KR0153774B1

KR0153774B1 - 항-트롬빈

Info

Publication number: KR0153774B1
Application number: KR1019900701389A
Authority: KR
Inventors: 로이 소여; 크리스토퍼 포웰-존스; 안토니 아트킨슨; 애스가 일레트리 콸라
Original assignee: 로이 티. 소여; 바이오팜 리미티드
Priority date: 1988-11-11
Filing date: 1989-11-13
Publication date: 1998-10-15
Also published as: DE68918246D1; EP0373767A1; DK87891A; IE64652B1; JP2865345B2; GB8826428D0; FI912240A0; WO1990005143A1; ZA898655B; DK173077B1; US5472942A; AU636857B2; JPH04502907A; CA2002924C; KR900701832A; HUT62016A; DK87891D0; EP0373767B1; RU2050160C1; CA2002924A1

Abstract

내용없음.

Description

항-트롬빈

본 발명은 신규난 항-트롬빈에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 거머리 조직 및 거리미 분비물로부터 유도된 신규한 항-트롬빈에 관한 것이다.

히루딘(hirudin)은 그 특성이 잘 알려진 공지의 폴리펩타이드로서, 트롬빈에 대해 특이성을 갖는 것으로 알려져 있으며, Hirudo medicinalis 종 거머리의 추출물에서 얻어진다. 이 폴리펩타이드는 비교적 작은 분자량 값(약 7,000)을 가지며 65 아미노산으로 이루어져 있다. 히루딘의 이소형태(isoform)들중 하나가 Dodt, Muller, Seemuller 및 Chang(The complete amino acid sequence of hirudin, a trombin-spesific inhibitor ; FEBS 165(1984) ; pp 180-184)에 의해 밝혀졌는 바, 그 최초로 밝혀진 시퀀스는 다음과 같다.

그 후,2종의 히루딘 변이체가 특성지워졌으며 그 아미노산 시퀀스가 결정되었다. 그중 하나의 변이체는 Dodt, Machleidt, Seemuller, Maschler 및 Fritz(Isolation and characterisation of hirudin isoinhibitors and sequence analysis of hidurin PA, Biol. Chem. Hoppe-seyler, 367(1986) pp 803-811)에 의해 설명된 것으로, 앞서 설명한 시퀀스에서 다음과 같이 변환되어 있다.

1. 제 1위치의 -val- 대신 -ile-

2. 제 2위치의 -val- 대신 -thr-

3. 제 24위치의 -gln- 대신 -lys-

4. 제 33위치의 -asp- 대신 -asn-

5. 제 35위치의 -glu- 대신 -lys-

6. 제 36위치의 -lys- 대신 -gly-

7. 제 47위치의 -lys- 대신 -asn-

8. 제 49위치의 -gln- 대신 -glu-

9. 제 53위치의 -asp- 대신 -asn-

다른 하나의 변이체는 Harvey, Degryse, Stefani, Schamber 등(Cloning and expression of a cDNA coding for the anti-coagulant hirudin from the bloodsucking(each, Hirudo medicinalis, Proc. Nat. Acad. Sci., U.S.A.(1986) pp 1084-1088)에 의해 설명되었으며, 이들은 제1 내지 32 위치의 시퀀스가 상기 변이체와 동일하고, 그 이후의 시퀀스는 최초로 밝혀진 시퀀스에서 다음과 같이 변환되어 있다.

1. 제 33위치의 -asp- 대신 -gln-

2. 제 35위치의 -glu- 대신 -lys-

3. 제 36위치의 -lys- 대신 -asp-

4. 제 53위치의 -asp- 대신 -glu-

5. 제 58 치의 -glu- 대신 -pro-

6. 제 62위치의 -glu- 대신 -asp-

7. 제 64위치의 -leu- 대신 -asp-

8. 제 65위치의 -gln- 대신 -glu-

상기에서 지적한 바와 같이 히루딘은 Hirudo medicinalis 종의 거머리로부터 유도되어 왔다.

그러나, 본 발명자들은 항-트롬빈을 Hirudinaria manillensis 종의 거머리로부터 유도하였다.

Hirudinaria manillensis는 양서류 및 포유류의 피를 빨아먹는다는 점에서 Hirudo medicinalis와 유사하지만, Hirudo medicinalis 보다 진화된 것으로, 이들 Hirudinaria의 분비물에 존재하는 활성물질이 Hirudo medicinalis에 존재하는 것과 같은지, 그리고 그들의 아미노산 시퀀스가 동일한지 혹은 현저하게 다른 것인지에 대해서 임의로 추측할 수는 없었다.

