KR100365578B1 - 두개의당류와하나의스페이서(spacer)를함유하는이결합체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 각 당류가 동일하거나 상이한 것으로서 하나 이상의 유니트가 우론산인 2개 내지 6개의 단당류 유니트를 함유하는, 두개의 당류와 하나의 스페이서(spacer)를 함유하는 조정 가능한 이결합체에 관한 것이며, 이때, 하나 이상의 당류 그 자체는 항혈전 활성을 갖고 있고, 스페이서는 하나 이상의 당류를 그것의 비환원성 말단을 통해 다른 당류에 연결시키며, 그 스페이서의 사슬 길이는 20-120원자인 것을 특징으로 한다.

Description

두개의 당류와 하나의 스페이서(spacer)를 함유하는 이결합체
본 발명은 두개의 당류와 하나의 스페이서(spacer)를 함유하는 조정 가능한 이결합체, 이것의 제조 방법, 이것을 함유하는 약학적 조성물, 및 약제 제조에 사용되는 상기 이결합체의 용도에 관한 것이다.
두개의 당류와 하나의 스페이서를 함유하는 항혈전성 이결합체는 유럽 특허 출원 제312,086호에 공지된 바 있다. 이 화합물의 당류 부는 황산화 갈락토피라노실, 만노피라노실 또는 글루코피라노실 유니트를 함유한다. 이 당류는 유럽 특허 출원 제529,715호에 개시된 바와 같은 우론산을 함유하는 글리코스아미노글리칸이나 글리코스아미노글리카노이드 류에 속하지 않는다. 이 문헌에는 상기 당류들 그 자체가 항혈전 활성을 나타내는 지에 대해서는 개시되어 있지 않다. 또한, 매우 특이적인 구조를 갖고 있고, 8개 원자 만큼 작은 사슬 길이를 가질 수 있는 스페이서만이 개시되어 있는데, 이에 반해 본 발명의 이결합체는 길이가 20개 원자 보다 적은 스페이서 사슬을 갖는 경우 그 이결합체가 활성적이지 않다는 것을 밝히고 있다. 또한, EP 312,086호에 개시된 이결합체에 있어서, 당류는 그들의 환원 말단을 통해 스페이서에 결합되어 있다.
본 발명은 각 당류가 동일하거나 상이한 것으로서 하나 이상의 유니트가 우론산인 2개 내지 6개의 단당류 유니트를 함유하는 두개의 당류와 하나의 스페이서를 함유하는 조정 가능한 이결합체에 관한 것이며, 여기에서 하나 이상의 당류 그 자체가 항혈전 활성을 갖고 있고, 스페이서는 최소한 하나의 당류를 그것의 비환원성 말단을 통해 다른 당류에 연결시키며, 그 스페이서의 사슬 길이는 20 내지 120원자인 것을 특징으로 한다.
글리코스아미노글리칸 형의 작은 탄수화물 분자가 강력한 항 Xa 저해제라는 것은 공지된 바 있다. 예를 들면, 유럽 특허 84999호를 참조하라. 그 이후 출원된 특허 출원들은 이 염기성 분자의 많은 변이체가 그와 유사한 활성을 갖고 있다는 것을 밝혔다. 현재, 이러한 비교적 작은 분자(오당류가 일반적인 예임)가 세린프로테아제 저해제중의 하나와만, 보통 항트롬빈 III(AT-III)과 반응한다는 것이 명백해졌다. 활성화된 당류 AT-III 복합체는 그 다음 Xa인자를 선택적으로 저해한다. 천연 발생의 헤파린과 그것의 단편을 사용한 연구로부터, 보다 긴 글리코스아미노글리칸이 IIa 인자(트롬빈)의 AT-III 매개의 불활성화에 필요로 된다는 것이 알려졌다. 적어도 16개의 당류 유니트를 갖는 보다 긴 글리코스아미노글리칸은 항IIa 활성 뿐만 아니라 항 Xa 활성도 나타내었다.
실제적으로, 16개 또는 그 이상의 당류 유니트를 갖는 글리코스아미노글리칸을 합성하는 것이 바람직한 것은 아니나, 헤파린이나 다른 천연 발생적인 글리코스아미노글리칸의 단편화는 대부분 단백질, DNA, 비루스 등과 같은 다른 종류의 화합물이 혼입되어 있는 화합물들의 혼합물을 만든다. 의약적 견지에서 볼때, 이러한혼합물들은, 예를 들면 일반적으로 발생하는 출혈 위험으로 인해 순수하고 일정한 합성 화합물에 비해 선호성이 떨어진다.
지금에 이르러, 이러한 보다 큰 글리코스아미노글리칸의 성질이, 하나 이상의 당류가 AT-III 또는 HC-II와 같은 프로테아제 저해제와 상호 작용할 수 있고 서로 스페이서를 통해 연결되어 있는 2개의 작은 당류 분자(2개 내지 6개의 단당류 유니트를 함유)에 의해 모방될 수 있다는 것을 발견하게 되었다. 또, 2개의 당류사이에 필요로 되는 최소 거리를 얻기 위해서는 최소 20개 원자의 스페이서 길이가 필요하였다. 120개 원자 이상의 스페이서는 합성적인 측면에서 적합하지 않다. 또한, 스페이서의 화학적 구조는 거의 또는 전혀 중요치 않다는 것을 발견하였다. 본 발명의 이결합체가 나타내는 항혈전 활성 및 αXa/αIIa 활성비는 당류의 본성, 스페이서에 대한 결합 부위 및 스페이서의 길이에 의존적이다. 예컨대, 양쪽 환원성 말단을 통해 스페이서에 결합된 당류는 활성이 없다.
하나 이상의 당류 그 자체가, 바람직하게는 두개의 당류 그 자체가 AT-III 및/또는 HC-II에 대한 친화성, 및/또는 항 IIa 인자 및/또는 항 Xa 인자 활성을 갖고 있다.
적합한 이결합체는 하나 이상의 당류가 하기 화학식을 갖는 이결합체이다.
이 식중에서,
R은 각각 H, OH, OSO3 -및 알콕시중에서 각각 선택되고,
R1은 OSO3 -및 NHSO3 -중에서 각각 선택되며,
주름선은 상향 또는 하향 결합을 나타내며, 음전하는 수소나 알칼리 금속 양이온에 의해 상쇄된다.
이 식에서 사용된 바와 같은 알킬이란 용어는 1 내지 8개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소원자를 갖는 알킬기이다. 가장 바람직한 알킬기는 메틸기이다.
알콕시란 용어는 1 내지 8개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소원자를 갖는 알콕시기를 의미한다. 가장 바람직한 것은 메톡시기이다.
나트륨은 바람직한 알칼리 금속이다.
