JPWO2019131673A1

JPWO2019131673A1 - 細胞培養容器

Info

Publication number: JPWO2019131673A1
Application number: JP2019562049A
Authority: JP
Inventors: 晃輔堀; 紀之河原
Original assignee: STEM CELL & DEVICE LABORATORY, INC.
Current assignee: STEM CELL & DEVICE LABORATORY, INC.
Priority date: 2017-12-26
Filing date: 2018-12-25
Publication date: 2021-02-04
Anticipated expiration: 2038-12-25
Also published as: WO2019131673A1; JP7278523B2

Abstract

【課題】予め細胞保持領域を有している細胞培養容器の提供。【解決手段】マルチウェルプレートＷ１のウェル１００の突出部１０５は、底面部１０１から内部空間Ｓ１００側に向かって突出するように、島状に形成されている。細胞保持空間１０７は、突出部１０５の上面Ｐ１０５ｕから底面部１０１までの中空円柱形状の中空空間として形成される。つまり、細胞保持空間１０７は、突出部１０５の上面Ｐ１０５ｕから底面部１０１に向かって凹状に形成されている。このように、マルチウェルプレートＷ１は、各ウェル１００に対して予め定められた位置に細胞保持空間１０７が形成されている。このため、ウェル１００において細胞が培養され、培養された細胞が保持される場所を固定できる。また、予め容量が定められた細胞保持空間１０７が配置されているため、ウェル１００間で、培養する細胞量に差がでないようできる。【選択図】図２

Description

本発明は、細胞培養容器に関し、特に、予め細胞保持領域を有しているものに関する。

従来の細胞培養容器について、プラスチック製容器１０を用いて説明する。図７に示すように、プラスチック製容器１０は、生物の細胞や組織等の生細胞を培養する容器であり、かつ、培養した生細胞を位相差顕微鏡で撮像（あるいは観察）するための容器である。また、プラスチック製容器１０は、いわゆるマルチウェルプレートであり、円形に開口された複数のウェル１１を有している。ウェル１１は、培養及び培養後に撮像する生細胞と生細胞を培養するための培養液を入れる凹部である。図７では、一例として、８行１２列の９６個のウェル１１を有する９６ウェルプレートを示しているが、プラスチック製容器１０は、ウェル１１を少なくとも２つ以上有していれば良く、ウェル１１の個数は任意である。９６ウェルプレートの他には、ウェル１１が、６個、２４個、または３８４個のマルチウェルプレートがよく用いられる。

プラスチック製容器１０に好適な材料は、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ＴＡＣ（トリアセチルセルロース）、ポリイミド（ＰＩ）、ナイロン（Ｎｙ）、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、中密度ポリエチレン（ＭＤＰＥ）、塩化ビニル、塩化ビニリデン、ポリフェニレンサルファイド、ポリエーテルサルフォン、ポリエチレンナフタレート、ポリプロピレン、ウレタンアクリレート等のアクリル系材料、セルロース、ガラス等が挙げられる。また、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクタン、もしくはその共重合体のような生分解性ポリマー等の樹脂等を用いることができる。これらなかでも、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネートを好ましく用いることができ、特に、ポリスチレンを好ましく用いることができる。細胞毒性が低いからである。また、プラスチック製容器１０の表面は、任意の表面処理（例えば、プラズマ、コロナ、マイクロウェーブ、電子線および紫外線等の照射等）が施されていても良い。

図８に示すように、ウェル１１は非貫通孔であり、プラスチック製容器１０の表面に開口されている。ウェル１１には、開口から、培養する生細胞１３と生細胞１３を培養するための培養液１２（例えば血清液）とが注入される。プラスチック製容器１０を用いる場合、ウェル１１は開口されているので、ウェル１１に注入された培養液１２は、生細胞１３の培養中及び位相差顕微鏡での撮像時にも常にウェル１１の開口近傍で空気に接触する。このため、培養された生細胞１３は生きたまま位相差顕微鏡によって撮像（観察）される。

