KR100244051B1 - 항알레르기성 화장품 또는 약학적,특히 피부학적 조성물의 제조에 사용되는 쿠쿠르비틴의 용도 및 그의 사용방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항알레르기성 활성을 갖는 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 제조, 또는 알레르기 발생의 위험을 감소시키는 화장품 또는 약학적 조성물의 제조에 사용되는 쿠쿠르비틴 또는 쿠쿠르바새아애 씨의 추출물의 용도에 관한 것이다.

Description

항알레르기성 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 제조에 사용되는 쿠쿠르비틴의 용도 및 그의 사용방법

제1도는 각 효과기의 HDC 억제활성을 나타내는 미카엘리스 곡선이다.

제2도는 각 효과기의 HDC 억제활성을 나타내는 RIA 분석도이다.

본 발명은 필수적으로, 항알레르기성 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 제조에 사용되는 쿠쿠르비틴의 용도 및 그의 사용방법에 관한 것이다.

하기 일반식 (Ⅰ) 의 쿠쿠르비틴, 또는 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘카르복실산은 쿠쿠르비타새아애 (Cucurbitaceae) 에서 발견되는 천연 수용성 아미노산이다 (V.H. Mihranian et al., LLOYDIA (1968), 31 (1) 23 내지 29 참조) ;

쿠쿠르비틴은 구충제, 특히 일본주혈흡층 (Schistosoma japonicum) 에 대한 구충제로서 공지되어 있다 (Morimoto, Y. et al., Chem. Pharm. Bull. (1987) 35 (9) 3845 내지 3849).

쿠쿠르비틴은 추출에 의해 좌회전성 (laevorotary) 형태로 수득되거나 인공적으로 라세믹 형태로 수득될 수 있다. 각종 쿠쿠르비틴 합성 방법 가운데, 특히 문헌 「H.J. Monteiro, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1973) 2」 의 합성방법을 언급할 수 있다. 이 방법에 의해서는 상대적으로 낮은 수율의 라세믹 쿠쿠르비틴만을 수득할 수 있다. 그외의 합성 방법에 의해서 쿠쿠르비틴의 2개의 광학 이성질체를 별도로 수득할 수 있다. 이 방법은 모리모또 등 (Morimoto et al., Chem. Pharm. Bull. (1987) 35 (9) 3845 내지 3849) 의 방법이며, 이는 돼지간 에스테라제를 이용하는 입체 특이성 효소 합성법이다. 하지만, 이 방법은 복잡하며 상대적으로 많은 수의 단계를 필요로한다.

예기치 않게도, 이제는 쿠쿠르비틴이 잘 공지된 알레르기 조정기인 히스타민의 생성을 억제하여 상당한 하이포 히스타민 활성을 나타냄이 발견되었다. 이 하이포 히스타민 활성은, 히스티딘에서 히스타민으로의 변환에 대한 반응성 효소인 히스티딘 카르복실기 분해 효소 상에서 쿠쿠르비틴의 억제작용에 기인한다. 결과적으로, 쿠쿠르비틴의 투여는 혈청 및 조직내의 히스타민 농도를 감소시키는데 기여한다.

상기는 상당한 기술적 진보성을 구성하는데, 그 이유는 현재 다룰 수 있는 활성물질의 수가 제한되어 있는 의사들에게 있어서, 알레르기 발현, 특히 폐동맥 및 피부 알레르기가 많은 문제점들을 야기하며, 또한 이들 활성물질들의 일부는 부작용을 나타낼 수 있기 때문이다. 따라서, 결과적으로 신규의 알레르기 예방 및 치료 조성물을 개발할 상당한 필요가 있다.

따라서, 본 발명의 주요목적은 알레르기 발현 조정제인 히스타민의 생성을 억제하여 알레르기 발현을 예방 및 치료할 수 있도록 하는 길잡이를 제공하는 것으로 구성된 기술적 문제점을 해결하는 것이다.

또 다른 양태에 따라, 본 발명의 주 목적은 알레르기 발현을 예방 및 치료할 수 있도록 하는 길잡이를 제공하는 것으로 구성된 기술적 문제점을 해결하는 것이다.

본 발명의 목적은 또한 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 알레르기 잠재성을 감소시킬 수 있도록 하는 길잡이를 제공하는 것으로 구성된 신규의 기술적 문제점을 해결하는 것이다.

본 발명의 목적은 또한 쿠쿠르비틴의 합성이 최소한의 단계수를 필요로하는 단순 합성 방법에 의해 양호한 수율로 수행될 수 있도록 하는 길잡이를 제공하는 것으로 구성된 신규의 기술적 문제점을 해결하는 것이다.

본 발명에 의해 상기 모든 기술적 문제점들이, 간단하고 확실하며 재생가능하며, 공업적 규모로 사용될 수 있는 방법으로 해결될 수 있다.

따라서, 제 1 양태에 따라, 본 발명은 항알레르기 활성을 갖는 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 제조에 사용되는 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르의 1 종의 용도에 관한 것이다.

특정 구현예의 변법에 따라, 본 발명의 제제는 그 원료 및 사용 부위에 상관 없이, 특히 기관지, 피부 및 눈에서의 알레르기 발현의 예방 또는 증후치료를 위한 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물 제제이다. 따라서, 상기 조성물은, 특히, 알레르기성 또는 운동 - 유발성 기관지 천식, 건초열, 경련성 기관염 및 비염, 담마진, 그외의 알레르기성 발진, 습진, 알레르기성 유래의 홍반 또는 피부 과민, 소양증, 퀸케병, 알레르기성 결막염 및 약제 유래의 알레르기성 반응의 예방 또는 증후 치료를 목적으로 한다.

화장품학의 보다 특정 분야에서, 상기 조성물은 유리하게는 하이포알레르기성인 생성물의 라인 (line) 용 또는 민감성 또는 감응성 피부용으로 목적된다.

