JPWO2017183570A1 - 細胞培養用容器、及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
しかしながら、ポートの流路径は、通常、1〜10mm程度であり、フィルタの面積も比較的小さくなるため、捕捉された細胞によってフィルタに目詰まりが生じ易く、古い培地の排出を妨げてしまう虞がある。さらに、フィルタに捕捉された細胞が培養容器内に戻らずに、フィルタに捕捉されたまま死滅してしまう虞もある。
まず、本発明の第一実施形態について説明する。
なお、図1は、本実施形態に係る細胞培養用容器の一例を示す説明図である。
フィルタ部材4によって区画されたそれぞれの槽は、必要に応じて、二以上の注入出用ポートを備えることができる。
すなわち、二枚のプラスチックフィルムを重ねて周辺部をシールしただけの平パウチ状の容器では、容器内が内容液で満たされていくにつれて周辺部が持ち上がるように底面が変形するが、注入量を考慮して容器本体2の膨出形状を設計することで、培地や細胞を注入する際の容器本体2の変形を抑制して、容器本体2の底面2bを平坦面のままとすることが可能となる。
したがって、図1に示す容器1は、容器本体2の底面2bに培地中の細胞を均一に沈降させ、底面2bに沈降した細胞の密度(単位面積あたりの細胞数)に偏りが生じないようにすることが求められる場合に好適に用いられる。
まず、二枚のプラスチックフィルムとシート状のフィルタ部材4とを用意し、これらを必要に応じて裁断して、その大きさを揃える。そして、一方のプラスチックフィルムを容器本体2の天面2a側となる天面側プラスチックフィルムとし、他方のプラスチックフィルムを容器本体2の底面2b側となる底面側プラスチックフィルムとして、これらを真空成形、圧空成形などにより、その周辺部を残して台地状に膨出するように成形する。
また、当該プラスチックフィルムは、細胞培養の進行状況や細胞の状態などを確認できるように、一部又は全部が透明性を有しているのが好ましい。
また、フィルタ部材4は、容器1の使用態様によって要求される機能が損なわれない限り、少なくとも一部が上記したような多孔質体を用いて形成されていればよい。例えば、前述したようにして容器1を製造するに際し、上記多孔質体の周囲を枠状に裁断されたプラスチックフィルムで保持するなどしてフィルタ部材4を形成することで、天面側及び底面側プラスチックフィルムとの熱融着がより良好になされるようにすることもできる。
図2は、図1に示す容器1を、培地交換などの操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる培養容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
図3は、図1に示す容器1を、細胞の凝集塊Caggを所望の大きさに分割する操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる凝集塊分割容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
所望の大きさに分割された凝集塊Cdivは、底面2b側の第二の槽2ndが備える注入出用ポート3bから取り出すことができる。
また、特に図示しないが、容器本体2の内部を三槽以上に区画しておき、各槽を区画するフィルタ部材4の細孔の大きさを適宜調整することで、凝集塊Caggを段階的に分割することもできる。さらに、各槽に注入出用ポートを備えるようにすることで、異なる大きさに分割された凝集塊Cdivを、それぞれ取り出すようにすることもできる。
図4は、図1に示す容器1を、混在する大きさの異なる二種類の細胞、例えば、シングルセルCsとその凝集塊Caggとを分離する操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる細胞分離容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
図5は、図1に示す容器1を、異なる種類の細胞Ca,Cbを同一容器内で共培養した後に、これらを別々に取り出す操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる共培養容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
次に、本発明の第二実施形態について説明する。
なお、図6は、本実施形態に係る細胞培養用容器の一例を示す説明図である。
なお、第一実施形態と同様に、容器本体2の具体的な形態が限定されないことはいいうまでもない。
図7は、図6に示す容器1を、凝集塊Caggを形成する細胞Csを培養するにあたり、その培地交換などの操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる培養容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
なお、特に図示しないが、前述した第一実施形態と同様に、底面2b側の第二の槽2ndが注入出用ポート3bを備えるようにすれば、注入出用ポート3bから培養された細胞(凝集塊Cagg)を取り出すこともできる。
次に、本発明の第三実施形態について説明する。
なお、図8は、本実施形態に係る細胞培養用容器の一例を示す説明図である。
また、図示する例では、凹部5を椀状に形成しているが、必要に応じて、円錐状、円錐台状などに形成することもできる。
なお、第一及び第二実施形態と同様に、容器本体2の具体的な形態が限定されないことはいいうまでもない。
図9は、図8に示す容器1を、凝集塊Caggを形成する細胞Csを培養するにあたり、細胞密度が高められた状態で効率良く培養するとともに、その培地交換などの操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる培養容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
なお、特に図示しないが、前述した第一実施形態と同様に、底面2b側の第二の槽2ndが注入出用ポート3bを備えるようにすれば、注入出用ポート3bから培養された細胞(凝集塊Cagg)を取り出すこともできる。
次に、本発明の第四実施形態について説明する。
なお、図10は、本実施形態に係る細胞培養用容器の一例を示す説明図である。
なお、第一、第二、及び第三実施形態と同様に、容器本体2の具体的な形態が限定されないことはいうまでもない。
図11は、図10に示す容器1を、培養対象の細胞Cが、生体内で成長、増殖、分化する環境を再現する操作を簡便、かつ、効率良く行うことができる培養容器として細胞培養の用途に供する例を示している。
