KR100371085B1

KR100371085B1 - 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물

Info

Publication number: KR100371085B1
Application number: KR10-2000-0045236A
Authority: KR
Inventors: 유익동; 김종평; 이인경; 윤봉식; 심규섭
Original assignee: 한솔제지주식회사; 한국생명공학연구원
Priority date: 2000-08-04
Filing date: 2000-08-04
Publication date: 2003-02-06
Also published as: KR20020011734A

Abstract

본 발명은 신규 엘라지탄닌(ellagitannin) 배당체 화합물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 주로 목재용으로 소비되는 유카리나무(Eucalyptus sp.)로부터 추출분리하여 얻은 것으로, 종래 합성된 항산화제와 달리 천연물로서 독성이 없으며, 지질과산화 억제능이 우수하고 유리라디칼 소거능을 갖는 다음 화학식 1로 표시되는 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물과 이의 추출방법에 관한 것이다.

상기 화학식 1에서 : R₁, R₂및 R₃가 동시에 수소원자이거나, 또는 두 치환기가 수소원자이면서 나머지 하나의 치환기가 아세토기이다.

Description

신규 엘라지탄닌 배당체 화합물{New ellagitannin glycosides}

본 발명은 신규 엘라지탄닌(ellagitannin) 배당체 화합물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 주로 목재용으로 소비되는 유카리나무(Eucalyptussp.)로부터 추출분리하여 얻은 것으로, 종래 합성된 항산화제와 달리 천연물로서 독성이 없으며, 지질과산화 억제능이 우수하고 유리라디칼 소거능을 갖는 다음 화학식 1로 표시되는 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

화학식 1

천연식물인 유카리나무(Eucalyptussp.)는 도금양과(Myrtaceae)에 속하는 상록광엽수로 현재 약 600여종 이상이 생육하고 있으며 육성기간이 빠르고 목재로서의 다양한 용도 때문에 유용한 식물로 인정되어 세계 각지에서 대단위로 재배 활용되고 있는 식물이다. 그러나, 유카리나무를 목재로 활용하고 난 후 발생하는 부산물은 연료 또는 사료 첨가물 등의 부가가치가 낮은 용도로 주로 활용하고 있어 유카리나무 부산물의 고부가가치 창출을 위한 방안이 요구되고 있다. 이에 따라 유카리나무로부터 신규 생리활성물질을 탐색하여 응용하고자 하는 연구가 비교적 최근에 이루어지고 있으며, 현재 다음과 같은 발명들이 공지되어 있다.

즉, 유카리나무 추출물로부터 화장품 및 의약품으로 이용 가능한 신규 후라보노이드 배당체[일본특허공개 평6-65278호, 1994.3.8], 활성산소 소거활성을 나타내는 항산화제[일본특허공개 평5-186768호, 1993.7.27], 식품 및 화장품에 사용할수 있는 항산화제[일본특허공개 평5-186769호, 1993.7.27], 구충, 선충 등에 유용한 물질[국제특허공개 WO 93/24446, 1993.12.9], 항염효과가 있는 치통경감제[오스트리아특허 제0397613호, 1994.4.15], 고혈압에 효과가 있는 유칼리추출물[일본특허공개 평6-199677호, 1994.7.19] 등이다.