가장 바람직한 이결합체는, 하나 이상의 당류가 하기 화학식을 갖는 이결합체이다.
이 식중에서, R2는 각각 OSO3 -또는 OCH3이다.
상기에서 강조한 바와 같이, 스페이서의 화학적 구조는 별로 중요치 않다. 그러나, 합성의 편리를 위해, 일부 스페이서가 다른 스페이서보다 더 적절하다. 쉽게 도입될 수 있는 간단한 스페이서는, 예를 들면 하기 화학식을 갖는 스페이서이다.
= {Q-NT-CO-[(CH2)n-NT-CO-(CH2)m]p-S-}2또는
= {Q-O-[(CH2)n-O]p-(CH2)m-S-}2
이 식중에서,
2개의 Q기중 하나는 한 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 다른 Q기는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, Q기는 각각 페닐렌(C6H4)기, 또는 -[(CH2O)q-(CH2)r-O]s-[(CH2)t-NT-CO]u-(CH2)v(여기에서, q는 0 또는 1이고; r 및 t는 각각 2 내지 4이며; s는 각각 1 내지 12이고, 바람직하게는 1 내지 6이며; u 및 v는 각각 1 내지 6임)이며, T는 각각 수소, 또는 전술한 바와 같은 알킬이고, n은 1 내지 8, m은 1 내지 8, p는 1 내지 12이고, 원자들의 총수는 20 내지 120이다.
또 다른 적합한 스페이서는 하기 화학식을 갖는다.
이 식중에서,
2개의 Φ기중 하나는 한 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 다른 Φ기는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, Φ는 페닐렌(C6H4)기를 나타내고, n, m 및 o는 각각 1 내지 8이고, 원자의 총수는 20 내지 120이다.
기타 동등하게 적합한 스페이서는 하기 화학식을 갖는다.
이 식중에서, 스페이서의 2개의 자유 원자가중의 하나는 하나의 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 그 스페이서의 다른 자유 원자가는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, T는 각각 H, 또는 전술한 바와 같은 알킬이고; m은 각각 1 내지 8이며; r은 각각 2 내지 4이고: s는 각각 1 내지 12이고, 바람직하게는 1 내지 6이며; w는 0 내지 10, 바람직하게는 0 내지 7이고; x는 0 또는 1이며; y는 0 또는 1이고; z는 0 또는 1이며, 원자들의 총수는 20 내지 120이다.
이 구체예들은 이들의 입수 용이성으로 인해 바람직한 것으로, 스페이서들이 전술한 것에만 결코 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 이결합체는 두개의 당류가 동일한 경우 대칭이라 부른다. 이결합체의 두개의 당류가 서로 상이한 경우에는 비대칭이라 부른다. 비대칭 이결합체는 우론산 유니트를 갖지 않는, 따라서 글리코스아미노글리칸 및 글리코스아미노글리카노이드와는 상이한 하나의 당류를 함유하는 것이 바람직하며, 예를 들면, 셀로비오즈, 말토트리오즈 또는 말토펜타오즈 또는 이것의 유도체와 같은 글루코즈 유니트로 이루어진 당류이다.
본 발명의 이결합체는 유사 화합물의 제조에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 보통, 탄수화물부는 문헌(예를 들면, EP 84999호, EP 301618호, EP 454220호, EP 529715호 및 EP 출원 제9304769호의 방법)에 공지된 방법을 사용하여 제조한다. 임시 보호기를 사용하면 바람직한 히드록시기를 스페이서와의 커플링 반응시 자유 상태로 유지시킬 수 있다. 그러나, 보다 바람직한 것은 바람직한 히드록시기에 적합한 링커기, 예컨대 일반적인 환원 단계(벤질 보호기의 절단)동안 상응하는 아닐린 기로 전환하는 니트로페닐기를 부착하는 것이며, 상기 아닐린기의 아미노기는 스페이서(예컨대, 그 말단에 카르복실기의 활성 에스테르나 또는 할로겐을 갖는 것)의 나머지와 커플링하는데 사용되거나, 또는 경우에 따라 일시적으로 보호된 후 이후의 단계에서 스페이서의 나머지에 커플링될 수 있다. 그 결과, 아닐린기는 스페이서의 일부분이 된다.
탄수화물부가 동일한 경우 특히 유용한 또 다른 방법은 탄수화물부를 스페이서의 절반에 상응하는 부에 커플링시키고, 당류에 결합되지 않는 말단은 이량체화하기 쉽기 때문에 보호기로 보호한다. 보호기 제거후, 분자는 적합한 반응 조건하에서 본 발명의 이결합체로 이량체화된다.
전술한 방법의 변이 방법은 탄수화물부에 스페이서의 일부를 커플링시킨 후 그 스페이서 부를 화학적 축합반응에 의해 추가로 제조한다. 이 방법은, 특히 동일한 탄수화물부를 출발 물질로 사용하여, 다양한 스페이서 길이를 지닌 이결합체의 제조에 유용하다.
또다른 방법은 스페이서, 또는 스페이서의 절반을 탄수화물부의 일부분에 커플링시키는 것이고, 이 탄수화물부는 표준 탄수화물 커플링 기법에 의해 나머지 탄수화물 부에 커플링되어 필요로 되는 이결합체 또는 이결합체의 절반으로 제조된 다음, 필요한 경우, 스페이서의 보호기 제거 및 이량체화를 전술한 바와 같이 실시할 수 있다.
본 발명의 이결합체는 혈전증 질환이나 평활근 세포 증식의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 본 발명의 이결합체는 장내로, 또는 비경구적으로 투여될 수 있고, 인체에 대해 바람직하게는 체중 kg 당 1 일 투여량 0.001 내지 10mg으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 표준 참고문헌[젠나로 등, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 판, Mack Publishing Company, 1990, 특히 8 편 : 약학 제제 및 이들의 제조방법, 참조]에 기술된 바와 같이 약학적으로 적합한 보조제와 혼합되는 경우, 경구 투여, 협측 투여 또는 설하 투여시 활성적인 이결합체는 환제 및 정제와 같은 고형 투여 단위로 압축되거나, 또는 캡슐이나 좌약으로 가공될 수 있다. 비경구 투여시 활성적인 경우, 이결합체는 또한 약학적으로 적합한 액체에 의해 용액, 현탁액, 유탁액의 형태로 주사용 또는 주입용 제제로서 투여되거나, 또는 분무제, 예를 들면 비축 분무제로서 투여될 수 있다.
정제와 같은 투여 단위를 제조하는 경우에 있어서, 충전제, 착색제, 중합성 결합제 등과 같은 통상적인 첨가제의 사용이 고려된다. 일반적으로, 활성 화합물의 작용을 방해하지 않는 임의의 약학적 허용성 첨가제가 사용될 수 있다.
