KR0154880B1 - 글루카곤-유사 펩티드 및 인슐리노트로핀 유도체 - Google Patents

글루카곤-유사 펩티드 및 인슐리노트로핀 유도체

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KR0154880B1 KR1019940704555A KR19940704555A KR0154880B1 KR 0154880 B1 KR0154880 B1 KR 0154880B1 KR 1019940704555 A KR1019940704555 A KR 1019940704555A KR 19940704555 A KR19940704555 A KR 19940704555A KR 0154880 B1 KR0154880 B1 KR 0154880B1
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피터 알.셰어러
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Abstract

본 발명은 약 4.0 이하 또는 7.0 이상의 pI를 가진 글루카곤유사 펩티드(GLP-1), 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 범주이내에서, GLP-1, 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체는 이온삼투법에 의해 포유동물에게 전달시키는데 특히 적합하다. 또한 본 발명은 상기 유도체를 사용하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 방법 및 상기 유도체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체를 이온삼투법에 의해 투여함으로써 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 상기 유도체의 신규한 용도에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]
글루카곤-유사 펩티드 및 인슐리노트로핀 유도체
[발명의 분야]
본 발명은 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1), 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 약 4.0 이하 또는 약 7.0 이상의 pI를 가진 GLP-1, 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다. 본 발명의 범주이내에서, GLP-1, 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체는 이온 삼투압에 의해 포유동물에게 전달시키는데 특히 적합하다. 본 발명의 유도체는 인슐리노트로프 활성을 가지며, 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키는데 유용하다. 본 발명의 치료 방법은 치료효과량의 GLP-1, 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체를 포유동물에게 투여함을 포함한다. 또한, 본 발명은 상기 GLP-1, 절단된 GLP-1, 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 유도체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 포유동물에게 인슐리노트로핀 및 절단된 인슐리노트로핀의 특정한 공지의 유도체를 투여함으로써 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키는 이러한 유도체의 신규한 용도에 관한 것이다.
[배경기술]
GLP-1의 아미노산 서열은 His-Asp-Glu-Phe-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Als-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Als-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly인 것으로 알려져 있다.
GLP-1은 엘.씨.로페즈(L.C.Lopez) 등의 P.N.A.S., USA 80:5485-5489(1983); 지.아이.벨(G.I.Bell) 등의 Nature 302:716-718(1983); 지.하인릭(G.Heinrick) 등의 Endocrinol. 115:2176-2181(1984) 및 엠.기글리온(M.Ghiglione) 등의 Diabetologia 27:599-600(1984)에 개시되어 있다.
GLP-1은 GLP-1의 아미노산 7-37을 갖는 31-아미노산 펩티드(7-37)로의 전환을 통해 자연적으로 제조된 것으로 공지되어 있다. 췌장 및 위장에서는 이러한 과정이 반복적으로 일어난다. 7-37 펩티드(달리, 인슐리노트로핀 이라고도 함) 는 인슐리노트로프 활성을 가진 호르몬이다.
인슐리노트로핀은 하기 아미노산 서열을 갖는다 :
인슐리노트로핀, 그의 특정 유도체 및 포유동물의 진성 당뇨병을 치한 그의 용도가 1987년 11월 19일자로 공개된 PCT/US87/01005 (WO87/06941)에 개시되어 있다. 그의 교지 내용은 본 원에서 참고로 인용하고 있다. PCT/US87/01005에 개시된 인슐린 노트로핀의 유도체는 자연 발생되는 서열에 존재할 수 없는 하나 이상의 아미노산을 함유하거나 또는 없는 폴리펩티드를 포함한다. 또한 PCT/US87/01005에 개시된 인슐리노트로핀의 유도체는 특정한 C-말단성 염, 에스테르 및 아미드를 포함하고, 상기 염 및 에스테르는 OM(이 때, M은 약학적으로 허용되는 양이온 또는 저급 (C1-C6) 직쇄 또는 분지된 알킬그룹이다.)으로 정의되고 상기 아미드는 -NR2R3(R2및 R3은 동일하거나 또는 상이하며 수소 및 저급(C1-C6) 직쇄 또는 분지된 알킬그룹으로 이루어진 그룹중에서 선택된다)로 정의된다.
인슐리노트로핀 활성을 가진 특정 기타 폴리펩티드(본 원에서는 달리 절단된 인슐리노트로핀이라고 함) 및 그의 유도체들이 PCT/US89/01121(WO90/11296)에 개시되어 있다. 이러한 폴리펩티드(GLP-1(7-36), GLP-1(7-35) 및 GLP-1(7-34)라고 함)은 하기 아미노산 서열을 각각 갖는다 :
PCT/US89/01121에 개시돈 폴리펩티드의 유도체는 운반 단백질에 대한 커플링을 증진시키거나 또는 그의 인슐리노트로프 효과를 증진시키기 이해 중요하지 않은 아미노산 치환체 또는 추가의 아미노산을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. PCT/US89/01121에 개시된 인슐리노트로핀의 유도체는 특정한 C-말단성 염, 에스테르 및 아미드를 포함하고, 상기 염 및 에스테르는 OM(이때, M은 약학적으로 허용되는 양이온 또는 저급 직쇄 또는 분지된 알킬 그룹이다)으로 정의되고 상기 아미드는 -NR2R3(이때, R2및 R3는 동일하거나 또는 상이하며 수소 및 저급 직쇄 또는 분지된 알킬 그룹으로 이루어진 그룹중에서 선택된다)로 정의된다.
