KR100494482B1

KR100494482B1 - 간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물, 황칠 분획물 및이들을 함유한 약학 조성물

Info

Publication number: KR100494482B1
Application number: KR10-2002-0018063A
Authority: KR
Inventors: 정세영
Original assignee: 주식회사 디피바이오텍
Priority date: 2002-04-02
Filing date: 2002-04-02
Publication date: 2005-06-10
Also published as: KR20030079205A

Abstract

본 발명은 간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 지방간, 간염, 간경화 등과 같은 간질환을 예방 및 치료할 수 있는 황칠 추출물과 그 분획물 및 이들을 함유한 약학 조성물과 기능성 식품에 관한 것이다.

Description

간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물, 황칠 분획물 및 이들을 함유한 약학 조성물{Dendropanax morbifera Lev. extract having a protective effect of hepatic cells, Dendropanax morbifera Lev. fractions, and pharmaceutical composition containing the same}

간암을 포함한 만성 간질환은 우리 나라 성인에게 있어서 입원 빈도 5위의 높은 유병율을 나타내는 질환이다(1994년 의료보험 관리공단 통계연보). 1996년 통계청 사망 원인 통계연보를 보면 인구 10만명당 남성의 간암 사망률은 33명으로서 세계에서 가장 높고, 만성 간질환으로 인한 사망률도 인구 10만명당 44명으로 매우 높은 것으로 나타나고 있다.

급성 바이러스 간염은 간 경변증과 간암 등의 만성 간질환의 중요한 원인이 되는 질환이며, 주로 간을 침범하는 전신적 감염으로서 A, B, C, D 및 E 등의 간염 바이러스가 원인으로 알려져 있다. 바이러스 간염과 더불어 간질환의 주요 원인 중 하나는 알코올이다. 알코올에 기인한 간질환은 알코올성 지방간, 알코올성 간염 및 알코올성 간경변증으로 분류되며, 간에 약간의 지방이 축적된 것부터 진행된 간경화에 이르기까지 여러 형태로 나타난다. 과도한 음주로 인한 알코올성 간질환 중 가장 초기에 흔히 나타나는 질환이 지방간이다. 알코올성 간염은 과량의 만성 알코올 섭취자의 20∼30%에서 발병하며, 알코올성 간경변증은 만성 알코올 섭취자의 10∼15% 정도에서 발병하는 것으로 보고되고 있다.

두릅나무과에 속하는 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)는 우리나라의 남부 해안 지역과 제주도에서 자생하는 상록활엽교목으로 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다. 황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장신구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 이용되어 왔으며 고려시대에 쓰여진 고려사절요, 중국의 계림유사, 계림지, 해동역사에 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있으며 그 이전인 백제의 특산품이었다는 것이 당나라 역사서인 책부원구, 통전에 남아있다. 이시진의 본초강목에는 황칠나무가 번열 제거, 안질 및 화상치료, 나병에 효과가 있으며 무해하다고 기록되어 있다.

황칠의 성분에 대해서는 황금색 도막을 형성하는 도료성분인 비휘발성분 66.7%, 방향성분 10.8%, 수분 8.1%, 고형분 14.4%로 구성되어 있다. 방향성분은 주로 세스퀴테르펜류의 β-쿠베벤(cubebene), γ-셀리넨(selinene), δ-카디넨 (cadinene)으로 이루어져 있으며 이들 성분이 신경계에 대한 진정작용과 강장작용을 나타낸다고 알려져 있다.

현재까지 밝혀진 황칠의 약리작용으로는, 잎추출물 분획에서 항암작용과, 황칠 추출분획에서 α-토코페롤보다 다소 약한 항산화작용이 있음이 밝혀졌을 뿐이다(한국특허 공개공보 제2000-0004499호).

본 발명자들은 황칠에 대한 연구를 예의 수행한 결과, 황칠로부터 얻은 추출물이 간세포 보호 효과가 있음을 최초로 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 지방간, 간염, 간경화 등과 같은 간질환을 예방 및 치료할 수 있는 효과를 갖는 황칠 추출물 및 그 분획물과 이들을 포함하는 간 세포 보호용 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있다.

