JP2001316263A - 化粧品用、または特に皮膚科の医薬用抗アレルギー性組成物の調製のためのククルビチンの用途、及び、その投与を含む方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アレルギー発現の予防あるいは治療を可能に
するために、アレルギー発現の場における媒介物質であ
るヒスタミン形成を阻害できる、抗アレルギー剤、また
は化粧品用あるいは特に皮膚科の医薬用組成物を提供す
る。 【解決手段】 少なくとも０．５重量％のククルビチン
を含むように精製されたウリ科植物（Cucurbitaceae）
果肉抽出物または種子抽出物の形態の、ククルビチン、
あるいはその化粧に許容可能な塩またはエステルからな
ることを特徴とする。また特に、抗ヒスタミンまたは抗
アレルギー剤の濃度が、０．００１％〜１０％とされ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、本質的に、化粧品
用、または特に皮膚科用の医薬用抗アレルギー組成物合
成の調製ためのククルビチン（cucurbitine）の使用、
及び、その適用を含む方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ククルビチンは、３−アミノ−３−ピロ
リジンカルボン酸ともいい、下記の式（Ｉ）で表され
る。

【化１】 これは、天然物質の水溶性アミノ酸であって、ウリ科植
物（cucurbitaceae）中に存在する。（V.H.Mihranian e
t.al., LLOYDIA (1968), 31 (1) 23-29 参照）。

【０００３】ククルビチンは、駆虫剤、特に日本住血吸
虫に対する駆虫剤として知られている。（Morimoto Y.
et. al., Chem.Pharm.Bull. (1987) 35 (9) 3845-384
9）。ククルビチンは、抽出によって左旋形が、合成に
よってラセミ体が得られる。ククルビチンの多くの合成
方法のうち、モンテイロの方法に特に言及する。（H.J.
Monteiro, J.Chem.Soc.,Shem.Commun. (1973) 2）。こ
の方法は、ラセミ体ククルビチンを、比較的低い収率で
生成するにすぎない。他の合成方法は、ククルビチンの
２つの光学異性体を別々に得ることを可能にした。これ
は、モリモトらの方法であり、（Morimoto et. al., Ch
em.Pharm.Bull., (1987) 35 (9) 3845-3849）、ブタ肝
臓エステラーゼを用いた立体特異的酵素的合成方法であ
る。しかし、この方法は複雑であり、比較的多くの工程
を必要としていた。

【０００４】現在では、予想しなかったことだが、クク
ルビチンが、アレルギーの媒体としてよく知られている
ヒスタミンの形成を阻害すること、従って重要なヒスタ
ミン活性低下作用を発揮することが見いだされている。
このヒスタミン活性低下作用は、ヒシチジンからヒスタ
ミンへの変換に作用する酵素であるヒスチジン脱炭酸酵
素に対するククルビチンの阻害作用によるものである。
結果として、ククルビチンを投与することによって、血
清中及び組織中のヒスタミン濃度を減少させることがで
きる。

【０００５】このことは、重要な技術的進歩をなす。な
ぜならば、特に肺及び皮膚アレルギーでのアレルギーの
発現は、今日、治療者にとって多くの問題を引き起こし
ているからである。治療者は、その治療において限られ
た数の活性物質しか持たず、さらに、それらのうちのい
くつかは副作用を示す。従って、アレルギーに対する新
しい予防及び治療用組成物の開発に対する強い要望が、
引続き存在していた。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題および課題を解決するた
めの手段】従って、本発明の第１の目的は、アレルギー
発現の予防あるいは治療を可能にするために、アレルギ
ー発現の場における媒介物質であるヒスタミン形成を阻
害できる方法を提供する上で生ずる技術的課題を解決す
ることである。

【０００７】他の側面からみると、本発明の主要な目的
は、アレルギー発現の予防あるいは治療を可能にする方
法を提供する上で生ずる技術的課題を解決することであ
る。また、化粧品用、特に皮膚科の医薬用組成物の、ア
レルギー発現の危険性を低下させることを可能にする方
法を提供する上で生ずる新たな技術的課題を解決するこ
とも本発明の目的である。

【０００８】さらに、ククルビチンの合成を、最小の工
程で高い収率を得る簡単な合成方法で行うことを可能に
する方法を提供する上で生ずる新たな技術的課題を解決
することもまた、本発明の目的である。本発明は、抗ア
レルギー活性を有する化粧品用あるいは特に皮膚科の医
薬用組成物の、これらすべての技術的課題を、簡単に、
確実に、再現性良く解決することを可能にした。

【０００９】具体的な例によると、特に、該調製は、そ
の起源や、特に気管支、皮膚、目といった作用部位に関
係ないアレルギー発現の、予防あるいは兆候の処置のた
めの化粧品用あるいは特に皮膚科の医薬用組成物の調製
である。従って、前記組成物は、特に、アレルギー性ま
たは運動誘引性の気管支喘息、枯草熱、発作性気管炎及
び鼻炎、ジンマシン、アレルギー性皮疹、湿疹、アレル
ギー起源のレッド・ブロッチェス（red blotches）また
は皮膚過敏症、そう痒症、クィンケ浮腫、アレルギー性
結膜炎、そして薬物起源のアレルギー反応を予防あるい
は治療するためのものである。

【００１０】化粧品という、より特定の分野において、
前記組成物は、有利に低アレルゲン性の製品群用、ある
いは敏感または過敏な皮膚用とされる。ククルビチン
は、遊離の形状でも、あるいは化粧品用または特に皮膚
科の医薬用に適用される塩またはエステルのうちの一方
の形でも用いられる。上記の塩とエステルは、当業者に
はよく知られた従来の方法で合成される。塩の中では、
モノ−あるいはジヒドロブロマイドと、モノ−あるいは
ジヒドロクロライドが挙がられる。エステルの中では、
メチルエステルあるいはエチルエステルが挙げられる。

