KR20030005721A - 천화분 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 천화분으로부터 유효 활성성분을 추출하여 그 추출물을 함유하는 피부 화장료에 관한 것으로서, 천화분 추출물은 탁월한 피부 미백효과, 피부자극 완화효과 및 면역증강효과를 나타내었으며, 이 물질을 이용하여 피부 미백용 등 각종 기능성 화장료를 제조할 수 있다.

Description

천화분 추출물을 함유하는 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION CONTAINING AN EXTRACT OF TRICHOSANTHES KIRILOWII}
본 발명은 천화분으로부터 추출한 유효 활성성분을 함유하는 피부 화장료에 관한 것이다.
최근 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 각종 한방 원료를 소정의 방법으로 추출하고, 그 추출물의 기능을 확인하여 각종 기능성 화장품을 개발하는 사례도 늘고 있다.
예를 들면 녹두는 피부를 청결하게 하는 기능이 알려져 있고, 그 외 인삼추출물, 상황버섯 추출물 등에 대해서도 그 특유의 노화방지 또는 미백 등의 효과가 밝혀져 각종 화장품에 응용되고 있다.
이러한 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 높아지고 있다.
이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 다른 한방재료들에 있어서 화장품으로의 응용가능성을 연구한 결과, 천화분의 추출물이 미백효과 등과 같은 화장품으로서의 효능이 기대 이상으로 우수함을 발견하게 되었다.
천화분은 하늘타리(Trichosanthes kirilowii Maximowicz) 또는 노랑하늘타리(Trichosanthes kirilowii Maximowicz var. japonica Kitamura(박과 Cucurbitaceae))의 피층을 벗긴 뿌리이다. 성상은 고르지 않은 담황백색의 원주형으로 지름 3~5cm, 길이 5~10cm, 흔히 세로로 쪼개져 있으며 불규칙한 황갈색의 유관속이 뻗어 있다. 냄새는 없고 맛은 약간 고미이다. 절단면은 담황색이고 약간 섬유성이다. 횡단면을 확대경으로 보면 폭이 넓은 방사 조직과 황색의 반점 또는 작은 구멍(道管)이 있다. 성분은 다량의 전분, 스테로이드(β-D-글루코피라노실-스티그마스트-7-엔-3β-올), 트리테르페노이드(3β,24,25-트리하이드록시큐커빗-5-엔-11one, 큐커비타신 B, D, 23, 24-다이하이드록시큐커비타신 B, D, 시트룰린, β-아미노뷰티르산, 트리초산틱산(trichosantic acid) 등이며, 해열, 거당, 배농 소독제, 황달, 당뇨병, 중풍 또는 살포약으로서 유아의 피부병에 쓰인다. 또한 중국에서는 피임약으로도 쓰인다. 하늘타리는 한국, 중국, 일본, 몽고, 대만 등에서 자생하는 외과의 다년생 덩굴성 초본으로 길이는 5m이고 단풍잎처럼 5~7개로 갈라지는 데 각 열편에 톱니가 있다. 잎의 표면에는 짧은 털이 많이 돋아 있다. 7~8월에 꽃이 피는데, 꽃은 흰색이며 5개의 꽃잎이 달리고 다시 각 꽃잎 열편이 실 같이 가늘게 갈라진다. 꽃에는 3개의 수술이 있다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).
이러한 천화분을 화장품으로 응용한 예가 국내 특허출원 98-49138호에 개시되어 있다. 그러나, 이 출원에 개시된 추출물은 천화분 외에 백렴, 백지, 고본,천궁, 살구씨, 황금, 당귀, 녹두, 삼백초, 인삼잎, 부자, 두충, 방풍, 표고버섯 등을 적당한 배율로 배합하여 1,3부틸렌글리콜에 의해 추출한 것으로서, 이미 녹두나 살구씨 같은 미백효과 등의 기능이 잘 알려진 원료가 같이 포함되어 있어, 천화분만을 따로 추출한 추출물의 효능에 대해서는 개시되어 있지 않다.
이에 본 발명자들은 여러 가지 한방 원료 중 천화분을 선택하여 이것의 화장품 원료로서의 효능을 확인하고 그 사용방법을 개발함으로써 다양한 화장품의 원료의 선택범위를 높이고, 또한 이 원료를 사용하여 좀더 자극이 없으면서도 소정의 기능성 효과를 나타내는 화장품을 제조할 수 있는 방법을 제공하고자 한다.
