KR100586307B1

KR100586307B1 - 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100586307B1
Application number: KR1020040047223A
Authority: KR
Inventors: 권은희; 백인걸; 이계호
Original assignee: 주식회사 에스티씨나라
Priority date: 2004-06-23
Filing date: 2004-06-23
Publication date: 2006-06-07
Also published as: KR20050122074A

Abstract

본 발명은 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해 및 콜라겐 합성 촉진용 조성물과 피부 주름 및 탄력 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 비자 추출물은 탁월한 엘라스타아제 저해, 콜라겐 합성 촉진 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 특히 비자 추출물의 물 분획물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성을 갖는다. 본 발명의 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 피부 주름 및 피부 탄력을 개선하는 효과가 탁월하며, 우수한 안정성을 나타낸다.

비자, 엘라스타아제, 콜라겐, 섬유아세포, 탄력, 주름

Description

비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Torreya nucifera Extract as Active Ingredient for Improving Skin Wrinkle and Elasticity}

본 발명은 비자 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명은 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물, 콜라겐 합성 촉진용 조성물 및 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 몸의 체표면을 덮고 있는 장기이다. 피부는 크게 표피 (epidermis)와 진피 (dermis)로 구분된다. 표피는 피부의 가장 바깥쪽에 위치하며 내부기관을 위한 보호막 역할을 한다. 표피는 각질층, 투명층, 과립층, 유극층 및 기저층으로 구성되어 있다. 진피는 표피에 영양소를 공급해 주는 일과 피부 조직내에서 피부의 틀을 형성해 주는 역할을 한다. 진피는 유두층 (papillary layer)과 망상층 (deep reticular layer)으로 구성되어 있는데, 유두층은 섬유아세포의 활동에 의한 피부세포 증식이 이루어지는 곳이다. 망상층은 피부 전체의 탄력을 유지하는 역할을 하며 콜라겐 (collagen; 교원질) 및 엘라스틴 (elastin; 탄력섬유)이 그물모양으로 짜여져 있다 (Braverman, J.Invest. Dermatol., 78, 434-443 (1982)).

탄력섬유는 결합조직에 포함되는 탄성을 가지는 섬유로서 결합조직에 포함되는 교원섬유에 비해 신장성이 훨씬 더 큰 섬유이다. 탄력섬유는 피부에 가해진 힘에 의해 변형된 피부가 원래의 모습으로 회복될 수 있도록 피부에 탄력성을 제공한다.

엘라스틴은 상기 탄력섬유의 주요 구성성분으로 탄력섬유의 90%가 무정형의 불용성 단백질인 엘라스틴 (elastin)으로 구성되어 있다. 엘라스타아제 (elastase)는 엘라스틴을 분해하는 활성이 있는 효소로서 엘라스타아제에 의해 엘라스틴이 분해되면 피부의 탄력이 감소되고 또한, 주름의 생성이 가속화된다 (피부과학 pp 18, 대한피부과학회 교과서 편찬위원회 편저, 려문각)

따라서 피부 주름 및 탄력의 개선 방법으로 엘라스타아제의 활성을 저해하여 엘라스틴의 분해를 억제하는 방법이 보고되고 있다 (김인영 외, Kor. J. Pharmacogn 33(4):364-371(2002)).

콜라겐은 생체 단백질 총 중량의 30%를 차지하는 중요한 단백질로 견고한 3중 나선 구조를 가지고 있다. 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱 등이 알려져 있다 (Van der Rest et al, 1990). 이러한 콜라겐은 고령화 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의하여 섬유아세포의 기능이 저하되어 그 생성량이 감소된다. 일반적으로 80세에서는 20세 에 비하여 65% 정도가 감소하여 피부의 두께가 얇아지고, 이러한 현상은 피부의 주름형성에 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다 (Arthur K. Balin et al., "Aging and the skin", 1989). 최근에 화장품에 콜라겐을 배합하는 제품들이 출시되고 있으나, 이들 화장품은 콜라겐을 피부표면에 도포하는 것으로, 고분자인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 피부표면의 보습작용 외에 본질적인 피부 주름 개선 기능을 기대 할 수 없다.

