KR100533284B1 - 암예방 기능성 한방 식혜의 제조방법 및 그 식혜 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 엿기름 분말에 느릅나무 껍질 분말, 치자 분말, 갈근 분말, 뽕잎 분말, 감초 분말 및 생강 분말을 첨가한 후 열수추출하여 얻어지는 엿기름 액을 찹쌀, 율무로부터 얻어지는 식혜밥에 첨가하여 당화시키는 것을 특징으로 하는 한방식혜의 제조방법에 관한 것으로, 암예방의 기능성이 보강된 식혜를 제공할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.
Description
본 발명은 식혜에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 엿기름 분말에 느릅나무 껍질 분말, 치자 분말, 갈근 분말, 뽕잎 분말, 감초 분말 및 생강 분말을 첨가한 후 열수추출하여 얻어지는 엿기름 액을 찹쌀 및 율무로부터 얻어지는 식혜밥에 첨가하여 당화시켜 제조되는 한방 식혜에 관한 것이다.
식혜는 조선시대 이전부터 각 가정에서 크게 사랑받아 온 한국의 전통적 음료로서 단술 혹은 감주(甘酒)라고도 하였다.
식혜의 일반적인 제조방법을 보면, 먼저 체로 친 고운 엿기름 가루를 자루에 담아 약 50℃ 정도의 물에서 추출하여 앙금이 가라앉은 후 고운 체로 걸러 엿기름 물을 준비한다. 준비한 엿기름 물을 멥쌀 또는 찹쌀로 되게 지은 밥에 붓고 4~5시간 동안 50℃로 계속 유지하여 밥알을 삭히는데, 이때 엿기름에 함유되어 있는 효소작용에 의해 밥알이 당화된다.
밥알이 몇개 떠오르면 건져내어 찬물에 헹군 후 받쳐서 물기를 빼고, 밥알을 건져낸 식혜물에 설탕을 넣고 끓인 후 냉각시켜서 식혜를 제조한다.
식혜에 대한 기호성의 증가와 더불어 식혜가 상품화되어 대량 생산, 판매됨에 따라 식혜의 기호성을 증가시키기 위한 연구가 활발히 진행되고 있다.
한편, 종래의 기술로서,
대한민국 등록특허공보 제10-0296729호에 마를 첨가하여 제조됨으로써 맛과 향이 향상되고 음용시 인체의 건강을 유지 및 도모시킬 수 있는 식혜가 개시되어 있고,
대한민국 공개특허공보 특1998-068217에 영지버섯, 솔닢, 인삼, 칡, 감초 등을 혼합하여 제조됨으로써 향이 유별나고 제조공정이 단순화된 식혜의 제조방법이 개시되어 있고,
대한민국 공개특허공보 특1997-0058599호에 인삼이나 오미자를 첨가하여 제조됨으로써 생약성분의 건강기능성 및 독특한 향미가 첨가된 식혜의 제조방법이 개시되어 있고,
대한민국 등록특허공보 제10-0173840호에 두충엽, 녹차, 메밀엽, 감잎, 산사자, 동규자 등의 생약재를 첨가하여 제조됨으로써 체중감량 및 고혈압 예방의 효과가 있는 식혜가 개시되어 있다.
그러나, 암예방 효과가 있는 한방식혜에 관한 것은 종래에 없었다.
이에 본 발명자들은 식혜의 기호성과 함께 암예방에 효과가 있는 기능성 건강 식혜를 제공하기 위하여 거듭 연구하여 왔으며, 그 결과 엿기름 분말에 느릅나무 분말, 치자 분말, 갈근 분말, 뽕잎 분말, 감초 분말 및 생강 분말을 혼합한 후 열수추출하여 얻어지는 엿기름액을 찹쌀, 율무로부터 제조된 식혜밥에 첨가하여 당화시키면, 생약재의 유효성분 식혜로 침출됨으로써, 암예방의 기능성을 보강된 식혜를 제조할 수 있음을 규명하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 생약재가 침출되어 있는 엿기름액을 찹쌀, 율무로부터 제조된 식혜밥에 첨가하여 당화시켜 제조함으로써, 암예방 효과가 있는 한방 식혜 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은,
찹쌀 25 중량부, 율무 25 중량부를 혼합한 후, 100 중량부의 물을 붓고 2시간 동안 실온에서 불린 후, 120℃의 온도에서 10분 동안 증자하여 식혜밥을 준비하는 단계;
정제수 500 중량부에 엿기름 47 중량부, 느릅나무 껍질 분말 0.5 중량부, 치자 분말 0.5 중량부, 갈근 분말0.5 중량부, 뽕잎 분말 0.5 중량부, 감초 분말 0.5 중량부 및 생강 분말 0.5 중량부를 첨가한 후 60℃의 온도로 2시간 동안 열수추출하여 엿기름액을 얻는 단계; 및
상기 단계를 통해 준비된 식혜밥과 엿기름액을 혼합한 후 50℃에서 5시간 동안 당화시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 한방 식혜의 제조방법을 제공한다.
