KR100415893B1

KR100415893B1 - 코디셉스 시넨시스균의 분리방법

Info

Publication number: KR100415893B1
Application number: KR10-2001-0026487A
Authority: KR
Inventors: 윤범덕
Original assignee: 주식회사 엔에스케이텍
Priority date: 2001-05-15
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2004-01-24
Also published as: KR20020087312A

Abstract

자연산 동충하초중코디셉스 시넨시스의 종균을 분리해내는 방법. 자연산코디셉스 시넨시스의 오염균을 멸균한 다음 얇게 잘라 경사면 배지에서 25 ~ 30℃에서 5 내지 7일간 배양하여 자라나온 균사를 분리한다.

Description

코디셉스 시넨시스균의 분리방법 {A PROCESS FOR ISOLATION OF CORDYCEPS SINENSIS}

본 발명은 동충하초속 균의 분리방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 야생의 박쥐나방 유충을 기주로하여 자생하는 자연산코디셉스 시넨시스동충하초로부터코디셉스 시넨시스(Cordyceps synensisBerk. sacc.)균을 인공적으로 분리하는 방법에 관한 것이다.

코디셉스 시넨시스동충하초 (冬蟲夏草)는 자낭균강 맥각균과에 속하는 일종의 버섯류로서, 정확히는, 곤충의 유충과 자실체 (버섯)의 복합체라고 할 수 있다. 동충하초는 충초 (蟲草)라고도 하며, 동충하초라는 이름은 겨울철에는 곤충의 몸속에서 기생하면서 곤충을 숙주로 하여 양분을 모조리 흡수하여 곤충을 죽인 다음 이듬해 여름에 곤충의 시체를 뚫고 나와 버섯으로 자라난다고 하여 붙여진 것이다.코디셉스 시넨시스동충하초는 간염, 당뇨병, 결핵등에 효험이 있고 혈액순환 개선, 강장제로서의 효과 뿐만 아니라, 면역기능 강화 등 다양한 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

이러한 동충하초속 균으로는 균주와 숙주가 되는 곤충의 종류에 따라 누에 번데기를 기주로 한 번데기 동충하초 (붉은 동충하초라고도 함:Cordyceps millitaris), 눈꽃 동충하초 (Paecilomyces japonica), 풍뎅이 동충하초 (Cordyceps scarabaeicola), 노린재 동충하초 (Cordyceps mutans), 매미동충하초 (Cordyceps sobolifera), 박쥐나방 유충 동충하초 (Cordyceps synensis) 등이 수백여종의 동충하초가 알려져 있다.

그 중에서도, 인시목의 박쥐나방 유충을 기주로 하여 발생하는 동충하초, 즉,코디셉스 시넨시스는 예로부터 그 약효가 가장 탁월한 것으로 널리 알려져왔다.코디셉스 시넨시스의 대표적인 분포지역은 티벳산맥의 해발 3,000m 이상의 고산지역으로서 그 외에 중국의 사천, 운남, 귀주, 감숙, 청해, 서장 등지에서 자생하고 있으나, 워낙 고지에서만 자라므로, 채취가 대단히 힘들뿐만 아니라, 아직까지 인공재배에 성공한 예가 없다.

코디셉스 시넨시스는, 겨울에는 박쥐나방 유충의 체내에서 균사가 영양분을 취하며 활착되어 여름이 되면 시넨시스 동충하초균이 발육하여 숙주의 머리부분에서 자실체가 성장하여 땅을 뚫고 나온 후 홀로 자라며 야구막대기 모양의 형태를띠게 된다. 유충과 자실체의 전체 길이는 약9∼12cm이고 자루부분이 대략 3∼8cm이다. 직경이 0.3∼0.8cm인 원형으로써 초기에는 연한 종려색을 띠다가 진한 갈색으로 변하며 가늘고 긴 균사로 이루어진다. 자실체의 머리부분은 약간 불룩하여 원주형 및 타원형을 이루고 있다. 한 개의 자낭각에는 가늘고 긴 자낭이 여러개 들어 있으며 한 개의 자낭에는 8개의 격막으로 된 자낭포가 들어있다.

