KR100507989B1

KR100507989B1 - 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 갖는 고삼 추출물 또는 프레닐플라보노이드화합물을 함유하는 조성물

Info

Publication number: KR100507989B1
Application number: KR10-2003-0000524A
Authority: KR
Inventors: 이현선; 김영국; 노문철; 김관회; 김환묵; 이창우; 김동현; 고정숙; 정미연
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2003-01-06
Filing date: 2003-01-06
Publication date: 2005-08-17
Also published as: KR20040063200A

Abstract

본 발명은 고삼 (Sophorae Radix)으로부터 분리된 추출물 또는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase, DGAT) 효소 저해활성을 갖는 고삼의 조추출물 또는 에틸아세테이트 추출물 또는 하기 일반식(Ⅰ) 또는 일반식(Ⅱ)로 표시되는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물에 관한 것이다.

본 발명의 프레닐플라보노이드 화합물은 DGAT 효소 활성저해에 의한 중성지방의 체내 흡수와 간, 지방 세포 및 근육 세포 등에서의 중성지방의 생합성을 저해하여 혈중 중성지방을 강하시키고, 중성지방의 장기 내 축적을 억제함으로써, 비만, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 등과 같은 중성지방 흡수·대사이상에 의한 질병의 예방 및 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.

(Ⅰ)

(상기 화학식 1에서 R¹, R², R³ 및 R⁴은 명세서에서 기재한 바와 같다.)

(Ⅱ)

(상기 화학식 2에서 R⁵은 명세서에서 기재한 바와 같다.)

Description

아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해 활성을 갖는 고삼 추출물 또는 프레닐플라보노이드 화합물을 함유하는 조성물 {Composition comprising the extract of Sophorae Radix or Prenylflavonoids having acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase - inhibitory activity}

본 발명은 중성지방 흡수와 생합성 저해 활성을 나타내는 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 갖는 고삼 추출물 또는 고삼에서 분리한 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 함유하는 중성지방 흡수·대사이상에 의한 질병의 예방 및 치료용 약학조성물에 관한 것이다.

아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제(Acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase, 이하 ‘DGAT’라 약칭함)는 글리세롤 3-포스페이트(Glycerol 3-phosphate) 경로의 마지막 과정을 촉매하는 효소로서, 1,2-디아실글리세롤(sn-1,2-diacylglycerol)과 지방 아실코에이(Fatty acyl CoA)를 기질로 사용하여 트리글리세라이드(Triglyceride) 중성지방을 합성하는 역할을 한다. 외부로부터 섭취된 중성지방은 췌장에서 분비된 리파제(lipase)에 의해 지방산(fatty acid)과 모노글리세라이드(monoglyceride)로 분해되어 장의 상피세포를 통해 흡수된 후, DGAT에 의해 중성지방으로 재합성된다. 중성지방의 생합성은 글리세롤 3-포스페이트 경로(간과 지방조직)와 모노아실글리세롤 경로 (소장의 장 상피세포)를 통해 이루어지며, 이들 생합성 과정에 작용하는 효소인 DGAT의 선택적 저해에 의한 중성지방의 흡수 및 생합성의 저해는 비만, 고중성지방혈증, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 등과 같은 중성지방 흡수·대사이상에 의한 질병의 예방 및 치료에 효과적인 것으로 부상되고 있다(Chen HC, et al.; Trends Cardiovasc. Med., 10, pp188-192, 2000; Farese Jr. et al.; Curr. Opin. Lipidol., 11, pp229-234, 2000). 최근에 고중성지방혈증(hypertriglyceridemia)은 관상동맥질환(coronary heart disease)의 주요한 요인으로 인식되어 왔으며 중성지방(triglyceride)을 낮추고 HDL 콜레스테롤(high density lipoprotein cholesterol)을 높여 줌으로써 관상동맥질환의 발병율을 감소시킨다고 보고되었다(Rubins et al.; New Engl. J. Med., 341, pp410-418, 1999). 또한, 혈중 중성지방의 농도 증가는 췌장염과 같은 질병상태에서 일어날 수 있다. 지방대사 장애(지방이영양증, lipodystrophy)는 고중성지방혈증 뿐만 아니라 체지방의 손실, 심각한 당뇨, 왕성한 식욕, 간, 비장, 췌장 및 신장의 비대를 포함하는 임상적 증상을 수반하며 인슐린 저항성과 고혈당성의 증상도 수반한다.

DGAT는 생체의 지방세포, 소장내의 장 상피세포, 유선, 골격근 및 심근등의 조직, 식물, 미코박테리움속 및 스트렙토미세스 속의 미생물, 곰팡이 및 곤충에서 발견된다. DGAT는 중성지방 합성과 흡수에 관여하며 장관내에서의 지방 흡수, 리포단백질의 합성, 혈장 중성지방의 조절, 지방세포 내 지방 축적, 근육에서의 에너지 대사, 유즙의 분비 등과 연관되어 중요한 생리적 기능을 담당하고 있고 그 활성은 생체 대사조절 상태에 따라 조절된다(Lau TE et al.; Lipids, 31, pp277-283, 1996). 최근 DGAT 유전자의 생체내 기능을 밝히기 위해, 스미스 등에 의해 만들어진 DGAT-결핍 쥐로부터 DGAT에 의한 선택적인 중성지방의 합성저해가 고중성지방혈증과 비만의 치료에 유용하다는 보고가 있었다(Smith et al.; Nature Genetics, 25, pp87-90, 2000).