이하, 본 발명의 구성에 대하여 더욱 상세히 설명한다.
본 발명에서 식혜의 기능성을 보강하기 위하여 첨가되는 생약재는 느릅나무 껍질, 치자, 갈근, 뽕잎, 감초 및 생강으로서, 느릅나무 껍질은 치습(治濕)·이뇨제·소종독(消腫毒)에 사용되고, 치자는 불면증과 황달의 치료에 사용하고 소염 ·지혈 및 이뇨의 효과가 있으며, 갈근은 한방에서 발한 ·해열 ·완하제(緩下劑)로서, 고열 ·두통 ·고혈압 ·심부전 ·설사 ·어깨가 결릴 때 등에 사용된다. 뽕잎은 열내림, 기침멎이의 효과가 있으며, 감초는 감미를 증진시키는 효과가 있고, 생강은 소화불량·구토·설사에 효과가 있고, 혈액 순환을 촉진하며, 항염증과 진통 효과가 있다.
본 발명은 엿기름액 제조시에 생약재를 첨가하여 생약재가 첨가된 엿기름액을 제조한다.
식혜의 제조 중에는 엿기름 제조시 또는 당화과정시에, 생약재를 첨가하여 식혜제조에 있어 필수적인 엿기름 제조공정과 당화공정에 병행하여 생약재를 열수추출할 수 있는 특징이 있는데, 당화공정에 첨가하는 것 보다 엿기름 제조공정에 생약재를 첨가하는 것이 쓴 맛의 발생이 적고, 따라서 생약성분을 많이 첨가시킬 수 있는 장점이 있다.
이는 본원발명에서 엿기름 액의 제조시에 온도가 더 높아 열수추출의 효과가 우수하며, 침출과 동시에 엿기름으로부터 유래한 여러 효소들의 작용을 받아 생약재로부터 유효성분들을 보다 효율적으로 침출시킬 수 있기 때문이다.
또한, 본 발명은 별도의 추출공정 없이 생약재로부터 유효성분을 추출해 낼 수 있으므로, 공정을 단순화시키는 장점도 있다.
본 발명의 건강 식혜에서 사용되는 생약재들은 그 형태에 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유효성분의 침출이 용이하게 이루어지도록 수분함량이 10% 이하가 되도록 건조된 후, 0.1∼0.5cm로 분쇄된 것을 사용한다.
또한, 본 발명에 사용되는 생약재들은 고유의 맛이 강하고 특유의 자극적인 향취를 갖고 있어 식혜의 전반적인 기호성을 해칠 수 있으므로, 엿기름 물 중량에 대해 균등하게 3.0중량% 첨가한다. 한편, 제조된 한방식혜에 기호에 따라 감미료를 추가로 첨가하여 섭취할 수 있다.
상기와 같이 제조되는 본 발명의 식혜는 하기 실험예에 의한 실험결과 암발생을 억제하는 효과가 발생한다.
이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예를 들어 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
실시예1: 본원발명인 한방 식혜의 제조
찹쌀 25 g, 율무 25 g을 혼합한 후, 100 g의 물을 붓고 2시간 동안 실온에서 불린 후, 120℃의 온도에서 10분 동안 증자하여 식혜밥을 준비하였다.
또한, 정제수 500 g에 엿기름 47 g, 느릅나무 껍질 분말 0.5 g, 치자 분말 0.5 g, 갈근 분말 0.5 g, 뽕잎 분말 0.5 g, 감초 분말 0.5 g 및 생강 분말 0.5 g을 첨가한 후 60℃의 온도로 2시간 동안 열수추출하여 엿기름액을 얻었다.