본 발명자들은 Hirudinaria manillensis로부터 항-트롬빈을 분리하고 연구한 결과, 이는 Hirudo medicinalis로부터 유도된 히루딘과는 그 아미노산 시퀀스가 다르며, 특히 히루딘에서 트롬빈에 대한 억제작용을 수행하는데 결정적인 부분인 C-터미날 부분에 있어서는 그 아미노산 시퀀스가 전혀 상이한 바, Hirudinaria manillensis로부터 유도된 항-트롬빈은 전혀 신규한 것이고 전혀 새로운 항-트롬빈활성을 나타냄을 알게 되었다.

즉, 본 발명의 목적은 신규한 항-트롬빈을 제공하는데 있다.

이하 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 트롬빈에 대해 특성이성의 억제작용을 갖으며 아미노산 시퀀스 gly-asp-phe-glu-glu-ile-pro-asp-glu-Z-ile-lys(여기서, Z은 아미노산 잔기이다)를 포함하는 폴리펩타이드나 그의 약제학적 허용가능한 염, 유도체 및 그의 생전구체인 것이다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 Hirudinaria manillensis로부터 신규한 항-트롬빈을 분리하였는바, 그러한 항-트롬빈은 다음과 같은 아미노산 시퀀스를 갖고 있었다.

여기서, X, Y 및 Z은 각각 임의의 아미노산을 나타내고,

D는 cys 또는 pro 이며,

E는 glu, asp 또는 his 이고,

F는 asp, trp 또는 lys 이며,

*는 상기에서 언급한 첫 번째 히루딘 변이체와 다른 부분의 위치를 나타낸 것이다.

상기 시퀀스는 히루딘시퀀스와 약 62%의 상동성(즉, 약 38%의 상이성)을 나타내어 놀랍게도 실질적으로 거의 다르며, 특히 주요하게는 C-터미너스에서 매우 다르고 다음에서 명확히 다르다.

제 13위치(-leu- 대신 -try-),

제 17위치(-glu- 대신 -val-),

제 24위치(-gln- 대신 -glu-),

제 26위치(-asn- 대신 -asp-),

제 27위치(-lys- 대신 -asn-),

제 29위치(-ile- 대신 -asn-),

제 30위치(-leu- 대신 -cys- 또는 -pro-),

제 31위치(-gly- 대신 -gln-),

제 32위치(-ser- 대신 -leu-),

제 33위치(-asp- 대신 -ser-),

제 34위치(-gly- 대신 -ser-),

제 35위치(-glu- 대신 -ser-),

제 36위치(-lys- 대신 -gly-),

제 41위치(-thr- 대신 -glu-, -asp- 또는 -his-),

제 47위치(-pro- 대신 -asp-, -lys- 또는 -trp-),

제 51위치(-his- 대신 -gln-),

제 52위치(-asn- 대신 -thr-),

제 53위치(-asp- 대신 -glu-)

제 61위치(-glu- 대신 -asp-),

제 64위치(-leu- 대신 -ile-) 및

제 65위치(-gln- 대신 -lys-)

상기 시퀀스에서 제 61위치의 변환(glu 대신 asp)과 제 62위치의 변환(leu 대신 ile) 및 65위치의 변환(glu 대신 lys)은 매우 중요한 것으로 여겨지는데, 이는 시퀀스 55∼64가 히루딘의 억제작용에 결정적인 부분으로 생각되기 때문이다(이와 관련하여, Owen 등의 N-terminal replacement of small peptide anti-coagulants based on hirudin, 1988, J. Med, Chem., 31 : pp. 1009-1011 참조). 본 발명에 따른 항-트롬빈에서 아스파테이트(-asp-)와 이소루이신(-ile- 및 라이신(-lys-)의 존재는 새로운 트롬빈-억제 부분을 초래하게 된다. 즉, 시퀀스 54∼65는 본질적으로 전혀 새로운 것이며 새로운 항-트롬빈 특성을 갖는 것이다. 그러므로, 본 발명은 상기에서 정의한 바와 같은 아미노산 시퀀스 54∼65를 갖는 작은 펩타이드를 포함한다.

상기 시퀀스에서 제 63위치의 아미노산(Z으로 나타냄)은 타이로신(tyr)일 수 있으며, 일반적으로 황산화 되어 있다(반면, 재조합 히루딘은 일반적으로 이 위치에서 황산화되어 있지 않다).