【００１１】好ましい例によれば、ククルビチンを含む
上記植物抽出物は、ウリ科植物、特にククルビタ・マキ
シマ・ダッチ（Cucurbita maxima Duch.）、ククルビタ
・ペポ・Ｌ（Cucurbita pepo L.）あるいはククルビタ
・モシャタ・ダッチ（Cucurbita moschata Duch.）；の
抽出物であり、好ましくは、種子もしくは果肉の抽出物
である。さらに好ましくは、ウリ科植物の種子の抽出物
である。

【００１２】特別な実施態様によれば、上記の植物抽出
物は、少なくとも０．５重量％のククルビチンを含むウ
リ科植物の果肉の抽出物である。優れた具体的な例によ
れば、ククルビチン、あるいはその化粧品用もしくは特
に皮膚科の医薬用として適用できる塩あるいはエステル
のうちの一種が、全組成物中に０．００１から１０重量
％、好ましくは０．０１から５重量％の濃度で存在して
いる。

【００１３】本発明は、第２の側面からみると、活性成
分として、ククルビチン、あるいはその化粧品用として
適用可能な塩またはエステルのいずれか一つ、あるいは
それを含有する植物抽出物を、化粧品用として適用可能
な佐薬、賦形剤、または媒体中に含むことを特徴とする
化粧用組成物に関する。

【００１４】好ましい例としては、上記植物抽出物が、
上で定義したようなウリ科植物の抽出物である。具体な
好ましい変形例としては、ククルビチンあるいはその塩
またはエステルが、抗アレルギー活性を示すために有効
な量、特に、０．００１から１０重量％、好ましくは
０．０１％から５重量％存在している。

【００１５】第３の側面によると、本発明は、好ましく
は、ククルビチンあるいはその医薬用として適用可能な
塩またはエステルのいずれか一つを、抗アレルギー活性
を示すのに有効な量で、特に気管支、皮膚および目にお
けるアレルギー発現を処置または予防するのに有効な量
で、医薬用として適用可能な佐薬、賦形剤、または媒体
中に含むことを特徴とする、抗アレルギー活性を有す
る、特に皮膚科の、医薬用組成物に関する。一変形例と
しては、上記化粧用、医薬用組成物は、上で定義した植
物起源の抽出物を含む。

【００１６】第４の側面は、本発明は、遊離形態、ある
いは化粧品用、まはた医薬用として適用可能な塩または
エステル形態、あるいは上で定義したようにそれを含有
している植物抽出物形態のいずれか一つの形態の、有効
な量のククルビチンを組成物中に含み、その最終組成物
が、アレルギー誘発の危険性の低下を示すようにされた
ことを特徴とする、化粧品用及び特に皮膚科用の医薬用
組成物のアレルギー潜在性の減少方法に関する。

【００１７】上記側面のいずれの場においても、ククル
ビチンあるいはその塩またはエステルの、局所的に使用
する組成物に対する好ましい重量濃度は、０．００１か
ら１０％であり、さらに好ましくは、０．０１から５％
である。全身系の（systemically）投与（経口、非経
口、経腸、吸入、等）を意図した組成物にあっては、ク
クルビチンの濃度は決定的なものではなく、例えば、組
成物中の６０％にまで上げることができる。ヒトに対す
る投与量は、一般的に、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ／日
の範囲、好ましくは、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲
である。

【００１８】さらに、天然のククルビチンである左旋
形、あるいはその塩またはエステルが一般的に使用され
る。特に、左旋形ククルビチンの優れた供給源は、特
に、ククルビタ・ペポ・Ｌ、ククルビタ・マキシマ・ダ
ッチあるいはククルビタ・モシャタ・ダッチの種類のウ
リ科植物の果肉及び種子である。しかし、ククルビチン
のラセミ体あるいはその塩またはエステルもまた使用し
てよい。

【００１９】さらに、ククルビチンは、純粋な形で、あ
るいは当業者に周知の抽出法に従った抽出物として使用
してよい。特に有利な抽出方法は、Valentine H. MIHRA
NIANet. al., in lloydia, 1968, 31, (1) 23-29 の文
献に記載されており、特に２４頁を、参考文献としてこ
こに含める。この方法は、剥皮及び脱脂したウリ科植物
の種子を水で処理することを記述している。それによる
と、少なくとも５０℃に加熱し、数時間一定条件で撹拌
する。その後、混合物を遠心分離し、上澄み液を回収し
て残存物をいくつかに分けた温水で１回またはそれ以上
再抽出する。上澄み液と洗浄液を混合し、懸濁液中のタ
ンパク質物質を沈澱させるため、等当量の８５％エタノ
ールを加え、全体を冷却装置中に一晩保存する。その混
合液を遠心分離し、上澄み液を回収する。例えば、回転
式蒸発器により、蒸発によりアルコールを留去する。水
溶液は、そのまま使用してもよく、一方、例えばドゥエ
ックス（Dowex）５０Ｗ−Ｘ−８型で、例えば７５×
２．２ｃｍの大きさのクロマトグラフィー・カラムを通
したものを使用してもよい。そのカラムは、約２００ｍ
ｌの水で洗浄した後、１％の水酸化アンモニウム水溶液
で、溶出液がニンヒドリン試験に負の応答を与えるよう
になるまで溶離する。溶出液は、減圧下で適当に加熱
し、蒸発させて乾燥させる。シロップ状の残留物は、や
はりそのまま使用してもよい。一方、再び温水で処理
し、等当量の９５％エタノールを加えてもよい。その
後、例えば６０％過塩素酸のような酸を滴下して、溶液
のｐＨがおよそ５になるまで酸性化する。それを、数日
間冷却装置中に保存し、過塩素酸ククルビチンの沈澱を
得る。この沈澱を、数ｍｌの水に溶かし、好ましくはア
ンバーライトＣＧ−４５型で、例えば２０×１．５ｃｍ
の大きさのクロマトグラフィー・カラムを通す。溶出液
を減圧下で蒸留することにより、実質的に純粋な状態の
ククルビチンを得る。