코디셉스 시넨시스동충하초에는 수분 10,84%, 지방 8.4%, 조단백질 25.32%, 조섬유 18.53%, 탄수화물 28.90%, 회분 4.10%가 포함되어 있고 지방에는 포화지방산 13.00%와 불포화지방산 82.2%가 포함되어 있다. 시넨시스 동충하초는 연한 황색 결정분말로서 시험관 안에서 사슬구균, 비저간균, 탄저균, 돼지출혈성패혈증간균 및 포도사상균의 생장을 억제하는 작용을 한다. 이외에 Bl2 0.29mg/1.00g이 들어 있고 만니톨 78.81mg/g, 다당류 11.5% 등이 함유되어 있다.

번데기 동충하초 (Cordyceps militaris), 눈꽃 동충하초 (Paecilomyces japonica)등의 여러종의 동충하초가 이미 인공재배에 성공하여 대량생산 단계에 접어들었으나, 그 효능이 가장 탁월한 것으로 알려진,코디셉스 시넨시스만은 상기한 바와 같이 현재까지 인공적인 재배에 성공하지 못한 상태여서, 자연산에만 의존하고 있는데, 그 채취가 대단히 어려워서,코디셉스 시넨시스의 현재 가격도 원산지인 중국 운남성 일대에서 한화로 600만원/kg에 거래되고 있을 정도로 대단히 고가이다. 이와 같이, 워낙 고가인 관계로코디셉스 시넨시스와 유사한 형상을 인위적으로 만들어낸 가짜들이 대량 위조 유통되고 있는 실정이다.

이는 종균의 분리기술의 문제와 분리된 종균의 배양제에의 활착기술등이 개발되지 못하였기 때문이다. 따라서, 두가지의 기술이 개발되어야만 비로소 인공적인코디셉스 시넨시스의 대량생산이 가능해 진다고 할 수 있다.

따라서, 본 발명의 목적은 상기와 같은 다양한 효능을 가진코디셉스 시넨시스의 대량 인공재배를 위한 전초단계가 되는, 종균 생산을 위한 균의 분리 기술로서 자연산코디셉스 시넨시스에서 종균으로 사용할 수 있는 균을 분리해내는 방법을 제공하는 데 있다.

도 1은 본 발명에 따라 분리된코디셉스 시넨시스균의 균사체를 200배로 확대한 현미경 사진.

도 2는 자연산코디셉스 시넨시스균사체의 적외선 스펙트럼 사진.

도 3은 본 발명에 따라 분리된코디셉스 시넨시스균사체의 적외선 스펙트럼 사진.

본 발명자들은 상기한 목적을 달성하고자, 자연산코디셉스 시넨시스로부터 종균으로 사용가능한 균을 분리하기 위해 집중적으로 연구한 결과, 최초로,코디셉스 시넨시스균을 분리하는데 성공하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명을 요약하면, 채취된 자연산코디셉스 시넨시스로부터 오염균을 멸균해내고, 얇게 잘라내어 경사면 (slant) 또는 평판 (plate) 배지에서 25 ~ 30℃에서 5내지 7일간 배양시켜, 자라나온 균사를 분리하는 것이다.

더욱 구체적으로, 본 발명의 방법은 다음 단계를 포함한다.

1) 채취된 박쥐나방 유충 동충하초 복합체 (자연산코디셉스 시넨시스)를 수세하여 흙과 모래를 씻어 내고,

2) 충체 및 자좌 (충체 꼭대기에 자라난 막대모양의 물건)를 95% EtOH 중에서 진탕시켜 오염균을 멸균한 후,

3) 0.1% HgCl₂에 5-10분간 침지시킨 후, 멸균수로 진탕 수세처리하여 시료를 얻은 다음,

4) 수분이 제거된 상기 시료를 얇게 잘라서 배지 중에서 25 ~ 30℃온도에서 5내지 7일간 배양하는 단계

이와 같은 본 발명의 방법으로 분리된 종균 균사체의 대량배양만으로도 자연산 동충하초인코디셉스 시넨시스와 유사한 물질을 대량으로 얻을 수 있으므로 최종적인 목적인 인공재배에 못지 않은 유용한 결과를 얻을 수 있는 효과가 있다.

본 발명의 방법은코디셉스 시넨시스의 인공생산에 필요한 종균을 분리해내는 기술을 제공하는 것으로서, 자연산 원초의 오염물질 제거 과정, 배지의 온도 및 배양기간을 비롯한 배양절차를 최적 조건하에서 정확히 진행하여야만 성공할 수 있다.

다음에 본 발명의 균 분리방법과 그로부터 얻어진 균사의 특징을 상세히 설명한다.

