KR100260510B1 - 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료 - Google Patents

상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료 Download PDF

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Abstract

본 발명은 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료에 관한 것으로 보다 자세하게는 뽕나무속 식물의 여린 가지인 상지에 물 또는 유기용매를 가하여 얻은 추출물의 물현탁액을 분배추출하고, 얻어진 분배추출물을 통상적인 기초화장료에 첨가하여 우수한 미백효과를 갖게 하는 미백 화장료에 관한 것이다.

Description

상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료
본 발명은 뽕나무속 식물의 여린 가지인 상지로부터 추출된 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백화장료에 관한 것이다.
일반적으로 사람의 피부가 검게 변화되는 것은 여러 원인이 있지만, 주된 요인은 자외선에 피부가 노출되면, 피부세포의 일종인 멜라노사이트(Melanocyte)내에서 멜라닌(Melanin)이 합성되고 방출되어 피부 표피가 검게 된다. 멜라노사이트내에서 멜라닌이 합성되는 과정은 세포내의 티로신(Tyrosine)을 기질로 하여 티로시나아제(Tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파퀴논(Dopaquinone)을 생성시키며, 도파퀴논으로부터 자발적인 반응과 효소 반응을 거쳐 공중합체 흑색 색소인 멜라닌이 생성된다. 따라서 피부가 검게되는 것을 막기 위하여 멜라닌 생성과정중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시켜 주는 방법이 가장 간단하며 일반적이다. 이를 위해 종래에는 아스콜빈산(Ascorbic acid), 코직산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin), 히드로퀴논(Hydroquinone) 및 상백피 추출물등 각종 식물 추출물이 사용되고 있다. 이들중에서, 코직산은 티로시나아제의 활성 부위에 존재하는 구리 이온을 킬레이트시켜 효소활동을 저해하는 작용을 하는데, 성능이 우수한 반면 화장품에 배합시 안정성에 문제점이 커 화장료로서 적당하지 않다. 아스콜빈산은 비교적 낮은 티로시나아제 활성 저해 효과와 분자 자체의 안정성이 낮아 미백원료로 적합하지 않다. 히드로퀴논은 피부에 대한 자극성이 높아 안전성 문제로 현재 화장료로 사용하지 못하고 있다. 대부분의 식물 추출물의 경우 고농도에서만 비교적 높은 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타내며, 저농도에서는 저해 효과가 거의 나타나지 않는다.
본 발명자들은 이러한 현실을 감안하여 종래 알려져 있는 미백물질들이 갖는 문제점을 극복하고 보다 우수한 미백 원료를 찾기 위하여, 오래전부터 한방 또는 민간 요법에 사용되어 안전성이 입증되어 있는 천연 식물을 대상으로 미백 효능이 있는 유효물질을 검색한 결과, 뽕나무속 식물의 여린 가지인 상지의 추출물이 매우 뛰어난 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타냄을 발견하게 되어 국내에 특허출원한 바가 있다.
본 발명자들은 상지추출물로부터 보다 강력한 티로시나아제 활성 저해 효과를 갖는 미백물질을 찾고자 유기용매를 사용하여 분배한 결과 상지추출물의 분배추출물이 보다 강력한 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타내고, 아울러 멜라노사이트에서 멜라닌 합성을 강하게 억제하는 것을 알게되어 본 발명을 완성하게 되었다.
뽕나무속에는 뽕나무(Morus alba, Linne), 처진 뽕나무(Morus alba for. Peldulls DIPPEL), 산 뽕나무(Morus bombycis, Koidzumi), 꼬리 뽕나무(Morus bombycis var. Caudatifolia), 섬 뽕나무(Morus bombycis var. maritima KOIDZ), 가새 뽕나무(Morus bombycis for. Kase VYKEI), 몽고 뽕나무, 왕 뽕나무, 돌 뽕나무(Morus tiliaefolia, Makino)가 있으며, 이들은 낙엽활엽성의 교목으로 한국의 대부분 지역에 걸쳐 표고 500-1,400 m에 수평적으로 분포하며, 산골 마을 부근이나 산 기슭에 자생한다.