조성물과 함께 투여될 수 있는 적합한 담체로는 적당한 양으로 사용되는 락토오즈, 전분, 셀룰로즈 유도체 등이나, 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 화합물의 조정 가능성은 표 I, II 및 III 에 제시되어 있다. 당류, 스페이서의 길이 및 이들의 조합을 이용하여 αXa/αIIa 활성비를 조정할 수 있다.
스페이서 길이는 스페이서에 연결된 당류의 산소 원자는 계수하지 않고, 두개의 당류 사이의 가장 짧은 사슬을 따라 계수한 스페이서 원자의 수이다.
표 I
상이한 당류 부와 동일한 스페이서 길이를 갖는 이결합체
a항 Xa 활성(유니트/mg)은 문헌 [에이.엔.타이엔과 엠.리, Thrombosis Research, 10, 399-410 (1977)]의 방법에 따라 측정하였다.
b항 IIa 활성(유니트/mg)은 문헌[엠.엘. 라슨등, Thrombosis Research, 13, 285-288(1978)]의 방법에 따라 측정하였다.
결론: 표 I에서는 이결합체의 αXa/aIIa 활성비가 당류의 변화에 의해 조정될 수 있다는 것을 나타내고 있다.
표 II
동일한 당류 부와 상이한 스페이서 길이를 갖는 이결합체
*스페이서 길이는 시클로펜틸기(가장 짧은 사슬)의 메틸렌기를 통해 측정함.
결론: 표 II는 이결합체의 αXa/αIIa 활성비가 스페이서 길이의 변화에 의해 조정될 수 있다는 것을 예시한다.
표 III
미셀상 당류 및/또는 스페이서 길이를 갖는 이결합체
*스페이서 길이는 시클로펜틸기(가장 짧은 사슬)의 메틸렌기에 의해 측정됨.
결론: 표 III은 당류와 스페이서 길이를 변화시켜 이결합체의 αXa/αIIa 활성 비를 조정할 수 있음을 나타낸다.
본 발명은 하기 실시예로 예시된다.
실시예 1
단당류 (5)
화합물 (1) (3.5g)[참고문헌: Carb. Res. 1989, 186(2), 189-205]을 디메틸포름아미드(30ml)에 용해시키고, 수소화나트륨(560mg)을 질소 대기하에 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1-플루오로-4-니트로벤젠(1.63ml)을 2분동안 첨가하였다. 30분동안 교반시킨 후, 혼합물을 농축시키고, 디클로로메탄 및 물로 희석시키고, 추출시켰다. 통상의 처리후에, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제시켜 4g의 화합물(2)를 얻었다. 화합물(2)를 가아세트산 분해 반응으로 화합물(3)으로 전환시킨 후, 비누화 반응으로 화합물(4)를 얻고, 트리클로로아세토니트릴과 반응시켜 화합물(5)를 얻었다. 화합물(9)(하기 참조), (41) 및 (42)(실시예 4 참조)의 제조에 대해 설명된 바와 같은 절차를 사용하여 화합물(3), (4) 및 (5)의 합성을실시하였다.
사당류 (14)
화합물 (39)(실시예 4 참조)에 대해 설명된 방법에 따라 화합물(6)(참고 문헌: Bioorganic and Medicinal Letters 1992, 2(9), 905)에서 화합물 (7)을 제조하였다.
화합물(7)(14.6g)을 아세톤(260ml)에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이 온도에서, 물(53ml)과 진한 황산(10.5ml)의 혼합물에 용해시킨 산화크롬(VI)(10.8g) 용액을 적가시켰다. 혼합물을 16시간 동안 2℃에서 교반시켰다. 과량의 산화 크롬(VI)을 메탄올로 분쇄하고, 그 혼합물을 탄산수소나트륨으로 중화시킨 후, 물을 첨가하였다. 디클로로메탄으로 추출시킨 후, 유기 층을 건조 농축시켰다. 잔류 오일을 무수 디메틸포름아미드(174ml)에 용해시켰다. 탄산수소칼륨(7g) 및 요오도메탄(7ml)을 첨가하고 그 혼합물을 실온에서 3시간동안 교반시켰다. 혼합물을 농축시킨 후, 그 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 9.1g의 화합물(8)을 얻었다.
화합물(8)(2.8g)을 아세트산 무수물(50ml), 아세트산(0.3ml) 및 트리플루오로아세트산(3.0ml)의 혼합물에 용해시켰다. 혼합물을 3시간동안 교반시킨 후, 농축시키고, 톨루엔으로 동시 증발시켜 3.1g의 화합물(9)를 얻었다.
화합물(9)의 비누화 반응으로 화합물(10)을 제조한 후, 이어서 이미데이트(11)로 전환시켰다. 화합물(41) 및 (42)를 제조하기 위한 절차를 사용하였다(실시예 4 참조).
화합물(11)을 화합물(12)와 커플링시켜[참고 문헌: Jaurand G. 등, Bioorganic and Medicinal Chem. Lett., 2(9), 897-900 (1992), 화합물 12]화합물(13)을 형성했으며, 이로부터 Lev 기를 제거하여 그 결과로서 사당류(14)를 얻었다. 화합물(43) 및 (44)(실시예 4 참조)를 제조하기 위한 절차를 사용하였다.
2.5ml의 디클로로메탄중에 용해시킨 79mg의 사당류(14) 및 70mg의 단당류(5) 용액에 4Å 분자체(70mg)를 첨가하였다. 혼합물을 -20℃로 냉각시키고, 6.8μmol의 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설폰산염을 첨가하였다. 혼합물을 30분동안 교반시킨 후, 탄산수소나트륨을 첨가하였다. 혼합물을 여과시키고, 용매를 증발시킨 뒤, 그 잔류물을 실리카 크로마토그래피로 정제하여 88mg의 오당류(15)를 얻고, 이를 7.3ml의 테트라히드로푸란에 용해시키고, -5℃로 냉각시켰다. 이 온도에서, 2.6ml의 30% 과산화수소 수용액을 첨가하고, 10분 후에 1.2ml의 1.25M 수산화리튬 용액을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하고, 4.8ml의 메탄올 및 1.3ml의 4M 수산화나트륨 용액을 첨가하여, 1시간 동안 교반시킨 후, 온도를 20℃로 승온시키고, 혼합물을 20시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃에서 6N의 염산을 사용하여 pH 3으로 산성화시키고, 비누화된 생성물을 에틸 아세테이트로 추출시켰다. 과량의 과산화수소를 5% 아황산나트륨 용액으로 추출시켜 분해시키고, 그 유기 혼합물을 황산 마그네슘상에서 건조, 증발시켜 89mg의 미정제 오당류(16)을 얻었다.
오당류(16)을 10.2ml의 디메틸포름아미드에 용해시키고, 55mg의 탄소상의 10% Pd를 첨가하였다. 밤새 가수소 분해 반응을 실시한 후, 64mg의 미정제오당류(17)을 얻었다.