プラスチック製容器１０では、ウェル１１は、開口の直径Ｒが０．５ｍｍ以上２ｃｍ未満に形成され、深さＤが２ｍｍ以上２ｃｍ未満に形成されている。ウェル１１の開口の直径Ｒが０．５ｍｍ以上２ｃｍ未満に形成されているのは、同一環境下で培養された生細胞１３の細胞数をばらつきなく収束したデータを取得するために好ましいからである。ウェル１１の開口の直径Ｒは、１ｍｍ以上であることがより好ましい。ウェル１１の開口の直径Ｒが２ｃｍ未満の場合には、培養液１２の液面１２ａのメニスカスが顕著になるので、本発明が特に有用であり、ウェル１１の開口の直径Ｒは１ｃｍ以下である場合に特に好適である。例えば、９６個のウェル１１を有する９６ウェルプレートの場合、ウェル１１の開口の直径は例えば６ｍｍである、３８４個のウェル１１を有する３８４ウェルプレートの場合、ウェル１１の開口の直径は例えば３ｍｍである。

ウェル１１の深さＤとは、ウェル１１の底面１１ｂから開口（プラスチック製容器１０の表面）までの高さであり、ウェル１１の深さＤが２ｍｍ以上に形成されているのは、生細胞１３を培養するために十分な培地を確保し、かつ、生細胞１３を培養するために十分な培養液１２の量を確保するためである。ウェル１１の深さＤが２ｃｍ未満に形成されているのは、透過型顕微鏡で観察する場合のケラレによる周辺視野の光量低下を防ぐためである。ウェル１１の深さＤが３ｍｍ以上１ｃｍ以下の範囲内であれば、生細胞１３の培養及び撮像に特に好適である。また、ウェル１１に入れる培養液１２の量は、ウェル１１の深さＤの１／２以下であることが好ましい（以上、特許文献１参照）。

特開２０１６−６７３２２号公報

前述のプラスチック製容器１０には、以下に示すような改善すべき点がある。プラスチック製容器１０では、ウェル１１の底部において生細胞１３が培養されている。ウェル１１の底部は、培養する細胞からすれば比較的面積が大きく、底部のどの位置で細胞、どの程度培養されるかは、不明である。そのため、細胞培養の前提条件、細胞数や培地量、温度等を同一にしたとしても、ウェル１１の底部においては、均一に細胞が培養されていない。このため、ウェル１１においても、どの位置の細胞対象として実験を行うかによって、結果に差異が生ずる可能性ある、という改善すべき点がある。

本発明者らは、上記の従来技術の問題点を克服することを目的とし、鋭意検討した結果、予め細胞保持領域を有している細胞培養容器を提供できることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の目的は、以下の発明により達成される。
（１）
底面及び側面によって形成される細胞培養空間に駐留した培地内で細胞を培養する際に用いる細胞培養容器であって、
前記底面から前記細胞培養空間に対して突出した突出部、
前記突出部において、上面から前記底面に向かって凹状に形成された細胞保持空間、
を有する細胞培養容器。
（２）
（１）に係る細胞培養容器において、
前記細胞培養容器は、
マルチウェルプレートに配置されるウェルであること、
を特徴とする細胞培養容器。
（３）
（１）又は（２）に係る細胞培養容器において、
前記本体は、
少なくとも中空柱形状の上面及び内側面により形成されており、
前記細胞保持空間は、
前記中空柱形状の中空空間であること、
を特徴とする細胞培養容器。
（４）
（１）〜（３）に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
前記細胞を保持しやすくするための親水処理が施されていること、
を特徴とする細胞培養容器。
（５）
（４）に係る細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
少なくとも前記細胞保持空間の底面を形成する領域は、６０°未満の接触角を有する細胞培養容器。
（６）
（１）〜（５）に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
培養する前記細胞を有していること、
を特徴とする細胞培養容器。
（７）
（１）〜（６）に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間を形成する面以外の面は、６０°以上の接触角を有する細胞培養容器。
（８）
（１）〜（７）に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間の容量は、３０μＬ〜０．５μＬである細胞培養容器。
（９）
（１）〜（８）に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間の底面を形成する領域は、全光線透過率が８０％以上を有する材料により形成される細胞培養容器。
（１０）
（９）に係る細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
前記底面を形成する領域が、ポリスチレン（ＰＳ）、ガラス, ポリカーボネート（ＰＣ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、環状オレフィン・コポリマー（ＣＯＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、及び、アクリル樹脂（ＰＭＭＡ）から成る群から選ばれる１種類以上の材料により形成される細胞培養容器。

