JPWO2018181064A1 - Pd−l1検出用抗pd−l1抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)(a) KSISKY(配列番号1)のアミノ酸配列を有するCDR1、SGSのアミノ酸配列を有するCDR2及びQQHNEYPLT(配列番号2)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するL鎖と、(b) GYTFTDYI(配列番号3)のアミノ酸配列を有するCDR1、INPDSGGN(配列番号4)のアミノ酸配列を有するCDR2及びARGITMMVVISHWKFDF(配列番号5)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するH鎖とを含む、抗PD-L1抗体。
(2)ラットに由来する(1)記載の抗体。
(3)ラット抗ウシPD-L1抗体である(2)記載の抗体。
(4)L鎖可変領域が配列番号6のアミノ酸配列を有し、H鎖可変領域が配列番号7のアミノ酸配列を有する、(3)記載の抗体。
(5)L鎖定常領域が、Kappa鎖の定常領域のアミノ酸配列を有する(1)〜(4)のいずれかに記載の抗体。
(6)H鎖定常領域が、IgG2aの定常領域のアミノ酸配列を有する(1)〜(5)のいずれかに記載の抗体。
(7)L鎖定常領域が配列番号8、10〜12のいずれかのアミノ酸配列を有し、H鎖定常領域が配列番号9又は13のアミノ酸配列を有する(5)又は(6)記載の抗体。
(8)L鎖2本とH鎖2本の4本鎖構造を持つ(1)〜(7)のいずれかに記載の抗体。
(9)(1)〜(8)のいずれかに記載の抗体を有効成分として含む、PD-L1を検出するための組成物。
(10)がん及び/又は感染症の診断に用いられる(9)記載の組成物。
(11)がん及び/又は感染症が、腫瘍性疾患、白血病、ヨーネ病、アナプラズマ病、細菌性乳房炎、真菌性乳房炎、マイコプラズマ感染症(例えば、マイコプラズマ性乳房炎、マイコプラズマ性肺炎など)、結核、小型ピロプラズマ病、クリプトスポリジウム症、コクシジウム症、トリパノソーマ病及びリーシュマニア症からなる群より選択される(10)記載の組成物。
(12)抗PD-L1抗体を用いた治療に適した被験動物を選定するために用いられる(9)記載の組成物。
(13)(1)記載の抗PD-L1抗体をコードするDNA。
(14)(13)記載のDNAを含むベクター。
(15)(14)記載のベクターにより形質転換された宿主細胞。
(16)(15)記載の宿主細胞を培養し、培養物から抗PD-L1抗体を採取することを含む、抗体の製造方法。
(17)KSISKY(配列番号1)のアミノ酸配列を有するCDR1、SGSのアミノ酸配列を有するCDR2及びQQHNEYPLT(配列番号2)のアミノ酸配列を有するCDR3を有する、抗PD-L1抗体のL鎖をコードするDNA。
(18)GYTFTDYI(配列番号3)のアミノ酸配列を有するCDR1、INPDSGGN(配列番号4)のアミノ酸配列を有するCDR2及びARGITMMVVISHWKFDF(配列番号5)のアミノ酸配列を有するCDR3を有する、抗PD-L1抗体のH鎖をコードするDNA。
本発明は、(a) KSISKY(配列番号1)のアミノ酸配列を有するCDR1、SGSのアミノ酸配列を有するCDR2及びQQHNEYPLT(配列番号2)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するL鎖と、(b) GYTFTDYI(配列番号3)のアミノ酸配列を有するCDR1、INPDSGGN(配列番号4)のアミノ酸配列を有するCDR2及びARGITMMVVISHWKFDF(配列番号5)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するH鎖とを含む、抗PD-L1抗体を提供する。
(表)
配列番号8〜13、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120及び122のアミノ酸配列においては、1若しくは複数個(例えば、5個以下、多くても10個程度)のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されてもよく、これらの変異が導入されても、Ig重鎖又は軽鎖の定常領域としての機能を有しうる。
1.病理検査でがん(例えば、メラノーマ)又は感染症と診断された症例
2.抗PD-L1抗体で陽性を示した症例
を満たしているものとするとよい。陰性コントロールは、正常な周囲組織(結合組織や血管など)とし、陽性コントロールは、がん(例えば、メラノーマ)又は感染症の症例とするとよい。基本的には、腫瘍のほぼ全領域が免疫組織化学染色で陽性になるものを治験の対象とするとよい。
〔実施例1〕
1. 序論
免疫抑制受容体Programmed death 1 (PD-1) とそのリガンドであるProgrammed death ligand 1 (PD-L1)は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容に深く関連している因子として京都大学、本庶 佑氏らによって同定された分子である。各種動物の感染症や腫瘍における免疫抑制に関与していることも近年明らかにされている。本実施例では、ラットを免疫することにより抗ウシPD-L1モノクローナル抗体を作成し、イヌのPD-L1を検出可能なクローン(6C11-3A11)を選別した。またイヌ悪性黒色腫他の悪性腫瘍や、ブタ・ヒツジの感染症において、抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11がPD-L1の検出に有用であるかを免疫組織化学染色法により検討した。
2. 材料および方法
2.1 ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体産生細胞
ウシPD-L1遺伝子配列を同定し (Ikebuchi R, Konnai S, Shirai T, Sunden Y, Murata S, Onuma M, Ohashi K.Vet Res. 2011 Sep 26;42:103.)、その遺伝子情報より組換えウシPD-L1を作製した。同組換えタンパク質をラットの足蹠に免疫し、腸骨リンパ節法を用いてハイブリドーマを樹立して、ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ を複数得た。 (Ikebuchi R, Konnai S, Okagawa T, Yokoyama K, Nakajima C, Suzuki Y, Murata S, Ohashi K. Immunology. 2014 Aug;142(4):551-61.)。ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11は同免疫ラットより樹立されたモノクローナル抗体の一つである。
2.2 完全長イヌPD-L1遺伝子の同定
イヌPD-L1 cDNA全長を決定するために、まずThe National Center for Biotechnology Information (NCBI) に既に登録されているイヌPD-L1の予想塩基配列 (GenBank accession number; XM_541302) から遺伝子のオープンリーディングフレーム (ORF) 内部を増幅するようにプライマー (cPD-L1 inner FおよびR) を設計しPCR法を行った。得られた増幅産物について、常法に従いキャピラリーシーケンサーにより塩基配列を決定した。さらに完全長PD-L1 cDNAの塩基配列を決定するために、上記で決定したイヌPD-L1 cDNA配列を基にプライマー (cPD-L1 5´GSPおよび3´GSP)を設計し、それぞれ5´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends および3´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends (Invitrogen社) を用いて5´および3´RACE法を行った。5´および3´RACE法により得られた目的とする遺伝子断片は上記の方法にしたがって塩基配列を決定した (Maekawa N, Konnai S, Ikebuchi R, Okagawa T, Adachi M, Takagi S, Kagawa Y, Nakajima C, Suzuki Y, Murata S, Ohashi K. PLoS One. 2014 Jun 10;9(6):e98415.)。