오당류(17)(49mg)을 에탄올-물(1:1) 혼합물 2ml에 용해시키고, 이 혼합물에 16mg의 탄산수소나트륨 및 10.4μl의 염화벤질옥시카르보닐(Z-Cl)을 첨가하였다. 4시간동안 실온에서 교반시킨 후, 용매를 증발시키고, 잔류물에 메탄올을 첨가하였다. 염을 여과 제거하고, 여과액을 증발시켜 67mg의 미정제 오당류(18)을 얻고, 이를 2.5ml의 무수 디메틸포름아미드에 용해시켰다. 질소 대기하에서, 442mg의 트리에틸아민 삼산화황을 첨가하고, 혼합물을 밤새 50℃에서 교반시키고, 탄산수소나트륨 수용액을 얼음 냉각하에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반시키고, 소량의 부피로 농축시킨 뒤, 세파덱스 G-25 컬럼으로 염을 제거하였다. 분리된 생성물을 도웩스 50WX8 Na+컬럼상에서 물로 용출시켜 104mg의 오당류(19)를 얻었다. 100mg의 오당류(19)를 8ml의 물에 용해시키고, 10% 탄소상 Pd를 첨가하고, 혼합물을 밤새 가수소 분해시켜 83mg의 오당류(20)을 얻었다. [α]D 20= +58.1˚ (c=1; 물).
9.6mg의 오당류(20) 및 4.8mg의 설포-LC-SPDP를 0.1ml의 에탄올과 pH가 7.8인 0.35ml의 0.05M 인산수소이나트륨 수용액의 혼합물에 용해시켰다. 혼합물을 3시간동안 교반시키고, 세파덱스 G-25 컬럼으로 염을 제거하여 9.0mg의 일결합체(21)을 얻었다.
일결합체(21)(8.9mg)을 pH가 8.0인 1.5ml의 0.05M 인산이수소나트륨 수용액에 용해시켰다. 이소프로판올중의 트리부틸포스핀 0.05M용액 157μl를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반한 뒤, 그 반응 혼합물에 공기를 유입시켰다. 세파덱스 G-25 컬럼으로 혼합물의 염을 제거한 후, 모노 Q 음이온 교환 컬럼을 사용하여 HPLC로 미정제 이결합체를 정제하여 4.0mg의 이결합체 (I)을 얻었다. [α]D 20= +45.7˚(c=0.35; 물).
실시예 2
일결합체(21)(14.7mg)을 1ml의 메탄올과 pH가 8인 2ml의 0.1M 인산이 수소나트륨 수용액의 혼합물에 용해시켰다. 이소프로판올중에 용해시킨 트리부틸포스핀 0.05M 용액 247μl를 질소 대기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 0.5ml 디메틸포름아미드 중에 화합물(23) 1.68mg을 용해시킨 용액을 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 교반시켰다. 세파덱스 G-25 컬럼으로 혼합물의 염을 제거한 후, 세파덱스 G-50 컬럼을 통해 10% 아세토니트릴을 함유하는 0.05M의 염화나트륨 수용액으로 용출시켜 미정제 생성물을 추가 정제시켰다. 분획을 합하여 세파덱스 G-25를 통해 염을 제거함으로써 5.5mg의 이결합체(II)를 얻었다. [α]D 20=+7.0˚ (c=0.34; 물).
실시예 3
75ml의 디메틸포름아미드중에 메틸 2,3,6-트리-O-벤질-α-D-글루코피라노사이드 (2.1g)(34)를 용해시키고, 5.5ml의 테트라에틸렌 글리콜 디-p-토실레이트를 실온에서 첨가하였다. 수소화나트륨(162mg)을 첨가하고, 그 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 가열하였다. 아지화 리튬(4.5g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1.52g의 화합물(25)를 얻었다.
-20℃에서 아세트산 무수물 40ml중에 용해시킨 화합물(25)(768mg) 용액에 아세트산 무수물중에 용해시킨 5%(v/v)의 황산 용액(-20℃로 냉각시킴) 10ml를 첨가하였다. 혼합물을 10분동안 상기 온도에서 교반시키고, 아세트산 나트륨(3.5g)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 10분 후, 에틸 아세테이트로 혼합물을 추출시키고, 합한 추출물을 10%의 탄산수소나트륨 수용액으로 세척하고, 건조시킨 뒤 농축시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피하여 573mg의 화합물(26)을 얻었다.
5.5ml의 디메틸포름아미드, 31μl의 아세트산 및 28μl의 히드라진 일수화물의 혼합물에 화합물(26)을 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시키고, 디클로로메탄 및 물로 희석시키고, 추출시켰다. 통상의 처리 및 생성물의 컬럼 크로마토그래피로 158mg의 화합물(27)을 얻었다.
화합물(27)(158mg)을 2ml의 디클로로메탄에 용해시켰다. 트리클로로아세토니트릴 (0.13ml) 및 탄산 세슘(17.8mg)을 질소 대기하에 첨가하였다. 혼합물을 1시간동안 실온에서 교반시키고, 여과한 뒤, 증발시켰다. 생성물을 컬럼 크로마토그래피하여 182mg의 화합물(28)을 얻었다.
화합물(11)을 화합물(29)와 커플링하여 화합물(30)을 제조하고(참고 문헌: H. Lucas 등, Angew. Chem. 1993,105, 462-464), 이로부터 Lev-기를 제거하여 화합물(31)을 형성시켰다. 화합물(43) 및 (44)(실시예 4 참조)를 제조하기 위한 절차를 사용하였다.
화합물(15), (16) 및 (17)(실시예 1 참조)을 제조하기 위해 설명된 절차와 유사하게 화합물(32), (33) 및 (34)를 제조하였다.
화합물(34)(35mg)를 20ml의 디메틸포름아미드중의 280μl의 트리에틸아민 원료 용액 0.35ml에 용해시켰다. pH 7.5에서 N-(벤질옥시카르보닐옥시)숙신이미드 (10.6mg)를 첨가한 후, 30분동안 교반시킨 다음, 용매를 증발시켜 부분적으로 제거하였다. 우선, 세파덱스 LH-20 컬럼으로 잔류물을 정제한 후, Rp-18 컬럼(아세토니트릴:물:암모니아=95:5:2 v/v)으로 추가 정제시켜 29.4mg의 화합물(35)를 얻었다.
화합물(19)(실시예 1 참조)에 대해 설명된 절차와 유사한 방법으로 화합물(36)을 제조하였다. [α]D 20=22.8˚(c=0.3; 물).