상기 2단계를 통해 준비된 식혜밥과 엿기름액을 혼합한 후 50℃에서 5시간 동안 당화시켜 한방 식혜를 제조하였다.
비교예1: 한약재를 첨가하는 것을 빼고는 본원발명과 동일한 과정으로 제조된 일반 식혜의 제조
엿기름액의 제조에 있어, 한약재를 첨가하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 일반 식혜를 제조하였다. 다만, 이때 첨가되는 엿기름이 양은 50 g으로 하였다.
실험예 1: 관능검사
전문 관능검사 요원 10명을 대상으로 하여, 실시예1 및 비교예1의 식혜에 대하여 식혜의 향미를 다음의 평가기준으로 점수화하였다. 평가는 3회에 걸쳐 반복실시하였으며 그 값을 표 1에 나타내었다.
| 패널1 | 패널2 | 패널3 | 패널4 | 패널5 | 패널6 | 패널7 | 패널8 | 패널9 | 패널10 | 총합 | |
| 점수 | 4 | 5 | 3 | 4 | 5 | 3 | 3 | 5 | 4 | 4 | 40 |
| 점수는 비교예 1에서 제조한 일반식혜에 비교한 실시예1에서 제조한 한방식혜의 우수성 및 열등성을 나타내며, "매우 우수하다" 5 점, "우수하다" 4 점, "비슷하다." 3 점, "불량하다" 2 점, "매우 불량하다." 1 점으로 점수를 부여하였다. | |||||||||||
상기 표 1의 결과로부터, 본 발명의 한방 식혜는 통상의 예측과 달리 한약재의 첨가에도 불구하고, 일반 식혜와 거의 비슷한 정도의 향미를 갖고 있으며, 은은하게 나는 한약 특유의 향으로부터 건강식품이라는 인식이 생기게 함으로써, 오히려 바람직스러운 풍미를 나타낸다는 것을 확인할 수 있었다.
실험예2: 본 발명 한방 식혜의 고형암 성장저지 효과
본 실험예에서는 상기 실시예1로부터 얻은 식혜(이하, "한방식혜"라 한다)와 비교예1로부터 얻은 식혜(이하, "일반식혜"라 한다)에 의한 항종양효과를 보기 위하여 Balb/c 마우스의 왼쪽 서혜부 피하에 'sarcoma-180' 종양세포를 이식시킨 후 20일 동안 0.25 mg/kg 시료를 투여하고, 이로부터 32일이 지난 다음 마우스를 해부하여 종양을 분리하고 그 무게를 측정하였다.
실험결과, 표 2에 나타낸 바와 같이 종양세포만 이식한 대조군(S-180+PBS, 시료대신 동량의 PBS만 투여)은 종양의 무게가 5.98g인 반면, 한방식혜를 주사한 군(S-180+FS)은 4.45g으로 감소하여 현저한 종양생성 억제효과를 보였으며, 일반식혜를 주사한 군(S-180+CS)은 5.90g으로 대조군과 큰 차이를 보이지 않았다.
따라서, 한방식혜가 고형암 성장저지 효과가 있음을 알 수 있었다.
| 샘플 | 투여량(mg/kg) | 종양 무게(g) |
| S-180+PBS | 0.25 | 5.98±0.02 |
| S-180+CS1 | 0.25 | 5.90±0.74 |
| S-180+FS2 | 0.25 | 4.45±1.12 |
| [주] 1: 일반식혜 2: 한방식혜 | ||
실험예3: 식혜를 식이로 급여한 마우스 각 장기 중량변화
본 발명 한방식혜와 일반식혜가 종양 외에 다른 기타 기관에서의 작용을 측정하기 위하여, 대조군(Control)은 자유식이만을 시켰고, 종양세포대조군(S-180+PBS)에는 자유식이를 시키고 주사로 PBS를 투여하였고, 처리군은 자유식이를 주고 주사로 종양세포대조군과 동량인 식혜물을 종양세포(Sarcoma-180 세포)이식 후 상기 실험예 2와 동일하게 시료를 20일 동안 투여하고 각 장기의 중량을 측정하였다.