プライマー(cPD-L1 inner F):ATGAGAATGTTTAGTGTCTT(配列番号22)
プライマー(cPD-L1 inner R):TTATGTCTCTTCAAATTGTATATC(配列番号23)
プライマー(cPD-L1 5´GSP):TTTTAGACAGAAAGTGA(配列番号24)
プライマー(cPD-L1 3´GSP):GACCAGCTCTTCTTGGGGAA(配列番号25)
2.3 イヌPD-L1発現COS-7細胞の構築
イヌPD-L1-EGFP発現プラスミドを作製するため、合成したビーグルPBMC由来cDNAを鋳型に、5´末端側に制限酵素BglIIおよびEcoRI (PD-L1) 認識部位を付加して設計したプライマー (cPD-L1-EGFP FおよびR) を用いてPCRを行った。得られたPCR産物をBglII (New England Biolabs社) およびEcoRI (Takara社)により処理した後、FastGene Gel/PCR Extraction Kit (NIPPON Genetics社) を用いて精製し、同様の制限酵素処理を行ったpEGFP-N2 vector (Clontech社) にクローニングを行った。得られた目的の発現プラスミドはQIAGEN Plasmid Midi kit (Qiagen社) を用いて抽出し、実験に供するまで-30℃で保存した。以降、作製した発現プラスミドをpEGFP-N2-cPD-L1と表記した。
プライマー(cPD-L1-EGFP F):GAAGATCTATGAGAATGTTTAGTGTC(配列番号26)
プライマー(cPD-L1-EGFP R):GGAATTCTGTCTCTTCAAATTGTATATC(配列番号27)
5×104/cm2のCOS-7細胞を6穴プレートに継代し、10% 非働化牛胎仔血清、0.01% L-グルタミンを含むRPMI 1640培地にて37°C、5% CO2存在下で一晩培養した。pEGFP-N2-cPD-L1または陰性対照としてpEGFP-N2 0.4 μg/cm2をLipofectamine 2000 試薬 (Invitrogen社) を用いて、COS-7細胞にそれぞれ導入し48時間培養した (イヌPD-L1-EGFP発現細胞またはEGFP発現細胞)。作製した発現細胞におけるPD-L1の発現を確かめるために、倒立型共焦点レーザー顕微鏡 LSM700 (ZEISS社) により、Enhanced green fluorescent protein (EGFP) の細胞内局在を可視化した(Maekawa N, Konnai S, Ikebuchi R, Okagawa T, Adachi M, Takagi S, Kagawa Y, Nakajima C, Suzuki Y, Murata S, Ohashi K. PLoS One. 2014 Jun 10;9(6):e98415.)。
2.4 ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11のイヌPD-L1に対する交差反応性
ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11がイヌPD-L1に特異的に結合することを確かめるため、2.3で作製したイヌPD-L1-EGFP発現細胞またはEGFP発現細胞を用いてフローサイトメトリーを行った。2×105-1×106個の細胞に対し、10 μg/mlの抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11を室温で30分間反応させ、洗浄した後にAllophycocyanine標識ヤギ抗ラットIg抗体 (Beckman Coulter社) を用いて細胞表面に結合した抗体の検出を行った。解析にはFACS Verse (Becton, Dickinson and Company社) を用いた。陰性対照抗体として、ラットIgG2a (κ) アイソタイプコントロール (BD Biosciences社) を使用した。なお、すべての洗浄操作および抗体の希釈には、10% 非働化ヤギ血清加PBSを使用した。結果を図1に示す。
2.5 ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11のCDR解析
ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11を産生するハイブリドーマより抗体重鎖および軽鎖遺伝子をRACE法により同定した。NCBI IGBLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) を用いて、ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11の相補性決定領域 (CDR) を決定した。結果を図2に示す。
2.6 イヌ腫瘍組織、ヒツジ・ブタ感染組織を用いた免疫組織化学染色
ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11がイヌ腫瘍に対するPD-L1免疫組織化学染色に応用可能であることを確かめるため、ホルマリン固定、パラフィン包埋イヌ腫瘍サンプルを用いて免疫組織化学染色を行った。常法に従い、脱パラフィン処置後、クエン酸バッファーにてマイクロウエーブ処置(5分、2回)を行った。その後、PD-L1抗体(6C11-3A11)(400倍希釈)を用いて30分反応後、シンプルステインマウスMAX-PO (Rat) (ニチレイバイオサイエンス社)を用いて30分間反応させた。発色はジアミノベンジジン(DAB)にて10分反応させた。
イヌリンパ腫では、PD-L1抗体(6C11-3A11)にびまん性に陽性を示している。イヌ骨肉腫では、一部の腫瘍細胞の細胞質に陽性像が認められた。イヌ腎細胞癌では、様々な組織型において、びまん性に腫瘍細胞は陽性を示した。
〔実施例2〕
1.序論
モノクローナル抗体はハイブリドーマを培養し、その培養上清から抗体を精製することにより
産生できる。また、その抗体の遺伝子配列が同定された場合は、その遺伝子配列を発現させるベクターを培養細胞にトランスフェクションすることによって抗体の発現細胞を作成し、ハイブリドーマの代替とすることができる。本実施例では、発現ベクターと哺乳類細胞を用いたタンパク質の発現系により抗体を産生する方法を例示する。
2.材料および方法
2.1 ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11発現ベクターの作製
[実施例1]の2.5で同定したラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11の遺伝子情報をもとに、NotI制限酵素認識配列、KOZAK配列、抗体軽鎖配列、ポリA付加シグナル配列(PABGH)、プロモーター配列(PCMV)、SacI制限酵素認識配列、イントロン配列(INRBG)、KOZAK配列、抗体重鎖配列、XbaI制限酵素認識配列を上記の順で配置するように遺伝子合成を行う。この際、抗体の遺伝子は発現させる細胞の種類に応じてコドン最適化を行ったものを使用してもよい。合成した遺伝子鎖を、発現用ベクターpDC6(北海道大学 人獣共通感染症リサーチセンター 鈴木 定彦 教授より分与)のクローニングサイト(PCMV下流、INRBGとPABGHの間にあるNotIおよびXbaI制限酵素認識配列)へ制限酵素認識配列を利用して上記の順で配置するように組み込み、ラット抗PD-L1抗体6C11-3A11発現ベクターを構築する。
2.2 ラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11の発現
2.1で作成したラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11発現pDC6ベクターをジヒドロ葉酸還元酵素欠損細胞であるCHO-DG44細胞(CHO-DG44(dfhr-/-))へトランスフェクションし、高発現クローンをドットブロット法により選抜する。さらに発現量を増大させたい場合には60 nM、250 nM、1000 nMのメトトレキサート(Mtx)を含む培地で負荷をかけることにより遺伝子増幅処理を行うことができる。上記のように作成したラット抗ウシPD-L1抗体6C11-3A11安定発現細胞は、Mtxを含まないOpti-CHO培地へ移し、14日間の振盪培養(125 rpm, 37℃, 5% CO2)を行うことで目的の抗体を含む培養上清を得ることができる。培養上清中の抗体はアフィニティークロマトグラフィーやイオン交換クロマトグラフィーなどの公知の方法により精製し、各実験に使用することができる。
