KR0156678B1 - 안지오텐신 전환효소 저해제 - Google Patents

안지오텐신 전환효소 저해제

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Abstract

본 발명은 안전성이 높은 식품 유래의 안지오텐신 저해제에 관한 것으로, 본 발명에 의하면 His-His-Leu 또는 His-Leu-Leu의 구조식을 가지는 안지오텐신 전환 효소 저해제 또는 생리적으로 허용가능한 이의 염이 제공된다..
본 발명에 따른 안지오텐신 전환 효소 저해 물질을 안지오텐신 전환 효소의 작용으로 발생하는 혈압상승을 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 식품 유래의 것이므로 인체에 대한 안전성이 높고, 구조가 단순하여 대량 생산에 유리하다.

Description

안진오텐신 전화요소 저해제
제1도는 된장으로 부터 본 발명의 펩티드를 분리하는 과정 중 3차 크로마토그래피한 결과를 나타내는 크로마토그램이고,
제2도는 된장으로 부터 본 발명의 펩티드를 분리하는 과정 중 4차 크로마토그래피한 결과를 나타낸 크로마토그램이다.
본 발명은 안진오텐신-Ⅰ(angiotensin-Ⅰ)을 안진오텐신-Ⅱ로 전환시키는 안진오텐신 전환효소(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)의 활성을 저해하는 안진오텐신 전환 요소 저해제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 안전성이 높은 식품 유래의 안진오텐신 전환 효소 저해제에 관한 것이다.
안진오텐신 전환효소가 안진오텐신-Ⅰ을 안진오텐신-Ⅱ로 전환시키는 작용을 가진 것을 알려져 있는 사실이다. 전환된 안진오텐신-Ⅱ는 혈압을 상승시키는 작용을 가지며, 본태성 공협압의 주된 원인이 된다. 따라서, 안진오텐신 전환효소의 작용을 저해하여 혈압 상승을 억제하고자, 종래에 안진오텐신 전환효소의 활성을 저해하는 물질에 대한 다양한 연구가 이루어져 있다.
기존에 개발된 안진오텐신 전환효소 저해물질의 예로는 치료용 혈압 강하제인 캡토프릴(Captoril)과 D-2-메틸-3-머캅토프로파노일-L-프롤라인과 같은 합성물질이 있으며, 일본국 특허 공개 소62-270533호, 소64-5497호, 소64-83096호 등에 기술된 방법에 의하여 카세인 효소 분해물로부터 제조되는 펩티드와 일본국 특허 공개 평3-16798호에 기술된 방법에 의하여 분리 대두 단백 효소 분해물로 부터 제조되는 펩티드 등 식품 유래 물질이 있다. 합성된 안진오텐신 전환효소 저해물질들은 일반적으로 효소 저해 활성이 높으나, 합성물이기 때문에 많은 경우 부작용 등의 안전성에 문제를 가지고 있다. 반면, 카제인 효소 분해물이나 대두 단백 효소 분해물로부터 얻은 안진오텐신 전환효소 저해물질의 경우는 상기의 합성물에 비하여 일반적으로 저해 활성이 낮지만 식품 우래의 것이기 때문에 독성이 낮고 안전성이 높다. 따라서, 최근에는 식품 유래의 안진오텐신 전환효소 저해 텝티드를 분리한 후, 이를 유기 화학적으로 합성하여 대량 생산하려는 연구가 다수 이루어지고 있다. 그러나, 종래에 보고된 카제인이나 대두단백 유래의 펩티드는 6∼10 개의 아미노산으로 복잡하게 이루어져 있어, 합성 및 대량생산에 바람직하지 못한 특성을 가지는 것으로 평가된다.
이에 본 발명자들은 식품 유래 안진오텐신 전환효소 저해 텝티드로 혈압상승을 효과적으로 억제제할 뿐만 아니라 인체에 대한 안전성이 높아 식품으로서 투여할 수도 있고, 나아가 구조가 단순하여 대량 합성 및 생산에도 유리한 신규한 안진오텐신 전화효소 저해 물질을 찾아내기 위하여 연구한 결과 원하는 효과를 나타내는 트리펩티드를 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 고혈압에 효과를 나타내는 신규한 안진오텐신 전환효소 저해 물질을 제공하는 데에 있다.
또한, 본 발명의 목적은 식품 유래 펩티드로서 인체에 투여시 안전하며, 구조가 단순하여 대량 합성이 용이한 펩티드상 안진오텐신 전환효소를 제공하는 데에 있다.
이러한 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 의하면 하기의 구조식 [1] 또는 [2]로 표시되는 안진오텐신 전환효소 저해 물질 및 생리학적으로 허용가능한 이들의 염이 제공된다.
[1] His-His-Leu
[2] His-Leu-Leu
본 발명의 내용을 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명에 따른 구조식 [1] 및 [2]의 텝티드는 된장에 존재하는 펩티드로 일반적인 펩티드 분리법에 따라 분리할 수 있으며, 천연의 펩티드이므로 L-형(L-form)이다. 이들은 일반적인 공지의 펩티드 합성법에 따라 합성하는 것도 가능하다.
