KR100257590B1 - 네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도 - Google Patents

네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR100257590B1
KR100257590B1 KR1019930002503A KR930002503A KR100257590B1 KR 100257590 B1 KR100257590 B1 KR 100257590B1 KR 1019930002503 A KR1019930002503 A KR 1019930002503A KR 930002503 A KR930002503 A KR 930002503A KR 100257590 B1 KR100257590 B1 KR 100257590B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
neotrehalose
weight
amylase
starch
parts
Prior art date
Application number
KR1019930002503A
Other languages
English (en)
Other versions
KR930018035A (ko
Inventor
다까시 시부야
히로또 챠엔
슈우조오 사까이
도시오 미야께
Original Assignee
도시오 미야께
가부시키가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 도시오 미야께, 가부시키가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조 filed Critical 도시오 미야께
Publication of KR930018035A publication Critical patent/KR930018035A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100257590B1 publication Critical patent/KR100257590B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/832—Bacillus
    • Y10S435/839—Bacillus subtilis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • Confectionery (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Grain Derivatives (AREA)
  • Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Non-Alcoholic Beverages (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 네오트레할로오스의 새로운 제조 방법과 그 용도에 관한 것이다.
즉, 본 발명의 제조 방법은 전분질에 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, 이것을 회수함을 특징으로 하고 있다.
이 제조 방법에서 제조한 네오트레할로오스는 화학적으로 안정한 외에 감미성, 에너지 부여성, 삼투압 조절성, 부형성, 광택부여성, 보습성, 점성, 기타 당의 석출 방지성, 비발효성등의 여러 가지 특성을 가지고 있다. 이러한 여러 가지 특성으로 인하여 네오트레할로오스를 여러 가지 조성물의 제조에 유리하게 이용할 수 있다.

Description

네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도
제1도는 효소 반응액의 고속 액체 크로마토그래피에 의한 크로마토그램.
제2도는 효소 반응색의 가스 크로마토그래피에 의한 크로마토그램.
본 발명은 네오트레할로오스(neotrehalose)의 제조 방법 및 그 용도에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 전분질이 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, 이것을 회수함을 특징으로 하는 네오트레할로오스의 제조 방법과 이 네오트레할로오스를 함유시킨 음식물, 의약품 등의 조성물에 관한 것이다.
네오트레할로오스는 식 O-α-글로코피라노실 β-D-글로코피라노시드 또는 O-β-글루코피라노실 α-D-글루코피라노시드로 나타내어지는 2 당류로서 옛날부터 알려져 있다. 이 당질은 풍부한 단맛을 가지며 물에 쉽게 용해하고 비환원성으로서 그 자체가 안정하여 각종 음료, 가공 식품, 기호물 등에 유리하게 이용할 수 있다고 기대되고 있다.
네오트레할로오스를 제조하는 방법은 문헌 [예컨대, W.N. Haorth, Journal of Chemical Society, pp.2847-2850(1931) ; V.E.S. Sharp, Journal of Chemical Society, pp.285-288(1951)]에 기재되어 있는 바와 같이 여러 가지 화학적 합성 방법이 알려져 있기는 하지만, 그 수율은 극히 낮고 안전성의 점에서도 화학 합성품이기 때문에 이용하기까지에는 해결해야할 많은 과제를 가지고 있다.
한편, 보다 안정성이 높은 천연물로 부터의 제조 방법 또는 생화학적 수단에 의한 제조 방법이 제안되어 있다.
예를 들자면 일본국의 松田은 日本農芸化學會誌, 제 30 권, 제 119 면 내지 제 123 면(1959년)에서 네오트레할로오스가 누룩 추출물중에 이소말토오스, 코지비오스(kojibiose) 등과 더불어 소량 함유되어 있음을 보고하였다. 이 보고에 의하면 네오트레할로오스 제조는 누룩 추출물중에 함유된 비발효성 당류를 탄소를 사용하는 카아본 칼럼 크로마토그래피로 처리하여 2 당류 함유 획분(劃分)을 회수하고, 이 2 당류를 페닐히드라진으로 처리하여 수득한 침전물을 여과하고 분리한 다음 여액중의 당을 아세틸화하여 2 당류의 옥타아세테이트 결정을 얻은 후 이 결정을 탈아세틸화 함으로써 제조하고 있다. 또한 Z.L.Nikolov 등은 문헌 [Biotechnology and Bioengineering, 제 34 권, 제 694 면 ~ 제 704 면 (1989년)]에서 글루코아밀라아제의 축합작용에 의하여 글루코오스로부터 네오트레할로오스를 0.43w.w%(이하 “w/w%”를 간단히 “%”라 함)의 수율로 얻고 있다.
그리고 일본국 小林 등은 일본국 특허 공개 제 216,492/88 호 공보에서 전분에 시클로덱스트린 합성 효소를 작용시켜 네오트레할로오스를 센토오스와 함께 제조하는 방법을 개시하고 있다.
이 공보에 의하면 전분에 시클로덱스트린 합성 효소를 작용시킨 반응액은 고속 액체 크로마토그래피(HPLC), 분석에서 네오트레할로오스 18.6%와 센토오스 20.0%을 함유하고, 더욱이 이 네오트레할로오스 획분에는 페이퍼 크로마토그래피 분석에서 약 20%의 니게로오스, 코지비오스 및 이소말토오스가 함유되어 있음을 기재하고 있다. 또한 이들은 이 반응액으로부터 네오트레할로오스를 제조하는 방법으로서 이 반응액중에 잔존하는 효소를 가열하여 실활(失活)한 후 글루코아밀라아제와 동시에 효모를 첨가하고 생성하는 글루코오스를 자화(資化)시켜 제거한 다음 효모를 제거하고, 수득한 용액에 수산화 나트륨을 가하여 오토클레이브 처리하고 중화한 후, 칼럼 크로마토그래피 및/또는 용매 침전법으로 처리하는 방법을 제안하고 있다.
이들 두가지 방법은 정제공정이 극히 번잡스럽고 그 수율도 낮으므로 어느 방법이라도 아직 공업적으로 실시되지 않고 있다. 따라서 본 발명자등은 일본국 특허 출원 제 307,054/90 호에서 락토네오트레할로오스 [O-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-O-β-D-글루코피라노실 α-D-글루코피라노시드]에 β-갈락토시다아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, 이것을 회수함을 특징으로 하는 네오트레할로오스의 제조 방법과 그 용도를 개시(開示)하였다. 이 방법에서는 원료인 락토네오트레할로오스에 대하여 네오트레할로오스를 고수율로 제조할 수 있으나 원료 제조에 몇가지 문제가 남아 있었다.