한편, 지질과산화물은 여러 가지 산화반응에 의하여 지질이 과산화됨으로써 생성되는 물질이다. 즉, 화학약품, 식품, 인체질환 및 방사선등에 의해 슈퍼옥사이드(superoxide, O₂), 하이드록실라디칼(hydroxyl radical, ·OH), 및 과산화수소(H₂O₂) 등과 같은 반응성이 큰 활성산소 및 유리라디칼(free radical) 등이 생체내에 생성되면 이들에 의해서 불포화 지방산이 다량 함유된 세포막의 인지질이 산화되어 지질과산화물이 생성된다. 이렇게 생성된 지질과산화물이 세포막에 축적되면 세포막의 유동성과 기능성이 저하되어 세포의 전체적인 기능이 저하되고 세포의 구조도 변화하는 등 조직상에 국소적인 장애가 생기면서 각종 질환이 유발되는 것이다. 이처럼 인체내에 지질과산화물이 과량으로 축적하게 되면 알콜성 간염 등의 간장질환, 뇌혈관 장애로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마치스 등 각종 질환을 일으키게 된다. 이에, 이러한 지질과산화를 억제하기 위해 일반적인 억제제로서 부틸하이드록시톨루엔(BHT) 및 부틸하이드록시아니솔(BHA) 등과 같은 합성 항산화제가 사용되어 왔다. 그러나, 상기 부틸하이드록시톨루엔(BHT)나 부틸하이드록시아니솔(BHA)은 지질과산화 억제능은 우수하지만, 암 또는 기형을 유발할 수 있는 가능성이 매우 높아 지속적으로 사용할 수 없는 단점이 있다.

상술한 바와 같이, 천연물로부터 지질과산화 억제능 및 유리라디칼 소거능을 갖는 새로운 물질을 창출하여 강력하면서도 독성이나 부작용이 전혀 없는 항산화제를 개발하는 것이 당면 과제로 남아있다. 상기와 같은 신규 물질의 발견은 각종 질병의 치료제 개발이나 노화방지용 화장품첨가제 및 식품첨가제 등으로 매우 유용하게 활용될 것이다.

이에, 본 발명자들은 약용식물 등 각종 천연물로부터 새로운 항산화활성 물질을 탐색하고 효과적으로 단리 취득할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 세계 각국의 식물체를 수집하여 조사 연구하였다. 그 결과, 호주지역에 대단위로 재배되고 있는 유칼리나무의 추출물로부터 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물을 분리 정제하는데 성공하였고, 이들 화합물의 이화학적 특성을 조사하여 동정하고 그 구조를 결정한 후, 이의 생체막 지질과산화 억제능을 측정하고, 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(DPPH)을 이용하여 유리라디칼 소거능을 측정함으로써 탁월한 지질과산화 억제능, 유리라디칼 소거능 및 안전성을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 신규한 엘라지탄닌 배당체 화합물을 제조하여 산업적으로 이용하고자 하는데 그 목적을 두고 있다.

본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물을 그 특징으로 한다.

화학식 1

또한, 본 발명은 유카리나무(Eucalyptus sp.) 분쇄물을 메탄올 추출 후 감압농축하고 에틸아세테이트로 재추출한 다음, 클로로포름/메탄올 혼합용매를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피, 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피, 및 50% 메탄올을 사용하는 역상 HPLC를 통해 순차적으로 분리 정제하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 엘라지탄닌 배당체 화합물의 추출방법을 또 다른 특징으로 한다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 주로 목재용으로 소비되는 유카리나무에서 추출한 천연물로서, 흰쥐의 간에서 추출한 마이크로좀의 지질과산화 억제능 및 유리라디칼 소거능이 우수한 신규한 엘라지탄닌 배당체 화합물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 신규한 상기 화학식 1로 표시되는 엘라지탄닌 배당체 화합물을 그 제조방법에 의거하여 더욱 구체화하여 설명하면 다음과 같다.

먼저, 본 발명은 유카리나무로부터 엘라지탄닌 배당체 화합물을 추출하고 분리 및 정제하는 과정을 수행한다. 상기 과정은 물이나 알콜, 에테르, 아세톤, 초산에틸 등의 유기용매로 추출하고, 각종 컬럼 크로마토그래피로 순차적으로 분리 및 정제하는 것이다. 즉, 식물성분 추출, 분리에 이용할 수 있는 공지 방법을 단독 또는 적당히 혼용하여 얻을 수 있고, 필요에 따라서는 공지 방법에 의해 더욱 순수하게 정제할 수 있다. 이때, 사용되는 유카리나무의 범위는 속(sp.) 전체이고, 사용 부위로는 잎, 줄기 뿌리, 꽃, 목질부, 목피부 등이 모두 해당된다.

