HUT64367A - Method for producing glucagon-like peptides and insulino-tropine derivatives as well as medical preparatives containing said compounds - Google Patents
Method for producing glucagon-like peptides and insulino-tropine derivatives as well as medical preparatives containing said compounds Download PDFInfo
- Publication number
- HUT64367A HUT64367A HU9301739A HU9301739A HUT64367A HU T64367 A HUT64367 A HU T64367A HU 9301739 A HU9301739 A HU 9301739A HU 9301739 A HU9301739 A HU 9301739A HU T64367 A HUT64367 A HU T64367A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ala
- glu
- gly
- ser
- amino acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás glukagon-jellegű peptid 1 (GLP-1) GLP-1 fragment, inzulintropin és fragmentált inzulintropin-származékok előállítására. Közelebbről, a találmány tárgyát képezi az az eljárás, amelynek segítségével olyan GLP-1, GLP-1 fragment, inzulintropin és fragmentált inzolinotropinszármazékok, valamint ezek gyógyászatilag megfelelő sói állíthatók elő, amelyek pl értéke mintegy 4,0 vagy ennél kevesebb, vagy amelyek pl értéke mintegy 7,0 vagy ennél nagyobb.
A találmány tárgyához tartozó GLP-1, GLP-1 fragment, inzulintropin és fragmentált inzolinotropin-származékok különösen alkalmasak arra, hogy ezeket iontoforézis segítségével kezelt humán betegeknek, illetőleg emlősöknek adjuk. A fent felsorolt származékoknak inzulintropikus hatása van, alkalmasak arra, hogy a kezelt emlősökben az inzulin hatást fokozzák.
A találmány tárgyához tartozik emlősöknek GLP-l-gyel, GLP-1 fragmenttel, inzulintropinnal vagy fragmentált inzulintropinnal történő kezelése is. Euzen kívül a találmány tárgyához tartoznak azok a gyógyászati készítmények is, amelyek a fentiekben felsorolt GLP-1, GLP-1 fragment, inzulintropin vagy fragmentált inzulintropint tartalmazzák. A találmány tárgyához tartozik továbbá némely új inzulintropin-származéknak új alkalmazása is, eszerint a származékokat iontoforézis segítségével emlősöknek beadva az inzulin hatás fokozható.
Ismeretes, hogy a GLP-1 aminosav szekvenciája a következő: His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly.
• ·
- 3 A GLP-l-et Lopez, L.C. és munkatársai ismertették [P.N.A.S., Amerikai Egyesült Államok, 80: 5485-5489 (1983); Bell, G.I. és munkatársai, Natúré 302, 716-718 (1983); Heinrick G. és munkatársai, Endocrinol. 115:2176-2181 (1984) és Ghiglione, M. és munkatársai, Diabetologia 27: 599-600 (1984)].
Ismeretes, hogy a GLP-1 természetes úton keletkezik egy aminosavból álló peptid átalakulása révén, ahol ezen peptidben jelen vannak a GLP-1 7-37 aminosavak. Ez az átalakulás a hasnyálmirigyben és a belekben megy végbe. Ez a 7-37 peptid, amit a továbbiakban inzulintropinnak is nevezünk, egy hormon, amelynek inzulintropikus hatása van.
Az inzulintropin aminosav szekvenciája a kővetkező:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly.
Az inzulintropint, valamint ennek némely származékát, továbbá ezek alkalmazását emlősöknél diabetes mellitus kezelésére a 87/01005 nemzetközi bejelentésben ismertetik (WO87/06941); közzétéve 1987. november 19-én. Jelen bejelentésben ezen közzétett bejelentés kitanítására hivatkozunk. A PCT/US87/01005 számú nemzetközi bejelentésben olyan inzulintropin-származékokat is ismertetnek, amelyeknél a polipeptidekben lévő aminosav-szekvencia egy-két aminosav kivételével hasonló a természetes inzulintropinban lévő szekvenciához. A PCT/US87/01005 számú nemzetközi bejelentésben ismertetett inzulintropin származékok közül megemlítjük a Cterminális sókat, észtereket és amidokat, ahol a sókat és t
- 4 észtereket OM-mel jelölik, amelyben M jelentése gyógyászatilag megfelelő kation vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport; az amidokat -NR2R3-mal jelölik, ahol R2 és R3 jelentése azonos vagy eltérő, hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport.
A PCT/US89/01121 (W090/11296) nemzetközi bejelentésben, illetőleg közzétételi iratban olyan polipeptideket ismeretetnek, amelyeket fragmentáit inzulintropinnak is neveznek, és amely származékoknak inzulintropikus hatása van. Ezen polipeptideknek, amelyeket GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-35) és GLP-1 (7-34) megjelöléssel definiálunk, a következő aminosav szekvenciát mutatják:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg;
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly és
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys.
A PCT/US89/01121 számú nemzetközi bejelentésben ismertetett polipeptid származékok között vannak olyan polipeptidek, amelyekben nem lényeges aminosav szubsztitúciók találhatók, vagy olyan további aminosavak, amelyek elősegítik a vivő proteinekhez való kapcsolódást, illetőleg növelik az előállított származékok inzulintropin hatását. A PCT/US89/01121 számú nemzetközi bejelentésben további inzulintropin-szárma
- 5 zékot írnak le, ezek között található néhány C-terminális só, észter és amid, ahol a sókat és észtereket OM-mel jelölik, amelyben M jelentése gyógyászatilag megfelelő kation, vagy rövid szénláncú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport; és ahol az amidokat -NR2R3-mal jelölik, amelyben R2 és R3 jelentése azonos vagy eltérő hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó rövid szénláncú alkilcsoport.
A szakember számára ismert, hogy a terápiás hatású polipeptideknek az emlősök szervezetébe való bejuttatása bizonyos problémákkal jár. Az orálisan beadott polipeptideknél, anélkül, hogy ezeknek bizonyos védelmet biztosítanánk, számolni kell azzal, hogy a kezelés eredménytelen marad; ennek oka a belek csekély permeabilitása, továbbá a gyomorban és a belekben fellépő kémiai lebontás. A polipeptidek transzdermális beadása esetén fennáll annak a lehetősége, hogy a kezelt betegekbe terápiás hatású polipeptidek juttathatók, anélkül, hogy ezek a bélben elbomlanának. A gyógyászatilag hatásos vegyületeknek a bőrön keresztül történő beadása és az ezekkel kapcsolatos megoldások jól ismertek a szakember előtt. A bőrön keresztül történő beadás egyik jól ismert módja az iontoforézis.
Az iontoforézisnél a bor—felületre elhelyezett gyógyászati hatású anyaggal egyidejűleg egy elektromos gradienst létesítünk a bőrön keresztül. E műveletnél két elektródát, áramforrást és egy gyógyszertartályt alkalmazunk. Különböző iontoferikus berendezéseket ismertet Tyle, P., Pharmaceutical Research 3: 318326 (1986). Az iontoforézisnél alkalmazható elektródákat ismertetnek a 4 950 229 számú amerikai egyesült államokbeli szaba • · dalai leírásban, amelynek kitanítására a továbbiakban hivatkozunk. Az iontoforézis eredményeként a gyógyászati hatású anyagok a bőrön keresztül a szervezetbe kerülnek, a hatóanyagok felhasználása lokálisan vagy a szervezet más részén történik. Ismeretes, hogy az iontoforézisnél különböző feszültség értékek alkalmazhatók, az ismert módszerek közül említjük meg az elektroporációt, vagy a pulzáló áram módszerét.