네오트레할로오스의 실용화를 위하여 안전하고 용이하게 고수율로 네오트레할로오스를 제조하는 방법과 그 용도의 확립이 강하게 요망되고 있다.
본 발명자들은 네오트레할로오스의 제조 방법과 그 용도의 확립을 목적으로 하고, 특히 전분질 분해효소에 착안하여 예의 연구를 계속한 결과, 전분질에 α-아밀라아제(EC 3.2.1.1)를 작용시킴으로써 네오트레할로오스가 생성함을 발견하고, 더욱이 수득한 네오트레할로오스를 함유시킨 조성물을 확립하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 전분질이 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고 이것을 회수함을 특징으로 하는 네오트레할로오스의 제조 방법과 이 네오트레할로오스를 함유시킨 음식물, 의약품 등의 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 이용하는 전분질로서는 전분 또는 그 부분 가수 분해물인데 통상 DE(dextrose equivalent) 약 70 이하의 것이 적당하고, 그 예로서는 호화(糊化) 전분, 액화 전분, 가용성 전분, 전분 부분 가수 분해물, 전분 당전이물등을 적절히 사용할 수 있다.
원료인 전분으로서는 감자 전분, 타피오카 전분, 고구마 전분 등의 지하 전분, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 등의 지상 전분을 적절히 사용할 수 있다.
본 발명에 적절히 사용되는 전분 가수 분해물로서는 아밀로오스, 덱스트린 등의 고분자물 뿐만 아니라, 말토오스, 말토트리오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스, 말토헵타오스, 말토옥타오스 등으로부터 선택되는 한가지 또는 두가지 이상의 말토올리고당이 있다.
본 발명에 사용되는 α-아밀라아제로서는 전분질에 작용시켰을 때 네오트레할로오스를 생성할 수 있는 것이면 좋은데, 예를 들자면 바실루스 속(Bacillus 屬), 아스페르길루스속(Aspergillus 屬) 등의 미생물 유래의 효소를 적절히 사용할 수 있다.
이들 α-아말리아제중에서 당화형 α-아말리아제가 네오트레할로오스의 생성에 적합함을 발견하였고, 예컨대 바실루스 서브틸리스 종(Bacillus subtilis 種)의 당화형 α-아밀라아제가 네오트레할로오스의 생성율이 높고 공업적으로 극히 유리하다는 것이 확인되었다. 당화형 α-아밀라아제는 일본국의 二國二郞편저의 「전분 핸드북」제 102 면 내지 제 103 면(1977년, 朝倉書店 발행)에 기재되어 있는 바와 같이 α-아밀라아제의 전분에 대한 작용형식에 있어서 덱스트린화력(dextrinogenic power)에 비하여 당화력이 현저하게 강한 α-아밀라아제이다.
효소 반응 방법은 네오트레할로오스를 생성할 수 있는 것이면 본 발명에서 이용할 수 있는데, 예를 들자면 바실루스 서브틸리스 유래의 당화형 α-아밀라아제를 사용할 경우에는 전분 부분 가수 분해물 등의 전분질을 함유하는 수용액에 당화형 α-아밀라아제 효소를 전분질 고형분 1g당 ~ 100 단위(당화력) 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키면 좋다. 이 경우에 있어서 전분질의 농도 1 ~ 8w/w%(이하, 본 명세서에서는 특히 명시하지 않는 한 “w/w%”를 “%”로 나타냄), 바람직하게는 20 ~ 70%, 온도 20 ~ 80℃, pH 3 ~ 9, 반응시간 1 ~ 100 시간으로부터 선택되는 조건에서 효소 반응시키면 좋다.
필요에 따라 α-아밀라아제 효소를 고정화(固定化)하여 적절히 반복해서 사용할 수도 있다. 그리고 이와 같이 하여 제조한 네오트레할로오스 함유 반응액에 글루코아밀라아제 또는 β-아밀라아제를 작용시킴으로써 네오트레할로오스, α-글리코실 네오트레할로오스등을 축적시킬 수도 있다.
위에서 설명한 바와 같은 효소 반응에 의하여 생성되는 네오트레할로오스 함유용액은 통상 고형물당 네오트레할로오스를 5 ~ 15% 정도 함유하고 있는데, 이것을 여과, 정제하여 액상으로 사용할 수도 있고 농축하여 시럽상으로 사용할 수도 있으며, 더욱이 건조하여 고상으로 사용할 수도 있다. 일반적으로는 네오트레할로오스의 특징을 개선하기 위하여 네오트레할로오스 생성용액을 다시 분리, 정제하여 네오트레할로오스 고함유물로 하여 사용한다. 본 발명에서 유리하게 이용할 수 있는 여과, 정제 방법의 예로서는 효모발효법, 막여과법, 분별 침전법, 결정화법, 칼럼 크로마토그래피 등이 있는데, 이들 방법에 의하여 협잡당류를 분리 제거할 수 있다. 특히 일본국 특허 공개 제 23,799/83 호 공보와 제 72,598/83 호 공보등에 개시되어 있는 염형 강산성 양이온 교환 수지를 사용하는 칼럼 크로마토그래피에 의하여 네오트레할로오스 용액중의 헙잡당류를 제거하여 네오트레할로오스 고함유 획분을 채취하는 방법을 유리하게 실시할 수 있다.
이 경우에 있어서 고정상 방식, 이동상 방식, 의사(擬似) 이동상 방식중 어느 방식을 이용하여도 좋다. 그리고 이와 같이 하여 수득한 네오트레할로오스 고함유액을 농축하여 고농도액으로 한 다음 일본국 특허 출원 제 307,054/90 호에 개시되어 있는 방법에 따라 결정 네오트레할로오스를 제조하는 것도 유리하게 실시할 수도 있다.