코디셉스 시넨시스 균의 분리

1) 채취된, 신선한 박쥐나방 유충 동충하초 복합체 (자연산코디셉스 시넨시스)에 붙어 있는 흙과 모래를 깨끗한 물로 씻어 버린 후 체반에 놓고 수돗물을 흘려 30분 동안 헹구었다.

2) 충체 및 자좌를 잘라서 멸균한 병속에 넣은 다음 95% EtOH 중에서 1 분간 진탕시켰다. 이렇게 하여 조직 공극에 있는 공기가 나오면서 오염균을 멸균하였다.이어서, EtOH을 쏟아 버리고 0.1% HgCl2 (염화제이수은, 승홍)에 5-10분간 침지시켰다. 승홍을 쏟아 버리고 멸균수로 5회 진탕하면서 씻어 시료로 사용하였다.

3) 페트리 디쉬에 멸균된 거름종이를 깔고 시료의 수분을 흡수시킨 다음, 멸균된 메스로 자좌를 자그마한 얇은 조각으로 가로로 잘라내어 경사면 배양제에 넣었다. 이어서, 28℃온도에서 5내지 7일간 배양하자 야생형코디셉스 시넨시스의 특성을 갖는 균사가 자라나오는 것이 관찰되었다.

코디셉스 시넨시스 균사의 특징

얻어진,코디셉스 시넨시스균사는 흰색이 적고 솜뭉치 모양이며 변두리에 균사속이 있고 배양물은 약간 누른 빛을 띠고 있었다.

또한, 현미경 검경시 약 160-640배로 확대하였을 때 균사에 격막이 있고, 균사가 묶음 모양으로 뭉쳐있음을 관찰할 수 있었다. 분리된 균을 4℃온도에 냉장 보관하였다.

도 1에 얻어진코디셉스 시넨시스균사체의 200배율의 현미경 사진을 첨부하였다. 또한, 본 발명에 따라 얻어진코디셉스 시넨시스동충하초 균사체의 적외선 스펙트럼 (도 3)을 야생형코디셉스 시넨시스동충하초 균사체의 적외선 스펙트럼 (도 2)과 비교하면, 주요 피크가 모두 일치하여 동일물성을 갖는 것을 알 수 있으므로, 이로부터, 본 발명의 방법에 따라 자연산코디셉스 시넨시스균이 성공적으로 분리되었음을 확인할 수 있다.

균사 생산을 위한 배지

본 발명의 방법에 사용된 배지는 경사면 배지 또는 평판 배지로서, 다음의표준 배지와 변형 배지를 사용할 수 있다.

1. PDA (감자설탕 한천 배지)

감자 추출물 1000ml

글루코오스 20g

한천 15-20g

pH 조절안함

2. GYP (포도당 효모 추출 펩톤 배지)

글루코오스 20g

펩톤 10g

효모 추출물 5g

한천 15-20g

물 1000ml

pH 조절안함

3. 챠팩 (Czapek) + PDA 배지

감자 추출물 1000ml

NaNO₄3g

K₂HPO₄1g

KCl 0.5g

MgSO₄0.5g

FeSO₄0.01g

글루코오스 20g

한천 15-20g

pH 조절안함

본 발명에 따른,코디셉스 시넨시스의 종균분리 기술은코디셉스 시넨시스동충하초 균사체의 대량배양을 가능하게 할 뿐만 아니라, 이러한 종균 분리방법으로 얻어진 종균 그 자체로도 자연산코디셉스 시넨시스와 유사한 성분과 효능을 가지므로, 많은 사람들이,코디셉스 시넨시스동충하초가 갖는 여러가지 유익한 건강증진 및 질병치유 효과를 보다 저렴하게 누릴 수 있을 것으로 기대된다.

Claims

2) 충체 및 자좌를 95% EtOH 중에서 진탕시켜 오염균을 멸균한 후,

4) 수분이 제거된 상기 시료를 얇게 잘라서 배지 중에서 25 ~ 30℃온도에서 5 내지 7일간 배양하는 단계

를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는코디셉스 시넨시스균의 분리방법.

제 1항에 있어서, 상기 배지는 PDA 배지 (감자 설탕 한천 배지), GYP 배지 (포도당 효모 추출 펩톤 배지), Czapek + PDA 배지 및 이들의 변형 배지중에서 선택되는 방법