화합물(36)(51.4mg)을 4ml의 물에 용해시키고, 촉매(10% Pd/C)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 기체 대기하에 5시간 동안 실온에서 교반시켰다. 여과 후, 용매를 증발시켜서 47mg의 화합물(37)을 얻었다.
디메틸포름아미드:물=7:3(pH 9.0)에 용해시킨 N,N-디이소프로필에틸아민 용액 450μl에 화합물(37)(15.1mg)을 용해시키고, 과량의 설포숙신이미딜 6-[3'(2-피리딜디티오)프로피오아미도]헥사노에이트를 9.0의 일정한 pH에서 첨가하였다. 20분동안 교반시킨 후, 물:아세토니트릴 8:2(v/v)를 사용하여 세파덱스 G-25 컬럼으로 혼합물의 염을 제거하여 16mg의 미정제 화합물(38)을 얻었다.
화합물(21)을 이결합체(I)로 전환시키는 것에 대하여 실시예 1에 설명된 것과 유사한 방법으로 화합물(38)에서 이결합체(III)을 제조하였다. [α]D 20=+29.6˚(c=0.125; 물).
실시예 4
사당류(44)를 화합물(31) 대신에 사용하고 N-(벤질옥시카르보닐옥시) 숙신이미드 대신에 숙신이미도 N-(벤질옥시카르보닐옥시)글리신을 이용하는 것을 제외하고는, 실시예 3의 절차에 따라서 이결합체(IV)[[α]D 20= +50.8˚(c=0.32; 물)]를 제조하였다.
사당류(44)의 제조
이당류(29)(0.8g)를 디옥산(5.3ml)중에 용해시킨 후에, 레불린산(278mg), 1,3-디시클로헥실카르보디이미드(494mg) 및 4-디메틸아미노피리딘(25mg)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반시킨 후, 디에틸 에테르를 첨가하고 그 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 결정을 여과해내고 여과액을 농축시켰다. 잔류하는 유상 물질을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 900mg의 화합물(39)를 얻었다.
무수 아세트산(50ml)중에 용해시킨 화합물(39)(1g) 용액을 -20℃로 냉각시켰다. 이 온도에서, 무수 아세트산 20ml에 98% 황산 1ml를 -20℃하에서 첨가하여 제조한 용액 A를 10ml 질소 대기하에 첨가하였다. 2.5시간 동안 교반시킨 후에 아세트산 나트륨을 첨가하므로써 반응을 종결시켰다. 에틸 아세테이트와 포화탄산수소나트륨 용액을 저온 반응 혼합물에 첨가하고 추출한 후에 유기층을 수세, 건조 및농축시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 800mg의 화합물(40)을 얻었다.
화합물(40)(800mg)을 무수 테트라히드로푸란(10ml)중에 용해시키고, 질소대기하에 피페리딘(1.3ml)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 20℃에서 교반시킨 후에 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기층을 0.3N 염산 및 물로 세척하고 건조시켰다. 유기층을 농축시킨 후에 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 430mg의 화합물(41)을 얻었다.
디클로로메탄(5.4ml)중의 화합물(41)(490mg) 용액에 탄산 세슘(43mg) 및 트리클로로아세토니트릴(0.52ml)을 첨가하였다. 그 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 방치해 두었다. 여과시킨 후에 여과액을 농축시키고 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 417mg의 화합물(42)를 얻었다.
톨루엔을 사용하여 화합물(42)(317mg)와 화합물(29)(243mg)를 동시증발시켰다. 디클로로메탄(7.1ml)과 분말상의 4Å 분자체(235mg)를 첨가하고 그 혼합물을 -20℃로 냉각시켰다. 이 온도에서, 디클로로메탄(2.8ml)중에 용해시킨 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트(8.75μl)의 용액을 적가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후에 고형의 탄산수소나트륨을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 이후 15분 동안 혼합물을 교반시키고 여과한 후 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후에 372mg의 화합물(43)을 얻었다.
화합물(43)(370mg)을 피리딘(1.2ml)중에 용해시켰다. 피리딘(1.2ml), 아세트산(1.56ml) 및 히드라진 수화물(0.18ml)의 혼합물을 20℃에서 첨가하고 혼합물을 7분동안 교반시켰다. 물로 희석시키고 에틸 아세테이트로 추출한 후에 유기층을 탄산수소 나트륨 용액과 물로 세척하고, 건조시킨 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 324mg의 화합물(44)를 얻었다.
실시예 5
활성 에스테르(52)의 제조
테트라에틸렌 글리콜(45)(10g)를 무수 테트라히드로푸란(150ml)에 용해시키고 수소화 나트륨(광유중의 60% 분산액, 1.64g)을 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후에 테트라히드로푸란(20ml)중에 용해시킨 t-부틸 디메틸실릴 클로라이드(6.18g) 용액을 첨가하고 그 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 교반한지 10분후 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 건조 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6g의 화합물(46)을 얻었다.
화합물(46)(5.0g)을 테트라히드로푸란(80ml)에 용해시키고 t-부틸 브로모아세테이트(26.2ml)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 교반시키고 수소화 나트륨(1.16g)을 질소 대기하에서 조금씩 첨가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후에 혼합물을 상기 화합물(46)에 대해 전술한 바와 동일한 방식으로 처리하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물(47)(5g)을 얻었다.
아세트산(25ml), 물(8.3ml) 및 테트라히드로푸란(8.3ml)의 혼합물중에 용해시킨 화합물(47)(3.1g)의 용액을 20℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 수산화나트륨 용액을 사용하여 혼합물을 중화시키고 물로 희석시킨 후 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 합쳐서 건조 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼상에서 여과하여 1.52g의 화합물(48)을 얻었다.
화합물(48)(1.4g)을 디클로로메탄(12.7ml)에 용해시켰다. 피리딘(7.7ml) 및p-톨루엔설포닐클로라이드(1.3g)를 첨가하고 혼합물을 20℃에서 20시간 동안 교반시켰다. 물로 희석시킨 후에 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하였다. 통상의 방식으로 처리하고 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1.5g의 화합물(49)를 얻었다.
아세톤(20ml)중에 화합물(49)(570mg)을 용해시킨 용액에 티오아세트산 칼륨(350mg)을 첨가하였다. 용액을 1시간 동안 20℃에서 방치하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 증발시키고 실리카 겔 컬럼으로 여과시켜 440mg의 화합물(50)을 분리하였다.
화합물(50)(120mg)을 디클로로메탄(1.5ml)에 용해시키고 실온에서 트리플루오로아세트산(0.20ml)을 첨가하였다. 4시간 동안 교반시킨 후에 혼합물을 톨루엔으로 희석시키고 증발시켰다. 잔류물을 톨루엔과 함께 3회 동시 증발시켰다. 미정제생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 91mg의 화합물(51)을 얻었다.