종래 기술에서 사용되고 있는 레티노이드와 같은 주름개선 물질은 안정성이 낮아 화장료에서 이용하는 것에 한계가 있고, 피부 적용 시에 자극 및 발적이 일어나므로 안전성에도 문제가 있어 사용량이 제한되어 있다.

따라서, 보다 우수한 주름 및 탄력 개선 효과는 물론 안정성 및 안전성이 우수한 새로운 물질 개발이 필요한 실정이다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 안정성이 높으며 피부 주름 및 탄력 개선 효과가 우수한 물질을 찾기 위해 생약재를 대상으로 예의 연구 노력한 결과, 비자 추출물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성, 콜라겐 합성 촉진 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 안 정성 또한 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 목적은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 콜라겐 합성 촉진용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 콜라겐 합성 촉진용 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물를 제공한다.

본 발명은 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.

비자나무 (Torreya nucifera)는 주목과 (Taxaceae)에 속하는 상록 침엽교목으로 전 세계적으로 우리나라와 일본에만 제한되어 분포한다. 성장이 너무 느려 나이테가 잘 보이지 않는 것이 특징이며, 우리나라에서는 천연기념물로 지정되어 보호되고 있다. 비자나무는 식용, 관상용, 공업용, 약용으로 쓰이고 종자는 기름을 짜내고 먹으며 한방과 민간에서 과실을 구충, 발묘, 건위. 조경, 장출혈 등에 약재로 쓰고 목재는 건축재, 기구재, 선박용재 등에 쓰인다 (김태정, 한국의 자원식물Ⅰ, p 40, 서울대학교 출판부, 1996; 육창수, 아세아 생약도감, p 23, 도서출판 경원, 1997). 잎과 종자에서 분리 보고된 성분에는 세스퀴테르페노이드 (sesquiterpenoids) (Sakaki T, Nishimura K, Hirose Y., Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 381-725, 1965), 라브단 (labdane) 계열과 아비에탄 (abietane) 계 디테르페노이드 (diterpenoid) (Sayama Y, Kyogoku K, Murayama H, Agric. Biol. Chem. 1971; 35: 1068-73 및 Harrison LJ, Asakawa Y, Phytochemistry, 1987; 26: 1211-2), 그리고 플라보노이드 (Kariyone T, Sawaka T, Yakugaku Zasshi, 1958;78: 1010-3) 등이 있다.

본 명세서에서 용어 "비자 추출물"은 비자나무의 다양한 기관 (예: 열매, 종자, 잎, 꽃, 수피, 줄기 및 뿌리 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 비자나무의 종자 추출물을 의미한다.

본 발명에서 이용되는 비자 추출물은, 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 얻어질 수 있고, 바람직하게는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름 또는 (f) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 얻은 것이다. 추출용매는 바람직하게는 알코올이며, 보다 바람직하게는 에탄올 또는 메탄올이다. 추출의 재료가 되는 비자는 이를 건조하여 사용하거나 또는 그대로 사용할 수 있으 며, 바람직하게는 건조하여 사용하는 것이다. 건조법으로는 자연 건조 또는 열풍 건조법을 이용할 수 있다.

본 발명의 하기 특정 제조예를 참조하여 비자 추출물의 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 비자를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분쇄한다. 분쇄된 비자 미세분말을 메탄올 또는 에탄올에 넣어 상온에서 수 일 동안 침출한다. 와트만 여과지로 여과하여 침출액을 회수하고 다시 메탄올 또는 에탄올을 넣고 재침출한다. 상기 재침출 과정을 수 회 반복하고 회수된 침출액은 감압농축장치로 농축한다.

