CN109444409A - 一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，包括包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。本发明灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作方法简便且上样量小，需要的血清样本量小。
Description
技术领域
本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种犬瘟热病毒抗体的检测试剂盒。
背景技术
犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种高度接触性传染病。分布于全世界，我国也时有发生。该病的传染性强，发病率高，临床症状多样，容易继发其他细菌、病毒的混合感染和二次感染，死亡率可高达80%。犬瘟热是危害养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业的重要疫病，然而目前一直缺少治疗犬瘟热的有效药物因此做好该病的预防具有重要意义。现在虽有犬瘟热疫苗出售，但仍存在免疫失败现象，犬瘟热时有发生，危害较大。CDV 特异抗体的检测有助于制定合理的免疫程序，评价CDV疫苗的免疫效果及早期感染的诊断。目前犬瘟热病毒抗体的传统检测方法有酶联免疫吸附测定法（ELISA）和免疫层析检测法。
ELISA试剂盒需要专业的操作人员，存在检测成本高、手工实验差异大、效率低且上样量较大，需要血清样本量大的缺陷；免疫层析检测虽然方便，但存在灵敏度低、只能定性或半定量检测、线性范围窄且重复性差等缺点。
发明内容
为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作方法简便且上样量小，需要的血清样本量小。
为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：
一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。
所述毛细管为高精度毛细管，其外径为1.2±0.02mm，内径为0.7±0.005m，长度为30±1mm，材质为高硼硅3.3玻璃。
所述犬瘟热病毒抗原为犬瘟热全病毒。
所述包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管通过如下方法制成：
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至6.0～6.5，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为90～110ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为：4.5～5.5 ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为0.5～1h，包被温度为20～30℃，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为30～37℃的条件下封闭1～2h或在2~8℃封闭12~24h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
所述酶标犬瘟热病毒抗原在制备时所用的免疫原是细胞培养的犬瘟热全病毒，所用的标记酶是碱性磷酸酶。
所述酶标犬瘟热病毒抗原通过如下方法制成：
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至3~5mg/mL，加入12.76～14.76mg/mL的抗原活化剂，在20～30℃条件下，活化15～20min，然后加入1M甘氨酸终止反应5～10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至2~4 mg/mL，加入6.09 ～7.29mg/mL的酶活化剂，室温反应30～40min，然后加入1M甘氨酸终止反应5～10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为2～8℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应10～15min，最后加入乙醇胺室温终止10～15min。
所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠： 5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.0～9.0，定容为1000mL。
所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至6.8～7.8，定容为1000mL。
所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.1～8.1，定容为1000mL。
所述发光底物为：APS-5。
所述洗涤液包括如下成分：
CHAPS 1g
NaCl 9g
Tris 6.16g
曲拉通 1ml
水 1000mL
所述洗涤液的pH为6.9～7.9。
本发明的试剂盒还包括毛细管化学发光检检测装置，该毛细管化学发光检测装置采用授权公告号为CN107091923B，授权公告日为2018年1月30日的中国发明专利公开的毛细管化学发光检测装置。将酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液其液体试剂杯里，而将犬瘟热病毒抗原的毛细管替换下该专利中的毛细管本体即可。
本发明试剂盒的检测分析原理是：
毛细管上包被特定浓度的犬瘟热病毒抗原（CDV Ag）形成固相抗原，与样本中犬瘟热病毒抗体（CDV Ab）特异性结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他杂质后，再与ALP标记的犬瘟热病毒抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物。底物经过酶促反应，形成激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子,形成光信号。用已知浓度的犬瘟热病毒抗体检测所做的标准曲线，可计算样本中CDV Ab浓度。
本发明相对于现有技术具有如下有益效果：
本发明以犬瘟热病毒抗原包被高精度毛细管作为固相抗原，以此作为开发的检测试剂盒能准确灵敏地检测狗血液中的犬瘟热病毒抗体，检测范围为10ng/mL～50ug/mL（见图1），样品检测过程快速、操作简单，检测成本远低于传统的仪器检测方法，而且本发明试剂保存时间长，无放射性污染。本发明对解决病人进行即时床边检验具有重要的现实意义。
本发明以毛细管为反应载体，使用化学发光法检测犬瘟热病毒抗体，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定性好上样量小，需要的血清样本量小等特点。
本发明的各种试剂已经提前配置好，对实验操作人员的实验技能要求低，试剂使用量小，不易出现错误。
附图说明
图1为犬瘟热病毒抗体的标准曲线图。
具体实施方式
本发明提供了一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，包括包被了犬瘟热病毒抗原的高精度毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。
其中，毛细管包被犬瘟热病毒抗原过程中，所用的高精度毛细管是符合外径1.2±0.02mm、内径0.7±0.005m、长度30±1mm标准的高硼硅3.3玻璃，所用的包被犬瘟热病毒抗原是犬瘟热全病毒，所用封闭液是2%的牛血清白蛋白缓冲液。
其中，酶标犬瘟热病毒抗原的制备过程中，所用的免疫原是细胞培养的犬瘟热全病毒，所用标记酶是碱性磷酸酶。
其中，洗涤液配方为每1000mL水中加入CHAPS 1g、NaCl 9g、Tris 6.16g和曲拉通1mL ，最终将pH调节至6.9～7.9。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所用实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，包括包被了犬瘟热病毒抗原的高精度毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。
其中，犬瘟热病毒抗原的高精度毛细管采用如下方法制备：