【００２０】従って、上記の方法によれば、ククルビチ
ンを、純粋な状態でも、あるいは種々の含有量の抽出物
としても得ることが可能になる。ククルビチンが、ウリ
科植物の抽出物の形態で使用される場合、ククルビチン
含有量は、抽出物中少なくとも０．５重量％に等しいの
が好ましい。ククルビチンの好ましい供給源は、ククル
ビタ・ペポ。Ｌ、ククルビタ・マキシマ。ダッチそして
ククルビタ・モシャタ・ダッチのようなククルビタ種
（Cucurbita species）の種子である。

【００２１】第５の側面としては、本発明は、アレルギ
ー発現の予防または治療するための、ヒト及び動物の治
療方法を含んでいる。その治療方法は、アレルギー発現
の予防あるいは治療に有効な量の、ククルビチン、ある
いはその医薬用として適用可能な塩またはエステルのい
ずれか一つ、あるいはそれを含有する植物抽出物を、ヒ
トまたは動物に投与することを特徴としている。

【００２２】特に、上記の治療は、アレルギー性または
運動誘引性の気管支喘息、枯草熱、発作性気管炎及び鼻
炎、ジンマシン、アレルギー性皮疹、湿疹、アレルギー
起源のレッド・ブロッチェスまたは皮膚過敏症、そう痒
症、クィンケ浮腫、アレルギー性結膜炎、そして薬物起
源のアレルギー反応を予防あるいは治療することに応用
される。

【００２３】具体的な例としては、ククルビチンあるい
は医薬用に適用可能なその塩またはエステルが、好まし
くは０．００１から１０重量％の濃度で局所的に投与さ
れる。具体的なもう一つの例としては、ククルビチンあ
るいは医薬用として適用可能な塩またはエステルが、ヒ
トに対して、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、好
ましくは、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投与量で
全身的に投与される。

【００２４】本発明はさらに、ククルビチン、化粧また
は医薬的に許容できる塩またはエステル、あるいは上で
定義したような、それを含有する植物抽出物が、化粧品
用または医薬用として適用可能な媒体、賦形剤、または
佐薬に含まれていることを特徴とする、化粧品用あるい
は、特に皮膚科の医薬用の組成物の製造方法に関する。

【００２５】具体的な例としては、ククルビチンあるい
は化粧品用または医薬用として適用可能なその塩または
エステルが、アレルギー発現の危険性を低減するため
に、完全な化粧品または医薬用製剤に含まれている。具
体的な他の例としては、抗アレルギー活性を有する組成
物が調製される。調製の種々の変形例が、前述した記載
の結果として得られる。

【００２６】上で述べた側面のいずれか一つの場におい
て、特別な具体例としては、前記ククルビチン、あるい
はその塩またはエステルを含む組成物、あるいは前記植
物抽出物を含む組成物は、さらに、リポソーム型小胞を
含んでいる。特別な例によれば、ククルビチンあるいは
その塩またはエステルは、リポソーム型小胞中に少なく
とも部分的にカプセル化されている。「リポソーム型の
小胞」とは、水和したラメラ脂質相と、イオン性または
非イオン性両親媒性脂質からなる小胞の両方を意味す
る。また、「リポソーム型小胞中に少なくとも部分的に
含まれる」とは、この記載及び特許請求の範囲において
は、ククルビチン、その塩またはエステルが、結合の形
態とは無関係に、リポソーム型小胞に結合していること
を意味する。しかし、好ましい結合は、リポソーム型小
胞中で、ククルビチン、その塩またはエステルが、カプ
セル化することにある。しかし、目的とする本発明の抗
アレルギー効果を得るために、全ての量が、含まれるま
たはカプセル化される必要はない。

【００２７】「リポソーム」型小胞は、脂質物質から合
成されることが知られている。「脂質」という用語は、
慣習的に「脂質」と呼ばれている、一般的に５以上の炭
素原子を含む、いわゆる脂質炭素鎖を含む全ての物質を
含んでいる。本発明によれば、ラメラ脂質相またはリポ
ソーム型小胞のどちらかを形成するために、両親媒性脂
質、即ちイオン性または非イオン性でも同じだが、親水
性基と親油性基を持つ分子からなる脂質が、脂質として
用いられ、これらの両親媒性脂質は、水相が存在すれ
ば、ラメラ脂質相あるいはリポソーム型小胞を形成する
ことができる。

【００２８】特に、これらの脂質の中で、リン脂質、ホ
スホアミノ脂質、糖脂質、ポリオキシエチレン化脂肪ア
ルコール、選択的にポリオキシエチレン化されたポリオ
ールのエステルが挙げられる。そのような物質は、例え
ば、選択的に水素化された卵または大豆レシチン、ホス
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴ
ミエリン、セレブロシド、オキシエチレン化ステアリン
酸ポリグリセロールからなる。

【００２９】水和したラメラ脂質相またはリポソーム中
に、本発明に従って使用される化合物の含有は、例え
ば、ＵＳ−Ａ−４５０８７０３公報の記載や、それとＵ
Ｓ−Ａ−４６２１０２３公報の記載を組み合わせたよう
な、周知の合成方法に従って行われる。

【００３０】第７の側面として、本発明は、１−ベンジ
ル−３−ピロリジノンを出発原料とすることを特徴とす
る、ククルビチンの合成方法を含んでいる。この合成方
法の具体的で特別な例は、１−ベンジル−３−ピロリジ
ノンを、塩化アンモニウムとシアン化カリウムとのアン
モニア溶液を用いて処理し、（±）−３−アミノ−１−
ベンジル−３−シアノピロリジンを得る。この化合物
を、酸性または塩基性加水分解し、（±）−３−アミノ
−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸に変換し、
最後に水素による還元、好ましくは、触媒による水素添
加分解を行って、（±）−３−アミノ−３−ピロリジン
カルボン酸または（±）−ククルビチンを得る。