본 발명에 따른 거머리로부터 유도된 항-트롬빈( 및 그로부터 추정되는 그의 DNA 시퀀스)은 의료용 거머리 Hirudo manillensis에 존재하는 것으로 알려져 있는 공지의 엘라스테이즈/키모트립신 억제제인 에글린(Seemuller 등, Eglin : elastase-cathepsin G inhibitor form leeches, 1981 Meth. Enzymol. 80 : pp. 804-816)과 상동성이 없다.

본 발명에 따른 항-트롬빈은, 일반적으로, Hirudinaria manillensis종의 조직으로부터 용매추출법등의 기술과 크로마토그라피에 의한 분별법 등을 이용하여 분리하거나 혹은 Hirudinaria manillensis의 분비물(예컨대, 타액등)로부터 유사한 방법으로 분리시킬 수도 있다.

그러므로, 본 발명에 따르면, Hirudinaria manillensis종 거머리의 조직 또는 분비물로부터 유도된 항-트롬빈을 제공한다. 이러한 항-트롬빈은 트롬빈에 대한 활성에 있어서 특이성을 갖는다.

또한, 본 발명은 상기에 지적한 구조의 폴리펩타이드와 동등한 재조합 또는 단백질공학 등가물을 포함한다.

본 발명에 따른 항-트롬빈은 그를 위한 약제학적 허용가능한 운반체 또는 부형제와 함께 약제에 이용될 수 있다. 일반적으로 그러한 제형은, 그 운반체로 생리식염수나 물(허용가능한 순도)을 사용하여, 정맥내로 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 항-트롬빈은 혈액응고와 같은 혈전색전증 등의 치료에 유용하다. 본 발명에 따른 항-트롬빈은 플라스미노 겐 활성제와 상용성을 갖는 것으로 밝혀졌는바, 본 발명의 한 구현예에 따르면 항-트롬빈을 조직 플라스미노겐 활성제와 같은 플라스미노겐 활성제와 함께 투여한다.

본 발명에 따른 항-트롬빈을 거머리 조직으로부터 분리하는 과정을 다음의 실시예에 의거하여 설명하겠다.

[단계 1 : 아세톤 추출]

600g의 Hirudinaria manillensis 거머리를 약 2ℓ의 96% 에탄올에서 24시간 동안 탈수시킨 다음, 동물의 앞면을 그 몸체로부터 절개해내고 약 200㎖의 96% 에탄올에서 24시간 동안 더 탈수시켰다.

탈수된 거머리의 머리를 작은 조각들로 잘게 부수고, 여기에 40㎖의 아세톤과 60㎖의 물과의 혼합물을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켜 주고, 2700rpm에서 15분 동안 회전시킨 후, 그 상등액을 다른 용기에 옮겼다.

얻어진 펠렛을 100㎖의 아세톤 : 물(40 : 60) 혼합물에 다시 현탁시키고, 이어서 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 이 혼합물을 2700rpm에서 15분 동안 회전시키고 그 상등액을 다른 용기에 옮긴 후, 이를 앞서 얻어진 상등액과 합쳤다. 80㎖의 아세톤과 20㎖의 물을 상기 합쳐진 상등액에 첨가하고 빙초산으로 pH를 4.4로 낮추었다.

그 혼합물을 2700rpm으로 15분 동안 회전시키고 그 상등액을 다른 용기에 옮겼다. 30% 암모니아를 이용하여 이 용액의 pH를 6.0으로 맞추었다. 그 부피를 35℃에서 회전증발기를 이용하여 약 30㎖로 감소시켰다.

트리클로로아세트산 결정을 첨가하여 용액의 pH를 1.9로 낮춘후, 원심분리하여 침전물을 제거하였다. 그런 다음, 9배 이상의 부피의 아세톤을 이용하여 이 용액으로 붙 미정제 상태의 항-트롬빈을 침전시켰다.

이 혼합물을 2700rpm에서 15분 동안 회전시킨 후 그 상등액을 제거해내었다. 얻어진 펠렛을 50㎖ 아세톤에 다시 현탁시키고, 2700rpm에서 10분 동안 회전시켜서, 그 세척액을 제거하고, 그 침전물을 건조기에서 1시간 동안 진공건조시켰다. 미정제된 상태의 항트롬빈을 4.0㎖의 물에 녹였다.