〔実施例3〕
1.序論
本実施例では、腫瘍疾患に対する新規診断法の確立を目的にラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体(6C11-3A11)の可変領域遺伝子と、ヒト免疫グロブリン(IgG4)の定常領域遺伝子を組み合わせたキメラ抗体遺伝子を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞(Chinese hamster ovary cell:CHO細胞)を培養増殖させて、ラット-ヒトキメラ抗PD-L1抗体を得る。
2.材料および方法
2.1 ラット-ヒトキメラ抗PD-L1抗体発現ベクターの作製(図10)
以下、ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体6C11-3A11をラット-ヒトキメラ抗PD-L1抗体の可変部とし、ラット-ヒトキメラ抗PD-L1抗体を樹立する。
[実施例4]
1.序論
イヌ腫瘍におけるPD-L1については、過去にラット抗ウシPD-L1抗体6G7-E1を用いた免疫組織化学染色法による検査法が樹立され、各種腫瘍における発現状態が報告されている(Maekawa N, Konnai S, Okagawa T, Ikebuchi R , Izumi Y, Takagi S, Kagawa Y, Nakajima C, Suzuki Y, Kato Y, Murata S, Ohashi K. PLoS One. 2016 Jun 11(6): e0157176.)。本実施例では、ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体6C11-3A11が、イヌ腫瘍におけるPD-L1の発現解析において、既存の抗PD-L1抗体である6G7-E1より有用であるかを検討するために、各種イヌ腫瘍において免疫組織化学染色を行い、6G7-E1と6C11-3A11のPD-L1検出感度の直接比較を行った。
2.材料と方法
2.1 イヌPD-L1-EGFP安定発現CHO-DG44細胞を用いたフローサイトメトリーによる比較(図11)
まず、イヌPD-L1膜発現細胞を作成するために、[実施例1]の2.3で作製したイヌPD-L1-EGFP発現プラスミド(pEGFP-N2-cPD-L1) あるいは陰性対照としてpEGFP-N2 (2.5 μg) を、4×106 個のCHO-DG44 細胞にLipofectamine LTX(Invitrogen社)を用いて導入した。48 時間後、G418(Enzo Life Science社)800 μg/ml、GlutaMAX supplement(Life technologies 社)20 ml/l、10% Pluronic F-68(Life technologies 社)18 ml/l を含むCD DG44 培地(Life technologies 社)へ培地交換し、安定発現細胞の選別と限界希釈法によるクローニングを行った。作成したイヌPD-L1膜発現細胞あるいはEGFP発現細胞に、ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体6C11-3A11または6G7-E1を室温で30分間反応させ、洗浄した後にAllophycocyanine標識ヤギ抗ラットIg抗体 (Beckman Coulter社) を用いて細胞表面に結合した抗体の検出を行った。解析にはFACS Verse (Becton, Dickinson and Company社) を用いた。陰性対照抗体として、ラットIgG2a (κ) またはIgM (κ)アイソタイプコントロール (BD Biosciences社) を使用した。なお、すべての洗浄操作および抗体の希釈には、10% 非働化ヤギ血清加PBSを使用した。
2.2 各種イヌ腫瘍のPD-L1発現解析(免疫組織化学染色)における両抗体の検出感度の比較
イヌの皮膚扁平上皮癌(n = 5)、鼻腔内腺癌(n = 5)、移行上皮癌(n = 5)、肛門嚢腺癌(n = 5)、軟部組織肉腫(n = 5)、骨肉腫(n = 5)のサンプルについて、[実施例1]の2.6に示した方法に従ってラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体6C11-3A11による免疫組織化学染色を行った。ラット抗ウシPD-L1モノクローナル抗体6G7-E1によっても、同じ検体由来の切片を用いて免疫組織化学染色を同様の方法により行った。この時用いた6G7-E1の終濃度は 10 μg/mlであり、2次抗体にはビオチン標識ヤギ抗ラットIgM抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories社)を使用した。
〔実施例5〕
1.序論
ヨーネ病は、Mycobacterium avium subsp. paratuberculosisによるウシの慢性感染症である。ヨーネ病に罹患したウシでは、ヨーネ菌の感染局所である回腸病変部で、ヨーネ菌感染細胞におけるPD-L1の発現が確認されている(Okagawa T, Konnai S, Nishimori A, Ikebuchi R, Mizorogi S, Nagata R, Kawaji S, Tanaka S, Kagawa Y, Murata S, Mori Y and Ohashi K. Infect Immun, 84:77-89, 2016.)。本実施例では、ラット抗ウシPD-L1 抗体6C11-3A11がウシのPD-L1の検出に使用可能であるか検討する目的でヨーネ病罹患牛の回腸病変部の免疫組織化学染色を行った。
2. 材料および方法
2.1. ウシPD-L1発現細胞の構築
ウシPD-L1遺伝子(GenBank accession number AB510902; Ikebuchi R, Konnai S, Shirai T, Sunden Y, Murata S, Onuma M, Ohashi K. Vet. Res. 2011 Sep. 26; 42:103.)についてcDNA全長の塩基配列を決定し、その遺伝子情報よりウシPD-L1膜発現細胞を作製した。まず、ウシPD-L1発現プラスミドを作製するため、合成したウシPBMC 由来cDNA を鋳型として、5´末端側に制限酵素NheIおよびXhoI認識部位を付加したプライマー(boPD-L1-EGFP FおよびR)を用いてPCR を行った。得られたPCR 産物をNheI(Takara社)およびXhoI(Takara社)により処理した後、FastGene Gel/PCR Extraction Kit(NIPPON Genetics 社)を用いて精製し、同様の制限酵素処理を行ったpEGFP-N2 vector(Clontech社)へ導入し、クローニングを行った。得られた目的の発現プラスミドはQIAGEN Plasmid Midi kit(Qiagen 社)用いて抽出し、実験に供するまで-30℃で保存した。以降、作製した発現プラスミドをpEGFP-N2-boPD-L1と表記する。
プライマー(boPD-L1-EGFP F):CTAGCTAGCACCATGAGGATATATAGTGTCTTAAC(配列番号124)
プライマー(boPD-L1-EGFP R): CAATCTCGAGTTACAGACAGAAGATGACTGC(配列番号125)
以下の手順に従い、ウシPD-L1膜発現細胞を作製した。まず、4×106 個のCHO-DG44 細胞に2.5 μg のpEGFP-N2-boPD-L1あるいは陰性対照としてpEGFP-N2をLipofectamine LTX(Invitrogen社)を用いて導入した。48 時間後、G418(Enzo Life Science社)800 μg/ml、GlutaMAX supplement(Life technologies 社)20 ml/l、10% Pluronic F-68(Life technologies 社)18 ml/l を含むCD DG44 培地(Life technologies 社)へ培地交換し、セレクションを行うと同時に限界希釈法によりクローニングを行った(ウシPD-L1-EGFP発現細胞ならびにEGFP発現細胞)。作製したウシPD-L1-EGFP発現細胞におけるウシPD-L1 の発現を確かめるために、倒立型共焦点レーザー顕微鏡LSM700(ZEISS 社)により、EGFPの細胞内局在を可視化した。