본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공한다.

본 발명은 또한 황칠나무 수지를 알코올에 넣고 50∼100℃에서 5∼24시간 동안 온탕하여 얻은 추출액을 40∼60℃로 냉각시켜 잔사를 여과한 상등액을 증발농축시킨 농축액임을 특징으로 하는 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공한다.

본 발명은 또한 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물을 제공한다.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 황칠 분획물을 유효성분으로 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 그의 분획물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 그의 분획물을 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 식품학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 첫번째 양상은 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공하는 것이다.

본 발명의 황칠의 추출방법의 일예는 하기와 같다.

먼저 황칠을 추출용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 등의 알코올 용매에 넣고 50∼120℃에서 5∼24시간 동안 가온하거나, 상온에서 소니케이션 하거나, 상온 또는 4℃ 에서 5∼7일간 냉침하여 추출한 다음, 추출액을 여과하여 상등액을 취한다. 상기와 같은 추출 및 여과조작을 1회 이상 반복 실시하여 얻은 상등액을 모두 합하여 용매를 증발시켜 농축한다. 추출 및 여과조작은 수회 반복 실시하는 것이 바람직하며, 농축액은 건조하여 분말상태로 얻을 수도 있다.

본 발명의 두번째 양상은 또한 상기 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물을 제공하는 것이다.

이와 같이, 극성 정도에 따른 분획을 얻기 위해 상기 분말상 메탄올 추출물을 유기 용매인 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물로 순차적으로 추출 및 여과하는 조작을 수회 반복하여 실시하여 황칠 분획물을 수득할 수 있다. 수득된 분획물은 건조하여 액상 또는 분말상태로 사용할 수도 있다.

본 발명의 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)의 알콜 추출물 및 그의 분획물들을 얻는 방법을 도 1에 도식화하여 나타내었다.

본 발명의 상기 황칠 추출물 및 그 분획물은 하기 실험예와 같이, 우수한 간 세포 보호 효과를 갖는다. 따라서 지방간, 간염, 간경화 등의 간 질환을 예방 또는 치료하는데 적합하다.

본 발명의 세번째 양상은 황칠 추출물 및/또는 분획물과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따르는 간세포 보호용 약학 조성물은 상기의 황칠 추출물 또는 그 분획물만으로 구성될 수 있으며, 또한 기타의 다른 약물 및 통상의 약제학적 첨가제를 더 포함할 수도 있다. 또한, 본 발명은 임상적으로 투여시에 약제학적으로 허용되는 담체와 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 배합하여 경구 또는 비경구 투여에 적합한 고체, 반고체 또는 액체 형태의 약제학적 제제로 제형화시킨 약학 조성물을 제조하여 투여할 수 있다.

상기 약학 조성물의 적합한 제형으로는 정제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 용액제, 현탁제 또는 유화액제, 주사제, 좌약제 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기한 목적에 적합하게 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체는 고체이거나 액체일 수 있으며, 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 붕해제 등으로 작용할 수 있는 물질 중의 어느 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 황칠 추출물, 그의 분획물 또는 이를 포함하는 간 세포 보호제 조성물은 하루에 황칠 추출물 또는 그의 분획물을 체중 kg당 건조분말로서 0.01∼0.10 g을 투여할 수 있다. 투여량은 환자의 필요정도, 치료되어야할 상태의 정도, 그리고 사용될 화합물에 따라 변할 수 있고, 필요에 따라 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.

상기 본 발명의 의약 조성물의 용도는 반드시 의약용으로 한정되는 것이 아니고, 스쿠왈렌, 알로에 등의 용법과 같은 건강 보조 식품으로도 사용할 수 있다.

본 명세서에 사용된, 용어 "건강 보조 식품"은 의약품 허가를 받지 않고 사용되는 조성물로서, 스쿠왈렌 등과 같은 용법으로 사용되는 캡슐제 등을 의미한다.