화합물(51)(29.1mg)을 무수 디메틸포름아미드(1.5ml)에 용해시키고 N,N-디이소프로필에틸아민(12.8μl)을 첨가하였다. O-(N-숙신이미딜)-N,N,N',N'- 테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(22.3mg)를 질소 대기하에 첨가하고 그 혼합물을 1.5시간 동안 교반시켰다. 이 활성 에스테르(52)의 원료 용액을 화합물(54)의 스페이서 신장용으로 사용하였다.
화합물(31) 대신에 사당류(53)를 사용하는 것을 제외하고는, 화합물(34)를 제조하기 위한 실시예 3의 절차에 따라서 화합물(54)를 제조했다:
화합물(53)은 문헌[H. Lucas 등, Angew. Chem. 1993. 32(3), 434-436]에 기술된 절차와 유사하게 제조하였다. 이 참고문헌에는 사당류(12)의 제조방법이 반응도식 2에 도시되어 있다. 화합물(53)을 제조하기 위해, 반응도식 2의 단계 d)를 다음과 같이 변화시켰다. 즉, BnBr 대신에 CH3I를 사용하므로써 벤질기 대신에 메틸기를 도입시켰다. 화합물(53)의 제조를 위한 이후의 반응단계는 상기 참고문헌의 사당류(12)의 제조 방법과 유사하였다.
화합물(54)(52mg)를 디메틸포름아미드(150μl)와 물(150μl)의 혼합물에 용해시켰다. 4-메틸모르폴린(50μl)을 첨가하고 5분동안 교반시킨 후에 활성 에스테르(52)의 원료 용액을 첨가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후에 혼합물을 증발시키고 잔류물을 Rp-18 컬럼상에서 정제하여(물:메탄올=7:3 v/v), 48mg의 화합물(55)를 얻었다.
화합물(55)(48mg)를 디메틸포름아미드와 함께 2회 동시증발시키고 건조시킨 후, 무수 디메틸포름아미드(2.1ml)에 용해시켰다. 트리에틸아민 삼산화황(312mg)을 질소 대기하에 첨가하고 그 혼합물을 50℃에서 밤새 교반시키고, 그 후에 탄산수소 나트륨 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고 소량이 되도록 농축시킨 뒤 세파덱스 G-25 컬럼으로 염을 제거하였다. 분리된 생성물을 도웩스 WX8 Na+컬럼상에서 물로 용출시켜 73mg의 황산화된 오당류 유도체를 얻었다. 이 화합물을 0.2N 염산 용액(2.0ml)으로 처리하였다. 중화시킨 후에 혼합물을 세파덱스 G-25 컬럼으로 제염 처리하여 57mg의 화합물(56)을 얻었다.
화합물(56)(50mg)을 완충액중의 히드록실아민 용액 10.7ml에 용해시켰다(상기 용액을 얻기 위해, 히드록실아민 염산염(174mg)을 100ml의 0.1M 인산이수소나트륨 용액에 용해시키고 4N 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH를 7.5로 조정했다). 반응 혼합물을 20℃에서 90분동안 교반시킨 후에, pH를 8.5로 만들고 혼합물을 추가로 24시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 세파덱스 G-50 컬럼으로 제염 처리하고 정제한 후에 40mg의 순수한 이결합체(V)를 분리하였다. [α]D 20= +42.9˚(c=1; 물)
실시예 6
화합물(53) 대신에 사당류(57)[문헌: H. Lucas 등, Angew. Chem. 1993, 32(3), 434-436) 사당류(12)임]을 사용하는 것을 제외하고는, 이결합체(V)에 대해 전술한 바와 유사한 방식으로 이결합체(VI)을 제조하였다.
[α]D 20= +31.6˚(c=0.82; 물)
실시예 7
일결합체(54) 대신에 화합물(89)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 5의 절차에 따라서 이결합체(VII)을 제조하였다. 화합물(89)는 단당류(24) 대신에 화합물(60)을 사용하여 화합물(34)를 제조하기 위한 절차(실시예 3에 기술된 절차)에 따라서 제조하였다. [α]D 20= +66.6˚(c=0.5; 물)
화합물(60)의 제조:
화합물(58)(29g)과 요오도메탄(15.5ml)을 디메틸포름아미드(50ml)에 용해시켰다. 그 용액을 20℃에서 디메틸포름아미드중의 수소화나트륨(10.5g) 현탁액에 적가하였다. 그 혼합물을 16시간 동안 교반시키고 메탄올을 사용하여 과량의 수소화 나트륨을 분해시켰다. 물을 첨가하고 그 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출시켰다. 농축시킨 후 25g의 화합물(59)를 분리시켰다. 화합물(59)(44g)를 디클로로메탄(90ml)에 용해시키고 트리에틸실란(92ml)을 첨가하였다. 트리플루오로아세트산(44ml)과 무수 트리플루오로아세트산 (0.9ml)의 혼합물을 적가하고, 그 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 저온의 탄산수소 나트륨 용액을 사용하여반응을 퀀칭시키고 에틸 아세테이트로 추출한 뒤, 건조, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 31g의 화합물(60)을 얻었다.
실시예 8
단당류(69)를 다음과 같이 제조하였다.
아세톤(75ml) 및 2,2-디메톡시프로판(75ml)중에 1,6-무수 만노스(61)(19.1g)을 용해시킨 용액에 캄포설폰산(200mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반시켰다. 트리에틸아민을 첨가하고 용매를 증발시켰다. 디클로로메탄을 잔류물에 첨가하고, 염을 여과 제거한 후 여과액을 무수상태까지 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 15g의 화합물(62)를 얻었다.
화합물(62)(3.0g)와 테트라에틸렌 글리콜 디-p-토실레이트를 무수 테트라히드로푸란(250ml)에 용해시켰다. 혼합물을 60℃로 가열하고 질소 대기하에 수소화나트륨(900mg)을 첨가하였다. 30분간 교반시킨 후에 혼합물을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 3.9g의 미정제 화합물(63)을 얻었다.
화합물(63)(3.9g)을 테트라히드로푸란(25ml)에 용해시키고 N-메틸벤질아민 (1.95ml)을 첨가하였다. 그 혼합물을 30분 동안 환류 온도로 가열하고 농축시켜 5.0g의 미정제 화합물(64)를 얻었다.
미정제 화합물(64)(5.1g)를 30ml의 메탄올: 1N 염산 9:1(v/v)중에 용해시키고 그 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 냉각시킨 후에, 피리딘(50ml)을 첨가하고 용액을 농축시켜 미정제 화합물(65)를 얻었다.
미정제 화합물(65)를 75ml의 피리딘: 아세트산 무수물 2:1(v/v)중에 용해시키고, 4-디메틸아미노피리딘(25mg)을 첨가한 후 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 톨루엔으로 희석하고 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 묽은 염산을 첨가하였다. 추출한 후에 산성 수층을 수산화나트륨 용액으로 pH 10으로 만들고 재차 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 건조 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1.86g의 화합물(66)을 얻었다.