현재까지 DGAT 효소저해제의 합성품은 알려진 것이 없으며, 단지 천연물로부터 분리된 몇 종 만이 보고되어 있는 실정이다. 국내의 경우, 비만과 고지혈증 등의 중성지방의 흡수와 대사이상에 의한 질병의 분자표적으로서 DGAT 효소저해제를 개발하는 연구는 본 연구팀 (한국생명공학연구원, 지질대사연구실)이 처음으로 시작하여 최근에 고려인삼으로부터 비만억제활성을 갖는 신규물질을 찾아내어 보고한 바 있으며(대한민국 특허 출원번호 2001-75636, 출원일자 2001. 12. 1), 생약자원인 오수유와 단삼으로부터 분리한 퀴놀론 알칼로이드와 탄시논계 물질을 보고한 바 있다 (대한민국 특허출원 제 2002-64744, 출원일자 2002년 10월 23일; Ko et al.; Arch. Phar. Res., 25, pp446-448, 2002). 국외의 경우, 일본의 기타사토 연구소의 오무라(Omura) 그룹에서 보고한 저해제로 로셀리핀 (roselipins) [Gliocladium roseum KF-1040, IC₅₀; 15-22 μM], 아미뎁신 (amidepsines) [Humicola sp. FO-2942, IC₅₀; 10-50 μM] 및 크산토후몰 (xanthohumols) [Humulus lupulus, IC₅₀; 50-194 μM], 그 외 에이코사펜타에노익산(eicosapentaenoic acid), 2-브로모옥타노에이트(2-bromooctanoate) 등이 보고되어 있을 뿐이다(Tabata et al.; Phytochemistry, 46, pp683-687, 1997; Rustan et al.; J. Lipid. Res., 29 , pp1417-1426, 1988).

한편, 고삼 (Sophorae Radix)은 콩과 (Leguminosae)에 속하는 다년생초본인 도둑놈의 지팡이(Sophora angustifolia S. et. Z) 뿌리의 코르크층을 제거하여 건조시킨 것으로서 매우 쓴맛을 지니고 있다(김창민 외, 중약대사전, 1 권, pp340-347, 1997, 도서출판 정담, 서울). 예로부터 고삼은 고미건위약으로 적리, 장출혈, 치질 등에 사용되어 왔다. 또한, 상기 고삼으로부터 다양한 종류의 알칼로이드, 프레닐플라보노이드, 트리테르펜 등의 성분이 분리되었고, 상기 성분들은 항부정맥 작용, 항궤양 활성, 항천식 활성, 항균작용, 테스토스테론 5-α-리덕타제 저해 활성, 항바이러스 활성, 암세포에 대한 세포독성 등의 작용이 보고되어있다 (Li H. et al.; Acta Pharmcol. Sin., 24, pp147-150, 1989; Kuroyagani N. et al.; J. Nat. Prod., 62, pp1596-1599, 1999; Woo ER. et al.; J. Nat. Prod., 61, pp1552-1554, 1998). 그리고, 대한민국 특허출원 제 2000-77932호에서는 고삼에서 추출한 프레닐플라보노이드 유도체의 항염증작용을 개시하고 있다.

이에, 본 발명자들은 천연자원인 고삼으로부터 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제를 억제하는 활성물질을 탐색하는 과정에서 프레닐플라보노이드 화합물을 발견하였고, 상기 화합물 및 추출물이 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 활성 저해활성이 있음을 확인하고 동물실험을 통해 비만, 고중성지방혈증, 고지혈증 등과 같은 중성지방 흡수 및 대사 이상에 의한 질병의 예방 또는 치료에 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해 활성을 갖는 고삼 추출물 또는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 고삼 조추출물을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기 조추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 극성용매 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물을 의미한다.

또한, 본 발명은 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 고삼 비극성용매 가용추출물을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기 비극성용매 가용추출물은 에틸아세테이트, 클로로포름과 같은 비극성용매, 바람직하게는 에틸아세테이트에 가용한 추출물을 의미한다.

또한, 본 발명은 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물 및 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 고삼으로부터 조추출물, 비극성용매 가용추출물 및 프레닐 플라보노이드 유도체 화합물들은 하기와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 고삼 조추출물은, 건조된 고삼을 세절하여 무게(㎏)의 약 3배 내지 20배, 바람직하게는 약 5배 내지 10배의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올로, 20 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 30℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 3일 내지 8일간 냉침, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 바람직하게는 냉침 추출방법을 이용하여 수득한 추출액을 여과, 감압농축하여 극성용매 가용추출물인 조추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 조추출물들을 포함하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한 본 발명의 비극성 용매 가용 추출물은 상기 조추출물을 증류수에 현탁한 후, 이를 현탁액이 약 1 내지 100배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 에틸아세테이트, 클로로포름와 같은 비극성 용매를 가하여 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 5회 비극성용매 가용층을 추출, 분리하여 수득할 수 있다. 또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. pp 6-7, 1998).

상기 본 발명의 화합물은 상기 비극성용매 가용추출물을 가지고 실리카겔 컬럼크로마토그래피와 같은 흡착크로마토그래피를 수행하며, 바람직하게는 실리카겔컬럼에 디클로로메탄:메탄올 1:0 내지 10:1(w/w)비, 바람직하게는 1:0 내지 5:1 비를 갖는 전개용매를 컬럼에 전개시켜 분획 후, 다시 실리카겔컬럼크로마토그래피 또는 Rp-18(ODS) 컬럼크로마토그래피와 같은 역상크로마토그래피를 반복 수행하여 하기 일반식 (Ⅰ)의 화합물군 및 일반식 (Ⅱ)의 화합물군을 분리할 수 있다. 이 때 전개용매를 클로로포름, 메탄올, 증류수 또는 이들의 혼합용매(예: 클로로포름:메탄올(30:1→1:1) 또는 메탄올:물(6:4)→ 메탄올(10:0))를 사용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 고삼으로부터 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 조추출물, 에틸아세테이트 가용추출물 및 하기 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 분리, 정제하는 방법을 제공한다.