Alacsony szintű elektromos áramot alkalmaznak a leuprolidnak bőrön keresztül történő beadásánál; e vegyület egy kilenc aminosavat tartalmazó szintetikus sárgatest hormon, amely hormon-analógokat ad le. [Meyer, B. R. és munkatársai, Clin. Pharmacol. Ther. 44, 607-612 (1988)]. Kísérleteket végeztek patkányokon, amelynek során iontoforetikus úton inzulint juttattak az állatokba [Siddiqui 0. és munkatársai, J. Pharmaceutical Sciences 76, 341-345 (1987)]. A gonadotropint leadó hormon valamint a thyreotropint leadó hormon transzdermális iontoforézisével kapcsolatos kísérleteket ismertet Miller L. és munkatársa [J. Pharmaceutical Sciences 79, 490-493 (1990)], valamint ugyanezt a témát dolgozzák fel Burnette R. R. és munkatársai [J. Pharmaceutical Sciences 75, 738-743 (1986)]. Ismeretes, hogy a leuprolid és a CCK-8 (kolecisztokinin-8) analóg iontoferitikus transzdermális bevitelét etanol alkalmazásával fokozni lehet [Srnivasan V. és munkatársai, J. Pharmaceutical Sciences 79, 588-591 (1990)].
A találmány szerinti eljárással előállított glukagon-szerű peptid 1 (GLP-1) és a GLP-1 fragmensek polipeptid-származékai és ezek gyógyászatilag megfelelő sói az alábbi képlettel • · • ·
- 7 írhatók le:
h2n-w-cooh ahol
W jelentése a következő aminosav-szekvencia:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly valamint
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-PheIle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg;
ahol a származékok pl értéke mintegy 4,0 vagy ennél kisebb, vagy ahol a származékok pl értéke mintegy 7,0 vagy ennél nagyobb; ezen származékokat emlősökbe juttatva olyan polipeptid származékok keletkeznek, amelyek inzulintropin hatást mutatnak.
A találmány tárgyához tartoznak továbbá azon GLP-1 és
GLP-1 fragmens polipeptid származékok, továbbá ezek gyógyászatilag megfelelő sói, amelyek képlete Η2Ν-Ν(χ)πΓ(γ)η-ζ ahol a képletben
W jelentése a fentiekben megadottal azonos, m értéke 0 vagy 1, n értéke 0 vagy 1,
X jelentése lűgos vagy semleges L-aminosav maradék,
Y jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék,
Z jelentése CO2R1 vagy CONR2R3 általános képletű csoport, ahol
RÍ jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó
I • · · ·
- 8 láncú 1 - 6 szénatomos alkilesöpört, ha m értéke 1, n értéke 0 és X jelentése bázikus L-aminosav maradék, vagy m értéke 0, n értéke 1 és Y jelentése bázikus Laminosav maradék, vagy m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és Y közül az egyik vagy mindkettő jelentése lúgos L-aminosav maradék;
R1 jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilesöpört, ha m és n értéke egyaránt 0, vagy m értéke 1, n értéke 0 és X jelentése semleges L-aminosav maradék, vagy m értéke 0, n értéke 1 és Y jelentése semleges L-aminosav maradék, m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és Y jelentése egyaránt semleges L-aminosav maradék;
r2 és r3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport.
A találmány tárgyához tartoznak a
H2N-R-COOH primer képletű polipeptid-származékok és ezek gyógyászatilag megfelelő sói, ahol a képletben
R jelentése valamely következő aminosav szekvencia:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly,
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys• ·« · ·· ·· *·*« • · ♦ · * « • · · » · · • · · · · · • ♦ ·· ·· · ·«· ·
- 9 -Gly-Arg,
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly és His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys; ahol a származék pl értéke mintegy 4,0 vagy ennél kisebb, vagy ahol a pl érték mintegy 7,0 vagy ennél nagyobb, és insulintrpin hatást mutat, azzal a feltétellel, hogy a polipeptid-származék C-terminálisa egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő, továbbá azzal a feltétellel, hogy a polipeptid-származék C-terminálisa CONR2R3 általános képletű Cterminális karboxamid-származéktól eltérő, ahol a karboxamidcsoportban R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport.
A találmány tárgyához tartoznak azon
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid-származékok, továbbá ezek gyógyászatilag megfelelő sói is, amelyek képletében R jelentése a fentiekben megadottal azonos, n értéke 0 vagy 1,
X jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Y jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Z jelentése CO2R1 vagy CONR2R3 általános képletű csoport, amelyben
R1 jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó t
··
- 10 láncú, 1-6 szénatomos alkilcsoport, az esetben, ha n értéke 0 és X jelentése lúgos L-aminosav maradék, vagy n értéke 1, továbbá X és Y közül az egyik vagy mindkettő jelentése lúgos L-aminosav maradék;
R1 jelentése egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, az esetben, ha n értéke 0 és X jelentése semleges L-aminosav maradék, vagy n értéke 1, továbbá X és Y jelentése egyaránt semleges L-aminosav maradék;
R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport.
A találmány szerinti származékok közül előnyösek azok, amelyek pl értéke mintegy 8,5 vagy ennél nagyobb. Előnyösek továbbá azok a polipeptid-származékok, amelyek képletében R jelentése
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp—Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly.
Még előnyösebbek azok a származékok, amelyek képletében R jelentése
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp—Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly;
n értéke 0 és
X jelentése Arg, vagy n értéke 1, továbbá
X és Y jelentése egyaránt Arg.
:
··«
A fenti előnyös vegyületek közül még előnyösebbek azok, amelyek képletében
Z jelentése CO2R1 és
R1 jelentése hidrogénatom vagy
Z jelentése CONR2R3, továbbá r2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom.
A találmány tárgyához tartozik az inzulin hatás növelésének módszere emlősöknél; e módszer szerint az emlősöknek hatásos mennyiségű találmány szerinti vegyületet adunk be. A találmány szerinti inzulin hatást fokozó eljárás előnyösen a (II) típusú diabetes kezelésére alkalmazható. A találmány szerinti eljárással előállított polipeptid-származékokat célszerűen iontoforetikus úton transzdermálisan adjuk a kezelt betegeknek .
A találmány tárgyához tartozik továbbá az inzulin hatás fokozására szolgáló eljárás humán betegeknél és emlősöknél; e módszer szerint iontoforetikus úton hatásos mennyiségű
H2N-R-(X)m-Yn-Z általános képletű polipeptidet adunk a kezelt humán betegeknek és emlősöknek, ahol a képletben
R jelentése valamely alábbi aminosav szekvencia:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly,
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg,
I
- 12 His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly és
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-val-Lys; ahol a képletben m értéke 0 vagy 1;
n értéke 0 vagy 1;
X jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Y jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Z jelentése CO2R1 vagy CONR2R3 általános képletű csoport, ahol a képletben
R1 jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú, 1-6 szénatomos alkilcsoport, az esetben, ha m értéke 0, n értéke 0 és X jelentése lúgos L-aminosav maradék, vagy m értéke 0, n értéke 0 és Y jelentése lúgos Laminosav maradék, vagy m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és Y közül az egyik vagy mindkettő jelentése lúgos L-aminosav maradék;
RÍ jelentése továbbá egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, az esetben, ha m és n értéke egyaránt 0, m értéke 1, n értéke 0, továbbá X jelentése semleges L-aminosav maradék, vagy m értéke 0, n értéke 1, továbbá Y jelentése semleges L-aminosav maradék; vagy m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és • ·.*· '· «
- 13 Y jelentése egyaránt semleges L-aminosav maradék;
r2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket egyéb kezelési módszerekkel együtt is alkalmazhatjuk, ezek közül említjük meg az antidiabetikus szereket, így például a szu1foni1-karbamid-származékokat.
Egy előnyös megoldás szerint iontoforetikus kezelést alkalmazunk olyan polipeptid-származékkal, amelynek képletében R jelentése
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly;
m értéke 0 és n értéke 0, még előnyösebb az a kezelési módszer, ahol olyan származékot alkalmazunk, amelynek képletében
Z jelentése CONR2R3, amelyben r2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom.