본 발명의 네번째 양상은 황칠 추출물 및/또는 분획물을 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 식품학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기 식품학적 조성물은 음료, 약술, 김치, 요구르트, 우유, 아이스크림, 빵, 떡 또는 국수 등이 바람직하며, 이에 제한되지는 않는다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하고자 하는 바, 본 발명은 다양한 변화와 변경 및 균등물을 사용할 수 있다. 본 발명은 다음 실시예를 적절히 변형하여 동일하게 응용할 수 있음이 명확하다. 따라서, 다음 실시예의 기재내용으로 본 발명이 한정되는 것은 아니다. 단, 본 명세서 및 실시예에 기재된 %는 용량%를 의미한다.

실시예 1 : 황칠 추출물 및 황칠 분획물의 제조

본 실시예에서 사용한 황칠은 진도에서 6∼7 월에 직접 채취한 것을 사용하였다. 채취한 황칠 100 g을 80 % 메탄올(메탄올:물=4:1) 500 ml에 넣고 환류 냉각기를 장치한 후 95∼100 ℃ 수욕조에서 12시간 동안 온탕하였다. 이 추출액을 약 50℃정도로 냉각시키고 여러 겹의 거즈로 여과하여 상등액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 3번 반복하여 상등액을 합하고 회전증발장치(rotary evaportor)를 이용하여 감압 하에서 메탄올을 완전히 증발시켜 농축하여 본 발명의 황칠 메탄올 추출물(78g)을 제조하였다.

또한 상기 황칠 메탄올 추출물은 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 적량 첨가하여, 이들 용매에 대한 가용부로 순차적으로 분획하고 각 분획물은 감압 농축하여 본 발명의 황칠 헥산 분획물(10g), 클로로포름 분획물(30g), 부탄올 분획물(3g) 및 물 분획물(5g)을 제조하였다.

실시예 2

상기 실시예 1에서 최종적으로 얻은 황칠 추출물 농축액 및 분획물을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.

실시예 3

황칠 100 g을 80% 메탄올 (메탄올:물=4:1) 500ml에 넣고 실온에서 1일간 또는 4℃에서 7일간 냉침한 후 여러 겹의 거즈로 여과하여 상등액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 3번 반복하여 얻은 상등액을 합하고 회전증발장치(rotary evaportor)를 이용하여 감압 하에서 메탄올을 완전히 증발시켜 농축한 다음 이를 소량의 증류수에 용해하여 본 발명의 황칠 추출물을 제조하였다.

실시예 4

상기 실시예 3에서 얻은 황칠 추출물 농출액을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.

실시예 5

상기 실시예 4에서 얻은 황칠 추출물의 건조분말을 분액여두에 넣고 용매인 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 적량 첨가하여, 순차적으로 실온에서 1일간 추출한 후 여러겹의 여과지로 여과하여 상등액을 취했다. 이와 같은 추출 및 여과조작을 3번 반복하여 수득한 상등액을 합하고 회전증발장치(rotary evaporator)를 이용하여 감압하에서 용매를 완전히 증발하여 농축하였다.

실시예 6

상기 실시예 5에서 최종적으로 얻은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물 분획물을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.

실시예 7 : 정제의 제조

상기 실시예 1에 따라 제조된 황칠 추출물 또는 그 분획물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분과 혼합한 후, 정제수를 적량 첨가하고 분말로 과립화시켰다. 과립을 건조시킨 후 스테아르산마그네슘과 혼합하고 압착하여 정제를 얻었다. 정제에 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.

실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 ㎎

락토오스 BP 150.0 ㎎

전분 BP 30.0 ㎎

전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0 ㎎

스테아르산 마그네슘 1.0 ㎎

실시예 8 : 캡슐제의 제조

상기 실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 체질한 다음 부형제와 혼합한 후, 젤라틴 캡슐중에 충전하여 캡슐을 제조하였다. 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.

실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 ㎎

전분 1500 100.0 ㎎

스테아르산마그네슘 BP 1.0 ㎎

실시예 9 : 시럽제의 제조

정제수 500 ㎖에 백당을 용해시키고, 별도의 용기에 카르복시메틸셀룰로오스나트륨는 따로 정제수 400 ㎖에 용해시킨 다음 상기 백당을 용해시킨 용액과 혼합한 다음 메틸파라벤과 프로필파라벤을 가하여 용해시킨 후 에탄올을 가한 다음 정제수를 전체 용액의 용량이 1000 ㎖가 되도록 하였다. 여기에 체질한 실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 현탁시켜 시럽제를 얻었다. 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.