(Ⅰ)

상기 화학식 1로 표시되는 퀴놀론 화합물에 있어서, R¹은 H, OH(α), 또는 OH(β); R²는 H 또는 CH₃; R³는 H, 또는; R⁴는 H, , 또는 인 것을 포함하며, 바람직하게는 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물의 유도체는 프레닐플라보노이드 화합물이며, 더욱 바람직하게는 하기 화학식 3 내지 화학식 11로 표시되는 큐라리논(kurarinone), 소포라플라바논 지(sophoraflavanone G), 큐라리놀(kurarinol), 큐세놀 에이치(kushenol H), 큐세놀 케이(kushenol K), 큐세놀 비(kushenol B), 큐세놀 엠(kushenol M), 큐세놀 이(kushenol E), 큐세놀 엘(kushenol L)인 화합물을 포함한다.

(Ⅱ)

상기 화학식 2로 표기되는 찰콘(chalcone) 화합물에 있어서, R⁵이 인 것을 포함하고, 바람직하게는 본 발명의 화학식 2로 표시되는 화합물의 유도체는 찰콘 (chalcone) 화합물이며, 하기 화학식 12의 큐라리딘 (kuraridine)인 것이 바람직하다.

본 발명은 고삼으로부터 상기 제법에 의해 수득된 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 갖는 고삼의 조추출물 및 비극성용매 가용추출물을 제공한다.

본 발명은 상기 제법에서 얻어지는 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 갖는 상기 고삼의 조추출물 또는 비극성용매 가용추출물을 유효성분으로 함유하고 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 중성지방 흡수·대사이상 질환 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명은 고삼으로부터 상기 제법에 의해 수득된, 상기 일반식 (Ⅰ) 및 (Ⅱ)로 표시되는 프레닐플라보노이드 화합물 및 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해제로서의 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 제법에서 얻어지는 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 갖는 상기 일반식 (Ⅰ) 및 (Ⅱ)로 표시되는 프레닐 플라보노이드 화합물을 유효성분으로 함유하고 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 중성지방 흡수·대사이상 질환 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 약학조성물을 이용하여 예방 및 치료할 수 있는 중성지방 흡수·대사이상에 의한 질병으로는 비만, 고중성지방혈증, 내인성 지혈증, 에탄올 지혈증, 트리토 지혈증, 아드레날린 지혈증, 메틸우라실 지혈증 등의 다양한 고지혈증, 관상동맥질환, 지방간 또는 간손상, 동맥경화증, 동맥경화증으로 인한 합병증 등을 포함한다.

본 발명의 방법에 따라 고삼으로부터 분리 정제된 상기 화학식 1로 표시되는 프레닐플라보노이드 화합물의 유도체인 화학식 3, 화학식 4, 화학식 5, 화학식 6, 화학식 7, 화학식 8, 화학식 9, 화학식 10, 화학식 11, 화학식 12의 화합물을 이용해 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성을 측정한 결과, IC₅₀은 각각 30.2μM, 10.9μM, 8.6μM, 142.0μM, 250.0 μM, 10.2 μM, 31.1 μM, 20.8 μM, 92.5 μM, 및 9.8 μM로 나타났다.

DGAT 활성을 저해하면 장내로의 중성지방의 흡수가 저해되고, 혈중 중성지방을 강하시키며, 간, 지방 세포, 근육 세포 등에서의 중성지방의 생합성을 감소시키는 작용을 하기 때문에, 본 발명에서 제조한 화합물들은 중성지방 흡수·대사이상에 의한 질병의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.

또한, 고삼은 오랫동안 생약으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출 분리된 본 발명의 화합물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다. 따라서, 본 발명의 화합물들을 유효성분으로 함유하는 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물을 제조할 수 있다.

본 발명의 중성지방 흡수·대사이상 질환 예방 및 치료용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 중성지방 흡수·대사이상 치료용 약학조성물은 상기 일반식 (Ⅰ) 또는 일반식 (Ⅱ)의 프레닐플라보노이드 유도체 화합물을 유효성분으로 포함하고, 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 기술을 가진 자가 용이하게 알 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용이 가능한 담체, 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조할 수 있다. 이때 제제 형태는 오일 또는 수성매질 중의 용액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

일반식 (Ⅰ) 또는 일반식 (Ⅱ)의 화합물은 임상투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 일반식 (Ⅰ) 또는 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물은 실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화를 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제한다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 일반식 (Ⅰ) 또는 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose) 및 젤라틴 등을 섞어 조제한다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 제조 방법에 따라 분리 정제된 화합물을 함유하는 조성물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하고, 일반적으로 그 유효용량은 경구투여인 경우에는 보통 성인을 기준으로 1회에 1 내지 500 ㎎이 바람직하며, 정맥투여인 경우에는 10 내지 100 ㎎이 바람직하다. 추출물의 경우에는 1 내지 100㎎의 양으로 투여할 수 있다. 특정환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것 일뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예. 분석기기

본 발명에서 사용된 자외선 분광광도 스펙트럼(UV) 기기는 시마주 UV-260 스펙트로포토미터 (Shimadzu UV-260 spectrophotometer,Shimadzu사)를 사용하였으며, 수소 핵자기 공명 스펙트럼(¹H-NMR) 기기는 배리안 유니티 300 NMR (Varian UNITY 300 NMR, Varian사)을 사용하였으며, 전자충격 질량분석기(EI-MS)는 휴렛팩커드 5989A (Hewlettpackard 5989A, Hewlettpackard사)을 사용하여 조사하였다.