단백질의 함량 280nm에서의 흡광도를 측정하여 산출한 결과 78mg/㎖였으며, 그 활성을 트롬빈/피브로겐 응고 억제로 평가한 결과 2400 항-트롬빈 유니트/㎖(혹은 분쇄된 머리 200g당 약 10,000 항트롬빈 유니트)였다. 총 활성은 9600 항-트롬빈 유니트였고, 특이활성은 30.7 항-트롬빈 유니트/mg 단백질로 산출되었다.

[단계 2 : 에탄올 추출]

미정제 상태의 항-트롬빈 용액을 3℃로 냉각시킨 후, 여기에 찬 96% 에탄올을 1.2㎖씩 5분 간격으로 6회에 걸쳐 첨가하였다. 그런 다음, 이 혼합물을 3℃에서 10분 동안 방치한 후 2400rpm에서 10분 동안 원심분리하고 그 상등액을 다른 용기에 옮겨 보관하였다.

상기에서 얻어진 펠렛을 4㎖의 찬 증류수에 다시 현탁시키고 다시 찬 96% 에탄올 7.2㎖와 혼합하였다. 이를 3℃에서 30분 동안 원심분리하였다. 이를 3℃에서 30분 동안 방치한 다음 2400rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 그 상등액을 분리해내어 앞서 얻어진 상등액과 합쳤다.

상기에서 얻어진 펠렛을 4㎖의 찬 96% 에탄올의 혼합물에 다시 현탁시키고 3℃에서 30분 동안 방치하였다. 그런 다음, 2400rpm에서 10분 동안 회전시킨 후 그 상등액을 다른 용기로 옮겨 합쳤다.

이 합쳐진 액을 0℃로 냉각시킨 다음, 0.5% 암모늄 아세테이트를 함유하는 에탄올 50.7㎖를 -10℃에서 첨가하였다. 이를 30분 동안 방치한 다음 2400rpm에서 10분 동안 회전시켰다.

그 상등액을 제거해내고, 그 침전물을 50㎖의 찬 에탄올로 세척한 후, 이 침전물을 건조기에서 1시간 동안 진공건조시켰다.

그 다음, 이를 물에 녹이고, 항-트롬빈 활성과 단백질 함량을 측정한 후, 바이알에 담아 동결건조시켰다. 이때 부피는 1.5㎖였다.

단백질 함량은 280nm에서의 흡광도를 이용하여 산출한 결과 19mg/㎖였고, 활성은 트롬빈/피브로겐 응고 분석법을 이용하여 측정한 결과 1000 항-트롬빈 유니트/㎖였으며, 특이활성은 52.6 항-트롬빈 유니트/mg인 것으로 나타났다.

[실시예 2]

상기 실시예 1에서의 단계 1을 반복하고 이어서 다음의 단계 2 및 3을 수행하였다.

[단계 2 : 양이온 교환 크로마토그라피]

미정제 상태의 항-트롬빈을 10mM 암모늄 아세테이트-아세트산 pH 4.0에 녹이고, 이를 여과하여 불용성 물질을 제거하였다.

카복시메틸셀룰로스 겔인 CM Sephadex C50(상품명)을 완충액(10mM 암모늄 아세테이트-아세트산, pH 4.0)중에서 미리 부풀린 후, 직경이 2.6cm이고 길이가 30cm인 칼럼에 팩킹한 다음, 샘플을 로딩하였다.

100㎖의 완충액을 칼럼을 따라 이동시켜서 불필요한 물질을 제거하였다. 그런 다음, 완충액을 10mM 암모늄 아세테이트 pH 4.2로 치환시켰다. 10㎖씩 분획을 수집하여 항-트롬빈 활성과 단백질 함량을 측정하였다. 각 분획에 대하여 특이활성을 산출하고 한계치를 넘는 특이활성을 갖는 분획들을 합쳐 이를 동결건조하였다.

[단계 3 : 음이온-교환 크로마토그라피]

에탄올 추출 또는 CM Sephadex 추출에 의해 얻어진 동결건조상태의 조정제된 추출물을 10mM Tris/HCl, pH 7.5에 녹이고, 동일 완충액으로 미리 평형시킨 DEAE-Sephadex A-25 칼럼(0.9 x 7cm)상에서 크로마토그라피하였다. 이 칼럼을 15㎖/시간의 유속으로 전개시켜, 용출액의 흡광도가 234nm에서 0.15 이하가 될 때까지 계속하였다. 그런 다음, 칼럼에 결합되어 있는 물질을 상기 평형 완충액에서의 NaCl 농도를 0 내지 1M로 선형 구배(각 60㎖씩)하여 용출시켰다. 흡광도와 억제활성을 측정하기 위해 그 용출액을 2㎖분획씩 수집하였다. 용출 프로필을 에탄올 추출 물질과 CM Sephadex 추출 물질에 대해 각각 제1도와 제2도에 나타내었다.