치료에 효과적인 폴리펩티드를 포유동물에게 전달시에 본 분야에 숙련된 자에게 잘 알려진 특정한 문제점이 생긴다. 일반적으로,장의 고유 침투성이 낮고 위 및 장에서의 화학적 분해와 같은 기타 과정 때문에, 임의 형태의 전달장치도 사용하지 않고 폴리펩티드를 경구 투여함은 성공적이지 않다. 폴리펩티드의 경피적 투여로 장에서 폴리펩티드를 분해시키지 않고 치료에 효과적인 폴리펩티드를 포유동물에게 제공할 수 있는 가능성이 부여된다. 약학적으로 활성이 있는 화합물을 경피적으로 투여하기 위한 각종 방법은 본 기술 분야의 숙련인에게 알려져 있다. 경피적으로 투여하기 위한 이러한 방법은 이온삼투법으로서 공지된 방법이다.
이온삼투법은 치료제의 표면 보조-적용과 함께 피부를 통한 전위 전기적 구배의 적용을 수반한다. 이를 수행하기 위해서는, 약제 저장조 및 전력 공급원이외에 2개의 전극이 필요하다. 각종 유형의 이온삼투 장치는 피.타일(P. Tyle)의 문헌[Pharmaceutical Research 3:318-326(1986)]에 기재되어 있다. 이온삼투법에 사용하기 위한 전극의 실례는 본 원에서 참고로 이용하고 있는 미합중국 특허 제4,950,229호에 개시되어 있다. 이온삼투법으로 치료제가 피부를 통해 국소 또는 전신 부위로 전달된다. 또한, 이온삼투법은 전기 영동 또는 펄스 전류 기술과 같은 방법을 비롯하여 상이한 전압 패턴을 적용함을 포함하는 적으로 공지되어 있다.
소량의 전류를 사용하여 경피적으로 류프롤라이드, 합성 9아미노산 황체 형성 호르몬 유리 호로믄 유사체를 투여하여 왔다(비.알.메이어(B.R.Meyer) 등의 문헌[Clin. Pharmacol. Ther. 44:607-612(1988)]. 래트에게 이온삼투법에 의해 인슐린을 전달함에 대해 연구하여 왔다. 오우.시디퀴(O.Siddiqui) 등의 문헌[J. Pharmaceutical Sciences 76:341-345(1987)]. 고나도트로핀 방출 호르몬 및 티로트리핀 방출 호르몬의 경피적 이온삼투법에 대해 연구하여 왔다. 엘엘.밀러(L.L.Miller) 등의 문헌[J. Pharmaceutical Sciences 79:490-493(1990)] 및 알.알.부메트(R.R.Bumette) 등의 문헌[J. Pharmaceutical Sciences 75:738-743(1986)]. 에탄올은 류프롤라이드 및 CCK-8(콜레사이스토키닌-8) 유사체의 이온삼투법에 의한 경피적 전달을 향상시키는 것으로서 개시되어 있다. 브이. 스리니바산(V. Srinivasan) 등의 문헌[J. Pharmaceutical Sciences 79:588-591(1990)].
[발명의 개요]
본 발명은 4.0 이하의 pI 또는 약 7.0 이상의 pI를 가지며 포유동물에서 프로세싱되어 인슐리노트리핀 활성을 가진 폴리펩티드 유도체가 생성되는 하기 일차 구조를 포함하는, 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 및 절단된 GLP-1의 폴리펩티드 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다 :
H2N-W-COOH
상기 식에서, W는
로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노산 서열이다.
또한, 본 발명은 하기 일차 구조를 포함하는 상기 기재된 GLP-1 및 절단된 GLP-1의 폴리펩티드 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다 :
H2N-2-(X)m-(Y)n-Z
상기 식에서 W는 상기 정의한 바와 같으며, m은 0 또는 1이고, n은 0 또는 1이고, X는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Y는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Z은 CO2R1또는 CONR2R3(이때, m이 1이고 n이 0이고 X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m이 0이고 n이 1이고 Y가 염기성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m 및 n이 둘다 1이고 X 및 Y중 하나 또는 둘다가 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; m 및 n이 둘다 0이거나, 또는 m이 1이고 n이 0이고 X가 중성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m이 0이고 n이 1이고 Y가 중성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m 및 n이 둘다 1이고 X 및 Y 둘다가 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1`은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고 ; R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다)이다.
또한, 본 발명은 약 4.0 이하의 pI 또는 약 7.0 이상의 pI를 가지며 인슐리노트로프 활성을 가지나, 단, C-말단의 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬 에스테르는 아니며, 또한 일반식 CONR2R3(이때, R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다)의 C-말단의 카복스아미드가 아닌 하기 일차 구조를 포함하는 폴리펩티드의 유도체 및 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.
H2N-R-COOH
상기 식에서, R은
로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열이다.
본 발명은 또한 하기 일차 구조를 포함하는 바로 위에 기재된 폴리펩티드의 유도체 및 약학적으로 허용되는 그의 염에 관한 것이다 :
H2N-R-X-(Y)n-Z
상기식에서,
R은 상기 정의한 바와 같으며,
n은 0 또는 1이며,
X는 염기성 또는 중성 L-아미노 산 잔기이고,
Y는 염기성 또는 중성 L-아미노 산 잔기이고,
Z은 CO2R1또는 CONR2R3(이때, n이 0이고 X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 n이 1이고 X 및 Y 중 하나 또는 둘다가 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; n이 0이고 X가 중성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 n이 1이고 X 및 Y 둘다 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다)이다.
