KR100328287B1

KR100328287B1 - 항혈전제화합물로서의니페코트산유도체

Info

Publication number: KR100328287B1
Application number: KR1019950705100A
Authority: KR
Inventors: 메리팻트비버스; 패트리시아안드레이드-고든; 윌리암제이.획스트라
Original assignee: 오르토 파마슈티칼 코포레이션
Priority date: 1994-03-16
Filing date: 1995-03-14
Publication date: 2002-10-11
Also published as: AU2119195A; NO954609L; FI113763B; HUT74871A; NO954609D0; DK0746545T3; ES2131313T3; AU703397B2; NO304885B1; EP0746545A1; FI955498A0; TW318179B; WO1995025091A2; EP0746545B1; DE69509875T2; JPH09510453A; CA2163027A1; MX9504800A; ATE180470T1; US5770575A

Abstract

본 발명은 혈소판-개재된 혈전증 질환을 치료하는데 유용한 일반식 (I)의 니페코트산-유도된 화합물에 관한 것이다.

상기식에서,

X¹, X², Y, A, Z, R²및 R⁶는 명세서에서 정의한 바와 같다.

Description

항혈전제 화합물로서의 니페코트산 유도체

발명의 배경

본 발명은 1994 년 12월 27 일자에 출원한 출원번호 제 08/364,896 호의 부분 계속 출원이며, 이는 1994년 3월 16 일자에 출원한 출원번호 제 08/213,772 호의 부분 계속 출원이다.

혈소판 응집은 혈관 손상에 의해 유도된 출혈을 줄이기 위한 초기 지혈 반응이다. 그러나, 이러한 정상 지혈 과정의 병리학적 확장은 혈전 형성을 유도할 수 있다. 혈소판 응집에서 통상의 최종 경로는 활성화된 노출 혈소판 GPIIb/IIIa 에 대한 피브리노겐의 결합이다. 혈소판 당단백질 IIb/IIIa(GPIIb/IIIa) 에 대한 피브리노겐의 결합을 억제하는 제제는 그러므로 혈소판 응집을 억제한다. 따라서 이들 제제는 동맥 및 정맥 혈전증, 급성 심근 경색, 불안정 협심증, 혈전융해 치료 및 혈관성형술에 따른 재폐색, 감염 및 다양한 혈관폐색 질환과 같은 혈소판-개재된 혈전증 질환을 치료하는데 유용하다. 피브리노겐 수용체(GPIIb/IIIa) 는 ADP, 콜라겐, 트롬빈과 같은 자극에 의해 활성화되어 결합 영역을 피브리노겐중 서로 다른 2 개의 펩타이드 영역에 노출시킨다: α-쇄 Arg-Gly-Asp(RGD) 및 γ-쇄His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val(HHLGGAKQAGDV, γ 400-411). 이들 펩타이드 단편 자체는 GPIIb/IIIa에 대한 피브리노겐 결합을 길항(억제)하는 것으로 나타났으므로, 이들 단편의 유사체는 길항제로서 또한 제공될 수 있다. 사실, 본 발명 이전에, 강력한 RGD-계 또는 RGD 유사 길항제는 GPIIb/IIIa 에 대한 피브리노겐 결합 및 혈소판 응집을 모두 억제하는 것으로 나타났다. 이들 제제의 일부는 또한 항혈전제로서의 생체내 효능을 나타냈고, 일부 경우에 또한 섬유소용해 치료(예: t-PA 또는 스트렙토키나제) 와 결합하여 사용하였다.

발명의 기술

본 발명은 하기 일반식 (I) 의 화합물에 관한 것이다:

상기식에서,

X¹, X², Y, Z, R²및 A는 이후에서 정의하는 바와 같다.

피브리노겐 γ400-411 의 구조적 특징을 기본으로 하는 이러한 화합물은 동맥 및 정맥 혈전증, 급성 심근 경색, 혈전융해 치료 및 혈관성형술에 따른 재폐색, 감염 및 불안정 협심증 및 다양한 혈관폐색 질환과 같은 혈소판-개재된 혈전증 질환을 치료하는데 유용한 혈소판 응집 억제제이다. 이들 화합물은 또한 섬유소용해 치료(예: t-PA 스트렙토키나제) 와 결합하여 사용되는 항혈전제로서 유용하다. 이러한 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 또한 본 발명의 일부이다.

더욱 특히 본 발명은 하기 일반식 (I) 의 화합물에 관한 것이다:

상기식에서,

X¹및 X²는 동일하거나 상이하고 H₂및 O 중에서 선택되고,

바람직하게는 각각의 X¹및 X²는 O 이며,

Y는 (CH₂)_m, CH(NHCOR³)(CH₂)_m또는 CH((NH₂)CH₂)_m이고,

A 는 NHR¹, C(NH)NH₂, 또는 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피롤리딘-2-일 및 피롤리딘-3-일로 구성된 그룹 중에서 선택되는 질소를 함유하는 사이클로알킬 환이며,

이때 환은 더욱 바람직하게는 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일 및 피페리딘-4-일로 구성된 그룹 중에서 선택되며,

Z 는 (CH₂)_n또는 CH(CO₂R⁴)(CH₂)_n이고,

바람직하게는 Z 는 (CH₂)₂이며,

R¹은 H, 알킬 또는 CH(NH)NH₂이고,

더욱 바람직하게는 R¹은 H또는 알킬이며,

가장 바람직하게는 R¹은 수소이고,

R²는 H 또는 알킬이며,

바람직하게는 R²는 수소이고,

R³는 알콕시 또는 알킬이며,

바람직하게는 R³는 t-부톡시 또는 메틸이고,

가장 바람직하게는 R³는 t-부톡시이며,

R⁴는 알킬, 또는 벤질과 같은 아릴알킬이며,

바람직하게는 R⁴는 메틸이고,

R⁶는 H, 알킬, 또는 벤질과 같은 아릴알킬이며,

R⁶가 H 이외의 것인 경우에, 프로드러그(prodrug) 형태이고,

m 은 0. 1, 2 또는 3 의 정수이며,

n 은 0. 1 또는 2 의 정수이다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이, 사용된 알킬 및 알콕시는 달리 지시하지않는 한 단독으로 또는 치환체 그룹의 일부로서 1 내지 8 개의 탄소를 갖는 직쇄 및 측쇄를 포함한다. 예를 들어, 알킬 래디칼은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2급-부틸, t-부틸, n-펜틸, 3-(2-메틸)부틸, 2-펜틸, 2-메틸부틸, 네오펜틸, n-헥실, 2-헥실 및 2-메틸펜틸을 포함한다. 알콕시 래디칼은 이전에 기술된 직쇄 또는 측쇄 알킬 그룹으로부터 형성된 산소 에테르이다. 사이클로알킬 그룹은 5 내지 8 환 탄소 및 바람직하게는 6 내지 7 개의 탄소를 포함한다.

본 명세서이서 단독으로 또는 다른 용어와 결합하며 사용한 바와 같이 용어 "아릴" 은 페닐 또는 나프틸과 같은 방향족 탄화수소 그룹을 의미한다. 용어 "아릴알킬"은 아릴 그룹으로 치환된 알킬 그룹을 의미한다.

본 발명의 화합물은 또한 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 존재할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 일반적으로 1-피페리딘 치환체 상의 질소가 무기 또는 유기산으로 양성자화된 형태를 취한다. 그러나, X₂가 H₂인 경우에 환 질소는 염을 형성시킬 수 있다. 대표적인 유기 또는 무기산은 염산, 브론화수소산, 요오드화수소산, 과염소산, 황산, 질산, 인산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 석신산, 말레인산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄설폰산, 하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 옥살산, 파모산, 2-나프탈렌설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클로엑산설팜산, 살리실산, 사카린산 또는 트리플루오로아세트산을 포함한다.