한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출용매 뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 비자 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐 만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 비자 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 비자 추출물은 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 사용되는 비자 추출물은 상술한 추출용매를 이용한 추출 이후에, 유효성분의 추가적인 분획 (fractionation)을 위하여, 물 및 유기 용매 (예: 헥산, 에틸아세테이트 및 클로로포름)를 이용한 분획화 과정을 거치게 된다. 따라서, 본 발명의 추출물은 보다 바람직하게는 물층 분획물이다.

본 발명자들은 비자 추출물을 다양한 용매로 분획하여 각각의 용매별 분획물의 엘라스타아제 저해 효과를 측정하였으며, 그 결과 물층 분획물이 우수한 엘라스타아제 저해 효과가 있는 것을 확인하였다.

상기 사실로부터 본 발명의 비자 추출물에서 물에 용해도가 높은 물질이 엘라스타아제 저해 효과가 특히 우수함을 알 수 있다. 또한, 비자 추출물을 추가적으로 용매별로 분획하는 것은 불필요한 물질들을 제거하고 핵심적인 성분만을 사용할 수 있게 한다.

본 발명의 하기 특정 제조예를 참조하여 비자 추출물의 용매별 분획을 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 추출용매를 사용하여 얻은 비자 추출물을 정제수에 분산시키고 헥산를 가하여 진탕시켰다. 헥산층 및 물층이 충분히 분리된 후 상층인 헥산층을 취하였다. 하층 (물층)에 헥산을 첨가하여 수 회 더 추출하였다. 회수된 상층을 모두 합한 후 감압증류장치를 이용하여 용매를 제거한다. 헥산 대신 클로로포름 및 에틸아세테이트를 사용하여 상기 하층 (물층)을 상기와 같은 방법으로 재추출하고 농축한다. 마지막으로 물층을 감압증류하여 물층 분획물을 얻는다.

본 발명의 비자 추출물은 탁월한 엘라스타아제 활성 억제 효과 및 우수한 콜라겐 합성 촉진 효과가 있다.

피부 전체의 탄력을 유지하는 역할을 수행하는 망상층은 콜라겐 (교원섬유) 및 엘라스틴 (탄력섬유)이 그물모양으로 짜여져 있다. 피부의 탄력은 엘라스틴을 주성분으로 하는 탄력섬유에 크게 영향을 받으며, 탄력섬유의 엘라스틴이 엘라스틴 분해 효소에 의해 분해되면, 피부가 탄력을 잃고 주름 생성이 가속화된다. 본 발명의 비자 추출물은 엘라스타아제 활성을 저해함으로써 엘라스틴 분해 효소에 의한 엘라스틴의 분해를 억제하여 탄력섬유가 그 기능을 원할히 수행할 수 있도록 한다. 또한, 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱하는 콜라겐의 합성을 촉진함으로써 결과적으로 피부의 탄력이 유지 및 개선되고 나아가 주름의 생성이 억제되고 주름이 개선되는 효과를 얻는다.

더욱이, 본 발명의 비자 추출물은 진피의 섬유성결합조직을 구성하는 섬유아세포의 증식을 촉진한다. 본 발명의 추출물에 의한 섬유아세포의 증식효과는 섬유성 결합조직에 건강한 젊은 세포의 수급을 가능하게 함으로써 비자 추출물의 엘라스타아제 제해 활성, 콜라겐 합성 촉진과 함께 결과적으로 피부의 섬유성 결합조직을 강화시키는 효과를 준다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 비자 추출물의 함량은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 15 중량%이며, 바람직하게는 0.001 내지 10중량%이고 보다 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%이다. 상기 비자 추출물의 함량의 양이 0.0001 중 량% 미만인 경우에는 효과가 나타나지 않는 문제점이 있고, 15 중량%를 초과하는 경우에는 효과에 큰 차이가 없다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 비자 추출물이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카 본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 엘라스타아제의 활성을 억제하고 콜라겐의 합성을 촉진할 뿐만 아니라, 섬유아세포 증식을 촉진하여 피부 주름 및 탄력을 개선하는 효과가 탁월하다. 또한, 본 발명의 비자 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 뛰어난 온도 안정성을 나타낸다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