실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 g

백당 637.5 g

카르복시메틸셀룰로오스나트륨 2.0 g

메틸파라벤 0.28 g

프로필파라벤 0.12 g

에탄올 20 ㎖

실시예 10 : 기능성 음료의 제조

상기 실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물 0.01 중량%와 식용색소 0.05 중량%, 오렌지 에센스 0.05 중량%, 과당 7.0 중량%, 구연산 0.1중량%, 비타민 C 0.05 중량%를 포함하는 일반 기능성 음료 베이스를 첨가한 조성물을 제조한 다음 정제수를 첨가하여 음료를 제조하였다.

실시예 11 : 약술의 제조

탈취 정제된 40 중량% 알코올을 증류수로 희석하고, 실시예 1에 따라 제조된 본 발명의 황칠 추출물 0.01 중량%를 첨가하고, 스테비오사이드, 고과당, 아미노산, 구연산, 소금 등을 첨가하여 알코올 함유 농도 15 내지 30중량%로 제조하였다.

실시예 12 : 건강 보조 식품의 제조

상기 실시예 8의 방법과 유사하게, 젤라틴 캡슐중에 실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물(5.0 ㎎)을 전분 1500(100.0 ㎎) 및 스테아르산마그네슘 BP(0.5 ㎎)과 혼합, 충전하여 캡슐을 제조하였다. 이 캡슐은 의약품 허가가 필요없이 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다.

실험예 1 : 본 발명의 황칠 추출물 및 황칠 분획물 투여에 의한 에탄올 유발 간독성 억제작용의 측정

본 실험예에서는 황칠 메탄올 추출물 및 분획물과 에탄올 동시투여에 대한 간보호 효과를 실험하였다.

(1) 혈중 GOT, GPT 및 ALP의 농도의 측정

간은 효소의 농도가 현저히 높고 혈중으로도 유출이 쉬운 혈행구조를 가지고 있으므로 손상된 간으로부터 혈액에 방출되는 간의 효소 활성도 측정은 간 손상 연구에 있어서 가장 유용한 방법 중 하나이며, 특히 혈청 중 GOT, GPT는 간 손상으로 인한 간세포의 괴사와 간 조직의 파괴가 진행됨에 따라 혈중으로 유리되어 높은 활성을 나타내게 된다(Plaa 등, 1982). 따라서, 혈중 GOT, GPT의 측정으로 간기능을 측정할 수 있다. 또한 ALP는 조직 손상시에 혈중으로 배출되는 효소로서, 혈중 ALP의 측정으로 간세포의 손상 정도를 알 수 있다. 구체적인 측정 방법은 하기와 같았다.

체중 150∼250g의 Sparague-Dawley계 수컷 흰쥐(각 심험군당 10마리씩 사용)를 22±2℃에서 2주 이상 사육하여 실험실 환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였고, 고형사료(삼양사료) 및 물을 충분히 공급하였다. 실시예 1의 황칠 메탄올 추출물 및 각 분획물들(황칠 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물)은 증류수에 현탁하여 100mg/kg씩 1회 경구투여 하였다. 에탄올은 상기 황칠 추출물 및 분획물 투여 직후 6g/kg씩 복강 투여하고 절식시켜 간손상을 유발시켰다. 에탄올 투여 24시간 후 에테르로 마취시키고, 복부 정중선을 절개하여 심장에서 채혈하고 3,000rpm에서 20분간 원심분리하여 얻은 혈장을 시료로 사용하였다. 상기 혈장중의 혈장 글루타메이트 옥살레이트 트랜스아미네이즈(glutamate oxalate transaminase: GOT), 글루타메이트 피루베이트 트랜스아미네이즈(Rglutamate pyruvate transaminase: GPT) 및 알칼리 포스파테이즈(alkaline phosphatase: ALP)를 kit(영동제약)를 이용하여 분석하였다.