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至6.0，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为100ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为：4.5 ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为0.5h，包被温度为室温，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为37℃的条件下封闭1h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
所述酶标犬瘟热病毒抗原在制备时所用的免疫原是细胞培养的犬瘟热全病毒，所用的标记酶是碱性磷酸酶。
其中酶标犬瘟热病毒抗原通过如下方法制成：
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至3~5mg/mL，加入13.76mg/mL的抗原活化剂，室温活化15min，然后加入1M甘氨酸终止反应5min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至2~4 mg/mL，加入6.69 mg/mL的酶活化剂，室温反应30min，然后加入1M甘氨酸终止反应5min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为4℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应10min，最后加入乙醇胺室温终止10min。
所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠： 5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.5，定容为1000mL。
所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.3，定容为1000mL。
所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.6，定容为1000mL。
其中，发光底物为APS-5。
其中，洗涤液包括如下成分：
CHAPS 1g
NaCl 9g
Tris 6.16g
曲拉通 1ml
水 1000mL
所述洗涤液的pH为7.4。
实施例2
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至6.0，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为90ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为：4.5 ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为0.5h，包被温度为20℃，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为30℃的条件下封闭1h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至3mg/mL，加入12.76mg/mL的抗原活化剂，在20℃条件下，活化15min，然后加入1M甘氨酸终止反应5min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至2mg/mL，加入6.09 mg/mL的酶活化剂，室温反应30min，然后加入1M甘氨酸终止反应5min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为2℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应10min，最后加入乙醇胺室温终止10min。
所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠： 5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.0，定容为1000mL。
所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至6.8，定容为1000mL。
所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.1，定容为1000mL。
所述发光底物为：APS-5。
所述洗涤液的pH为6.9。
实施例3
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至6.5，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为110ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为： 5.5 ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为1h，包被温度为30℃，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为37℃的条件下封闭2h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至5mg/mL，加入14.76mg/mL的抗原活化剂，在30℃条件下，活化20min，然后加入1M甘氨酸终止反应10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至4 mg/mL，加入7.29mg/mL的酶活化剂，室温反应40min，然后加入1M甘氨酸终止反应10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为8℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应15min，最后加入乙醇胺室温终止15min。
所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠： 5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至9.0，定容为1000mL。
所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.8，定容为1000mL。
所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.1，定容为1000mL。
所述洗涤液的pH为7.9。
实施例4
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至6.2，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为100ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为：5.0 ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为0.8h，包被温度为25℃，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为35℃的条件下封闭1.5h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至4mg/mL，加入13.76mg/mL的抗原活化剂，在25℃条件下，活化18min，然后加入1M甘氨酸终止反应8min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至3 mg/mL，加入7.19mg/mL的酶活化剂，室温反应35min，然后加入1M甘氨酸终止反应8min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为6℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应12min，最后加入乙醇胺室温终止13min。