실험결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 먼저 대사과정 중에 생기는 여러 유해한 물질들의 해독작용을 담당하는 간의 중량비는 종양세포만 이식한 대조군(S-180+PBS)과 일반식혜를 주사한 군(S-180+CS)이 한방식혜를 주사한 군(S-180+FS)에 비해 다소 높았고, 비장의 경우도 식혜를 주사한 군이 종양세포만 이식한 대조군에 비해 낮았으나, 일반식혜를 주사한 군과는 큰 차이는 없었다.
| 샘플 | 체중(g) | 비장/몸무게(%) | 간/몸무게(%) | 심장/몸무게(%) | 신장/몸무게(%) |
| 대조군 | 28.85±1.8 | 0.35±0.01 | 5.71±0.5 | 0.51±0.14 | 1.87±0.06 |
| S-180+PBS | 29.4±1.4 | 1.57±0.10 | 7.73±0.8 | 0.33±0.02 | 1.59±0.03 |
| S-180+CS1 | 29.8±1.3 | 1.45±0.10 | 7.56±0.7 | 0.32±0.03 | 1.68±0.19 |
| S-180+FS2 | 28.5±2.0 | 1.39±0.02 | 6.69±0.3 | 0.36±0.02 | 1.65±0.05 |
| [주] 1: 일반식혜 2: 한방식혜 | |||||
실험예4: 본 발명 한방식혜와 일반식혜의 면역활성 증가 효과
본 실험예에서는 실험예3과 동일한 방법으로 종양세포를 이식하고 20일 동안 본 발명 한방식혜와 일반식혜 시료를 투여한 후 각 마우스의 비장을 무균적으로 적출하여 비장의 자연살해(natural killer;NK) 세포 활성을 살펴보았다.
자연살해세포의 활성을 분석하기 위해 먼저 이펙터 세포(Effector cell)인 NK세포를 준비하였다. 마우스의 비장을 클린 벤치(clean bench) 내에서 무균적으로 적출하여 페니실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)을 함유한 5mL의 RPMI 1640 배지로 3회 세척한 후 곱게 마쇄하였다.
이 세포 부유액을 70㎛ 나일론 메쉬로 여과시켜서 원심분리하여 림프구를 모은 다음 이것을 같은 배지에 부유시켰다.
이것을 다시 히스토파쿠에-1077(histopaque-1077)을 이용하여 원심분리(500×g, 30 min, 18℃)를 통해서 림프구를 분리해냈다. 준비한 세포를 10% FCS, 2mM L-글루타민, 페니실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)을 함유한 RPMI 1640 배지에 재현탁시켰다.
이것을 37℃, CO2 배양기에서 1~2 시간 배양시켜서 세포가 배양 플라스크(6cm 페트리디쉬)에 부착되도록 하였다. 비부착성 자연살해 세포를 원심분리하여 수집한 후 배양배지에 재현탁시킨 다음 적정 세포수를 계수하여 사용하였다. 이어서, 자연살해 세포의 세포파괴활성은 MTT 방법으로 분석하였다.
Yac-1 마우스 림포마 세포(Yac-1 mouse lymphoma cell)는 타겟 세포(target cell)로 사용하였다. Yac-1 세포는 NK 세포 활성을 측정하는데 가장 편리한 타겟 세포주이다.
Yac-1 세포는 10% FCS, 2mM L-글루타민 페니실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)를 함유한 RPMI 1640 배지에 5×104cells/mL의 밀도가 되도록 희석한 후 각 웰에 50㎕씩 가하였다.
그리고, NK 세포×107cells/mL의 NK 세포 활성 분석을 위해서 이펙터 세포와 Yac-1 세포 각각 50㎕씩을 96웰 플레이트에 첨가하였다.
이를 37℃, CO2 배양기 안에서 3일간 배양시킨 후 MTT(5mg/mL) 용액을 10㎕씩 각 웰에 가한 다음 37℃에서 4시간 배양하였다. 여기에 SDS(10% in 0.02N HCl)을 25㎕ 첨가하여 실온에서 30분간 발색시킨 후 540nm에서 OD를 측정하였다. 세포 독성 퍼센트는 하기 공식에 의해 계산하였다.