쿠쿠르비틴은 유리 형태, 또는 화장품학적 또는 약학적으로, 특히 피부학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 1 종의 형태로 사용될 수 있다. 상술한 염 및 에스테르는 당해 기술분야의 전문가에게 잘 공지된 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 염 가운데서는, 모노 - 및 디히드로브로마이드 및 모노 - 및 디히드로클로라이드를 언급할 수 있다. 에스테르 가운데서는 메틸 에스테르 및 에틸 에스테르를 언급할 수 있다.

유리한 변법에 따라, 쿠쿠르비틴을 함유하는 상술한 식물 추출물은 쿠쿠르비타새아애, 특히 쿠쿠르비타 맥시마 듀크. (Cucurbita maxima Duch.), 쿠쿠르비타 페포 엘. (Cucurbita pepo L.) 또는 쿠쿠르비타 모스카타 듀크. (Cucurbita moschata Duch.) 의 추출물이며; 바람직하게는 씨 또는 열매 과육의 추출물이다. 좀더 바람직한 것은 쿠쿠르비타새아애 씨의 추출물이다.

구현예의 유리한 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적 또는 약학적, 특히 피부학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 1 종은 총조성물에 대해 0.001 내지 10중량 %, 및 바람직하게는 0.01 내지 5 중량 % 의 농도로 존재한다.

2 번째 양태에 따라, 본 발명은 또한 활성 성분으로서, 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 1 종, 또는 그를 함유하는 식물 추출물을 필요할 경우, 화장품학적으로 허용되는 적절한 부형제 또는 담체 내에 함유함을 특징으로 하는 화장품 조성물에 관한 것이다.

유리한 변법에 따라, 상술한 식물 추출물은 상기 정의한 것과 같은 쿠쿠르비타새아애의 추출물이다.

바람직한 양태의 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 염 또는 에스테르의 1 종은 항알레르기 활성을 나타내는데 효과적인 양, 특히 조성물 총 중량의 0.001 내지 10 %, 및 바람직하게는 0.01 내지 5 % 의 농도로 존재한다.

3 번째 양태에 따라, 본 발명은 특히 기관지, 피부 및 눈에서의 알레르기 발현을 예방 또는 치료하기 위해, 필요할 경우 약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체내에 항알레르기 활성을 나타내는데 효과적인 양의 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 1 종을 함유함을 특징으로 하는, 바람직하게는 항알레르기 활성을 갖는 약학적, 특히 피부학적 조성물에 관한 것이다.

변법에 따라, 상술한 화장품 및 약학적 조성물은 상기 정의한 것과 같은 식물 유래의 추출물을 함유한다.

4 번째 양태에 따라, 본 발명은 또한 유리형태 또는 그의 화장품학적 또는 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 1 종의 형태인 쿠쿠르비틴의 유효량, 또는 그를 함유하는 상기 정의한 것과 같은 식물 추출물의 유효량을 상기 조성물에 혼입하여 최종 조성물이 알레르기성이 될 위험성을 감소시킴을 특징으로 하는, 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 알레르기 잠재성을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

상기 모든 양태들에 있어서, 국소에 사용하기 위한 조성물용의 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르의 바람직한 중량 농도는 0.001 % 내지 10 % 이고, 좀더 바람직하게는 0.01 내지 5 % 이다.

계통적 투여 (예를 들어 경구, 비경구, 직장, 흡입 투여) 용 조성물에 있어서, 쿠쿠르비틴 농도는 중요하지 않으며, 예를 들어 조성물의 60 % 에 달할 수 있다. 사람에 있어서의 복용량은 일반적으로 0.1 mg/kg/1일 내지 20 mg/kg/1일이며 바람직하게는 1 mg/kg/1일 내지 15 mg/kg/1일 이다.

또한, 좌회전성 형태의 천연 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르가 일반적으로 사용된다. 특히 유리한 좌회전성 쿠쿠르비틴의 원료는 쿠쿠르비타새아애의 과육 및 씨이며, 특히 쿠쿠르비타 페포 엘., 쿠쿠르비타 맥시마 듀크. 및 쿠쿠르비타 모스카타 듀크의 종이다. 하지만, 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르의 라세믹 형태도 또한 사용할 수 있다.

또한 쿠쿠르비틴은 당해 기술분야의 전문가에게 공지된 추출방법에 따라 순수형태, 또는 추출물의 형태로 사용될 수 있다. 특히 유리한 추출방법은 본 명세서에 참고로 혼입된 문헌 [Valentine H. MIHRANIAN et al. in IIoydia 1968, 31, (1) 23 - 29, 특히 page 24] 에 기재되어 있다. 이 방법은 유리하게는, 수시간 동안 일정하게 교반하면서 유리하게는 50 ℃ 이상으로 가열하고, 물을 사용하여 탈피 및 탈지된 쿠쿠르비타새아애 씨를 처리하는 방법을 재공한다. 그후, 혼합물을 원심분리하고, 상청액을 수거하고 잔류물을 여러 분획의 열수를 이용하여 유사한 방법으로 1 회 이상 재추출한다. 상청액 및 세척액을 합한 다음, 현탁액 중의 단백질성 물질 침전에 동부피의 85 % 에탄올을 가함으로써 처리하고 전체를 냉장고에서 하룻밤 유지시킨다. 다음, 혼합물을 원심분리하고 상청액을 수거한다. 알콜은, 예를 들어 회전 증발기 내에서 증류에 의해 제거할 수 있다. 수용액은 그 자체를 사용하거나, 그렇지 않으면 그 이후에 예를 들어 크기가 75 x 2.2 cm 인 도베 (Dowex) 50W-X-8 형의 크로마토그래피 컬럼에 통과시킬 수 있다. 이 컬럼을 약 200 ml 의 물로 세척한 다음, 용리액이 닌히드린 테스트에 음성 반응을 나타낼 때 까지 1 % 수성 수산화암모늄 용액으로 용리한다. 용리액을 감압하에 증발건조시키고, 필요할 경우 가열한다. 시럽상 잔류물은 다시 그 자체를 사용하거나, 그렇지 않으면 열수로 다시 처리되고 유리하게는 동부피 이상의 95 % 에탄올에 첨가할 수 있다. 다음, 혼합물을 산, 예를 들어 60 % 과염소산을 적가하여 pH 약 5 의 용액으로 산성화 할 수 있다. 다음, 이를 냉장고에 수일간 방치하여 쿠쿠르비틴 과염소산염의 침전을 수득한다. 다음, 이 침전을 수 밀리미터의 물에 용해시키고, 필요할 경우, 크로마토그래피 컬럼, 바람직하게는 예를 들어 크기가 20 x 1.5 cm 인 암버라이트 CG-45 형 크로마토그래피 컬럼을 통과시킬 수 있다. 감압하에 용리액을 증발시켜 실질적으로 순수한 상태의 쿠쿠르비틴을 수득한다.