본 발명의 네오트레할로오스는 비환원성의 2 당류로서 극히 안정하고 그 취급이 용이하며 양질이고 단맛이 풍부하다. 또한 본 발명자 등의 일본국 특허 출원 제 268,683/91 호에 기재된 바와 같이 네오트레할로오스는 경구적 또는 비경구적으로 투여할 수 있고 독성과 부작용의 우려도 없이 대사 이용이 좋고 생체에 대한 에너지 보급에 유리하게 이용할 수 있다. 또한 네오트레할로오스는 충치유발균 등에 의하여 쉽사리 발효되지 않기 때문에 충치를 전혀 유발하지 않은 감미료로서도 이용할 수 있다. 그리고 안정한 감미료이기 때문에 풀룰란(pullulan), 히드록시에틸 전분등의 결합제와 병용하여 정제(錠劑)의 당의제로서 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다. 더욱이 네오트레할로오스는 화학적으로 안정하다는 것외에도 침투압 조절성, 부형성, 광택 부여성, 보습성, 점성, 기타 당의 결정석출 방지성, 비발효성등의 성질을 가지고 있다.
이들 여러 가지 성질은 네오트레할로오스를 예컨대 감미료, 맛 개선제, 품질 개량제, 안정제 등으로 하여 음식물, 기호물, 사료, 화장품, 의약품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 네오트레할로오스를 적당량 함유시켜 네오트레할로오스의 특징을 발휘하도록 하는 것이면 좋은데, 일반적으로는 그 효과를 높이기 위하여 네오트레할로오스를 고형물당 5% 이상, 바람직하게는 10% 이상 함유시키는 것이 적절하다.
본 발명의 조성물은 네오트레할로오스 단독이어도 좋으나, 통상 네오트레할로오스와 더불어 목적에 따라 기타 물질, 예컨대 단백질, 아미노산, 지질, 비타민, 미네랄 등의 영양물질, 또는 항균물질, 효소, 호르몬, 사이토카인 등의 약효물질 등으로부터 선택되는 한가지 또는 두가지 이상을 함유시켜 제조한다.
이 조성물을 제조함에 있어서 필요에 따라 기타 적당한 물질, 예를 들자면 맛부여제, 착색제, 착향료, 안정제, 증량제, 부형제 등의 한가지 또는 두가지 이상의 조성물에 첨가하여 사용할 수도 있는데, 제조된 조성물을 목적에 따라 적당한 형상으로 하여도 좋다. 이와 같이하여 제조한 조성물을 경구투여하거나 비경구투여할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 조성물에 네오트레할로오스를 함유시키는 방법은 그 제품이 완성되기까지의 공정에서 함유시켜도 좋은데, 예를 들자면 혼화, 반죽, 용해, 용융, 침지, 산포, 도포, 피복, 분무, 주입, 결정화, 고화 등의 공지의 방법을 적절히 선택한다.
이하 본 발명의 α-아밀라아제에 의한 네오트레할로오스의 제조 방법을 실험에 따라 설명한다.
[실험 1]
[네오트레할로오스 생성 효소의 검색]
본 실험에 사용한 효소로서 α-아밀라아제(EC 3.2.1.1, 일본국 上田化學 공업 주식회사제의 당화형 α-아밀라아제), β-아밀라아제(EC 3.2.1.2, 일본국의 Nagase 生化學 공업 주식회사제의 상품명 “#1500”), 글루코아밀라아제(EC 3.2.1.3, 일본국의 Nagase 生化學 공업 주식회사제의 상품명 “GLUCOZYME”), α-글루코시다아제(EC. 3.2.1.20, 일본국의 生化學 공업 주식회사제, 벼에서 유래한 시료), 이소아밀라아제(EC 3.2.1.68, 일본국의 주식회사 林原 생물화학 연구소제)를 사용하였다. 이들 효소를 말토오스(일본국의 주식회사 林原 생물화학 연구소제, 상품명 “MALTOSE HHH”)이 33% 수용액(pH 6.0)에 말토오스 1g당 1000 단위 가하고 55℃에서 24시간 효소 반응시켰다.
100℃에서 10분간 열처리하여 효소반응을 정지시켰다. 각 효소 반응액을 20mM 아세트산 완충액(Ph 4.5)으로 농도 약 5%(고형분 기준)로 희석하고 이 액에 글루코아밀라아제를 말토오스 1g당 20 단위 가하여 40℃에서 24시간 효소 반응시켰다. 이 글루코아밀라아제 처리액중의 네오트레할로오스의 함유의 유무를 칼럼으로서 PA-03(일본국의 YMC 사제)를 사용하고 용리액으로서 70%(v/v) 아세토니트릴 수용액을 사용한 고속 액체 크로마토그래피로 조사하였다. 그 결과는 표 1에 나와 있다.
[표 1]
(주) - : 네오트레할로오스를 생성하지 않음.
+ : 네오트레할로오스를 원료에 대하여 5% 이하 생성함.
++ : 네오트레할로오스를 원료에 대하여 5% 이상 생성함.
표 1에 나와 있는 바와 같이 글루코아밀라아제, α-글루코시다아제, α-아밀라아제가 네오트레할로오스를 생성하였다. 글루코아밀라아제와 α-글루코시다아제는 종래의 보고에서 알 수 있는 바와 같이 네오트레할로오스를 약간 생성하였다. α-아밀라아제는 네오트레할로오스를 대량으로 생성하였다. 이러한 사실은 지금까지 알려지지 아니한 것으로서 전혀 새로운 발견이다.
위의 사실에 근거하여 본 발명자등은 네오트레할로오스를 대량으로 생성하는 α-아밀라아제의 검색을 하였다.
[실험 2]
[네오트레할로오스를 생성하는 α-아밀라아제의 검색]
실험에 사용한 α-아밀라아제로서 당화형 α-아밀라아제(일본국의 上田화학 공업 주식회사제), 말토테트라오스 생성효소(일본국의 주식회사 林原 제), 타카(Taka) 아밀라아제(일본국의 新日本 화학 공업 주식회사제, 상품명 “SUMIZYME L”), 고온 액화영 α-아밀라아제(일본국의 Nagase 生化學 공업 주식회사제의 상품명 “N대-SPITASE” 및 “SPITASE HS”)를 사용하였다.
실험 1과 마찬가지 방법으로 네오트레할로오스 생성의 유무를 조사하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.
[표 2]
(주) - : 네오트레할로오스를 생성하지 않음.
± : 네오트레할로오스를 흔적량 정도 생성함.
+ : 네오트레할로오스를 원료에 대하여 5% 이하 생성함.
++ : 네오트레할로오스를 원료에 대하여 5% 이상 생성함.
표 2에 나타낸 바와 같이 α-아밀라아제는 네오트레할로오스의 생성량에 차이는 있으나, 이들 α-아밀라아제중에서 당화형 α-아밀라아제가 네오트레할로오스를 현저하게 다량으로 생성하였다.