GOT 기질액 1.0ml를 37℃ 수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검 혈청을 0.2ml 가하고, 37℃ 수조에서 60분간 가온하고, 발색액을 1.0ml 가한 후 실온에서 20분간 방치한 후, 0.4N-NaOH 10.0ml를 가하고 충분히 혼합 후 증류수를 대조로 하여 505nm에서 흡광도를 UV/VIS 스텍트로포토미터(Jasco V-530)으로 읽어, 혈중 GOT의 농도를 측정하였다.

또한 GPT 기질액 1.0ml를 37℃ 수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검 혈청을 0.2ml 가하고, 37℃ 수조에서 30분간 가온하고, 발색액을 1.0ml 가한 후 실온에서 20분간 방치한 후, 0.4N-NaOH 10.0ml를 가하고 충분히 혼합 후 증류수를 대조로 하여 505nm에서 흡광도를 읽어 혈중 GPT의 농도를 측정하였다.

또한 ALP 기질액 2.0ml를 37℃수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검혈청을 0.05ml를 가하고, 37℃ 수조에서 정확하게 15분간 가온하고, 발색액을 2.0ml 가한 후 10분이상 방치한 후, 상기와 동일한 방법으로 조작한 맹검액을 대조로 하여 570nm에서 흡광도를 읽어 혈중 ALP의 농도를 측정하였다.

모든 실험 결과는 평균값과 표준오차를 계산하고, 각 군간의 차이는 Student's t-test를 사용하여 p값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의성이 있다고 판정하였다. 상기 측정 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

처리	수	GOT(IU/L)	GPT(IU/L)	ALP (IU/L)
정상	10	60.7±3.2	26.4±6.4	62.7±31.8
에탄올(대조군)	10	105.0±1.6	47.5±5.7	177.3±27.3
황칠 메탄올총추출물 + 에탄올	10	87.3±8.3	32.3±4.3^*	152.21±21.3
황칠 물분획물+ 에탄올	10	92.8±10.4	36.8±3.9^*	143.25±23.9
황칠 부탄올 분획물 + 에탄올	10	85.0±13.1^*	35.5±6.7^*	136±15.3^*
황칠 클로로포름분획물 + 에탄올	10	88.8±9.6^*	32.3±9.4^*	157±29.0
황칠 헥산 분획물+ 에탄올	10	73.7±6.2^**	27.3±6.6^**	148±22.1

(* : p<0.05, ** : p<0.01)

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 황칠 메탄올 총 추출물 및 그 분획물들을 에탄올과 동시에 투여한 경우, GOT의 경우 황칠 부탄올 총 추출물 및 그의 분획물 투여군 모두에서 현저한 감소를 보였고, GPT의 경우에도 황칠 부탄올 총 분획물 및 그의 분획물 투여군 모두 현저한 감소를 보였다. 특히, 황칠 헥산 분획물의 투여의 경우. GOT, GPT 모두 정상값에 가깝게 감소되어 에탄올에 의한 간손상 보호 효능이 매우 탁월함을 알 수 있었다.

또한 ALP의 경우도 황칠 추출물 및 그 분획물 투여군에서 모두 현저하게 감소하였다. 따라서, 황칠 분획물 및 그 분획물들이 에탄올 투여에 의한 간조직 손상으로부터 간세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

(2) 간세포의 말론디알데하이드(Malondialdehyde: MDA)의 농도의 측정

세포막의 인지질은 유리 라디칼(free radical)의 공격에 의해서 리피드 퍼옥시 라디칼을 거쳐 리피드 엔도퍼옥사이드(lipid endoperoxide) 라디칼 및 리피드 엔도퍼옥사이드로 된 후 분해되어 MDA를 생성하게 되므로, MDA는 지질과산화의 정도를 측정하는 지표가 되며, 지질과산화는 산화적 스트레스의 지표로서 널리 사용되고 있다(Johansson, .I 등, 1985; Ayene, I. S. 등, 1992). 생체 내에서 과산화지질은 세포의 구성 성분인 단백질, RNA 및 DNA 등과 작용하여 미토콘드리아 등의 기능이상과 생화학적 결론을 일으키며 이로 인해서 질병과 노화를 촉진시키는 물질로 주목받고 있다. 특히 생체 막에서 과산화지질이 잘 형성되며 생체막의 주요구성 성분인 다가불포화지방산이 유리 라디칼로 형성된 과산화지질에 의해 지방조성이 변화되기 때문에 생체막의 기능이 저하되고, 유동성을 감소시켜서 막의 주요 기능인 물질수송 및 투과성이 감소됨으로써, 항상성 유지에 지장을 초래하게 된다(Plaa, G. L., 1976; Curtis, M. T., 1984; Lacko, A. G., 1984).