본 발명의 바람직한 유도체는 약 8.5이상 pI를 갖는 유도체이다. 이러한 폴리펩티드의 또다른 바람직한 유도체는 R이
(서열 ID NO:2) 이고, n이 0이고 X가 Arg 이거나 또는 n이 1이고 X 및 Y가 각각 Arg인 유도체가 보다 바람직하다. Z이 CO2R1이고 R1이 H이거나 또는 Z이 CONR2R3이고 R2및 R3이 각각 H인 상기 바람직한 유도체가 더욱 바람직하다.
또한, 본 발명은 포유동물에게 치료효과량의 본 발명의 유도체를 투여함을 포함하는 상기 포유동물에서의 인슐린 작용을 증진시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 인슐린 작용을 증진시키는 바람직한 방법은 제 II형 당뇨병의 치료를 포함한다. 이러한 유도체를 투여하는 바람직한 방법은 이온삼투법에 의한 경피 투여방법이다.
또한, 본 발명은 치료효과량의, 하기 일차 구조를 포함하는 폴리펩티드 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염을 포유동물에게 이온삼투법에 의해 투여함을 포함하는 상기 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키는 방법에 관한 것이다.
H2N-R-(X)m-(Y)n-Z
상기 식에서, R은
로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노산 서열이며, m은 0 또는 1이고, n은 0 또는 1이며, X는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Y는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이며, Z은 CO2R1또는 CONR2R3(이때, m이 1이고 n이 0이고 X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m이 0이고 n이 1이고 Y가 염기성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m 및 n이 둘다 1이고 X 및 Y중 하나 또는 둘다가 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; m 및 n이 둘다 0이거나, 또는 m이 1이고 n이 0이고 X가 중성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m이 0이고 n이 1이고 Y가 중성 L-아미노산 잔기이거나, 또는 m 및 n이 둘다 1이고 X 및 Y 둘다 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고 ; R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다)이다.
본 발명의 유도체는 또한 기타 당뇨병 치료제(예: 설포닐우레아)와 같은 치료방법과 병행할 수 있다.
바로 위에 기재된 폴리펩티드의 유도체를 이온삼투법으로 투여하는 바람직한 방법은 R이
이고, m이 0 이며 n이 0인 상기 유도체를 이온삽투법으로 투여함을 포함하고, Z이 CONR2R3이고 R2및 R3이 각각 수소인 상기 바람직한 유도체를 포함하는 방법이 더욱 바람직하다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드의 유도체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 이러한 약학 조성물은 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 제II형 당뇨병과 같은 특정한 당뇨병 질환을 치료하는데 특히 적합하다.
[발명의 상세한 설명]
본 명세서 및 첨부된 특허 청구 범위에 전반적으로 사용된 바와 같이, 유도체란 용어는 하나 이상의 L-아미노산이 그의 C-말단에 포함되는 일반식, C-말단의 카복실 그룹이 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬 그룹과 함께 에스테르를 형성하는 일반식, C-말단성 카복실 그룹이 카복스아미드 또는 치환된 카복스아미드를 형성하는 일반식, 산성 아미노산 잔기(Asp 및/또는 Glu)가 에스테르 또는 카복스아미드를 형성하는 일반식, 이들의 혼합 형태인 일차 구조를 포함하는 폴리펩티드를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서 및 첨부된 특허 청구 범위에 전반적으로 사용된 바와 같이, 염기성 L-아미노산 잔기란 용어는 일반적인 아미노산 Lys, Arg, 및 His을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서 및 첨부된 특허 청구 범위에 전반적으로 사용된 바와 같이 중성 L-아미노산 잔기 란 용어는 Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn 및 Glu를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. Gly는 기술적으로, 카복실 및 아미노 그룹이외에 α-탄소에 수소만이 존재하기 때문에 L-아미노산 잔기가 아니지만, 간략히 하기 위해 본 원에서는 이를 L-아미노산으로서 칭한다.
염기성 또는 중성으로서의 L-아미노산 잔기의 선행 분류는 pH 7.0에서의 상응하는 아미노산의 순 전하를 기준으로 한다.
본 명세서 및 첨부된 특허청구 범위에 전반적으로 사용된 바와 같이, pI 이란 용어는 PCGENE(미합중국 캘리포니아 94040 마운틴뷰 이스트 이엘 카미노 리얼 700에 소재하는 인텔리지네틱스, 인코포레이티드)으로서 알려진 시판되고 있는 소프트웨어를 이용하여 계산한 이론적인 pI를 뜻한다.
상기 기재된 폴리펩티드와 동형(이 동형은 상기 폴리펩티드에 인슐리노트로프 활성을 부여하기에 충분하다)을 갖는 폴리펩티드는 본 발명의 범주에 포함된다. 또한 상기 기재된 폴리펩티드의 변형체(이 변형체는 중요하지 않은 아미노산 치환체를 포함하며 인슐리노트로프 활성을 갖는다)도 본 발명의 범주에 포함된다.