실험결과, 한방식혜투여군(S-180+FS)이 55.42%의 저해효과를 나타내 가장 높았으며 대조군은 49.35%, 종양세포만을 이식한 경우는 31.52%, 종양세포를 이식하고 일반식혜를 투여한 군은 33.42%를 나타냈다. 상기 결과에서 일반식혜를 투여한 군은 NK세포 면역활성이 낮아 종양세포만 이식한 군과 비슷하게 나타났다.
실험예5: 본 발명 한방식혜와 일반식혜에 의한 마우스 간내의 글루타치온-S-트랜스퍼라아제 활성 변화
간에서 일어나는 대사효소계의 'phaseⅡ' 단계는 내인성 물질이나 외부에서 투여되어지는 독성물질을 포함하거나 수용성 물질로 전환시켜 체외로 배출 시킴으로서 이물질을 제거하는 작용을 하는데 글루타치온-S-트랜스퍼라아제(glutathione-S-transferase)는 환원 글루타치온(reduced glutathione)을 이용하여 체내 독성물질과 과산화물질을 전이, 배설함으로서 무독화에 관여하는 효소이다.
본 실험예에서는 상기 실시예 4와 같이 시료와 식이를 공급한 쥐의 간내 글루타치온-S-트랜스퍼라아제 활성을 측정하였다.
먼저, 글루타치온-S-트랜스퍼라아제(GST) 활성을 측정하기 위해 마우스를 치사시킨 후 4℃ 이하의 생리 식염수로 간을 관류하여 간내에 남아 있는 혈액을 제거한 후 간장을 적출하였다.
간조직 1g 당 0.1M 인산칼륨 버퍼(potassium phospate buffer, pH 7.4)를 가하여 빙냉하에서 글라스 테플론 호모게나이저(glass teflon omogenizer)로 마쇄하였다.
이 마쇄액을 호모게네이트(homogenate) 분획으로 하였으며, 이것을 13,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 핵 및 미마쇄세포부분을 제거하고 다시 105,000×g에서 1시간 동안 초원심분리하여 얻은 상등액을 사이토졸 분획으로 하였다.
0.1M 인산칼륨버퍼(pH 6.5) 중에 0.04M 환원 글루타치온 75㎕을 가한 후 효소액을 0.1mL 넣고 블랭크에는 20% 트리크로아세트산 0.5mL를 가해 효소를 실활시키고 시료는 25℃에서 5분간 반응시킨 후 블랭크와 시료 각각에 0.12M 1-클로로-2,4-디니트로벤젠 25㎕를 가하여 25℃에서 2분간 반응시킨 다음, 시료에 20% 트리클로로아세트산을 가해 반응을 완결시킨 후 원심분리하여 얻은 상등액을 340nm에서 흡광도를 측정한 다음 1-클로로-2,4-디니트로벤젠의 몰 흡광계수 9.6mM1cm-1을 이용하여 활성도를 산정하였다.
효소 활성의 단위는 1분간 mg 단백질이 생성한 2,4-디니트로벤젠-글루타치온의 nmole 수로 표시하였다.
실험결과, 글루타치온-S-트랜스퍼라아제 활성은 종양세포를 이식하지 않은 대조군이 391.5nmol/mg protein/min이었으며 종양세포를 이식한 대조군(S-180 + PBS)에서는 282.5nmol/mg protein/min으로 떨어졌다.
일반식혜를 주사한 군(S-180 + CS)에서는 275.4nmol/mg protein/min으로 종양세포를 이식한 대조군보다 오히려 낮은 수치를 보였으나, 한방식혜를 주사한 군(S-180 + FS)에서는 512.5nmol/mg protein/min으로 종양세포를 이식한 대조군에 비해 글루타치온-S-트랜스퍼라아제의 활성이 현저히 높은 것으로 나타났다.
실험예6: 본 발명 한방식혜와 일반식혜에 의한 마우스 간조직내의 글라이코겐 분포조사
본 실시예에서는 상기 실험예 4와 같이 시료와 식이를 공급한 쥐의 간조직내 글라이코겐 분포를 조사하였다. 쥐의 간을 절취하여 4% 파라포름알데하이드 인 포스페이트-버퍼 사린(paraformaldehyde in phosphate-buffered saline;PBS)에 4℃, 12시간 고정하여 순차적인 탈수와 투명화를 거쳐 파라핀(paraffin)에 포매한 후 6㎛ 연속절편을 제작하였다.
