JPWO2020041311A5 - - Google Patents

Claims (12)

1つ以上の免疫ドミナントエピトープ内に1個以上の変化した残基を有するH3またはH5ヘマグルチニン（HA）をコードする複数のインフルエンザウイルス核酸分子を作製する方法であって、
少なくとも2つの免疫ドミナントエピトープを有するインフルエンザウイルスH3またはH5ヘマグルチニンをコードする単離された親インフルエンザ核酸分子の1つ以上の免疫ドミナントエピトープの複数のコドンにランダムな変異を導入することにより、変異インフルエンザウイルスヘマグルチニンをコードするインフルエンザ核酸分子のライブラリを提供すること；
このライブラリを細胞に導入して、該変異ヘマグルチニンを発現する細胞のライブラリを提供すること；および
該1つ以上の免疫ドミナントエピトープを形成する残基に1つ以上の置換および／または欠失がある結果として該親ヘマグルチニンと比べて免疫ドミナントエピトープの数が減少したライブラリによってコードされる変異ヘマグルチニンを同定すること、ここで、該変異H3ヘマグルチニンが置換を有する場合、該変異H3ヘマグルチニンは該親H3ヘマグルチニンと比べて5個より多い置換を有する、
を含む、方法。

H3内の、121位の残基が、Q、R、I、L、V、T、S、F、Y、もしくはAであるか、131位の残基が、R、A、M、K、V、S、Q、C、V、Y、D、E、もしくはLであるか、135位の残基が、Y、G、R、M、K、N、V、W、S、V、もしくはPであるか、138位の残基が、S、W、K、I、R、もしくはLであるか、140位の残基が、L、M、T、S、R、K、M、もしくはPであるか、142位の残基が、N、D、G、Y、Q、E、H、N、L、もしくはPであるか、144位の残基が、T、K、V、G、D、H、L、もしくはQであるか、145位の残基が、P、R、W、もしくはKであるか、155位の残基が、C、F、H、I、R、A、V、S、もしくはNであるか、156位の残基が、P、G、S、M、R、T、A、もしくはCであるか、157位の残基が、D、P、S、G、I、R、もしくはTであるか、158位の残基が、R、V、S、A、K、C、もしくはQであるか、171位の残基が、T、F、L、E、H、C、もしくはRであるか、189位の残基が、A、P、T、L、A、S、Y、もしくはRであるか、193位の残基が、Q、R、N、T、E、V、もしくはPであるか、212位の残基が、V、R、G、S、M、D、もしくはEであるか、または225位の残基が、L、P、C、S、Q、G、Y、もしくはFであるか、または、H5内の、119位の残基が、L、K、R、S、G、T、E、A、V、F、もしくはNであるか；123位の残基が、L、Y、I、M、N、S、V、K、G、T、もしくはRであるか；125位の残基が、L、D、N、G、W、M、I、R、K、F、A、もしくはSであるか；126位の残基が、S、R、I、G、N、Q、A、N、もしくはRであるか；127位の残基が、V、A、S、M、L、K、F、もしくはYであるか；129位の残基が、D、S、G、K、W、R、E、V、Q、A、I、もしくはFであるか；138位の残基が、G、D、E、L、A、M、V、F、R、もしくはSであるか；140位の残基が、T、G、S、R、D、K、Q、E、C、もしくはVであるか；141位の残基が、R、P、W、K、E、A、M、D、L、もしくはQであるか；151位の残基が、T、S、L、Y、K、N、もしくはQであるか；152位の残基が、A、P、T、Y、H、E、S、I、F、もしくはDであるか；153位の残基が、R、Q、T、N、S、F、P、V、もしくはKであるか；154位の残基が、L、T、D、R、P、S、もしくはHであるか；155位の残基が、N、G、K、H、T、L、S、I、P、もしくはQであるか；156位の残基が、T、F、R、S、D、P、H、G、A、もしくはNであるか；185位の残基が、L、D、N、G、E、F、S、L、Q、P、V、M、R、A、もしくはSであるか；または189位の残基が、Y、S、L、R、K、G、E、F、D、V、E、I、もしくはHである、請求項1に記載の方法。

前記変異HAが、10個以上の置換を有する、請求項1または2に記載の方法。

親インフルエンザウイルスと比べて変化した免疫ドミナントエピトープを持つ変異ヘマグルチニンをコードするインフルエンザウイルスを作製する方法であって、
親H3 HA核酸分子において、121位、131位、135位、138位、140位、142位、144位、145位、155位、156位、157位、158位、171位、189位、193位、212位、または225位の残基についての2つ以上のコドンに、この親H3 HA内の免疫ドミナントエピトープの残基ではない残基をコードする変異を導入すること、または、親H5 HA核酸分子において、119位、123位、125位、126位、127位、129位、138位、140位、141位、151位、152位、153位、154位、155位、156位、185位、または189位の残基についての2つ以上のコドンに、この親H5 HA内の免疫ドミナントエピトープの残基ではない残基をコードする変異を導入すること；および
この変異したH3またはH5 HAを持つ1種類以上のインフルエンザウイルスを単離または作製すること、ここで、該変異したH3核酸は、アミノ酸置換をコードするよう変異した5個より多いコドンを有する、
を含む方法。