[실험 3]
[α-아밀라아제에 의한 네오트레할로오스의 제조]
말토오스(일본국의 주식회사 林原 생물화학 연구소제의 상품명 “MALTOSE H”) 50 중량부를 물 50 중량부에 가열 용해하고, 이 용액을 60℃, pH 5.2로 조정한 후 바실루스 서브틸리스 유래의 당화형 α-아밀라아제(일본국의 生化學 공업 주식회사제의 결정 효소)를 말토오스 1g당 100 단위 가하고 20 시간 효소반응시킨 다음, 100℃에서 10분간 가열하여 잔존 효소를 비활성화하였다. 이 용액을 Ph4.5 및 55℃로 조정하고 글루코아밀라아제(일본국의 Nagase 生化學 공업 주식회사제의 상품명 “GLUCOZYME”)를 고형물당 20 단위 가하고 16 시간 효소반응시킨 다음 100℃에서 15분간 가열하여 잔존 효소를 실활하였다. 이 용액을 실험 1의 경우와 마찬가지로 고속 액체 네오트레할로오스를 하여 그 크로마토그램을 제1도에 나타내었다. 제1도에서 종축은 RI(굴절율 : Refractive Index)를 나타내고, 횡축은 시간을 나타낸다.
이 용액에는 네오트레할로오스를 고형물당 약 12% 함유하고 있었다.
이 용액을 활성탄으로 탈색하고 이온 교환 수지(H+형 및 OH형)로 탈염하여 정제해서 농도 약 40%되게 농축한 다음, 이온 교환수지를 사용한 칼럼 크로마토그래피를 하여 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하였다. 분획용 수지로는 염형 강산성 양이온 교환 수지 [일본국의 Organo 주식회사제, 상품명 Amberlite XT-1016(Na+형)]를 사용하여 내경 5.4cm 인 쟈케트 달린 스테인레스제 칼럼에 물에 현탁하여 충전하였다. 이 경우에 있어서 수지층의 길이 5m인 칼럼 4개를 연속으로 수지층 전체 길이를 약 20m 되게 하였다. 칼럼내의 온도를 55℃로 유지하면서 농도 약 40%인 원료 당용액을 수지당 5v/v% 가한 다음 55℃의 온수를 SV(space velocity) 0.3의 유속으로 공급하여 분획함으로써 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하였다. 수득한 네오트레할로오스 고함유액(고형물당 네오트레할로오스를 약 85% 함유)의 일부를 취해 농도 약 75% 되게 농축하고 20℃되게 하룻밤 방치하여 결정을 석출하였다. 이 결정을 위의 네오트레할로오스 고함유액의 약 72% 농축액에 종정(種晶)으로 하여 가하고, 서서히 교반하면서 결정화하였다. 수득한 매스키트(massecuite)를 분리하여 결정을 얻은 다음 여기에 소량의 물을 분무하여 세척함으로써 고순도 결정을 얻고, 다시 이 결정을 물에 용해하여 마찬가지로 처리하여 재결정화하고 분리해서 순도 99.9%인 극히 고순도의 네오트레할로오스 결정을 얻었다.
[실험 4]
[네오트레할로오스의 물리화학적 성질]
실험 3의 방법으로 제조한 네오트레할로오스의 고순도 결정품을 사용하여 물리화학적 성질을 조사하였다. 그 결과, 본 발명자등의 1990년 일본국 특허 출원 제 307,054 호에 나온 네오트레할로오스의 물리화학적 성질과 동일하였다.
이하, 본 발명의 네오트레할로오스의 제조 방법을 실시예 A에서, 그리고 본 발명의 네오트레할로오스를 함유시킨 조성물을 실시예 B에서 설명한다.
[실시예 A-1]
덱스트린(DE 18, 일본국의 松谷화학공업 주식회사 판매, 상품명 “PINE-DEX #4”) 5중량부를 물 5중량부에 가열 용해하고, 이 용액을 pH 5.6 및 60℃로 조정한 후 당화형 α-아밀라아제(일본국 上田 화학공업 주식회사제)를 덱스트린 1g당 100 단위 가하고 20시간 효소반응시킨 다음, 가열하여 잔존 효소를 실활화 하였다. 이 용액을 통상의 방법에 따라 활성탄으로 탈색하고 이온 교환 수지(H+형 및 OH-형)으로 탈염하여 정제하고, 농축하여 농도 약 75%의 시럽을 고형물 수율 약 93%로 얻었다.
이 제품은 고형물당 약 10%의 네오트레할로오스를 함유하고 있고 풍부한 단맛, 적당한 점도, 보습성을 가지고 있기 때문에 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 A-2]
[실시예 A-2 (1) : 효소제조]
바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) IFO 14140(Fukumoto D11) 균주를 아래의 액체 배지에 식균(植菌)하고 온도 27℃에서 3일간 배양하였다.
배양액(broth)을 원심 분리하여 그 상청액에 황산 암모늄을 가한 다음 하룻밤 냉실에서 방치한 후 원심 분리하여 침전물을 회수하였다. 이침전물에 0.1M 인산 완충액(pH 7.0)을 소량 가하고 효소를 용해시켰다.
이 요액을 효소시료로 사용하였다. 수득한 효소시료의 효소활성은 340U/ml 이었다.
액체 배지 (pH 7.0으로 조정)
가용성 전분 3.0%
인산 2 암모늄 1.0%
CSL 1.0%
효모엑스 0.1%
폴리펩톤 0.1%
본 명세서를 통하여 활성(당화력)은 1% 가용성 전분(20mM 아세트산 완충액 : pH 5.5)를 5ml에 효소액 0.2ml을 가하고 40℃에서 10분간 효소 반응시켜 생성된 환원당의 양을 소모지-넬슨(Somogyi-Nelson)법으로 측정하는 조건에 따라 구하였다.
활성 1 단위는 40℃에서 1분간에 1μmol의 글루코오스에 상당하는 환원력을 유리하는 효소량으로 하였다.