본 명세서 및 첨부된 특허 청구 범위에 전반적으로 사용된 바와 같이, 인슐린 작용을 증진시키는이란 구는 인슐린 합성의 증가,인슐린 분비의 증가, 근육 및 지방에 의한 글루코즈 흡수의 증가 및 간에 의한 글루코즈 생산의 감소 중 하나 이상을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 폴리펩티드는 본 기술 분야에 숙련된 자에게 잘 알려진 여러 방법들에 의해 제조된다. 예를 들면, 폴리펩티드는 Applied Biosystems(ABI) 430A 고상 펩티드 합성장치와 같은 자동화된 폴리펩티드 합성장치를 이용하여 합성할 수 있다. 달리, Z이 CO2H인 본 발명의 폴리펩티드는, 폴리펩티드에 대한 DNA 서열 암호가 발현 벡터에 작동적으로 결합하여 적당한 숙주 세포를 변형시키는데 사용되는 재조합 DNA 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 이어서, 변형된 숙주 세포를 폴리펩티드를 반현시키는 조건하에 배양한다. 그후 폴리펩티드를 배지로부터 회수한다. 또한, 합성 및 재조합 DNA 기술을 조합하여 본 발명의 아미드 및 에스테르 유도체를 제조하고/하거나 본 기술 분야에 숙련된 자에게 공지된 방법에 의해 결합되는 목적하는 폴리펩티드의 단편을 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 유도체는 본 기술 분야에 숙련된 자에게 공지된 방법에 의해 재조한다. 예를 들면, 본 발명 폴리펩티드의 C-말단의 알킬 에스테르 유도체는 HCl과 같은 촉매산의 존재하에 목적하는 (C1-C6)알칸올을 목적하는 폴리펩티드와 반응시킴으로써 제조한다. 이러한 알킬 에스테르 형성에 적합한 반응조건은 약 50℃의 반응은도 및 약 1 내지 약 3시간의 반응 시간을 포함한다. 마찬가지로, 본 발명 폴리펩티드내에 있는 Asp 및/또는 Glu 잔기의 (C1-C6) 알킬 에스테르를 포함하는 폴리펩티드의 유도체를 제조할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드의 카복스아미드 유도체는 또한 본 기술분야에 숙련된 자에게 잘 알려진 고상 펩티드 합성 방법에 의해 제조한다. 예를 들면, 제이엠.스튜워트(J.M.Stewart) 등의 문헌[Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chem. Co. Press, 1984]을 참조하시오. 약 4.0 이하의 pI를 갖는 본 발명에 따른 폴리펩티드의 유도체를 원하는 경우, 이러한 유도체는 본 기술 분야에 숙련된 자에게 잘 알려진 여러 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 글루탐산 잔기를 제조하기 위한 글루타민 잔기의 탄 아미드화, 리신 잔기의 N-말단 및/또는 엡실론 아미노 그룹에서 유리 아미노 그룹의 알킬화 또는 아미드화, 또는 이들의 조합으로 보다 낮은 pI 수치를 가진 유도체가 생성될 것이다. 인슐리노트로핀의 유도체의 pI를 약 3.89 미만으로 감소시키기 위해, 유용한 아미노 그룹중 2개를 개질시키거나 또는 적어도 하나의 아미노 그룹을 개질시키고 글루타민을 탈아미드화 시켜야 한다 글루타민 잔기의 탈아미드 화는 수시간동안 8보다 큰 pH에서 수중에 본 발명의 목적하는 폴리펩티드를 현탁시킴으로써 쉽게 이루어진다.
예를 들면, 반응의 pH에 따라서, 염기성 조건하에 인슐리노트로핀의 아세틸화로 N-말단성 아미노 그룹 및 2개의 엡실론 아미노 그룹들이 모두 아미드화된 유도체를 수득할 수 있다. 그 결과, 3.61의 이론적 pI를 가진 유도체가 생성된다. 달리, 인슐리노트로핀의 단일 글루타민 잔기의 탈아미드화와 함께 N-말단 아세틸화로 4.11의 이론적 pI를 가진 유도체가 생성된다.
pI를 감소시키기 위한 다른 방법으로서, 사이클릭 무수물을 폴리펩티드와 반응시켜 염기성 잔기를 차단하고 산성 잔기를 도입할 수 있다. 이에 한정되지는 않지만 예시하기 위해, 8당량의 트리에틸아민 및 8당량의 숙신산 무수물의 존재하에 DMF중 인슐리노트로핀 용액(서열 ID NO:2)으로 그의 N-말단 및 Lys20 alc Lys28 잔기에서 인슐리노트로핀의 N-숙시네이트 유도체를 수득한다.
달리, 또는 상기와 합하여, 본 발명의 폴리펩티드의 유도체는 염기성 아미노산 잔기를 산성 또는 중성 아미노산 잔기로 치환하거나 또는 중성 아미노산 잔기를 산성 아미노산 잔기로 치환하도록 상기 폴리펩티드에 대한 DNA 암호 서열을 개질시킴으로써 제조할 수 있다. 폴리펩티드 기본 서열의 이러한 변화는 유도체의 직접적인 합성에 의해 이루어질 수 있다. 이러한 방법은 본 기술 분야에 숙련된 자에게 잘 알려져 있다. 물론, 본 발명의 실시에 유용한 이러한 유도체는 인슐리노트로프 효과가 있어야 한다.
본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체가 GLP-1 또는 절단된 GLP-1의 아미노산 1-6을 포함하지 않는 상기 폴리펩티드의 인슐리노트로프 활성은 하기와 같이 결정된다.