前記変異したH3 HA内の、121位の残基が、Q、R、I、L、V、S、F、Y、もしくはAであるか、131位の残基が、R、V、S、Q、C、V、Y、D、E、もしくはLであるか、135位の残基が、Y、K、N、V、W、G、S、V、もしくはPであるか、138位の残基が、W、K、I、F、R、もしくはLであるか、140位の残基が、L、M、T、S、R、K、M、Y、もしくはPであるか、142位の残基が、N、G、Y、Q、E、H、N、もしくはQであるか、144位の残基が、T、V、G、D、P、H、L、K、もしくはQであるか、145位の残基が、P、D、R、W、もしくはNであるか、155位の残基が、C、I、R、A、V、S、もしくはQであるか、156位の残基が、P、G、S、T、A、もしくはCであるか、157位の残基が、D、P、S、G、I、Q、R、もしくはTであるか、158位の残基が、R、V、S、A、K、C、Q、もしくはGであるか、171位の残基が、T、F、L、E、H、V、もしくはRであるか、189位の残基が、A、P、T、L、S、Y、もしくはRであるか、193位の残基が、Q、R、N、T、E、V、もしくはPであるか、212位の残基が、V、R、G、S、M、D、もしくはEであるか、または225位の残基が、L、P、C、S、Q、G、Y、もしくはFであるか、または、H5内の、119位の残基が、L、K、R、S、G、T、E、A、V、F、もしくはNであるか；123位の残基が、L、Y、I、M、N、S、V、K、G、T、もしくはRであるか；125位の残基が、L、D、N、G、W、M、I、R、K、F、A、もしくはSであるか；126位の残基が、S、R、I、G、N、Q、A、N、もしくはRであるか；127位の残基が、V、A、S、M、L、K、F、もしくはYであるか；129位の残基が、D、S、G、K、W、R、E、V、Q、A、I、もしくはFであるか；138位の残基が、G、D、E、L、A、M、V、F、R、もしくはSであるか；140位の残基が、T、G、S、R、D、K、Q、E、C、もしくはVであるか；141位の残基が、R、P、W、K、E、A、M、D、L、もしくはQであるか；151位の残基が、T、S、L、Y、K、N、もしくはQであるか；152位の残基が、A、P、T、Y、H、E、S、I、F、もしくはDであるか；153位の残基が、R、Q、T、N、S、F、P、V、もしくはKであるか；154位の残基が、L、T、D、R、P、S、もしくはHであるか；155位の残基が、N、G、K、H、T、L、S、I、P、もしくはQであるか；156位の残基が、T、F、R、S、D、P、H、G、A、もしくはNであるか；185位の残基が、L、D、N、G、E、F、S、L、Q、P、V、M、R、A、もしくはSであるか；または189位の残基が、Y、S、L、R、K、G、E、F、D、V、E、I、もしくはHである、請求項4に記載の方法。

H3内の、121位の残基がNであるか、131位の残基がTであるか、135位の残基がTであるか、138位の残基がAであるか、140位の残基がIであるか、142位の残基がRであるか、144位の残基がSであるか、145位の残基がSであるか、155位の残基がTであるか、156位の残基がHであるか、157位の残基がLであるか、158位の残基がNであるか、171位の残基がNであるか、189位の残基がKであるか、193位の残基がFであるか、212位の残基がAであるか、または225位の残基がDである、請求項4に記載の方法。

前記変異HAが、少なくとも6個または少なくとも10個の置換を有する、請求項4、5または6に記載の方法。

親ウイルスにおいて免疫ドミナントエピトープを形成する残基と比べて抗原性が異なる複数の残基を含むヘマグルチニンをそれぞれがコードする複数の異なる組み換えインフルエンザH3またはH5ウイルスを含む組成物であって、
該複数のH3インフルエンザウイルスのそれぞれが、H3内に、121位、131位、135位、138位、140位、142位、144位、145位、155位、156位、157位、158位、171位、189位、193位、212位、もしくは225位のうちの2つ以上に置換を含むか、または121位、131位、135位、138位、140位、142位、144位、145位、155位、156位、157位、158位、171位、189位、193位、212位、もしくは225位のうちの1つ以上に欠失を含むか、またはこれらの任意の組み合わせを含むか、または、該複数のH5インフルエンザウイルスのそれぞれが、H5内に、119位、123位、125位、126位、127位、129位、138位、140位、141位、151位、152位、153位、154位、155位、156位、185位、もしくは189位のうちの2つ以上に置換を含むか、または119位、123位、125位、126位、127位、129位、138位、140位、141位、151位、152位、153位、154位、155位、156位、185位、もしくは189位のうちの1つ以上に欠失を含むか、またはこれらの任意の組み合わせを含む、
組成物。