[실시예 A-2 (2) : 효소반응]
말토오스(일본국의 주식회사 林原 생물화학 연구소제 상품명 “MALTOSE H”) 50 중량부에 물 50중량부를 가하고 가열 용해하였다. 수득한 용액에 실시예 A-2-(1)에서 제조한 효소시료를 말토오스 1g당 50 단위 가하고 pH 5.5 및 55℃에서 24 시간 효소 반응시켰다. 반응액이 들어 있는 용기를 끓는 물속에 10 분간 넣어 유지함으로써 효소 반응을 정지시켰다. 이 효소반응액을 물로 농도 약 5% 되게 희석하고 글루코아밀라아제를 말토오스 1g당 20 단위 첨가한 다음 pH 4.5 및 40℃에서 24 시간 효소 반응시켰다. 이 글루코아밀라아제 처리액을 가스 크로마토그래피로 분석하여 제2도에 있는 가스 크로마토그래피와 같은 결과를 얻었다.
제2도에서 종축은 FID(Flame Ionization Detector)로 측정한 검출강도를 나타내고, 횡축은 시간을 나타낸다. 이 반응액에는 네오트레할로오스가 7.2% 생성해 있었다.
이 용액을 통상의 방법에 따라 활성탄으로 탈색하고 이온 교환 수지(H+형 및 OH-형)로 탈염하여 정제한 다음 농도 약 40% 되게 농축한 후 실험 1의 방법에 따라 칼럼 크로마토그래피를 하여 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하였는데, 이 용액에는 네오트레할로오스를 고형물당 52% 함유하고 있었다. 이 획분을 농축하여 농도 약 75%의 시럽을 얻었다.
이 제품은 풍부한 단맛, 적당한 점도, 보습성을 가지므로 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 A-3]
말토오스(일본국의 주식회사 林原 판매의 등록상표 “SUNMALT”) 60 중량부를 물 40 중량부에 가열 용해하고, 이 용액을 60℃ 및 pH 5.2로 조정하고 당화형 α-아밀라아제(일본국의 上田 화학 공업 주식회사제)를 말토오스 1g당 200 단위 가하고 36 시간 효소반응시킨 다음 가열하여 잔존효소를 실활하였다. 수득한 혼합물을 농도 약 20%까지 희석하고 pH 5.0으로 조정한 후 글루코아밀라아제를 말토오스 1g당 10 단위 가하고 40 시간 효소반응시킨 다음 가열하여 잔존효소를 실활하였다.
이 용액을 통상의 방법에 따라 활성탄으로 탈색하고 이온교환 수지 (H+형 및 OH-형)로 탈염하여 정제한 다음 농도 약 60% 되게 농축하였다. 분획용 수지로서 염형 강산성 양이온 교환 수지(일본국의 Organo 주식회사 판매, 상품명 “CG6000”, Na+형)를 사용한 이외에는 실험 1의 방법에 따라 칼럼 크로마토그래피를 하여 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하였다. 이 획분을 농도 약 76%까지 농축한 후 결정화 장치에 넣고 종정(種晶)을 약 2% 가하여 서서히 냉각함으로써 결정석출을 약 45%의 매스키트를 얻었다. 이 매스키트를 건조탑위의 노즐로부터 150kg/cm2의 고압으로 분무함과 동시에 85℃의 열풍을 건조탑 상부로부터 하부로 송풍하여 분무탑의 저부에 설치된 이송 금망 콘베이어 위에 포집하고, 콘베이어 아래로부터 45℃의 온풍을 보내면서 금망 콘베이어 위에 포집된 결정 분말을 건조탑 밖으로 서서히 이동시켜 배출하였다. 배출된 결정 분말을 숙성탑에 충전하여 온풍을 보내면서 10시간 숙성시켜 결정화와 건조를 완료하여 기타 당류를 함유한 결정 네오트레할로오스 분말을 얻었다.
이 제품은 실질적으로 흡습성을 나타내지 않고 취급이 용이하므로 감미료, 맛개선제, 품질개량제, 안정제 등으로 하여 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 A-4]
실시예 A-1에서 제조한 고형물당 약 10%의 네오트레할로오스 함유용액을 농도 약 10%까지 희석하고 pH 4.6으로 조정한 후 글루코아밀라아제를 덱스트린 1g당 30단위 가하고 16시간 효소 반응시켰다. 이어서 가열하여 잔존 효소를 실활하고 이 반응 혼합물을 통상의 방법에 따라 활성탄으로 탈색해서 이온 교환 수지(H+형 및 OH-형)로 탈염하여 정제한 다음 농도 약 45%되게 농축하였다. 분획용 수지로서 염형 강산성 양이온 교환 수지(미합중국의 Dow Chemical사 판매, 상품명 “DOWEX 50W-X4”, Ca형)를 사용한 이외는 실험 1의 방법에 따라 칼럼 크로마토그래피를 하여 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하였다. 이 고함유액은 고형물당 약 85%의 네오트레할로오스를 함유하고 있었다. 이 용액을 농도 약 85%로 농축하고 결정화 장치에 넣어 20℃에서 4일간 방치하여 결정을 석출시켜 고화한 다음 절삭형 분쇄기로 분쇄하고 건조하여 기타 당류를 함유한 결정 네오트레할로오스 분말을 얻었다.
이 제품은 실질적으로 흡습성을 나타내지 않고 취급이 용이하므로 감미료, 맛개선제, 품질 개량제, 안정제 등으로서 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 B-1 : 감미료]
실시예 A-3의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 1중량부에 α-글리코실 스테비오시드(일본국의 東洋精糖 주식회사 판매, 상품명 “α-G Sweet”) 0.05 중량부를 균일히 혼합하여 과립성형기에서 과립상 감미료를 제조하였다.
이 제품은 감미의 질이 우수하고 수크로오스의 약 2배의 감미도를 가지며 감미도당 칼로리는 수크로오스의 약 ½로 저하되어 있다. 이 감미료는 저칼로리 감미료로서 칼로리 섭취를 제한하고 있는 비만자, 당뇨병자등을 위한 저칼로리 음식물등에 대한 감미여부에 적합하다. 또한 이 감미료는 충치유발균에 의한 산의 생성이 적고 불용성 글루칸의 생성도 적기 때문에 충치를 억제하는 음식물등에 대한 감미부여에 적합하다.
[실시예 B-2 : 하아드 캔디]
농도 55%의 수크로오스 용액 100 중량부에 실시예 A-2의 방법으로 제조한 네오트레할로오스 함유 시럽 30 중량부를 가열 혼합한 다음 감압하에 수분 2%이하가 되기까지 가열 농축하고, 여기에 시트르산 1 중량부와 적당량의 레몬 향료 및 착색료를 혼합하여 통상의 방법에 따라 성형하여 표제의 제품을 제조하였다.
이 제품은 씹히는 맛과 정미(呈味)가 양호학 수크로오스의 결정석출도 일어나지 않는 고품질의 하아드 캔디(hard candy)이다.