특히 바람직한 본 발명의 화합물은 하기 일반식의 화합물을 포함한다:

상기식에서,

화합물 번호 1 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 L-NHBoc 이며, R⁶는 벤질(Bn) 이고;

화합물 번호 2 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 L-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 3 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 D-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 4 인 경우, R은 H 이고, m은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 L-NH₂이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 5 인 경우, R은 H 이고, m은 3 이며, n은 2 이고, R⁵는 H 이며,R⁶는 H 이고;

화합물 번호 6 인 경우, R 은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 1 이고, R⁵는 L-NHAc이며, R⁶는 H 이고,

화합물 번호 7 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 L-NHAc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 8 인 경우, R은 C(NH)NH₂이고, m 은 2 이며, n 은 2 이고, R⁵는 L-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 9 인 경우, R 은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 3 이고, R⁵는 L-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 10 인 경우, R 은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 D-NH₂이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 11 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 3 이고, R⁵는 D-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 12 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 1 이고, R⁵는 D-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고;

화합물 번호 13 인 경우, R은 H 이고, m 은 3 이며, n 은 2 이고, R⁵는 D-NHAc 이며, R⁶는 H 이고,

화합물 번호 14 인 경우, 화합물 번호 3 의 3-S-이성체이고, R⁶는 H 이며;

화합물 번호 15 인 경우, R은 i-Pr 이고, m은 3 이며, n 은 2 이고, X 는 L-NHBoc 이며, R⁶는 H 이고,

화합물 번호 16 인 경우, 화합물 번호 3 의 3-R-이성체이고, R⁶는 H 이며,

화합물 번호 17

화합물 번호 18

화합물 번호 19

이다.

본 발명의 화합물은 하기 반응도식 AA, AB, AC 및 AD 에 의해 상업적으로 입수가능한 출발물질로부터 제조할 수 있다.

X¹및 X²가 각각 산소인 본 발명의 화합물은 하기 도식 AA 에 의해 제조할 수 있다. 이 도식에서 니페코트산(라세미 혼합물 또는 분리한 거울상이성체)을 대략 실온 내지 환류온도에서 저급 알킬 알콜 및 촉매량의 산으로 처리하여 산성염으로서 에스테르 유도체 AA1 을 수득할 수 있다. 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 및 부탄올을 포함하는 전형적인 알콜을 p-톨루엔설폰산, HC1 또는 황산과 같은 산성 촉매로 페어링(pairing)시킬 수 있다. 바람직한 시약은 메탄올 및 HC1 이다. 유도체 AA1 을 다양한 아실화제를 사용하여 환 질소에서 아실화시켜 유도체 AA2 를 수득할 수 있다. 전형적인 반응 조건은 AA1 을 실온에서 15 분 내지 2 시간동안 아실화제 및 1 당량의 유기염기로 처리함을 포함한다. 바람직한 아실화제는 아미노 보호된 아미노산 또는 아미노 보호된 아미노알킬 카복실산이고, 이는 DCC(1,3-디사이클로헥실카보디이미드) 및 BOP-C1(비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로라이드)와 같은 커플링제로 활성화된다. 그러나, 무수물, N-옥시석신이미드와 같은 아미노 보호된 산 유도체, 및 산 클로라이드를 또한 사용할 수 있다. 적합한 보호 그룹은 저급 알킬 카바메이트, 측쇄 알킬 카바메이트, 벤질 카바메이트, 아세트아미드 및 치환된 아세트아미드를 포함한다. 아실화제 및 그의 아미노 보호 그룹의 선택은 X¹및 X²가 O 인 일반식 (I) 의 화합물에서 치환체 Y 및 R¹를 결정하는 인자이다. 도식 AA 에서, 보호된 아미노산은 일반식NH(Boc)CHCO₂H(CH₂)_nN(Cbz) 의 디아미노산이고, 이는 도식에서 후자 관점에서 두 가지 아미노 그룹을 선택적으로 탈보호시킨다. 이 선택은 본 발명의 설명만을 의미하는 것이지 이를 제한하는 것은 아니다.

유도체 AA2 를 염기 및 적합한 용매 혼합물로 처리하여 염 유도체 AA3를 수득한다. 적합한 무기 염기로는 NaOH, KOH, Mg(OH)₂, LiOH, Na₂CO₃및 NaHCO₃가 포함되고, 이를 실온에서 1 내지 6 시간 동안 THF 및 물의 혼합물과 배합하여 목적 생성물을 수득할 수 있다. 사용할 수 있는 유기 염기로는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민 및 테트라메틸구아니딘이 포함된다. 이들 염기를 실온 내지 환류 온도에서 1 내지 6 시간 동안 유기 용매와 함께 사용하여 염 AA3 를 수득할 수 있다.

바람직한 반응 조건(설명된) 은 AA2 를 실온에서 1 시간 동안 LiOH, 물 및 THF 로 처리하는 것이다. NaOH, KOH, Mg(OH)₂, NaCO₃및 NaHCO₃와 같은 다른 적합한 무기 염기를 사용할 수 있다. 또 다른 이러한 염기를 사용해야하고, AA3 에서 Li 는 물론 적절한 금속 치환체에 의해 대체할 수 있다. 유도체 AA3 는 표준 아미노산 커플링 조건하에서 카복시 보호된 카복시알킬아민 또는 카복시 보호된 아미노산으로 처리하여 이치환된 니페코트산 유도체 AA4 를 수득할 수 있다. 허용되는 커플링 조건은 DCC, BOP-Cl 및 EDC (에틸 디메틸아미노프로필카보디이미드 · HCl) 와 같은 펩타이드 커플링제의 사용을 포함한다. 적합한 카복시 보호 그룹은 벤질 카바메이트, 치환된 벤질 카바메이트, 알킬 카바메이트 및 측쇄 알킬 카바메이트를 포함하고, 여기에서 보호 그룹의 선택은 화학적 합성의 숙련가들에게 명백하다. 기술된 예로는 보호된 아미노산으로서 NH₂(CH₂)_nCO₂-(Bzl)을 사용한다. 다시 아미노산 및 그의 카복시 보호 그룹의 선택이 X¹및 X²가 O 인 일반식 (I) 의 화합물에서 치환제 R²및 Z 를 결정한다. 유도체 AA4 는 아미노 또는 카복시 보호 그룹의 필요조건에 따라 선택적으로 탈보호될 수 있다. 기술된 예에서, 3-카복시 그룹 및 하나의 아미노 그룹 상의 보호 그룹을 H₂대기중의 Pd/C 를 사용하여 촉매적 수소화에 의해 동시 제거하여 유도체 AA5를 수득한다.