따라서, 상기 방법에 의해 순수한 상태의 쿠쿠르비틴, 또는 각종 쿠쿠르비틴 함량을 갖는 추출물을 수득하는 것이 가능하다. 쿠쿠르비틴이 쿠쿠르비티새아애의 추출물 형태로 사용될 경우, 쿠쿠르비틴 함량은 바람직하게는 추출물의 0.5 중량 % 이상이다. 쿠쿠르비틴을 수득하기 위한 바람직한 원료는 쿠쿠르비타 페포 엘., 쿠쿠르비타 맥시마 듀크. 및 쿠쿠르비타 모스카타 듀크와 같은 쿠쿠르비타 종의 씨로 구성된다.

5 번째 양태에 따라, 본 발명은 또한 알레르기 발현의 예방 또는 치료에 효과적인, 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종의 소정량, 또는 상기 정의한 것과 같은 쿠쿠르비틴을 함유하는 식물 추출물의 소정량을 인간 또는 동물에 투여함을 특징으로 하는, 알레르기 발현의 예방 또는 치료를 위한 인간 또는 동물의 치료방법에 관한 것이다.

특히, 상술한 치료방법은 알레르기성 또는 운동 - 유발성 기관지 천식, 건초열, 경련성 기관염 및 비염, 담마진, 그외의 알레르기성 발진, 습진, 알레르기성 유래의 홍반 또는 피부과민, 소양증, 퀸케병, 알레르기성 결막염 및 약제 유래의 알레르기성 반응의 예방 또는 증후 치료에 적용된다.

구현예의 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종은 바람직하게는 0.001 내지 10 중량 % 의 농도로 국소 투여된다.

구현예의 또 다른 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종은 인간에게 0.1 mg/kg/1일 내지 20 mg/kg/1일, 및 바람직하게는 1 mg/kg/1일 내지 15 mg/kg/1일의 복용량으로 계통적 투여된다.

본 발명은 또한 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적 또는 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종, 또는 그를 함유하는 상기 정의한 것과 같은 식물 추출물을 화장품학적 또는 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제에 혼입함을 특징으로 하는, 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

구현예의 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적 또는 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종을, 이후에 알레르기성이 될 위험을 감소시키기 위해 완전한 화장품 또는 약학적 제제에 혼입한다.

구현예의 또 다른 변법에 따라, 항 알레르기 활성을 갖는 조성물이 제조된다. 일부 제조 변법은 또한 상술한 기재로 부터 유래한다.

상술한 모든 양태에 있어서, 본 발명의 특정 구현예에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 염 또는 에스테르 1 종을 함유하는 상술한 조성물, 또는 상술한 식물 추출물은 추가로 리포좀 형의 소포 (vesicle) 를 함유한다. 특정 변법에 따라, 쿠쿠르비틴 또는 그의 염 또는 에스테르는 리포좀 형 소포내에 일부 이상이 캡슐화된다. 용어 "리포좀형 소포" 는 수화 라멜라 지질층, 및 이온성 또는 비이온성의 친양쪽 이온성 지질로 구성된 지질 소포를 모두 의미한다. 또한, 표현 "리포좀형 소포내에 일부 이상을 혼입" 은 본 명세서 및 특허청구범위에서, 그 결합 형태와는 무관하게 쿠쿠르비틴, 그의 염 또는 에스테르가 리포좀 형의 소포와 결합됨을 의미하는 것으로 이해된다. 하지만, 바람직한 결합은 리포좀형 소포내의 쿠쿠르비틴, 그의 염 또는 에스테르의 캡슐화에 있다. 하지만, 본 발명의 목적하는 항알레르기 효과를 수득하기 위해서 반드시 전량이 혼입 또는 캡슐화될 필요는 없다.

"리포좀" 형의 소포는 지질 물질로 부터 제조됨이 공지되어 있다. 용어 "지질" 은 일반적으로 5 이상의 탄소원자를 포함하는 소위 지방족 탄소 사슬을 포함하는 모든 물질에 대해 사용할 수 있으며, 이 물질을 통상적으로 "지질" 이라 칭한다.

본 발명에 따라, 라멜라 지질층 또는 리포좀 형의 소포를 생성하기 위해, 지질로서 친양쪽이온성 지질, 즉 동등하게 이온성 또는 비이온성일 수 있는 친수성기 및 친지방성기를 함유하는 분자로 구성된 지질을 사용하며, 이 친양쪽이온성 지질은 수성층의 존재하에 라멜라 지질층 또는 리포좀 형 소포를 생성할 수 있다.

특히, 상기 지질 가운데 하기를 언급할 수 있다 ; 포스포리피드, 포스포아미노리피드, 글리코리피드, 폴리옥시에틸렌화 지방족 알콜 및 폴리올의 임의로 폴리옥시에틸렌화된 에스테르. 상기 물질들은, 예를 들어, 임의로 수소화된 계란 또는 대두 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 스핑고미엘린, 세레브로시드 또는 옥시에틸렌화 폴리글리세롤 스테아레이트로 구성된다.

본 발명에 따라 사용된 화합물을 수소화 라멜라 지질층 또는 리포좀 내로 혼입하는 것은 예를 들어 문헌 US-A-4,508,703, 및 필요할 경우 US-A-4,621,023 에 기재된 공지의 제조방법에 따라 수행될 수 있다.