화합물(66)(1.86g)을 아세트산 무수물(45ml)과 트리플루오로아세트산(3.8ml)의 혼합물에 용해시켰다. 그 용액을 20℃에서 60시간 동안 교반시킨 후에 톨루엔으로 희석하였다. 농축시킨 후에 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 탄산수소 나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 건조 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 0.5g의 화합물(67)을 얻었다.
화합물(68) 및 (69)는 각각 화합물(27) 및 (28)에 대하여 상기 실시예 3에 기재된 방식에 따라서 제조하였다.
화합물(69)를 사당류(57)과 커플링시킨 후에, 비누화시키고 가수소분해시켜서[각각 화합물(32), (33) 및 (34)에 대해 실시예 3에 기술한 바와 같은 절차를 따름], 화합물(70)을 얻었다.
화합물(70)을 활성 에스테르(52)로 처리한 후에 황산화시켜[실시예 5의 화합물(55)와 (56)의 제조 방법을 따름], 화합물(71)을 얻었다.
화합물(71)을 히드록실아민으로 처리하여[실시예 5의 화합물(56)으로부터 이결합체(V)를 제조하는 방법을 따름], 이결합체(VIII)을 얻었다. [α]D 20= +27.3˚(c=1; 물)
실시예 9
글루코피라노실 이미테이트(28) 대신에, 만노피라노실 이미데이트 유사체(69)(테트라에틸렌 글리콜 측쇄 말단에 -N(CH3)Bn 대신에 -N3를 가짐)를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 4의 절차에 따라서 이결합체(IX)를 제조하였다. 상기 -N3함유 화합물은 화합물(63)을 N-메틸벤질아민 대신 아지화 리튬과 반응시킴으로써 제조하였다. 아지화물 함유 만노피라노실 이미데이트에 대한 기타 모든 반응단계들은 화합물(69)의 합성 단계와 유사하게 사용하였다. [α]D 20=+33.2˚(c=0.25; 물)
실시예 10
오당류 부의 제조에 사용된 사당류(57)대신에 사당류(53)을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 9의 절차에 따라서 이결합체(X)를 제조하였다. [α]D 20= +26.5˚(c=1; 물)
실시예 11
N-(벤질옥시카르보닐옥시)슥신이미드 대신에 숙신이미도 N-(벤질옥시카르보닐옥시) 글리신을 이용하는 것을 제외하고는, 화합물(32)를 이결합체(III)으로 전환시키는 절차(실시예 3)에 따라서, 화합물(75)로부터 이결합체(XI)을 제조하였다. [α]D 20= +25.7˚(c=0.49; 물)
화합물(75)의 제조
실온에서 화합물(28) 214mmol과 화합물(72) 178mmol(참조: 유럽 특허 제 529715호, 제법 V)을 디클로로메탄 4ml에 용해시키고 4Å 분자체 160mg을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 -20℃로 냉각시키고 디클로로메탄중의 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트 40mM 용액 21.4mmol을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 후에 규조토상으로 여과하고 잇따라 탄산수소 나트륨 수용액과 물로 세척하고 증발시켜 건조한다. 잔류물을 트리플루오로아세트산과 무수 아세트산과의 혼합물에 용해시켜 가아세트산 분해시킨다. 반응 생성물을 디에틸 에테르중의 벤질아민으로 처리한 후, 탄산 칼륨이 존재하에서 디클로로메탄중의 트리클로로아세토니트릴로 처리하여 화합물(73)을 수득했다(수율: 50%).
화합물(73) 0.121mmol과 화합물(74) 0.093mmol(참조: 유럽 특허 제529715호, 제법 IX)을 디클로로메탄 3.2ml에 용해시켰다. 분자체와 아르곤 가스존재하에서, 그 혼합물을 -20℃로 냉각시키고, 디클로로메탄중의 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트 용액 0.470ml를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 여과시키고, 물로 세척하고 증발시킨 다음 세파덱스 LH-20 컬럼으로 정제한 다음 실리카 컬럼으로 정제하여 화합물(75)를 얻었다(62%).
실시예 12
말토펜타오즈(76)(500mg)을 피리딘:무수아세트산=2:1(v/v)인 용액 15ml에 용해시키고 하룻밤 교반한 뒤 농축시켰다. 톨루엔을 사용하여 동시증발시킨 후 화합물(77) 930mg을 얻었다.
화합물(26)→(27)→(28)의 전환에 대해 설명된 바와 동일한 과정으로 반응(77)→(78)→(79)를 수행하고, 이어서 화합물(28)과 (31)의 커플링 반응에 대해 설명된 바와 동일한 과정에 따라, 화합물(80)을 산출하는 커플링 반응을 수행했다(참조: 실시예 3).
화합물(80)(300mg)을 무수 메탄올에 용해시키고 소량의 3차 부톡시화 칼륨을 첨가하였다. 그 혼합물을 밤새 교반하였다. 그 혼합물을 중화시키기 위해 도웩스 H+를 첨가하고 여과후 여과물을 농축하여 화합물(81)을 180mg 얻었다.
화합물(35)에 대해 설명된 바와 동일한 과정(참조: 실시예 3)에 따라 화합물(81)을 황산화하여, 화합물(82)를 제조하였다. 화합물(16)을 화합물(17)로 전환시키는 반응에 대해 설명된 바와 동일한 과정(참조: 실시예 1)에 따라 화합물(82)를 가수소분해시킨 후, 화합물(83)을 얻었다.
비대칭 이결합체(XII)의 제법
용액 A
화합물(83)(42mg)을pPH 7.5인 0.1M 인산 이수소나트륨 완충용액(1.3ml)과 디메틸포름아미드(0.5ml)와의 혼합물에 용해시키고 설포숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(7mg)를 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하였다.
반응 혼합물 B
일결합체(71)(17.5mg)을 아르곤 대기하에서 pH 7.5인 0.1M 인산이수소나트륨 완충용액중에 용해시킨 50mM 히드록실아민 용액 1.7ml에 용해시켰다. 그 혼합물을 1시간 동안 교반하여 화합물(84) 용액을 얻었다. 이 용액에 아르곤 대기하에서 용액 A 1당량을 첨가하였다. 그 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 이 과정중에 형성되는 대칭 이결합체는 디티오트레이톨 처리로 제거하였다. 교반 30분 후, 그 혼합물을 세파덱스 G-50 컬럼으로 정제하여 비대칭 이결합체(XII)를 4.7mg 얻었다.
[α]D 20= +40.3˚(c=0.38; 물).