本発明における課題を解決するための手段及び発明の効果を以下に示す。

本発明に係る細胞培養容器は、底面及び側面によって形成される細胞培養空間に駐留した培地内で細胞を培養する際に用いる細胞培養容器であって、前記底面から前記細胞培養空間に対して突出した突出部、前記突出部において、上面から前記底面に向かって凹状に形成された細胞保持空間、を有する。

これにより、細胞培養容器に対して予め定められた位置に細胞保持空間が形成されるので、細胞培養容器において細胞が培養され、培養された細胞が保持される場所を固定できる。

また、細胞培養容器に対して、予め容量が定められた細胞保持空間が配置されているため、細胞培養容器間で、培養する細胞量に差がでないようできる。これにより、各細胞培養容器で培養した細胞を対象に比較実験、比較試験を行う際に、各細胞培養容器における実験前の条件を同じにできる。

さらに、細胞保持空間で細胞を培養できるので、３次元的に所望の細胞を培養できる。

本発明に係る細胞培養容器では、前記細胞培養容器は、マルチウェルプレートに配置されるウェルであること、を特徴とする。

これにより、マルチウェルプレートにおいて、各ウェルに対して予め定められた位置に細胞保持空間が形成されるので、各ウェルにおいて細胞が培養され、培養された細胞が保持される場所が固定される。

本発明に係る細胞培養容器では、前記本体は、少なくとも中空柱形状の上面及び内側面により形成されており、前記細胞保持空間は、前記中空柱形状の中空空間であること、を特徴とする。

これにより、細胞培養容器用細胞保持領域形成装置を容易に生成することができる。

本発明に係る細胞培養容器では、前記細胞保持空間は、前記細胞を保持しやすくするための表面被覆処理が施されていること、を特徴とする。

これにより、細胞保持空間に容易に細胞を播種し、保持できる。

本発明に係る細胞培養容器では、前記細胞保持空間は、培養する前記細胞を有していること、を特徴とする。

これにより、予め細胞が固定位置に播種されている細胞培養容器を提供することができる。

本発明に係る細胞培養容器の一実施例であるマルチウェルプレートＷ１を示す図であり、Ａは平面図を、Ｂは正面図を、ＣはＡのＸ１−Ｘ１断面を、それぞれ示す。マルチウェルプレートＷ１のウェル１００を示す図である。本発明に係る細胞培養容器の一実施例であるマルチウェルプレートＷ２を示す図であり、Ａは平面図を、Ｂは正面図を、ＣはＡのＸ３−Ｘ３断面を、それぞれ示す。マルチウェルプレートＷ２のウェル２００を示す図である。本発明に係る細胞培養容器の一実施例であるマルチウェルプレートＷ３を示す図であり、Ａは平面図を、Ｂは正面図を、ＣはＡのＸ５−Ｘ５断面を、それぞれ示す。マルチウェルプレートＷ３のウェル３００を示す図である。従来の細胞培養容器を示す図である。従来の細胞培養容器を示す図である。細胞保持空間の形状を示す図である。