7 번째 양태에 따라, 본 발명은 또한 출발물질로서 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논을 사용하는 것을 특징으로 하는 쿠쿠르비틴의 합성방법에 관한 것이다.

이 합성방법의 구현예의 특정 변법에 따라, 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논을 염화 암모늄 및 시안화 칼륨의 암모니아성 용액으로 처리하여 (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노피롤리딘을 수득한다. 다음, 이 화합물을 산 또는 염기 가수분해에 의해 (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 -피롤리딘카르복실산으로 변환시키고, 최종적으로 수소 환원, 바람직하게는 촉매적 가수소분해를 수행하여 (±) - 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘 카르복실산 또는 (±) - 쿠쿠르비틴을 수득한다.

바람직한 변법에 따라, 상술한 암모니아성 용액은 수성 - 알콜 용액이며, 알콜은 유리하게는 이소프로판올 또는 메탄올이다.

그외의 바람직한 변법에 따라, 상술한 가수분해는 6N 수성 수소화브롬산 용액을 이용하여 수행한다.

또 다른 변법에 따라, 촉매적 가수소분해는 수성 반응매질내에 분산된 챠콜상 팔라듐과 같은 촉매의 존재하에 대기압에서 수소하에 수중에서 수행된다.

합성 방법의 바람직한 구현예에 따라 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논을 염화암모늄 및 시안화 칼륨과 1 : 4 : 4 의 몰비로 실온에서 48 시간 동안 반응시킨다.

구현예의 그외의 특정 변법에 따라, 광학 이성질체는 당해 기술분야의 전문가에게 공지된 분리 방법에 따라 특히 부분입체 이성질체의 제조를 거쳐 라세믹 혼합물로 부터 분리된다.

본 발명에 따른 쿠쿠르비틴의 합성 방법에 의해서 공지방법의 수율 보다 평균 2 내지 3 배 높은 수율의 라세믹 쿠쿠르비틴을 수득한다.

본 발명의 그외의 목적, 특징 및 잇점은 하기에 주어지는 각종 쿠쿠르비틴 제조예, 약학적 테스트의 결과를 나타내는 각종예 뿐만 아니라 화장품 또는 약학적 제제의 각종예를 참고로 하여 주어지는 설명적 기재로 부터 명백해질 것이다. 실시예에서, 백분율은 특정한 언급이 있는 경우를 제외하고 중량 백분율이다.

[실시예 1]

라세믹 혼합물 형태의 쿠쿠르비틴 합성방법은 하기와 같다.

a) (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노피롤리딘의 합성

3ml의 2 - 프로판올에 용해된 0.5 g 의 1 - 벤질 - 3- 피롤리디논 (2.85mmol)을 7ml의 28% 암모니아 용액중 0.741 g (11.4 mmol) 의 시안화칼륨 및 0.615 g (11.4mmol) 의 염화암모늄 용액에 첨가한다. 혼합물을 3일간 교반하면서 실온에서 유지시킨다. 용액을 15ml의 10%탄산칼륨 용액으로 세척하고 디클로로메탄 (3 xc 15 ml) 으로 추출한다. 황산 마그네슘으로 건조시키고 용매를 증발시킨 후, 오일 (0.475 g) 을 수득한다.

생성물을 고체 부하 실리카 컬럼상에서 정제한다. 이를 4 : 2 에테르 / 석유 에테르 혼합물로 용리한다.

하기 NMR 스펙트럼을 갖는 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노 - 피롤리딘으로 구성된 베이지 고체 0.402 g 을 수득한다 (수율 : 70%) :

¹HNMR, 300 MHz, CDCl₃

1.8 (광범위한 s, 2H, NH₂) ; 1.97 (ddd, 1H, J_4.4'= 13.4, J_4,5= 8, J_4,5'= 5.4) ; 2.5 (ddd, 1H, J_4,4'= 8, J_4,5'= 8, J_4',5'= 5.4) ; 2.64 (d, 1H, J_2,2'= 9.4) ; 3.04 (d, 1H, J_2',2= 9.4) ; 3.67 (s, 2H, CH₂-C₆H₅) ; 7.33 (m, 5H, 방향족 양성자).

b) (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 피롤리딘카르복실산 또는 (±) - 1 - 벤질쿠쿠르비틴의 합성

상기 수득한 화합물의 가수분해는 산 매질 또는 염기 매질에서 수행될 수 있다.

산 매질에서의 가수분해 :

5 ml 의 48 % 수소화브롬산에 용해되었으며 단계 a) 에서 수득된 0.3 g (1.49 mmol) 의 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노피롤리딘을 4시간 동안 40 내지 50℃로 승온시킨다. 산을 증발시킨 후, 생성물을 실리카 컬럼상에서 정제한다. 불순물을 CH₂Cl₂/MeOH 10 % 로 제거하고, MeOH/H₂O 15 % 로 아미노산을 제거한다.

메탄올 제거후, 화합물을 가열상태의 최소량의 수성 매질내에서 동물성 챠콜로 탈색한 다음 친액성화 한다. 하기 NMR 스펙트럼을 가지며 모노 - 또는 디히드로브로마이드의 형태이고, (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 피롤리딘카르복실산으로 구성된 암황색 고체를 수득한다 (수율 : 80%) :

¹HNMR, 300 MHz, D₂O

2.47 - 2.69 (m, 1H, H₄) ; 2.75 - 2.91 (m, 1H, H_4'; 3.69 - 3.94 (m, 3H, H₅, H_5', H₂) ; 4.12 (d, J_2,2'= 14.2, 1H, H_2') ; 4.58 (2d, J = 13.8, 2H, CH₂-C₆H₅) ; 7.62 (s, 5H, 방향족 양성자)

염기 매질에서의 가수분해 :

단계 a) 의 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노필롤리딘 280 mg (1.39 mmol) 을 2 ml 의 에탄올에 용해시킨다. 5 ml 의 10 % 수산화나트륨 용액을 첨가한 다음, 혼합물을 5 시간 동안 환류시킨다. 냉각 후, 48 % 수소화브롬산으로 산성화한다.