【００３１】好ましい例としては、上記アンモニア溶液
が水性アルコール溶液であり、アルコールはイソプロパ
ノールまたはメタノールであるのが好ましい。他の好ま
しい変形例では、上記加水分解が、６Ｎの臭化水素酸水
溶液を用いて行われる。さらに他の好ましい例では、触
媒による水素添加が、水性反応媒体中に分散された炭上
のパラジウムのような触媒存在下で、水素雰囲気で水中
で行われる。合成方法の好ましい具体例としては、１−
ベンジル−３−ピロリジノンを、塩化アンモニウムとシ
アン化カリウムと、１：４：４のモル比率で、室温で、
少なくとも４８時間反応させる。

【００３２】具体的な他の特別な例では、光学異性体
を、ラセミ混合物から、当業者に周知の分離方法で、特
に、ジアステレオマーの合成を経て分離する。本発明の
ククルビチンの合成方法は、特に、ラセミ体のククルビ
チンを、従来法の２倍から３倍の高収率で合成できる。

【００３３】本発明の他の目的、特徴、効果は、以下に
続く説明によって明らかになるだろう。その説明は、ク
クルビチンの合成の種々の実施例、薬理的試験の結果を
報告する種々の例、化粧品または医薬用製剤の種々の例
を参照して与えられる。なお、実施例において、特に断
わらない場合は、パーセントは重量％を意味している。

【００３４】

【実施例】（実施例１）ラセミ混合物形態のククルビチン（cucurbitine）の合
成 操作手順を以下に示す。 ａ）（±）−３-アミノ−１−ベンジル−３−シアノピ
ロリジンの合成 ２−プロパノ−ル、３ｍｌ中に溶解する１−ベンジル−
３−ピロリジノン０．５ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）を、２
８％のアンモニア溶液７ｍｌ中の塩化アンモニウム０．
６１５ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）とシアン化カリウム０．
７４１ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。この混
合物は、室温で３日間撹拌する。この溶液は、１０％の
炭酸カリウムの溶液１５ｍｌで洗浄され、ジクロロメタ
ン（３×ｃ１５ｍｌ）で抽出される。硫酸マグネシウム
上で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、油（０．４７５ｇ）
が得られる。

【００３５】生成物は、固体充填物を持つシリカカラム
で精製される。それが４：２のエ−テル／石油エ−テル
の混合物で抽出される。ベ−ジュの固体０．４０２ｇが
得られ（収率：７０％）、この固体は以下のＮＭＲスペ
クトルを持つ３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノ−
ピロリジンからなる。¹ ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃１．８（ブロ−ド
ｓ，２Ｈ，ＮＨ₂）；１．９７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_4,4´
＝１３．４，Ｊ_4,5＝８，Ｊ_4,5´＝５．４）；２．５
（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_4,4´＝８，Ｊ_4,5´＝８，Ｊ₄´_,5
´＝５．４）；２．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ_2,2´＝９．
４）；３．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ₂´_,2＝９．４）；３．
６７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅）；７．３３（ｍ，５
Ｈ，芳香性プロトン）。

【００３６】ｂ）（±）−３−アミノ−１−ベンジル−
３−ピロリジンカルボン酸、または、（±）−１−ベン
ジルククルビチンの合成 上記のように得られる化合物の加水分解は、酸性媒体中
または塩基性媒体中のいずれかで実行される。

【００３７】酸性媒体中の加水分解：ステップａ）で得
られた３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジ
ン０．３ｇ（１．４９ｍｍｏｌ）を、４８％の臭化水素
酸５ｍｌ中に溶かし、４時間、４０−５０℃に保持す
る。臭化水素酸が蒸発した後、生成物をシリカカラムで
精製する。不純物は、ＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノ−ル１５％で
取り除かれ、アミノ酸は、メタノ−ル／水１５％で抽出
される。メタノ−ルを除去した後、化合物は、最小量の
水性媒体中、加熱下、獣炭で脱色され、その後、凍結乾
燥される。

【００３８】暗黄色の固体が得られ（収率：８０％）、
これは、以下のＮＭＲスペクトルを持つモノまたはジヒ
ドロブロマイド形態の（±）−３−アミノ−１−ベンジ
ル−３−ピロリジンカルボン酸からなる。¹ ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、Ｄ₂Ｏ２．４７−２．６９
（ｍ，１Ｈ，Ｈ₄）；２．７５−２．９１（ｍ，１Ｈ，
Ｈ₄′；３．６９−３．９４）（ｍ，３Ｈ，Ｈ₅，Ｈ
₅´，Ｈ₂）；４．１２（ｄ，Ｊ_2,2´＝１４．２，１
Ｈ，Ｈ₂´）；４．５８（２ｄ，Ｊ＝１３．８，２Ｈ，
ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅）；７．６２（ｓ，５Ｈ，芳香性プロト
ン）。

【００３９】塩基性媒体中の加水分解 ステップａ）の３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノ
ピロリジン２８０ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）を、エタノ
−ル２ｍｌに溶かす。１０％の水酸化ナトリウム溶液５
ｍｌを加え、混合物を５時間還流する。冷却後、４８％
の臭化水素酸で酸性化する。生成物は、シリカカラム、
メタノ−ル／水１０％で精製される。生成物は、獣炭で
脱色され、その後、凍結乾燥される。臭化ナトリウム塩
を存在させることにより、１００％以上の収率が得られ
た。

【００４０】存在する塩を取り除くために、ピロリジン
２００ｍｇが用いられ、１０％の水酸化ナトリウム溶液
を用いてｐＨ８に達せられる。Duolite Ｃｌ^-に２規定
の臭化水素酸を充填する。塩は蒸留水で取り除かれる。
ピロリジンを引き離すために、０．１規定の臭化水素酸
溶液が使用される。凍結乾燥後、（±）−３−アミノ−
１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸１２０ｍｇが
得られる（収率：４０％）。

