JPH04299991A - アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドおよびその製造 法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、大豆蛋白を原料として
得られるアンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドおよび
その製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】高血圧の９０％を占めるといわれている
本態性高血圧にアンジオテンシン変換酵素（以下「ＡＣ
Ｅ」という）の阻害剤が効果的であることが明かにされ
、降圧剤としてＡＣＥ阻害剤であるカプトプリル、エナ
ラプリルなどが開発されてきた。近年、食品各種にもＡ
ＣＥ阻害作用が見いだされ、これらＡＣＥ阻害作用の原
因物質としてＡＣＥ阻害ペプチドが数多く報告されるよ
うになった。そして、安全性の高い食品原料由来のＡＣ
Ｅ阻害ペプチドを経口投与し高血圧を予防するという観
点から、食品蛋白を蛋白分解酵素で分解しＡＣＥ阻害ペ
プチドを生成するという試みがなされてきた。

【０００３】食品蛋白のうち安定して安価に供給される
大豆蛋白からも蛋白分解酵素で分解しＡＣＥ阻害ペプチ
ドを得ることが行われている。例えば、大豆蛋白のペプ
シン分解物中より４種類のＡＣＥ阻害ペプチドが単離さ
れ研究されている（化学と生物Ｖｏｌ．２７，　Ｎｏ．
１２，Ｐ７６６−７６８，１９８９）。しかし、食品蛋
白を蛋白分解酵素で分解して得られるペプチドのＡＣＥ
阻害作用は、ＡＣＥ阻害作用を有する限られた小数の種
類のペプチドによるものではなく、ＡＣＥ阻害作用を有
する多種類のペプチドによるものである。このため、１
種当たりの含量が少ない特定のＡＣＥ阻害作用を有する
ペプチドを単離して使用するよりも、蛋白分解酵素によ
り生成したペプチド混合物をそのままＡＣＥ阻害ペプチ
ドとして高血圧予防に利用することが望ましい。大豆蛋
白を原料としてＡＣＥ阻害ペプチドを製造する場合にお
いても、ペプチド混合物が強いＡＣＥ阻害作用を有し、
かつ高い回収率で得られる製造法が望まれるのである。

【０００４】大豆蛋白からＡＣＥ阻害ペプチドを得る方
法としては、例えば、大豆蛋白を特定の酵素（バチルス
属細菌由来のセリンプロテアーゼ、バチルス属細菌由来
の金属プロテアーゼ、植物由来のチオールプロテアーゼ
）を用いた加水分解物で分子量　３００〜１，５００　
のペプチドの含有量が４０重量％以上である加水分解物
を得る方法（特開昭６２−１６９７３２）がある。また
、大豆蛋白の各市販蛋白分解酵素製剤による加水分解物
のＡＣＥ阻害活性を測定しブロメラインＦ（天野製薬株
式会社製）、ビオプラーゼＰＮ４（ナガセ生化学工業株
式会社製）、プロチンＰＣ１０（大和化成株式会社製）
で良好な結果を得たという報告（信州大学農学部紀要　
　第２６巻第１・２号，Ｐ１３−１９，　　１９９０）
がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかし、これまで知ら
れた上記のペプチドは、ＡＣＥ阻害活性が高いもののペ
プチド回収率が低かったり、ペプチド回収率が高いもの
のＡＣＥ阻害活性が低いなど、高いＡＣＥ阻害活性と高
いペプチド回収率が両立していなかった。また、食品蛋
白分解物のＡＣＥ阻害ペプチドはカプトプリルなどの降
圧剤に比べ活性が低く高血圧予防のためには多量の摂取
を必要とするため、より高いＡＣＥ阻害活性を有するペ
プチドが望まれていた。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこれら問題
点を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、大豆蛋白を蛋白
分解酵素ブロメラインで蛋白分解率５０重量％以上７０
重量％以下となるように分解して得られるペプチドが高
いＡＣＥ阻害活性を有しかつ高回収率で得られること、
二軸エクストルーダー（以下「エクストルーダー」とい
う）で処理した大豆蛋白を蛋白分解酵素ブロメラインで
蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以下となるように
分解して得られるペプチドがさらに高いＡＣＥ阻害活性
を有しかつ高回収率で得られることを見いだし本発明を
完成するに至った。