생성물을 실리카 컬럼 : MeOH/H₂O 10 % 상에서 정제한다. 생성물을 동물성 챠콜로 탈색시킨 다음 친액성화 한다. 브롬화 나트륨염의 존재로 인해 100 % 이상의 수율이 수득된다.

존재하는 염을 제거하기 위해, 200 mg 의 피롤리딘을 흡수시키고 10 % 수산화나트륨 용액으로 pH 8 이 되게 한다. 듀오라이트 (Duolite) Cl^-를 2N 수소화브롬산 용액으로 부하시킨다. 증류수로 염을 제거한다. 피롤리딘을 제거하기 위해 0.1N 수소화브롬산 용액을 사용한다.

친액성화 후, 120 mg 의 (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벨질 - 3 - 피롤리딘카르복실산을 수득한다 (수율 : 40 %).

c) (±) - 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘 카르복실산 또는 (±) - 쿠쿠르비틴의 합성

단계 b) 에서 수득된 (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 피롤리딘카르복실산 히드로브로마이드 300 mg 을 10 ml 의 물에 용해시킨다. 10 % 의 팔라듐을 수득하는 0.5 mg 의 챠콜을 분산시킨 다음, 이 현탁액을 대기압하 수소대기 내에 방치한다. 18 시간 동안 교반을 계속한다. 여과지를 통해 여과하고 친액성화 한 다음, 하기 NMR 스펙트럼을 갖는 (±) - 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘 카르복실산 또는 (±) - 쿠쿠르비틴으로 구성된 황색 고체를 수득한다 (98 %) :

¹HNMR, 300 MHz, D₂O

2.45 (m, 1H, H₄) ; 2.69 (m, 1H, H_4') ; 3.61 (d, 1H, J_2,2'= 13.4) ; 3.67 - 3.78 (m, 2H, H₅, H_5') ; 4 (d, 1H, J_2',2= 13.4).

[실시예 2]

(±) - 쿠쿠르비틴 합성 수율의 최적화

방법은, 단계 a) 의 반응물의 비율을 변화시키고, 단계 b) 에서 6N 수소화브롬산으로 가수분해 하는 것을 선택하는 것을 제외하고, 실시예 1 에 기재된 것과 같다.

수득된 수율은 하기 표 Ⅰ에 나타낸다.

N.B.P : 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논

* : 아미노니트릴, 분리안됨

CN : 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 시아노피롤리딘의 수율

COOH^-: 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘 카르복실산의 총수율

표 Ⅰ 의 최종 컬럼은 출발 반응물질에 상대적인 수율의 (±) - 쿠쿠르비틴을 함유한다.

: 1 - 벤질 - 3 - 피롤리돈, 염화암모늄 및 시안화칼륨간의 비율 1 : 4 : 4를 이용하여 48 시간 이상 동안 실온에서 반응을 수행할 경우, 수율이 최대임이 관찰되었다.

또한, 가수분해제로서 동일 농도의 염산을 사용했을때 보다 수소화브롬산에 의한 가수분해에 의해서 좀더 나은 수율이 수득됨이 관찰되었다.

[실시예 3]

쿠쿠르비틴의 광학 이성질체의 분리

그 자체가 공지된 분리방법은 에스테르화에 의해 산 작용기를 보호하고 시클릭 아민 작용을 보호한 후 (±) - 쿠쿠르비틴을 특정 광학 활성 시약과 커플링함으로써 부분입체 이성질 유도체를 제조하는 것을 바탕으로 한다. 쿠쿠르비틴의 1 종 이상의 이성질체에 상응하는 상기 입체이성질체의 각 형태는 크로마토그래피, 특히 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 또는 실리카 컬럼상에서 분리될 것이다. 그후 2 개의 쿠쿠르비틴 에난티오머를 재생시키기 위해서는 보호 에스테르를 비누화한 다음, 이를 가수분해하여 산 작용기를 유리시키는 것으로 충분하며, 아민 작용기가 벤질기와의 치환에 의해 보호되었을 경우 예를 들어 실시예 1 에 기재된 것과 같은 가수소분해에 의해 아민 작용기를 유리시키는 것으로 충분하다.

본 방법을 위한 시약으로는 하기와 같은 좌회전성 S 광학 활성 화합물을 사용하는 것이 가능하다 :

- (1S) - 캄파닐 클로라이드,

- (S) - (-) - α- 메톡시 - α- (트리플루오로메틸) 페닐아세트산.

- N - (t - 부톡시카르보닐) - L - 페닐알라닌.

본 실시예는 (1S) - 캄파닐 클로라이드와의 커플링에 의한 쿠쿠르비틴 라세미체의 분할을 기재한다.

a) (+) - 1 - 벤질쿠쿠르비틴의 산 작용기의 보호 : 그의 메틸 에스테르의 합성

실시예 1 의 단계 b) 에서 수득된 (±) - 1 - 벤질쿠쿠르비틴 0.1 g (0.20 mmol) 을 티오닐 클로라이드 (0.28 mmol) 및 메탄올 (2 ml) 의 빙냉용액에 천천히 첨가한다. 반응 온도가 -5℃ 이상으로 올라가지 않아야 한다. 혼합물을 0℃ 에서 2 시간 동안 교반한 다음, 2 일간 실온으로 복귀시킨다.

증발후, 생성물을 고체부하 실리카 컬럼상에서 정제한다 (용리액 CH₂Cl₂/MeOH 10 내지 50 %).

(±) - 1 - 벤질쿠쿠르비틴 메틸 에스테르로 구성된 황색 생성물을 70 % 수율로 수득한다.

b) (1S) - (-) - 캄파닐 클로라이드와의 커플링

1.5 ml 의 염화 메틸렌에 용해된 1 몰의 (±) - 1 - 벤질쿠쿠르비틴 메틸 에스테르를 1 몰의 트리에틸아민으로 중화시킨다. 1.1 등가의 (1S) - (-) - 캄파닐 클로라이드를 첨가한다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반한다.

생성물을 고체 부하 실리카 컬럼상에서 정제한다 (용리액 : CH₂Cl₂/ MeOH 10 %).