간의 조직학적 변화와 글라이코겐 분포관찰을 위해 탈 파라핀한 후 헤마토실린-에오신(hematoxylin-eosin:H-E) 염색과 PAS(periodic acid Schiff)반응을 실시하였다.
실험결과, 종양세포 'sarcoma-180'를 이식하고 PBS를 투여한 군(S-180 + PBS)은 간 특유의 간소엽 형태를 갖추고 있으나, 약한 혼탁종창, 수포성 변성, 지방변성, 커퍼(Kupffer) 세포변화, 국소적 괴사 등의 변화와 함께 호산성 세포도 일부 관찰되는 등 간세포의 변화를 보이고 있다.
대조군에서 위와 같은 조직학적 변화가 현저히 증가할 뿐만 아니라 호산성세포와 핵이 농염되는 세포가 증가하는 등 많은 변화를 보이는데 특히 간소엽 주변구역에서 심하였다.
일반식혜를 식이한 경우(S-180 + CS)는 조직학적 변화가 S-180 + PBS와 유사하였으며, 한방식혜를 식이한 경우(S-180 + FS)는 지방변성, 커퍼(Kupffer) 세포변화, 국소적 괴사에서 다소 적은 변화를 보였다.
이를 표 4에 정리하였다.
| 그룹/HC | CS | HD | FC | KC | FN |
| 정상군 | + | 0-+ | +-++ | + | 0-+ |
| S-180 + PBS | +++ | ++ | +++ | +++ | ++ |
| S-180 + CS | +++ | ++ | +++ | +++ | ++ |
| S-180 + FS | +++ | ++ | ++ | ++ | + |
| [주] HC: 조직적 변화, CS: 종기형성, HD: 수증 변질, FC: 지방질 변화, KC: 커퍼 세포 반응, FN: 병소 회저 0:변화가 없거나 무시해도 좋을 정도 +: 약하게 나타남 ++: 적당한 수준으로 나타남 +++: 심하게 나타남 ++++: 매우 심하게 나타남 | |||||
글라이코겐 분포는 정상적인 간조직에 비해 'S-180 + PBS'의 간소엽 주변구역과 중간구역에서 감소하며 'S-180 + CS'와 'S-180 + FS'도 정상군에 비해 간소엽 주변구역에서 다소 감소하였다. 이는 일반식혜보다 본 발명 한방식혜가 간세포를 덜 손상시킴을 나타낸다. 이는 표 5에 정리하였다.
| 그룹 | PZHL | IZHL | CZHL |
| 정상군 | ++++ | ++-+++ | ++-+++ |
| S-180 + PBS | +++ | ++ | ++-+++ |
| S-180 + CS | ++-+++ | ++-+++ | ++-+++ |
| S-180 + FS | +++ | ++-+++ | ++-+++ |
| [주] PZHL: 간소엽 말초지역, IZHL: 간소엽 중간지역, CZHL: 간소엽 중앙지역, 0:변화가 없거나 무시해도 좋을 정도 +: 약하게 나타남 ++: 적당한 수준으로 나타남 +++: 심하게 나타남 ++++: 매우 심하게 나타남 | |||
실험예7: 본 발명 한방식혜와 일반식혜에 의한 마우스 간조직의 면역조직학적 반응
본 실험예에서는 상기 실험예 4와 같이 시료와 식이를 공급한 쥐의 간조직에 대한 종양관련 단백질의 면역조직화학적 반응을 보기 위해 각 종양과 관련된 단백질에 대한 면역조직학적 관찰을 위해 탈파라핀하여 10mM 소듐 시트레이트 버퍼(pH 6.0)에서 95℃ 5분간 처리하였고, 다시 실온에서 동일 버퍼에 20분 두었다.
이를 3% 메탄올 하이드로전 퍼옥사이드에 30분간 실온에서 처리하고 PBS(0.01M, pH 7.5)로 5분간 3회 세척한 후 비특이성 반응을 없애기 위하여, 'goat normal serum(Vector Lab., PK-6101)'으로 실온에서 30분간 처리하였다.