상지(Ramulus Mori)는 뽕나무속 식물의 여린 가지를 말린 것으로, 모양은 긴 원주형으로 드물게 분지가 있고, 크기가 일정하지 않으며, 직경은 0.5-1.5 cm 이다. 표면은 회황색 혹은 황갈색으로 다수의 황갈색 점상 피공과 미세한 종문이 있으며, 회백색을 띤 반원형 잎 흔적과 황갈색의 액아가 있다. 절편의 두께는 0.2-0.5 cm 로 외피 부위는 비교적 얇고, 목질 부위는 황백색이며, 사선은 방사상이고, 수부는 백색 또는 황백색이다. 상지의 채취 시기는 늦은 봄과 초여름 사이이며, 잎을 제거한 후, 신선할 때 30∼60 cm 크기로 잘라 햇볕에 말린다. 상지는 약간 쓴 맛이 나며, 소염, 이뇨, 강장, 발한 및 풍을 제거하는 등의 효능을 가지고 있어, 오래 전부터 한약재로 쓰이고 있다.
본 발명의 목적은 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료를 제공하는데 있다.
제1도는 상지추출물의 분배추출물과 종래 미백물질의 티로시나아제 활성 저해 효과의 지속성을 비교한 도면이다.
본 발명은 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료에 관한 것으로 보다 자세하게는 뽕나무속 식물의 여린 가지인 상지에 물 또는 유기용매를 가하여 얻은 추출물의 물현탁액을 분배추출하여 상지추출물의 분배추출물을 얻고, 얻어진 상지추출물의 분배추출물을 통상적인 기초화장료에 첨가하여 우수한 미백효과를 갖게 하는 미백 화장료에 관한 것이다.
본 발명의 미백화장료에 함유되는 상지추출물의 분배물의 제조 방법은 다음과 같다.
상지(Ramulus Mori)에 물 또는 유기용매를 가하여 얻어진 상지추출물에 상지추출물 건조 중량의 1∼10배의 물을 가하여 현탁시킨 후 물과 동량의 클로로포름을 가하여 분배(partition) 시킨 후, 두개의 상으로 분리 된 것 중 물 분배층을 분리하고 여기에 물과 동량의 에틸 아세테이트를 가하여 다시 두개의 상으로 분리 시킨 후, 에틸아세테이트 분배층을 분리하여 회전 감압 증발기로 완전히 건조시켜 상지추출물의 분배추출물을 얻는다.
분배시키기 전의 상지추출물을 얻는 과정을 구체적으로 설명하면, 상지를 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 1∼10배의 물, 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 클로로포름 또는 1,3-부틸렌글리콜 등을 가한다. 그 후 냉각 콘덴서가 장치되어 유효성분이 증발되는 것을 방지한 상태에서 40∼100℃에서 3∼20시간 가열하여 추출하거나, 4∼40℃에서 1∼15일간 침적추출하고 회전 감압증발기로 완전히 건조시켜 상지추출물을 얻을 수 있다.
제조된 상지추출물의 분배 추출물은 통상적인 기초 화장료, 다시말하면 유연화장수(스킨), 영양화장수(밀크로션), 영양크림, 맛사지 크림, 엣센스, 팩 등에 첨가되어 사용되는데, 첨가량은 그 건조 중량에 대하여 0.00001∼5중량%, 바람직하게는 0.001∼1중량%를 화장료에 첨가하여 미백화장료를 제조하는 것이 가능하다.
아래의 실시예 및 실험 예들은 본 발명의 내용을 설명하나, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
정제수로 세척하고 건조한 상지 1kg을 50% 에탄올 5L에 넣고 4∼40℃에서 5일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고 5∼10℃에서 7∼10일간 방치하여 저온숙성 시킨 후 와트만 5번 여과지로 여과 하였다. 이 여액을 65℃에서 회전 감압 증발기로 건조하였다(건조 중량 48.96g). 이 건조물에 480mL 의 정제수를 가하여 현탁시킨 후 480mL 의 클로로포름을 가하여 두 상으로 분리시킨 후 물 층을 분리하고, 여기에 480mL 의 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 분배 층을 분리하여 70℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여 건조 중량 6.37g을 얻었다.
실시예 2∼12
실시예 1에서와 같이 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 표1에 기재하였다.