또한, 천화분의 추출물 제조시 특정 추출용매 선택시 목적 효능이 더욱 크게 나타난 점으로부터 화장품 원료로서의 이들 물질을 이용하여 화장료를 제조하는 방법 및 그 화장료를 제공하고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 천화분 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 천화분 추출용매로서 정제수, 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 추출용매로서 에탄올 40∼95% 용액을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 냉침 또는 가열방법으로 추출을 수행하는 것을 특징으로 한다.
나아가, 본 발명은 추출 후 여과, 농축 또는 동결건조를 더 수행하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 화장료는 천화분 추출물을 0.01∼30중량% 함유함을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중 하나인 것을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 피부 미백용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 피부 자극완화용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 피부 면역증강용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.
[실시예 1]천화분 추출물 제조
세절하여 음건한 천화분을 뜨거운(hot) 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이0.01 내지 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 천화분 추출물을 제조하였다.
[실시예 2]멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 이용한 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)를 이용하여 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해정도로 미백효과를 평가한 것이다.
본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 사람에서 유래한 세포주이며 정상적인 조건에서는 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하지 않다가 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 처리하면 멜라닌을 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 α-MSH와 천화분 추출물을 처리하여 멜라닌 흑색색소의 합성 정도를 비교, 평가하였다. 본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 KCLB(Korea Cell Line Bank, 기탁번호:80004)로부터 분양받아 사용하였다.
멜라노싸이트 자극 호르몬은 멜라노싸이트의 세포막 수용체와 결합하여 세포내로 멜라닌 합성 신호를 전달하는 싸이토카인으로 α-타입과 β-타입으로 나누어지는데, β-타입은 동물개체간 특이성이 높아 사람과 마우스 등 동물 개체간 교차반응이 일어나지 않고, α-타입은 모든 동물개체간 동일한 구조를 가지고 있어 실험실내 미백효과 평가를 위하여 폭넓게 사용되고 있다.
α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.
A375SM 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 α-MSH(Sigma사) 200nM과 천화분 추출물을 독성을 유발하지 않는 농도로 동시에 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 48시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액{homogenization buffer(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF)} 1㎖을 첨가하여 5분간 와류(vortexing)하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액(cell lysate)에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정하여 합성된 멜라닌을 정량한 다음 시료의 멜라닌 합성 저해율(%)을 측정하였다.
A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해율(%)은 다음 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라노싸이트의 세포막에 결합하는 α-MSH를 저해하여 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
저해율(%) = [(A-B)/A]×100
A : α-MSH만 첨가한 웰의 멜라닌 양
B : 시료와 α-MSH를 동시에 첨가한 웰의 멜라닌 양
α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 천화분 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 1).
이와 같은 결과로 볼 때 본 발명의 천화분 추출물의 경우 기존의 미백제가 단순히 티로시나제만을 저해하는 것과는 달리 멜라노싸이트 자극 호르몬인 α-MSH가 멜라노싸이트에 결합하는 것을 저해하여 멜라닌 합성을 저해하는 것임을 알 수 있다.
시 료 멜라닌 합성 저해 효과(IC50)
코지산 0
알부틴 0
천화분 추출물 0.01%
상백피 추출물 0
유용성 감초추출물 0
[실시예 3]머쉬룸 티로시나제를 이용한 티로시나제 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.
티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S.H., J. Biochem., 24:161-168, 1966)을 응용해 미백 효과를 판정하였다.
상백피 추출물, 천화분 추출물, 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물을 시료로 사용하여 티로시나제 활성 억제효과를 조사하였다.
각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50mM 인산완충액(pH6.5) 150㎕, 1.5mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/㎖, Sigma社 ) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 2에 의하여 계산하였으며, IC50값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
저해율(%) = {[(D-C)-(B-A)]/(D-C)}×100
A : 시료를 넣은 웰의 반응전 흡광도
B : 시료를 넣은 웰의 반응후 흡광도
C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응전 흡광도
D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응후 흡광도
티로시나제 활성 억제 효과를 시험한 결과 천화분 추출물의 IC50값은 0.02%로나타나 티로시나제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 2).
시 료 머쉬룸 티로시나제 저해효과(IC50)
코지산 0.037%
알부틴 0.4%
천화분 추출물 0.02%
상백피 추출물 10%
유용성 감초추출물 0.02%
[실시예 4]방선균을 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 방선균에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.