다음으로, 상기 추출물의 이화학적 성질을 조사하고 화학구조식을 결정한다. 이를 위해 통상의 질량스펙트럼(MS), 자외선 흡수 스펙트럼(UV), 적외선 흡수 스펙트럼(IR), 수소핵자기 공명 스펙트럼(¹H NMR), 탄소핵자기 공명 스펙트럼(¹³C NMR)을 측정함으로써, 상기 추출물은 엘라직산(ellagic acid)에 람노스 또는 아세틸람노스가 결합된 엘라지탄닌 배당체 화합물임을 규명한다.

한편, 본 발명은 상기에서 얻은 엘라지탄닌 배당체 화합물의 생체막 지질과산화 억제능을 측정한 결과, IC₅₀이 5 ㎍/㎖ 이하로서, 몰비로 비교하면 유사한 공지 화합물보다 억제능이 높음을 확인할 수 있다.

또한, DPPH를 이용한 라디칼 소거능을 측정한 결과, IC₅₀이 6 ㎍/㎖ 이하로서 우수한 유리라디칼 소거능을 확인할 수 있다.

따라서, 이상과 같은 본 발명의 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물은 하기의 실시예에서도 알 수 있듯이 유사한 공지의 다른 화합물보다 탁월한 항산화활성을 나타내므로 생체막 지질의 과산화 반응과 관련되는 생리활성 분야에 매우 유용하며, 생체내 활성산소 소거제로서 활용될 수 있다. 게다가, 안전성도 매우 높기 때문에 식품이나 화장품 등에 첨가하는 경우 이외에도 각종 의약품으로서 사용이 가능하다. 의약품으로 사용할 경우에는 본 발명의 화합물을 유효성분으로 하며, 이에 상응하는 무기 또는 유기 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액체의 형태로 제제화하고, 경구 투여제 뿐만 아니라 외상용 등 비경구투여제로 제제화할 수 있다. 경구투여를 위한 가능한 제제로는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 펠렛제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 현탁제, 시럽제 등이 있으며, 비경구투여제로는 주사제, 점적제, 수액, 연고, 스프레이제, 현탁제, 유제, 좌제 등이 있다. 본 발명의 유효성분은 상법에 따라 비교적 쉽게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색제, 착향제, 보존제, 안정제, 완충제, 현탁제 등도 상법에 따라 적당히 선별하여 사용할 수 있다.

이하, 본 발명을 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 본 발명이 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 추출

풍건한 유카리나무(Eucalyptus sp.) 수피 4 kg을 분쇄기로 잘게 마쇄하고 80% 메탄올 20 ℓ로 추출한 다음 감압농축하고 에틸아세테이트 4ℓ로 4회 반복추출하여 에틸아세테이트 층과 물층으로 나누었다. 그런 다음, 에틸아세테이트 층을 취하여 클로로포름/메탄올 100:1, 80:1, 60:1, 20:1, 10:1, 2:1 혼합용매를 사용하여 농도구배 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 활성분획을 얻었고, 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피 및 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 실시한 다음 메탄올/물 1:1을 용매로하여 역상 HPLC를 실시하였다.

그 결과, 다음 표 1과 같은 본 발명에 따른 화합물을 얻을 수 있었다.


구 분	R₁	R₂	R₃	수득량(mg)
유카리사이드 A	H	H	H	18
유카리사이드 B	H		H	10
유카리사이드 C	H	H		10
유카리사이드 D		H	H	8

실시예 2: 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 이화학적 성질 및 동정

상기 실시예 1에서 추출한 유카리사이드 A ∼ D의 성상, 분자량, 분자식, MS, UV, IR,¹H NMR,¹³C NMR을 조사하여 동정하였다.

그 결과는 하기에 나타낸 표 2 ∼ 5와 같으며 이 결과로부터 본 발명의 화합물은 엘라직산(ellagic acid)에 람노스 또는 아세틸람노스가 결합된 엘라지탄닌 배당체인 것으로 확인되었다.