본 발명에 따른 텝티드는 생리학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할수 있으며, 특히 염산염, 염화수소산염, 요드화수소산염, 황산염 등의 무기산염과, 아세트산염, 구연산염, 주석산염, 유산염, 메탄설폰산염 등의 유기산염이 바람직하다.
본 발명에 따른 트리펩티드 또는 생리학적으로 허용 가능한 이의 염은 종래의 텝티드성 안지오텐신 전화 효소 저해 물질과 비슷하거나 그 보다 높은 활성을 나타내며, 식품 유래 텝티드이므로 인체에 투여시 안전하고, 구조가 단순하여 대량 생산성이 용이하다.
이하 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명의 범위가 이에 한하여 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
A. 된장으로부터 His-His-Leu 및 His-Leu-Leu 의 분리
먼저, 된장을 동결 건조하여 마쇄하였다. 된장 분말 300g을 5ℓ추출조에 넣고 3ℓ의 물을 가수하여, 30분간 진탕 추출한 후 3,000rpm에서 원심분리하여 상층액만을 회수하였다. 상층액을 토요 4번(Toto No. 4)필터 페이퍼로 여과하여 여과액을 회수하였다. 얻어진 여과액을 다시 아미콘사(Amicon CO. Ltd.)의 PM-10 한의 여과막을 사용하여 한외여과하였다. 얻어진 여과액을 동결 건조하여 보관하고, 크로마토그라피에 의하여 목적 텝티드를 분리하였다.
[크로마토그라피 조건]
: 분취용 고속 액체 크로마토그래피(Preparative high perfomance liquid chromatography) 모델 LC-20[Japan analytical institure]의 사용
1] 1차 크로마토그라피
- 컬럼: JAIGE-ODS-1-301컬럼[Japan analytical institure사]
- 이동상: 2%∼60%의 아세토니트릴, 유속 5㎖/분
- 텝티드의 검출: 214nm 자외선 검출기
2] 2차 크로마토그라피
- 컬럼: JAIGE-ES-502CP 컬럼
- 이동상: pH 4.2의 완충액(0.1M sodium succinate buffer), 유속 4㎖/분
- 텝티드의 검출: 214nm 자외선 검출기
3] 3차 크로마토그라피
- 칼럼: JAIGE-ODS-A-301컬럼
- 이동상: 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유한 10% 아세토니트릴 유속 1㎖/분
- 텝티드의 검출: 214nm 자외선 검출기
4] 4차 크로마토그라피
- 칼럼: JAIGE-ES-502N 칼럼
- 이동상: pH 7.5 트리스-염산 완충액(0.1M Tris-HCl buffer) 유속 1㎖/분
- 텝티드의 검출: 214nm 자외선 검출기
1차 크로마토그래피를 실시하여 총 7개의 분획으로 나누어 분취한 후 쿠시만과 쳉(Cushman and Cheung)의 방법에 따라 안지오텐신 전환효소 저해활성을 측정하였다. 측정 결과 5번째 분획의 저해활성이 가장 높았다. 따라서, 동 분획을 다시 2차 크로마토그라피하여, 총 5개의 분획으로 나누어 상기의 방법으로 안지오텐신 전환효소 저해활성을 측정하였다. 측정결과 3번째 분획이 저해활성이 가장 높았다. 이 분획을 사용하여 다시 3차 크로마토그라피하였다. 3차 크로마토그라피 결돠는 제1도에 나타내었다. 상기의 방법으로 분획하여 저해활성을 측정하여 가장 놓은 활성을 보이는 5번째 분획을 사용하여 4차 크로마토그라피하였다. 4차 크로마토그라피의 결과는 제2도에 나타내었다. 4차 크로마토그라피 결과 얻은 분획 A, B를 단백질 서열분석기로 분석하여 구조식 [1]의 His-His-Leu과 [2]의 His-Leu-Leu 트리텝티드의 분리를 확인하였다.
B. His-His-Leu 및 His-Leu-Leu의 안지오텐신 전환 효소 저해 호라성 측정
시판 안지오텐신 전환 효소와 이의 기질(HHL)을 반응시켜 안지오텐신 전환 효소의 작용으로 생성되는 히프릭산(Hippuric acid)의 양을 측정(214nm)하고, 동일한 조건에서 본 발명에 따른 트리텝티드가 존재하는 경우 생성하는 히프릭산(Hippuric acid)의 양을 측정(214nm)하여, 안지오텐신 전환 효소의 활성의 저해도를 평가하였다. IC50은 안지오텐신 전환 효소의 활성을 50% 저해하는 농도를 질소분석기로 분석하여 구하였다. His-His-Leu과 His-Leu-Leu의 IC50 은 각각 21.8μg단백질/㎖, 22.2μg단백질/㎖이었다.

Claims (2)

  1. 하기의 구조식 [1] 또는 [2]로 표시되는 안지오텐신 전환 효소 저해제 또는 생리적으로 허용가능한 이의 염.
    [1] His-His-Leu
    [2] His-Leu-Leu
  2. 제1항에 있어서, 상기 염의 염산염, 염화수소산염, 요드화수소산염, 황산염, 아세트산염, 구연산염, 주석산염, 유산염, 메탄설폰산염으로 구성된 그룹에서 선택된 것임을 특징으로 하는 안지오텐신 전화 효소 저해제.
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