실시예 1. 고삼으로부터 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해제의 분리 및 정제

1-1. 고삼 메탄올 조추출물 제조

경동시장에서 구입한 고삼 21 ㎏을 세절하여 메탄올 100 ℓ에 침지시킨 후 실온에서 7일간 방치하여 추출액을 수득하고, 다시 50ℓ의 메탄올을 가하여 1회 더 추출하였고, 상기 각 추출액을 여과한 후, 여과액을 혼합하였다. 상기 메탄올 추출물을 감압, 농축 및 건조하여 총 추출물 2000g을 수득하였으며, 이 중 2g을 취하여 효소활성검색을 위한 시료로 사용하였다.

1-2. 고삼 에틸아세테이트 가용추출물의 제조

상기 총 추출물 2000g을 2ℓ의 증류수에 현탁시킨 다음, 에틸아세테이트 10 ℓ를 가하여 3회 추출하였으며, 아실 코에이 : 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해 활성이 높은 에틸아세테이트 분획 12ℓ를 수득하였다. 상기 수득한 에틸아세테이트 분획을 감압, 농축하여 에틸아세테이트 가용부 950g을 수득하였으며, 이 중 2g을 취하여 효소활성검색을 위한 시료로 사용하였다.

실시예 2. 프레닐 플라보노이드 유도체의 분리

2-1. 에틸아세테이트 가용추출물의 분획

상기 실시예 1-2의 에틸아세테이트 가용부 950g을 동량의 실리카겔 (230-400 mesh, Art. 9385, Merck사)에 흡착시킨 후 실리카겔 컬럼크로마토그래피(10×90㎝)를 수행하였다. 이때 전개용매로서 디클로로메탄 (CH₂Cl₂)을 초기 용매로 하여 메탄올의 양을 증가시켜 디클로로메탄 : 메탄올 혼합액(1 : 1)까지 극성을 올리면서, 시간당 1000㎖로 수행하여 아실 코에이 : 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성 물질을 용출시켜 10개의 분획으로 나누었다.

각각의 분획에 대해 실리카겔크로마토그래피와 Rp-18(ODS) 컬럼크로마토그래피를 반복적으로 행하여 하기 10개의 화합물을 얻었다.

(1) 화합물 1 : 큐라리논

화합물 1 큐라리논은 실시예 2-1의 에틸아세테이트 분획들 중 6번째 분획을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(10 x 8O㎝, 전개용매; 클로로포름: 메탄올(30:1 →1:1))를 수행하여 시간당 300㎖로 수행하여 4 개 분획물을 얻었다. 이중 2번째 분획물(70g)을 Rp-18(ODS) 컬럼크로마토그래피를 사용한 역상크로마토그래피 (8 x 8O㎝, 전개용매; 60% 메탄올(증류수에 희석)→100% 메탄올)를 수행하여 시간당 300㎖로 수행하여 7개의 분획물을 얻었다. 이 중 4번째 분획물에서 큐라리논 (kurarinone) 15 g을 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말상,

물질의 분자식과 분자량: C₂₆H₃₀O₆,438

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 290

전자충격 질량분석(70eV): m/z(rel. int) = 438(M⁺,missing), 423(12), 422(22), 300(30), 299(100), 153(47), 124(49), 110(55), 109(44)

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.41, 1.51, 1.62(각각 3H, s), 1.95(2H, m), 2.45(1H, dd, J=2.6, 16.0 Hz), 2.48(1H, m), 2.50(2H, m), 2.82(1H, dd, J=13.2, 16.0 Hz), 3.68(3H, s), 4.46과 4.53(각각 1H, brs), 4.85(1H, m), 5.42(1H, dd, J=2.5,13.2 Hz), 6.10(1H, s), 6.23(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.31(1H, d, J=2.2 Hz), 7.20(1H, d, J=8.4 Hz)

(2) 화합물 2 : 소포라플라바논 G

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 소포라플라바논 G를 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말상,

물질의 분자식과 분자량: C₂₅H₂₈O₆, 424

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 293 및 340

전자충격 질량분석(70eV): m/z(rel. int) = 424(M⁺,70), 406(4), 301(78), 283(84), 165(100),

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.43, 1.53, 1.57(각각 3H, s), 1.90(2H, m), 2.38(1H, m), 2.42(2H, m), 2.61(1H, dd, J=2.8, 17.2 Hz), 3.08(1H, dd, J=13.2, 17.2 Hz), 4.46과 4.53(각각 1H, brs), 4.85(1H, m), 5.45(1H, dd, J=2.8,13.2 Hz), 5.92(1H, s), 6.25(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.33(1H, d, J=2.2 Hz), 7.20(1H, d, J=8.4 Hz), 12.12(1H, s)

(3) 화합물 3 : 큐라리놀

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐라리놀을 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 무색 침상결정,

물질의 분자식과 분자량: C₂₆H₃₂O₇, 456,

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 285, 325(sh)

고속원자충격 질량분석(FAB-MS): m/z(rel. int) = 457(M⁺＋1,40), 315(40), 307(70), 289(50), 179(70), 155(100), 138(99)