구 분	유카리사이드 A
분자량	462
분자식	C₂₁H₁₇O₁₂
질량분석(HRFAM-MS [M-H]^-)	측정값(m/z) :461.0727계산값(m/z) :461.0720
UV(λ_max, nm, logε)in MeOH	246(4.6), 260(sh), 285(sh), 360(sh), 375(4.0)
IR λ_maxcm^-1	3433, 2925, 1726, 1608, 1492, 1420, 1366, 1107, 1070
¹H NMR(400MHz, CD₃OD)δppm	7.46(1H, s, H-5), 7.47(1H, s, H-5'), 4.12(3H, s, OCH₃), 5.73(1H, d, J=1.6 Hz, H-1＂), 4.34(1H, dd, J=1.6, 3.4 Hz, H-2＂), 4.05(1H, dd, J=3.4, 9.6 Hz, H-3＂), 3.46(1H, t, J=9.6 Hz, H-4＂), 4.46(1H, dq, J=9.6, 6.2 Hz, H-5＂), 1.21(3H, d, J=6.2 Hz, H-6＂).
¹³C NMR(100MHz, CD₃OD)δppm	112.3(C-1), 142.3(C-2), 143.5(C-3), 154.4(C-4), 114.0(C-5), 113.3(C-6), 161.8(C-7), 110.6(C-1'), 143.6(C-2'), 140.3(C-3'), 153.7(C-4'), 115.2(C-5'), 114.6(C-6'), 161.8(C-7'), 61.6(OCH₃), 102.9(C-1＂), 72.0(C-2＂), 72.2(C-3＂), 73.9(C-4＂), 71.7(C-5＂), 17.9(C-6＂)

이상과 같은 물리화학적 특성으로부터 본 물질은 3-O-메틸엘라직산 3'-O-α-람노피라노사이드로 판명되었다.

구 분	유카리사이드 B
분자량	504
분자식	C₂₃H₂₀O₁₃
질량분석(HRFAM-MS [M-H]^-)	측정값(m/z) :503.0835계산값(m/z) :503.0825
UV(λ_max, nm, logε)in MeOH	246(4.9), 260(sh), 285(sh), 360(sh), 375(4.3)
IR λ_maxcm^-1	3411, 2934, 1727, 1606, 1492, 1421, 1366, 1106, 1069
¹H NMR(400MHz, CD₃OD)δppm	7.47(1H, s, H-5), 7.51(1H, s, H-5'), 4.12(3H, s, OCH₃), 5.64(1H, d, J=1.6 Hz, H-1＂), 4.44(1H, dd, J=1.6, 3.4 Hz, H-2＂), 5.24(1H, dd, J=3.4, 9.6 Hz, H-3＂), 3.65 (1H, t, J=9.6 Hz, H-4＂), 4.50(1H, dq, J=9.6, 6.2 Hz, H-5＂), 1.21(3H, d, J=6.2 Hz, H-6＂), 2.12(3H, s, CH₃-C=O)
¹³C NMR(100MHz, CD₃OD)δppm	113.2(C-1), 142.2(C-2), 142.0(C-3), 154.4(C-4), 114.4(C-5), 113.5(C-6), 160.4(C-7), 113.0(C-1'), 143.6(C-2'), 138.6(C-3'), 153.7(C-4'), 113.0(C-5') 114.6(C-6'), 160.4(C-7'), 62.0(OCH₃), 103.8(C-1＂), 70.9(C-2＂),75.4(C-3＂), 71.9(C-4＂), 69.6(C-5＂), 17.8(C-6＂), 172.7(CO), 21.1(CH₃)

이상과 같은 물리화학적 특성으로부터 본 물질은 3-O-메틸엘라직산 3'-O-α-3＂-O-아세틸람노피라노사이드로 판명되었다.