반응도식 AA

도식 AB 는 X²가 O 이고 X¹이 H₂인 일반식 (I) 의 화합물의 제조를 설명한다. 니페코트산(라세미 혼합물 또는 분리한 거울상이성체)를 알킬 알콜 및 촉매량의 산으로 대략 실온 내지 환류 온도에서 처리하여 산성됨으로서 에스테르유도체 AB1 를 수득할 수 있다. 전형적인 알콜은 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 및 부탄올을 포함한다. 산 촉매는 P-톨루엔설폰산, HCl 및 황산을 포함하고, 이중에서 바람직한 시약은 메탄올 및 HCl 이다. 유도체 AB1 은 다양한 아실화제를 사용하여 환 질소에서 아실화시켜 유도체 AB2 를 수득할 수 있다. 전형적인 반응 조건은 AB1 을 실온에서 15분 내지 2시간 동안 불활성 용매 중의 아실화제 및 1 당량의 유기염기로 처리함을 포함한다. 바람직한 아실화제는 아미노 보호된 아미노산 또는 아미노 보호된 아미노알킬 카복실산이고, 이는 DCC(1.3-디사이클로헥실카보디이미드) 및 BOP-Cl(비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로라이드) 와 같은 커플링제로 활성화시킨다. 그러나, 무수물, N-옥시석신이미드 및 산클로라이드와 같은 아미노 보호된 산 유도체를 또한 사용할 수 있다. 적합한 보호 그룹은 저급 알킬 카바메이트, 측쇄 알킬 카바메이트, 벤질 카바메이트, 아세트아미드 및 치환된 아세트아미드를 포함한다. 아미노산 및 그의 아미노 보호 그룹(들)의 선택은 일반식 (I) 의 화합물에서 치환체 Y 및 R¹를 결정하는 인자이다. 도식 AB 에서, 보호된 아미노산은 일반식 NH(Boc)CHCO₂H(CH₂)_nN(Boc) 의 디아미노산이고, 이 선택은 본 발명의 설명만을 위한 것이지 이를 제한하는 것은 아니다. 유도체 AB2 를 염기 및 적합한 용매혼합물로 가수분해하여 유도체 AB3를 수득한다. 적합한 무기 염기로는 NaOH, KOH, Mg(OH)₂, LiOH, Na₂CO₃및 NaHCO₃가 포함되고, 이를 실온에서 1 내지 6시간 동안 THF 및 물의 혼합물과 배합하여 목적 생성물을 수득할 수 있다. 사용할 수 있는 유기 염기로는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민 및 테트라메틸구아니딘이 포함된다. 이들 염기는 실온 내지 환류 온도에서 1 내지 6 시간 동안 유기 용매와 함께 사용하여 AB3 를 수득할 수 있다. 유도체 AB3 의 3-카복시 그룹을 다양한 반응 조건을 사용하여 환원시켜 알데하이드 유도체 AB4 를 수득할 수 있다. 이들 조건은 -78 ℃ 내지 0 ℃ 에서 용매로서 HMPT/THF 와 함께 리튬 t-디이소프로필아미드, -78 ℃ 에서 용매로서 피리딘과 함께 N,N-디메틸클로로메틸렌이미늄 클로라이드 및 리튬 t-부톡시알루미늄 하이드라이드, 및 표준 로젠문드(Rosenmund) 환원 조건의 사용을 포함한다. 바람직한 반응 조건은 N,N'-카보닐디이미다졸을 사용한 후 -10 ℃ 에서 디이소부틸알루미늄 하이드라이드를 사용하여 알데하이드 유도체 AB4 를 수득한다. AB4 는 카복시 보호된 카복시알킬아딘 또는 카복시 보호된 아미노산으로 처리한 후 환원제로 처리하여 이치환된 니페코트산 유도체 AB5 를 수득할 수 있다. 적합한 카복시 보호 그룹은 벤질 카바메이트, 치환된 벤질 카바메이트, 저급 알킬 카바메이트 및 측쇄 알킬 카바메이트를 포함하고, 여기에서 보호 그룹의 선택은 화학적 합성의 숙련가들에게 명백하다. 환원제는 산성 용매와 함께 나트륨 시아노보로하이드라이드, 리튬 시아노보로하이드라이드, 나트륨-9-시아노-9-하이드라이도-보라비사이클로[3,3,1]노난, 테트라부틸암모늄 시아노보로하이드라이드 및 Pd/C 를 포함하고, 여기에서 환원제의 선택은 사용하는 보호 그룹에 의해 결정된다. 기술된 예로는 보호된 아미노산으로서 NH₂(CH₂)_nCO2Bzl, 및 환원제로서 나트륨 시아로보로하이드라이드를 사용한다. 아미노산 및 그의 카복시보호 그룹의 선택은 화합물에서 치환체 R²및 Z 을 결정하는 것이지 제한하려는 것은 아니다. 유도체 AB5 를 아미노 또는 카복시 보호 그룹의 필요조건에 따라 선택적으로 탈보호시킬 수 있다. 기술된 예로서, 3-카복시 그룹 및 둘 모두의 아미노 그룹 상의 보호 그룹을 H₂대기 중의 Pd/C 를 사용하여 촉매적 수소화에 의해 동시 제거하여 유도체 AB6 를 수득한다.

반응도식 AB

X¹이 산소이고, X²가 수소인 본 발명의 화합물은 하기 반응 도식 AC 에 의해 제조할 수 있다. 이 반응식에서 니페코트산(라세미 혼합물 또는 분리된 거울상 이성체)을 대략 실온 내지 환류 온도에서 저급 알킬 알콜 및 촉매량의 산으로 처리하여 산성 염으로서 에스테르 유도체 AC 1을 수득할 수 있다. 전형적인 알콜은 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 및 부탄올을 포함한다. 산 촉매는 선택한 시약으로서 메탄올과 염산과 함께 P-톨루엔설폰산, 염산 및 황산을 포함한다. 유도체 AC 1 을 환 질소에서 알킬화제를 사용하여 알킬화하여 유도체 AC 2 를 수득할 수 있다. 알킬화제는 브로모알킬프탈이미드 및 브로모알킬니트릴과 같은 할로 알킬아민 신톤(synton), 또는 환원성 아민화 방법(조건은 반응식 AD 참조)을 통한 보호된 아미노알데하이드를 포함한다. 전형적인 반응 조건들은 수소화 나트륨과 같은 염기 또는 테트라부틸암모늄 플루오라이드와 같은 상전이 촉매 및 알킬화제로 불활성 용매중, 실온에서 15 분 내지 2 시간동안 AC 1 을 처리한후, 상술한 적절한 보호그룹중 하나를 사용하여 3-치환체의 아미노 그룹을 통상적으로 보호하는 것을 포함한다. 알킬화제와 그의 아미노 보호 그룹의 선택은 치환체 Y 와 R¹을 결정하는 요인이다. 반응식 AC 에서 1-위치는 (CH₂)NH(Cbz) 에 의해 치환되며, 이는 본 발명을 단지 설명하려는 의도이지 제한하지는 않는다. 유도체 AC 2 를 염기와 적절한 용매 혼합물로 처리하여 염 유도체 AC 3 을 제조할 수 있다. 반응식 AA에서와 같이, 반응 도식 AC는 바람직한 LiOH 의 사용을 보여주고 있다.

그러나 다른 적절한 무기 염기는 NaOH, KOH, Mg(OH)₂, Na₂CO₃및 NaHCO₃을 포함하며, 이들은 THF 와 물의 혼합물과 실온에서 1-6 시간동안 배합하여 목적하는 생성물을 수득할 수 있다. 사용할 수 있는 유기 염기는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민 및 테트라메틸구아니딘을 포함한다. 이들 염기들을 실온 내지 환류 온도에서 1-6 시간동안 유기 용매와 함께 사용하여 염 AC 3 을 수득할 수 있다. (기재된) 바람직한 반응 조건은 AC 2 를 LiOH, 물 및 THF 로 실온에서 1 시간 동안 처리하는 것이다. 유도체 AC 3 을 표준 아미노산 커플링 조건하에 카복시 보호된 카복시알킬아민 또는 카복시 보호 아미노산으로 처리하여 이치환 니페코트산 유도체 AC 4 를 수득할 수 있다. 허용되는 커플링 조건은 DCC, BOP-C1 및 EDC (애틸디메틸아미노프로필 카보디이미드 · HCl) 와 같은 펩타이드 커플링제를 포함한다. 적절한 카복시 보호기는 벤질 카바메이트, 치환된 벤질 카바메이트, 알킬 카바메이트 및 측쇄 알킬 카바메이트를 포함하며, 보호기 그룹 선택은 화학 합성에서 당업자에게 명백하다. 기재된 실시예는 보호된 아미노산으로서 NH₂(CH₂)_nCO₂Bzl 을 사용한다. 아미노산과 그의 카복시 보호 그룹의 선택은 일반식 I 의 화합물에서 치환체 R²및 Z을 결정한다. 유도체 AC 4 는 아미노 또는 카복시 보호 그룹의 요구에 따라 선택적으로 탈보호될 수 있다. 기재된 실시예에서 3-카복시 그룹과 1-아미노 그룹상의 보호 그룹은 수소 분위기에서 Pd/C 을 사용한 촉매적 수소화에 의해 동시에 제거되어 유도체 AC 5 를 제조한다.