방선균(Streptomyces bikiniensis NRRL B1049)은 생명과학연구원(KCTC)으로부터 분양(기탁번호:9172)받아 사용하였다.
방선균을 파파비자스(papavizas) VDYA 한천 슬랜트 배지(V-8 juice 200㎖, 포도당 2g, 효모 추출물 2g, CaCO31g, 한천 20g, 증류수 800㎖, pH7.2)에서 2주간 28℃로 배양시켜 포자를 생성시킨 후 멸균수로 포자 현탁액을 만들었다. 0.2%의 효모 추출물을 첨가한 ISP No.7 평판배지에 포자 현탁액을 0.2㎖씩 도포한 후 배지표면에 시료(30㎍/㎖)를 200㎕씩 적신 페이퍼 디스크(paper disc)를 올리고 28℃에서 배양하였다. 48시간 배양한 후 생성된 멜라닌 생성 저해환의 크기를 대표적 멜라닌 생성 저해물질로 알려진 4-하이드록시아니졸을 대조군으로 하여 측정하여 멜라닌 생성 저해여부를 관찰하였다(이충환, 산업미생물학회지, 21:139-143, 1993).
천화분 추출물의 방선균에 대한 멜라닌 생성 저해환은 30㎜로 대조군인 4-하이드록시아니졸이나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴보다 우수한 멜라닌 생성 저해효과를 나타내었다(표 3).
물 질 방선균 저해환 지름(㎜)
4-하이드록시아니졸 24
코지산 0
알부틴 0
하이드로퀴논 25
천화분 추출물 30
상백피 추출물 12
유용성 감초 추출물 16
p-메톡시페놀 28
[실시예 5]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.
B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.
세포내 멜라닌 정량은 Lotan(Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm,10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10%DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 다음 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
저해율(%) = [(A-B)/A]×100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 천화분 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물,상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 4).
시 료 멜라닌 생성 억제효과(IC50)
코지산 0.05%
하이드로퀴논 0.03%
알부틴 0.5%
천화분 추출물 0.01%
상백피 추출물 5%
유용성 감초추출물 0.03%
[실시예 6]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 세포내 티로시나제 효소 합성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트내 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 세포내 티로시나제 효소합성량을 측정하여 판단한 것이다.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 티로시나제라는 효소를 합성하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하고 세포에서 티로시나제를 분리하여 효소 합성량을 측정하므로서 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 비교 평가하였다.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.
B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.
B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하고, 원심분리(3,000rpm,10분)하여 상등액을 회수하였다. 50mM 소듐 포스페이트 버퍼(pH6.5)에 1.5mM L-티로신, 0.06mM L-DOPA, 세포 상등액을 각각 넣고, 37℃에서 30분간 배양한 후 마이크로플레이트 판독기로 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제 효소 합성 억제효과를 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제율(%)은 다음 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC50값은 티로시나제 효소 합성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
저해율(%) = [(A-B)/A]×100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 티로시나제 효소 합성량
B : 시료를 첨가한 웰의 티로시나제 효소 합성량
B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제 효과를 시험한 결과, 천화분 추출물의 IC50값은 0.015%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 매우 우수한 효과를 나타내었다(표 5). 이와 같은 결과를 볼 때 본 발명의 천화분 추출물의 경우는 기존의 미백제가 단순히 티로시나제 효소의 활성만을 저해하는 것과는 달리 티로시나제 효소의 합성을 저해하여 미백효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
시 료 티로시나제 효소 합성 억제효과(IC50)
코지산 0
알부틴 0
천화분 추출물 0.015%
상백피 추출물 0
유용성 감초추출물 0
[실시예 7]염증유발관련 효소 활성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 항염증효과를 확인하기 위해 염증유발관련 효소인 히아루로니디아제의 효소 활성을 측정하여 판단한 것이다.
히아루로니디아제(Hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 기능을 가지고 있다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammation, 4:437-438, 1984)을 응용해 항염증효과를 판정하였다.
컴프리, 시소, 삼백초, 유용성 감초 추출물, 천화분 추출물을 시료로 사용하여 히아루로니디아제 활성 억제효과를 조사하였다.
각 시료들의 히아루로니디아제 대한 저해활성은 다음과 같이 행하였다.