以下、本発明の実施例について、図面を参照しながら詳細に説明していく。

本発明に係る細胞培養容器について、一実施例である９６個のウェルを有するマルチウェルプレートＷ１を用いて説明する。マルチウェルプレートＷ１は、培地内で細胞を培養し、培養した細胞に対して所定の実験、検査を実施するための装置である。

第１構成
マルチウェルプレートＷ１の構成について、図１を用いて説明する。ここで、図１ＡはマルチウェルプレートＷ１の平面図を、図１ＢはマルチウェルプレートＷ１の正面図を、図１Ｃは図１ＡのＸ１−Ｘ１断面を、それぞれ示す。

図１Ａに示すように、マルチウェルプレートＷ１は、９６個のウェル１００を有している。各ウェル１００は、８×１２のマトリクス状にマルチウェルプレートＷ１に配置されている。図１Ｂに示すように、ウェル１００は、底面部１０１、及び、側面部１０３を有している。底面部１０１、及び、側面部１０３によって、円筒状の内部空間Ｓ１００が形成される。内部空間Ｓ１００には、細胞培養のための培地等が貯留される。

また、図１Ｃに示すように、ウェル１００は、突出部１０５、及び、細胞保持空間１０７を有している。図２に、図１Ｃの円部Ａの拡大図を示す。突出部１０５は、中空円柱形状に形成されている（図１Ａ参照）。突出部１０５は、中空円柱形状の中心が、底面部１０１の中心と一致するように形成されている。また、突出部１０５は、底面部１０１から内部空間Ｓ１００側に向かって突出するように、島状に形成されている。突出部１０５の高さ、つまり、上面Ｐ１０５ｕから底面部１０１までの高さは、内部空間Ｓ１００において細胞培養のための一般的な培地貯留高さよりも低くなっている。これにより、細胞保持空間１０７を培地中に配置し培地中で細胞を培養ができる。

図２に示すように、細胞保持空間１０７は、突出部１０５の上面Ｐ１０５ｕから底面部１０１までの中空円柱形状の中空空間として形成される。つまり、細胞保持空間１０７は、突出部１０５の上面Ｐ１０５ｕから底面部１０１に向かって凹状に形成されている。このように、マルチウェルプレートＷ１は、各ウェル１００に対して予め定められた位置に細胞保持空間１０７が形成されている。このため、ウェル１００において細胞が培養され、培養された細胞が保持される場所が固定される。

また、ウェル１００に対して、予め容量が定められた細胞保持空間１０７が配置されているため、ウェル１００間で、培養する細胞量に差がでないようできる。これにより、各ウェル１００で培養した細胞を対象に比較実験、比較試験を行う際に、各ウェル１００における実験前の条件を同じにできる。マルチウェルプレートＷ１間でも同様に、実験前の条件を同じにできる。

さらに、細胞保持空間１０７で細胞を培養できるので、３次元的に所望の細胞を培養できる。

第２マルチウェルプレートＷ１における細胞培養方法
マルチウェルプレートＷ１における細胞培養方法について、心筋細胞を培養する場合を例に説明する。使用者は、細胞保持空間１０７に、播種した心筋細胞を保持しやすくする細胞保持領域生成処理を施す。細胞保持領域生成処理は、親水処理、洗浄処理、及び、表面被覆処理を有している。

使用者は、まず、細胞保持空間１０７に親水処理を施す。親水処理は、例えば、ピペットに吸引した牛の血清を細胞保持空間１０７に吐出し、細胞保持空間１０７に牛の血清を所定時間滞留させた後、アスピレータで吸引することによって行う。

次に、使用者は、親水処理を施した細胞保持空間１０７に洗浄処理を施す。洗浄処理は、例えば、ピペットを用いて純水を吸引し、細胞保持空間１０７に吐出し、アスピレータを用いて、吸引することにより行う。