【００４１】ｃ）（±）−３−アミノ−３−ピロリジン
カルボン酸、または、（±）−ククルビチンの合成 ステップｂ）で得られた（±）−３−アミノ−１−ベン
ジル−３−ピロリジンカルボン酸ヒドロブロマイド３０
０ｍｇを、１０ｍｌの水に溶かす。パラジウム１０％を
含む炭０．５ｍｇを分散させ、この懸濁液を、大気圧
下、水素雰囲気中に置く。撹拌は、１８時間続けられ
る。瀘紙を通して瀘過して凍結乾燥させ、黄色の固体を
得た（９８％）。これは、以下のＮＭＲスペクトルを持
つ（±）−３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸、ま
たは、（±）−ククルビチンからなる。¹ ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、Ｄ₂Ｏ２．４５（ｍ，１Ｈ，
Ｈ₄）；２．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ₄′）；３．６１（ｄ，
１Ｈ，Ｊ_2,2´，＝１３．４）；３．６７−３．７８
（ｍ，２Ｈ，Ｈ₅，Ｈ₅´）；４（ｄ，１Ｈ，Ｊ₂´_,2，
＝１３．４）。

【００４２】（実施例２）（±）−ククルビチン合成の収率の最適化 操作手順は、上記実験例１のように、ステップｂ）にお
いて、６規定の臭化水素酸を用いて加水分解させたが、
ステップａ）の反応物の割合を変化させた。得られた収
率を以下の表１に示す。

【００４３】

【表１】 Ｎ．Ｂ．Ｐ：１−ベンジル−３−ピロリジノン（pyrrol
idinone） ＊ ：アミノニトリル（aminonitorile）、単離
されていない ＣＮ ：３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピ
ロリジンの収率 ＣＯＯＨ−：３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸の
全体の収率

【００４４】表１の最後のコラムは、初期の反応物に対
する（±）−ククルビチンの収率を含む。収率は、反応
が室温で４８時間を越えて進行し、１−ベンジル−３−
ピロリジノン、塩化アンモニウム、シアン化カリウムの
各反応物が１：４：４の割合で使用されれば、最も良好
であることが観察された。さらに、臭化水素酸を用いた
加水分解は、加水分解剤として同じ濃度の塩化水素酸を
用いたときより高い収率を導くことが観察された。

【００４５】（実施例３）ククルビチンの光学異性体の分離 分離方法は、それ自体知られているように、エステル化
による酸性基の保護と環状アミン基の保護の後、光学的
に活性な試薬を用いて（±）ククルビチンのカップリン
グによるジアステレオマ−の誘導体の調製に基づく。ク
クルビチンの一つまたは他の異性体に相当する異性体の
各形は、クロマトグラフィ−により分離され、特に、高
速液体クロマトグラフィ−、または、シリカカラムによ
り分離される。その後のククルビチンの二つの鏡像体を
再生するために、保護するエステルを鹸化し、そして、
酸性基を自由にするために加水分解し、例えば、アミン
基がベンジルラジカルによる置換によって保護される場
合には、実施例１に述べた水素添加分解によりアミン基
を自由にする。

【００４６】この方法に用いられる試薬として、−（１
Ｓ）−カムファニルクロライド（camphanyl chlorid
e）、−（Ｓ）−（−）−α−メトキシ−α−（トリフ
ルオロメチル）フェニル酢酸、−Ｎ−（タ−ト−ブトキ
シカルボニル（tert-butoxycarbonyl）−Ｌ−アラニン
のような左旋性のＳ光学活性な化合物を用いることがで
きる。この例は、（１Ｓ）−カムファニルクロライドを
用いたカップリング手段により、ククルビチンのラセミ
体の分割を述べる。 ａ）（＋）−１−ベンジルククルビチンの酸性基の保
護：メチルエステルの合成

【００４７】実験例１のステップｂ）で得られた（±）
−１−ベンジルククルビチンの０．１ｇ（０．２０ｍｍ
ｏｌ）を、チオニルクロライド（０．２８ｍｍｏｌ）と
メタノ−ル（２ｍｌ）とを氷で冷却した溶液にゆっくり
加える。反応温度は、−５℃以上に上げてはいけない。
混合物を０℃で２時間撹拌し、そして、二日間で室温に
戻す。蒸発後、生成物は、固体充填物を持つシリカカラ
ムで精製される。（溶離剤はＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノ−ル
１０から５０％まで） 黄色の生成物が、７０％の収率で得られ、これは（±）
−１−ベンジルククルビチン メチルエステルからな
る。

【００４８】ｂ）（１Ｓ）−（−）−カムファニルクロ
ライドとのカップリング 塩化メチレン１．５ｍｌ中に溶解させた（±）−１−ベ
ンジルククルビチンメチルエステルの１モルをトリエチ
ルアミンの１モルで中和する。（１Ｓ）−（−）−カム
ファニルクロライド１．１当量を加える。混合物は、１
６時間室温で撹拌される。生成物は、固体充填物（溶離
剤はＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール１０％）を持つシリカコラ
ムで精製される。ジアステレオイソマ−の分離は、各種
カラムのＨＰＬＣによって達成され、特に、ＮＨ₂−グ
ラフトゾルバックス（grafted Zorbax）で 達成され
る。

【００４９】（実施例４） ククルビタ・ペポの果肉からのククルビチンの製造 新鮮なククルビタ・ペポの果物を半分に切断し、種の抽
出物の製造に使用される種が取り除かれる。その結果得
られた果肉が、粉末にされ、凍結乾燥される。粉末を回
復させ、粉末１００ｇに対して１リットルの割合で石油
エ−テルを用いて脱脂される。ククルビタ・ペポの果肉
の望ましい抽出物からなる不溶物は、瀘過作用によって
回収する。この抽出物の中のククルビチンの割合は、Ｈ
ＰＬＣにより検査され、ククルビチンの重量で０．０３
％の濃度が、脱脂した乾燥抽出物に得られた。