수소 핵자기 공명스펙트럼[500MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 0.96(6H, s), 1.09, 1.18(각각 1H, m), 1.28(2H, m), 1.57(3H, s), 2.33(1H, m), 2.50(2H, m), 2.52(1H, dd, J=2.2, 16.0 Hz), 2.82(1H, dd, J=13.2, 16.0 Hz), 3.70(3H, s), 4. 03, 4.49과 4.56(각각 1H, brs), 5.45(1H, dd, J=2.2,13.2 Hz), 6.13(1H, s), 6.28(1H, dd, J=1.8, 8.3 Hz), 6.36(1H, d, J=1.8 Hz), 7.23(1H, d, J=8.4 Hz)

(4) 화합물 4 : 큐세놀 H

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 H를 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₂₆H₃₂O₈, 472

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 288, 325

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 454(M⁺-H2O, 10), 436(10), 313(100), 285(15), 179(20), 153(60), 123(10)

수소 핵자기 공명스펙트럼[500MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 0.97(6H, s), 1.09, 1.14(각각 1H, m), 1.25(2H, m), 1.49(3H, s), 2.28(1H, m), 2.40(2H, m), 3.71(3H, s), 3.97(1H, brs), 4.36(1H, dd, J=1.0, 11.0 Hz), 4.41과 4.48(각각 1H, brs), 5.21(1H, d, J=11.0 Hz), 6.12(1H, s), 6.23(1H, dd, J=2.0, 8.4 Hz), 6.31(1H, d, J=2.0 Hz), 7.23(1H, d, J=8.4 Hz)

(5) 화합물 5 : 큐세놀 K

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 K를 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₂₆H₃₂O₈, 472

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 290, 325

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 454(M⁺-H2O, 10), 436(10), 313(100), 285(15), 179(30), 153(40), 123(10)

수소 핵자기 공명스펙트럼[500MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 0.94(6H, s), 1.05, 1.16(각각 1H, m), 1.26(2H, m), 1.60(3H, s), 2.32(1H, m), 2.53(2H, m), 3.71(3H, s), 3.82와 3.95(1H, brs), 4.54과 4.59(각각 1H, brs), 5.37(1H, d, J=1.5 Hz), 6.13(1H, s), 6.24(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.31(1H, d, J=2.2 Hz), 7.29(1H, d, J=8.4 Hz)

(6) 화합물 6 : 큐세놀 B

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 B 를 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₃₀H₃₆O₆, 492

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 295, 333

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 492(M⁺,10), 370(26), 369(100), 351(37), 295(40), 233(27)

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.43, 1.53, 1.59, 1.60과 1.69(각각 3H, s), 1.92(2H, m), 2.38(1H, m), 2.52(2H, m), 2.62(1H, dd, J=2.5, 17.2 Hz), 3.17(1H, dd, J=13.2, 17.2 Hz), 3.21(2H, m), 4.53과 4.59(각각 1H, brs), 5.52(1H, dd, J=2.5, 13.2 Hz), 6.25(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.36(1H, d, J=2.2 Hz), 7.25(1H, d, J=8.4 Hz), 12.42(1H, s)

(7) 화합물 7 : 큐세놀 M

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 M을 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₃₀H₃₆O₇, 492

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 298, 350

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 508(M⁺,15), 490(5), 385(82), 367(33), 311(35), 233(100), 177(67)

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.41, 1.48, 1.50, 1.56과 1.66(각각 3H, s), 1.91(2H, m), 2.35(1H, m), 2.49(2H, m), 3.19(2H, m), 4.44과 4.52(각각 1H, brs), 4.62(1H, d, J=11.3Hz), 4.84(1H, t, J=6.6Hz), 5.05(1H, m), 5.28(1H, d, J=11.3 Hz), 6.29(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.35(1H, d, J=2.2 Hz), 7.18(1H, d, J=8.4 Hz), 12.16(1H, s)

(8) 화합물 8 : 큐세놀 E

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 E를 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₂₅H₂₈O₆, 424

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 250,(sh), 290, 316

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 424(M⁺,82), 406(37), 364(30), 363(100), 307(27), 295(27)

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.53, 1.58, 1.50, 1.61과 1.70(각각 3H, s), 2.62(1H, dd, J=2.8, 17.2 Hz), 3.12(1H, dd, J=13.0, 17.2 Hz0, 3.15(4H, m), 5.07(2H, m), 5.52(1H, dd, J=2.8, 13.0 Hz), 6.25(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.34(1H, d, J=2.2 Hz), 7.18(1H, d, J=8.4 Hz), 12.40(1H, s)

(9) 화합물 9 : 큐세놀 L

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐세놀 L을 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₂₅H₂₈O₇, 440

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 288(sh), 298, 334

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 440(M⁺,23), 406(4), 301(78), 283(84), 165(100)

수소 핵자기 공명스펙트럼[300MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.38, 1.47, 1.52과 1.61(각각 3H, s), 3.05와 3.20(각각 2H, m), 4.62(1H, d, J=11.2 Hz), 5.01(2H, m), 5.22(1H, d, J=11.2 Hz), 6.24(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.29(1H, d, J=2.2 Hz), 7.05(1H, d, J=8.4 Hz), 12.17(1H, s)

(10) 화합물 10 : 큐라리딘

상기의 화합물 1과 유사한 방법을 사용하여 하기 화학식으로 표기되는 큐라리딘을 수득하였으며, 화합물을 NMR 및 MS 등과 같은 각종 분석기기로 분석한 결과는 하기와 같다.