【０００７】本発明で用いる大豆蛋白は、大豆より熱水
等で抽出して得られる豆乳、脱脂大豆、濃縮大豆蛋白、
分離大豆蛋白等を原料とすることができる。本発明で用
いるエクストルーダー処理した大豆蛋白は、上記大豆蛋
白原料固形分に対して水を２０〜５０重量％、好ましく
は３０〜４０重量％添加し、品温　１１０℃〜１９０　
℃、好ましくは　１５０〜１９０　℃、圧力が２０〜５
０ｋｇ／ｃｍ２　、好ましくは３０〜４０ｋｇ／ｃｍ２
　、滞留時間が５〜１８０　秒、好ましくは　１２０〜
１８０　秒、スクリュー回転数が８０〜３００ｒｐｍ、
好ましくは　１５０〜２５０ｒｐｍに調整してエクスト
ルーダー処理したものでよい。

【０００８】本発明では、大豆蛋白原料またはエクスト
ルーダー処理した大豆蛋白原料に蛋白分解酵素ブロメラ
インを作用させ蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以
下となるように分解する。これら大豆蛋白を該分解率に
分解する方法は、一般的に蛋白分解酵素で食品蛋白を加
水分解する工程に用いられる方法でよい。条件は大豆蛋
白原料の種類により異なるが、一般的には蛋白濃度１〜
１５重量％でよく、大豆蛋白原料をカッター等で細かく
切断しまたミル等で粉砕化し懸濁・溶解しやすくしても
よい。 蛋白分解酵素ブロメラインの添加量は力価にもよるが、
一般的には原料の大豆蛋白当たり１〜１０重量％でよい
。 反応ｐＨは６〜８でよい。反応温度は４０〜７０℃でよ
いが、特に滅菌工程を経ない場合には雑菌汚染および汚
染菌の産生する蛋白分解酵素による影響を防止するため
に５０℃以上でなければならない。ｐＨの調整には食品
に適した酸やアルカリを用いればよい。反応時間は１０
分〜２４時間でよい。蛋白分解酵素の反応を停止するに
は、加熱処理により蛋白分解酵素を失活させればよい。 このとき、食品に適した酸またはアルカリによりｐＨを
調整後、加熱処理を行ってもよい。

【０００９】本発明は、このようにして大豆蛋白をブロ
メラインで蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以下と
なるように分解して得られる分解液中のペプチド混合物
とエクストルーダー処理した大豆蛋白をブロメラインで
蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以下となるように
分解して得られる分解液中のペプチド混合物であり、こ
れらペプチド混合物が強いＡＣＥ阻害活性を有し、高回
収率で得られるというものである。エクストルーダー処
理すると大豆蛋白が変性し蛋白分解酵素の作用を受けや
すくなることはよく知られた事実であるが、大豆蛋白を
エクストルーダー処理することにより、その分解物であ
るペプチドのＡＣＥ阻害活性が向上することは知られて
おらず、本発明において明らかになったものである。こ
の原因はまだ解明されていないが、エクストルーダー処
理によるなんらかの変化のため大豆蛋白のブロメライン
による切断部位が変化するためではないかと考えられる
。　　本発明のＡＣＥ阻害ペプチドを利用する場合、大
豆蛋白分解液をそのまま利用してもよいし、遠心分離ま
たは濾過により沈澱物を除去しペプチドを回収してもよ
い。また、沈澱物除去の際ペプチドの回収を容易にする
ために酸やエタノール等を添加してもよい。さらに、沈
澱物中に残存するペプチドを回収するために、沈澱物残
渣を懸濁し再び固液分離を行ってもよい。

【００１０】

【実施例】以下、試験例および実施例により本発明をさ
らに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定さ
れるものではない。 〔試験例１〕市販豆乳（蛋白含量　３．７％）を各反応
温度に加温し、塩酸または水酸化ナトリウムで各反応ｐ
Ｈに調整した。次に各蛋白分解酵素を各々添加し反応さ
せた。 蛋白分解酵素の添加量、反応時間は、適当な蛋白分解率
が得られるように調節した。