さらに、使用者は、洗浄処理を施した細胞保持空間１０７に表面被覆処理を施す。表面被覆処理は、例えば、市販の表面被覆材、例えばゲルトレックス（Ｇｅｌｔｒｅｘ：商標）をピペットで吸引し、細胞保持空間１０７に吐出し、所定時間、乾燥する。なお、乾燥は、湿度６０％以上で、３０分〜２時間とする。

そして、使用者は、細胞保持空間１０７に、心筋細胞を含む細胞懸濁液を用いて、心筋細胞を播種する。これにより、ウェル１００の所定の位置、具体的には細胞保持空間１０７が形成されている位置に、正確に、心筋細胞を含む細胞懸濁液を配置し、つまり、心筋細胞を播種し、保持することができる。使用者は、必要なウェル１００について、同様に、心筋細胞を播種する。

本発明に係る細胞培養容器について、一実施例である９６個のウェルを有するマルチウェルプレートＷ２を用いて説明する。前述のマルチウェルプレートＷ１では、各ウェル１００が、島状に突出した突出部１０５を有するものであった。一方、マルチウェルプレートＷ２は、前述の突出部１０５とは異なる形状の突出部２０５（後述）を有するものである。なお、以下においては、実施例１と同様の構成について、同符号を付し、詳細な説明を省略する。

第１構成
マルチウェルプレートＷ２の構成について、図３を用いて説明する。ここで、図３ＡはマルチウェルプレートＷ２の平面図を、図３ＢはマルチウェルプレートＷ２の正面図を、図３Ｃは図３ＡのＸ３−Ｘ３断面を、それぞれ示す。

図３Ａに示すように、マルチウェルプレートＷ２は、９６個のウェル２００を有している。各ウェル２００は、８×１２のマトリクス状にマルチウェルプレートＷ２に配置されている。図３Ｂに示すように、ウェル２００は、底面部１０１、及び、側面部１０３を有している。

また、図３Ｃに示すように、ウェル２００は、突出部２０５、及び、細胞保持空間１０７を有している。図４に、図３Ｃの円部Ｐ３の拡大図を示す。突出部２０５は、中空円柱形状に形成されている（図３Ａ参照）。突出部２０５は、中空円柱形状の中心が、底面部１０１の中心と一致するように配置されている。また、突出部２０５は、底面部１０１から内部空間Ｓ１００（図３参照）側に向かって突出するように形成されている。突出部２０５は、突出部２０５の外側面Ｐ２０５ｓと側面部１０３とが一体となるように、また、突出部２０５の低面Ｐ２０５ｂと底面部１０１とが一体となるように形成されている。突出部２０５の高さ、つまり、上面Ｐ２０５ｕから底面部１０１までの高さは、内部空間Ｓ１００において細胞培養のための一般的な培地貯留高さよりも低くなっている。これにより、細胞保持空間１０７を培地中に配置し、培地中で細胞を培養ができる。

図４に示すように、細胞保持空間１０７は、底面部１０１から突出部２０５の上面Ｐ２０５ｕまでの中空円柱形状の中空空間として形成される。つまり、細胞保持空間１０７は、突出部２０５の上面Ｐ２０５ｕから底面部１０１に向かって凹状に形成されている。このように、マルチウェルプレートＷ２は、各ウェル２００に対して予め定められた位置に細胞保持空間１０７が形成されている。このため、ウェル２００において細胞が保持される場所が固定される。

また、ウェル２００に対して、予め容量が定められた細胞保持空間１０７が配置されているため、ウェル２００間で、培養する細胞量に差がでないようできる。これにより、各ウェル２００で培養した細胞を対称に比較実験を行う際に、各ウェル２００における実験前の条件を同じにできる。マルチウェルプレートＷ２間でも同様に、実験前の条件を同じにできる。