구 분	유카리사이드 C
분자량	504
분자식	C₂₃H₂₀O₁₃
질량분석(HRFAM-MS [M-H]^-)	측정값(m/z) :503.0835계산값(m/z) :503.0828
UV(λ_max, nm, logε)in MeOH	246(4.9), 260(sh), 285(sh), 360(sh), 375(4.3)
IR λ_maxcm^-1	3433, 2925, 1726, 1608, 1492, 1420, 1366, 1107, 1070
¹H NMR(400MHz, CD₃OD)δppm	7.46(1H, s, H-5), 7.48(1H, s, H-5'), 4.12(3H, s, OCH₃), 5.67(1H, d, J=1.6 Hz, H-1＂), 5.49(1H, dd, J=1.6, 3.4 Hz, H-2＂), 4.18(1H, dd, J=3.4, 9.6 Hz, H-3＂), 3.40(1H, t, J=9.6 Hz, H-4＂), 4.32(1H, dq, J=9.6, 6.2 Hz, H-5＂), 1.17(3H, d, J=6.2 Hz, H-6＂), 2.09(3H, s, CH₃-C=O)
¹³C NMR(100MHz, CD₃OD)δppm	113.2(C-1), 142.2(C-2), 142.0(C-3), 154.4(C-4), 114.4(C-5), 113.4(C-6), 160.4(C-7), 112.9(C-1'), 143.6(C-2'),138.6(C-3'), 153.8(C-4'), 113.4(C-5'), 114.4(C-6'), 160.4(C-7'), 62.0(OCH₃), 100.0(C-1＂), 75.4(C-2＂), 73.6(C-3＂), 71.9(C-4''), 70.4(C-5＂), 20.5(C-6＂), 172.0(CO), 20.9(CH₃)

이상과 같은 물리화학적 특성으로부터 본 물질은 3-O-메틸엘라직산 3'-O-α-2＂-O-아세틸람노피라노사이드로 판명되었다.

구 분	유카리사이드 D
분자량	504
분자식	C₂₃H₂₀O₁₃
질량분석(HRFAM-MS [M-H]^-)	측정값(m/z) :503.0828계산값(m/z) :503.0826
UV(λ_max, nm, logε)in MeOH	246(4.6), 260(sh), 285(sh), 360(sh), 375(4.0)
IR λ_maxcm^-1	3423, 2934, 1726, 1608, 1490, 1421, 1366, 1104, 1069
¹H NMR(400MHz, CD₃OD)δppm	7.47(1H, s, H-5), 7.48(1H, s, H-5'), 4.1(3H, s, OCH₃), 5.68(1H, d, J=1.6 Hz, H-1＂), 4.38(1H, dd, J=1.6, 3.4 Hz, H-2＂), 4.19(1H, dd, J=3.4, 9.6 Hz, H-3＂), 5.04(1H, t, J=9.6 Hz, H-4＂), 4.60(1H, dq, J=9.6 Hz, 6.2, H-5＂), 1.09(3H, d, J=6.2 Hz, H-6＂), 2.14(3H, s, CH₃-C=O)
¹³C NMR(100MHz, CD₃OD)δppm	113.5(C-1), 143.2(C-2), 142.0(C-3), 154.8(C-4), 113.0(C-5), 113.2(C-6), 160.3(C-7), 112.7(C-1'), 143.6(C-2'), 138.6(C-3'), 153.9(C-4'), 113.0(C-5'), 114.6(C-6'), 160.3(C-7'), 62.0(OCH₃), 103.6(C-1＂), 71.8(C-2＂), 70.1(C-3＂), 75.1(C-4＂), 69.6(C-5＂), 17.7(C-6＂), 172.6(CO), 21.0(CH₃)

이상과 같은 물리화학적 특성으로부터 본 물질은 3-O-메틸엘라직산 3'-O-α-4＂-O-아세틸람노피라노사이드로 판명되었다.