실시예 2∼12의 실험 결과
실험 물질 상지의 추출용매 최종 분배 추출물의 건조 중량(g)
실시예 2 60% 에탄올 6.34
실시예 3 70% 에탄올 6.71
실시예 4 80% 에탄올 5.42
실시예 5 90% 에탄올 4.61
실시예 6 100% 에탄올 3.66
실시예 7 50% 메탄올 8.72
실시예 8 60% 메탄올 8.92
실시예 9 70% 메탄올 9.51
실시예 10 80% 메탄올 9.82
실시예 11 90% 메탄올 9.53
실시예 12 100% 메탄올 9.41
실험예 1 : 상지추출물의 분배추출물의 티로시나아제 활성 저해 효과
실시예 1∼12에서 제조한 상지추출물의 분배 추출물에 대하여 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하였다. 티로시나아제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(Sigma)사에서 구입하여 사용하였다. 실시예 1∼12의 분배 추출물은 1,3-부틸렌 글리콜에 고농도로 용해시키고, 다시 완충용액에 희석하여 적당한 농도로 조절하여 추출물을 시료액으로 만들어 사용하였다. 티로신용액 0.5mL를 시험관에 넣고 여기에 추출물 시료액 0.5mL를 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치한 후 200U/mL 티로시나아제 0.5mL를 넣고 37℃에서 10분간 반응시킨다. 이때 대조군은 각 분배추출물 대신 완충용액을 0.5mL 넣은 것이다. 이 반응액이 들어 있는 시험관을 얼음위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시키고 분광광도계(Spectrophotometer)로 파장 475nm 에서의 흡광도를 측정하였다. 각 분배 추출물의 티로시나아제 활성 저해 효과는 하기의 공식으로 구한다.
Figure 1019970047259_B1_M0001
실험 결과는 하기 표2에 나타낸 바와 같다.
상지추출물의 분배 추출물의 티로시나아제 활성 저해율
실험 물질 최종 실험 농도(%, W/V) 티로시나아제 활성 저해율(%)
실시예 1 0.00050 96.8
실시예 2 0.00050 97.5
실시예 3 0.00050 99.4
실시예 4 0.00050 98.6
실시예 5 0.00050 98.7
실시예 6 0.00050 96.7
실시예 7 0.00050 98.9
실시예 8 0.00050 97.5
실시예 9 0.00050 97.9
실시예 10 0.00050 99.2
실시예 11 0.00050 98.6
실시예 12 0.00050 97.8
비교예1
정제수로 세척하고 건조한 상백피 1kg을 2∼3mm 정도로 절단한 후 95% 메탄올 20L를 3 시간 동안 교반하여 추출하여 그 추출액을 와트만 6번 여과지로 여과하였다. 이 여액을 65℃에서 회전 감압 증발기로 건조하였다.[Fragrance Journal 1990(6) pp 59-66]
비교예 2-4
실시예 3에서 클로로포름 으로 분배 추출하기 전의 상지추출물(비교예2) 과 시그마사에서 구입한 코직산(비교예 3), 알부틴(비교예4)을 사용하였다.
실험예 2 : 상지추출물의 분배추출물과 종래 미백물질의 티로시나아제 활성 저해 효과의 비교
상지추출물의 분배추출물은 상기의 실시예 3에서 제조한 것을 사용하였다. 티로시나아제 활성 저해효과는 실험예1과 같은 방법으로 측정하였다. 상지추출물의 분배추출물의 티로시나아제 활성 저해효과를 기존의 미백물질인 상백피 추출물, 코직산, 알부틴, 그리고 본 발명자들이 발명한 상지추출물의 분배추출물과 비교하였다. 실험 결과는 하기 표 3에 나타낸 바와 같다.
상지추출물의 분배추출물 및 여러 미백 물질의 티로시나아제 활성 저해 효과
미백 물질 IC50: ㎍/mL(티로시나아제 활성을 50% 저해시 필요한 농도)
실시예 3 1.25
비교예 1 18.72
비교예 2 12.48
비교예 3 5.82
비교예 4 65.2
상지추출물의 분배추출물이 농도에 따른 티로시나아제 활성 저해 효과가 상백피, 코직산등의 다른 미백 물질에 비해 매우 강한 미백 효능을 나타내었을 뿐만 아니라 본발명자들에 의해 발명된 분배추출 전의 상지추출물에 비해서도 10배 정도의 뛰어난 효능을 나타내었다. 코직산의 경우 비교적 미백효과는 우수하나 화장품에 배합시 변색 등의 안정성에 문제가 많다.
실험예 3 : 상지추출물의 분배 추출물과 상백피 추출물 등의 티로시나아제 활성 저해 효과의 지속성 비교
미백 물질이 안정적으로 미백 효능을 나타내는 지를 관찰하기 위하여 실험예 1의 방법에서 미백 물질을 첨가한 반응액의 37℃에서 반응시간대 별로 24시간 까지 연장하여 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하였다.