本発明に係る細胞培養容器について、一実施例である９６個のウェルを有するマルチウェルプレートＷ３を用いて説明する。前述のマルチウェルプレートＷ２は、各ウェル２００が、突出部２０５の外側面Ｐ２０５ｓと側面部１０３とが一体となるように、また、突出部２０５の低面Ｐ２０５ｂと底面部１０１とが一体となるように形成されている突出部２０５を有するものであった。一方、マルチウェルプレートＷ３は、前述の突出部２０５とは異なる形状の突出部３０５（後述）を有するものである。なお、以下においては、実施例１、実施例２と同様の構成について、同符号を付し、詳細な説明を省略する。

第１構成
マルチウェルプレートＷ３の構成について、図５を用いて説明する。ここで、図５ＡはマルチウェルプレートＷ３の平面図を、図５ＢはマルチウェルプレートＷ３の正面図を、図５Ｃは図５ＡのＸ５−Ｘ５断面を、それぞれ示す。

図５Ａに示すように、マルチウェルプレートＷ３は、９６個のウェル３００を有している。各ウェル３００は、８×１２のマトリクス状にマルチウェルプレートＷ３に配置されている。図５Ｂに示すように、ウェル３００は、底面部３０１、及び、側面部３０３を有している。なお、底面部３０１は、突出部３０５の内側面Ｐ３０５ｉ（後述）の下部の一端を閉じる面として形成される。

また、図５Ｃに示すように、ウェル３００は、突出部３０５、及び、細胞保持空間１０７を有している。図６に、図５Ｃの円部Ｐ５の拡大図を示す。突出部３０５は、中空円柱形状の上面Ｐ３０５ｕ及び内側面Ｐ３０５ｉにより形成されている（図５Ａ参照）。突出部３０５は、上面Ｐ３０５ｕ及び内側面Ｐ３０５ｉにより形成される中空円柱形状の一部形状の中心が底面部３０１の中心と一致するように配置されている。また、突出部３０５は、底面部３０１から内部空間Ｓ１００側に向かって突出するように形成されている。突出部３０５の高さ、つまり、上面Ｐ３０５ｕから底面部３０１までの高さは、内部空間Ｓ１００において細胞培養のための一般的な培地貯留高さよりも低くなっている。これにより、細胞保持空間１０７を培地中に配置し培地中で細胞を培養ができる。

図６に示すように、細胞保持空間１０７は、底面部３０１から突出部３０５の上面Ｐ３０５ｕまでの中空円柱形状の中空空間として形成される。つまり、細胞保持空間１０７は、突出部３０５の上面Ｐ３０５ｕから底面部３０１に向かって凹状に形成されている。このように、マルチウェルプレートＷ３は、各ウェル３００に対して予め定められた位置に細胞保持空間１０７が形成されている。このため、ウェル３００において細胞が保持される場所が固定される。

また、ウェル３００に対して、予め容量が定められた細胞保持空間１０７が配置されているため、ウェル３００間で、培養する細胞量に差がでないようできる。これにより、各ウェル３００で培養した細胞を対称に比較実験を行う際に、各ウェル３００における実験前の条件を同じにできる。マルチウェルプレートＷ３間でも同様に、実験前の条件を同じにできる。

［その他の実施形態］
（１）突出部の形状：前述の実施例１においては、突出部１０５は中空円柱形状としたが、底面部１０１から内部空間Ｓ１００に向かって突出する形状であれば、例示のものに限定されない。例えば、角柱形状の中空角柱形状としてもよい。また、角柱形状から円筒形状が取り除かれた形状としてもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（２）細胞保持空間１０７：前述の実施例１においては、ウェル１００は、１つの細胞保持空間１０７を有するとしたが、複数の細胞保持空間を有するようにしてもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（３）計測対象の細胞：前述の実施例１においては、ウェル１００を用いて培地内で培養する細胞として心筋細胞を用いたが、例示のものに限定されない。例えば、神経細胞であってもよい。また、多能性幹細胞由来の神経細胞であってもよい。なお、多能性幹細胞としては、例えば、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）やｉＰＳ細胞がある。実施例２、実施例３についても、同様である。