【００１１】反応の停止は、塩酸または水酸化ナトリウ
ムにより反応液のｐＨを４．５とし１００℃に１０分間
加熱することにより行った。ここで各蛋白分解酵素によ
り得られた大豆蛋白分解液の蛋白分解率、ＡＣＥ阻害活
性、ペプチド回収率を求めた。その結果を表１に示す。

【００１２】

【表１】 表１に示すように、ブロメラインによって蛋白分解率５
０重量％以上７０重量％以下となるように分解して得ら
れたペプチドは、他の蛋白分解酵素により得られたペプ
チドよりも、高ペプチド回収率で、かつ高いＡＣＥ阻害
活性を有することがわかる。

【００１３】表１のように幅広い蛋白分解率のペプチド
を得、ＡＣＥ阻害活性、ペプチド回収率を同時に調べる
と、従来の方法（　特開昭６２−１６９７３２）で選択
されたバチルス属細菌由来のセリンプロテアーゼ、バチ
ルス属細菌由来の金属プロテアーゼ、植物由来のチオー
ルプロテアーゼがＡＣＥ阻害活性の高いペプチドを高回
収率で生成するわけではないこと、従来の方法では優れ
たＡＣＥ阻害活性のペプチドを生成しなかったペプシン
によっても比較的高いＡＣＥ阻害活性のペプチドが高回
収率で得られることがわかる。また、植物由来のチオー
ルプロテアーゼとしては最適とされていたパパインで得
られるペプチドは、ＡＣＥ阻害活性が比較的高いものの
高回収率で得られないことがわかる。このように単に植
物由来のチオールプロテアーゼといっても起源によりＡ
ＣＥ阻害ペプチドの生成に適・不適があり、ＡＣＥ阻害
ペプチドの生成に優れている蛋白分解酵素として植物プ
ロテアーゼを一括して選択することはできないのである
。

【００１４】このように蛋白分解率を指標としペプチド
のＡＣＥ阻害活性だけではなくペプチド回収率をも選択
の対象とすると、ＡＣＥ阻害ペプチドの生成に最も効率
的な蛋白分解酵素としてブロメラインが選択されるので
ある。 〔試験例２〕フジプロＲ（分離大豆蛋白、不二製油株式
会社製）を５重量％となるように水に懸濁し６０℃に加
熱した後、ブロメライン（ナカライテスク株式会社製）
を大豆蛋白当たり０．１〜３０重量％添加し２時間反応
させた。次に１００℃に１０分間加熱しブロメラインを
失活させ、得られた大豆蛋白分解液の蛋白分解率、ＡＣ
Ｅ阻害活性、ペプチド回収率、ペプチドの分子量分布を
測定した。その結果を表２に示す。

【００１５】

【表２】 表２に示すようにブロメラインによる蛋白分解率５０〜
７０重量％のとき得られるペプチドは、高ペプチド回収
率でかつ高いＡＣＥ阻害活性を有することがわかる。こ
れらのペプチドの分子量分布を測定した結果、蛋白分解
率が２３．６重量％である大豆蛋白分解液上清から得ら
れる加水分解物は分子量　３００〜１，５００　のペプ
チドの割合が４０重量％以上であるが、それにもかかわ
らずＡＣＥ阻害活性が低いことがわかる。また、蛋白分
解率が５０重量％以上になると分子量　３００〜１，５
００　のペプチドの割合が７２〜８２重量％と大きく変
化しないにもかかわらず、ＡＣＥ阻害活性は著しく変化
することがわかる。したがって、従来の方法（　特開昭
６２−１６９７３２）のようにＡＣＥ阻害活性の高いペ
プチドを高回収率で生成しうる蛋白分解酵素を選択する
条件として単に加水分解物中の分子量３００〜１，５０
０　のペプチドの割合が４０重量％以上であることのみ
を設定していたのではＡＣＥ阻害活性の高いペプチドが
高回収率で得られる蛋白分解酵素としてブロメラインを
選択できないのであり、幅広い蛋白分解率におけるＡＣ
Ｅ阻害活性、ペプチド回収率を調べた本発明において初
めてブロメラインを選択することができたのである。 〔試験例３〕本発明のブロメライン分解によって得られ
るＡＣＥ阻害ペプチドが、従来の報告（信州大学農学部
紀要　　第２６巻第１・２号，Ｐ１３−１９，　　１９
９０　）の中で良好な結果を得た大豆蛋白のブロメライ
ン分解物とは異なるものであることを説明するために以
下に試験結果を示す。