【００５０】その後、脱脂された乾燥抽出物を水に入
れ、完全に溶解するまで、撹拌下、約５０℃に加熱され
る。９５％のエタノ−ルの当量が、懸濁液中の蛋白性物
質を沈澱させるために加えられ、これが遠心分離により
取り除かれる。そのときに、澄んだ上清の残物が、６０
％の過塩素酸を用いてｐＨ５．０まで酸性化される。こ
のように酸性化された溶液は、収集する過塩素酸ククル
ビチンを沈澱させるために、少なくとも２日間冷凍機中
に置かれる。ククルビチンは、その技術の熟練者の慣習
的な方法で、特に、陽イオン交換樹脂（Ｎａ⁺型 ）を通
る輸送および減圧下で溶出液の蒸発により、過塩素酸ク
クルビチンから得られる。

【００５１】（実施例５） ククルビタ・ペポの種の抽出物の調製 あらかじめはぎとられたククルビタ・ペポの種１．５ｋ
ｇをすりつぶす。得られた粉末は、脂肪を取り除くため
に、３回、（３リットル、２リットル、１．８リット
ル）のヘキサンで抽出される。得られた乾燥ケ−キは、
約ｐＨ４に維持された塩酸溶液で抽出される。この抽出
は、３つのステ−ジで行なわれ、二つは約２２℃の室温
で、三つ目は７０℃で行なわれる。各ステ−ジでは、ケ
−キ溶液（cake-solution）が塩酸溶液（最初の場合が
２リットルであり、残り２つの 場合が２．５リットル
である）に接触する時間は、２４時間である。

【００５２】排液後、固形残留分は取り除かれ、水性の
相は、集められ、部分的に蒸発され、遠心分離される。
遠心分離されたペレットは、蒸留水で洗浄され、その
後、捨てられる。洗浄液は、遠心分離された濃縮物に混
ぜられる。

【００５３】水の留分は再濃縮され、そして、等重量の
エタノ−ルで処理する。白い沈澱物が遠心分離によって
取り除かれる。水性−アルコ−ル性の上清は、例えば、
水酸化ナトリウムを用いて中和され、そのまま使用する
こともできる（−）−ククルビチンを含む抽出物を構成
する。使用される種のバッチにより、（−）−ククルビ
チンを３から５％含有する粉末を得るために、アルコ−
ルを消散させ、得られた水性溶液を霧状にすることも可
能である。

【００５４】（実施例６） ククルビタ・ペポの種の（−）−ククルビチンが豊富な
抽出物の調製と、精製された（−）−ククルビチンの生
成 Ａ−ククルビタ・ペポの種の抽出物の調製 出発物質は、剥皮されたまたはそうでないククルビタの
種であって、バッチまたは原料により、重量で０．２か
ら０．４パ−セントの（−）−ククルビチン含量を持つ
もの、または、バッチまたは原料により、重量で０．４
から０．８パ−セントの（−）−ククルビチン含有量を
持つククルビタの種の油のないケ−キで構成される．

【００５５】出発物質は、約１００マイクロメ−タ−の
粉状にされていることが望ましい。この粉状の物質は、
室温で、粉状のケ−キの場合は２時間、種の場合は１６
時間まで、約ｐＨ３．５の酸性の水（重量で０．１％濃
度の硫酸）に漬けて処理される。使用される酸性の水の
量は、出発物質の重量の約５倍である。そして、全部
を、大気圧で、１時間沸騰させる。８０℃に冷却した
後、混合物を瀘過し、適切に遠心分離する。得られた水
相は、８０℃から９０℃の温度に引き上げられ、その
後、０．５マイクロメ−タ−のフィルターを通して細か
く瀘過される。リットル当たり約１０ｇの乾燥物を含有
する果汁がそのために得られる。

【００５６】この果汁は、部分的な吸引下、加熱による
予備濃縮を行って、乾燥物質の約２５０ｇ／ｌの濃度に
変化させる。この予備濃縮物は、その後、４℃で４８時
間置かれ、減圧下、後の濃度をリットル当たり５００ｇ
の乾燥物となるように濃縮し、再び４８時間４℃にお
く。これらの操作の後に、加圧瀘過機を通す瀘過を行
う。乾燥物質を４０から５０％含み、（−）−ククルビ
チンを１から２％含有する抽出物が、その結果として得
られる。収率は、出発物質のトン当たり、抽出物が約２
００リットルである。

【００５７】Ｂ−精製された（−）−ククルビチンの製
造 リットル当たり乾燥物質を２５０から３００ｇ含有する
前記含有物は、水酸化ナトリウムを用いて、ｐＨ７．５
に中和される。混合物は、加圧瀘過機を通して瀘過さ
れ、そして、瀘過液は、陽イオン交換樹脂（Ｎａ⁺型）
を通過させる。溶出が、アンモニア溶液を用いて行なわ
れる。部分的な減圧下、溶出液を熱的に濃縮した後、シ
ロップが得られ、この乾燥物質は、重量で約５０％の
（−）−ククルビチンを含む。望ましくは、このシロッ
プは、凍結乾燥される。この目的のために、タルクのよ
うな中性の粉末のキャリァを混合させるのがよい。

【００５８】（実施例７） ヒスタミン生成に関するククルビチンの阻止活性につい
ての例証 （１−Ａ）酵素的試験による この試験は、ヒスチジンをヒスチミンに転化するヒスタ
ジンデカルボキシラーゼ（ＨＤＣ）酵素に対するククル
ビチンの阻止活性を、ＨＤＣ阻止剤として知られている
トリトカリン（tritoqualine）のそれと比較した結果に
基づいている。このトリトカリンは、カルピ Ｃ．，マ
ギ Ｇ．Ｃ．「Bull. Soc Ital. Sper.」1968年，44（6
543-4）に記載され、「Hypostamine（登録商標）」と
して低ヒスタミン剤として治療的に用いられているもの
である。