췌장도는, 췌장 조직의 콜라게나제 소화를 피콜(Ficoll) 구배(pH 7.4의 행크스 균형 염 용액중 27%, 23%, 20.5% 및 11%)로 분리하는 피.이.레이시(P.E.Lacy) 등의 문헌[Diabetes, 16:35-39(1967)]의 방법의 변형에 의해 보편적인 래트의 췌장 조직으로부터 단리한다. 상기 췌장도를 20.5%/11% 계면으로부터 수집하고, 세척하고, 입체현미경으로 외분비 및 기타 조직이 없도록 주의하여 고른다. 상기 췌장도를 37℃ 및 95% 공기/5% CO2에서 10% 태아성 소 혈청이 보충되고 11mM 글루코즈를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 밤새도록 배양한다. 그 후, 상기 췌장도를 10% 태아성 소 혈청이 보충되고 5.6mM 글루코즈를 함유하는 RPMI 1640 배지를 옮긴다. 상기 췌장도를 37℃ 및 95% 공기/5%CO2,에서 60분동안 배양한다. 연구대상인 폴리펩티드 유도체는 10% 태아성 소 혈청 및 16.7mM 글루코즈를 함유하는 RPMI 배지에서 1nM 및 10nM 농도로 제조한다. 그 후, 약 8 내지 10개로 단리된 췌장도를 96개의 웰 미량역가 디쉬에서 총 부피가 250㎕인 폴리펩티드 유도체 함유 배지로 피펫으로 옮긴다. 폴리펩티드 유도체의 존재하에 췌장도를 37℃ 및 95% 공기/5%CO2에서 90분동안 배양한다. 이어서 췌장도가 없는 배지의 분취량을 수집하고 이중 100㎕에 대하여 이퀘이트 인슐린 RIA 키트(메인 포트랜드 소재의 비낵스, 인코포레이티드)를 이용하여 방사선면역측정법에 의해 존재하는 인슐린의 양을 분석한다.
본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체를 포함하는 약학 조성물을 본 기술 분야에 숙련된 자에게 잘 알려진 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를들면, 폴리펩티드 유도체를 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 합할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드 유도체를 정맥내, 근육내 또는 피하 투여하는 경우, 본 기술 분야에 잘 알려진 바와 같이 적당한 무균 희석제를 사용한다. 이러한 약학 조성물은 충분한 양의 폴리펩티드 유도체를 포함하므로 하기 기재된 바와 같이 적당한 기간동안 적당한 투여량으로 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체를 이온삼투법으로 전달하기 위해, 여러 조성물을 제조할 수 있다. 폴리펩티드 유도체는 겔 또는 포움의 일부로서 또는 용액중에 포함될 수 있다. 그러나, 이러한 조성물중 폴리펩티드 유도체는 사용한 이온삼투법 장치의 약물 저장조중 전극과 동일하거나 또는 거의 동일한 전하를 갖는 것이 바람직하다. 유도체의 전하는 예를 들면, 적당한 완충제를 사용하여 조절할 수 있다. 완충제를 사용하는 경우, 투여하는 특정한 폴리펩티드 유도체의 전하와 반대인 전하를 갖는 완충제를 사용하는 것이 바람직하다. 달리, 폴리펩티드 유도체는 그의 적당한 염 형태를 사용하는 경우에는 그 자체가 완충제로서 작용할 수 있다. 이러한 조성물중 변수는 폴리펩티드 유도체의 농도, 존재하는 경우 완충제의 농도, 조성물의 이온 강도 및 비수성 보조용매를 포함한다. 일반적으로, 이러한 조성물을 사용하여 이온삼투법에 의한 가장 높은 전달효율을 얻기 위해, 상기 조성물중 폴리펩티드를 제외한 모든 이온 종의 농도를 최소화하는 것이 바람직하다. 본 기술분야에 종사하는 자의 기술 범위내에서 이러한 농도는 본 원의 개시내용에 의해 조절할 수 있다.
각종 이온삼투 장치들이 공지되어 있다.이러한 장치에 사용하기 위한 여러 전극 물질들이 공지되어 있으며 시판되고 있다. 이러한 전극들은 백금 또는 은-염화 은으로 제조한 전극을 포함한다. 전극들중 차이는 특정한 성능 뉘앙스와 연관이 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 백금 전극의 사용으로 가수분해가 일어나 수소 이온의 유리된 후 pH가 변한다. pH의 변화도 또한 폴리펩티드 유도체의 이온화 상태에 영향을 주어 이온삼투법에 의한 전달이 이루어진다. 다른 한편으로 이온삼투 장치를 사용할 때, 은-염화 은 전극에서는 물이 가수분해되지 않는다. 그러나, 이러한 은-염화 은 전극은 피부를 통한 전류-유도에 의한 전달에 필적할 수 있는 염소이온을 필요로 한다. 본 기술분야에 종사하는 자의 기술범위내에서 본 원 개시내용에 의해 본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체를 이온삼투법에 의해 투여하는데 사용하기에 적당한 전극을 선택할 수 있다.
또한, 제이.이.리비에르(J.E.Rievere) 등의 문헌[J.Toxicol.-Cut. Ocular Toxicol. 8:493-504(1989-1990)]에 기재된 바와 같이, 돼지 피부 조직판을 이용하여 이온삼투법에 의한 전달을 평가하기 위한 방법에 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물을 사용할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드 유도체를 정맥내, 근육내 또는 피하투여하는 경우, 성인의 초기 당뇨병을 치료하는데 효과적인 일일 투여량은 1pg/kg 내지 1000㎍/kg 범위일 것이다. 식사 도중 및 식사사이에 정맥내 주입하기에 바람직한 투여량은 몸무게가 100kg인 환자를 기준으로 약 4 내지 10ng/kg/분 또는 약 0.6 내지 1.4 ㎍/kg/분이다. 그러나, 상기 범위를 벗어나는 양으로 투여할 수 있으며 이러한 투여량도 또한 본 발명의 범주내에 있음을 알아야 한다. 적당한 투여량은 처방하는 담당의사에 의해 결정될 수 있고 치료할 상태의 중증도 뿐만 아니라 투여할 유도체로 인한 반응 및 환자의 연령, 몸무게, 성별 및 병력에 따라 달라질 것이다. 본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체의 이온삼투법에 의한 투여일 경우,일일 투여량은 약 500 내지 1000㎍범위일 것이다. 또한 상기 범위량을 벗어날 수 있으며 본 발명의 범위내에 있다.