제조예 1: 비자 추출물의 제조

비자 (Torreyae semen)를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분쇄하였다. 분쇄된 비자 미세분말 140 g을 메탄올 또는 에탄올 1.4 ℓ에 넣어 상온에서 1일 동안 침출하였다. 와트만 2번 여과지로 여과하여 침출액을 회수하고 다시 메탄올 또는 에탄올 1.4 ℓ을 넣고 재침출하였다. 상기 재침출 과정은 총 3회 반복되었다. 회수된 침출액은 감압농축장치로 농축하였으며, 건조 추출물 53.3 g을 얻었다.

제조예 2: 용매별 분획의 제조

상기 제조예 1에서 얻은 비자의 메탄올 추출물을 정제수 1 ℓ에 분산시키고 헥산 2 ℓ를 가하여 진탕시켰다. 헥산층 및 물층이 충분히 분리된 후 상층인 헥 산층을 취하였다. 하층 (물층)에 헥산을 첨가하여 세 번 더 추출하였다. 회수된 상층을 모두 합한 후 감압증류장치를 이용하여 용매를 제거하고 67 g의 헥산층 분획물을 얻었다. 헥산 대신 클로로포름 및 에틸아세테이트를 사용하여 상기 하층 (물층)을 상기와 같은 방법으로 재추출하고 농축하여 클로로포름층 분획물 60 mg 및 에틸아세테이트층 분획물 115 mg을 얻었다. 마지막으로 물층을 감압증류하여 물층 분획물 4.91 g을 얻었다.

실험예 1: 엘라스타아제 저해 효과 실험 (Elastase inhibition assay)

상기 제조예 1의 비자 추출물을 각 농도별로 조제한 용액 (용매: 100 mM Tris HCl pH 8.0) 60 ㎕와 0.6 units/ml 엘라스타아제 효소 (Sigma, 미합중국) 용액 100 ㎕를 30분간 37℃에서 반응시켰다. 그 다음, 4 mM sucAla3-PNA 용액 (Sigma, 미합중국) 40 ㎕를 첨가하고 30분간 37℃에서 반응시킨 후 분광광도기를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험결과는 하기 표 1에 나타나 있다. 엘라스타아제 저해활성은 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.

저해율(%)={1-[비교군 흡광도(O.D.405)/대조군 흡광도 (O.D.405)]}x100

비자 추출물 (㎎/㎖)	엘라스타아제 저해 활성 (%) (메탄올 추출)	엘라스타아제 저해 활성 (%) (에탄올 추출)
0.03	37.2	59.8
0.3	76.6	86.3
0.45	80.9	86.9

상기 표 1에서 보는 바와 같이 비자 추출물은 농도 의존적으로 엘라스타아제 의 활성을 저해하였으며, 그 저해 효과가 탁월하였다.

실험예 2: 비자 추출물의 용매별 분획의 엘라스타아제 저해 효과 실험

상기 제조예 2에서 얻은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 물의 용매별 분획의 엘라스타아제 저해 효과를 실험예 1에 기재된 방법에 의해 측정하였다.

용매별 분획 (0.45 ㎎/㎖)	엘라스타아제 저해 활성 (%)
헥산층	7.7
클로로포름층	5.7
에틸아세테이트층	8.2
물층	56.6

상기 표 2에서 알 수 있듯이 물층이 다른 층에 비하여 월등한 엘라스타아제 저해 활성을 보였다. 따라서, 물층에 엘라스타아제 저해 활성이 높은 물질이 존재함을 예상할 수 있다.