실시예 3: 생체막 지질과산화 억제능의 측정

실험에 사용한 동물은 체중 160 ∼ 180g인 8주령의 웅성 KIST:SD 흰쥐이고, 이로부터 마이크로좀의 분리는 분별원심분리법으로 실시하였다. 즉, 흰쥐의 간을 적출하고 4 ℃의 0.25 M 수크로오스 용액에 넣어 2∼3회 세척한 후 세절하고 간 무게의 8배 용량의 수크로오스 용액, 5 mM 트리스-염산 완충용액(pH 7.4) 및 0.1 mM EDTA 혼합용액을 가하여 조직분쇄기로 마쇄하였다. 이것을 1,000 g에서 10 분간 원심분리하고 상층액을 취하여 100,000 g에서 60 분간 초원심분리한 후 침전물을 취하여 트리스-염산 완충용액으로 3회 세척하였다. 그 다음, 트리스-염산완충용액으로 현탁 희석하고 로우리방법으로 단백질을 정량하여 1 mg/㎖로 만들었다.

상기와 같은 방법으로 제조된 마이크로좀 용액을 생체막 지질원으로 하고 신규 엘라지탄닌 배당체 시료를 억제제로 하여 다음과 같이 지질과산화 억제능을 측정하였다. 먼저, 상기 실시예 1에서 얻은 배당체를 메탄올에 녹여 농도를 각각 200 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 30 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 3 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖이 되도록 10개의 시료를 만들었다. 그런 다음, 시험관에 마이크로좀 용액 10 ㎕, 상기 메탄올에 녹인 배당체 시료 10 ㎕, 100 mM 트리스-염산 완충용액(pH 7.5) 0.5 ㎖, 증류수 450 ㎕를 넣고 4 mM FeSO₄용액 30 ㎕를 첨가하여 반응을 개시하였다. 반응은 37 ℃의 수욕상(water bath)에서 30 분간 행하였고, 3M 트리클로로초산과 2N 염산의 1:1 혼합용액 0.3 ㎖를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응물을 3000 g에서 10 분간 원심분리하고 상등액 1 ㎖를 취한 후 0.67% 티오바비투릭산(TBA) 0.3 ㎖를 첨가하여 끓는 수욕상에서 10 분간 반응시켰다. 그 다음, 분광광도계를 사용하여 파장 530 nm에서 흡광도를 측정함으로써, TBA에 대한 반응양성물질의 양을 결정하고, 다음 수학식 1에 따라 지질과산화 억제율(%)을 산출하였다. 양성 대조군으로는 부틸하이드록시아니솔(BHA) 및 비타민 E를 사용하였다.

상기 수학식 1에서 : A는 마이크로좀을 넣고 억제제는 넣지 않은 경우의 흡광도를 나타내고, B는 마이크로좀과 억제제를 모두 넣지 않은 경우의 흡광도를 나타내고, C는 마이크로좀과 억제제를 모두 넣은 경우의 흡광도를 나타낸다.

다음 표 6는 IC₅₀을 지표로 하여 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 생체막 지질과산화 억제능을 나타낸 것이다. 여기서 IC₅₀은 상기 억제율이 50% 일때의 억제제 농도 즉, 지질과산화를 50% 억제하는 억제제의 농도를 의미한다. 또한, 몰비는 대조군 2(비타민 E)를 기준으로 계산한 것으로, 동일 몰수에 대한 지질과산화 억제능을 나타내므로 몰비가 높을수록 억제능이 우수함을 뜻한다. 이에 따라, 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물이 대조군 2(비타민 E)보다 생체막 지질과산화 억제능이 약간 높고 대조군 1(BHA)보다는 월등하게 높음을 알 수 있었다.

신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 생체막 지질과산화 억제능

물질	생체막 지질과산화 억제능	분자량
물질	IC₅₀	분자량	중량비	몰 비
유카리사이드 A	4 ㎍/㎖	125%	134%	462
유카리사이드 B	5 ㎍/㎖	100%	117%	504
유카리사이드 C	5 ㎍/㎖	100%	117%	504
유카리사이드 D	5 ㎍/㎖	100%	117%	504
대조군 1^*	3 ㎍/㎖	167%	70%	180
대조군 2^**	5 ㎍/㎖	100%	100%	430
[주] * : 부틸하이드록시아니솔(BHA)**: 비타민 E