[실시예 1]
표제 펩티드를 Applied Biosystems(ABI) 430A 고상 펩티드 합성장치[mfr, address]를 사용하는 p-메틸벤즈하이드릴아민(HCl 염) 수지로부터 출발하여 N-메틸피롤리돈/하이드록시벤조트리아졸 t-BOC 사이클의 ABI Version 1.40을 사용하여 합성하였다. 말단 사이클을 선택하여 합성의 완결단계에서 최종 t-BOC 보호 그룹을 제거하였다. 하기 아미노산 측쇄 보호 그룹을 사용하였다 : Arg(Tos), Lys(Cl-Z), Trp(CHO), Glu(OCyHex), Tyr(Br-Z), Ser(Bzl), Thr(Bzl), Asp(OCyHex) 및 His(BOM). 사용한 합성 사이클은 하기 개선 방법을 ABI에 의해 제공하였다 : 측정 루우프에 대한 하이드록실벤조트리아졸의 전달 시간은 재생산 가능하고 적당한 그의 전달이 보장되도록 6 내지 10초로 증가하였고, 활성장치 용기에 대한 하이드록시벤조트리아졸 의 전달 시간은 12 내지 18초로 증가하였다. 아세트산 무수물 시약병에서 발생되는 증기로 인해 야기되는 장치내의 장애물을 막기 위해, 반응 용기 사이클을 각각의 아세트산 무수물의 전달후에 연결된 밸브 블록을 가압하도록 개선하였다. Glu를 활성시키기 위해서 보편적으로 사용되는 ABOC12 대신에 ABOC11 활성장치 사이클을사용하였다. N-말단의 -t-BOC-그룹을 최정적으로 제거한 후에, 펩티드-수지 총 2.65g을 수득하였다. 이어서, 포르밀 보호 그룹을 Trp잔기로부터 2㎖의 H2O, 메탄올중 2㎖의 70% 에탄올아민 및 16㎖의 디메틸포름아미드를 함유하는 용액중에 온화하게 진탕시켜 1시간동안 펩티드-수지로 처리함으로써 제거하였다. 이어서, 상기 수지를 여과하고, 디메틸포름아미드(3×10㎖), 메탄올(3×10㎖) 및 디클로메탄(3×10㎖)으로 연속해서 세척하였다. 세척한 수지를 진공하에 건조시켜 2.48g의 수지를 얻었다.
상기 수지로 부터 펩티드를 제거하기 위해, 건조된 수지 997mg을 1시간동안 0℃에서 액체 불화수소/10%m-크레졸로 처리하였다. 이어서, 증발에 의해 불화수소를 제거하고 상기 펩티드를 트리플루오로아세트산에 용해시켰다. 이어서, 상기 펩티드를 에틸 에테르를 사용하여 침전시켜 백색 고형물로서 403mg의 펩티드를 수득하였다. 분석 HPLC 데이터는 펩티드중 Trp 포르밀 보호 그룹이 완전히 제거되지 않은 것으로 나타났다. 잔여 포르밀 보호 그룹을 제거하기 위해, 40mg의 펩티드를 3.6㎖의 H2O와 메탄올중 0.4㎖의 70% 에탄올아민의 혼합물중에 용해시켰다. 생성 용액을 실온에서 30분동안 방치시켰다. 이어서, 0.35㎖의 트리플루오로아세트산을 첨가하고 침전물을 원심분리(14,000rmp, 5분)에 의해 수집하였다. 수집된 침전물을 4㎖의 6M 구아니딘-HCl 중에 용해시키고 60분에 걸쳐 10㎖/분의 유속에서 100%→40%A, 0%→60%B의 구배 시스템(A는 0.1% 트리플루오로아세트산/95%H2O/5%CH3CN이고 B는 CH3CN이다)을 이용하는 1인치 VYDACC18 칼럼상에서 에비 역상 HPLC에 의해 크로마토그라피하여 10.5mg의 표제 펩티드를 수득하였다.
FAB MS : 3511.4 Da(parent + H 예측치 : 3511 Da)
[실시예 2]
표제 펩티드를 합성하기 위해 개선된 실시예1에 기재된 방법을 사용하여 총 2.0g의 펩티드 수지를 제조하였다. 실시예1의 방법에 따라 900mg의 펩티드 수지를 불화수소로 처리하여 340mg의 펩티드를 제조한 후 트리플루오로아세트산 용액을 에틸 에테르로 부터 침전시켰다. 이어서, 실시예 1에서와 같이, 40mg의 펩티드를 수성 에탄올아민중에서 처리하고 산성화하고, 침전시킨 후 크로마토그라피하여 10mg의 표제 펩티드를 수득하였다.
FAB MS : 3511.9 Da(parent + H 예측치 : 3512 Da)
[실시예 3]
표제 펩티드를 합성하기 위해 개선된 실시예1에 기재된 방법을 사용하여 총 1.3g의 펩티드 수지를 제조하였다. 실시예1의 방법에 따라 1.3g의 펩티드 수지를 불화수소로 처리하여 671mg의 펩티드를 제조한 후 트리플루오로아세트산 용액을 에틸 에테르로 부터 침전시켰다. 이어서, 실시예 1에서와 같이, 7mg의 펩티드를 수성 에탄올아민중에서 처리하고 산성화하고, 침전시킨 후 크로마토그라피하여 4.2mg의 표제 펩티드를 수득하였다.