【００１６】フジプロＲ（分離大豆蛋白、不二製油株式
会社製）を５重量％となるように０．２Ｍリン酸バッフ
ァー（ｐＨ７．２）　に懸濁し３７℃に加温し、ブロメ
ラインＦ（天野製薬株式会社製）を大豆蛋白当たり２重
量％添加し２４時間反応させた後、ブロメラインを失活
させるために１００℃に５分間加熱した。ここで得られ
た大豆蛋白分解液を遠心分離し上清をブロメライン分解
物溶液として得た（信州大学農学部紀要　　第２６巻第
１・２号，Ｐ１３−１９，　　１９９０　の方法）。こ
こで得られた大豆蛋白分解液の分解率は７６．２％で、
大豆蛋白の分解が過剰に進行しており本発明とは明らか
に異なっていた。

【００１７】上清のブロメライン分解溶液は窒素濃度が
６，０７６ｐｐｍであり、報告に従いこの上清溶液をそ
のまま用いて報告に従ったＡＣＥ阻害活性試験に供する
と報告と同様ＡＣＥを１００％阻害した。これは報告中
のＡＣＥ阻害活性試験が、本発明中でＡＣＥ阻害活性測
定に用いているペプチド溶液のおよそ１００倍以上とい
う高濃度のペプチド溶液を用いているためである。尚、
本発明中でのＡＣＥ阻害活性測定に上記のブロメライン
分解物溶液を供したところＩＤ５０は窒素濃度１７ｐｐ
ｍ　であった。

【００１８】上記の報告では大豆蛋白からブロメライン
等の蛋白分解酵素でペプチドを作成したものの、「蛋白
分解率」のように得られるペプチドの基準となるものが
なかったために望ましいＡＣＥ阻害ペプチドの生成方法
が明確にできていなかったのである。本発明において、
ＡＣＥ阻害活性の高いペプチドを高回収率で生成しうる
蛋白分解酵素の選択には、各蛋白分解酵素の幅広い蛋白
分解率におけるＡＣＥ阻害活性とペプチド回収率を調べ
ることが必要であることが明らかとなり、大豆蛋白をブ
ロメラインで蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以下
となるように分解して得られるペプチドが強いＡＣＥ阻
害活性を有し、高回収率で得られるということがわかっ
たのである。 〔試験例４〕脱脂大豆をエクストルーダーに供給しなが
ら、脱脂大豆に対して水を３０重量％添加し、各品温、
　１１０℃〜１９０　℃で処理した後、ダイから出てき
た処理物をエクストルーダー処理脱脂大豆として得た。

【００１９】得られたエクストルーダー処理した脱脂大
豆を蛋白濃度５％となるように水に懸濁し６０℃に加熱
した後、ブロメラインＦ（天野製薬株式会社製）を大豆
蛋白重量当たり２重量％添加し、蛋白分解率約６０％と
なるように反応時間を調節し分解した。次に、１００℃
に１０分間加熱しブロメラインを失活させ遠心分離上清
をペプチド溶液として得、蛋白分解率、ＡＣＥ阻害活性
を求めた。その結果を表３に示す。

【００２０】

【表３】 表３に示すようにエクストルーダー処理した脱脂大豆を
分解して得られたペプチドは、未処理の脱脂大豆から得
られたペプチドに比べＡＣＥ阻害活性が高いことがわか
る。特に、エクストルーダー処理温度が　１５０℃以上
の脱脂大豆より得られたペプチドはＡＣＥ阻害活性がさ
らに高いことがわかる。 〔試験例５〕脱脂大豆をエクストルーダーに供給しなが
ら、脱脂大豆に対して水を３０重量％添加し、品温　１
７５℃で処理した後、ダイから出てきた処理物をエクス
トルーダー処理脱脂大豆として得た。