물질의 성상: 미황색 분말

물질의 분자식과 분자량: C₂₆H₃₀O₆, 438

자외선 분광광도 스펙트럼[λ_max(㎚) MeOH]: 390

전자충격 질량분석(EI-MS): m/z(rel. int) = 422(M⁺-16,5), 329(5), 299(20), 179(15)

수소 핵자기 공명스펙트럼[500MHz, 디메틸설폭사이드-d₆, δ(ppm)]: 1.49, 1.58과 1.64(각각 3H, s), 2.00(2H, m), 2.45(1H, m), 2.50(2H, m), 3.85(3H, s), 4.49와 4.56(각각 1H, brs), 4.95(1H, m), 6.03(1H, s), 6.30(1H, dd, J=2.2, 8.4 Hz), 6.37(1H, d, J=2.2 Hz), 7.20(1H, d, J=8.4 Hz), 7.84(1H, d, J=15.5 Hz), 7.94(1H, d, J=15.5 Hz), 14.86(1H, s)

실시예 3. 화합물의 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 활성 검정

3-1. DGAT의 활성 측정

본 발명자들은 DGAT의 활성을 측정하기 위해 콜만 등의 방법(Coleman et al.; Methods Enzymol., pp98-103, 1992)에 따라 랫트에서 분리한 마이크로좀 단백질을 효소원으로 사용하고, 기질로서 1,2-디아실글리세롤(Sigma사, D0138)과 [¹⁴C]팔미토일-코에이(Amersham사, CFA583)를 사용하여 효소 반응 후 생성된 [¹⁴C]트리아실글리세롤의 방사능의 양을 측정하였다. 구체적으로, 반응액(175 mM Tris-HCl(pH 8.0), 20 ㎕의 소의 혈청 알부민(10 ㎎/㎖), 8 mM의 MgCl₂, 30 μM의 [¹⁴C]팔미토일 코에이(0.02 μCi, Amersham사) 및 200 μM 1,2-디올레오일 글리세롤)에 메탄올 또는 디메틸설폭사이드(DMSO)에 녹인 시료액 10.0 ㎕을 가하고, 분리한 마이크로좀 단백질을 100 내지 200 ㎍을 넣은 다음 25℃에서 10분간 반응시킨 후, 1.5 ㎖의 반응 종결액 (2-프로판올/헵탄/물 = 80/20/2, v/v/v) 을 가하여 반응을 정지시켰다. 상기 반응으로 생성된 [¹⁴C]트리아실글리세롤을 분리하기 위하여 1 ㎖의 헵탄 및 0.5 ㎖의 증류수를 가하여 진탕한 후 상등액 1 ㎖을 취하고 여기에 2 ㎖의 알칼리성 에탄올 용액(에탄올/0.5 N 수산화 나트륨/물 = 50/10/40, v/v/v)을 가하여 진탕하였다. 상기 진탕액의 상층액 0.65 ㎖을 취하여 LSC (liquid scintillation counter)로 방사능의 양을 측정하고, 아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제의 저해활성은 하기 수학식 1로 계산하였다.

T : 효소반응액에 시료를 넣은 시험구의 cpm 값,

C : 효소반응액에 시료를 넣지 않은 대조구의 cpm 값 및

B : 효소원을 넣지 않고 시료를 넣은 대조구의 cpm 값.

3-2. 고삼의 추출물과 화학식 3 내지 화학식 12의 화합물의 DGAT 저해활성 측정

상기 3-1의 DGAT 활성 측정 방법에 따라 실시예 1-1의 고삼의 메탄올 추출물 및 실시예 1-2의 에틸아세테이트 추출물을 각각 125㎍/㎖의 농도로 첨가하여 DGAT 효소 저해 활성을 측정하였고, 그 결과는 표 1에 나타난 바와 같다.

	농도 (㎍ / ㎖)	DGAT 저해율 (%)
메탄올 추출물	125	50.4
에틸아세테이트 추출물	125	65.5

메탄올 추출물의 용매분획 결과 DGAT 효소저해 활성물질은 에틸아세테이트 분획으로 이행되었음을 알 수 있다.

이 분획으로부터 활성물질을 분리, 정제하기 위해 컬럼 크로마토그래피를 수행하였고, DGAT 저해제로 분리, 정제된 활성물질인 화학식 3 내지 화학식 12의 화합물을 첨가하여 DGAT 효소저해 활성 및 IC₅₀을 측정하였으며, 그 결과는 표 2에 나타내었다.

농도 화합물	DGAT 저해율 (%)						IC₅₀ (1×10^-6M)
농도 화합물	250(1×10^-6M)	125	25	12.5	5	1	IC₅₀ (1×10^-6M)
화학식 3	95	87	75	49	25	13	30.2
화학식 4	99	95	82	72	53	5	10.9
화학식 5	81	77	76	71	59	28	8.6
화학식 6	73	66	38	14	5	3	142
화학식 7	82	51	32	16	14	5	250
화학식 8	98	97	75	68	50	18	10.2
화학식 9	99	96	69	43	27	12	31.1
화학식 10	99	92	74	63	36	12	20.8
화학식 11	99	91	42	26	15	7	92.5
화학식 12	99	89	76	71	54	22	9.8

실시예 4. 큐라리논(화학식 3)의 동물실험

4-1. 큐라리논(화학식 3)의 랫트를 이용한 반복 경구투여시의 비만 억제효과 검증

설치류 랫트를 이용한 큐라리논 (화학식 3) 시료의 반복 경구투여시 비만억제효과를 검증하였다. 사용한 동물은 스프라그-도올리(Sprague-Dawley)계 랫트로서 5주령의 동물을 중앙실험동물에서 입수하여 1주간 순화시킨 후 6주령의 동물을 사용하였다. 사용동물의 성은 암컷으로 대조군 3마리, 시험군(용량군) 4마리를 사용하였으며, 대조군에는 비히클(vehicle)로 사용된 5% 트윈80 (Tween80)을, 시험군에는 5% 트윈80에 녹인 큐라리논 (화학식 3)을 10 ㎎/㎏와 50 ㎎/㎏로 하여 경구로 매일 오후 4시, 하루에 한번 씩 투여하여 20일간 실험하였다. 매일 체중측정을 실시하여 체중을 기준으로 투여량을 산출하였으며, 투여 20일째 되는 날 부검하여 장간막의 지방무게, 복부지방무게, 전장을 측정하였다.