[실시예 B-3 : 딸기잼]
신선한 딸기 150 중량부, 수크로오스 60 중량부, 말토오스 20 중량부, 실시예 A-2의 방법으로 제조한 네오트레할로오스 함유 시럽 40 중량부, 펙틴 5 중량부 및 시트르산 1 중량부를 용기중에서 충분히 끓인 다음 병에 담아 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 풍미와 색조가 모두 양호한 잼이다.
[실시예 B-4 : 락트산 음료]
탈지유 10 중량부를 80℃에서 20 분간 가열 살균한 후 40℃로 냉각하고, 여기에 스타아터(starter) 0.3 중량부를 가하여 37℃에서 10 시간 발효시켰다. 이어서 이것을 균질화 한 후 실시예 A-4의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 4 중량부, 수크로오스 1 중량부 및 이성화당 시럽 2 중량부를 가하고 70℃로 유지하여 살균하였다. 이것을 냉각하고 적당량의 향료를 가하여 병에 담아 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 풍미와 감미가 산미(酸味)와 잘 조화된 고품질의 락트산 음료이다.
[실시예 B-5 : 가당 연유]
우유 100 중량부에 실시예 A-2의 방법으로 제조한 네오트레할로오스 함유 시럽 3 중량부 및 수크로오스 1 중량부를 용해하고, 플레이트 히이터에서 가열 살균한 다음 농도 약 70%로 농축하여 무균상태에서 병에 담아 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 온화한 감미와 풍미를 가지므로 해서 젖먹이 아이들의 식품, 과일, 커피, 코코아, 홍차등의 조미용으로 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 B-6 : 분말 쥬우스]
분무 건조법으로 제조한 오렌지 과즙 분말 33 중량부에 대하여 실시예 A-3의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 50 중량부, 수크로오스 10 중량부, 모수 시트르산 0.65 중량부, 말산 0.1 중량부, L-아스코르브산 0.1 중량부, 시트르산 나트륨 0.1 중량부, 플풀란 0.5 중량부, 분말 향료 적당량을 가하여 잘 혼합 균질화하고, 분쇄하여 미분말로 하였다. 이것을 유동층 조립기(造粒機)에 공급하여 배풍(排風) 온도 40℃ 및 풍량 매분 150㎥로 하고, 여기에 실시예 A-3의 방법으로 제조한 네오트레할로오스 고함유 용액을 바인더(binder)로 해서 분무하여 30분간 조립(造粒)한 다음 계량, 포장하여 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 과즙 함유율이 약 30%인 분말 쥬우스이다. 그리고 이 제품은 이미(異味)와 이취(異臭)가 없고 흡습하여 고화하지도 않으므로 장기간 안정하였다.
[실시예 B-7 : 초콜렛]
카카오 페이스트 40 중량부, 카카오 버터 10 중량부, 실시예 A-4의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 50 중량부를 혼합하고 리파이너(refiner)를 통과시켜 입자크기를 작게한 후, 콘체(conche)에 넣어 50℃에서 2일 동안 반죽하였다.
그 동안에 레시틴 0.5 중량부를 가하여 충분히 혼화 분산시킨 다음 온도 조절기로 31℃로 조절하고 버터가 고화하기 직전에 모울드(mold)에 부어 넣어 진동기로 탈기한 후 10℃의 냉각 터널속을 20분간 통과시켜 고화시켰다.
이것을 모울드에서 제거하여 포장함으로써 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 흡습성이 없고, 색과 광택성이 모두 양호하며 내부조직도 양호하고 입속에서 잘 녹고 상품의 감미를 가지며 온화한 풍미를 가지고 있다.
[실시예 b-8 : 츄잉 검]
검 베이스 3 중량부를 연화될때까지 가열 용해하고 여기에 수크로오스 4 중량부와 실시예 A-3의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 3 중량부를 가한 다음 다시 적당량의 향료와 착색료를 혼합하고 통상의 방법에 따라 로울러에서 반죽하여 성형, 포장함으로써 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 덱스쳐(texture)와 풍미 모두가 양호한 츄잉 검이다.
[실시예 B-9 : 크리임 필링]
옥수수 전분 100 중량부, 실시예 A-2의 방법으로 제조한 네오트레할로오스 함유 시럽 100 중량부, 말토오스 80 중량부, 수크로오스 20 중량부 및 식염 1 중량부를 충분히 혼합하고 계란 280 중량부를 가하고 교반한 후, 여기에 끓는 우유 100 중량부를 교반, 가열하면서 서서히 가하였다.
옥수수 전분이 완전히 호화(糊化)하여 전체가 반투명하게 되었을 때 가열을 중단하고 이것을 냉각하여 적당량의 바닐라 향료를 가하고 계량, 충전, 포장함으로써 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 평활한 광택을 가지며 온화한 감미를 가져 맛이 만족스럽다.
[실시예 B-10 : “우이로-노-모토” (단맛의 쌀젤리 프리믹스)]
쌀가루 90 중량부에 옥수수 전분 20 중량부, 실시예 A-4의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 120 중량부, 풀룰란 4 중량부를 균일히 혼합하여 표제의 제품을 제조하였다.
여기에 적당량의 물과 녹차 분말을 가하고 혼련하여 용기에 넣고 60분간 증기로 찜질하여 녹차 분말이 함유된 단맛의 쌀젤리(우이로)를 제조하였다.
이 제품은 광택과 씹히는 맛도 양호하고 풍미도 양호하다. 또한 전분의 노화도 억제되어 비교적 장기간 저장할 수 있다.
[실시예 B-11 : 유동식용 고체 제제]
실험 3의 방법으로 제조한 결정 네오트레할로오스 500 중량부, 분말 난황 270 중량부, 탈지분유 209 중량부, 염화나트륨 4.4 중량부, 염화칼륨 1.85 중량부, 황산 마그네슘 4 중량부, 티아민 0.01 중량부, 아스코르브산 나트륨 0.1 중량부, 비타민 E 아세테이트 0.6 중량부 및 니코틴아미드 0.04 중량부로 된 조성물을 제조하여 이 조성물 25g씩을 방습성 라미네이트 포대(laminated bag)에 충전하여 히이트 시일(heat seal)해서 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 포대 하나를 약 150 ~ 300ml의 물에 용해하여 유동식으로 해서 경구투여하거나 비강, 위, 장등에 경관 투여한다.