실험 결과는 제 1도에 나타낸 바와 같이 상지추출물의 분배추출물이 상백피 추출물, 코직산, 알부틴 등에 비하여 매우 우수한 지속적인 미백 효능을 나타내었으며, 본발명자들에 의해 발명된 상지추출물에 비해서도 우수한 지속성을 나나내었다.
실험예 4 : 멜라노사이트(Melanocyte)에서 멜라닌 생성에 대한 상지추출물의 분배추출물의 영향
멜라노 사이트는 마우스 유래 B-16 흑색종(ATCC CRL 6323) 세포주를 구입하여 사용하였다.
흑색종 세포주를 포도당 4.5 g/L, 10% 혈청, 1% 항생제가 함유된 DMEM 배지에 접종하여 50mL T-플라스크에 37℃에서 배양한다. 5% CO2조건하에서 24시간 배양한 후, 0.02% EDTA가 함유된 0.05% 트립신(Trypsin)을 처리하여 세포를 분리한 후 50mL T-플라스크에 접종하여 48시간 배양한다. 이때 세포수는 4.857 × 106세포/플라스크이다. 여기에 적당 농도의 상지추출물의 분배추출물을 DMEM 배지에 희석시켜 배양된 흑색종 세포에 처리하여 37℃에서 5일간 배양한다. 배양후 배지를 모두 제거하고, 0.02% EDTA와 0.05%트립신을 함유한 살린-포스페이트 완충용액(PBS)을 1mL 처리하여 세포를 분리시킨 후 5분간 원심 분리하여 세포만을 수집한다. 5% 트리클로로아세테이트(TCA)를 처리하여 교반하고, 원심 분리하여 침전된 멜라닌을 살린-포스페이트 완충용액으로 세척한다. 침전된 멜라닌에 1N NaOH를 처리하여 용해 시킨 후, 475nm에서 흡광도를 측정한다. 멜라닌 농도는 합성 멜라닌(Sigma)의 표준 농도 곡선으로부터 결정하였다.
실험 결과는 표4에 나타낸바와 같다.
멜라노 사이트에서 멜라닌 합성에 대한 상지추출물의 분배추출물의 영향
상지 추출물의 분배 추출물(㎍/㎖) 멜라닌의 함량(pg/세포)
무처리 3.91
10 1.58
20 1.35
50 1.01
100 0.58
실험 결과는 상지추출물의 분배추출물이 멜라노사이트내에서 멜라닌 합성을 억제하는 강력한 미백물질임을 나타낸다.
처방예 1
상지추출물의 분배 추출물을 함유한 화장료 중 유연 화장수(스킨)의 처방예는 다음과 같다. 여기서 상지추출물의 분배 추출물은 실시예 3의 것을 말한다.
성 분 함량(단위:중량%)
상지 추출물의 분배 추출물1,3- 부틸렌 글리콜글리세린올레일 알코올폴리 솔베이트 20에탄올방부제벤조 페논 -9향정제수 0.16.04.00.10.515.0미량0.05미량잔량
합계 100
처방예 2
상지추출물의 분배 추출물을 함유한 화장료 중 밀크로션의 처방예는 다음과 같다. 여기서 상지추출물의 분배 추출물은 실시예 3의 것을 말한다.
성 분 함량(단위:중량%)
상지 추출물의 분배 추출물프로필렌 글리콜글리세린트리 에탄올 아민토코페릴 아세테이트유동 파라핀스쿠 알란마카다미아 너트 오일폴리 솔베이트 60솔비탄 세스퀴 올레이트카르복시 비닐 폴리머방부제향정제수 0.16.04.01.23.05.03.02.01.51.01.0미량미량잔량
합계 100
처방예 3
상지추출물의 분배 추출물을 함유한 화장료 중 영양 크림의 처방예는 다음과 같다. 여기서 상지추출물의 분배 추출물은 실시예 3의 것을 말한다.
성 분 함량(단위:중량%)
상지 추출물의 분배추출물바셀린유동 파라핀밀 납폴리 소베이트 60솔비탄 세스퀴올레이트스쿠알란프로필렌 글리콜글리세린트리 에탄올 아민카르복시 비닐 폴리머토코페릴 아세테이트방부제향정제수 0.17.010.02.02.02.53.06.04.00.50.50.1미량미량잔량
합계 100
처방예 4
상지추출물의 분배추출물을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 처방예는 다음 과 같다. 여기서 상지추출물의 분배 추출물은 실시예 3의 것을 말한다.