A találmány tárgyához tartoznak azok a gyógyászati készítmények is, amelyek hatóanyagként a találmány szerinti eljárással előállított polipeptid-származékokat tartalmazzák. E gyógyászati készítményeket humán betegeknél és emlősöknél általában az inzulin hatás fokozására alkalmazzuk. Ezen gyógyászati készítmények különösen előnyösen alkalmazhatók bizonyos diabetikus állapotok kezelésére, ezek közül említjük ·· ·»·· · ·««· • t · ··· • ··· é · • · · « » · ·♦·· ·ν * »··4
- 14 meg a II típusú diabetes-t.
A leírásban említett származék kifejezés olyan polipeptidekre vonatkozik, amelyek primer képletét a fentiekben megadtuk, ahol a C-terminális helyzetben egy vagy több L-aminosav található, amelyben a C-terminális karboxilesöpört valamely egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoportot tartalmazó alkohollal észtert képez; továbbá ahol a Cterminális karboxilcsoportból karboxamid vagy szubsztituált karboxamid-csoport van kialakítva; ahol az aminosav maradékok (Asp és/vagy Glu) észtert vagy karboxamidot képeznek; továbbá ezek kombinációi.
A fentiekben, továbbá a leírás további részében és az igénypontokban alkalmazott bázikus L-aminosav maradék nem korlátozó értelemben a Lys, Arg és His aminosavakra vonatkozik.
A leírásban és az igénypontokban alkalmazott semleges Laminosav maradék nem korlátozó értelemben az Alá, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn és Glu csoportokra vonatkozik. Noha a Gly megjelölés egész pontosan véve nem L-aminosav maradékra vonatkozik, minthogy az «-helyzetben csak hidrogénatom található, a karboxil- és aminocsoportok mellett, az egyszerűség kedvéért ezt is L-aminosavként tekintjük.
Az L-aminosav maradékok esetében a fentiekben alkalmazott lúgos vagy semleges megjelölés használata a megfelelő aminosavnak 7,0 pH-értéken mutatott töltésén alapszik.
A leírásban és az igénypontokban alkalmazott pl megjelölés az elméleti pl értékekre vonatkozik, amelyeket
ismert módon számítunk ki [lásd PCGENE (IntelliGenetics, Inc. 700 East El Camina Reál, Mountein View, CA 94040].
A találmány tárgyához tartoznak azok a polipeptid származékok is, amelyek a leírásban és igénypontokban ismertetett polipeptidek homológjait képezik, amely homológok inzulinotróp hatást mutatnak. A találmány oltalmi körébe tartoznak olyan polipeptid-származék variánsok is, amelyekben nem lényeges aminosav helyettesítés található, és amelyek inzulintropin hatást mutatnak.
A leírásban és az igénypontokban alkalmazott inzulin hatást fokozó kifejezés olyan hatást jelöl nem korlátozó értelemben, amelynek eredményeként az inzulin szintézis fokozódik, az inzulin kiválasztás növekszik, az izmok és zsír glükóz felvétele fokozódik, és a máj glükóz termelése csökken.
A fentiekben definiált polipeptid származékokat ismert módszerekkel állíthatjuk elő. így például a polipeptidek előállíthatók automata peptid szintetizáló berendezéssel, mint például az Applied Biosystems (ABI) 430A jelzésű szilárd fázis peptid szintetizáló berendezéssel. Másik megoldásként a Z helyében CO2H csoportot tartalmazó polipeptidek rekombináns DNS technológiával is előállíthatók, ahol a polipeptidet kódoló DNS szekvencia operábilis módon kapcsolódik egy expressziós vektorhoz és alkalmas arra, hogy a megfelelő gazdasejtet transzformálja. A transzformált gazdasejtet ezután olyan körülmények között tenyésztjük, ahol a polipeptid expresszálódik. Ezután a polipeptidet a tenyészetből kinyerjük. Ezen túlmenően a rekombináns DNS technika és szintetikus eljárás kombinációjával amid és észter-származékokat és/vagy polipeptid fragmenteket állíthatunk elő, amely fragmenteket azután ismert módon kapcsoljuk össze.
Az előállított polipeptideket ismert módon alakíthatjuk át származékokká. így például C-terminális alkil-észter-származékokat állíthatunk elő oly módon, hogy valamely polipeptidet egy 1-6 szénatomos alkanollal reagáltatunk katalitikus mennyiségű sav, így például sósav jelenlétében. Az alkil-észter-származék képzésének hőmérséklete célszerűen mintegy 50 °C, a reakcióidő előnyösen 1 és mintegy 3 óra között van. Azon polipeptid-származékokat, ahol a polipeptidben Asp és/vagy Glu maradék van, fentiek szerint alakíthatjuk át 1 - 6 szénatomos alkil-észterré.
A polipeptidek karboxamid-származékait ismert módon szilárdfázisú peptid szintézis módszerrel állíthatjuk elő. Példaként említjük meg a Solid Phase Peptide Synthesis,, Stewart, J. M. és munkatársai, Pierce Chem. Co. Press, 1984 szakirodalmi helyet. Az esetben, ha 4,0 pl értékű vagy ennél kisebb pl értékű polipeptid származékokat kívánunk előállítani, ezeket a szakirodalomból jól ismert módszerekkel állíthatjuk elő. így például egy glutamin maradékot dezamidálva glutaminsav-maradékhoz jutunk; az N-terminális helyzetben lévő szabad aminocsoportot alkilezve vagy amidálva és/vagy a lizin maradékon az epszilon-helyzetben lévő aminosavakat alkilezve vagy amidálva vagy e módszereket kombinálva alacsony pl értékű * származékokhoz jutunk. Annak érdekében, hogy az inzulintropin származék pl értékét 3,89 alá csökkentsük, a jelenlévő mindkét aminocsoportot vagy legalább az egyik aminocsoportot származékká kell alakítani, így szükséges, hogy a glutamint dezamidáljuk. A glutamin maradék dezamidálása oly módon történhet, hogy a kívánt polipeptid-származékot 8-nál nagyobb pH-értékű vízben szuszpendáljuk, a műveletet több órán keresztül végezzük.
így például a reakcióelegy pH-jától függően az inzulintropin-származéknak lúgos körülmények között végzett acetilezése olyan származékokat eredményez, ahol mind az N-terminális aminocsoport amidálása, mind az epszilon aminocsoport amidálása végbemegy. A művelet eredményeként olyan származékot kapunk, amelynek elméleti pl értéke 3,61. Másik megoldásként az N-terminális acetilezést kombinálva az inzulintropinban lévő egyetlen glutamin maradéknak glutaminsawá való dezamidálásával olyan származékhoz jutunk, amelynek elméleti pl értéke 4,11.
Másik megoldásként a pl értéket oly módon is csökkenthetjük, hogy egy polipeptidet egy gyűrűs anhidrid-származékkal reagáltatjuk, ily módon a lúgos maradékot blokkolva savas maradékot alakítunk ki. A korlátozás szándéka nélkül említjük meg például, hogy az ínzulintropint (SEQUENCE ID NO.: 2) dimetil-formamidos oldatban 8 ekvivalens trietil-amin és 8 ekvivalens borostyánkősav anhidrid jelenlétében az N-terminális részen és a Lysao és Lys28 maradékon N-szukcinát-származékká alakíthatjuk.