2.2. ラット抗ウシPD-L1抗体 6C11-3A11のウシPD-L1への結合特異性
ラット抗ウシPD-L1抗体 6C11-3A11がウシPD-L1-EGFP発現細胞(前述)に対し特異的に結合することをフローサイトメトリー法により確認した。まず、ウシPD-L1発現細胞、あるいはEGFP発現細胞(陰性対照)に対してラット抗ウシPD-L1抗体 6C11-3A11、または陰性対照抗体としてラットIgG2a(κ) アイソタイプコントロール(BD Biosciences社)を室温で30分間反応させた。洗浄後、APC標識抗ラットIgヤギ抗体(SouthernBiotech社)を室温で30分間反応させた。洗浄後、細胞表面に結合した抗体をFACS Verse(BD Biosciences社)により検出した。なお、すべての洗浄操作および抗体の希釈には、1% ウシ血清アルブミン(Sigma-Aldrich社)を加えたPBSを使用した。
2.3. ウシ感染組織を用いた免疫組織化学染色
ラット抗ウシPD-L1 抗体6C11-3A11 がウシ組織に対するPD-L1 免疫組織化学染色に応用可能であることを確かめるため、ホルマリン固定、パラフィン包埋ウシ組織サンプルを用いて免疫組織化学染色を行った。ヨーネ病の野外発症牛 (#1, 下痢や重度の削痩などヨーネ病の臨床症状を示していた)、ヨーネ菌実験感染牛 (#65, 排菌および下痢などの臨床症状が観察された; Okagawa T, Konnai S, Nishimori A, Ikebuchi R, Mizorogi S, Nagata R, Kawaji S, Tanaka S, Kagawa Y, Murata S, Mori Y and Ohashi K. Infect Immun, 84:77-89, 2016.) および非感染コントロール牛 (C#6) の回腸組織ブロック (農研機構・動物衛生研究部門 森 康行 博士より分与) を用いて、免疫組織化学染色を行った。常法に従い、脱パラフィン処置後、クエン酸バッファーにてマイクロウエーブ処置(5 分、2回)を行った。その後、ラット抗ウシPD-L1 抗体 6C11-3A11(400 倍希釈)を用いて30分反応後、シンプルステインマウスMAX-PO (Rat)(ニチレイバイオサイエンス社)を用いて30 分間反応させた。最後に、アミノベンジジン(DAB)に10 分反応させて発色させ、光学顕微鏡を用いて観察した。
KSISKY
<配列番号2>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のL鎖可変領域のCDR3のアミノ酸配列を示す。
QQHNEYPLT
<配列番号3>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖可変領域のCDR1のアミノ酸配列を示す。
GYTFTDYI
<配列番号4>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖可変領域のCDR2のアミノ酸配列を示す。
INPDSGGN
<配列番号5>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖可変領域のCDR3のアミノ酸配列を示す。
ARGITMMVVISHWKFDF
<配列番号6>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のL鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
MRVQIQFWGLLLLWTSGIQCDVQMTQSPSNLAASPGESVSINCKASKSISKYLAWYQQKPGKANKLLIYSGSTLQSGTPSRFSGSGSGTDFTLTIRNLEPEDFGLYYCQQHNEYPLTFGSGTKLEIK
<配列番号7>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
MGWICIIFLVAIATGAHSQVKLLQSGAALVKPGDSVKMSCKASGYTFTDYIIHWVKQSHGKSLEWIGYINPDSGGNNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMEFSRLTSEDSAIYYCARGITMMVVISHWKFDFWGPGTMVTVSS
<配列番号8>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
RADAAPTVSIFPPSTEQLATGGASVVCLMNNFYPRDISVKWKIDGTERRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTKADYESHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC*
<配列番号9>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖定常領域のアミノ酸配列を示す。
AETTAPSVYPLAPGTALKSNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGALSSGVHTFPAVLQSGLYTLTSSVTVPSSTWSSQAVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRECNPCGCTGSEVSSVFIFPPKTKDVLTITLTPKVTCVVVDISQNDPEVRFSWFIDDVEVHTAQTHAPEKQSNSTLRSVSELPIVHRDWLNGKTFKCKVNSGAFPAPIEKSISKPEGTPRGPQVYTMAPPKEEMTQSQVSITCMVKGFYPPDIYTEWKMNGQPQENYKNTPPTMDTDGSYFLYSKLNVKKETWQQGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK*
<配列番号10>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列(GenBank: #V01241.1)を示す。
ADAAPTVSIFPPSTEQLATGGASVVCLMNNFYPRDISVKWKIDGTERRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTKADYESHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC*
<配列番号11>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列(GenBank: #X16129.1)を示す。
RADAAPTVSIFPPSTEQLATGGASVVCLMNNFYPRDISVKWKIDGTERRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLSKADYESHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC
<配列番号12>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列(GenBank: #DQ402471.1)を示す。
AAPTVSIFPPSMEQLTSGGATVVCFVNNFYPRDISVKWKIDGSEQRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTKVEYERHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC*
<配列番号13>ラット抗体(IgG2a)のH鎖定常領域のアミノ酸配列(GenBank: #DQ402472.1)を示す。
APSVYPLAPGTALKSNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGALSSGVHTFPAVLQSGLYTLTSSVTVPSSTWSSQAVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRECNPCGCTGSEVSSVFIFPPKTKDVLTITLTPKVTCVVVDISQNDPEVRFSWFIDDVEVHTAQTHAPEKQSNSTLRSVSELPIVHRDWLNGKTFKCKVNSGAFPAPIEKSISKPEGTPRGPQVYTMAPPKEEMTQSQVSITCMVKGFYPPDIYTEWKMNGQPQENYKNTPPTMDTDGSYFLYSKLNVKKETWQQGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK*
<配列番号14>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のL鎖可変領域のヌクレオチド配列を示す。
ATGAGGGTCCAGATTCAGTTTTGGGGGCTTCTTCTGCTCTGGACATCAGGTATACAGTGTGATGTCCAGATGACCCAGTCTCCATCTAATCTTGCTGCCTCTCCTGGAGAAAGTGTTTCCATCAATTGCAAGGCAAGTAAGAGCATTAGCAAGTATTTAGCCTGGTATCAACAGAAACCTGGGAAAGCAAATAAGCTTCTTATCTACTCTGGGTCAACTTTGCAATCTGGAACTCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACAGATTTCACTCTCACCATCAGAAACCTGGAGCCTGAAGATTTTGGACTCTATTACTGTCAACAGCATAATGAATACCCGCTCACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
<配列番号15>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖可変領域のヌクレオチド配列を示す。
ATGGGATGGATCTGTATCATCTTTCTTGTGGCAATAGCTACAGGTGCCCACTCCCAGGTCAAGCTGCTGCAGTCTGGGGCTGCACTGGTGAAGCCTGGGGACTCTGTGAAGATGTCTTGCAAAGCTTCTGGTTATACATTCACTGACTACATTATACACTGGGTGAAGCAGAGTCATGGAAAAAGCCTTGAGTGGATTGGTTATATTAATCCTGACAGTGGTGGTAATAACTACAATGAAAAGTTCAAGAGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCAGCAGCACAGCCTATATGGAGTTTAGCAGATTGACATCTGAGGATTCTGCAATCTACTACTGTGCAAGAGGGATTACCATGATGGTAGTTATTAGCCACTGGAAGTTTGACTTCTGGGGCCCAGGAACCATGGTCACCGTGTCCTCA
<配列番号16>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
CGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCTATCTTCCCACCATCCACGGAACAGTTAGCAACTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCCTCATGAACAACTTCTATCCCAGAGACATCAGTGTCAAGTGGAAGATTGATGGCACTGAACGACGAGATGGTGTCCTGGACAGTGTTACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACGTACAGCATGAGCAGCACCCTCTCGTTGACCAAGGCTGACTATGAAAGTCATAACCTCTATACCTGTGAGGTTGTTCATAAGACATCATCCTCACCCGTCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
<配列番号17>抗PD-L1抗体6C11-3A11(IgG2a)のH鎖定常領域のヌクレオチド配列を示す。
GCTGAAACAACAGCCCCATCTGTCTATCCACTGGCTCCTGGAACTGCTCTCAAAAGTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTCACCGTGACCTGGAACTCTGGAGCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGGACTCTACACTCTCACCAGCTCAGTGACTGTACCCTCCAGCACCTGGTCCAGCCAGGCCGTCACCTGCAACGTAGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCAAGGGAATGCAATCCTTGTGGATGTACAGGCTCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGACCAAAGATGTGCTCACCATCACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATTAGCCAGAATGATCCCGAGGTCCGGTTCAGCTGGTTTATAGATGACGTGGAAGTCCACACAGCTCAGACTCATGCCCCGGAGAAGCAGTCCAACAGCACTTTACGCTCAGTCAGTGAACTCCCCATCGTGCACCGGGACTGGCTCAATGGCAAGACGTTCAAATGCAAAGTCAACAGTGGAGCATTCCCTGCCCCCATCGAGAAAAGCATCTCCAAACCCGAAGGCACACCACGAGGTCCACAGGTATACACCATGGCGCCTCCCAAGGAAGAGATGACCCAGAGTCAAGTCAGTATCACCTGCATGGTAAAAGGCTTCTATCCCCCAGACATTTATACGGAGTGGAAGATGAACGGGCAGCCACAGGAAAACTACAAGAACACTCCACCTACGATGGACACAGATGGGAGTTACTTCCTCTACAGCAAGCTCAATGTAAAGAAAGAAACATGGCAGCAGGGAAACACTTTCACGTGTTCTGTGCTGCATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGTCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
<配列番号18>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列(GenBank: #V01241.1)を示す。
GGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCTATCTTCCCACCATCCACGGAACAGTTAGCAACTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCCTCATGAACAACTTCTATCCCAGAGACATCAGTGTCAAGTGGAAGATTGATGGCACTGAACGACGAGATGGTGTCCTGGACAGTGTTACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACGTACAGCATGAGCAGCACCCTCTCGTTGACCAAGGCTGACTATGAAAGTCATAACCTCTATACCTGTGAGGTTGTTCATAAGACATCATCCTCACCCGTCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
<配列番号19>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列(GenBank: #X16129.1)を示す。
CGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCTATCTTCCCACCATCCACGGAACAGTTAGCAACTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCCTCATGAACAACTTCTATCCCAGAGACATCAGTGTCAAGTGGAAGATTGATGGCACTGAACGACGAGATGGTGTCCTGGACAGTGTTACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACGTACAGCATGAGCAGCACCCTCTCGTTGTCCAAGGCTGACTATGAAAGTCATAACCTCTATACCTGTGAGGTTGTTCATAAGACATCATCCTCACCCGTCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
<配列番号20>ラット抗体(IgG2a)のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列(GenBank: #DQ402471.1)を示す。
GCCGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCATGGAACAGTTAACATCTGGAGGTGCCACAGTCGTGTGCTTCGTGAACAACTTCTATCCCAGAGACATCAGTGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACAACGAGATGGTGTCCTGGACAGTGTTACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACGTACAGCATGAGCAGCACCCTCTCGTTGACCAAGGTTGAATATGAAAGGCATAACCTCTATACCTGTGAGGTTGTTCATAAGACATCATCCTCACCCGTCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
<配列番号21>ラット抗体(IgG2a)のH鎖定常領域のヌクレオチド配列(GenBank: #DQ402472.1)を示す。
CAGCCCCCTCTGTCTATCCACTGGCTCCTGGAACTGCTCTCAAAAGTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTCACCGTGACCTGGAACTCTGGAGCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGGACTCTACACTCTCACCAGCTCAGTGACTGTACCCTCCAGCACCTGGTCCAGCCAGGCCGTCACCTGCAACGTAGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCAAGGGAATGCAATCCTTGTGGATGTACAGGCTCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGACCAAAGATGTGCTCACCATCACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATTAGCCAGAATGATCCCGAGGTCCGGTTCAGCTGGTTTATAGATGACGTGGAAGTCCACACAGCTCAGACTCATGCCCCGGAGAAGCAGTCCAACAGCACTTTACGCTCAGTCAGTGAACTCCCCATCGTGCACCGGGACTGGCTCAATGGCAAGACGTTCAAATGCAAAGTCAACAGTGGAGCATTCCCTGCCCCCATCGAGAAAAGCATCTCCAAACCCGAAGGCACACCACGAGGTCCACAGGTATACACCATGGCGCCTCCCAAGGAAGAGATGACCCAGAGTCAAGTCAGTATCACCTGCATGGTAAAAGGCTTCTATCCCCCAGACATTTATACGGAGTGGAAGATGAACGGGCAGCCACAGGAAAACTACAAGAACACTCCACCTACGATGGACACAGATGGGAGTTACTTCCTCTACAGCAAGCTCAATGTAAAGAAAGAAACATGGCAGCAGGGAAACACTTTCACGTGTTCTGTGCTGCATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGTCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
<配列番号22〜27>配列番号22〜27は、順に、プライマーcPD-L1 inner F、cPD-L1 inner R、cPD-L1 5’GSP、cPD-L1 3’GSP、cPD-L1-EGFP F及びcPD-L1-EGFP Rのヌクレオチド配列を示す。
<配列番号28>
配列番号28は、ヒト抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号29>
配列番号29は、ヒト抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号30>
配列番号30は、ヒト抗体(IgG4 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号31>
配列番号31は、ヒト抗体(IgG4 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号32>
配列番号32は、ヒト抗体(IgG4 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号33>
配列番号33は、ヒト抗体(IgG4 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号34>
配列番号34は、ヒト抗体(IgG4 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号35>
配列番号35は、ヒト抗体(IgG4 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号36>
配列番号36は、マウス抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号37>
配列番号37は、マウス抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号38>
配列番号38は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号39>
配列番号39は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号40>
配列番号40は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号41>
配列番号41は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号42>
配列番号42は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号43>
配列番号43は、マウス抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号44>
配列番号44は、マウス抗体(IgG1 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号45>
配列番号45は、マウス抗体(IgG1 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号46>
配列番号46は、マウス抗体(IgG1 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号47>
配列番号47は、マウス抗体(IgG1 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号48>
配列番号48は、マウス抗体(IgG2a variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号49>