에탄올은 간대사효소인 CYP 2E1에 의해 대사중간체로 되는 과정에서 산소 라디칼을 생성하여 간세포의 지질과산화를 초래하고 지질과산화물이 생체막에 구조적인 변화를 일으키며 내부의 효소계가 파괴됨으로써 혈액 및 조직내 과산화지질 함량이 증가하게 되므로, 간세포의 MDA 농도가 높을 수록 간기능이 저하된 것을 의미하므로, MDA 농도가 간기능 검사의 지표가 될 수 있다.

본 발명의 황칠 추출물 및 그의 분획물 투여에 의한 MDA 억제작용을 측정하는 구체적인 방법은 하기와 같았다.

상기 (1)에서 기술된 방법에 따라 황칠 메탄올 추출물과 그의 분획물들, 및 에탄올을 투여하고, 에탄올 최종투여 24시간 후 적출한 간조직을 생리식염수로 씻고 세절한 후 일부분을 정량하여 무게 5배에 해당하는 인산완충용액을 넣고 균질화 시켰다. 균질화된 시료 0.5ml와 SDS 0.4ml를 넣고 37℃ 수욕상에서 가용화시켰다. 0.1N HCl 2ml와 0.67% TBA액을 넣고 혼합한 후, 95℃의 수욕상에서 50분간 가열시켰다. 얼음 수욕상에서 반응을 중지시키고 5ml의 부탄올을 넣었다. 이후 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 535nm에서 흡광도를 측정했다. 블랭크(blank)는 지질을 제외한 모든 시약을 함유하고 동일 반응과정을 거쳐 구했다. 상기 측정 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

처리	수	MDA
정상	10	0.0154±0.002
에탄올(대조군)	10	0.0358±0.001
황칠 메탄올총추출물 + 에탄올	10	0.0302±0.003^*
황칠 물 분획물 + 에탄올	10	0.0277±0.002^**
황칠 부탄올 분획물 + 에탄올	10	0.0270±0.004^*
황칠 클로로포름 분획물+ 에탄올	10	0.0290±0.003^*
황칠 헥산 분획물+ 에탄올	10	0.0325±0.002

(* : p<0.05, ** : p<0.01)

상기 표 2와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 투여하고 간세포의 MDA의 농도를 측정한결과, MDA의 유의성 있는 감소를 보였다. 특히, 황칠 부탄올 및 클로로포름 분획물이 50%이상 과산화지질 생성을 억제하여, 간보호작용을 나타냄을 알 수 있고, 이 작용이 CYP 2E1효소 기능과 연관이 있음을 보여주었다.

실험예 2. 본 발명의 황칠 추출물 및 황칠 분획물 전투여에 대한 에탄올 유발 간독성 억제작용의 측정

본 실험예에서는 황칠 메탄올 추출물 및 분획물의 전투여에 의한 간보호 효과를 실험하였다.

체중 150∼250g의 Sparague-Dawley계 수컷 흰쥐를 22±2℃에서 2주 이상 사육하여 실험실 환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였고, 고형사료(삼양사료) 및 물을 충분히 공급하였다. 실시예 1의 황칠 메탄올 추출물 및 각 분획물들(황칠 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물)은 증류수에 현탁하여 100mg/kg씩 1회 경구투여 하였다. 에탄올은 황칠 추출물 및 분획물 투여 24시간 후 복강 투여하고 절식시켜 간손상을 유발시켰다. 채혈과 혈정의 분리 및 혈액의 GOT, GPT 및 ALP의 생화학적 분석과, 간세포의 MDA의 생화학적 분석은 실험예 1과 동일하게 실시하였고, GOT, GPT 및 ALP에 대한 결과를 하기 표 3에 나타내었고, MDA에 대한 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