FAB MS : 3667.8 Da(parent + H 예측치 : 3667.81 Da)
[실시예 4]
표제 펩티드를 합성하기 위해 개선된 실시예1에 기재된 방법을 사용하여 총 2.66g의 펩티드 수지를 제조하였다. 실시예1의 방법에 따라 1.1g의 펩티드 수지를 불화수소로 처리하여 490mg의 펩티드를 제조한 후 트리플루오로아세트산 용액을 에틸 에테르로 부터 침전시켰다. 이어서, 실시예 1에서와 같이, 10mg의 펩티드를 수성 에탄올아민중에서 처리하고 산성화하고, 침전시킨 후 크로마토그라피하여 3.8mg의 표제 펩티드를 수득하였다.
FAB MS : 3669.1 Da(parent + H 예측치 : 3668.83 Da)
[실시예 5]
_
80㎕의 디메틸포름아미드(DMF)중 800㎍(0.24μ몰)의 인슐리노트로핀(서열 ID NO:2)의 용액에 20㎕의 DMF중 200㎍(2.0μ몰)의 숙신산 무수물 및 10μ1의 DMF중 200μg(2.0μ몰)의 트리에틸아민을 연속해서 첨가하였다. 투명한 용액을 주워 온도에서 3시간동안 교반하여 실시예 1의 방법에 따라 역상 HPLC 분석에 의해 하나의주요 생성물을 약 90% 수율(HPLC 피이크 면적을 기준으로 한다)로 수득하였다. 생성물을 10㎖의 물에 첨가하고 트리플루오로아세트산을 사용하여 pH12로 산성화하고 건조상태로 동결건조시켰다. 건조된 동결건조물을 HPLC 이동상에 용해시키고실시예 1의 방법에 따라서 예비 역상 HPLC에 의해 정제하여 플라즈마 탁착 질량 스펙트럼 분석법에 의해 트리-숙시노일 치환된 인슐리노트로핀으로 나타난 균일한 생성물을 수득하였다. 예측치 질량 (M+H :3656.68 Da, 실측치 3658.2 Da.
[실시예 6]
실시예 5의 방법에 따라서, 800㎍(0.24μ몰) 대신에 100μg(0.03μ몰)의 인슐리노트로핀 (서열 ID NO:2)을 실시예 5의 모든 기타 반응물의 양에 따라 반응시킨 후 16시간 동안 주위온도에서 교반하여 신규한 생성물을 수득하였다(HPLC 분석에 의해 입증됨). 실시예 5의 방법에 따라 단리한 생성물은 ES-MS질량 스펙트럼 분석에 의해 헥사- 및 헵타-숙시노일화된 인슐리노트로핀인 것으로 나타났다. 헥사-숙시노일화된 인슐리노트로핀에 대한 질량 예측시 3955.68 Da, 실측치 3955.9 Da, 헵타-숙시노일화된 인슐리노트로핀에 대한 질량 에측치 4055.68 Da. 실측치 4055.9Da.
[실시예 7]
100㎍(0.03μ몰)의 인슐리노트로핀(서열 ID NO:2)을 20㎕의 수성 트리신 완충제(pH 8.75)를 함유하는 50㎕의 DMF 용액중에 용해시키고 37℃에서 밤새도록 교반하였다. 실시예1의 방법에 따라 HPLC 분석함으로써 실시예2에 따른 전체 합성방법에 의해 제조된 생성물과 함께 동시 용출하는 것으로 보이는 새로운 피이크가 나타났다.
[서열목록]
(1)일반적인 정보;
(i)출원인:앤드류즈, 글렌 씨.
도미.가스톤 오우.
프랜코유, 마이클 엘.
라손, 에릭 알.
화이자 인코포레이티드(미국을 제외한 국가에서)
(ii)발명의 명칭: 글루카곤-유사 펩티드 및 인슐리노트로핀 유도체
(iii)서열수:6
(iv)주소:
(A)수신인: 그레그 씨. 벤손, 화이자 인코포레이티드
(B)거리:이스턴 포인트 로드
(C)도시:그로톤
(D)주:코넥티컷
(E)국가:미합중국
(F)우편번호:06340
(v)컴퓨터 해독가능한 형태;
(A) 매체 종류:플로피 디스크
(B)컴퓨터:IBM PC(호환성)
(C)작동시스템:PC-DOS/MS-DOS
(D)소프트웨어:패턴트인 릴리이스(Patentln Release)#1.0,
버전 #1.25
(vi)현재 출원 데이타
(A)출원번호:
(B)출원인:
(C)분류:
(vii)우선 출원 데이타
(A)출원번호:US 07/899,073
(B)출원일:1992년 6월 15일
(viii)변리사/대리인정보
(A)성명:벤손, 그레그 씨.
(B)등록 번호:30,997
(C)정리/서류번호:PC8156AGCB
(ix)원거리통신, 정보
(A)전화 번호:(203) 441-4901
(B)팩스번호:(203) 441-5221
(2)서열 ID NO:1에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:37개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:팹티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:1:
(2)서열 ID NO:2에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:31개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:펩티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:1:
(2)서열 ID NO:3에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:30개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:팹티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:3:
(2)서열 ID NO:4에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:29개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:펩티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:4:
(2)서열 ID NO:5에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:28개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:펩티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:5:
(2)서열 ID NO:6에 대한 정보:
(i)서열 특성:
(A)길이:36개 아미노산
(B)유형:아미노산
(D)위상:선형
(ii)분자 유형:팹티드
(iii)서열 설명 : 서열 ID NO:6:

Claims (18)

  1. 약 4.0이하 또는 약 7.0 이상의 pI를 가지며, 에스테르화 되거나, 아미드화되거나, 탈아미드화되거나, 알킬화되거나, 아세틸화되거나, 사이클릭 무수물과 반응되거나, 추가의 C-말단 염시성 및/또는 중성 아미노산(들)이 부가되거나, 또는 이들 중 둘 이상이 조합된 하기 일차 구조를 가지고, 포유동물에서 프로세싱되어 인슐리노트로프 활성을 갖는 폴리펩티드 유도체를 생성하는, 하기 일차 구조를 갖는 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염 : H2N-W-COOH 여기서, W는
    로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노산 서열이다.