配列番号49は、マウス抗体(IgG2a variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号50>
配列番号50は、マウス抗体(IgG2a variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号51>
配列番号51は、マウス抗体(IgG2a variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号52>
配列番号52は、マウス抗体(IgG2b variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号53>
配列番号53は、マウス抗体(IgG2b variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号54>
配列番号54は、マウス抗体(IgG2b variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号55>
配列番号55は、マウス抗体(IgG2b variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号56>
配列番号56は、マウス抗体(IgG2c variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号57>
配列番号57は、マウス抗体(IgG2c variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号58>
配列番号58は、マウス抗体(IgG2c variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号59>
配列番号59は、マウス抗体(IgG2c variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号60>
配列番号60は、マウス抗体(IgG2c variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号61>
配列番号61は、マウス抗体(IgG2c variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号62>
配列番号62は、マウス抗体(IgG3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号63>
配列番号63は、マウス抗体(IgG3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号64>
配列番号64は、ウシ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号65>
配列番号65は、ウシ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号66>
配列番号66は、ウシ抗体(IgG1 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号67>
配列番号67は、ウシ抗体(IgG1 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号68>
配列番号68は、ウシ抗体(IgG1 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号69>
配列番号69は、ウシ抗体(IgG1 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号70>
配列番号70は、ウシ抗体(IgG1 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号71>
配列番号71は、ウシ抗体(IgG1 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号72>
配列番号72は、ウシ抗体(IgG2 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号73>
配列番号73は、ウシ抗体(IgG2 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号74>
配列番号74は、ウシ抗体(IgG2 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号75>
配列番号75は、ウシ抗体(IgG2 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号76>
配列番号76は、ウシ抗体(IgG2 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号77>
配列番号77は、ウシ抗体(IgG2 variant 3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号78>
配列番号78は、ウシ抗体(IgG3 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号79>
配列番号79は、ウシ抗体(IgG3 variant 1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号80>
配列番号80は、ウシ抗体(IgG3 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号81>
配列番号81は、ウシ抗体(IgG3 variant 2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号82>
配列番号82は、イヌ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号83>
配列番号83は、イヌ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号84>
配列番号84は、イヌ抗体(IgG-D)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号85>
配列番号85は、イヌ抗体(IgG-D)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号86>
配列番号86は、ヒツジ抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号87>
配列番号87は、ヒツジ抗体のL鎖(kappa鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号88>
配列番号88は、ヒツジ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のアミノ酸配列を示す。
<配列番号89>
配列番号89は、ヒツジ抗体のL鎖(lambda鎖)定常領域のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号90>
配列番号90は、ヒツジ抗体(IgG1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号91>
配列番号91は、ヒツジ抗体(IgG1)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号92>
配列番号92は、ヒツジ抗体(IgG2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号93>
配列番号93は、ヒツジ抗体(IgG2)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号94>
配列番号94は、ブタ抗体(IgG1a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号95>
配列番号95は、ブタ抗体(IgG1a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号96>