각종 컬럼, 특히 NH₂- 그라프트 조르박스 (NH₂-grafted Zorbax (등록상표))상의 HPLC 에 의해 부분입체 이성질체의 분리를 수행한다.

[실시예 4]

쿠쿠르비타 페포과육으로 부터 쿠쿠르비틴의 제조

신선한 쿠쿠르비타 페포 열매를 절반으로 자르고, 씨 추출물의 제조에 사용될 수 있는 씨를 제거한다. 상기와 같이 수득된 과육을 분쇄하여 친액성화한다. 분말을 회수하여, 1 ℓ대 분말 100 g 의 비율인 석유 에테르로 탈지한다. 목적하는 쿠쿠르비타 페포 과육의 추출물을 구성하는 불용성 물질을 여과에 의해 수거한다. 이 추출물 중 쿠쿠르비틴의 비율은 HPLC에 의해 분석하여, 탈지 건조 추출물 중 쿠쿠르비틴의 농도는 0.03 중량 % 이다.

다음, 탈지 건조 추출물을, 용해가 완료될때까지 교반하면서 약 50℃ 로 가열된 물로 도입한다. 동부피의 95 % 에탄올을 첨가하여 현탁액의 단백질성 물질을 침전시켜, 이를 원심분리에 의해 제거한다. 다음, 잔류하는 투명한 상청액을 60 % 과염소산을 사용하여 pH 5.0 으로 산성화한다. 상기와 같이 산성화된 용액을 냉장고에 2 일 이상 방치하여 쿠쿠르비틴 과염소산염을 침전시키고, 이를 수거한다. 이 쿠쿠르비틴 과염소산염으로 부터, 당해 기술 분야의 전문가에게 통상적인 방법, 특히 양이온 교환 수지 컬럼 (Na⁺형) 을 통과시키고 감압하에 용리액을 증발시킴으로써 쿠쿠르비틴을 수득할 수 있다.

[실시예 5]

쿠쿠르비타 페포 씨 추출물의 제조

미리 탈피한 쿠쿠르비타 페포 씨 1.5 kg 을 분쇄한다. 수득된 분말에 헥산 (3ℓ, 2ℓ 및 1.8ℓ) 을 사용하여 추출을 3 회 수행하여 지방을 제거한다. 수득된 건조 케이크 (cake) 를 약 pH 4 로 유지되는 수성 염산 용액으로 추출한다. 이 추출액을 3 단계로 수행한다 : 2 개는 실온 - 약 22℃ - 으로, 그리고 3 번째는 70℃로 수행한다. 각 단계에서, 케이크 - 용액이 염산 용액 (1 번째 경우에는 2ℓ이고 다음 2 가지 경우에는 2.5ℓ이다) 과 접촉하게 되는 시간은 24 시간이다.

배수 (draining) 시킨 후, 고체 잔류물을 제거하고, 수성층을 수거하여 부분적으로 증발 및 원심분리한다. 원심분리 펠렛을 증류수로 세척한 다음, 폐기한다. 세척액을 원심분리 농축액과 합한다.

수성 분획을 재농축시킨 다음 동중량의 에탄올로 처리한다. 백색 침전이 생성되며, 이는 원심분리에 의해 제거한다. 예를 들어 수산화나트륨으로 중화되는 수성 - 알콜 상청액은 (-) - 쿠쿠르비틴을 함유하는 추출물을 구성하며, 이는 그 자체가 사용될 수 있다.

알콜을 증류제거한 다음, 수득된 수용액을 분무화하여, 사용한 씨의 배치(batch) 에 따라 3 내지 5 % 의 (-) - 쿠쿠르비틴이 분석되는 분말을 수득하는 것도 가능하다.

[실시예 6]

쿠쿠르비타 페포 씨의 (-) - 쿠쿠르비틴 - 풍부 추출물의 제조, 및 정제 (-) - 쿠쿠르비틴의 제조

A - 쿠쿠르비타 페포 씨 추출물의 제조

출발물질은, 탈피되었거나 그렇지 않으면 배취 또는 원료에 따라 0.2 내지 0.4 중량 % 의 (-) - 쿠쿠르비틴 함량을 갖는 쿠쿠르비타 씨, 또는 배취 또는 원료에 따라 0.4 내지 0.8 중량 % 의 (-) - 쿠쿠르비틴 함량을 갖는 쿠쿠르비타 씨의 무 - 오일 케이크로 구성된다.

출발물질은 바람직하게는 약 100 μm로 분쇄된다. 다음, 분쇄 물질을 실온에서 약 pH 3.5 의 산성화된 물 (0.1 중량 % 농도의 황산) 로 분쇄 케이크일 경우에는 2 시간 동안, 또는 씨일 경우에는 16 시간 까지 소킹 (soaking) 처리한다. 사용된 산성화수의 양은 출발물질의 약 5 배 중량이다. 다음 전체를 대기압에서 1 시간 동안 끓인다. 80℃ 로 냉각한 후, 혼합물을 여과한 다음, 필요할 경우 원심분리한다. 다음, 수득된 수성층을 80 내지 90℃ 의 온도가 되게한 후 0.5μm 필터를 통해 미세여과한다. 그리하여 1ℓ당 건조물질 약 10 g 이 분석되는 쥬스를 수득한다.

다음, 이 쥬스를 부분진공하에 건조물질의 농도가 약 250 g/ℓ가 되도록 열적 과농축시킨다. 다음, 상기 과농축액을 4℃ 에서 48 시간 동안 방치하여 감압하에 1ℓ당 건조물질 500 g 이 되도록 추가로 농축시키고, 이를 다시 4℃ 에서 48 시간 동안 방치한다. 상기 공정후에 필터 프레스를 통해 여과시킨다. 그리하여 40 내지 50 % 의 건조물질을 함유하며 1 내지 2 % 의 (-) - 쿠쿠르비틴이 분석되는 추출물을 수득한다. 수율은 출발물질 1 톤 (tonne) 당 추출물 약 200ℓ이다.