처리	수	GOT(IU/L)	GPT(IU/L)	ALP (IU/L)
정상	10	60.7±3.2	26.4±6.4	62.7±31.8
에탄올(대조군)	10	106.0±5.1	42.0±8.8	177.3±27.3
황칠 메탄올총추출물 + 에탄올	10	91.6±20.3	29.4±6.7	156.8±37.0
황칠 물 분획물 + 에탄올	10	102.0±23.8	30±5.0	157.8±53.0
황칠 부탄올 분획물 + 에탄올	10	87.0±16.9	27.5±8.1^*	150.3±69.3
황칠 클로로포름 분획 + 에탄올	10	91.5±38.0	38.3±5.1	169.3±19.1
황칠 헥산 분획물+ 에탄올	10	86.0±8.6^*	28.5±6.73^*	158.0±38.3

(* : p<0.05)

상기 표 3에서 알 수 있듯이, 황칠 추출물 및 그 분획물들을 에탄올보다 먼저 투여한 경우도, GOT의 경우 황칠 부탄올 총 추출물 및 그의 분획물 투여군에서 실험예 1의 동시투여한 경우와 마찬가지로, 모두 현저한 감소를 보였고, GPT의 경우에는 황칠 부탄올 분획물 및 그의 분획물 투여군 모두 현저한 감소를 보였다. 또한 ALP의 경우도 황칠 추출물 및 그 분획물 투여군에서 모두 감소하는 경향을 보였다.

이와 같이 황칠 추출물 및 그 분획물의 전투여에서도 모두 현저하게 간세포 보호작용을 나타내는 것을 알 수 있어, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 간질환의 예방제로서 사용할 수 있음을 알 수 있다.

처리	수	MDA
정상	10	0.0154±0.002
에탄올(대조군)	10	0.0358±0.001
황칠 메탄올총추출물 + 에탄올	10	0.0232±0.003^*
황칠 물 분획물+ 에탄올	10	0.0222±0.002^**
황칠 부탄올 분획물 + 에탄올	10	0.0361±0.022
황칠 클로로포름 분획물+ 에탄올	10	0.0200±0.002^**
황칠 헥산 분획물+ 에탄올	10	0.0209±0.004^**

(* : p<0.05, ** : p<0.01)

상기 표 4와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 전투여한 경우도, 간세포의 MDA의 농도가 유의성 있게 감소하였다.

이와 같이 황칠 추출물 및 그 분획물의 전투여에서도 모두 현저하게 간세포 보호작용을 나타내는 것을 알 수 있고, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 간질환의 예방제로서 사용할 수 있음을 알 수 있다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물은 우수한 간세포 보호 효과를 가진다. 따라서, 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물 및 이들을 포함하는 약학 조성물은 부작용을 보이지 않으면서 탁월한 간세포 보호 효과를 갖고 있기 때문에 지방간, 간염, 간경화 등과 같이 간세포 보호와 관련된 질환의 예방 및 치료를 목적으로 기존의 치료제에 대체, 또는 병용하여 안심하고 사용할 수 있다.

또한 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물은 간보호를 위한 약술, 음료 또는 기능성식품 등으로서도 사용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)의 알콜 추출물 및 그의 분획물들을 얻는 방법을 도식화하여 나타낸 도면이다.

Claims

황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물.
제 1 항에 있어서, 상기 황칠 추출물은 황칠나무 수지를 알코올에 넣고 50∼100℃에서 5∼24시간 동안 온탕하여 얻은 추출액을 40∼60℃로 냉각시켜 잔사를 여과한 상등액을 증발농축시킨 농축액임을 특징으로 하는 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물.
제 1 항의 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물.
제 1 항 또는 제 2 항의 황칠 추출물, 또는 제 3 항의 황칠 분획물을 유효성분으로 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 조성물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물.
제 5 항에 있어서, 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제 및 붕해제 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물.
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