前記置換を持つ少なくとも5種類または少なくとも10種類の異なるウイルスを有する、請求項10に記載の組成物。

表1Bまたは表6中の1種類以上のウイルスを有する、請求項8に記載の組成物。

前記複数の異なるインフルエンザそれぞれがH5 HAを含み、このH5 HA内の、119位の残基が、L、K、R、S、G、T、E、A、V、F、もしくはNであるか；123位の残基が、L、Y、I、M、N、S、V、K、G、T、もしくはRであるか；125位の残基が、L、D、N、G、W、M、I、R、K、F、A、もしくはSであるか；126位の残基が、S、R、I、G、N、Q、A、N、もしくはRであるか；127位の残基が、V、A、S、M、L、K、F、もしくはYであるか；129位の残基が、D、S、G、K、W、R、E、V、Q、A、I、もしくはFであるか；138位の残基が、G、D、E、L、A、M、V、F、R、もしくはSであるか；140位の残基が、T、G、S、R、D、K、Q、E、C、もしくはVであるか；141位の残基が、R、P、W、K、E、A、M、D、L、もしくはQであるか；151位の残基が、T、S、L、Y、K、N、もしくはQであるか；152位の残基が、A、P、T、Y、H、E、S、I、F、もしくはDであるか；153位の残基が、R、Q、T、N、S、F、P、V、もしくはKであるか；154位の残基が、L、T、D、R、P、S、もしくはHであるか；155位の残基が、N、G、K、H、T、L、S、I、P、もしくはQであるか；156位の残基が、T、F、R、S、D、P、H、G、A、もしくはNであるか；185位の残基が、L、D、N、G、E、F、S、L、Q、P、V、M、R、A、もしくはSであるか；189位の残基が、Y、S、L、R、K、G、E、F、D、V、E、I、もしくはHであるか、またはこれらの位置の残基が、これらの残基の任意の組み合わせであるか、または前記複数の異なるインフルエンザそれぞれがH3 HAを含み、このH3 HA内の、121位の残基が、Q、R、I、L、V、S、F、Y、もしくはAであるか、131位の残基が、R、V、S、Q、C、V、Y、D、E、もしくはLであるか、135位の残基が、Y、K、N、V、W、G、S、V、もしくはPであるか、138位の残基が、W、K、I、F、R、もしくはLであるか、140位の残基が、L、M、T、S、R、K、M、Y、もしくはPであるか、142位の残基が、N、G、Y、Q、E、H、N、もしくはQであるか、144位の残基が、T、V、G、D、P、H、L、K、もしくはQであるか、145位の残基が、P、D、R、W、もしくはNであるか、155位の残基が、C、I、R、A、V、S、もしくはQであるか、156位の残基が、P、G、S、T、A、もしくはCであるか、157位の残基が、D、P、S、G、I、Q、R、もしくはTであるか、158位の残基が、R、V、S、A、K、C、Q、もしくはGであるか、171位の残基が、T、F、L、E、H、V、もしくはRであるか、189位の残基が、A、P、T、L、S、Y、もしくはRであるか、193位の残基が、Q、R、N、T、E、V、もしくはPであるか、212位の残基が、V、R、G、S、M、D、もしくはEであるか、または225位の残基が、L、P、C、S、Q、G、Y、もしくはFであるか、またはこれらの位置の残基が、これらの残基の任意の組み合わせである、請求項８、９または１０に記載の組成物。

親ウイルスにおいて免疫ドミナントエピトープを形成する残基と比べて抗原性が異なる複数の残基を含むヘマグルチニンをそれぞれがコードする少なくとも6種の異なる組み換えインフルエンザH3またはH5ウイルスを組み合わせることを含む、免疫原性組成物を作製するための方法であって、
該H3インフルエンザウイルスのそれぞれが、H3内に、121位、131位、135位、138位、140位、142位、144位、145位、155位、156位、157位、158位、171位、189位、193位、212位、もしくは225位のうちの6つ以上に置換を含むか、または121位、131位、135位、138位、140位、142位、144位、145位、155位、156位、157位、158位、171位、189位、193位、212位、もしくは225位のうちの1つ以上に欠失を含むか、またはこれらの任意の組み合わせを含むか、または、該H5インフルエンザウイルスのそれぞれが、H5内に、119位、123位、125位、126位、127位、129位、138位、140位、141位、151位、152位、153位、154位、155位、156位、185位、もしくは189位のうちの2つ以上に置換を含むか、または119位、123位、125位、126位、127位、129位、138位、140位、141位、151位、152位、153位、154位、155位、156位、185位、もしくは189位のうちの1つ以上に欠失を含むか、またはこれらの任意の組み合わせを含む、
方法。