실험예 3: 콜라겐 합성 촉진 효과 실험

12-웰 플레이트의 각 웰에 섬유아세포 1.4 x 10⁵ cells/well을 접종하여 DMEM 배지에서 24 시간 배양하였다. 제조예 1의 메탄올을 사용하여 얻은 비자 추출물의 농도가 각각 0.001, 0.01, 0.1 및 1 ㎎/㎖가 되도록 처리하고 24 시간 배양하였다. Sircol^TM collagen assay kit(Biocolor Ltd., Ireland)를 이용하여 섬유아세포가 새롭게 합성 분비한 콜라겐의 양을 측정하였다. 즉, 콜라겐에서 특이적으로 발견되는 [Gly-X-Y]n 삼중나선구조에 특이적으로 결합하는 염색시약의 발색 반응을 분광분석기를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정함으로써 합성된 콜라겐 양을 계산하였다.

비자 추출물 (㎎/㎖)	콜라겐 합성율(%)
0.001	105.4
0.01	113.5
0.1	121.6
1	135.8

상기 표 3에서 보는 바와 같이, 비자 추출물을 처리하였을 경우 농도 의존적으로 콜라겐 합성율이 높아짐을 알 수가 있다. 따라서 비자 추출물이 콜라겐 합성촉진에도 효과가 탁월함을 알 수가 있었다.

실험예 4: 섬유아세포 증식 효과 실험

4-1: 쥐 섬유아세포의 일차 세포배양

(주)바이오 제노믹스에서 구입한 SD계 쥐 (4 주령)을 마취시키고 등을 제모한 후 조직을 적출하였다. 적출한 조직을 표피와 진피를 분리한 후, 진피에서 섬유아세포를 분리하여 형태를 확인하였다. 확인된 섬유아세포를 DMEM 배지에 10 % FBS (fetal bovine serum), 1% 페니실신-스트렙토마이신을 가하여 25 ㎠ 조직 배양 플라스크 내에서 배양기 내부 공기 5% CO₂ 농도로 37 ℃에서 3-5 일간 안정화하였다. 안정화 후 트립신-EDTA 용액을 처리하여 계대 배양하였으며 초기 계대 세포 (passage 3)를 사용하였다.

4-2: 섬유아세포 증식율 측정

96-웰 플레이트의 각 웰에 대수증식기의 정상 쥐 섬유아세포 4 x 10⁴ cells/well를 접종하여 DMEM 배지에서 24 시간 배양하였다. 제조예 1의 메탄올을 사용하여 얻은 비자의 추출물의 최종 농도가 각각 0.1, 0.5 및 1 ㎎/㎖이 되도록 처리된 5% 혈청이 포함된 DMEM 배지로 교환하고 72 시간 배양하였다. MTT 용액을 50 ㎕ (5 ㎎/㎖)씩 첨가하고 4 시간 후 원심분리하여 상등액을 제거하였다. DMSO를 100 ㎕씩 첨가한 후 570 ㎚에서 엘라이자 리더로 흡광도를 측정하였다. 세포증식률 (%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였다.

세포증식률(%)= (추출물 처리군의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도x100

비자 추출물 (㎎/㎖)	세포증식효과(%)
0.1	108.1
0.5	122.8
1	92.4

상기 표 4에서 보는 바와 같이 비자 추출물은 정상 쥐 섬유아세포의 세포증식 효과가 있음을 알 수 있었다. 추출물의 농도가 0.5 ㎎/㎖ 일 때 가장 높은 증식 효과를 가져왔으며, 전반적으로 우수한 효과를 보여주었으므로 비자 추출물은 탁월한 세포증식효과가 있음을 알 수 있었다.

이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 영양 로션 및 영양 크림 등을 예 시하고 있으나, 본 발명의 조성물을 포함하는 화장료의 제형은 이에 제한되는 것은 아니다.

제형예

제형예 1

비자 추출물을 함유한 화장료 중 화장수(스킨)의 제형예는 표 5와 같다.