【００２１】得られらエクストルーダー処理した脱脂大
豆を蛋白濃度５％となるように水に懸濁し６０℃に加熱
した後、ブロメライン（ナカライテスク株式会社製）を
大豆蛋白重量当たり１重量％添加し反応させた。一定時
間後、反応液を分取し、１００℃に１０分間加熱しブロ
メラインを失活させ遠心分離上清をペプチド溶液として
得、蛋白分解率、ＡＣＥ阻害活性、ペプチド回収率を求
めた。 その結果を表４に示す。

【００２２】

【表４】 表４に示すようにエクストルーダー処理した脱脂大豆を
蛋白分解率５０〜７０重量％となるように分解して得ら
れたペプチドはＡＣＥ阻害活性が高くかつペプチド回収
率が高いことがわかる。

【００２３】以下に、蛋白分解率の測定方法、ＡＣＥ阻
害活性測定法、ペプチド回収率の測定方法、分子量分布
測定法について説明する。文中の各窒素重量、各窒素濃
度は、全てケールダール法により求めた。 （蛋白分解率の測定方法）蛋白分解率は、蛋白分解酵素
により生じる１２％トリクロロ酢酸（以下「ＴＣＡ」と
いう）可溶性窒素重量の、原料大豆蛋白中の１２％ＴＣ
Ａ不溶性窒素重量に対する割合をいい、次の計算式で求
めた。 蛋白分解率＝〔（大豆蛋白分解液中の１２％ＴＣＡ可溶
性窒素重量）−（大豆蛋白分解反応前の液中の１２％Ｔ
ＣＡ可溶性窒素重量）〕／〔（大豆蛋白原料中の全窒素
重量）−（大豆蛋白分解反応前の液中の１２％ＴＣＡ可
溶性窒素重量）〕×１００（％） （ＡＣＥ阻害活性測定法）大豆蛋白分解液を遠心分離し
て得た上清をペプチド溶液として分取し、ＡＣＥを５０
％阻害するときの窒素濃度（重量ｐｐｍ）をＩＤ５０で
表し、そのペプチドのＡＣＥ阻害活性とした。

【００２４】ＡＣＥ阻害活性の測定法は　Ｃｕｓｈｍａ
ｎら（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｙ，Ｖｏｌ．２０，Ｐ１６３７−１６４８，１９７１
）　の方法に準じて行った。ＡＣＥ溶液は、１０ｇのラ
ビットラングアセトンパウダー（Ｓｉｇｍａ社）を１０
０ｍｌ　の５０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ８
．３）　に懸濁・溶解後、遠心（４０，０００×ｇ）し
て得られた上清を水酸化カリウムでｐＨを８．３に補正
後、同バッファーで、２．５倍希釈したものを用いた。

【００２５】ＡＣＥの基質溶液は、ヒプリルヒスチジル
ロイシン（Ｓｉｇｍａ社）を濃度１２．５ｍＭ、塩化ナ
トリウム　７５０ｍＭ、ｐＨ８．３となるように　１７
５ｍＭリン酸カリウムバッファーに溶解したものを用い
た。ＡＣＥ阻害活性測定に供試したペプチド溶液は、適
当な窒素濃度に５０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐ
Ｈ８．３）　で希釈し用いた。

【００２６】ＡＣＥ反応は、まずペプチド溶液０．２ｍ
ｌと基質溶液を０．２ｍｌをチューブ中で混合後、３７
℃に保温し、ＡＣＥ溶液を０．１ｍｌ添加し反応を開始
し３０分後に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え反応を停止した
。同時に、ＡＣＥ溶液添加前に１Ｎ塩酸を加えたものを
ブランクとした。ＡＣＥ活性は反応により生成するヒプ
リル酸量とし、反応液中の酢酸エチル抽出物水溶液の　
２２８ｎｍの吸光度をヒプリル酸量として表した。