반응 도식 AC

X¹과 X²가 각각 수소인 본 발명의 화합물은 하기 반응 도식 AD 에 의해 제조할 수 있다. 이 반응 도식에서 니페코트산(라세미 혼합물 또는 분리된 거울상 이성체)을 대략 실온 내지 환류 온도에서 저급 알킬 알콜 및 촉매량의 산으로 처리하여 산성 염으로서 에스테르 유도체 AD 1 을 수득할 수 있다. 전형적인 알콜은 에탄올, 메탄올, 이소프로판을 및 부탄올을 포함한다. 산 촉매는 p-톨루엔 실폰산, 염산 및 황산을 포함하다. 바람직한 시약은 메탄올과 염산이다. 유도체 AD 1 을 환 질소에서 알킬화제를 사용하여 알킬화하여 유도체 AD 2 를 수득할 수 있다. 알킬화제는 브로모알킬프탈이미드 및 브로로알킬니트릴과 같은 할로알킬아민 신톤, 또는 환원성 아민화 방법(조건은 반응식 AD 참조)을 통한 보호된 아미노알데하이드를 포함한다. 전형적인 반응 조건들은 수소화 나트륨과 같은 염기 또는 테트라부틸암모늄 플루오라이드와 같은 상전이 촉매 및 알킬화제로 불활성 용매중, 실온에서 15 분 내지 2 시간동안 AD 1 을 처리한후, 상술한 적절한 보호그룹중 하나를 사용하여 아미노 그룹을 통상적으로 보호하는 것을 포함한다. 알킬화제와 그의 아미노 보호 그룹의 선택은 치환체 Y 와 R¹을 결정하는 요인이다. 반응도식 AD에서 1-위치는 (CH₂)NH(Cb₂)에 의해 치환되며, 이는 본 발명을 단지 서술하려는 의도이지 제한하지는 않는다. 유도체 AD 2 를 염기 및 적절한 용매 혼합물로 가수분해하여 유도체 AC 3 을 제조할 수 있다. 적절한 무기 염기는 NaOH, KOH, MgOH, LiOH, Na₂CO₃및 NaHCO₃을 포함하며, 이들은 THF 와 물의 혼합물과 실온에서 1-6 시간 동안 배합하여 목적하는 생성물을 수득할 수 있다. 사용할 수 있는 유기 염기는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민 및 테트라메틸구아니딘을 포함한다. 이들 염기들을 실온 내지 환류 온도에서 1-6 시간동안 유기 용매와 함께 사용하여 AD 3 을 수득할 수 있다. 유도체 AD 3 의 3-카복시기는 많은 반응 조건들을 사용함으로써 환원시켜 알데하이드 유도체 AD 4 를 수득한다. 조건들은 -78 내지 0 ℃ 에서 용매로서 HMPT/THF 을 사용한 리튬 디이소프로필아미드의 사용, -78 ℃ 에서 용매로서 피리딘을 사용한 N,N-디메틸클로로메틸렌이미늄 클로라이드 및 리튬 t-부톡시알루미늄 수소화물의 사용 및 표준 로젠문드 반응 조건들을 포함한다. 바람직한 반응 조건은 N,N'-카보닐디이미다졸을 사용한 후 디이소부틸알루미늄 수소화물을 -10 ℃ 에서 사용하여 알데히이드 유도체 AD 4 를 수득한다. 유도체 AD 4 를 카복시 보호된 카복시알킬아민 또는 카복시 보호된 아미노산으로 처리한후, 환원제로 처리하여 이치환된 니페코트산 유도체 AD 5 를 수득할 수 있다. 적절한 카복시 보호 그룹은 벤질 카바메이트, 치환된 벤질 카바메이트, 저급 알킬 카바메이트 및 측쇄 알킬 카바메이트를 포함하며, 보호 그룹의 선택은 화학 합성에서 당업자에게 명백하다. 환원제는 산성용매와 함께 나트륨 시아노보로하이드라이드, 리튬 시아노보로하이드라이드, 나트륨-9-시아노-9-하이드리도-보라비사이클로[3,3,1]노난, 테트라부틸암모늄 시아노보로수소화물 및 Pd/C 를 포함하며, 여기에서 환원제의 선택은 사용하는 보호 그룹에 의해 결정된다. 기재된 실시예는 보호된 아미노산으로서 NH₂(CH₂)_nCO₂Bzl, 및 환원제로서 나트륨 시아노보로하이드라이드를 사용한다. 아미노산과 그의 카복시 보호 그룹의 선택은 화합물에서 치환체 R²및 Z 을 결정하며, 이는 서술적인 의미이며 제한적인 것은 아니다. 유도체 AD 5 는 아미노 또는 카복시보호 그룹의 요구에 따라 선택적으로 탈보호될 수 있다. 기재된 바와 같이, 3-카복시 그룹과 아미노 그룹상의 보호 그룹은 수소 분위기에서 Pd/C 을 사용한 촉매적 수소화에 의해 동시에 제거되어 유도체 AD 6 을 제조한다.

반응도식 AD

모든 반응 도식을 위한 출발 물질에 있어서, A 가 NHR¹인 화합물을 제조하기 위해 필요한 대부분의 아미노산과 아미노알킬카복실산은 시판중이며, 단지 보호그룹의 조작을 통해 일반식 I 의 목적 화합물을 수득한다. 그러나 A 가 내부에 질소를 함유하는 사이클로알킬 환인 본 발명의 화합물을 제조하기 위해서는, 1-치환체(피페리딘) 는 첨가된 이후 변형되어 일반식 I 의 목적하는 화합물을 수득한다. 1-치환체가 C(O)(CH₂)₂-4-일-피페리딘인 화합물을 제조하기 위하여, 유도체 AA 1 또는 AB 1 을 상술한 아실화 방법을 사용하여 3-(4-피리딜)아크릴산으로 아실화시켜 아실화 유도체 AA 2 와 AB 2 를 제조한다. 이들 유도체들은 반응 도식에 도시된 바와 같이 전환되어 AA 4 및 AB 5를 제조한다. 유도체 AA 5 및 AB 6 은 적절한 환원제로 AA 4 및 AB 5를 처리하여 제조하는데, 이때 3-위치의 카복시 그룹상의 보호 그룹을 제거하고, 에틸렌-치환된 피리딘을 환원시켜 목적 화합물을 제조한다. 바람직한 환원제/탈보호제는 PtO₂이다. 2 및 3-일 피페리딘은 종래의 방법에 의해 아크릴산 유도체를 변형함으로써 제조할 수 있다.

1-치환체가 C(O)(CH₂)₂-3-일-피롤인 화합물을 제조하기 위하여 유도체 AA 1 또는 AB 1 을 상술한 아실화 방법을 사용하여 3-(1-벤질피롤리딘-3-일)아크릴산으로 아실화하여 아실화 유도체 AA 2 및 AB 2를 제조한다. 이러한 치환된 피롤 아크릴산 유도체는 상응하는 니트릴 유도체를 수성 산으로 가수분해하여 제조할 수 있다. 참조 문헌으로 기재된 미합중국 특허 제 4,002,643호에 기재된 방법에 따라 3-(1-벤질피롤리딘-3-일)아크릴로니트릴을 제조한다. 이들 유도체들을 상술한 바(6-원의 경우) 대로 처리하여 A 가 여기에 함유된 질소를 갖는 5-원환인 본 발명의 화합물을 수득한다.

Boc-D-Lys 및 R- 또는 S-니페코틸기를 함유하는 부분 입체 이성체적으로 풍부한 최종 생성물(참조 : 화합물 14 및 16) 을 제조하기 위하여, 합성 초기에 상응하는 거울상 이성체적으로 풍부한 니페코트산 메틸에스테르를 사용하였다. 거울상 이성체적으로 풍부한 니페코트산 메틸에스테르를 공지(참조 : A. M Akker-man, Rec. Trav. Chim. pays-Ras 1951. 70, 899) 된 라세미 물질의 키랄 분할에 의해 분리한다.

본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 하나 또는 그 이상의 본 발명의 일반식(I)의 화합물 또는 그의 염을 종래의 약제학적 배합 기술에 의한 약제학적 담체와 완전 혼합하며, 이때 담체는 투여하기 위한 제제형태에 따라 다양한 형태, 즉 경구용 또는 근육내 투여와 같은 비경구용을 취한다. 경구 투여용의 조성물을 제조할 때, 통상적인 약제학적 매질 중 하나를 사용할 수 있다. 따라서 예를 들어 현탁액, 엘릭서 및 용액과 같은 액체 경구용 제제를 위한 적절한 담체 및 부가제는 물, 글리콜, 오일, 알콜, 방향제, 방부제, 착색제 등을 포함하고; 예를 들어 분말, 캡슐, 카플렛, 젤캡 및 정제와 같은 고체 경구용 제제를 위한 적절한 담체 또는 부가제는 전분, 당, 희석액, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕괴제 등을 포함한다. 정제 및 캡슐은 투여 용이성 때문에 가장 유익한 경구 투여 단위 형태를 나타내며, 이때 고체 약제학적 담체를 명백하게 사용한다. 필요하다면, 정제는 표준 기술에 의해 코팅 또는 내부 코팅된 당일 수 있다. 비경구용으로, 담체는 통상 용해성 보조와 같은 목적 또는 보존을 위해 다른 성분들을 함유할 수 있을 지라도 멸균수로 이루어질 것이다. 주사용 현탁액을 또한 제조할 수 있는데, 이때적절한 액체 담체, 현수제 등을 사용할 수 있다. 여기에서 약제학적 조성물은 투여 단위당 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 주사액, 찻숟갈 하나 가득한 양과 같은 상기의 유효량을 전달하기에 필요한 활성 성분의 양을 포함할 것이다. 여기에서 약제학적 조성물은 투여 단위당 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 주사액, 좌약, 찻숟갈 하나 가득한 양을 약 0.03 mg 내지 100 mg/kg (바람직하게는 0.1-30 mg/kg) 을 함유할 것이고, 약 0.1-300 mg/kg/일(바람직하게는 1-50 mg/kg/일) 의 양을 투여할 수 있다. 그러나 투여량은 환자의 조건, 치료된 상태의 심각성 및 사용한 화합물에 따라 달라질 수 있다. 매일 투여 또는 주기-후 투여가 사용될 수 있다.