항-트롬빈 활성을 갖는 분획들을 합쳐서 농축한 후, 더 정제시키기 전에 Sephadex G-25로 탈염시켰다. 부분정제된 시료를 트롬빈 Sephadex 상에서 친화성 크로마토그라피하여 더 분별하였다. 이 칼럼을 평형 완충액(0.1M Tris/HCl, pH 8.0)으로 세척하고, 칼럼에 결합되어 있는 항-트롬빈을 1M 벤즈아미딘으로 용출시켰다. 이 용출물을 동결건조하고 탈염하였다. 그런 다음, 이 물질을 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)하였다. 50㎕의 농축 시료를 실온에서 0.1% TFA로 예비평형시킨 마이크로보어 RP-300 C-8 칼럼(3 x 0.21cm)에 투입하였다. 칼럼에 결합되어 있는 물질을 0.09% TFA를 함유하는 60% 아세토니트릴을 0 내지 100%로 선형구배하여 0.25㎖/분의 유속으로 35분 동안 용출시켰다.

이 용출액의 흡광도를 215mm에서 측정하였다. 각 피크 또는 부분적으로 분해된 피크를 분리된 분획으로 취하여 그의 억제활성을 측정하는데 사용하였다. 각 용출 프로필을 제3도에 나타내었는 바, 여기서 항트롬빈 활성을 갖는 피크(피크 5,6,7)는 다른 피크와 구분된다.

[시퀀싱]

항-트롬빈 활성을 갖는 주 피크(제3도에서 피크 5,6 및 7이 해당)를 진공건조시켜, PTH 아미노산 확인을 위한 온라인 분석기(Model 120)에 연결된 Applied Biosystems 가스상 시퀀서(Model 470A)에서 N-터미날 아미노산 시퀀스를 분석하였다.

정제된 항-트롬빈 샘플을 시퀀싱을 위한 필터에 직접 로딩하였다. 정제된 샘플에 디티오트레이톨과 4-비닐피리딘을 반응시켜 시퀀스내에 시스테인 잔기를 피리딘에틸로 유도한 후 결정하였다.

환원되어 피리딜에틸화된 항-트롬빈의 트립신 분해물을 TPCK-트립신으로 얻었다. 이 반응은 0.05M 암모늄 바이카보네이트 완충액에서 37℃를 유지하면서 4시간동안 수행하였으며, 동결건조 및 0.1% TFA에 재현탁함으로써 반응을 종료시켰다. 절편을 다음 실시예 3의 단계 5에서와 유사한 조건하에서 역상 HPLC하여 분리해내었다.

C-터미날 스퀸싱은 카복시펩티데이즈 Y 분해법과 DABS-C1법을 이용하여 실시하였다(Chang, FEBS Letts(1983), 164, pp 307-313 참조). 이렇게 하여 결정된 시퀀스는 상기에서 주어진 바와 같았다.

[실시예 3]

실시예 2의 단계 1 및 2를 반복하고, 이어서 다음의 단계 3 및 4를 수행하였다.

[단계 3 : 음이온 교환 크로마토그라피]

단계 2에서 얻어진 용액을 0.1M Na0H로 pH 7.0으로 맞추고 이를 20mM Tris/HCl, pH 7.0 완충액으로 평형화시킨 음이온 교환기 Q-Sepharose(상품명) 칼럼에 투입하였다. 결합되어 있지 않은 단백질이 제거될때까지(280mm에서의 흡광도로 검출) 완충액을 상기 칼럼에 투입한 다음, 염을 선형 또는 단계적 구배시켜서 결합되어 있던 항-트롬빈을 용출시켰다. 그 크로마토그라피 프로필을 제4도에 나타내었다.

항-트롬빈 활성을 갖는 분획을 합치고, 한외여과하여 25 내지 50㎖ 부피로 농축하였다. 이 단계에서, 항트롬빈제는 100∼400 항트롬빈유니트/mg 단백질의 특이활성을 갖었다.