번호	원료명	실시예1 (중량%)	실시예2 (중량%)	실시예3 (중량%)	비교실시예1 (중량%)
1	비자 추출물	0.01	1.00	5.00	-
2	글리세린	2.00	2.00	2.00	2.00
3	부틸렌글라이콜	3.00	3.00	3.00	3.00
4	디프로필렌글라이콜	2.00	2.00	2.00	2.00
5	EDTA-2Na	0.01	0.01	0.01	0.01
6	색소	미량	미량	미량	미량
7	에탄올(95%)	5.00	5.00	5.00	5.00
8	방부제	미량	미량	미량	미량
9	옥틸도데세스-16	0.10	0.10	0.10	0.10
10	향	미량	미량	미량	미량
11	정제수	잔량	잔량	잔량	잔량

제형예 2

비자 추출물을 함유한 화장료 중 영양로션의 제형예는 표 6과 같다.

번호	원료명	실시예4 (중량%)	실시예5 (중량%)	실시예6 (중량%)	비교실시예2 (중량%)
1	비자 추출물	0.01	1.00	5.00	-
2	친유형글리세릴스테아레이트	1.50	1.50	1.50	1.50
3	스테아릭애씨드	0.30	0.30	0.30	0.30
4	스테아릴알코올	0.50	0.50	0.50	0.50
5	밀납	0.40	0.40	0.40	0.40
6	폴리소르베이트 60	1.20	1.20	1.20	1.20
7	소르비탄세스퀴올리에이트	0.30	0.30	0.30	0.30
8	방부제	미량	미량	미량	미량
9	스쿠알란	3.00	3.00	3.00	3.00
10	세틸에틸헥사노에이트	5.00	5.00	5.00	5.00
11	사이클로메치콘	4.00	4.00	4.00	4.00
12	글리세린	3.00	3.00	3.00	3.00
13	부틸렌글라이콜	3.00	3.00	3.00	3.00
14	EDTA-2Na	0.03	0.03	0.03	0.03
15	트리에탄올아민	0.15	0.15	0.15	0.15
16	카보머	0.12	0.12	0.12	0.12
17	색소	미량	미량	미량	미량
18	향	미량	미량	미량	미량
19	정제수	잔량	잔량	잔량	잔량

제형예 3

비자 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 제형예는 표 7과 같다.

번 호	원 료	중량%
1	비자 추출물	10.0
2	밀납	3.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
5	유동파라핀	20.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노 스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	6.0
11	트리에탄올아민	0.2
12	방부제	미량
13	색소	미량
14	향료	미량
15	정제수	잔량

제형예 4

비자 추출물을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 제형예는 표 8과 같다.

번 호	원 료	중량%
1	비자 추출물	10.0
2	밀납	5.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄세스퀴올레이트	0.8
5	유동파라핀	40.0
6	스쿠알란	5.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0
8	카르복시 비닐폴리머	0.2
9	부틸렌글리콜	6.0
10	글리세린	6.0
11	트리에탄올아민	0.2
12	방부제	미량
13	색소	미량
14	향료	미량
15	정제수	잔량

제형예 5

비자 추출물을 함유한 화장료 중 영양 에센스의 제형예는 표 9와 같다.

번 호	원 료	중량%
1	비자 추출물	5.0
2	시토 스테롤	13.0
3	폴리 글리세릴 2-올레이트	0.2
4	세라마이드	0.1
5	세테아레스-4	5.0
6	콜레스테롤	0.3
7	디세틸포스페이트	미량
8	농글리세린	1.0
9	마카데미아 오일	0.2
10	카르복시비닐폴리머	미량
11	산탄검	미량
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량

제형예 6

비자 추출물을 함유한 화장료 중 유화형 화운데이션의 제형예는 표 10과 같다.

번 호	원 료	중량%
1	비자 추출물	10.0
2	밀납	2.0
3	사이크로메치콘	2.0
4	유동파라핀	5.0
5	스쿠알란	5.0
6	스테아린산	2.0
7	친유성 모노스테아린산 글리세린	3.0
8	마카데미아 오일	4.0
9	글리세린	4.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	부틸렌글리콜	3.0
12	트리에탄올아민	1.0
13	알루미늄마그네슘실리케이트	0.5
14	안료	12.0
15	방부제	미량
16	향료	미량
17	정제수	잔량

실험예 1: 온도 보존 안정성

상기 제조예 1에서 에탄올을 용매로 하여 제조한 비자 추출물을 사용하여 상기 제형예 1 및 2의 실시예 1 내지 6의 화장료를 제조하고 화장료의 온도 보존 안정성을 평가하였다. 온도 보존 안정성을 확인하기 위하여 온도별 변화에 따른 안정성을 조사하였으며, 그 결과는 하기 표 11에 나타나 있다.