약리학

본 발명의 화합물은 혈소판 당 단백질 IIb/IIIa (GP IIb/IIIa) 애 대한 피브리노겐의 결합을 저해하며, 따라서 혈소판 응집을 억제한다. 이와 같은 화합물은 따라서 동맥 및 정맥 혈전증, 급성 심근 경색, 혈전융해 치료후 재폐색 및 협심증, 및 다양한 혈관 폐색 장애와 같은 혈소판-개재 혈전증 장애를 치료하는데 유용하다. 정상 혈소판 응집에서 최종의 통상 경로가 활성화된 노출 GP IIb/IIIa 에 대한 피브리노겐의 결합이기 때문에, 이러한 결합의 저해는 있을 수 있는 항혈전증 접근을 나타낸다. 수용체는 ADP, 콜라겐, 및 트롬빈과 같은 자극에 의해 활성화되어 결합 영역을 피브리노겐중 서로 다른 2 개의 펩타이드 영역인 α-사슬 Arg-Gly-Asp (RGD) 및 γ-사슬 400-411 에 노출시킨다. 후술하는 약리학적 연구의 결과에 의해 입증되었듯이, 본 발명의 화합물은 분리된 GP IIb/IIa (IC_50's3-5800nM) 에 피브리노겐 결합을 저해할 수 있음을 보였고, 다양한 혈소판 자극하에 시험관내 혈소판 응집 저해, 및 동물 모델에서 생체내 혈소판 응집 저해를 나타내었다.

시험관 내에서 고상 순수 당단백질 IIB/IIIA 결합 분석

96 웰 이물론(immulon)-2 미량역가 (Dynatech-immulon) 를 pH 7.4 에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 1 mM 중의 RGD-친화성 순수한 GP IIb/IIIa (유효 범위 0.5 - 10 ㎍/㎖) 50 ㎕/웰로 피복하였다. 플레이트를 덮고, 4℃ 에서 밤새 배양하였다. GP IIb/III3 용액을 버리고, 5 % BSA 150 ㎕ 를 첨가한후 실온에서 1-3 시간 동안 배양하였다. 플레이트를 변형된 타이로드(Tyrodes) 완충액으로 세정하였다. 2 × 최종 농도에서 비오틴화 피브리노겐 (25 ㎕/웰)을 2 × 최종 농도에서 시험 화합물(25 ㎕/웰)을 함유하는 웰에 첨가하였다. 플레이트를 덮고, 실온에서 2-4 시간 동안 배양하였다. 배양 종결 20분전에 한 방울의 시약 A (Vector Stain ABC Horse Radish Peroxidase kit, Vector Laboratories, Inc.)과 한 방울의 시약 B 을 5 ㎖ 의 변형 타이로드 완충 혼합액과 혼합하면서 가한후 방치시킨다. 리간드 용액을 버리고, 변형 타이로드 완충액으로 플레이트를 세정한다 (5 ×200 ㎕/웰). 벡터 스테인 HRP-비오틴-아비딘 시약 (50 ㎕/웰, 상기 제조된 것임) 을 가하고, 실온 에서 15 분 동안 배양하였다. 벡터 스테인 용액을 버리고, 웰을 변형 타이로드 완충액으로 세정하였다 (5 ×200 ㎕/웰). 전개 완충액(50 mM 시트레이트/인산염 완충액 @ 10 ㎖ pH 5.3, 6 mg o-페닐렌디아민, 6 ㎕ 30 % H₂O₂, 50 ㎕/웰) 를 가하고, 실온에서 3-5분 동안 배양한후, 2 N 황산 (50 ㎕/웰)를 가한다. 흡광도를 490 nM 에서판독한다. 결과는 표 1 에 기재되어 있다.

트롬빈-유도된 겔-여과된 혈소판 응집 현상의 시험관내 저해 분석

혈소판 응집의 백분율을 화합물 처리 혈소판 농축물 대 대조용 처리 혈소판 농축물의 투광 증가로서 측정하였다. 약물이 없는 정상 공여체에서 혈액을 채취하여 0.13 M 나트륨 시트레이트를 함유하는 관에 넣는다. 전혈을 25 ℃ 에서 10 분간 200 ×g 의 속도로 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)을 수집한다. PRP (5 ㎖) 를 세파로즈 2B (베드 양 50 ㎖)를 통해 겔 여과하고, 시료당 혈소판 계수를 2×10⁷혈소판수로 조정한다. 하기 성분을 실리콘화 큐베트 : 농축 혈소판 여과액 및 타이로이드 완충액 (0.14 M NaCl, 0.0027 M KCl, 0.012 M NaHCO₃, 0.76 mM Na₂HPO₄, 0.0055 M 글루코오스, 2 mg/㎖ BSA 및 5.0 mM HEPES @ pH 7.4) 에 350 ㎕, 20 mM 칼슘 50 ㎕ 및 시험 화합물 50 ㎕ 의 양으로 가한다. BIODATA 응집 측정기에서 3 분 동안 응집 현상을 관찰한후, 아고니스트(트롬빈 50 ㎕ 를 1 단위/㎖ 로)를 가한다. 결과는 표 1 에 기재되어 있다.

생체의 개 연구

다 자란 잡종개 (8-13 kg) 를 펜타바르비탈 나트륨 (35 mg/kg i.v.)으로 마취시키고, 인공 호흡시킨다. 대퇴골 동맥에 주입한 밀러 카테터-팁 압력 변환기를 사용하여 동맥 혈압 및 심장 박동수를 측정한다. 좌심실(LV) 말단 심장이완 압력 및 심근 수축의 지표를 측정하기 위하여 경동맥을 통해 LV 에 다른 밀러 변환기를 위치시킨다. 림(limb) 전극에서 부터 납(II) 심전도를 기록한다. 혈액과 주입 약물을 시료화하기 위하여 대퇴부 동맥과 정맥에 카테터를 위치시킨다. 모듈러 장치 데이타 인지 시스템을 사용하여 반응들을 연속적으로 검사한다.

동맥 혈액 시료 (5-9 ㎖)를 3.8 % 나트륨 시트레이트를 함유하는 관에 회수하여 혈소판 풍부한 혈장 (PRP)을 제조하고, 응고 매개변수, 즉 프로트롬빈 시간 (PT) 와 활성화된 국부적 트롬보플라스틴 시간 (APTT) 에 대한 효과를 측정한다. 분리 혈액 시료 (1.5 ㎖)를 EDTA 에서 회수하여 적혈구 용적 및 세포계수를 측정한다 (혈소판, RBC 및 백혈구). 심플레이트(symplate) 절개 장치 및 와트만(Whatman) 여과지를 사용하여 구강 표면으로 부터 주형(template) 출혈시간을 수득한다.

BioData 응집 검출계를 사용하여 PRP 의 응집을 수행한다. 전혈의 응집은 크로놀로그(Chronolog) 임피던스 응집검출계를 사용한다. BioData 또는 ACL 3000 + 응고 분석기상에서 PT 와 APTT 를 측정한다. 세포수는 시스멕스(SySmex) K-1000 으로 측정한다.

화합물(17)을 소량의 디메틸포름아미드 (DMF)에 용해시키고, 염수로 희석시켜 최종 농도를 10% DHF로 한다. 화합물(17)을 하바드 주입 펌프를 사용하여 정맥내 경로로 투여한다. 각각의 동물에 0.3, 1, 3 및 10 mg/kg의 양을 점증적으로 투여한다. 각 투여량을 15 분 간격으로 0.33 ㎖/분의 일정한 속도로 투여한다. 각각의 투여량에 대해 30 분 및 60 분 투여후 데이타를 얻고, 약물 투여를 종결한다.

화합물(17)은 생체외 혈소판 응집 반응의 현저한 저해현상을 야기시킨다. 따라서, 전혈에서 화합물(17) 은 10 mg/kg 에서 콜라겐 자극 혈소판 APT 방출을 현저히 저해함과 함께 0.3 - 10 mg/kg 의 투여량으로는 콜라겐-자극 응집현상을 저해한다. PRP 에서, 화합물(17)은 또한 0.3 mg/kg 에서 현저하게 활성을 나타냄과 함께 콜라겐 자극 혈소판 응집현상을 저해한다. PRP의 감마 트롬빈 유도 응집현상은 3.0 mg/kg 이상의 양에서 저해된다. PRP와 전체 혈액에서 혈소판의 기능은 약물 작용중 비교적 단기간이라 제시된 30-60분내에 회복하기 시작한다. 화합물(17)은 10 mg/kg, iv 이하의 양에서는 측정할 수 있는 혈역학 효과를 전혀 나타내지 못하였다. 약물은 빠른 회복 후처리와 함께 3 및 10 mg/kg 에서 주형 출혈시간의 증가를 초래한다. 응고 (PT또는 APTT)에 대한 효과는 처리하는 동안에는 전혀 관찰하지 못하였고, 백혈구와 RBC 계수는 화합물(17)의 어떠한 양으로도 불변하였다.