실시예 4: DPPH를 이용한 유리라디칼 소거능의 측정

먼저, DPPH를 에탄올에 녹여 0.15mM DPPH 용액을 제조하였다. 또한, 상기 실시예 1에서 얻은 배당체를 메탄올에 녹여 농도를 각각 200 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 30 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 3 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖이 되도록 10개의 시료를 만들었다. 그런 다음, DPPH 용액 1 ㎖와 상기 메탄올에 녹인 배당체 시료 0.1 ㎖를 섞고 30 분간 방치하였다. 517 nm에서의 광흡수도를 측정하여 다음 수학식 2에 따라 라디칼 소거능을 산출하였다. 양성 대조군으로는 BHA와 비타민 E를 사용하였다.

상기 수학식 1에서 : A는 측정할 시료를 넣지 않은 경우의 흡광도를 나타내고, B는 측정할 시료를 넣은 경우의 흡광도를 나타낸다.

다음 표 7은 IC₅₀을 지표로 하여 DPPH 유리라디칼 소거능을 나타낸 것이다. 이에 따라, 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 DPPH 유리라디칼 소거능이 대조군에 비해 약간 낮음을 알 수 있었다.

신규 엘라지탄닌 배당체 화합물의 DPPH 유리라디칼 소거능

물질	생체막 지질과산화 억제능	분자량
물질	IC₅₀	분자량	중량비	몰 비
유카리사이드 A	4 ㎍/㎖	63%	72%	462
유카리사이드 B	5 ㎍/㎖	50%	59%	504
유카리사이드 C	5 ㎍/㎖	50%	59%	504
유카리사이드 D	6 ㎍/㎖	42%	49%	504
대조군 1^*	0.5 ㎍/㎖	500%	210%	180
대조군 2^**	2.5 ㎍/㎖	100%	100%	430
[주] * : 부틸하이드록시아니솔(BHA)**: 비타민 E

상술한 바와 같이, 본 발명의 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물은 유카리나무(Eucalyptus sp.)로부터 추출분리한 것으로 공지 화합물보다 탁월한 지질과산화 억제능이 있고, 유리라디칼 소거능 및 안전성에 우수한 효과가 있으며, 목재용도 이외의 유카리나무 부산물 활용에 있어 높은 부가가치를 창출한다.

따라서, 본 발명의 신규 엘라지탄닌 배당체 화합물은 생체막 지질의 과산화 반응과 관련되는 생리활성분야에서 매우 유용하며, 상기 화합물의 화학구조식을 변화시켜 신규한 화합물을 제공할 수 있으므로 의약품, 화장품 및 식품 등에 매우 효과적으로 널리 응용될 수 있다.

Claims

다음 화학식 1로 표시되는 것임을 특징으로 하는 엘라지탄닌 배당체 화합물.

화학식 1

상기 화학식 1에서 : R₁, R₂및 R₃가 동시에 수소원자이거나, 또는 두 치환기가 수소원자이면서 나머지 하나의 치환기가 아세토기이다.
유카리나무(Eucalyptus sp.) 분쇄물을 메탄올 추출 후 감압농축하고 에틸아세테이트로 재추출한 다음, 클로로포름/메탄올 혼합용매를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피, 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피, 및 50% 메탄올을 사용하는 역상 HPLC를 통해 순차적으로 분리 정제하여 다음 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 것을 특징으로 하는 유카리나무로부터 엘라지탄닌 배당체 화합물의 추출방법.

화학식 1

상기 화학식 1에서 : R₁, R₂및 R₃가 동시에 수소원자이거나, 또는 두 치환기가 수소원자이면서 나머지 하나의 치환기가 아세토기이다.
다음 화학식 1로 표시되는 엘라지탄닌 배당체 화합물이 유효성분으로 함유된 것을 특징으로 하는 항산화제.

화학식 1

상기 화학식 1에서 : R₁, R₂및 R₃가 동시에 수소원자이거나, 또는 두 치환기가 수소원자이면서 나머지 하나의 치환기가 아세토기이다.