B - 정제 (-) - 쿠쿠르비틴의 제조

1ℓ당 250 내지 300 g 의 건조 물질이 분석되는 상술한 과농축액을 수산화나트륨으로 중화하여 pH 7.5 를 수득한다. 혼합물을 필터 프레스를 통해 여과한 다음 여액을 양이온 교환 수지 (Na⁺형) 에 통과시킨다. 암모니아 용액을 이용하여 용리를 수행한다. 부분 진공하에 용리액을 열적 농축시킨 후, 시럽을 수득하며, 이의 건조물질은 약 50 중량 % 의 (-) - 쿠쿠르비틴을 함유한다. 목적할 경우, 상기 시럽을 친액성화할 수 있다. 이 목적을 위해, 유리하게는 이들을 탈크와 같은 중성 분말상 담체와 혼합할 수 있다.

[실시예 7]

히스타민 생성에 대한 쿠쿠르비틴의 억제 활성의 검증

1-A. 효소 테스트에 의한 검증

이 테스트는 HDC 의 공지된 억제제 (문헌 Carpi C., Maggi G.C. Bull. Soc. Ital. Sper. 1968, 44 (6 543-4) 참조) 이며 하이포히스타민성 제제로서 하이포스 (등록상표) 타민의 명칭하에 치료학적으로 사용되는 트리토쿠알린과 비교하여, 히스티딘을 히스티민으로 변환시키는 효소 히스타딘 디카르복실라제(HDC) 상에서의 쿠쿠르비틴의 억제 활성을 바탕으로 한다.

HDC 에 대한 억제 활성은 하기 화학 반응을 바탕으로 하여 비색정량 분석에 의해 용이하게 측정될 수 있다 :

비색정량 분석

MBTH = 3 - 메틸 - 2 - 벤조티아졸리논 히드라존

DMAB = 3 - (디메틸아미노) 벤조산

실제로, 청색 착색의 형성은 소비된 히스티딘의 농도에 비례함이 관찰되었다. 따라서 반응의 초기 속도를 규정하여 문헌 「Fundamentals of Enzymology, 2nd ed. Oxford Univ. Press, 1989」에 기재된 것과 같은 소위 미카엘리스 곡석을 작도하는 것이 가능하다.

초기 속도는 분당 흡광도의 변화율로서 표현된다.

각각 효과기가 없이 각종 초기 농도, 즉 132 nmol, 265 nmol 및 530 nmol의 히스티딘을 사용하고, 공지된 HDC 억제제로서 트리토쿠알린을 사용하며, 본 발명에 따른 억제제로서 라세믹 형태의 쿠쿠르비틴을 사용하여 수득된 결과를 하기 표Ⅱ에 기록하였으며, 이는 제 1 도의 미카엘리스 곡선의 주부를 형성한다.

표 Ⅱ 및 제 1 도의 미카엘리스 곡선으로 부터 쿠쿠르비틴이 트리토쿠알린 보다 훨씬 더 잠재적인 HDC 억제제임이 명백하며, 이는 당해 기술분야의 전문가에게 매우 놀라운 결과를 제시한다.

1-B. RIA 분석에 의한 검증

쿠쿠르비틴의 항히스타민 활성은 또한 하기 방법으로 방사선 면역학적 분석 (방사선 면역분석 또는 "RIA") 에 의해 검증할 수 있다.

이 분석은 효소 HDC 의 작용하에 직접적으로 제조된 히스타민을, 당해 기술분야의 전문가에게 잘 공지되어 있고 특히 IMMUNOTECH (마셀레 - 프랑스) 사제의 HISTAMINE 방사선 면역 분석 키트 (Cat. ≠ 1302) 로 불리는 분석 키트의 사용 지시서에 기재된 RIA 법에 의해 분석함으로써 수행된다.

pH 6.3 의 인산염 완충액중의 히스티딘의 16 x 10^-3몰 농도에 대해 유리된 히스타민의 양 (nmol) 을 각각 시간에 대해, 효과기 없이 분석하고, 비교 효과기로서 트리토쿠알린을 사용하여 분석하고, 본 발명의 항히스타민제로서 합성라세믹 쿠쿠르비틴을 사용하여 분석한다. 트리토쿠알린 및 쿠쿠르비틴은 2 x 10^-3몰의 농도로 사용된다.

유리 히스티딘의 nmol 로 표현된 수득된 결과를 하기 표 Ⅲ에 기록하였으며, 이는 제 2 도 곡선의 주부이고, 이 곡선에서 유리 히스타민의 nmol 수는 종축에 나타냈으며 분으로 표시된 시간은 횡축에 나타냈다. 효과기가 없는 곡선은 직선으로 도시하였으며, 트리토쿠알린을 사용하여 수득된 곡선은 파선으로 도시하였고 쿠쿠르비틴을 사용하여 수득된 곡선은 점선으로 도시하였다.

* Ⅰ = 억제율

** = 유리 히스타민의 nmol

표 Ⅲ 으로 부터, 유리 히스타민의 양은 쿠쿠르비틴의 존재하에 현저하게 낮은이 명백하게 나타난다.

따라서 RIA 법에 의해 수득된 결과로 부터 쿠쿠르비틴이 수분 후에 트리토쿠알린 보다 히스타민 생성과 관련하여 현저하게 더 잠재적인 억제 활성을 가짐이 확인된다.

본 발명에 따른 화장품 또는 약학적, 특히 피부학적 조성물의 각종 제형예는 하기와 같다 :

[실시예 8]

정제

경구 투여용 1 정제당 :

- (±) - 쿠쿠르비틴 100 mg

- 전분 38 mg

- 락토오스 75 mg

- 탈크 10 mg

- 그외의 정제용 부형제 충분량 250 mg

(마그네슘 스테아레이트 포함)

적용 : 알레르기 발현, 특히 피부 및 호흡기 발현의 예방 및 치료.

복용량 : 성인에 있어서 1 일 10 정. 15세 까지의 어린이에게는 2 정 감소시켜 복용함.