（４）マルチウェルプレート：前述の実施例１においては、マルチウェルプレートＷ１として８×１２のマトリクス状に配置されたウェル１００を有するものを用いたが、複数のウェルを有するものであれば、例示のものに限定されない。例えば、３×４、４×６のマトリクス状に配置されたウェルを有するものであってもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（５）親水処理：前述の実施例１においては、親水処理を牛の血清を用いて行ったが、少なくとも細胞保持空間１０７を親水化できるものであれば、例示のものに限定されない。例えば、プラズマ処理、コロナ放電処理、マイクロウェーブ、電子線や紫外線照射等を用いた物理的処理、コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン、マトリゲル、ゼラチン、ゲルトレックス、合成アミノ酸鎖、ポリ-Ｌ-オルニチン、アルブミン等を用いたタンパク-アミノ酸-マトリックコート処理、又は、酸化剤、親水物質、ハイドロゲル、ガラス化剤等を用いた化合物処理等であってもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（６）洗浄処理：前述の実施例１においては、洗浄処理を、純水を用いて行ったが、少なくとも細胞保持空間１０７を洗浄できるものであれば、例示のものに限定されない。また、必要でなければ、細胞保持領域生成処理において、洗浄処理を施さなくてもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（７）表面被覆処理：前述の実施例１においては、表面被覆処理を、ゲルトレックスを用いて行ったが、少なくとも細胞保持空間１０７を、表面を被覆できるものであれば、例示のものに限定されない。例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン、マトリゲル、ゼラチン、ゲルトレックス、合成アミノ酸鎖、ポリ-Ｌ-オルニチン、アルブミン等を用いたタンパク-アミノ酸-マトリックコート処理を用いるようにしてもよい。また、必要でなければ、細胞保持領域生成処理において、表面被覆処理を施さなくてもよい。実施例２、実施例３についても、同様である。

（８）接触角：前述の実施例１において、細胞保持空間１０７を形成する面以外の面について、細胞保持空間１０７に貯留する細胞懸濁液が細胞保持空間１０７以外の領域へ流出しないような接触角を有することが望ましい。具体的には、細胞保持空間１０７を形成する面以外の面は、６０°より大きい接触角を有することが望ましい。その他の実施例についても同様である。

（９）細胞保持空間の大きさ：前述の実施例１において、細胞保持空間１０７の大きさを、細胞保持空間１０７に細胞懸濁液を貯留する際に用いるピペットから１回で吐出される細胞懸濁液の量と、同程度の大きさとしてもよい。具体的には、細胞保持空間１０７の容量として、３０μＬ〜０．５μＬ程度が望ましい。

（１０）細胞保持空間を形成する部材：前述の実施例１において、底面部１０１のうち、細胞保持空間１０７の底面を形成する領域、つまり、底面部１０１のうち、少なくとも突出部１０５の中空円柱部分に対応する領域を、透明な材料により形成するようにすることが望ましい。これにより、細胞保持空間１０７における細胞培養の様子を外部、特に底面側から確認しながら、作業を進めることができる。その他の実施例についても同様である。前記透明な材料としては、例えば、ポリスチレン（ＰＳ）、ガラス、ポリカーボネート（ＰＣ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、環状オレフィン・コポリマー（ＣＯＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、アクリル樹脂（ＰＭＭＡ）等が挙げられるが、これらに限定するものではない。

また、実施例２におけるウェル２００（図４参照）において、底面部１０１を透明な材料で形成し、側面部１０３と突出部２０５との合成体と接合することによって、ウェル２００を形成するようにしてもよい。また、底面部１０１と突出部２０５とを透明な材料で形成し、両端が開放された側面部１０３と接合することによって、ウェル２００を形成するようにしてもよい。実施例３におけるウェル３００（図６参照）においも同様に、底面部３０１を透明な材料で形成し、中空円柱形状の上面Ｐ３０５ｕ、内側面Ｐ３０５ｉ、及び、側面部３０１の合成体と、両端が開放された側面部１０３と接合することによって、ウェル３００を形成するようにしてもよい。また、底面部３０１、及び、突出部３０５を透明な材料で形成し、両端が開放された側面部１０３と接合することによって、ウェル３００を形成するようにしてもよい。なお、両部材の接合には、シリコン接着材等、細胞毒性が低い接着材を用いるようにする。