Másik megoldásként vagy a fentiekkel kombinálva a találmány szerinti polipeptid-származékokat oly módon is előállíthatjuk, hogy a polipeptidek DNA-t kódoló szekvenciáját úgy módosítjuk, hogy valamely lúgos aminosav maradékot egy savas vagy semleges aminosav maradékkal helyettesítünk, vagy egy semleges aminosav maradékot egy savas aminosav maradékkal helyettesítünk. A polipeptid primer szekvencia ezen változtatásait a származékok direkt szintézisével is létrehozhatjuk. Ezek a módszerek a szakember számára jól ismertek. Természetesen ahhoz, hogy ezek a származékok a gyakorlatban eredményesen alkalmazhatók legyenek, az szükséges, hogy ezek inzulintropin hatást mutassanak.
A polipeptid-származékok inzulintropin hatását azon vegyületeknél, ahol a polipeptid nem tartalmazza a GLP-1 vagy GLP-1 töredék 1-6 aminosavját, az alábbiak szerint határozhatjuk meg.
Patkányok hasnyálmirigy szövetéből hasnyálmirigy szigeteket különítünk el; e műveletet egy ismert módszer [Lacy, P.E. és munkatársai, Diabetes, 16, 35-39 (1967)] szerint végezzük; így a hasnyálmirigyből vett szövet kollagenázzal lebontott részét Ficoll gradiensen elkülönítjük (27 %, 23 %, 20,5 % és 11 % Hanks'-féle sóoldat, pH 7,4). A szigeteket a 20,5 %/ll %-os felületről nyerjük, mossuk, majd sztereomikroszkóp alatt kézzel megszabadítjuk a külső elválasztású mirigytől és egyéb szövetektől. A szigeteket egy éjszakán át RPMI 1640 jelzésű tápközegen inkubáljuk, a tápközeget 10 % magzati borjúszérummal kiegészítjük, a táptalajhoz 11 mmól glükózt adunk, és 37 °C hőmérsékleten 95 % levegő/5 % CO2 eleggyel áramoltatjuk át. Ezt követően a szigeteket olyan RPMI 1640 jelzésű tápközegbe visszük át, amely 10 % magzati borjúszérumot és 5,6 mmól • ·
- 19 glükózt tartalmaz. A szigeteket 60 percig 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, miközben a táptalajon 95 % levegő/5 % CO2 elegyet áramoltatunk át. A vizsgálandó polipeptid-származékból 1 mmól és 10 mmól koncentrációjú hígítást készítünk, ehhez olyan RPMI jelzésű táptalajt használunk, amely 10 % magzati borjúszérumot és 16,7 mmól glükózt tartalmaz. A polipeptidet tartalmazó táptalajt 96 nyílást tartalmazó mikrotiter lemezre helyezzük, az egyes nyílásokban 250 /zliter térfogatú táptalaj van, ezekhez pipettával 8-10 izolált szigetet adunk. A szigeteket a polipeptid-származékok jelenlétében {inktrbáljukj 37 °C hőmérsékleten 95 % levegő/5 % CO2 elegy bevezetése mellett 90 percig inkubáljuk. Ezt követően szigetmentes, alikvot térfogatú táptalaj mintákat veszünk le, majd 100 - 100 μΐ-t ebből inzulinra vizsgálunk, a vizsgálatot Equate Insulin RIA Kit (Binax, Inc. Portland, ME) készülék segítségével radioimmun módszerrel végezzük.
A találmány szerinti eljárással előállított polipeptid-származékokat tartalmazó gyógyászati készítményeket ismert módon készíthetjük el. így például a polipeptid-származékokat gyógyászatilag megfelelő segéd- vagy vivőanyaggal elegyíthetjük. A polipeptid-származékokat adhatjuk intravénásán, intramuszkulárisan vagy szubkután, megfelelő steril hígítószert alkalmazva. A gyógyászati készítmények olyan mennyiségben tartalmazzák a polipeptid-származékot, hogy a kezelt betegnek megfelelő dózis értékeket adhassunk be kellő időn keresztül.
A találmány szerinti eljárással előállított polipeptid-
- 20 származékokat adhatjuk iontoforetikus úton is, erre a célra többféle készítményt állíthatunk elő. A polipeptid-származékot oldatban vagy gél vagy hab formájában készíthetjük el. Előnyös, ha ezen készítményekben a polipeptid-származékok azonos vagy közel azonos töltést mutatnak mint az iontoforetikus berendezésben lévő elektróda. A származék elektromos töltését megfelelő puffer alkalmazásával ellenőrizhetjük. Célszerűen olyan puffért alkalmazunk, amelynek töltése ellentétes a beadásra szánt polipeptid töltésével. Másik megoldásként a polipeptidszármazék saját puffereként is szerepelhet, amennyiben a polipeptidet megfelelő só formát alkalmazzuk. Készítményeknél a polipeptid koncentrációja, az alkalmazott puffer koncentrációja, a készítmény ionerőssége és a nemvizes társoldószer mennyisége és fajtája változhat. Annak érdekében, hogy az iontoforézissei bevitt hatóanyag mennyiségét a legnagyobb értékre növeljük, célszerű az egyéb ionok koncentrációját (kivéve a polipeptid-származékét) a minimális értéken tartani. A megfelelő koncentráció érték beállítása a szakember számára ismert módon történik.
Számos olyan berendezés ismert, amely iontoforézishez alkalmazható. E készülékekhez különböző elektródák alkalmazhatók. Ismertek a platinából, továbbá ezüst/ezüst-klorid-ból készült elektródák. Az elektródákban mutatkozó eltérések a művelet eredményét kismértékben befolyásolják. így például platina elektródák alkalmazása esetén hidrolízis lép fel, ami hidrogén ion felszabadulást, majd ezt követően pH-változást okoz. A pH-ban fellépő változás viszont befolyásolhatja a
polipeptid-származék ionizációs állapotát, és ennek eredményeként magát az iontoforetikus elmozdulást. Ezzel szemben az ezüst/ezüst-klorid elektródák nem okoznak víz hidrolízist az iontoforetikus műveletnél. Az ezüst/ezüst-klorid elektródák alkalmazásánál azonban klorid-ionok vannak jelen, ami befolyásolhatja az áram által indukált bőrön keresztül történő migrálást. A polipeptid-származékok iontoforetikus alkalmazásánál a tapasztalt szakember képes a megfelelő elektróda kiválasztására.
Az iontoforetikus kezelés eredményének értékeléséhez alkalmazható a sertés bőrlebennyel végzett vizsgálat [Riviere J.E. és munkatársai, J. Toxicol.-Cut. & Ocular Toxicol 8, 493504 (1989-1990)]; e módszer használható a találmány szerinti polipeptid-származékoknál, valamint ezen vegyületeket tartalmazó készítményeknél.
A diabétesz kezdeti stádiumában szenvedő felnőtt betegek kezelésére 1 pg/kg - 1000 Mg/kg napi dózis eredményesen alkalmazható, amennyiben a polipeptid-származékot intravénásán, intramuszkulárisan vagy szubkután adjuk be. Az étkezés közben vagy étkezések között beadott intravénás infúziók célszerű dózisa mintegy 4-10 ng/kg/perc vagy mintegy 0,6 - 1,4 Mg/nap, 100 kg testtömegű kezelt betegre számítva. Meg kívánjuk jegyezni azonban, hogy az ettől eltérő dózis értékek is a találmány oltalmi körébe tartoznak. A megfelelő dózisértékét a kezelő orvos állapítja meg, ez az érték függ a betegség súlyosságától, a kezelt beteg állapotától és a beadott készítményre adott reakciójától, valamint a kezelt beteg korától,
- 22 súlyától, nemétől valamint előző betegségeitől. Iontoforetikus alkalmazás esetén a találmány szerinti eljárással előállított polipeptid-származékokat mintegy 500 - 1000 gg/nap dózisban adjuk. Az ezektől eltérő dózis értékek azonban szintén a találmány oltalmi körébe tartoznak.
1. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid-származék előállítása; a képletben n értéke 0; X jelentése Arg; Z jelentése CONR2R3, amelyben R2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom; R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
A cím szerinti peptid-származékot p-metil-benzhidrilamin(sósavas só)-ból kiindulva állítjuk elő Applied Biosystems (ABI) 430A jelzésű szilárd fázisú peptid szintetizáló berendezés segítségével, aholis az ABI verzió szerint 1,40 N-metil-pirrolidon/hidroxi-benzotriazol terc-BOC ciklust alkalmazunk. A végső ciklust úgy választjuk meg, hogy a szintézis befejezése után a végső terc-BOC védőcsoportot eltávolítsuk. Aminosav oldallánc védőcsoportként a következőket használjuk: Arg (Tos), Lys (Cl-Z), Trp (CHO), Glu (OCyHex), Tyr (Br-Z), Ser (Bzl), Thr (Bzl), Asp (OCyHex) és His (BŐM). Az ABI rendszer által rendelkezésre álló szintézis ciklusokat alkalmaztuk az alábbi eltérésekkel: a hidroxi-benzotriazolnak a mérőkacshoz való juttatási idejét 6 másodpercről 10 másodpercre növeltük, ily módon biztosítva a reprodukálható értékeket; a hidroxi • · ·
- 23 benzotriazolnak az aktivátor edényhez való juttatási idejét 12 másodpercről 18 másodpercre növeltük. Annak érdekében, hogy elkerüljük, hogy az ecetsavanhidrides reagens edényből keletkező gőzök a berendezésben eltömődést okozzanak, a reakcióedényben minden egyes ecetsavanhidrid adag beadása után a szelep-blokkban nyomást alkalmaztunk. A Glu aktiválására az AB0C11 aktivátor ciklust alkalmaztuk az általában szokásos AB0C12 helyett. A terminális terc-BOC csoport végső eltávolítása után 2,65 g peptid gyantát kaptunk. Ezt követően a Trp maradékról a forrni1 védőcsoportot eltávolítottuk, e műveletet 2 ml H2O, 2 ml 70 %-os metanolos etanol-amin és 16 ml dimetil-formamid elegyét tartalmazó oldatban végeztük, a peptid gyantát 1 óra hosszat kíméletesen rázogatva. Ezt követően a gyantát szűréssel elkülönítettük, egymást követően dimetil-formamiddal (3 x 10 ml), metanollal (3 x 10 ml), majd diklór-metánnal (3 x 10 ml) mostuk. A mosott gyantát vákuumban szárítottuk, így 2,48 g gyantát kaptunk.
A peptidnek a gyantából való kinyerése céljából 997 mg szárított gyantát 1 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten folyékony hidrogén-fluorid/10 % m-krezol eleggyel kezeltük. Ezt követően a hidrogén-fluoridőt bepárlással eltávolítottuk, majd a peptidet trifluor-ecetsawal felvettük. Ezután a peptidet etil-éter alkalmazásával kicsaptuk, így 403 mg fehér színű szilárd peptidet nyertünk. A magas nyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatok eredménye azt mutatta, hogy a Trp csoportról a forrni 1 védőcsoport eltávolítása nem volt tökéletes. A visszamaradt formil védőcsoport eltávolítására 40 mg peptidet feloldottunk
t • · ··
3,6 ml víz és 0,4 ml 70 %-os, metanollal készült etanol-amin elegyében. A kapott oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagytuk. Ezt követően az elegyhez 0,35 ml trifluor-ecetsavat adtunk, a keletkező csapadékot centrifugálással elkülönítettük (14 000 rpm, 5 perc). Az összegyűjtött csapadékot 4 ml (6 mól) guanidini-HCl-oldatban feloldjuk, majd magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével kromatografáljuk, ehhez 2,5 cm átmérőjű VYDAC C18 jelzésű oszlopot alkalmazunk; a gradiens rendszer összetétele: 100 % -> 40 %A, 0 % -> 60 %B* a műveletet 60 percig végezzük 10 ml/perc folyási sebességgel (A jelentése 0,1 % trifluor-ecetsav/95 % H2O/5 % CH3CN; B jelentése CH3CN); ily módon 10,5 mg cím szerinti peptid-származékot kapunk.
FAB MS: 3511,4 Da (számított: 3511 Da) .
2. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid-származék előállítása; a képletben n értéke 0; X jelentése Arg, z jelentése CO2R1 r amelyben R1 jelentése hidrogénatom; R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Az 1. példában leírtak szerint járunk el, így 2,0 g peptid gyantát kapunk. 900 mg peptid gyantát hidrogén-fluoriddal kezelünk az 1. példában leírtak szerint, így 340 mg peptidet kapunk, miután etil-éteres közegből trifluor-ecetsavas lecsapást végzünk. Ezt követően az 1. példa szerint 40 mg peptidet vizes etanol-aminnal kezelünk, megsavanyítjuk, kicsapjuk, majd
- 25 kromatografáljuk; így 10 mg cím szerinti peptidet kapunk.
FaB MS: 3511,9 Da (számított: 3512 Da).
3. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képlett! peptid előállítása; a képletben n értéke 1; X jelentése Arg; Y jelentése Arg; Z jelentése CONR2R3, amelyben R2 és R3 jelentése hidrogénatom; R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-8er-Tyr-Leu-Glu-Gly-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe~Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Az 1. példában leírtak szerint járunk el, így 1,3 g peptid gyantát kapunk. 1,3 g peptid gyantát hidrogén-fluoriddal kezelünk az 1. példában leírtak szerint, így 671 mg peptidet kapunk a trifluor-ecetsavas oldatban etil-éterrel végzett lecsapás után. Ezt követően az 1. példában leírtak szerint 1,7 mg peptidet vizes etanol-aminnal kezelünk, megsavanyítjuk, kicsapjuk, majd kromatografáljuk; így 4,2 mg cím szerinti peptidet kapunk.
FaB MS: 3667,8 Da (számított: 3667,81 Da).
4. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid előállítása; a képletben n értéke 1; X jelentése Arg; Y jelentése Arg; Z jelentése Ct^R1# amelyben R1 jelentése hidrogénatom; R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-8er-Asp-Val-Ser-8er-Tyr-Leu-Glu-Gly-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
- 26 Az 1. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a cím szerinti származékot állítjuk elő. 2,66 g peptid gyantát kapunk. 1,1 g peptid gyantát hidrogén-fluoriddal kezelünk az 1. példában leírtak szerint, így 490 mg peptidet kapunk a trifluor-ecetsav-oldatban etil-éterrel végzett lecsapás után. Ezt követően az 1. példában leírtak szerint 10 mg peptidet vizes etanol-aminnal kezelünk, az elegyet megsavanyítjuk, lecsapjuk, majd kromatografáljuk; így 3,8 mg cím szerinti peptidet kapunk.
FaB MS: 3669,1 Da (számított érték: 3668,83 Da).
5. Példa
HjN-R-X-(Y)n-Z általános képletű peptid előállítása, a képletben n értéke 0; X jelentése Arg; Z jelentése CO2r1, amelyben R1 jelentése hidrogénatom; R jelentése His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly, ahol az N-terminális (N-alfa) csoport szukcináttá van alakítva, hasonlóképpen mindkét Lys maradékban az epszilonamin csoportok szukcináttá vannak alakítva
800 gg (0,24 μιηόΐ) inzulintropinnak 800 μΐ dimetil-formamiddal (DMF) készült oldatához 200 μg (2,0 μπιόΐ) borostyánkősav-anhidridnek 20 μΐ dimetil-formamiddal készült oldatát és 200 μg (2,0 μιηδΐ) trietil-aminnak 10 μΐ dimetil-formamiddal készült oldatát adjuk egymást követően. A tiszta oldatot 3 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, így egyetlen terméket kapunk (magas nyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat ··♦
- 27 eredménye szerint), aholis a műveletet az 1. példában leírtak szerint végezzük, 90 %-os hozammal (a magas nyomású folyadékkromatográfiás csúcsok alatti területekre számítva). A kapott terméket 10 ml vízhez adjuk, trifluor-ecetsawal pH = 2 értékre savanyítjuk, majd beszáradásig liofilizálunk. A száraz liofilizátumot a magas nyomású folyadékkromatográfia mobil fázisával felvesszük, és fordított fázisban tisztítjuk az 1. példában leírtak szerint; így homogén termékhez jutunk; a vizsgálatot Plasma Desorption tömegspektrum analizátorral végezzük; a kapott termék triszukcinoil-csoporttal szubsztituált inzulintropin. Számított tömeg (Μ + H) : 3656,68 Da, talált érték: 3658,2 Da.
6. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid előállítása, a képletben n értéke 0; X jelentése Arg; Z jelentése CO2R1, amelyben R1 jelentése hidrogénatom; R jelentése -His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-8er-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly, ahol a származékot hat vagy hét szukcinoilcsoporttal szubsztituáljuk
Az 5. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy 100 μg (0,03 μπιόΐ) inzulintropint alkalmazunk az ott leírt 800 μg (0,24 μιηόΐ) helyett, a többi reakcióban résztvevő komponens az 5. példában megadottal azonos; így 16 óráig tartó szobahőmérsékleten végzett keverés után egy új terméket kapunk (mint azt a magas nyomású folyadékkromatográfiás vizsgá* · ·» · ·*· • · « · · ····*·* · * ··
- 28 lat is igazolja). A kapott terméket az 5. példában leírtak szerint különítjük el, az ES-MS tömegspektrum vizsgálat szerint a kapott anyag olyan inzulintropin, amelyben hexa- és hepta-szukcinoil-csoportok találhatók szubsztituensként. A hexaszukcinoil inzulintropin számított tömegértéke: 3955,68 Da; talált érték: 3955,9 Da. A hepta-szukcinoil inzilintropin számított tömegértéke 4055,68 Da, talált érték: 4055,9 Da.
7. Példa
H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid előállítása;
a képletben n értéke 0, X jelentése Arg; Z jelentése C02R1 f amelyben R1 jelentése hidrogénatom; R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
100 pg inzulintropint oldunk fel 50 μΐ dimetil-formamidban, ahol az oldószer 20 μΐ vizes tricin-puffért tartalmaz (pH 8,75) , majd az elegyet egy éjszakán át 37 °C hőmérsékleten keverjük. Magas nyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatot végzünk az 1. példában leírt módszer szerint, amikoris egy új csúcs jelentkezését észleljük; az ehhez tartozó anyag a 2. példa szerint előállított vegyülettel együtt eluálódik.
Claims (11)
1. Eljárás a
H2N-W-COOH primer struktúrájú polipeptid-származékok, valamint e vegyület gyógyászatilag megfelelő sóinak előállítására, ahol a képletben
W jelentése a következő aminosav-szekvencia: His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly vagy His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-PheIle-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg;
ahol a származékok pl értéke mintegy 4,0 vagy ennél kisebb, vagy ahol a származékok pl értéke mintegy 7,0 vagy ennél nagyobb; és amely származékot emlősökben inzulintropin hatású polipeptid származékot eredményeznek, azzal jellemezve, hogy a polipeptid-származékokat ismert módon állítjuk elő, majd a kapott származékokat kívánt esetben gyógyászatilag megfelelő sóvá alakítjuk át.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás H2N-W(X)m- (Y)n-Z általános képletű polipeptid-származékok, valamint ezek gyógyászatilag megfelelő sóinak előállítására, ahol a képletben m értéke 0 vagy 1, n értéke 0 vagy 1,
X jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék,
- 30 Y jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék,
Z jelentése CO2R4 vagy CONR^R^ általános képletü csoport, ahol
R1 jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, ha (a) m értéke 1, n értéke 0 és X jelentése lúgos Laminosav maradék, vagy (b) m értéke 0, n értéke 1 és Y jelentése lúgos L-aminosav maradék, vagy (c) m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és Y közül az egyik vagy mindkettő jelentése lúgos L-aminosav maradék;
R1 jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, ha (a) m és n értéke egyaránt 0, vagy (b) m értéke 1, n értéke 0 és X jelentése semleges Laminosav maradék, vagy (c) m értéke 0, n értéke 1, továbbá Y jelentése semleges L-aminosav maradék, vagy (d) m és n értéke egyaránt 1, továbbá X és Y jelentése egyaránt semleges L-aminosav maradék;
R2 és R^ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypontban megadottak szerint járunk el.
3. Eljárás a H2N-R-COOH általános képletü polipeptid-szár- 31 - mazékok és ezek gyógyászatilag megfelelő sóinak előállítására, ahol a képletben
R jelentése valamely következő aminosav szekvencia:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly, vagy His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg, vagy His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly vagy His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys aminosav szekvencia, ahol a származékok pl értéke mintegy 4,0 vagy ennél kisebb, vagy ahol a pl érték mintegy 7,0 vagy ennél nagyobb, és ahol a származékok inzulintropin hatást mutatnak, azzal a feltétellel, hogy az előállított származék C-terminális része egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilésztertől eltérő, továbbá azzal a feltétellel, hogy a származékok C-terminális része a CONR2R3 általános képletű karboxamid-csoporttól eltérő, ahol a képletben R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy a polipeptid-származékokat ismert módon állítjuk elő, majd a kapott származékot kívánt esetben gyógyászatilag megfelelő sóvá alakítjuk át.
* t » ♦
···:
4. A 3. igénypont szerinti eljárás a H2N-R-X-(Y)n-Z általános képletű polipeptid-származékok, valamint ezek gyógyászatilag megfelelő sóinak előállítására, ahol a képletében n értéke 0 vagy 1,
X jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Y jelentése lúgos vagy semleges L-aminosav maradék;
Z jelentése CO2R1 vagy CONR2R3 általános képletű csoport, amelyekben
R1 jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú, 1-6 szénatomos alkilcsoport, az esetben, ha (a) n értéke 0 és X jelentése lúgos L-aminosav maradék, vagy (b) n értéke 1 továbbá X és Y közül az egyik vagy mindkettő jelentése lúgos L-aminosav maradék;
R1 jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, ha (a) n értéke 0 és X jelentése semleges L-aminosav maradék, vagy (b) n értéke 1, továbbá X és Y jelentése egyaránt semleges L-aminosav maradék;
R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy a polipeptid-származékokat ismert módon állítjuk elő, majd a kapott származékot kívánt'esetben-gyógyászatilag megfelelő sóvá alakítjuk át.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan polipeptid-szárt » > ♦ mazékok előállítására, amelyek képletében
R jelentése His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly, azzal jellemezve, hogy az előállítást a 4. igénypont szerint végezzük.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás olyan polipeptid-származékok előállítására, amelyek képletében n értéke 0 és X jelentése Arg, azzal jellemezve, hogy a műveletet az 5. igénypont szerint végezzük.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás olyan polipeptid-származékok előállítására, amelyek képletében Z jelentése CO2R1 és R1 jelentése hidrogénatom, vagy Z jelentése CONR2R3, amelyben R2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy a műveletet a 6. igénypont szerint végezzük.
8. Az 5. igénypont szerinti eljárás olyan polipeptid-származékok előállítására, amelyek képletében n értéke 1, továbbá X és Y jelentése egyaránt Arg, azzal jellemezve, hogy az eljárást az 5. igénypont szerint végezzük.