온도(℃)	기간	실시예1	실시예2	실시예3	실시예4	실시예5	실시예6
-5℃	1주일	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	1개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	3개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
4℃	1주일	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	1개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	3개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
35℃	1주일	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	1개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	3개월	◎	◎	○	◎	○	○
45℃	1주일	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	1개월	◎	◎	◎	◎	◎	◎
	3개월	◎	◎	○	◎	○	○
◎: 아주양호 ○: 양호 x: 분리

상기 표 11의 결과로부터, 본 발명의 비자 추출물을 함유하는 화장품은 온도 보존 안정성이 매우 우수함을 알 수 있었다.

실험예 2: 피부 주름 개선의 임상효과

본 발명의 비자 추출물을 함유하는 화장료에 대한 피부 주름 개선 임상효과를 측정하였다.

본 임상 시험은 주름이 생성되기 시작하거나 이미 생성된 25세 이상의 여성 20명을 2 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예 6의 화장료, B 그룹에는 비교실시예2의 화장료를 안면 중 좌측 및 우측 눈가를 중심으로 12주간 도포하게 하였다. 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 4등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도를 측정하였다. 결과는 하기 표 11 및 표 12에 나타나 있다.

피부주름개선 평가 기준:

- : 변화없음

+ : 약간 개선

++ : 개선

+++: 매우개선

피부주름개선 임상효과 (숙련자의 객관적 평가)

구 분	피부주름 개선 정도 (12주 후)
구 분	실시예 6	비교실시예 2
피검자1	+++	-
피검자2	++	-
피검자3	++	+
피검자4	+++	+
피검자5	+	-
피검자6	+	-
피검자7	++	-
피검자8	++	+
피검자9	-	-
피검자10	+	-

피부주름개선 임상효과 (피검자의 주관적 평가)

구 분	피부주름 개선 정도 (12주 후)
구 분	실시예 6	비교실시예 2
피검자1	+++	++
피검자2	++	-
피검자3	+++	+
피검자4	+++	+
피검자5	+	+
피검자6	++	-
피검자7	+	-
피검자8	++	++
피검자9	++	+
피검자10	+	-

상기 임상시험 결과, 표 12 및 표 13에서 알 수 있듯이 실시예 6의 경우 숙련자의 객관적 평가 및 피검자의 주관적 평가가 비교실시예 2 에 비하여 월등히 높 았다. 따라서, 본 발명의 비자 추출물을 첨가하여 제조한 제형의 주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.

이상에서 상세히 설명하듯이, 본 발명은 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물, 콜라겐 합성 촉진용 조성물과 피부 주름 및 탄력 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 비자 추출물은 탁월한 엘라스타아제 저해 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 특히 비자 추출물의 물 또는 클로로포름의 분획물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성을 갖는다. 본 발명의 비자 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 피부 주름 및 피부 탄력을 개선하는 효과가 탁월하며, 우수한 안정성을 나타낸다.

Claims

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비자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 비자 추출물은 엘라스타아제 저해, 콜라겐 합성 촉진 또는 섬유아세포 증식 촉진을 통하여 피부 주름 및 탄력을 개선하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물.
제 3 항 또는 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유효성분으로서의 비자 추출물은, 추출용매를 이용한 추출 이후에 물 및 유기 용매를 이용하여 유효성분의 추가적인 분획화 과정을 거치는 경우에 있어서 물층 분획물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항 또는 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비자 추출물의 함량은 상기 조성물의 총 중량에 대해서 0.0001-15.0 중량%인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항 또는 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물.