配列番号96は、ブタ抗体(IgG1b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号97>
配列番号97は、ブタ抗体(IgG1b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号98>
配列番号98は、ブタ抗体(IgG2a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号99>
配列番号99は、ブタ抗体(IgG2a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号100>
配列番号100は、ブタ抗体(IgG2b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号101>
配列番号101は、ブタ抗体(IgG2b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号102>
配列番号102は、ブタ抗体(IgG3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号103>
配列番号103は、ブタ抗体(IgG3)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号104>
配列番号104は、ブタ抗体(IgG4a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号105>
配列番号105は、ブタ抗体(IgG4a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号106>
配列番号106は、ブタ抗体(IgG4b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号107>
配列番号107は、ブタ抗体(IgG4b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号108>
配列番号108は、ブタ抗体(IgG5a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号109>
配列番号109は、ブタ抗体(IgG5a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号110>
配列番号110は、ブタ抗体(IgG5b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号111>
配列番号111は、ブタ抗体(IgG5b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号112>
配列番号112は、ブタ抗体(IgG6a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号113>
配列番号113は、ブタ抗体(IgG6a)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号114>
配列番号114は、ブタ抗体(IgG6b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号115>
配列番号115は、ブタ抗体(IgG6b)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号116>
配列番号116は、スイギュウ抗体のL鎖(Ig lambdaと推定される)定常領域(CL)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号117>
配列番号117は、スイギュウ抗体のL鎖(Ig lambdaと推定される)定常領域(CL)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号118>
配列番号118は、スイギュウ抗体(IgG1と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号119>
配列番号119は、スイギュウ抗体(IgG1と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号120>
配列番号120は、スイギュウ抗体(IgG2と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号121>
配列番号121は、スイギュウ抗体(IgG2と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号122>
配列番号112は、スイギュウ抗体(IgG3と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のアミノ酸配列を示す。
<配列番号123>
配列番号123は、スイギュウ抗体(IgG3と推定される)のH鎖定常領域(CH1〜CH3)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号124>
配列番号124は、プライマー(boPD-L1-EGFP F)のヌクレオチド配列を示す。
<配列番号125>
配列番号125は、プライマー(boPD-L1-EGFP R)のヌクレオチド配列を示す。
Claims (18)
- (a) KSISKY(配列番号1)のアミノ酸配列を有するCDR1、SGSのアミノ酸配列を有するCDR2及びQQHNEYPLT(配列番号2)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するL鎖と、(b) GYTFTDYI(配列番号3)のアミノ酸配列を有するCDR1、INPDSGGN(配列番号4)のアミノ酸配列を有するCDR2及びARGITMMVVISHWKFDF(配列番号5)のアミノ酸配列を有するCDR3を有するH鎖とを含む、抗PD-L1抗体。
- ラットに由来する請求項1記載の抗体。
- ラット抗ウシPD-L1抗体である請求項2記載の抗体。
- L鎖可変領域が配列番号6のアミノ酸配列を有し、H鎖可変領域が配列番号7のアミノ酸配列を有する、請求項3記載の抗体。
- L鎖定常領域が、Kappa鎖の定常領域のアミノ酸配列を有する請求項1〜4のいずれかに記載の抗体。
- H鎖定常領域が、IgG2aの定常領域のアミノ酸配列を有する請求項1〜5のいずれかに記載の抗体。
- L鎖定常領域が配列番号8、10〜12のいずれかのアミノ酸配列を有し、H鎖定常領域が配列番号9又は13のアミノ酸配列を有する請求項5又は6記載の抗体。
- L鎖2本とH鎖2本の4本鎖構造を持つ請求項1〜7のいずれかに記載の抗体。
- 請求項1〜8のいずれかに記載の抗体を有効成分として含む、PD-L1を検出するための組成物。
- がん及び/又は感染症の診断に用いられる請求項9記載の組成物。
- がん及び/又は感染症が、腫瘍性疾患、白血病、ヨーネ病、アナプラズマ病、細菌性乳房炎、真菌性乳房炎、マイコプラズマ感染症(例えば、マイコプラズマ性乳房炎、マイコプラズマ性肺炎など)、結核、小型ピロプラズマ病、クリプトスポリジウム症、コクシジウム症、トリパノソーマ病及びリーシュマニア症からなる群より選択される請求項10記載の組成物。
- 抗PD-L1抗体を用いた治療に適した被験動物を選定するために用いられる請求項9記載の組成物。
- 請求項1記載の抗PD-L1抗体をコードするDNA。
- 請求項13記載のDNAを含むベクター。
- 請求項14記載のベクターにより形質転換された宿主細胞。
- 請求項15記載の宿主細胞を培養し、培養物から抗PD-L1抗体を採取することを含む、抗体の製造方法。
- KSISKY(配列番号1)のアミノ酸配列を有するCDR1、SGSのアミノ酸配列を有するCDR2及びQQHNEYPLT(配列番号2)のアミノ酸配列を有するCDR3を有する、抗PD-L1抗体のL鎖をコードするDNA。
- GYTFTDYI(配列番号3)のアミノ酸配列を有するCDR1、INPDSGGN(配列番号4)のアミノ酸配列を有するCDR2及びARGITMMVVISHWKFDF(配列番号5)のアミノ酸配列を有するCDR3を有する、抗PD-L1抗体のH鎖をコードするDNA。
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