러스의 정제는 바이러스 접종후 세포변성효과가 최대로 일어났을 때 바이러스 감염 배양액을 원심분리(12,000 xg, 30분, 4℃)한 후 상층액을 초원심분리하였다. 초원심 분리하여(265,000×g, 3hrs, 4℃)(L8-70M, Beckman, USA) 침전물을 회수한 후, PBS 10㎖에 부유시키고 sucrose gradient ultra- centrifugation(SGUC) 법으로 정제하였다. 즉, 20% 2㎖, 30% 2㎖, 50% 1㎖의 농도 경사를 둔 sucrose(Sigma, USA)용액에 바이러스 부유액 2㎖를 중층하고 원심 분리(265,000×g, 3hrs, 4℃)(L8-70M, Beckman, USA)하여 2㎖씩 분획을 회수하였다. 각 분획의 흡광도를 280nm에서 측정하여(Uvikon922, Kontron, Denmark) 극대값을 보이는 분획들을 선정하고 microplate에 단계별로 희석 흡착시킨 후 CDV에 감염된 개의 (양성) 혈청과 반응하는 분획을 선택하였다. 이렇게 정제된 항원은 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체 제조와 검체 패드 제조시 사용하였다.
2) 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론 항체 제조
정제된 개 디스템퍼바이러스 항원을 면역원으로 사용하여 Balb/c 마우스에 면역시켰다. 이후 비장 세포를 분리하여 myeloma와 접합시켜 개 디스템퍼바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체를 분비하는 잡종 세포주를 ELISA 방법으로 선별하고 한계희석 방법으로 여러 단세포군을 확립하였다. 이들 세포주를 대량 배양하여 Balb/c 마우스에 복강에 접종하여 항체가 다량 함유된 복수를 얻고 protein A/G gel을 이용하여 IgG 항체를 정제하였다. 이렇게 정제된 항체는 개 디스템퍼 바이러스 외피 부분의 fusion protein인 40 kDa와 반응하는 단클론항체임을 western blot으로 확인하였다(도 3). 정제된 항체를 1 mg/㎖ 농도로 PBS로 희석하여 골드 접합용으로 사용하였다.
[실시예 2] 검사선용 산양 항 개 IgG 항체 제조
정제된 개 IgG를 구입하여 생리식염액에 용해하고 각 접종 때마다 100 ㎍ 씩 준비하여 Freund's Adjuvant, complete 0.5 ㎖과 혼합하여 emulsion시켰다. 이렇게 준비된 접종물을 30 kg이상의 산양의 피하에 접종하였다. 1개월 간격으로 6회를 동일한 방법으로 접종하되 2회 접종부터는 incomplete adjuvant를 사용하였다.
면역된 산양의 경정맥에서 시험 채혈을 실시한 후 혈청을 분리하여 ELISA방법으로 역가를 측정하였다. 역가 측정은 개 IgG를 ELISA용 plate에 1㎍/㎖농도로 흡착시키고 항혈청을 1% BSA용액으로 1,000, 10,000, 100,000, 1,000,000배 등으로 희석하여 반응시켰다. 구입한 anti-goat IgG-peroxidase를 이용하여 2차 반응을 시키고 TMB로 발색 시킨다. 정상 산양 혈청의 흡광도 값보다 약 3배 이상되는 흡광도를 cut off로 하여 100만배 이상의 titer를 나타내면 전채혈하였다.
전채혈 후 원심하여 혈청을 분리하고 개 IgG를 sepharose 4B gel에 흡착시켜 통과시켰다. 항혈청 중에 goat anti-canine IgG 항체는 개 IgG에 반응하고, 반응하지 않은 단백질은 PBS로 세척하였다.
0.2M glycine (pH 2.0) 용액으로 특이 항체를 용출하고 용출액을 PBS로 투석하였다. 투석된 항체액의 단백농도를 BCA법으로 측정하고 사용할 때까지 냉장에 보관하였다.
[실시예 3] 대조선용 산양 항 돼지 IgG 항체의 제조
정제된 돼지 IgG를 구입하여 생리식염액에 용해하고 각 접종 때마다 100 ㎍ 씩 준비하여 Freund's Adjuvant, complete 0.5 ㎖과 혼합하여 emulsion시켰다. 이렇게 준비된 접종물을 30 kg이상의 산양의 피하에 접종하였다. 1개월 간격으로 6회를 동일한 방법으로 접종하되 2회 접종부터는 incomplete adjuvant를 사용하였다.
면역된 산양의 경정맥에서 시험 채혈을 실시한 후 혈청을 분리하여 ELISA방법으로 역가를 측정하였다. 역가 측정은 돼지 IgG를 ELISA용 plate에 1㎍/㎖농도로 흡착시키고 항혈청을 1% BSA용액으로 1,000, 10,000, 100,000, 1,000,000배 등으로 희석하여 반응시켰다. 구입한 anti-goat IgG-peroxidase를 이용하여 2차 반응을 시키고 TMB로 발색 시킨다. 정상 산양 혈청의 흡광도 값보다 약 3배 이상되는 흡광도를 cut off로 하여 100만배 이상의 titer를 나타내면 전채혈하였다.