【００５９】ＨＤＣに対する阻止活性は下式の化学反応
に基づく測色分析によって容易に評価することができ
る。

【化２】 上式において、ＭＢＴＨは３−メチル−２−ベンゾチア
ゾリノン ヒドラゾンであり、ＤＭＡＢは３−（ジメチ
ルアミノ）安息香酸である。

【００６０】実験によれば、青色呈色の生成は消費され
たヒスチジンの濃度に比例することが観察された。そこ
で、反応の開始速度を決定し、かつ、いわゆるミカエリ
ス曲線（「Fundamentals of Enzymology」第二版．オク
スフォード大学出版，1989年版に記載）を描くことが可
能となる。この開始速度は、１分間当りの吸光度の変化
として表すことができる。

【００６１】ヒスチジンの種々な初期濃度、すなわち、
１３２ｎｍｏｌ、２６５ｎｍｏｌおよび５３０ｎｍｏｌ
において、それぞれ活性体なしの場合、ＨＤＣ阻止剤と
して知られるトリトカリンを用いた場合、および本発明
に従う阻止剤としてのラセミ体ククルビチンを用いた場
合に得られた結果を下記表２に示す。またこの結果をミ
カエリス曲線として図１に示す。

【００６２】

【表２】

【００６３】表２および図１のミカエリス曲線に示され
た結果から明らかなように、ククルビチンはトリトカリ
ンより遥かに強力なＨＤＣ阻止能力を有している。これ
は当業者にとって驚くべき結果である。

【００６４】（１−Ｂ）ＲＩＡ分析による ククルビチンの抗ヒスタミン活性は、以下の方法にした
がって、放射線免疫学的測定法（ラジオイムノアッセイ
または「ＲＩＡ」と称する）によっても例証することが
できる。この測定法は、ＨＤＣ酵素の作用下に生成する
ヒスタミンを、ＲＩＡ法によって直接に測定するもので
ある。この測定法は当業界ではよく知られたものであ
り、特に、イムノテック社（フランス国マルセイユ）か
ら市販されている「HISTAMINE ラジオイムノアッセイ
キット（Cat. ≠ 1302）」と呼ばれる測定キットの
使用説明書に詳しく記載されている。

【００６５】それぞれ活性体なしの場合、対照活性体と
してのトリトカリンを用いた場合、および本発明に従う
抗ヒスタミン剤としての合成ラセミ体ククルビチンを用
いた場合について、ｐＨ６．３のリン酸塩緩衝液中１６
×１０^-3モル濃度のヒスチジンに対して放出されたヒス
タミンの量をナノモルの水準で時間を追って測定する。
トリトカリンとククルビチンとは、２×１０^-3モルの濃
度で用いた。この結果を、放出されたヒスチジンのナノ
モル量で表して下記の表３に示す。またこの結果を曲線
として図２に示す。ここでは、放出されたヒスタミンの
ナノモル数を縦軸に、分単位の時間を横軸にとり、活性
体なしの曲線は実線で、トリトカリンで得られた曲線は
一点鎖線で、またククルビチンで得られた曲線は点線で
示した。

【００６６】

【表３】 ^*Ｉ ：阻止率％^** ：放出されたヒスタミンのナノモル数

【００６７】表３から、放出されるヒスタミンの量がク
クルビチンの存在によって著しく低減されたことは明か
である。ここに得られたＲＩＡ法による測定結果から、
ククルビチンはヒスタミン生成に関して、トリトカリン
よりさらに強力に、僅か数分以内に著しい阻止能力を発
現するものであることが確認された。以下の実施例で
は、本発明に従う化粧品または医薬品、特に皮膚病学的
組成物の種々な処方例を示す。

【００６８】 （実施例８） 錠剤 経口投与錠一錠あたり （±）−ククルビチン １００ｍｇ でん粉 ３８ｍｇ ラクトース ７５ｍｇ タルク １０ｍｇ その他の賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを含む）を加えて 総量 ２５０ｍｇ 適用：アレルギー性症候群、特に皮膚性および呼吸器性
症候群に対する予防的および治療的処置。 投与量：成人に対し１日１〜１０錠。１５才未満の児童
に対しては半分に減量。

【００６９】 （実施例９） エロゾルパウダー 加圧缶中１００ｇあたり （±）−ククルビチン ３ｇ マンニトール １ｇ 噴射ガス ９６ｇ 適用：気管支ぜんそく、およびぜんそく様気管支炎を含
む全ての呼吸器系アレルギー性症候群に対する予防的お
よび治療的処置。 投与量：気管支内投与、１日平均４〜６回吸入。

【００７０】（実施例１０） 過敏症皮膚に対する刺戟緩和乳液 実施例５に示した種子抽出液（分析値：（−）−ククル
ビチン３％） １０ｇ過敏症皮膚用の通常の化粧用乳剤
（脂肪族アルコール、ポリオキシエチレン化脂肪族アル
コール、鉱油、パルミチン酸イソプロピル、グリセロー
ル、ゲル化剤、保存料、香料、水）を加えて総量
１００ ｇ

【００７１】（実施例１１） 低アレルギー性メーキャップ用ファンデーション 実施例４に従って（−）−ククルビチンを強化したクク
ルビタ・ペポ果実の抽出物（（−）−ククルビチン１％
含有） １０ｇ 通常のメーキャップ用ファンデーション基材（脂肪酸エ
ステル、スクワラン、大豆レシチン、揮発性シリコー
ン、プロピレングリコール、キサンタンガム、遮光剤、
顔料、保存料、香料、水）を加えて総量
１００ｇ

【００７２】（実施例１２） 抗刺戟性マスカラ （±）−ククルビチン １．０ｇ ウルトラマリンブルー ９．０ｇ ヘキサデシルアルコール ７．４ｇ プロピレングリコール ９．０ｇ ステアリン酸 １１．３ｇ モノステアリン酸グリセリド ４．４ｇ トリエチルアミン ３．６ｇ 保存料 ０．３ｇ 水を加えて総量 １００ｇ