[단계 4 : 겔 여과]

단계 3의 용액을 평형시킨 Sephadex 200을 함유하는 겔 여과 칼럼에 투입하고 500mM Tris HCl, 0.1M NaCl, pH 7.5로 용출시켰다. 그 크로마토그라피 프로필을 제5도에 나타내었다.

항-트롬빈 활성을 갖는 분획을 수집하여 합쳐서 동결건조하였다. 이 단계에서, 항-트롬빈제는 1000∼4000 항트롬빈 유니트/mg 단백질의 특이활성을 갖었다.

[단계 5 : 최종정제]

단계 4에서 얻은 물질을 0.1M Tris HCl, pH 8.0로 평형시킨 트롬빈-Sepharose 친화성 칼럼에 투입하고, 칼럼 결합되지 않은 물질을 동일 완충액으로 용출시켰다. 칼럼에 결합되어 있는 항-트롬빈을 1M 벤즈아미딘으로 칼럼으로부터 용출해내어 동결건조하고, 이를 Sephadex G 25를 이용하여 탈염시켰다.

친화성 크로마토그라피로 정제된 물질을 역상 칼럼(RP-300 C-8)에서 HPLC하여 더 정제하였다. 그 대표적인 예로, 샘플을 실온에서 0.1% 트리플루오로아세트산(TFA)로 평형시킨 칼럼에 투입하고, 결합되어 있는 항-트롬빈을 0.9% TFA를 함유하는 60% 아세토니트릴로 선형구배하여 용출시켰다. 단백질 피크(215/280nm에서의 흡광도로 검출)를 수집하고 항-트롬빈을 함유하는 피크의 분획을 진공건조시켰다.

[항-트롬빈 활성의 분석]

항-트롬빈 활성은 피브로겐에 대한 트롬빈의 응고활성을 억제하는 정도를 측정하거나(Markwardt, Methods in Enzymology ; XIX, pp 924 ; Hirudin as an inhibitor of Thrombin (1970)), 혹은 S-238(Kabi사 제품)과 같은 특이서 p-니트로페놀이 유도된 색소생산성 기질을 트롬빈 절단에 대한 억제를 측정하여 결정하였다.

본 발명에 따른 항-트롬빈의 활성은 히루딘에 대해 특이성인 고농도의 중화성 모노크로날 항체에 의해 중화되지 않으므로 본 발명의 항-트롬빈과 히루딘이 유사하지 않다는 점이 면역학적으로 증명된다.

그러나 본 발명에 따른 항-트롬빈과 히루딘을 동일한 1회 투약량으로 투여했을 때 응혈시간에 있어서 부분적인 유사성을 갖았는 바, 이로부터 그들이 인간의 혈액에 대해 유사한 항응고작용을 갖는다는 것을 추측할 수 있다.

Claims

트롬빈에 대해 특이성의 억제작용을 갖는 아미노산 시퀀스 gly-asp-phe-gluglu-ile-pro-asp-glu-Z-ile-lys(여기서, Z은 아미노산 잔기이다)를 포함하는 폴리펩타이드나 그의 약제학적 허용가능한 염.
제1항에 있어서, 폴리펩타이드는 다음의 아미노산 시퀀스를 갖는 것임을 특징으로 하는 폴리펩타이드와 그의 약제학적으로 허용가능한 염.

X-Y-tyr-thr-asp-cys-thr-glu-ser-gly-gln-asn-tyr-cys-leu-cys-val-gly-ser-asn-val-cys-gly-glu-gly-asp-asn-cys-asn-D-gln-leu-ser-ser-ser-gly-asn-gln-cys-val-E-gly-glu-gly-thr-pro-F-pro-gln-ser-gln-thr-glu-gly-asp-phe-glu-glu-ile-pro-asp-glu-Z-ile-lys 여기서, X,Y 및 Z은 각각 아미노산 잔기이고, D는 lys 또는 pro이며, E는 glu, asp 또는 his이고, F는 asp, lys 또는 trp이다.
제2항에 있어서, X는 val인 것임을 특징으로 하는 폴리펩타이드와 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
제2항에 있어서, Y는 ser인 것임을 특징으로 하는 폴리펩타이드와 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, Z는 try 또는 그의 황산화된 유도체인 것임을 특징으로 하는 폴리펩타이드와 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
제1항에 있어서, 폴리펩타이드는 Hirudinaria manillensis 종 거머리의 조직 또는 분비물로부터 유도된 것임을 특징으로 하는 폴리펩타이드와 그의 약제학적으로 허용가능한 염.