9. A 8. igénypont szerinti eljárás olyan polipeptid-származékok előállítására, amelyek képletében Z jelentése CO2R1, amelyben R1 jelentése hidrogénatom vagy Z jelentése CONR2R3, amelyben R2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
10. Az 1-9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az előállítás során egy vagy több alábbi lépést alkalmazunk:
♦ t ' 9
(a) A primer struktúrájú polipeptid-származékot katalitikus mennyiségű sav jelenlétében 1-6 szénatomos alkanollal reagáltatva a polipeptidet C-terminális-(1-6 szénatomos alkil)-észterré alakítjuk;
(b) a polipeptidben lévő Asp és/vagy Glu maradékok (1-6 szénatomos alkil)-észtereinek előállítására a megfelelő polipeptidet 1-6 szénatomos alkanollal reagáltatjuk katalitikus mennyiségű sav jelenlétében;
(c) a karboxamid-származékok előállítására a primer struktúrájú polipeptideket szilárd fázisú peptid szintézissel állítjuk elő;
(d) a polipeptidben lévő Gin maradékot dezamidáljuk;
(e) a polipeptidekben az N-terminális részen és/vagy a Lys maradékok epszilon csoportján lévő szabad aminosavakat alkilezzük vagy amidáljuk, vagy ezen műveleteket kombináljuk, (f) valamely polipeptidet ciklusos anhidriddel reagáltatjuk;
(g) a polipeptid-származékokban lévő lúgos aminosav-maradékot egy savas vagy semleges aminosav-maradékkal helyettesítjük; illetőleg (h) a polipeptid-származékokban lévő semleges aminosavmaradékot egy savas aminosav-maradékkal helyettesítjük.
11. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. va^gy 3. igénypont szerint előállított polipeptid-származékokat -j^zubsztituensek jelentése az 1. és
3. igénypontban megadottal azonos - a gyógyászatban általában alkalmazott segéd- és vivőanyagokkal elegyítve gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US89907392A | 1992-06-15 | 1992-06-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9301739D0 HU9301739D0 (en) | 1993-09-28 |
| HUT64367A true HUT64367A (en) | 1993-12-28 |
Family
ID=25410453
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9301739A HUT64367A (en) | 1992-06-15 | 1993-06-14 | Method for producing glucagon-like peptides and insulino-tropine derivatives as well as medical preparatives containing said compounds |
| HU95P/P00479P HU211498A9 (en) | 1992-06-15 | 1995-06-28 | Glucagon-like peptide and insulinotropin derivatives |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU95P/P00479P HU211498A9 (en) | 1992-06-15 | 1995-06-28 | Glucagon-like peptide and insulinotropin derivatives |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0969016A2 (hu) |
| JP (1) | JP2575298B2 (hu) |
| KR (1) | KR0154880B1 (hu) |
| CN (1) | CN1057098C (hu) |
| AU (1) | AU671117B2 (hu) |
| BR (1) | BR9306551A (hu) |
| CA (1) | CA2138161C (hu) |
| CZ (1) | CZ315594A3 (hu) |
| FI (1) | FI932722A7 (hu) |
| HR (1) | HRP930993A2 (hu) |
| HU (2) | HUT64367A (hu) |
| IL (1) | IL105928A0 (hu) |
| MX (1) | MX9303554A (hu) |
| NO (1) | NO944853D0 (hu) |
| PL (1) | PL176007B1 (hu) |
| RU (1) | RU2128663C1 (hu) |
| SK (1) | SK155694A3 (hu) |
| WO (1) | WO1993025579A1 (hu) |
| YU (1) | YU41493A (hu) |
Families Citing this family (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6849708B1 (en) | 1986-05-05 | 2005-02-01 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone and uses thereof |
| US5614492A (en) * | 1986-05-05 | 1997-03-25 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone GLP-1 (7-36) and uses thereof |
| US7138486B2 (en) | 1986-05-05 | 2006-11-21 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone derivatives and uses thereof |
| FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| US6284727B1 (en) | 1993-04-07 | 2001-09-04 | Scios, Inc. | Prolonged delivery of peptides |
| US5705483A (en) | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
| GB9409496D0 (en) * | 1994-05-12 | 1994-06-29 | London Health Ass | Method for improving glycaemic control in diabetes |
| US5574008A (en) * | 1994-08-30 | 1996-11-12 | Eli Lilly And Company | Biologically active fragments of glucagon-like insulinotropic peptide |
| US5512549A (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-30 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptide analogs, compositions, and methods of use |
| AU4415796A (en) * | 1994-12-07 | 1996-06-26 | Bionebraska, Inc. | Production of c-terminal amidated peptides from recombinant protein constructs |
| US5990077A (en) * | 1995-04-14 | 1999-11-23 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 and its therapeutic use |
| US5834428A (en) | 1995-04-14 | 1998-11-10 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 and its therapeutic use |
| US6184201B1 (en) | 1995-04-14 | 2001-02-06 | Nps Allelix Corp. | Intestinotrophic glucagon-like peptide-2 analogs |
| US5747453A (en) * | 1995-06-06 | 1998-05-05 | Alza Corporation | Method for increasing the electrotransport flux of polypeptides |
| US6333189B1 (en) | 1996-06-06 | 2001-12-25 | Alza Corporation | Method of making an electrotransport device |
| US6006753A (en) * | 1996-08-30 | 1999-12-28 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery |
| UA65549C2 (uk) | 1996-11-05 | 2004-04-15 | Елі Ліллі Енд Компані | Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція |
| EP0996459B1 (en) | 1997-01-07 | 2005-09-21 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Use of exendins and agonists thereof for the reduction of food intake |
| US5981488A (en) * | 1997-03-31 | 1999-11-09 | Eli Lillly And Company | Glucagon-like peptide-1 analogs |
| US7157555B1 (en) | 1997-08-08 | 2007-01-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist compounds |
| US7223725B1 (en) | 1997-11-14 | 2007-05-29 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist compounds |
| CA2310097C (en) | 1997-11-14 | 2014-07-29 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Novel exendin agonist compounds |
| US6380357B2 (en) | 1997-12-16 | 2002-04-30 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like peptide-1 crystals |
| FR2777283B1 (fr) * | 1998-04-10 | 2000-11-24 | Adir | Nouveaux composes peptidiques analogues du glucagon-peptide- 1 (7-37), leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| JP4624558B2 (ja) | 1998-08-10 | 2011-02-02 | ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ レプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | ＧＬＰ−１またはＥｘｅｎｄｉｎ−４による、非インスリン産生細胞のインスリン産生細胞への分化、およびその使用 |
| US6903186B1 (en) * | 1998-12-07 | 2005-06-07 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S | Analogues of GLP-1 |
| DK1137666T5 (da) * | 1998-12-07 | 2009-10-05 | Univ Tulane | GLP-1-analoger |
| PT1180121E (pt) | 1999-05-17 | 2004-03-31 | Conjuchem Inc | Peptidos insulinotropicos de longa duracao |
| US6514500B1 (en) | 1999-10-15 | 2003-02-04 | Conjuchem, Inc. | Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!} |
| ES2529300T3 (es) | 2000-04-12 | 2015-02-18 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Proteínas de fusión de albúmina |
| EP2062593A3 (en) | 2000-12-01 | 2011-08-17 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Method for producing preparation containing bioactive peptide |