【図面の簡単な説明】

【図１】 種々のヒスチジン初期濃度における、活性体
なしの場合、ＨＤＣ阻止剤として知られるトリトカリン
を用いた場合、および本発明にかかる阻止剤としてのラ
セミ体ククルビチンを用いた場合に得られた反応の開始
速度に係るミカエリス曲線を示す。

【図２】 ＲＩＡ法による測定結果を示す。放出された
ヒスタミンのナノモル数を縦軸に、分単位の時間を横軸
にとり、活性体なしの曲線は実線で、トリトカリンで得
られた曲線は一点鎖線で、またククルビチンで得られた
曲線は点線で示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 9/48 Ａ６１Ｋ 9/48 35/78 35/78 Ｓ Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 11/06 17/00 17/00 27/02 27/02 37/08 37/08 43/00 １１３ 43/00 １１３ (72)発明者 ヴァレリー・チュエリィ フランス・45370・クレリー・セン・タン ドレ・リュ・マレシャル・フォシュ・146 (72)発明者 ジェラール・ギョーム フランス・45100・オルレアン・リュ・オ ーギュステ・ルノワール・２ Ｆターム(参考） 4C076 AA19 AA54 BB01 BB31 CC03 CC18 DD28 DD38 DD41 DD67 EE38 FF04 4C083 AC022 AC072 AC122 AC242 AC352 AC422 AC532 AC851 AC852 AD152 AD352 AD572 CC01 CC02 CC12 CC14 DD31 EE13 EE14 4C086 AA01 AA02 BC07 MA01 MA24 MA37 MA52 MA63 NA05 ZA33 ZA34 ZA59 ZA89 ZB13 ZC45 ZC75 4C088 AB19 AC04 BA09 CA05 CA12 CA21 CA22 MA01 MA24 MA37 MA52 MA63 NA05 ZA33 ZA34 ZA59 ZA89 ZB13 ZC45 ZC75

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも０．５重量％のククルビチン
   を含むように精製されたウリ科植物（Cucurbitaceae）
   果肉抽出物の形態の、ククルビチン、あるいはその化粧
   品的に許容可能な塩またはエステルからなることを特徴
   とする、抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤。
2. 【請求項２】 ウリ科植物の種子抽出物の形態の、クク
   ルビチン、あるいはその化粧品的に許容可能な塩または
   エステルからなることを特徴とする、抗ヒスタミンまた
   は抗アレルギー剤。
3. 【請求項３】 ククルビタ・ペポ（Cucurbita pepo）の
   種子を抽出して精製することによって得られたククルビ
   タ・ペポの種子抽出物の形態の、ククルビチン、あるい
   はその化粧品的に許容可能な塩またはエステルからなる
   ことを特徴とする、抗ヒスタミンまたは抗アレルギー
   剤。
4. 【請求項４】 請求項１ないし３のいずれか一項に記載
   の抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤をカプセル化する
   ことを特徴とする、抗ヒスタミン活性または抗アレルギ
   ー活性を有するリポソーム小胞。
5. 【請求項５】 最終的な組成物のアレルギー性を低減す
   るのに有効な量の請求項１ないし３のいずれか一項に記
   載の抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤を、化粧品また
   は薬学的組成物に添加することを特徴とする、化粧品ま
   たは薬学的組成物のアレルギー性を低減する方法。
6. 【請求項６】 前記薬学的組成物が、皮膚科学的に用い
   られるものであることを特徴とする、請求項５記載の方
   法。
7. 【請求項７】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の濃
   度が、０．００１％〜１０％であることを特徴とする、
   請求項５または６に記載の方法。
8. 【請求項８】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の濃
   度が、０．０１％〜５％であることを特徴とする、請求
   項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 請求項４に記載されたリポソーム小胞を
   前記組成物中に添加することを特徴とする、請求項５な
   いし８のいずれか一項に記載の方法。
10. 【請求項１０】 請求項１ないし３のいずれか一項に記
    載の抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤、および化粧品
    的に許容可能な佐薬、賦形剤または媒体を含むことを特
    徴とする、抗ヒスタミン活性または抗アレルギー活性を
    有する化粧品組成物。
11. 【請求項１１】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の
    濃度が、０．００１％〜１０％であることを特徴とす
    る、請求項１０記載の化粧品組成物。
12. 【請求項１２】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の
    濃度が、０．０１％〜５％であることを特徴とする、請
    求項１１記載の化粧品組成物。
13. 【請求項１３】 請求項４記載のリポソーム小胞が添加
    されたことを特徴とする、請求項１０ないし１２のいず
    れか一項に記載の化粧品組成物。
14. 【請求項１４】 請求項１ないし３のいずれか一項に記
    載の抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤、および薬学的
    に許容可能な佐薬、賦形剤または媒体を含むことを特徴
    とする、抗ヒスタミン活性または抗アレルギー活性を有
    する薬学的組成物。
15. 【請求項１５】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の
    濃度が、０．００１％〜１０％であることを特徴とす
    る、請求項１４記載の薬学的組成物。
16. 【請求項１６】 抗ヒスタミンまたは抗アレルギー剤の
    濃度が、０．０１％〜５％であることを特徴とする、請
    求項１５記載の薬学的組成物。
17. 【請求項１７】 請求項４記載のリポソーム小胞が添加
    されたことを特徴とする、請求項１４ないし１６のいず
    れか一項に記載の薬学的組成物。
18. 【請求項１８】 皮膚科学的に用いられることを特徴と
    する、請求項１４ないし１７のいずれか一項に記載の薬
    学的組成物。
19. 【請求項１９】 気管支、皮膚または目に用いられるこ
    とを特徴とする、請求項１４ないし１７のいずれか一項
    に記載の薬学的組成物。
20. 【請求項２０】 請求項１０ないし１３のいずれか一項
    に記載の化粧品組成物を、皮膚に局所的に適用すること
    を含む、皮膚アレルギーの危険性を予防または低減する
    ための化粧的ケア方法。