  2. 제 1항에 있어서, 하기 일차구조인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염 : H2N-W-(X)m-(Y)n-Z 여기서, W는 제1항에 정의한 바와 같으며, m은 0 또는 1이고, n은 0 또는 1이며, X는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Y는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Z는 CO2R1또는 CONR2R3이고, 이때, (a) m이 1이며, n이 0이고, X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (b) m이 0이며, n이 1이고, Y가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (c) m 및 n이 둘다 1이고, X 및 Y중 하나가 또는 둘다가 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고 : (a) m 및 n이 둘다 0이거나 또는 (b) m 이 1이며, n이 0이고, X가 중성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (c) m이 0이며, n이 1이고, Y가 중성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (d) m 및 n이 둘다 1이고, X 및 Y가 둘다 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이며; R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다.
  3. 약 4.0 이하의 pI 또는 약 7.0 이상의 pI 및 인슐리노트로프 활성을 가지며, 에스테르화되거나, 아미드화되거나, 탈아미드화되거나, 알킬화되거나, 아세틸화되거나, 사이클릭 무수물과 반응되거나, 추가의 C-말단 염기성 및/또는 중성 아미노산(들)이 부가되거나, 또는 이들중 둘 이상이 조합된 하기 일차구조를 가지나, 단 일차 구조 그 자체의 C-말단 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬 에스테르가 아니며, 또한 일차 구조 그 자체의 일반식 CONR2R3(이때, R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다)의 C-말단 카복스아미드가 아니거나, 또는 C-말단에 추가의 Lys 또는 Lys-Gly를 갖는 서열 ID NO:4의 유도체가 아닌, 하기 일차 구조를 갖는 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염 : H2N-R-COOH 상기식에서, R은
    로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노산 서열이다.
  4. 제 3항에 있어서, 하기 일차구조인 폴리펩티드의 유도체 및 약학적으로 허용되는 그의 염 : H2N-R-X-(Y)n-Z 상기식에서, R은 제 3항에 정의한 바와 같고, n은 0 또는 1이며, X는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Y는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이며, Z은 CO2R1또는 CONR2R3이고, 이때, (a) n이 0이고 X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (b) n이 1이고 X 및 Y 중 하나 또는 둘 다 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; (a) n이 0이고 X가 중성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (b) n이 1이고 X 및 Y 둘다 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다.
  5. 제 4항에 있어서,
    폴리펩티드의 유도체 및 약학적으로 허용되는 그의 염.
  6. 제 5항에 있어서, n이 0이고, X가 Arg인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  7. 제 6항에 있어서, Z가 CO2R1이고, R1이 H인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  8. 제 6항에 있어서, Z가 CONR2R3이고, R2및 R3이 각각 H인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  9. 제 5항에 있어서, n이 1이고, X 및 Y 가 각각 Arg인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  10. 제 9항에 있어서, Z가 CO2R1이고, R1이 H인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  11. 제 9항에 있어서, Z가 CONR2R3이고, R2및 R3이 각각 H인 폴리펩티드의 유도체 및 그의 약학적으로 허용되는 염.
  12. 제 1항의 폴리펩티드의 유도체를 포함하는, 이온삼투법에 의해 투여하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 약학조성물.
  13. 제 2항의 폴리펩티드의 유도체를 포함하는, 이온삼투법에 의해 투여하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 약학조성물.
  14. 제 3항의 폴리펩티드 유도체를 포함하는, 이온삼투법에 의해 투여하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 약학 조성물.
  15. 제 4항의 폴리펩티드의 유도체를 포함하는, 이온삼투법에 의해 투여하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한 약학조성물.
  16. 이온삼투법에 의해 투여하여 포유동물의 인슐린 작용을 증진시키기 위한, 하기 일차 구조를 포함하는 폴리펩티드의 유도체 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학 조성물: H2N-R-(X)m-(Y)n-Z 여기서, R은
    로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노산 서열이고, m은 0 또는 1이고, n은 0 또는 1이며, X는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Y는 염기성 또는 중성 L-아미노산 잔기이고, Z는 CO2R1또는 CONR2R3이고, 이때, (a) m이 1이며, n이 0이고, X가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (b) m이 0이며, n이 1이고, Y가 염기성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (c) m 및 n이 둘다 1이고, X 및 Y중 하나 또는 둘다가 염기성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이고; (a) m 및 n이 둘다 0이거나 또는 (b) m 이 1이며, n이 0이고, X가 중성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (c) m이 0이며, n이 1이고, Y가 중성 L-아미노산 잔기이거나 또는 (d) m 및 n이 둘다 1이고, X 및 Y가 둘다 중성 L-아미노산 잔기인 경우에 R1은 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이며;
    R2및 R3은 각각 독립적으로 H 또는 (C1-C6) 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다.
  17. 제 16항에 있어서, R이
    m이 0이며, n이 0인 약학 조성물.
  18. 제 17항에 있어서, Z가 CONR2R3이고, R2및 R3이 각각 소수인 약학조성물
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