시료 100㎕와 히아루로니디아제 용액(type IV-S, Sigma사, 400U/㎖) 50㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨후, 효소활성화용액(Compound 48/80 CaCl2·2H2O,Sigma사, 0.1㎎/㎖)을 100㎕ 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시킨다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4㎎/㎖)을 250㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100㎕를 넣어 반응을 종결시킨다. 포타슘보레이트 용액을 100㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 p-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시켜 발색시킨다. 585㎚에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제에 대한 저해율을 측정하였다.
히아루로니디아제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC50값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
저해율(%) = [(A-B)/A] ×100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성
B : 시료를 첨가한 웰의 효소활성
히아루로니디아제 효소 활성 억제 효과를 시험한 결과 천화분 추출물의 IC50값은 0.05%로 나타나 히아루로니디아제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 항염증제인 유용성 감초 추출물, 컴프리 추출물, 삼백초 추출물, 시소 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 6).
시 료 히아루로니디아제 활성 억제효과(IC50)
컴프리 추출물 0.22%
시소 추출물 0.58%
유용성 감초 추출물 0.08%
삼백초 추출물 0.3%
천화분 추출물 0.05%
[실시예 8]피부 면역증강작용 평가 실험
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 피부 면역증강작용을 평가하고자 마우스 복강 내에서 활성화된 마크로파아지에 의해 생성되는 수퍼옥사이드 음이온의 분비정도를 정량하여 평가하였다. 면역증강작용 실험은 다음과 같이 실시하였다.
마크로파아지는 인체 면역을 담당하는 세포중의 하나로 외부 물질에 의해 자극을 받으면 수퍼옥사이드 음이온을 분비하여 외부 물질을 용해시키거나 세포 외부로 방출시켜 생체를 보호하게 된다. 본 면역증강작용 평가실험에는 ICR계 마우스(9주령, 수컷)를 사용하였다. 마우스의 복강으로부터 마크로파아지 세포를 회수하여 37℃, 5% CO2배양기에서 48시간 배양하면서 면역증강작용이 우수한 인터페론과 리포폴리사카리드(lipopolysaccharides:LPS)를 대조군으로 하여 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 첨가한 후 마크로파아지 세포의 분비물 중의 수퍼옥사이드 음이온인 이산화질소 음이온에 대한 양을 가시광선 흡수 스펙트럼으로 540㎚에서 정량하였다. 그 결과 마크로파아지 세포 배양중 천화분 추출물을 첨가했을 때 인터페론을 첨가한 경우보다 2배, LPS를 첨가한 경우보다 4배 정도 높은 이산화질소 음이온을 분비하는 것으로 나타나는 것으로 보아 면역증강작용이 매우 우수함을 알 수 있었다.
[실시예 9]세포배양기술을 이용한 자극완화 효과 평가
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물의 자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 배양 기술을 이용하여 피부자극을 유발하는 물질인 소듐라우릴썰페이트(Sodium Lauryl Sulfate:SLS)에 의한 세포 사멸을 저해시키는 정도로 자극완화 효과를 평가한 것이다.
SLS는 화장품 기재의 피부 자극 평가의 기준이 되는 물질로 세포막에 결합되어 세포대사억제와 세포막을 파괴하여 피부 자극을 유발시키는 물질이다.
본 실시예는 사람 섬유아세포에 SLS와 천화분 추출물을 동시에 첨가하였을 때 SLS에 의한 세포 사멸을 감소시키는 효과를 평가한 것이다.
본 실시예에 사용된 Hs68 섬유아세포는 사람의 피부 진피세포로 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호:1635)에서 분양받아 사용하였다.
세포배양기술을 이용한 자극완화 평가 실험은 다음과 같이 행하였다.
사람 유래의 섬유아세포를 96 웰 플레이트에 각 웰당 1×105농도로 분주하고, 24시간 동안 배양한 후 0.01% SLS 단독, 0.01% SLS와 천화분 추출물(0.01%)을 동시에 처리하고 24시간 동안 추가배양하였다. 배양후 MTT(Sigma사)시약을 첨가하고 4시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고 1N NaOH/이소프로판올용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 마이크로플레이트 판독기로 565㎚에서 흡광도를 측정하여 천화분 추출물이 SLS에 의한 세포사멸을 저해하는 효과를 측정하였다.