전채혈 후 원심하여 혈청을 분리하고 개 IgG를 sepharose 4B gel에 흡착시켜 통과시켰다. 항혈청 중에 goat anti-canine IgG 항체는 개 IgG에 반응하고, 반응하지 않은 단백질은 PBS로 세척하였다.
0.2M glycine (pH 2.0) 용액으로 특이 항체를 용출하고 용출액을 PBS로 투석하였다. 투석된 항체액의 단백농도를 BCA법으로 측정하고 사용할 때까지 냉장에 보관하였다.
[실시예 4] 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체 - 금 접합체 제조방법
Gold chloride를 0.01%로 증류수에 용해한 후 0.1% sodium citrate용액을 첨가하면서 가열하였다. 약 10분간 가열한 후 냉각하여 냉장 보관하면서 금 접합체와 반응시킬때 이용하였다. 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론 항체를 1 mg/㎖ 농도로 금 용액에 첨가하여 10분간 반응시켰다. 골드 입자를 안정화 시킨 후 10,000g에서 30분간 원심하여 침전을 만들고, 다시 PBS에 용해한 후 0.45㎛ 여과기로 여과하여 540nm에서 흡광도가 10이 되도록 희석하였다. 이 금 용액을 산양 항 마우스 면역글로블린이 흡착된 멤브레인에 Tween 20과 혼합하여 이동시켜 반응성을 확인하였다.
[실시예 5] 돼지 IgG - 금 접합체 제조방법
Gold chloride를 0.01%로 증류수에 용해한 후 0.1% sodium citrate용액을 첨가하면서 가열하였다. 약 10분간 가열한 후 냉각하여 냉장 보관하면서 금 접합체와 반응시킬때 이용하였다. 돼지 IgG 항체를 1 mg/㎖ 농도로 금 용액에 첨가하여 10분간 반응시켰다. 골드 입자를 안정화 시킨 후 10,000g에서 30분간 원심하여 침전을 만들고, 다시 PBS에 용해한 후 0.45㎛ 여과기로 여과하여 540nm에서 흡광도가 10이 되도록 희석하였다. 이 금 용액을 산양 항 마우스 면역글로블린이 흡착된 멤브레인에 Tween 20과 혼합하여 이동시켜 반응성을 확인하였다.
[실시예 6] 스트립 제조방법
1) 멤브레인 코팅공정
나이트로셀룰로스 멤브레인의 특정위치에, 즉 검사선 T에는 산양 항 개 IgG(1.0mg/㎖)항체를, 대조선 C1(0.1mg/㎖)과 C2(1.0mg/㎖)에는 산양 항 돼지 IgG항체를 각각 코팅한다.
2) 금 접합체 패드 (골드 패드) 제조
마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체-금 접합체 및 돼지 IgG-금 접합체를 폴리에스테르 또는 유리 섬유에 적셔 건조시킨 후 골드 패드를 제조하였다.
3) 검체 패드 제조
정제된 개 디스템퍼 바이러스 항원을 211 이상(antigen test 역가/(주)에스디, CDV antigen test kit) 역가되게 검체 패드에 적셔 건조시킨 후 검체 패드를 제조하였다.
4) 흡습 패드 제조
반응용액이 잘 흡수될 수 있도록 잘 건조하여 제조된 흡습 패드를 제조한다.
5) 스트립 조립
상기 제조된 메브레인에 골드 패드, 검체 패드, 흡습패드를 부착하여 스트립을 제조한다.
[실시예 7] 신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 바이러스 항체 진단 시약의 검사 원리
개 디스템퍼 바이러스 항체가 함유된 검액(혈청 혹은 혈액)을 시료 적용홀(S)에 넣으면 검액중의 개 디스템퍼 바이러스 항체가 검체 패드의 개 디스템퍼 바이러스 항원과 결합하고 곧이어 금 입자가 부착된 마우스 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체와 반응하여 복합체를 형성한다. 결합물은 모세관 현상에 의해서 멤브레인 위를 이동하며 다시 멤브레인 위에 흡착된 산양 항 개 IgG항체와 반응하여 indirect sandwich 원리에 의해 항원-항체-멤브레인 항체의 복합체를 형성하며 이러한 경우 금입자의 색상에 의해 해당 위치에 보라색 밴드 (검사선/T) 가 형성된다. 검사선에서 반응하지 않은 돼지 IgG 금 입자는 발색 정도관리를 위해 산양 항 돼지 IgG 항체가 흡착된 대조선 위치 (대조선 1/C1 및 대조선 2/C2)에서 반응하여 서로 다른 발색정도의 보라색 밴드를 나타낸다.