| AU2002228608A1 (en) | 2000-12-13 | 2002-06-24 | Eli Lilly And Company | Amidated glucagon-like peptide-1 |
| AU2002348469B2 (en) * | 2001-10-18 | 2008-03-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Human glucagon-like-peptide-1 mimics and their use in the treatment of diabetes and related conditions |
| ES2425738T3 (es) | 2001-12-21 | 2013-10-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Proteínas de fusión de la albúmina |
| KR101165431B1 (ko) | 2002-02-20 | 2012-07-12 | 에미스페어 테크놀로지스, 인코포레이티드 | Ｇｌｐ-1 분자의 투여 방법 |
| CA2513213C (en) | 2003-01-22 | 2013-07-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| US20060286129A1 (en) | 2003-12-19 | 2006-12-21 | Emisphere Technologies, Inc. | Oral GLP-1 formulations |
| JP2007537149A (ja) * | 2004-01-08 | 2007-12-20 | セラテクノロジーズ インコーポレイテッド | 長時間作用性のグルカゴン様ペプチド−１類似体 |
| CA2564031A1 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-03 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Method for the purification of albumin conjugates |
| US8039432B2 (en) | 2005-11-09 | 2011-10-18 | Conjuchem, Llc | Method of treatment of diabetes and/or obesity with reduced nausea side effect |
| EP4074327A1 (en) | 2008-06-27 | 2022-10-19 | Duke University | Therapeutic agents comprising elastin-like peptides |
| US9296805B2 (en) * | 2009-06-18 | 2016-03-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized insulinotropic peptides and methods of use |
| JP6224586B2 (ja) | 2012-07-10 | 2017-11-01 | 武田薬品工業株式会社 | 注射用製剤 |
| PL3297654T3 (pl) | 2015-05-22 | 2021-12-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Leczenie pobariatrycznej hipoglikemii eksendyną (9-39) |
| WO2017210100A1 (en) * | 2016-06-02 | 2017-12-07 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon-like peptide-1-t3 conjugates |
| SI3541366T1 (sl) | 2016-11-21 | 2025-05-30 | Amylyx Pharmaceuticals, Inc. | Zapufrane formulacije eksendina (9-39) |
| CA3055759A1 (en) * | 2017-03-08 | 2018-09-13 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Apparatus and methods for administration of a nauseogenic compound from a drug delivery device |
| KR102665710B1 (ko) | 2017-08-24 | 2024-05-14 | 노보 노르디스크 에이/에스 | Glp-1 조성물 및 그 용도 |
| JP7761567B2 (ja) | 2020-02-18 | 2025-10-28 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 医薬製剤 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04504246A (ja) * | 1989-03-20 | 1992-07-30 | ザ・ジェネラル・ホスピタル・コーポレーション | インシュリン刺激ホルモン |
| JP3262329B2 (ja) * | 1990-01-24 | 2002-03-04 | アイ． バックレイ，ダグラス | 糖尿病治療に有用なｇｌｐ―１アナログ |
| EP0499990B1 (en) * | 1991-02-19 | 1996-05-15 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing cysteine-free peptides |
| DK36392D0 (da) * | 1992-03-19 | 1992-03-19 | Novo Nordisk As | Anvendelse af kemisk forbindelse |
| DK36492D0 (da) * | 1992-03-19 | 1992-03-19 | Novo Nordisk As | Praeparat |
| DK39892D0 (da) * | 1992-03-25 | 1992-03-25 | Bernard Thorens | Peptid |
-
1993
- 1993-04-14 RU RU94046251A patent/RU2128663C1/ru active
- 1993-04-14 CZ CZ943155A patent/CZ315594A3/cs unknown
- 1993-04-14 CA CA002138161A patent/CA2138161C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-14 BR BR9306551A patent/BR9306551A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-04-14 JP JP6501448A patent/JP2575298B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-14 PL PL93306766A patent/PL176007B1/pl unknown
- 1993-04-14 EP EP99110184A patent/EP0969016A2/en not_active Withdrawn
- 1993-04-14 KR KR1019940704555A patent/KR0154880B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-14 AU AU40275/93A patent/AU671117B2/en not_active Expired
- 1993-04-14 WO PCT/US1993/003388 patent/WO1993025579A1/en not_active Ceased
- 1993-04-14 SK SK1556-94A patent/SK155694A3/sk unknown
- 1993-04-14 EP EP93909505A patent/EP0646128A1/en not_active Ceased
- 1993-06-07 IL IL105928A patent/IL105928A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1993-06-14 HU HU9301739A patent/HUT64367A/hu unknown
- 1993-06-14 FI FI932722A patent/FI932722A7/fi unknown
- 1993-06-14 YU YU41493A patent/YU41493A/sh unknown
- 1993-06-14 CN CN93108718A patent/CN1057098C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-06-15 MX MX9303554A patent/MX9303554A/es active IP Right Grant
- 1993-06-24 HR HR07/899,073A patent/HRP930993A2/xx not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-12-14 NO NO944853A patent/NO944853D0/no not_active Application Discontinuation
-
1995
- 1995-06-28 HU HU95P/P00479P patent/HU211498A9/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2575298B2 (ja) | 1997-01-22 |
| CA2138161C (en) | 2003-10-21 |
| FI932722L (fi) | 1993-12-16 |
| RU94046251A (ru) | 1996-10-27 |
| AU671117B2 (en) | 1996-08-15 |
| FI932722A0 (fi) | 1993-06-14 |
| CN1085913A (zh) | 1994-04-27 |
| NO944853L (no) | 1994-12-14 |
| HU9301739D0 (en) | 1993-09-28 |
| MX9303554A (es) | 1994-06-30 |
| EP0969016A2 (en) | 2000-01-05 |
| AU4027593A (en) | 1994-01-04 |
| KR950701937A (ko) | 1995-05-17 |
| EP0646128A1 (en) | 1995-04-05 |
| SK155694A3 (en) | 1995-05-10 |
| RU2128663C1 (ru) | 1999-04-10 |
| PL176007B1 (pl) | 1999-03-31 |
| CA2138161A1 (en) | 1993-12-23 |
| CN1057098C (zh) | 2000-10-04 |
| HU211498A9 (en) | 1995-11-28 |
| NO944853D0 (no) | 1994-12-14 |
| BR9306551A (pt) | 1998-09-15 |
| HRP930993A2 (en) | 1996-12-31 |
| FI932722A7 (fi) | 1993-12-16 |
| JPH07504679A (ja) | 1995-05-25 |
| KR0154880B1 (ko) | 1998-10-15 |
| CZ315594A3 (en) | 1995-07-12 |
| YU41493A (sh) | 1996-10-18 |
| WO1993025579A1 (en) | 1993-12-23 |
| IL105928A0 (en) | 1993-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT64367A (en) | Method for producing glucagon-like peptides and insulino-tropine derivatives as well as medical preparatives containing said compounds | |
| US5686411A (en) | Amylin agonist peptides and uses therefor | |
| AU2017216533B2 (en) | Improved peptide pharmaceuticals | |
| US6921748B1 (en) | Analogs of gastric inhibitory polypeptide and their use for treatment of diabetes | |
| RU2167881C2 (ru) | Соединения, способствующие высвобождению гормона роста | |
| DK172760B1 (da) | Lineære og cycliske analoge til alfa-MSH-fragmenter med ekstraordinær styrke, lægemiddel eller kosmetisk præparat indeholde | |
| US5084442A (en) | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof | |
| JP2022172128A (ja) | インスリン抵抗性のための改善されたペプチド医薬品 | |
| CN103732617A (zh) | 用于胰岛素抵抗的改进的肽医药 | |
| IL101452A (en) | Analogs of the factor that releases the growth hormone, their preparation and the pharmaceutical preparations that contain them | |
| JPH11152299A (ja) | 新規アミリン作動薬ペプチドおよびその使用 | |
| HUT50487A (en) | Process for production of peptides | |
| US7402663B2 (en) | Modified peptide | |
| KR20190019030A (ko) | 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체 | |
| AU2002238701A1 (en) | Modified derivatives of CCK-8 | |
| EP0307860B1 (en) | Cyclic GRF-analogs | |
| CN120981479A (zh) | Gip/glp1/gcg三受体激动剂及其用途 | |
| US20090281032A1 (en) | Modified CCK peptides | |
| JPH04295496A (ja) | インスリン活性を有する短ペプチド | |
| HK1196280B (zh) | 改良的肽药物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: SCIOS INC., US |
|
| DFD9 | Temporary protection cancelled due to non-payment of fee |