본 시험은 온도 23 ± 3 ℃, 상대습도 50 ± 10%, 조명시간 12시간 (오전 6시-오후 6시), 환기횟수 10-20회/시간. 및 조도 150-300 룩스(Lux)로 설정된 한국생명공학연구원 실험동물동 1079호실에서 사육하였다. 시험자들은 모두 고압증기멸균 (121℃, 20분)된 작업복, 두건, 마스크 및 장갑 등을 착용하고 작업을 실시하였다. 순화, 검역기간 동안에는 폴리카보네이트제 구두통형 사육상자 (260W x 410L x 200H ㎜)에 3마리씩 수용하였다. 투여 및 관찰기간 중에는 와이어사육상자 (205W x 350L x 175H ㎜)에 1마리씩 수용하였다. 시험기간 중 사육상자는 시험번호 및 동물번호를 기입한 라벨지를 붙여 식별하였다.

사료는 방사선 멸균된 (25 kGy, Picolab) 실험동물용 고형사료를, 음수는 상수도수를 고압멸균기로 멸균시킨 후 물병을 이용하여 자유섭취 시켰다.

큐라리논 (화학식 3) 시료의 비만억제활성을 검증하기 위한 목적으로 스프라그-도올리 (Sprague-Dawley)계 암컷 랫트를 이용하여 10㎎/㎏, 50㎎/㎏으로 반복 경구투여 하였다. 시험결과 체중의 경우, 큐라리논 (화학식 3) 시료 10 및 50 ㎎/㎏ 용량군에서 최종일 결과를 보면 대조군에 비해 각각 9.7 및 8.6% 정도의 체중감소가 관찰되었다 (표 3). 또한 큐라리논 (화학식 3)의 반복경구투여에 의한 장간막 지방, 복부지방 및 전장의 변화가 표 4에 나타나 있으며, 종일 부검을 실시하여 장간막 지방무게를 측정한 결과 50 ㎎/㎏ 용량군에서 대조군에 비해 9.6%정도 감소하였으며, 복부지방의 경우 10 및 50 ㎎/㎏ 용량군에서 각각 12.6 및 68.3%정도 감소하여, 시료투여에 의한 랫트 전장의 변화는 없는 것으로 확인되었다.

이상의 결과와 같이 큐라리논 (화학식 3)의 반복 경구투여는 전장의 변화 없이 체중, 장간막 및 복부 지방을 감소시키는 것으로 판단된다.

투여군	투여용량(㎎/㎏)	투여기간 (Days after treatment)
투여군	투여용량(㎎/㎏)	0	1	3	7	14	20
대조군	0	149.6± 5.8	150.6± 12.0	159.3±9.7	170.2± 24.8	205.5 ± 20.8	225.9± 13.1
큐라리논(화학식 3)	10	140.7± 7.0	139.5± 7.0	149.7± 7.3	164.0± 8.6	188.7± 7.5	204.1± 9.1
큐라리논(화학식 3)	50	137.8± 2.2	139.7 ± 5.5	140.3± 17.7	161.7± 11.8	188.5± 13.0	206.5± 20.8
(Mean ±SD : g)

	투여용량(㎎/㎏)	장간막지방(g)	복부지방(g)	전장(㎝)
대조군	0	4.05 ± 1.32	1.99 ± 0.45	19.9 ± 0.6
큐라리논(화학식 3)	10	4.27 ± 0.71	1.74 ± 0.16	20.1 ± 0.8
큐라리논(화학식 3)	50	3.66 ± 1.12	0.63 ± 0.36	19.7 ± 0.3
(Mean ±SD)

4-2. 트라이톤 WR-1339 유도 고지혈증 마우스에서 큐라리논(화학식 3)의 항고지혈증 활성 측정

트라이톤 WR-1339으로 유도한 고지혈증 모델 동물에서의 큐라리논(화학식 3)의 혈중 콜레스테롤과 혈중 트리글리세라이드에 미치는 영향을 조사하였다.

마우스 한 군을 10마리로 하여 큐라리논(화학식 3) 시료를 각각 1일 1회 10 ㎎/㎏, 50 ㎎/㎏로 5일간 경구투여 하였고, 대조군에는 본 발명의 추출물 대신 생리식염수(saline)를 경구 투여하였다. 트라이톤 WR-1339 (Triton WR-1339, Nakarai Chemicals, Ltd, Kyoto, Japan) 투여 16시간 전부터 절식시키고 최종 약물은 Triton WR-1339 투여 30분전에 투여했다. 멸균한 증류수에 녹인 Triton WR-1339을 250 ㎎/㎏의 양으로 꼬리 정맥에 주사하고, 정상군에는 Triton WR-1339 대신 생리식염수를 주사하여, 18시간이 경과한 후 심장으로부터 채혈하였다. 혈액 중의 중성지방 (TG; total Triglyeride), 총 콜레스테롤 (TC; total cholesterol), 고밀도지단백 (HDL; high density lipoprotein) 및 저밀도 지단백 (LCL; low density lipoprotein)을 측정하여 그 결과를 표 5에 나타내었다.