이 제품은 에너지 보급용 조성물로서 유용하게 이용할 수 있다.
[실시예 B-12 : 수액제(輸液劑)]
실험 3의 방법으로 제조한 결정 네오트레할로오스를 물에 농도 약 10w/v%되게 용해한 다음 통상의 방법에 따라 멤브레인 여과하여 플라스틱제 병에 무균적으로 충전하고 마개로 밀봉하여 표제의 제품을 얻었다.
이 제품은 시일이 경과하여도 변화하지 않고 안정한 수액제로서 정맥내, 복강내등에 투여하기에 적합하다. 이 제품의 농도 10w/v% 용액은 혈액과 등장성이어서 글루코오스의 경우의 2배 농도에서 에너지를 보급할 수 있다.
[실시예 B-13 : 수액제]
실험 3의 방법으로 제조한 결정 네오트레할로오스와 아래 조성의 아미노산 배합물 각각 5w/v% 및 3w/v% 되도록 물에 혼합하여 용해한 다음 실시예 B-12와 마찬가지로 정제하여 플라스틱제 포대에 충전하고 밀봉하여 포제의 제품을 얻었다.
이 제품은 당질과 아미노산의 복합 수액제임에도 불구하고 제품중에 함유된 네오트레할로오스가 환원성을 나타내지 않기 때문에 시일이 경과하여도 변화하지 않는 안정한 수액제이어서 정맥내와 복강내에 투여하기에 적합하다. 이 제품은 에너지 보급용 조성물로서 에너지 보급뿐만 아니라 아미노산 보급에도 유리하게 이용할 수 있다.
[실시예 B-14 : 외상 치료용 연고]
실시예 A-4의 방법으로 제조한 결정성 네오트레할로오스 분말 500 중량부에, 요오드 3 중량부를 용해한 메탄올 50 중량부를 가하여 혼합하고, 이 혼합물에 10w/v% 풀룰란 수용액 200 중량부를 가하여 혼합하여 적당한 확포성과 부착성을 가진 외상 치료용 연고를 제조하였다.
이 제품은 요오드에 의한 살균 작용뿐만 아니라 네오트레할로오스에 의한 세포에 대한 에너지 보급용 조성물로서도 작용하기 때문에 치유기간이 단축되고 상처부위도 말끔히 아물도록 치료한다.
[실시예 B-15 : 당의 정]
중량 150mg의 소정(素錠)을 심제(芯劑)로 하고 여기에 실험 3의 방법으로 제조한 결정 네오트레할로오스 40 중량부, 풀룰란 (평균 분자량 20만) 2 중량부, 물 30 중량부, 탈크 25 중량부 및 산화 티탄 3 중량부로 된 1차 용액을 사용하여 정제 중량이 약 230mg 될 때까지 당의 (糖衣)한 다음, 동일한 결정 네오트레할로오스 65 중량부, 풀룰란 1 중량부 및 물 34 중량부로 된 2차 용액을 사용하여 당의한 후 다시 왁스로 코우팅해서 광택이 있는 외관이 우수한 당의 정을 제조하였다.
이 제품의 당의(糖衣) 처리시의 작업성이 우수할뿐만 아니라 내충격성도 우수하며 고품질을 장시간 유지한다. 이 제품은 에너지 보급용 조성물로서 유리하게 이용할 수 있다.
위에서 명백한 바와 같이 전분질이 α-아밀라아제를 작용시켜 제조되는 본 발명의 네오트레할로오스는 그 수율이 높고, 분리와 정제도 용이하다. 이와 같이 하여 제조되는 네오트레할로오스는 비환원성 2 당류로서 극히 안정하고 양질이며 풍부한 감미를 가지고 있다. 또한 경구적 또는 비경구적으로 사용할 수 있고 독성이나 부작용의 우려도 없으며 대사이용이 양호하여 생체에 대한 에너지 보급에 유리하게 이용할 수 있다.
결정 네오트레할로오스는 물에 용이하게 용해함에도 불구하고 실질적으로 비흡습성이어서 그 취급이 용이하다. 더욱이 네오트레할로오스는 화학적으로 안정한 외에도 삼투압 조절성, 부형성, 광택 부여성, 보습성, 기타 당의 결정 석출 방지성, 비발효성 등의 여러 가지 특성을 구비하고 있다. 이들 특성은 감미료, 맛 개량제, 품질 개량제, 안정제 등으로서 각종 조성물 제조에 유리하게 이용할 수 있다.
따라서 본 발명의 네오트레할로오스의 제조 방법과 그 용도의 확립은 식품, 화장품, 의약품 분야 등에서 공업적 의의가 극히 크다.

Claims (14)

  1. (가) 용액중에서, 전분질이 당화형 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, (나) 이 네오트레할로오스를 회수함을 특징으로 하는 네오트레할로오스의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 전분질의 농도가 건조 고형분 중량 기준으로 1 ~ 80w/w%의 범위내임을 특징으로 하는 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서, (가) 단계에서의 pH가 3 ~ 9의 범위내임을 특징으로 하는 제조 방법.
  4. 제1항에 있어서, (가) 단게에서의 온도가 20 ~ 80℃의 범위내임을 특징으로 하는 제조 방법.
  5. 제1항에 있어서, (가) 단계에서의 효소 반응시간이 1 ~ 100시간의 범위내임을 특징으로 하는 제조 방법.
  6. 제1항에 있어서, α-아밀라아제를 고정화함을 특징으로 하는 제조 방법.
  7. 제1항에 있어서, (가) 단계에서 수득한 용액은 건조 고형분 중량 기준으로 네오트레할로오스를 5 ~ 15w/w% 함유함을 특징으로 하는 제조 방법.
  8. 제1항에 있어서, (나) 단계에는 (가) 단계에서 수득한 네오트레할로오스 함유용액을 분리, 정제하는 단계와, 수득한 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하는 단계 및 이 획분을 농축하여 네오트레할로오스 고함유 시럽을 회수하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 제조 방법.
  9. 제8항에 있어서, 분리 및 정제는 효모 발효법, 막여과법, 분별침전법, 결정화법, 강산성 양이온 교환수지를 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제조 방법.
  10. (가) 전분질에 당화형 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, (나) 수득한 네오트레할로오스 함유 용액을 분리, 정제하고, (다) 수득한 네오트레할로오스 고함유 획분을 회수하고, (라) 이 획분을 농축한 다음, (마) 수득한 농출물 중의 네오트레할로오스를 결정화한 후, (바) 수득한 결정 네오트레할로오스를 회수함을 특징으로 하는 결정 네오트레할로오스의 제조 방법.