결과는 화합물(17)이 (콜라겐과 트롬빈 경로 모두에 길항작용하는) 0.3-10 mg/kg 범위의 정맥내 투여후 생체외에서 혈소판 응집에 대한 매우 유효한 저해제임을 알려주고 있다. 항응집 효과는 비교적 단기간이며, 보다 고량에서 출혈 시간의 증가를 수반하게 된다. 기타 혈역학 또는 혈액학 효과는 관찰하지 못하였다.

표 1

^*는 IC₅₀을 의미한다.

생체내 개 연구

화합물(16)을 하기 생체내 개 모델을 사용하여 시험하여 그의 치료 효능을 측정한다.

외과용 제제

암수의 다 자란 잡종개 (9-13 kg) 를 펜토바르비탈 나트륨 (35 mg/kg, i.v.)으로 마취시키고, 기관내의 관을 통해 실내 공기를 통기시킨다(12 스트로크/분, 25 ㎖/kg). 동맥압을 측정하기 위하여, 좌심실 정맥에 염수로 채워진 폴리에틸렌 카테터(PE-200)로 캐뉼라 삽입하고, 스타탐(Statham) 압력 변환기(P231D, Oxinard, CA)에 연결한다. 평균 정맥 이완 혈압, 림 납에 의해 발생한 납(II) 심전도에서 야기된 심장 속도는 심박타코미터 (Biotach, Gould Electronics, Cleveland, OH)를 사용하여 검사한다. 약물을 투여하는 동안 경정맥을 캐뉼라 삽입한다(PE-200). 좌측 대퇴골 동맥과 좌측 대퇴골 정맥을 실리콘 처리되고(Sigmacotce Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), 염수로 채워진 폴리에틸렌 튜빙(PE-200)으로 캐뉼라 삽입하고, 실리콘 처리된 튜빙(PE-240)의 5cm 부분과 연결시켜 체외 동정맥 션트(shunt)(A-V) 를 형성한다. 션트 개존성(patency)을 도플러 유속 시스템(모델 VF-1, Crystal, Biotech Inc., Hopkinton, MA)을 사용하여 조절하고, 션트 부위의 기부에 대해 검사한다. 모든 파라미터들을 10 mm/분의 페이퍼 속도로 폴리 그래프 기록기(Gould TA-4000, Oxnard CA) 상에서 연속적으로 검사한다.

프로토콜

수술후 15 분의 안정화 기간이 끝나고, 션트내에 응괴형성 표면(Obraided silk thread, 5 cm 길이, Ethicon Inc., Somerville, NJ)을 도입함으로써 폐색성 혈전을 형성한다. 4 회의 연속 15 분 션트 기간을 이용하는데, 이때 우선 비이클을 주입하고, 이어서 화합물(16)인 SC-47643, DMF를 함유하는 염수 또는 시트르산을함유하는 염수의 농도를 증가시켜가면서 이를 큰 알약으로 하여 응괴 형성 표면의 주입 5 분전에 주입을 시작하고 추가로 15 분동안 계속 수행한다. 각 15 분 션트기간의 AT 말기에 실크를 주의깊게 제거하고, 중량을 측정한다. 다섯 번째 션트후 바로 전체 누계 처리량을 사용하여 전체 폐색까지의 시간에 의해 지시된 바와 같이 개존 기간을 평가한다. 혈전 중량은 션트에서 제거시 실크의 전체 중량으로 부터 배치 이전의 실크 중량을 빼서 계산한다. 첫 번째 션트 이전 및 전혈 콜라겐-유도 혈소판 응집, 트롬빈-유도 혈소판 탈과립화 (혈소판 ATP 방출), 프로트롬빈 시간 및 혈소판 계수를 측정하기 위해 각 션트 기간 이후에 동맥 혈액을 회수한다. 주형 출현 시간은 각 션트 기간으로 시작 10 분에 수행한다.

혈액 연구

혈소판, WBC와 RBC 의 계수 및 적혈구 용적 측정을 Sysmex^TMK 1000(Baxter Laboratories, McGraw Park, IL)을 사용하여 2 mg/㎖ 이나트륨 EDTA 중에 수집한 전혈에서 진행한다.

전혈 혈소판 응집 및 APT 방출을 루미-응집을 사용하여 측정하고, ATP 방출은 루미-응집검출계(Chrono-log, Havertown, PA)를 사용하여 37 ℃로 유지된 전혈의 교반(1000 rpm)현탁액을 통해 임피던스의 변화(혈소판 응집) 및 투광성(aATP-방출)을 기록함으로써 측정한다. 혈액 시료를 나트륨 시트레이트 0.01M에 수집하고, 0.5 mM Ca 이 보충된 염수(0.02 M CaCl₂25 ㎕) 및 루시페롤 20 ㎕ (Chrono-log, Havertown, PA) 로 50 % 희석시킨다. 최종 부피는 1 ㎖ 였다. 응집은 분리 시료중에 있는 동안 콜라겐 (2 ㎍/㎖)으로 유도하고,트롬빈 (0.5 U/㎖)을 사용하여 혈소판 탈과립화를 조사하고(Chrono-log, Havertown, PA), 6분에 걸쳐 임피던스의 변화 및 발광성을 기록한다. 프로트롬빈 시간 (PT) 을 마이크로시료 응고 분석기 (Ciba Corning 512, Corning, NY)를 사용하여 조사한다. 고무(Surgicutt, ITC Corp., Edison, NJ) 로 절개함으로써 수행된 바와 같이 주형 출혈시간 및 덩어리 형성 시간을 조사한다.

약물

화합물 (16) ; 1 + 0.03, 3 + 0.1 및 5 + 0.3 mg/kg, i.v. (응집괴) + mg/kg/hr, i.v. (주입) 을 염수 + DMF (5 %) 에 용해시키고, 계속해서 희석하여 모(pare-nt) 화합물로서 표현된 적절한 농도를 얻는다.

통계학적 분석

결과는 표 2-4 에 기재되어 있다 모든 값들은 평균 및 평균의 표준 오차로서 표현한다. 변화의 통계학적 의의는 편차 및 스튜던트 t-시험(Student's t-test) 의 베이스라인 분석으로 부터의 변화를 기준으로 평가한다. P < 0.05 일때 유의차가 있는 것으로 간주한다.

표 2

표 2. 처리 기간 동안 및 처리후 축의 용량에 의한 폐색성 혈전 형성의 발생 빈도. 제시된 값은 제로 션트 혈류가 발생하고 션트가 더 이상 개존적이지 않은 그룹당 동물의 수이다. 개는 처리후 회복 기간 동안에 60 분 동안 관찰하였다.

표 3

표 2. 혈전 중량 및 출혈 시간에 대한 화합물 # 16 의 효과

모든 값은 평균 ±SEM으로 표시된다. 모든 파라미터는 처리 효과를 평가하기 위한 각 션트 기간후 즉시 기록된다.