그 결과, 큐라리논(화학식 3) 시료를 10 ㎎/㎏, 50 ㎎/㎏ 투여 시, 혈중 중성지방의 농도를 47.5%, 98.7%, 혈중 콜레스테롤 농도를 60.1%로 낮추었다. 또한 혈중 고밀도지단백(HDL)에는 큰 영향은 없었었으나, 혈중 저밀도지단백(LDL) 농도는 50%, 64%로 낮아졌다.

	투여 용량(㎎/㎏)	혈중 농도 (㎎/㎗)
	투여 용량(㎎/㎏)	TG	TC	HDL	LDL
정상식이 대조군		162.2± 6.5	142.5± 24.0	70.5± 5.3	56.6± 3.4
Triton WR-1339처리 대조군		536.7± 42.9	386.3± 5.3	47.4± 9.4	343.5± 1.4
큐라리논(화학식 3)	10	358.1± 26.5	238.1± 46.3	40.1± 9.2	200.8± 40.4
큐라리논(화학식 3)	50	167.9± 36.8	237.5± 49.1	49.5± 14.6	158.9± 14.9

4-3. 콘오일(Corn oil) 투여 유도 고지혈증마우스에서 큐라리논(화학식 3)의 항고지혈증 활성 측정

콘오일(Corn oil)로 유도한 고지혈증 모델 동물에서의 큐라리논(화학식 3)의 혈중 콜레스테롤과 혈중 트리글리세라이드에 미치는 영향을 조사하였다.

마우스 한 군을 10마리로 하여 큐라리논 (화학식 3) 시료를 10 ㎎/㎏, 50 ㎎/㎏로 경구투여 하였고, 대조군에는 생리식염수를 경구투여 하였다. 2시간 후에 콘오일(corn oil)을 1 g/㎏를 경구투여 하여 고지혈증을 유도하고, 정상군에는 콘오일 대신 생리식염수를 경구투여 하였으며, 콘오일 투여 2시간 후에 심장으로부터 채혈하였다. 대조약물로는 테트라하이드로립스타틴 (tetrahydrolipstatin)을 10㎎/㎏, 50㎎/㎏로 경구투여 하였다.

혈액 중의 중성지방 (TG; total Triglyeride), 총 콜레스테롤 (TC; total cholesterol), 고밀도지단백 (HDL;high density lipoprotein) 및 저밀도 지단백 (LCL; low density lipoprotein)을 측정하여 그 결과를 표 6에 나타내었다.

그 결과, 큐라리논(화학식 3) 시료를 10 ㎎/㎏, 50 ㎎/㎏ 투여 시, 혈중 중성지방의 농도를 59%, 77%로 낮추었으나 혈중 콜레스테롤, 혈중 고밀도지단백(HDL), 혈중 저밀도지단백 농도에는 큰 영향을 미치지 않았다.

	투여 용량(㎎/㎏)	혈중 농도 (㎎/㎗)
	투여 용량(㎎/㎏)	TG	TC	HDL	LDL
정상식이 대조군		70.3± 15.7	151.4± 13.4	101.3± 5.9	38.3± 9.1
콘오일 처리 대조군		158.8± 13.8	141.8± 17.3	84.7± 9.4	48.9± 9.1
큐라리논(화학식 3)	10	106.5± 20.2	130.0± 9.7	85.9± 10.7	51.4± 9.8
큐라리논(화학식 3)	50	89.8± 17.6	139.7± 10.0	102.8± 11.3	47.5± 0.9
테트라하이드로립스타틴(tetrahydrolipstatin)	10	111.2± 9.2	127.7± 23.6	74.9± 7.3	41.6± 5.0
테트라하이드로립스타틴(tetrahydrolipstatin)	50	54.0± 13.5	130.8± 24.3	73.7± 3.5	41.3± 1.6

실시예 5. 급성 독성 시험

마우스(20±5 g, 중앙실험동물)와 래트(235±10 g, 중앙실험동물)를 사용하여 고삼 추출물 및 화합물의 급성독성 시험을 실시하였다. ICR계 마우스와 스프라그-도올리 래트를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 고삼 추출물 및 화합물을 각각 100, 250 및 500 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여한 후 2주간 독성여부를 관찰한 결과 3군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 고삼에서 분리한 조추출물, 에틸아세테이트 가용추출물 및 프레닐플라보노이드 유도체 화합물의 아실코에이 : 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 저해활성이 높음을 확인하였으며, 이들은 중성지방 흡수 및 대사이상에 의한 질병의 예방 및 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.

Claims

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아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 하기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하고, 약학적으로 허용하는 담체를 포함하는 비만 또는 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물.

(Ⅰ)

상기의 식에서,

R¹은 H, OH(α) 또는 OH(β);

R²는 H 또는 CH₃;

R³는 H, 또는 ;

R⁴는 H, , 또는 이다.
제 3항에 있어서, 프레닐플라보노이드 유도체는 큐라리논 (kurarinone), 소포라플라바논 지 (sophoraflavanone G), 큐라리놀 (kurarinol), 큐세놀 에이치 (kushenol H), 큐세놀 케이 (kushenol K), 큐세놀 비 (kushenol B), 큐세놀 엠 (kushenol M), 큐세놀 이 (kushenol E) 또는 큐세놀 엘 (kushenol L)인 약학조성물.
아실 코에이:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 (DGAT) 효소 저해 활성을 갖는 하기 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 프레닐플라보노이드 유도체 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 하고, 약학적으로 허용하는 담체를 포함하는 비만 또는 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물.

(Ⅱ)

상기의 식에서,

R⁵은 H, OH, CH₃, 또는 이다.
제 5항에 있어서, 프레닐플라보노이드 유도체는 큐라리딘(kuraridine)인 약학조성물.
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