所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠： 5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.5，定容为1000mL。
所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.2，定容为1000mL。
所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.5，定容为1000mL。
所述洗涤液的pH为7.0。
实施例5
本实施例与实施例1基本相同，不同的时，封闭时，封闭温度为2℃，封闭时间为24h。
实施例6
本实施例与实施例1基本相同，不同的时，封闭时，封闭温度为8℃，封闭时间为12h。
实施例7
本实施例与实施例1基本相同，不同的时，封闭时，封闭温度为5℃，封闭时间为18h。
本试剂盒使用时的具体操作如下：
a.待测样本经过前处理形成血清或血浆，备用。拆开试剂盒包装袋，取出毛细管化学发光检测装置套件，吸取血清或血浆12ul加入至检测装置的加样口，37℃孵育15分钟。洗涤液清洗3次。
b.加入酶标抗原12ul，37℃孵育15分钟。洗涤液清洗3次。
c.将检测装置放入化学发光免疫分析仪，检测发光值。
本试剂盒稳定性实验
将试剂盒放置于4℃保存，分别取0、10、20、30、60、90、120、150和180天的试剂盒，以抗原包被浓度为1ug/mL，酶标抗原浓度为0.1ug/mL。进行标准样品检测以测定其检测效果。稳定性测定结果如下表一所示：
表一 试剂盒稳定性实验结果
| 时间（天） | 0 | 10 | 20 | 30 | 60 | 90 | 120 | 150 | 180 |
| 发光值（RLU） | 32041 | 32553 | 32808 | 32297 | 32808 | 33064 | 33576 | 33320 | 33576 |
| 拟合值（ug/mL） | 1.01 | 1.03 | 1.04 | 1.02 | 1.04 | 1.05 | 1.07 | 1.06 | 1.07 |
从以上结果可以看出，发光值变化不大，试剂盒在℃下至少可保存6个月以上。有效期长。
本试剂盒添加回收实验
选择检测样本，分为体积相同的4份。在其中3份样本中分别加入相同体积已知浓度的低值标准品、中值标准品和高值标准品，制备待回收分析样本，加入体积小于原体积的10%，制成3个不同加入浓度的待回收分析样本，计算加入的待测物的浓度。在另一份样本中加入同样体积的无待测物的溶剂，制成基础样本。用本发明试剂盒对待回收分析样本和基础样本进行测定，对样本进行3次重复测定，计算均值，取其均值进行计算。回收率计算结果如表二所示：
表二 添加回收实验结果
| 测定浓度ug/mL | 加入浓度ug/mL | 回收浓度ug/mL | 回收率% | |
| 基础样本 | 1.00 | \ | \ | \ |
| 分析样本1 | 1.48 | 0.50 | 0.48 | 96 |
| 分析样本2 | 2.04 | 1.00 | 1.04 | 104 |
| 分析样本3 | 5.02 | 4.00 | 4.02 | 101 |
英语缩写解释：
EDC ：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
MES：2-(N-吗啉代)乙烷磺酸一水
BSA：牛血清白蛋白
CHAPS：3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐
Tris：三羟甲基氨基甲烷
KV300：KroVin 300M
PD10：葡聚糖凝胶过滤柱
APS-5：（4-氯苯巯基）（10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基）磷酸二钠盐。
Claims (10)
1.一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管、酶标犬瘟热病毒抗原、发光底物和洗涤液。
2.根据权利要求1所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬瘟热病毒抗原为犬瘟热全病毒。
3.根据权利要求1所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述包被了犬瘟热病毒抗原的毛细管通过如下方法制成：
配置包被缓冲液：在800mL去离子水中，加入MES ：19.52g、NaCl ：4.5g、1M 的MgCl2 ：2.5mL、0.1M 的ZnCl2： 0.5mL、BSA ：5g、吐温20：0.25g和KV300 ：1ul，待溶解完全后调节溶液pH至5.5～6.5，最后定容为1000mL；
配置包被液：将EDC溶解于包被缓冲液中，溶解后，EDC的浓度为90～110ug/mL；然后加入犬瘟热病毒抗原，制成包被液，包被液中，犬瘟热病毒抗原的浓度为：4.5～5.5ug/mL；
包被：将毛细管浸泡在包被液中进行包被，包被时间为0.5～1h，包被温度为20～30℃，包被完成后，将毛细管吹洗干净；
封闭：用2%的BSA缓冲液浸没毛细管，在温度为30～37℃的条件下封闭1～2h或在2~8℃封闭12~24h，封闭完成后，将毛细管吹洗干净。
4.根据权利要求1所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶标犬瘟热病毒抗原在制备时所用的免疫原是细胞培养的犬瘟热全病毒，所用的标记酶是碱性磷酸酶。
5.根据权利要求1所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶标犬瘟热病毒抗原通过如下方法制成：
犬瘟热病毒抗原活化：用抗原缓冲液Ⅰ将犬瘟热病毒抗原稀释至3~5mg/mL，加入12.76～14.76mg/mL的抗原活化剂，室温活化15～20min，然后加入1M甘氨酸终止反应5～10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为抗原缓冲液Ⅱ，纯化后等待偶联；
酶活化：用酶缓冲液将碱性磷酸酶稀释至2~4 mg/mL，加入6.09～7.29 mg/mL的酶活化剂，室温反应30～40min，然后加入1M甘氨酸终止反应5～10min，最后用PD10柱纯化，纯化时洗脱液为酶缓冲液，纯化后等待偶联；
偶联：将活化后的犬瘟热病毒抗原与活化后的碱性酶按照质量比1:1混匀，并加入混合液体总体积0.2%的1M MgCl2，在温度为2～8℃的条件下反应过夜，然后加入马来酰亚胺室温反应10～15min，最后加入乙醇胺室温终止10～15min。
6.根据权利要求5所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述抗原缓冲液Ⅰ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺 ：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O： 0.41g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至8.0～9.0，定容为1000mL。
7.根据权利要求5所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述抗原缓冲液Ⅱ的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：14.92g、氯化钠：5.84g、EDTA.2Na.2H2O：0.37g、1M氯化镁溶液： 1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至6.8～7.8，定容为1000mL。
8.根据权利要求5所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶缓冲液的制备工艺为：在800mL去离子水中，加入三乙醇胺：4.48g、氯化钠：175.32g、1M氯化镁溶液：1mL、0.1M氯化锌溶液：1mL，调节溶液pH至7.1～8.1，定容为1000mL。
9.根据权利要求1所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液包括如下成分：
CHAPS 1g
NaCl 9g
Tris 6.16g
曲拉通 1ml
水 1000mL。
10.根据权利要求1或9所述的一种犬瘟热病毒抗体的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液的pH为6.9～7.9。
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