^*스튜던트 t-시험 대 예비처리, P<0.05

표 4

실시예

보호된 아미노산은 바켐 바이오사이엔스 일코퍼레이티드(Bachem Biosci-ence Inc.) 로 부터 구입한다. 보호된 아미노 N-하이드록시석신이미드 에스테르를 사용하면 BOP-Cl을 사용하지 않아도 된다(참조 : 화합물 14의 합성). 거울상 이성체적으로 풍부한 니페코트산 메틸 에스테르는 이미 알려진 라세미 물질을 키랄 분할하여 분리한다(참조: A.M. Akkerman, Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 1951, 70,899). 그밖의 다른 모든 화학 물질은 Aldrich Chcmical Company, Inc. 의 시판 제품을 구입하여 사용한다. 고 해상도¹H NMR 스펙트럼은 360 MHz Bruker AC-360 분광광도계 상에서 기록되었고, 커플링 상수는 Hz 로 나타내었다. 융점은 Mel-Temp II 상에서 측정하고, 융점 장치는 보정되지 않았다. 미소분석은 Robertson Microlit Laboratories, Inc.[Madison, New Jersey 소재] 또는 The R. W. Johnson Pharmaceutical Research Institute Analytical Department 에서 수행하였다. 최종 화합물은 통상의 유기 용매에 의한 재결정화/침전 및/또는 Merck 실리카겔-60 을 사용한 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순도는 수성 아세토니트릴 이동상(일반적으로 10% MeCN/90% 물) 을 사용한 Beckman/Waters HPLC 시스템 및 Phenomenex-Ultracarb 5 ODS(30) 칼럼(100×4.6 mm) 상에서 평가하였다. 실시예 및 본 출원을 통해 하기 약어가 이후 인용된다:

Ac = 아세틸

Bn 또는 Bzl = 벤질

Boc = t-부톡시카보닐

BOP-Cl = 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로라이드

Cbz = 벤질옥시카보닐

CP = 화합물

DiBAL = 디이소부틸알루미늄 하이드라이드

EDC = 에틸 디메틸아미노프로필카보디이미드

EDTA = 에틸렌디아민테트라아세트산

HOBT = 하이드록시벤조트리아졸

i-Pr = 이소프로필

NMMl = N-메틸모르폴린

Nip = 니페코틸(다른 지시가 없는한 3-위치에서 라세미체)

PTSA = p-톨루엔설폰산

RT = 실온

TFA = 트리플루오로아세트산

실시예 1 - N^α-Boc-D-Lys-S-(+)-Nip-β-Ala-OH(CP#14)

5 ℃ 에서 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-OH(2.9 g, 7.74 mmol) 및 CH₂Cl₂(80 ㎖)의 혼합물에 BOP-Cl(1.96 g, 7.7 mmol) 및 NMM(0.83 ㎖, 7.7 mmol) 을 가한다. 이 혼합물을 30분 동안 교반하고, S-(+)-니페코트산 메틸 에스테르 하이드로클로 라이드(1.39 g, 7.7 mmol) 및 NMM(0.83 ㎖) 으로 처리한 후, 5 ℃ 에서 2 시간 동안 교반한 다음, 포화 NH₄Cl(50 ㎖) 로 회석한다. 유기충을 수성충으로 부터 분리하여 MgSO₄로 건조시킨 후, 증발시켜 유리질 고체를 수득한다. 이 고체를 플래쉬(flash) 크로마토그래피(4% EtOH/CH₂Cl₂)에 의해 정제하여 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-S-(+)-Nip-OMe를 백색 품으로서 수득한다.

실온에서 THF(25 ㎖) 중의 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-S(+)-Nip-OMe(3.52 g, 7.0 mmol) 의 용액에 수성 수산화리튬(15 ㎖ 물 중의 0.19 g) 을 3분 간에 걸쳐 적가한다. 이 용액을 6시간 동안 교반하고, 증발시켜 백색 폼을 수득한다. 이 폼을 실온에서 CH₂Cl₂(80 ㎖) 로 슬러리화 하고, H-β-Ala-OBn·PTSA(2.43 g, 7.0 mmol), HOBT (5 mg), EDC · HCl (1.98 g, 10.4 mmol) 및 NMM (0.76 ㎖, 7.0 mmol) 으로 차례로 처리한단. 이 혼합물을 13 시간 동안 교반하고, 포화 NH₄Cl (50 ㎖) 로 희석한 후 층을 분리한다. 유기층을 MgSO₄로 건조시킨 후, 증발시켜 백색 폼을 수득한다. 이 폼을 플래쉬 크로마토그래피 (3-4% EtOH/CH₂Cl₂)에 의해 정제하여 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-S(+)-Nip-β-Ala-OBn 백색 품으로서 수득한다 :

질소 대기하에 Parr용기 중에서 THF(15 ㎖) 중의 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-S(+)-Nip-β-Ala-OBn(0.80 g, 1.22 mmol)의 용액에 AcOH(5 ㎖), 물(10 ㎖) 및 Pd/C(10%, 0.09 g) 을 가한다. 이 혼합물을 50 psi/실온에서 21 시간 동안 수소화 시키고, 셀라이트를 통해 여과한 후, 약 5 ㎖ 가 될 때까지 증발시킨다. 이 용액을 Et₂O(60 ㎖) 로 처리하여 백색 침전을 수득한 후, 이 침전을 여과하고, 동결건조시켜 화합물 14를 융점 52내지 60 ℃ 인 무색 플레이크로 수득한다 :

실시예 2 - N^α-Boc-L-Lys-(Cbz-Nip-β-Ala-OBn(CP#1)

N^α-BOC-L-Lys(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르를 출발물질로 하여 실시예 1 에서와 같이 반응시켜 화합물 1 을 유리질로서 분리한다:

실시예 3 - N^α-Boc-L-Lys-Nip-β-Ala-OH(CP#2)

실시예 1 에서와 같이 화합물 1 을 가수소분해시켜 화합물 2 를 백색 폼으로서 분리한다 :

실시예 4 - N^α-Boc-D-Lys-Nip-β-Ala-OH(CP#3)

라세미 니페코트산 메틸 에스테르 및 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-OH 를 출발 물질로 하여 실시예 1 에서와 같이 반응시켜 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 백색 폼으로서 분리한다 :

N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 실시예 1 에서와 같이 가수소분해시켜 화합물 3 을 무색 플레이크로서 분리한다 :

실시예 5 - N^α-Boc-D-Lys-Nip-L-Asp-OMe (CP#18)

실시예 1 에서와 같이 H-L-Asp(OBn)-OMe 및 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)Nip-OH 로 부터 제조한 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-L-Asp(OBn)-OMe 를 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-L-Asp(OBn)-OMe 를 가소수분해시켜 제조한 화합물 18 을 백색 폼으로서 분리한다. :

실시예 6 - H-L-Lys-Nip-β-Ala-OH(CP#4)

실온예서 물(10 ㎖) 및 MeOH(10 ㎖) 중의 화합물 2(0.30 g, 0.70 mmol) 의 용액에 HCl(0.50 ㎖, 진한)을 가한다. 이 용액을 1 시간 동안 교반하고,약 2 ㎖ 의 오일이 될 때까지 증발시킨다. 이 오일을 MeCN(20 ㎖) 으로 처리하고, 여과한 후, Et₂O(3×20 ㎖) 로 세척한 다음, 건조시켜 화합물 4 를 융점 65 내지 75 ℃ 인 백색 분말로 수득한다 :

실시예 7 - N-(N^ε-아미노카프로일)-Nip-β-Ala-OH (CP#5)

라세미 니페코트산 메틸 에스테르 및 N^ε-Boc-아미노카프로산 N-옥시석신이미드 에스테르를 출발 물질로 하여 실시예 1 에서와 같이 제조한 N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-Nip-β-Ala-OBn을 오일성 고체로서 분리한다 :

N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-Nip-β-Ala-OBn을 실시예 1 에서와 같이 가수소분해시키고, 산 가수분해 하여 화합물 5 를 유리질로서 분리한다 :

실시예 8 - N-[3-(4-피페리딘프로피오닐)]-Nip-β-Ala-OH (CP#17)

실시예 1 에서와 같이 3-(4-피리딘)아크릴산 및 라세미 니페코트산 메틸에스테르로 부터 제조한 N-[3-(4-피리딘아크릴로일)]-Nip-β-Ala-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

질소 대기하에 물(10 ㎖) 및 EtOH(20 ㎖) 중의 N-[3-(4-피리딘아크릴로일)]-NiP-β-Ala-OBn(0.56 g, 1.33 mmol) 의 용액에 HCl(0.66 ㎖ 디옥산 중의 4.0 M) 및 산화백금(IV) (0.060g) 을 가한다. 이 혼합물을 50 psi/실온에서 22 시간 동안 수소화 시키고, 셀라이트를 통해 여과한 후, 약 5 ㎖ 가 될 때까지 증발시킨다. 이 용액을 MeCN (30 ㎖) 으로 처리하고 여과한 후, Et₂O(3×20 ㎖) 로 세척한 다음 건조시켜 화합물 17을 담황색 폼으로서 수득한다 :

실시예 9 - N^α-Ac-L-Lys-Nip-Gly-OH (CP#6)

N^α-Ac-L-Lys(Boc)-OH및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르(참조 : 화합물 14) 을 출발 물질로 하여 제조한 N^α-Ac-L-Lys(Boc)-Nip-Gly-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 이서와 같이 N^α-Ac-L-Lys(Boc)-Nip-Gly-OBn 을 가수소분해한 후, TFA-개재된 Boc 제거에 의해 제조한 화합물 6을 갈색 분말로서 분리한다 (방법 참조예: M. Bodanszky The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag ; New York 1984) :