이를 제거하고 'Santa Cruz Biotechnology Inc' 제품의 Bax(sc-493), Bcl-2(sc-783), Rb(sc-050), c-fos (sc-253), c-jun(sc-1694)을 500:1로 희석하여 4℃ 습실에 16시간 동안 반응시켰다.
PBS로 세척하고 'biotinylated anti-rabbit lgG(Vector Lab., PK-6101)'를 실온에서 30분 동안 반응시켰으며, PBS로 세척하고 ABC 키트(avidin-biotin-peroxidae complex, vector Lab., PK-6101)에 실온에서 60분간 반응시켰다.
다시 PBS로 세척한 후 'DAB substract' 키트(vector Lab., SK-4100)로 실온에서 5분간 발색시켰다. 증류수로 세척하여 'Mayer's hematoxylin'으로 대조 염색한 후 광학현미경하에서 반응정도를 판정하였다.
실험결과, 간세포에 대한 종양관련 단백질의 면역조직화학적 반응을 보면 6가지 항체중 Bax, Rb, c-fos에만 반응을 나타내며 세포질에 비해 핵에서 강한 반응을 보였으며 일부 간세포사이의 염증세포에서도 반응을 나타내었다.
Bax는 핵에서만 반응을 나타내며 정상군에 비해 'S-180 + PBS'와 'S-180 + CS'는 감소하였으며 한방식혜인 'S-180 + FS'에서는 감소정도가 적었다.
Rb는 핵과 세포질 모두에서 정상군에 비해 'S-180 + PBS'와 'S-180 + CS'의 경우에 증가하여 특히 중심정맥주위 간세포의 세포질의 변화가 심하였으나 한방식혜인 'S-180 + FS'의 경우는 세포질의 변화는 적었다.
c-fos는 정상군의 핵과 세포질에 비해 'S-180 + PBS'에서 증가하는데 일반식혜 'S-180 + CS'와 한방식혜 'S-180 + FS'에서도 대조군과 유사하게 증가하였다. 이를 표 6에 정리하였다.
| 그룹 | 지역/항체 | Bax | Bcl-2 | Rb | c-jun | c-fos |
| 정상군 | 핵세포질 | ++++0 | 00 | +++0-+ | 00 | +++0-+ |
| S-180 + PBS | 핵세포질 | ++0 | 00 | ++++++ | 00 | ++++++ |
| S-180 + CS | 핵세포질 | ++-+++0 | 00 | +++++ | 00 | ++++ |
| S-180 + FS | 핵세포질 | +++0 | 00 | ++++ | 00 | ++++-++ |
| [주] 0:변화가 없거나 무시해도 좋을 정도 +: 약하게 나타남 ++: 적당한 수준으로 나타남 +++: 심하게 나타남 ++++: 매우 심하게 나타남 | ||||||
이상 상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 엿기름 분말에 느릅나무 분말, 치자 분말, 갈근 분말, 뽕잎 분말, 감초 분말 및 생강 분말을 혼합한 후 열수추출하여 얻어지는 엿기름액을 찹쌀, 율무로부터 제조된 식혜밥에 첨가하여 당화시킴으로써 암예방의 기능성을 보강된 식혜를 제조할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로, 건강식품 산업상 매우 유용한 것이다.
Claims (2)
- 찹쌀 25 중량부, 율무 25 중량부를 혼합한 후, 100 중량부의 물을 붓고 2시간 동안 실온에서 불린 후, 120℃의 온도에서 10분 동안 증자하여 식혜밥을 준비하는 단계;정제수 500 중량부에 엿기름 47 중량부, 느릅나무 껍질 분말 0.5 중량부, 치자 분말 0.5 중량부, 갈근 분말 0.5 중량부, 뽕잎 분말 0.5 중량부, 감초 분말 0.5 중량부 및 생강 분말 0.5 중량부를 첨가한 후 60℃의 온도로 2시간 동안 열수추출하여 엿기름액을 얻는 단계; 및상기 단계를 통해 준비된 식혜밥과 엿기름액을 혼합한 후 50℃에서 5시간 동안 당화시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 한방 식혜의 제조방법.
- 제1항의 방법에 의하여 제조됨으로써, 암예방 기능이 있는 한방 식혜.
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