즉, 검사하고자 하는 검액을 타원형의 검체 홀에 넣고 20분 후에 C1, T, C2 위치에 보라색 밴드가 나타났는지를 관찰한다. 모든 경우에 C1, C2위치에 서로 다른 발색정도의 보라색 선이 나타나야 하고 T 위치의 보라색 선의 발색 정도를 C1과 C2와 비교하여 항체가 유무와 항체 역가의 정도를 판정한다.
[실시예 8] 본 발명에 따르는 진단키트의 진단 효능 시험
1) 혈청중화항체반응과의 상관관계
개 디스템퍼 바이러스 항체가 측정을 위한 표준 시험법인 혈청중화항체 역가를 알고 있는 개 혈청을 대상으로 본 발명품과의 역가별 상관관계를 조사하였다.
혈청중화항체 역가 (Serum Neutralizing Titer /SN Titer)는 국립수의과학검역원의 가축질병 표준 혈청검사법의 방법에 따라 실시하였다. 즉, 96well microplate에 먼저 Vero 세포를 단층형성시켰다. 혈청은 배지와 1:10으로 희석한후 2진 단계희석하고 100 TCID50/㎖의 개 디스템퍼 바이러스와 동량 혼합하였다. 이렇게 혼합된 바이러스-혈청 혼합물은 37℃에서 1시간동안 중화시킨 후 단층이 형성된 Vero세포에 100㎕/well씩 첨가하여 다시 37℃에서 1시간동안 바이러스를 세포에 접종하였다. 이후 접종된 바이러스-혈청 혼합물을 버리고 PBS로 3회 세척한후 배지를 200㎕/well씩 첨가하고 37℃, 5% CO2배양기에서 5일간 배양하였다. 혈청중화항체 역가는 디스템퍼 바이러스에 의한 세포변성효과가 나타나지 않는 최고 희석배수를 혈청중화항체 역가로 결정하였다.
본 발명품은 검체희석액 (210㎕)에 혈청을 1 루프(1㎕)를 잘 혼합한 모두 검체 적용홀에 점적하고 20분후 검사선(T)의 발색 정도에 따라 음성, 1+, 2+, 3+로 판정하였다.
그 결과, SN역가 1:10미만일때는 음성으로, 1:10이상 1:80미만일 경우는 1+로, 1:80이상부터 1:640미만일경우는 2+로, 1:640이상일때는 3+로 검출할수 있었으며, SN항체 역가가 높을경우 검사선의 강도도 비례적으로 높아짐을 확인할 수 있었다.
2) 민감도, 특이도 시험
본 발명품의 민감도 및 특이도 시험을 위해 제주대학교 농과대학 부설 동물병원, 서울시내의 동물병원에서 전혈, 혈장, 및 혈청 검체 286건을 공급받아 혈청중화항체반응역가와 본 발명품을 비교하여 시험한 결과 아래 표1과 같이 민감도 100%(260/260×100), 특이도 100% (26/26×100) 임을 확인하였다.
Figure 112004505950057-pat00001
이상에서 상술한 바와같이 본 발명은, 이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명에 따르는 개 디스템퍼 바이러스 항체 신속진단 측정법은 개의 혈액, 혈청, 혈장을 이용하여 항체역가를 20분내에 동물병원 현장에서 특별한 검사 장비 없이 간편하고 신속하게 진단 할 수 있는 유용한 검사 방법이다. 따라서 개 디스템퍼 바이러스 항체가 측정을 바탕으로 한 동물병원 현장에서의 백신 프로그램 작성이나 개 디스템퍼 바이러스 진단에 도움이 될 것이다.

Claims (4)

  1. 산양 항 개 IgG항체가 코팅된 멤브레인에 개 디스템퍼바이러스에 특이적인 단클론항체와 금이 접합된 골드패드와, 개 디스템퍼 항원이 함침건조된 검체패드와, 반응용액 흡수용 흡습패드가 부착된 스트립에 의해 개 혈액중의 개 디스템퍼 바이러스 항체 역가가 측정되게 함을 특징으로 하는 신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 항체 진단키트.
  2. 제 1 항에 있어서, 진단키트의 표시창을 대조선1, 검사선, 대조선2의 순서로 구성되게 함을 특징으로 하는 신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 항체 진단키트.
  3. 제 2 항에 있어서, 진단키트의 대조선1은 개 디스템퍼바이러스 혈청중화항체의 역가가 1:80, 대조선2는 개 디스템퍼바이러스 혈청중화항체의 역가가 1:640과 동일한 강도로 발색되게함을 특징으로 하는 신속 면역크로마토그라피법에 의한 개 디스템퍼 항체 진단키트.
  4. 삭제
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