次に、本発明の第五実施形態について説明する。
なお、図12は、本実施形態に係る細胞培養用容器の一例を示す説明図である。
なお、培養終了後には、培地交換を行うのと同様にして、それぞれの凹部6に洗浄液を注入、排出させることで、凝集塊を洗浄することもできる。
2 容器本体
2a 天面
2b 底面
3a,3b,3c 注入出用ポート
4 フィルタ部材
5 凹部
6 凹部
7 側壁部
1st 第一の槽
2nd 第二の槽
3rd 第三の槽
Claims (14)
- 細胞培養の用途に供される細胞培養用容器であって、
容器本体と注入出用ポートとを備え、
前記容器本体の内部が、少なくとも一つのフィルタ部材によって複数の槽に区画されていることを特徴とする細胞培養用容器。 - 前記容器本体の内部が、前記容器本体の天面側の第一の槽と、前記容器本体の底面側の第二の槽とに区画され、
前記天面側の第一の槽と前記底面側の第二の槽の少なくとも一方に、前記注入出用ポートを少なくとも一つ備える請求項1に記載の細胞培養用容器。 - 前記容器本体の底面に、複数の凹部が設けられた請求項1又は2に記載の細胞培養用容器。
- 前記容器本体の内部が、前記容器本体の天面側の第一の槽と、前記容器本体の底面側の第二の槽と、前記天面側の第一の槽と前記底面側の第二の槽との間に位置する第三の槽とに区画され、
前記天面側の第一の槽と前記底面側の第二の槽に、前記注入出用ポートを少なくとも二つ備え、
前記第三の槽に、記注入出用ポートを少なくとも一つ備える請求項1に記載の細胞培養用容器。 - 細胞培養の用途に供される細胞培養用容器であって、
細胞培養部となる複数の凹部を有する容器本体を備え、前記凹部のそれぞれの開口部がフィルタ部材によって覆われていることを特徴とする細胞培養用容器。 - 前記容器本体に、前記容器本体の周りを取り囲んで立ち上る側壁部が設けられている請求項5に記載の細胞培養用容器。
- 前記フィルタ部材が、合成樹脂繊維を編んだメッシュシートである請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞培養用容器。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の細胞培養用容器を用いて培地交換しながら細胞を培養する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、培養対象の細胞の通過を許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記フィルタ部材によって区画された一方の槽に、前記細胞を注入して培養を行い、
前記フィルタ部材によって区画された他方の槽が備える前記注入出用ポートから、培地を注入出して培地交換を行うことを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項1〜3のいずれか一項に記載の細胞培養用容器を用いて細胞の洗浄を行う当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、培養対象の細胞の通過を許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記フィルタ部材によって区画された一方の槽に、前記細胞を注入して培養を行い、
前記フィルタ部材によって区画された他方の槽が備える前記注入出用ポートから、洗浄液を注入出して培養された細胞の洗浄を行うことを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項1又は2に記載の細胞培養用容器を用いて細胞の凝集塊を分割する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、細胞の凝集塊を分割したい大きさに応じた細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記フィルタ部材によって区画された一方の槽に、前記凝集塊を培地とともに圧送して前記凝集塊を分割することを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項1又は2に記載の細胞培養用容器を用いて混在する大きさの異なる細胞を分離する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、混在する細胞のうち少なくとも一の細胞の通過を許容するが、それ以外の細胞の通過を許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記フィルタ部材によって区画された一方の槽に、混在する大きさの異なる細胞を注入して、
前記フィルタ部材によって区画された他方の槽から、前記フィルタ部材を通過した細胞を取り出すことを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項1又は2に記載の細胞培養用容器を用いて異なる種類の細胞を共培養する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、共培養されるいずれの細胞も通過を許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記フィルタ部材によって区画されたそれぞれの槽に、前記細胞を種類ごとに別々に注入して共培養することを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項2又は3に記載の細胞培養用容器を用いて凝集塊を形成する細胞を培養する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、凝集塊を形成する前の細胞の通過は許容するが、凝集塊の通過は許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記細胞を、前記第一の槽に注入し、次いで、前記第二の槽に沈降させて、形成された凝集塊を前記第二の槽に留まらせた状態で培養することを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。 - 請求項4に記載の細胞培養用容器を用いて細胞を培養する当該容器の使用方法であって、
前記フィルタ部材として、培養対象の細胞の通過を許容しない細孔を有するフィルタ部材を選択し、
前記第一の槽と前記第二の槽とのそれぞれに、成分組成の異なる培地を流通させながら、前記第三の槽に前記細胞を注入して培養を行うことを特徴とする細胞培養用容器の使用方法。
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