[실시예 9]

에어로졸용 분말

고압 캔 내의 100 g 당 :

- (±) - 쿠쿠르비틴 3 g

- 만니톨 1 g

- 분산 기체 96 g

적용 : 기관지성 천식 및 천식성 기관지염과 같은 모든 호흡기 알레르기 발현의 예방 및 치료.

복용량 : 평균 1 일 4 내지 6 흡입의 비율로 기관지내 투여.

[실시예 10]

민감성 피부용 점활 유제

- 3% 의 (-) - 쿠쿠르비틴이 분석되는 실시예 5 의 씨 추출물 10 g

- 민감성 피부용의 통상적인 화장품 유제 충분량 (지방족 알콜, 폴리옥시에틸렌화 지방족 알콜, 미네랄오일, 이소프로필 팔미트산염, 글리세롤, 겔화제, 보존제, 방향제, 수분) 100 g

[실시예 11]

하이포알레르기성 메이크업 화운데이션

- (-) - 쿠쿠르비틴 함량이 1 % 이며 (-) - 쿠쿠르비틴이 강화된 실시예 4 의 쿠쿠르비타 페포 과육의 추출물 10 g

- 통상적인 메이크럽 화운데이션 조성물 충분량 (지방족 에스테르, 스쿠알렌, 대두 레시틴, 휘발성 실리콘, 프로필렌 글리콜, 크산탄 고무, 태양광 차단제, 안료, 보존제, 방향제, 수분) 100 g

[실시예 12]

항염증성 마스카라

- (±) - 쿠쿠르비틴 1.0 g

- 울트라마린 블루 9.0 g

- 헥사데실 알콜 7.4 g

- 프로필렌 글리콜 9.0 g

- 스테아르산 11.3 g

- 글리세롤 모노스테아레이트 4.4 g

- 트리에틸아민 3.6 g

- 보존제 0.3 g

- 수분 충분량 100 g

Claims (18)

1. 활성 성분으로서 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종을 화장품학적으로 허용되는 부형제 또는 담체 내에 함유함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
2. 제1항에 있어서, 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종이 항알레르기 활성을 나타내는 데 효과적인 양인 총 조성물의 0.001 ~ 10 중량 % 농도로 존재함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
3. 활성 성분으로서, 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종을, 기관지, 피부 및 눈에서 항알레르기 활성을 나타내는 데 효과적인 양으로, 약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체 내에 함유함을 특징으로 하는, 항알레르기 활성을 갖는 약학적 조성물.
4. 제3항에 있어서, 국소 용도가 목적이며, 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르의 농도가 0.001 ~ 10 % 임을 특징으로 하는 약학적 조성물.
5. 제1항에 있어서, 추가로 쿠쿠르비틴, 그의 염 또는 에스테르가 리포좀 형 소포내에 일부 이상이 캡슐화되도록 함유함을 특징으로 하는 조성물.
6. 제1항에 있어서, 쿠쿠르비틴이 좌회전성 형태로 존재함을 특징으로 하는 조성물.
7. 제6항에 있어서, 쿠쿠르비틴이, 쿠쿠르비타 맥시마 듀크., 쿠쿠르비타 페포 엘. 또는 쿠쿠르비타 모스카타 듀크와 같은 쿠쿠르비타새아애 씨 또는 열매 과육으로부터 수득됨을 특징으로 하는 조성물.
8. 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논을 염화 암모늄 및 시안화 칼륨의 암모니아성 용액으로 처리하여 (±) - 1 - 벤질 - 3 - 아미노 - 3 - 시아노피롤리딘을 수득한 다음, 이 화합물을 산 또는 염기 가수분해에 의해 (±) - 3 - 아미노 - 1 - 벤질 - 3 - 피롤리딘 카르복실산으로 변환시키고, 수소를 사용한 환원, 예를 들어, 촉매적 가수소분해를 수행하여 (±) - 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘카르복실산 또는 (±) - 쿠쿠르비틴을 수득함을 특징으로 하는 합성방법.
9. 제8항에 있어서, 1 - 벤질 - 3 - 피롤리디논과 염화암모늄 및 시안화 칼륨과의 반응이 실온에서 48 시간 이상 동안 1 : 4 : 4 의 몰비로 수행됨을 특징으로 하는 합성 방법.
10. 제8항에 있어서, 3 - 아미노 - 3 - 피롤리딘 카르복실산의 좌회전성 이성질체가 부분입체 이성질체의 제조를 거쳐 라세믹 화합물로 부터 분리됨을 특징으로 하는 합성 방법.
11. 알레르기 발현의 예방 또는 치료에 효과적인 양의 쿠쿠르비틴, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종을 동물에 투여함을 특징으로 하는 인간을 제외한 동물의 알레르기 발현의 예방 또는 치료 방법.
12. 제11항에 있어서, 쿠쿠르비틴, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종이 0.001 ~ 10 중량 % 의 농도로 국소 투여됨을 특징으로 하는 치료방법.
13. 제11항에 있어서, 쿠쿠르비틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종이 0.1 mg/kg/1일 ~ 20 mg/kg/1일의 복용량으로 계통적 투여됨을 특징으로 하는 치료방법.
14. 제2항에 있어서, 쿠쿠르비틴 또는 그의 화장품학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 1 종이 0.01 ~ 5 중량 % 의 농도로 존재함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
15. 제4항에 있어서, 쿠쿠르비틴, 또는 그의 염 또는 에스테르의 농도가 0.01 ~ 5 % 임을 특징으로 하는 약학적 조성물.
16. 제3항에 있어서, 추가로 쿠쿠르비틴, 그의 염 또는 에스테르가 리포좀 형 소포내에 일부 이상이 캡슐화되도록 함유함을 특징으로 하는 조성물.
17. 제3항에 있어서, 쿠쿠르비틴이 좌회전성 형태로 존재함을 특징으로 하는 조성물.
18. 제17항에 있어서, 쿠쿠르비틴이 쿠쿠르비타 맥시마 듀크., 쿠쿠르비타 페포 엘. 또는 쿠쿠르비타 모스카타 듀크와 같은 쿠쿠르비타새아애의 씨 또는 열매 과육으로 부터 수득됨을 특징으로 하는 조성물.