실시예 10 - N^α-Ac-L-Lys-Nip-β-Ala-OH (CP#7)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Ac-L-Lys(Boc)-OH 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Ac-L-Lys(Boc)-Nip-β-Ala-OBn 을 백색 폼으로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Ac-L-Lys(Boc)-Nip-β-Ala-OBn 을 가수소분해 한 후, 실시예 6 에서와 같이 산 가수분해 하여 제조한 화합물 7을 백색 폼으로서 분리한다 :

실시예 11 - N^α-Boc-L-Arg-Nip-β-Ala-OH (CP#8)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-L-Arg(Cbz₂)-OSu 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Boc-L-Arg(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-L-Arg(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn을 가수소분해 하여 제조한 화합물 8 을 백색 폼으로서 분리한다 :

실시예 12 - N^α-Boc-L-Lys-Nip-γ-아미노부티르산 (CP#9)

N^α-Boc-L-Lys(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조(참조 : I-1, I-2) 한 N^α-Boc-L-Lys(Cbz)-Nip-γ-아미노부티르산 벤질 에스테르를 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-L-Lys(Cbz)-γ-아미노부티르산 벤질 에스테르를 가수소분해 하여 제조한 화합물 9를 융점 65 내지 71 ℃ 인 백색 폼으로서 분리한다 :

실시예 13 - H-D-Lys-Nip-β-Ala-OH(CP#10)

실시예 6 에서와 같이 화합물 3 을 산 가수분해 하여 제조한 화합물 10 을 융점 108-128 ℃ 인 크림 분말로서 분리한다 :

실시예 14 - N^α-Boc-D-Lys-Nip-γ-아미노부티르산 (CP#11)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-γ-아미노부티르산 벤질 에스테르를유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-γ-아미노부티르산 벤질에스테르를 가수소분해 하여 제조한 화합물 11 을 융점 50-57 ℃ 인 갈색 분말로서 분리한다 :

실시예 15 - N^α-Boc-D-Lys-Nip-Gly-OH (CP#12)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-Cly-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys(Cbz)-Nip-Gly-OBn을 가수소분해하여 제조한 화합물 12 를 융점 66-80℃ 인 백색 플레이크로서 분리한다:

실시예 16 - N^α-Ac-D-Lys-Nip-β-Ala-OH(CP#13)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Ac-D-Lys(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Ac-D-Lys(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Ac-D-Lys(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 가수소분해 하여 제조한 화합물 13 을 융점 46-59 ℃ 인 유리질로서 분리한다 :

실시예 17 - N^α-Boc-L-Lys(i-Pr)-Nip-β-Ala-OH(CP#15)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-L-Lys(i-Pr)(Cbz)-OH 및 라세미 니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 N^α-Boc-L-Lys(i-Pr)(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 유리질로서 분리한다 :

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-L-Lys(i-Pr)(Cbz)-Nip-β-Ala-OBn 을 가수소분해 하여 제조한 화합물 15 를 융점 90-123 ℃ 인 백색 플레이크로서 분리한다:

실시예 18 - N^α-Boc-D-Lys-R-(-)-Nip-β-Ala-OH (CP#16)

실시예 1 에서와 같이 N^α-Boc-D-Lys-(Cbz)-OH 및 R-(-)-니페코트산 메틸 에스테르로 부터 제조한 화합물 16을 융점 42-51 ℃ 인 무색 플레이크로서 분리한다:

실시예 19 - N-(N^ε-아미노카프로일)-3-피페리딘메틸아미노프로피온산 (CP#19)

N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-니페코트산(3.1 g 9.0 mmol) 및 THF(50 ㎖) 의 용액에 1.1-카보닐디이미다졸(1.45 g. 9.0 mmol) 을 가한다. 이 용액을 1 시간 동안 교반하고, -10 ℃ 로 냉각한 후, DiBAL(360 ㎖, 톨루엔 중 1.0 M) 을 20 분 간에 걸쳐 적가 처리하고, 2 시간 동안 추가로 교반한다. 이 용액을 수성 시트르산(40 ㎖ 의 물 중의 5.0 g) 으로 처리하고, CHCl₃(200 ㎖) 로 희석한 후, 형성된 층을 분리한다. 수성층을 CHCl₃(100 ㎖) 로 추출하고, 유기층을 합하여 건조시키고, 증발시킨 다음, 플래쉬 크로마토그래피(4% EtOH/CH₂Cl₂) 에 의해 정제하여 N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-피페리딘-3-카복스알데하이드를 유리질로서 수득한다 :

실온에서 MeOH(10 ㎖) 중의 N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-피페리딘-3-카복스알데하이드(0.69 g, 2.12 mmol) 의 용액에 H-β-Ala-OBn · PTSA(0.74 g, 2.12 mmol) 및 NaCNBH₃(0.13 g, 2.12 mmol) 를 가한다. 이 혼합물을 2.5시간 동안 교반하고, 증발시켜 백색 고체를 수득한다. 이 고체를 포화 NaHCO₃(10 ㎖) 및 CH₂Cl₂(50 ㎖) 사이에 분배시키고, 층을 분리한다. 수성층을 CH₂Cl₂(2×50 ㎖) 로 추출한 다음, 유기충을 합하여 건조시키고, 증발시킨 후, 플래쉬 크로마토그래피(0.5 % NH₄OH/4-10% EtOH/CH₂Cl₂) 에 의해 정제하여 N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-3-피페리딘메틸아미노프로피온산 벤질 에스테르를 유리질로서 수득한다 :

실온에서 THF(10 ㎖) 및 N-(N^ε-Boc-아미노카프로일)-3-피페리딘메틸아미노프로피온산 벤질 에스테르(0.28 g, 0.57 mmol) 의 용액에 수성 HCl(3.4 ㎖, 1.0 N)을 가한다. 이 혼합물을 22 시간 동안 교반하고, 증발시켜 유리질 고체를 수득한 다음, 이를 Et₂O(3×25 ㎖) 로 연마한 후, 건조시켜 백색 분말을 수득한다. 이 분말을 THF(5 ㎖) 및 물(10 ㎖) 에 용해시키고, 질소 대기하에서 Parr 용기에 옮긴 후, Pd/C(0.04 g, 10 %) 로 처리한다. 이 혼합물을 50 psi/실온에서 20시간 동안 수소화시킨 다음, 셀라이트를 통해 여과하고,약 5 ㎖ 가 될 때까지 증발시킨다. 이 용액을 MeCN(25 ㎖) 으로 처리하고, 여과한 후, Et₂O(2×25 ㎖) 로 세척한 다음, 건조시켜 화합물 19를 융점 65-70 ℃ 인 무색 유리질로서 수득한다.

Claims

일반식 (I) 의 화합물, 그의 거울상 이성체 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 :

상기식에서,

X¹및 X²는 동일하거나 상이하고 H₂및 O 중에서 선택되고,

Y 는 (CH₂)_m, CH(NHCOR³)(CH₂)_m및 CH(NH₂)CH₂)_m중에서 선택되며,

A 는 NHR¹, C(:NH)NH₂, 및 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피롤리딘-2-일 및 피롤리딘-3-일로 구성된 그룹 중에서 선택되는 질소를 함유하는 사이클로알킬 환 중에서 선택되고,

Z 는 (CH₂)_n및 CH(CO₂R⁴)(CH₂)_n중에서 선택되며,

R¹은 H, 알킬 및 CH(NH)NH₂중에서 선택되며,

R²는 H 및 알킬 중에서 선택되고,

R³는 알콕시 및 알킬 중에서 선택되며,

R⁴는 알킬 또는 아릴알킬이고,

R⁶는 H, 알킬, 또는 아릴알킬이며,

m은 0, 1, 2또는 3의 정수이고,

n은 0, 1 또는 2의 정수이다.
제 1 항에 있어서, Z가 (CH₂)₂인 화합물.
제 1 항에 있어서, R¹이 H 인 화합물.
제 1 항에 있어서, R²가 H 인 화합물.
제 1 항에 있어서, R³이 t-부톡시인 화합물.
제 1 항에 있어서, R⁴가 메틸인 화합물.
제 1 항에 있어서, Z 가 CH(CO₂R₄)(CH₂) 인 화합물.
제 1 항에 있어서,

중에서 선택된 화합물.