황산화된 말토펜타오사이드의 제조
비대칭 이결합체(XII)
실시예 13
비대칭 이결합체(XIII)은 이결합체(XII)의 제조에 대해 설명된 바와 동일한 과정에 따라 제조하였다. 오당류(71) 대신에 유사 화합물(85)를 사용하였다. 화합물(85)는 화합물(54)를 (56)으로 전환시키는 반응에 대해 설명된 바와 동일한 과정으로(참조: 실시예 5), 활성 에스테르(52)를 이용한 스페이서 신장 반응과 황산화 반응에 의해 화합물(89)를 전환시킴으로써 얻었다. 화합물(89)는 실시예 7에서 기재되어 있다. [α]D 20= +65.4˚(c=0.09; 물)
비대칭 이결합체(XIII)
실시예 14
화합물(76)으로부터 말토펜타오사이드(83)의 제조에 대해 설명된 바와 동일한 과정(참조: 실시예 12)에 따라 화합물(86)으로부터 황산화된 말토트리오사이드(87)을 제조하였다.
반응 A: 화합물(87)(25mg)을 pH 7.5인 0.1M 인산이수소 나트륨 완충용액 1.0ml에 용매시키고 설포숙신이미딜-(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(21mg)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 30분동안 교반하고 세파덱스 G-15 컬럼으로 정제하여 생성물을 30mg 얻었다.
반응 B: 화합물(85)(15mg)를 아르곤 대기하에서 pH7.5인 0.1M 인산이수소 나트륨 완충용액중의 50mM 히드록실아민 용액 1.7ml에 용해시켰다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하고 세파덱스 G-25 컬럼으로 정제하여 화합물(88) 14mg을 얻었다.
반응 A로부터 얻은 생성물 및 화합물(88)을 0.1M 인산수소 나트륨 완충용액 1ml에 용해시키고 4℃의 아르곤 대기하에서 60시간 동안 교반하였다. 대칭 이결합체는 디티오트레이톨 처리로 제거하였다. 교반 30분 후, 혼합물을 세파덱스 G-50 컬럼으로 정제하여 이결합체(XIV)를 13mg 얻었다. [α]D 20= +55.7˚(c=0.46; 물)
말토트리오사이드
비대칭 이결합체(XIV)
실시예 15
비대칭 이결합체(XV)는 비대칭 이결합체(XIV)의 제조에 대해 설명된 바와 동일한 과정에 따라 제조하였다. 말토트리오사이드(87)대신에 화합물(91)을 사용하였다. 황산화된 셀로비오즈 유도체(91)은 화합물(77)로부터 화합물(83)의 제조를 위해 설명된 바와 동일한 과정(참조: 실시예 12)에 따라 셀로비오즈 옥타아세테이트(90)으로부터 제조하였다. [α]D 20= +51.2˚(c=0.83; 물)
비대칭 이결합체(XV)

Claims (10)

  1. 각 당류가 동일하거나 상이한 것으로, 하나 이상의 유니트가 우론산인 2개 내지 6개의 단당류 유니트를 함유하는 두개의 당류와 하나의 스페이서(spacer)를 함유하는 조정 가능한(tuneable) 이결합체(bisconjugate)로서, 하나 이상의 당류 그 자체가 항혈전 활성을 갖고 있고, 상기 스페이서는 하나 이상의 당류를 그것의 비환원성 말단을 통해 다른 당류에 연결시키며, 그 스페이서의 사슬 길이는 20 내지 120 원자인 것을 특징으로 하는 이결합체.
  2. 제1항에 있어서,
    하나 이상의 당류 그 자체가 AT-III 및/또는 HC-II에 대한 친화성, 및/또는 항 IIa 인자 및/또는 항 Xa 인자 활성을 갖고 있는 것이 특징인 이결합체.
  3. 제2항에 있어서,
    두개의 당류 그 자체가 AT-III 및/또는 HC-II에 대한 친화성, 및/또는 항 IIa 인자 및/또는 항 Xa 인자 활성을 갖고 있는 것이 특징인 이결합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    하나 이상의 당류가 하기 화학식으로 표시되는 것이 특징인 이결합체.
    상기 화학식에서,
    R은 각각 H, OH, OSO3 -및 (C1-C8)알콕시 중에서 선택되고,
    R1은 OSO3 -및 NHSO3 -중에서 각각 선택되며,
    주름선은 상향 또는 하향 결합을 나타내며, 음전하는 수소 또는 알칼리 금속 양이온에 의해 상쇄된다.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    하나 이상의 당류가 하기 화학식으로 표시되는 것이 특징인 이결합체.
    상기 화학식에서, R2는 각각 OSO3 -또는 OCH3이다.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    스페이서가 하기 화학식으로 표시되는 것이 특징인 이결합체.
    = {Q-NT-CO-[(CH2)n-NT-CO-(CH2)m]p-S-}2또는
    = {Q-O-[(CH2)n-O]p-(CH2)m-S-}2
    상기 화학식에서,
    2개의 Q기 중 하나는 하나의 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 다른 Q기는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, Q기는 각각 페닐렌(C6H4)기, 또는 -[(CH2O)q-(CH2)r-O]s-[(CH2)t-NT-CO]u-(CH2)v(여기에서, q는 0 또는 1 이고; r 및 t는 각각 2 내지 4이며; s는 각각 1 내지 12이고, u 및 v는 각각 1 내지 6임)이며, T는 각각 수소 또는(1-8C) 알킬이고, n은 1 내지 8, m은 1 내지 8, p는 1 내지 12이며, 원자들의 총수는 20 내지 120이다.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    스페이서가 하기 화학식으로 표시되는 것이 특징인 이결합체.
    상기 화학식에서,
    2개의 Φ기 중 하나는 하나의 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 다른 Φ기는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, Φ는 페닐렌(C6H4)기를 나타내고; n,m 및 0는 각각 1 내지 8 이고, 원자의 총수는 20 내지 120이다.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    스페이서가 하기 화학식으로 표시되는 것이 특징인 이결합체:
    상기 화학식에서,
    스페이서가 가진 2개의 자유 원자가 중 하나는 하나의 당류의 비환원성 말단에 결합되고, 스페이서의 다른 자유 원자가는 다른 당류의 환원성이나 비환원성 말단에 결합되며, T는 각각 H, 또는 (1-8C) 알킬이고; m은 각각 1 내지 8이며; r은 각각 2 내지 4이고; s는 각각 1 내지 12이고; w는 0 내지 10이며; x는 0 또는 1이며, y는 0 또는 1이고; z는 0 또는 1이며, 원자들의 총수는 20 내지 120이다.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 기재된 이결합체와 약학적 허용성 보조제(auxiliaries)를 함유하는 혈전 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
  10. 음전하가 수소 또는 알칼리금속 양이온에 의해 상쇄되는, 하기 화학식으로표시되는 이결합체.
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