  11. 제10항에 있어서, 분리 및 정제는 효모발효법, 막여과법, 분별침전법, 결정화법, 강산성 양이온 교환 수지를 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제조 방법.
  12. 용액중에서 전분질이 α-아밀라아제를 작용시켜 네오트레할로오스를 생성시키고, 이 네오트레할로오스를 회수하며,수득한 네오트레할로오스를 제품중에 함유시켜서 되는 조성물.
  13. 제12항에 있어서, α-아밀라아제가 당화형 α-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 건조 고형분 중량 기준으로 네오트레할로오스를 5w/w% 이상 함유함을 특징으로 하는 조성물.
KR1019930002503A 1992-02-25 1993-02-23 네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도 KR100257590B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP09393692A JP3172925B2 (ja) 1992-02-25 1992-02-25 ネオトレハロースの製造方法とその用途
JP92-93936 1992-02-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR930018035A KR930018035A (ko) 1993-09-21
KR100257590B1 true KR100257590B1 (ko) 2000-06-01

Family

ID=14096324

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019930002503A KR100257590B1 (ko) 1992-02-25 1993-02-23 네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5578469A (ko)
EP (1) EP0558213B1 (ko)
JP (1) JP3172925B2 (ko)
KR (1) KR100257590B1 (ko)
CA (1) CA2089241A1 (ko)
DE (1) DE69303302D1 (ko)
TW (1) TW336954B (ko)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3172925B2 (ja) * 1992-02-25 2001-06-04 株式会社林原生物化学研究所 ネオトレハロースの製造方法とその用途
IL108965A (en) * 1993-03-16 1998-07-15 Hayashibara Biochem Lab A complementary saccharine source - energy
US5576303A (en) * 1993-03-16 1996-11-19 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Energy-supplementing saccharide source and its uses
JP3605129B2 (ja) * 1993-12-15 2004-12-22 株式会社林原生物化学研究所 ネオトレハロース構造を有する非還元性オリゴ糖とその製造方法並びに用途
US5714368A (en) * 1994-06-24 1998-02-03 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Thermostable non-reducing saccharide-forming enzyme its production and uses
WO1996008979A1 (en) 1994-09-22 1996-03-28 Quadrant Holdings Cambridge Limited Compositions for use in rehydration and nutrition during athletic exercise and methods of making same
TW466116B (en) * 1997-03-04 2001-12-01 Hayashibara Biochem Lab Reduction inhibitory agent for active-oxygen eliminating activity, method for inhibiting the reduction of said activity, and composition containing said agent
US6455096B1 (en) * 1998-04-28 2002-09-24 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Hard candy with a relatively-high moisture and hardness, and process of the same
CN108872448B (zh) * 2018-09-18 2020-09-22 国家烟草质量监督检验中心 一种超高效液相色谱-串联质谱检测烟用香精中5种甜味剂的方法
CN108956840B (zh) * 2018-09-18 2021-01-26 国家烟草质量监督检验中心 一种超高效液相色谱-串联质谱检测电子烟液中5种甜味剂的方法
CN108776187B (zh) * 2018-09-18 2020-09-29 国家烟草质量监督检验中心 一种超高效液相色谱-串联质谱检测烟用接装纸中5种甜味剂的方法
KR102233132B1 (ko) * 2019-09-06 2021-03-29 한국섬유개발연구원 롤 블라인드용 암막 직물지의 제조방법

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5823799A (ja) * 1981-08-03 1983-02-12 株式会社林原生物化学研究所 高純度マルト−スの製造方法
JPS5872598A (ja) * 1981-10-26 1983-04-30 Hayashibara Biochem Lab Inc 高純度イソマルト−スの製造方法
US4487198A (en) * 1982-07-28 1984-12-11 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Process for producing a high-purity maltose
JPS63216492A (ja) * 1987-03-05 1988-09-08 Natl Food Res Inst ネオトレハロ−ス、セント−スの製造法
JP2896598B2 (ja) * 1990-10-06 1999-05-31 株式会社林原生物化学研究所 ラクトネオトレハロースとその製造方法並びに用途
JP3082094B2 (ja) * 1990-11-15 2000-08-28 株式会社林原生物化学研究所 ネオトレハロースの製造方法とその用途
JP3172925B2 (ja) * 1992-02-25 2001-06-04 株式会社林原生物化学研究所 ネオトレハロースの製造方法とその用途

Also Published As

Publication number Publication date
DE69303302D1 (de) 1996-08-01
US5578469A (en) 1996-11-26
CA2089241A1 (en) 1993-08-26
EP0558213B1 (en) 1996-06-26
JPH05252973A (ja) 1993-10-05
JP3172925B2 (ja) 2001-06-04
KR930018035A (ko) 1993-09-21
TW336954B (en) 1998-07-21
EP0558213A1 (en) 1993-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100394149B1 (ko) 트레할로오스와그제조방법및용도
KR100334056B1 (ko) 비환원성올리고당질및그제조방법과용도
KR0182615B1 (ko) 락토네오트레할로오스, 그 제조방법 및 용도
KR100362688B1 (ko) 비환원성당질과그제조방법및용도
JP3082094B2 (ja) ネオトレハロースの製造方法とその用途
KR100362689B1 (ko) 환원성이감소된당질조성물과그제조방법및용도
KR100257590B1 (ko) 네오트레할로오스의 제조 방법 및 그 용도
EP0690131B1 (en) Non-reducing saccharide and its production and use
JP4070250B2 (ja) 還元性を低減させた糖質とその製造方法並びに用途
TW397840B (en) Crystalline maltotetraosyl glucoside, and its production and use
KR100350845B1 (ko) 결정말토실글루코시드,그제조방법및그것을함유한음식물
JP3936752B2 (ja) 結晶マルトテトラオシルグルコシドとその製造方法並びに用途
JP3963491B2 (ja) 結晶マルトシルグルコシドとその製造方法並びに用途
JP3182665B2 (ja) ツラノースの製造方法とその用途
KR100458486B1 (ko) 말토올리고실투라노오스와말토올리고실파라티노오스를함유한당조성물,그제조방법및용도
US5908767A (en) Non-reducing saccharide and its production and use

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20070205

Year of fee payment: 8

LAPS Lapse due to unpaid annual fee