なお、各実施例における細胞保持空間の底面を形成する領域は、細胞を保持しやすくするために、６０°未満の接触角を有するようにすることが望ましい。

（１１）ウェルの材質：前述の実施例１において、ウェル１００をポリスチレン、シリコン、ガラス、ポリカーボネート等により形成してもよい。

（１２）細胞保持空間の形状：前述の実施例１においては、細胞保持空間１０７を形成する突出部１０５は中空円柱形状であり、細胞保持空間１０７は円筒形状であったが、細胞懸濁液を貯留できる細胞保持空間１０７であれば、例示のものに限定されない。例えば、図９に示すように、円筒形状から円錐台形状を除いた形状を有する突出部５０５を用いるようにしてもよい。この場合、側面Ｐ５０５を下に向かって先細りに形成できるため、逆円錐台形状の細胞保持空間５０７に安定して細胞懸濁液を貯留することができる。その他の実施例についても同様である。

本発明に係る細胞培養容器は、例えば、マルチウェルプレートに用いることができる。

Ｗ１マルチウェルプレート
１００ウェル
１０１底面部
１０３側面部
１０５突出部
Ｐ１０５ｕ上面
１０７細胞保持空間
Ｓ１００内部空間
Ｗ２マルチウェルプレート
２００ウェル
２０５突出部
Ｐ２０５ｓ外側面
Ｐ２０５ｂ低面
Ｐ２０５ｕ上面
Ｗ３マルチウェルプレート
３００ウェル
３０１底面部
３０３側面部
３０５突出部
Ｐ３０５ｉ内側面
Ｐ３０５ｕ上面

Claims

底面及び側面によって形成される細胞培養空間に駐留した培地内で細胞を培養する際に用いる細胞培養容器であって、
前記底面から前記細胞培養空間に対して突出した突出部、
前記突出部において、上面から前記底面に向かって凹状に形成された細胞保持空間、
を有する細胞培養容器。
請求項１に係る細胞培養容器において、
前記細胞培養容器は、
マルチウェルプレートに配置されるウェルであること、
を特徴とする細胞培養容器。
請求項１又は請求項２に係る細胞培養容器において、
前記本体は、
少なくとも中空柱形状の上面及び内側面により形成されており、
前記細胞保持空間は、
前記中空柱形状の中空空間であること、
を特徴とする細胞培養容器。
請求項１〜請求項３に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
前記細胞を保持しやすくするための親水処理が施されていること、
を特徴とする細胞培養容器。
請求項４に係る細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
少なくとも前記細胞保持空間の底面を形成する領域は、６０°未満の接触角を有する細胞培養容器。
請求項１〜請求項５に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
培養する前記細胞を有していること、
を特徴とする細胞培養容器。
請求項１〜請求項６に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間を形成する面以外の面は、６０°以上の接触角を有する細胞培養容器。
請求項１〜請求項７に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間の容量は、３０μＬ〜０．５μＬである細胞培養容器。
請求項１〜請求項８に係るいずれかの細胞培養容器において、
前記細胞保持空間の底面を形成する領域は、全光線透過率が８０％以上を有する材料により形成される細胞培養容器。
請求項９に係る細胞培養容器において、
前記細胞保持空間は、
前記底面を形成する領域が、ポリスチレン（ＰＳ）、ガラス, ポリカーボネート（ＰＣ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、環状オレフィン・コポリマー（ＣＯＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、及び、アクリル樹脂（ＰＭＭＡ）から成る群から選ばれる１種類以上の材料により形成される細胞培養容器。