시험결과 천화분 추출물은 SLS에 의해서 유발되는 세포 사멸을 억제시키므로써 화장료 기재와 함께 처방하였을 때 화장료 기재로 인하여 일어날 수 있는 피부 자극을 감소시키는 자극완화 물질임이 밝혀졌다(표 7).
시 료 섬유아세포 생존율(%)
0.01% SLS 25
0.01% SLS + 0.01% 천화분 추출물 57
[실시예 10 내지 12 및 비교예 1]
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.
비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 10 내지 12, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽부위에는 실시예 10 내지 12에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운 색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 9는 실시예 12에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 1로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다.
표 9에 나타난 바와 같이 천화분 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.
원 료 실 시 예 비교예1
10 11 12
가 스테아릴알콜 8 8 8 8
스테아린산 2 2 2 2
스테아린산콜레스테롤 2 2 2 2
스쿠알란 4 4 4 4
2-옥틸도데실알콜 6 6 6 6
폴리옥시에틸렌(25몰 부가) 알콜에스테르 3 3 3 3
글리세릴모노스테아린산아스테르 2 2 2 2
나 천화분 추출물 10 1 0.1 -
프로필렌글리콜 5 5 5 5
정제수 적량 적량 적량 적량
주) 단위:중량 %
사용 제품 실시예 12 비교예 1
실험 인원 번호 오른쪽 피부색 왼쪽 피부색
1 2 3
2 2 3
3 2.5 3.5
4 2 3
5 1.5 2.5
6 2 3
7 2.5 3
8 3 4
9 2 3
10 2 3
11 2 3
12 1.5 3
13 2 3.5
14 1.5 2.5
15 2.5 3.5
16 2 3
17 2.5 3
18 3 4
19 2.5 3
20 2.5 3
[실시예 13]
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 함유한 화장료의 자극 완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가한 것이다.
본 평가는 실시예 9에서 얻어진 결과를 인체에 직접 적용하여 얻어진 평가의 결과이다. 일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS와 실시예 10 내지 12에서 제조된 제품을 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첨포하여 자극 유발 지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.
20-50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박부위에 FINN CHAMBER (FINLAND)를 이용하여 각각의 제품을 0.2㎎씩 첩포하고, 24시간 후 급성자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.
시험 결과 천화분 추출물을 함유하는 제품을 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발적을 일으키지 않았다.
이 평가의 결과는 천화분 추출물이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있는 유의한 효과가 있음을 나타낸다.
이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 앞에서와 같이 미백효과, 자극완화효과, 면역증강효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.
[실시예 14]실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 함유한 화장수의 제조
95%에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합, 용해하였다. 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.
[실시예 15]실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 함유한 유액의 제조
세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.
[실시예 16]실시예 1에서 수득한 천화분 추출물을 함유한 미용액의 제조
95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 천화분 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 천화분 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌의 생성을 막아주는 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)의 세포막 결합저해효과, 티로시나제 활성억제효과, 티로시나제 합성억제효과, 멜라닌 합성억제효과 등의 미백효과와 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 감소시키는 피부세포사멸 억제효과, 염증유발관련효소 활성 억제효과 등의 피부자극 완화효과와 면역증강작용에 우수한 효과를 나타내었다. 따라서, 이러한 천화분 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩 등의 화장료 조성물은 피부 미백효과, 자극완화효과 및 면역증강작용이 있음을 알 수 있다.

Claims (7)

  1. 천화분 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 추출용매로서 정제수, 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 추출용매로서 에탄올 40∼95% 용액을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 추출은 냉침 또는 가열방법으로 수행하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 추출 후 여과, 농축 또는 동결건조를 수행하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 천화분 추출물을 0.01∼30중량% 함유함을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 천화분 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR100433055B1 (ko) * 2001-08-21 2004-05-28 주식회사 태평양 하눌타리의 천연 추출물을 함유하는 피부 탄력 증진용 또는 피부 보습 증진용 화장료 조성물
KR20060093164A (ko) * 2005-02-21 2006-08-24 주식회사 엘지생활건강 주름완화 화장료 조성물
WO2011101498A1 (es) * 2010-02-17 2011-08-25 Garcia Otero Maria Del Carmen Procedimiento de elaboración de un producto cosmético por congelación
CN111317691A (zh) * 2020-02-12 2020-06-23 南京中医药大学 一种具有美白效果的栝楼果瓤总黄色素及其制备方法与应用

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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