【００２７】ＡＣＥ阻害率は次式、 ＡＣＥ阻害率＝［１−〔Ａ２２８　−Ａ２２８　（ｂｌ
ａｎｋ）〕／〔ＡＣ２２８−ＡＣ２２８（ｂｌａｎｋ）
〕］×１００（％）　で求めた。ここで、Ａ２２８　は
ペプチド添加時の波長　２２８ｎｍの吸光度、ＡＣ２２
８はペプチドの代わりに５０ｍＭリン酸カリウムバッフ
ァー（ｐＨ８．３）　を添加した時の波長　２２８ｎｍ
の吸光度、Ａ２２８　（ｂｌａｎｋ）とＡＣ２２８（ｂ
ｌａｎｋ）はそれぞれＡ２２８　とＡＣ２２８のブラン
クの波長　２２８ｎｍの吸光度である。

【００２８】上記の方法で求めたＡＣＥ阻害率をもとに
ＩＤ５０を求めた。 （ペプチド回収率の測定方法）ペプチド回収率は、大豆
蛋白分解後溶液中に溶解して存在する窒素重量が大豆蛋
白原料中の全窒素重量に占める割合をいうが、ここでは
、便宜上次式により求めた。 ペプチド回収率＝（大豆蛋白分解液遠心上清中の加水分
解物窒素濃度）／（大豆蛋白分解液中の大豆蛋白原料窒
素濃度）×１００（％） （分子量分布測定法）分子量分布の測定はＴＳＫｇｅｌ
Ｇ２０００ＳＷＸＬ（東ソー株式会社製）カラムを用い
た高速液体クロマトグラフィーにより行った。高速液体
クロマトグラフィーの条件は次に示す通りである。　　
カラム；ＴＳＫｇｅｌＧ２０００ＳＷＸＬ（７．８ｍｍ
ＩＤ×３０ｃｍ）溶離液；４５％アセトニトリル＋０．
１　％トリフルオロ酢酸流速　　；０．２ｍｌ／ｍｉｎ 温度　　；２５℃ 分子量マーカー； リボヌクレアーゼＡ（１３，７００） グルカゴン（３，４８３） インシュリンＢ鎖（２，５３２） アンジオテンシンＩ（１，２９７） ブラジキニン（１，０６２） グルタチオン、酸化型（６１３） グルタチオン、還元型（３０７） チロシン（１８１） グリシン（７５） まず、上記分子量マーカーにより較正曲線を作成し、分
子量　３００〜１，５００　のペプチドの溶出時間を求
めた。次に供試する加水分解物溶液をインジェクトし、
該当分子量区間の溶出液を分取・濃縮乾固後、水に溶解
し窒素重量を求めた。加水分解物中の分子量　３００〜
１，５００　のペプチドの割合は、該当溶出時間中に溶
出する窒素重量の全溶出液中の窒素重量に対する割合を
算出し求めた。

【００２９】

【実施例１】脱脂大豆をエクストルーダーに供給しなが
ら、同時に脱脂大豆に対して水を３０重量％添加し、品
温　１７５℃、圧力３０ｋｇ／ｃｍ２　、スクリュー回
転数２００ｒｐｍ、滞留時間　１５０秒で処理した。得
られたエクストルーダー処理した脱脂大豆　１．２ｋｇ
を水８．８Ｌに懸濁し６０℃に加熱した後、ブロメライ
ンＦ（天野製薬株式会社製）を１０ｇ添加し２時間反応
させた後、８０℃に１０分間加熱しブロメラインを失活
させ遠心分離上清をペプチド溶液として得た。蛋白分解
率は６３．５％で、ＡＣＥ阻害活性ＩＤ５０が窒素濃度
６ｐｐｍのペプチドが、ペプチド回収率６４．０％で得
られた。

【００３０】

【発明の効果】本発明によれば、従来の大豆蛋白由来の
ペプチドに比し、高いＡＣＥ阻害活性を有するペプチド
を高回収率で得ることができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　大豆蛋白を蛋白分解酵素ブロメライン
   で蛋白分解率５０重量％以上７０重量％以下となるよう
   に分解してペプチドを得ることを特徴とするペプチドの
   製造法。
2. 【請求項２】　　大豆蛋白が二軸エクストルーダー処理
   したものである請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】　　請求項１または２に記載の製造法によ
   って製造されるアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有
   するペプチド。