성분 함량(단위:중량%)
상지 추출물의 분배추출물프로필렌 글리콜글리세린트리 에탄올 아민밀 납토코페릴 아세테이트폴리 솔베이트 60솔비탄 세스퀴 올레이트세테아릴 알코올유동 파라핀카르복시 비닐 폴리머방부제향정제수 0.16.04.00.52.00.13.02.52.030.00.5미량미량잔량
합계 100
처방예 5
상지추출물의 분배추출물을 함유한 화장료 중 팩 처방예는 다음과 같다. 여기서 상지추출물의 분배 추출물은 실시예 3의 것을 말한다.
성분 함량(단위:중량%)
상지 추출물의 분배추출물프로필렌 글리콜글리세린카르복시비닐 폴리머에 탄 올피이지-40 히드로 게비이티드 캐스터 오일트리 에탄올 아민방부제향정제수 0.12.04.00.37.00.80.3미량미량잔량
합계 100
실험예 5 : 피부 색소침착 억제 효과
갈색 기니아 피그(guinea pig)의 등부위 털을 제거하고 3×3㎠ 의 부위를 실험 대상으로 설정하였다. 실험 대상 부위에만 자외선이 조사되도록 알루미늄호일을 접착시킨 후 SE 램프(일본 도시바 제품)를 1.25 mW/㎠로 6분간, 1일 1회씩 연속 3일간 조사 하였다. 조사후 자외선 조사부위에 상기의 처방예 1 ∼ 5의 화장료를 1일 2회씩 3주간 도포 하였다. 도포 3주후 색소 침착 억제 효과를 육안으로 판정하였다.
실험 결과는 하기의 표5에 나타낸 바와 같다.
피부 색소 침착억제 효과
실험 제품 색소침착 억제효과
처방예 1 경미한 색소침착
처방예 2 경미한 색소침착
처방예 3 경미한 색소침착
처방예 4 약한 색소침착
처방예 5 약한 색소침착
* 색소 침착 판정 기준은 색소 침착이 없음, 경미한 색소 침착, 약한 색소 침착, 중간 정도의 색소 침착, 강한 색소 침착의 5단계로 구분하여 기재하였다.
본 발명의 상지추출물의 분배추출물의 미백효과는 기존의 미백물질로 개발된 상백피, 코직산, 알부틴 및 본발명자들에 의해 개발된 상지추출물과 비교한 결과 본발명의 상지추출물의 분배추출물이 가장 강력한 미백효과를 나타내었으며, 동일한 뽕나무 유래의 천연물인 상백피 등에 비하여 매우 우수한 지속적인 미백 효과를 나타내었고, 또한 본 발명자들에 의해 발명된 상지추출물에 비해서도 10배 정도의 티로시나아제 활성 저해효과를 보였으며, 그 효과의 지속성에서도 우수하였다..

Claims (5)

  1. 상지(Ramulus Mori)에 물 또는 유기용매를 가하여 얻어진 상지추출물에 상지추출물 건조 중량의 1∼10배의 물을 가하여 현탁시킨 후 물과 동량의 클로로포름을 가하여 분배(partition) 시킨 후, 두개의 상으로 분리 된 것 중 물 분배층을 분리하고 여기에 물과 동량의 에틸 아세테이트를 가하여 다시 두개의 상으로 분리 시킨 후, 에틸아세테이트 분배층을 분리하여 회전 감압 증발기로 완전히 건조시켜 얻은 상지추출물의 분배추출물을 함유하는 미백 화장료.
  2. 제 1 항에 있어서, 상지는 뽕나무속 식물의 여린 가지임을 특징으로 하는 미백 화장료.
  3. 제 1 항에 있어서, 상지추출물의 분배추출물이 화장료의 건조중량에 대하여 0.00001∼5중량%의 양으로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 미백 화장료.
  4. 제 1 항에 있어서, 상지추출물의 분배추출물이 화장료의 건조중량에 대하여 0.001∼1중량%의 양으로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 미백 화장료.
  5. 제 1 항에 있어서, 유연화장수(스킨), 영양화장수(밀크로숀), 영양크림, 맛사지크림, 엣센스, 팩의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 미백 화장료.
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