JPWO2015029714A1 - タンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法、機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法、タンパク質アレイ又はペプチドアレイ、及び、機能性タンパク質又は機能性ペプチド同定キット - Google Patents
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Abstract
Description
(a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、固相担体に固定された核酸と無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記核酸からタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、
を有することを特徴とする。
(2)本発明の一実施態様におけるタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法は、
(a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、固相担体に固定されたDNAと無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記DNAからmRNAを転写し、前記核酸リンカーにハイブリダイズした前記mRNAからタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、
を有することを特徴とする。
(3)本発明の一実施態様におけるタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、
先に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法を用いて製造されたことを特徴とする。
(4)本発明の一実施態様における機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法は、(d)先に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイを用いて、機能性スクリーニングを行い、リアクターを特定する工程を有することを特徴とする。
(5)本発明の一実施態様におけるタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、
前記リアクター内に配置された、固相担体に固定された核酸及び該核酸にコードされるタンパク質又はペプチドと、を有し、
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記タンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を有すること特徴とする。
(6)本発明の一実施態様におけるタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、
前記リアクター内に配置された、固相担体に固定されたDNA及び該DNAにコードされるタンパク質又はペプチドと、を有し、
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記DNAから合成されるmRNA及びタンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを有すること特徴とする。
(7)本発明の一実施態様における機能性タンパク質又は機能性ペプチド同定キットは、先に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイと、前記固相担体との親和性を有する基板と、を備えたことを特徴とする。
[第1実施形態]
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法は、(a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、固相担体に固定された核酸と無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記核酸からタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、を有する。
以下、図1を参照しながら、本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法について具体的に説明する。
本実施形態においては、個々に壁を有するリアクター2からなるリアクターアレイ1を用いるため、DNAアレイからタンパク質アレイを製造する際、又は、タンパク質アレイを用いて機能性スクリーニングを行う際に必要とされていた、基板をリアクターに重ね合わせる際のアライメントを取る必要がない。
また、リアクター2の深さとしては、1〜200μmが好ましく、1〜50μmがより好ましく、1〜5μmが特に好ましい。
また、リアクター2は親水化処理が施されていてもよい。
該DNAは、≪機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法≫における後記工程(d)で特定されたリアクター2に対応する核酸の塩基配列を解析する観点から、リアクターアレイ1において、核酸の位置情報が特定されており、本実施形態においては、DNA13が固相担体に固定化されている。また、一例として、固相担体に固定された核酸は、固相担体1個当たり1種類の核酸である。
固定化には、アビジン−ビオチン結合を利用する方法の他、DNAをアミノ基、アルデヒド基、SH基、などの官能基で修飾し、固相担体をアミノ基、アルデヒド基、エポキシ基などを有するシランカップリング剤で表面処理したものを利用する方法などを用いることができ、特に、アビジン−ビオチン結合を利用した方法が好ましい。
かかる構造のリアクターアレイ1を用いることにより、リアクター2内に磁気ビーズ14を容易にかつ確実に配置することができる。一例として、該基板材料の下部に磁石を配置し、該基板材料上にDNA13を固定した磁気ビーズ14を分散させた分散液を滴下する。磁石及び磁性体板による磁力の作用により、リアクター12内へ磁気ビーズが誘引されることにより配置されやすくなる。さらに磁石を適宜基板に対し平行方向に動かすことで磁気ビーズ14が分散し、リアクター2内への充填率が向上する。磁石によりビーズ配置用基板に印加する磁場の強さは、所望の効果を得る上で、好ましくは100〜10000ガウスである。
また、磁石を取り除いた後も磁性体板の磁化は残るため、磁気ビーズ14は安定した配置を保持し続けることが可能となる。
充填率の観点から、リアクター2の直径又は一辺が磁気ビーズ14の直径又は一辺よりも若干広い方が好ましく、リアクター2の直径又は一辺は磁気ビーズの直径の1〜2倍であることがより好ましい。
また、1個のリアクター2に1個の磁気ビーズ14を充填する上で、リアクター2の深さは、磁気ビーズ14の直径の1〜2倍であることが好ましい。
また、一例として、固相担体1個当たり1種類の核酸であり、1個の固相担体に複数種類の核酸は固定されていない。その場合、1個のリアクターには1種類の核酸が用意され、合成されるタンパク質も1種類である。
変異DNAライブラリーとしては、Error−prone PCR(エラープローンPCR)を利用したライブラリー、Gene assembly mutagenesisを利用したライブラリー、Random insertion and deletion mutagenesisを利用したライブラリー、DNA shufflingを利用したライブラリー、Family shufflingを利用したライブラリー、Staggered Extension Process in vitro recombinationを利用したライブラリー、ITCHY Hybrid protein libraries、SCRATCHY Hybrid Protein Libraries、Sequence Homology−independent Protein Recombinationを利用したライブラリー等が挙げられる。
タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子6としては、タンパク質又はペプチド7中に存在するアミノ酸配列に親和性を有する分子が挙げられる。一例として、マルトース;グアニンヌクレオチド;ニッケル、コバルト等の金属イオン;グルタチオン;抗原等が挙げられる。
図1に示すように、工程(b)として一例として、基板15をリアクターアレイ1と重ね合わせる工程が挙げられる。また、基板15に替えて、オイル等を用いて密閉してもよい。
また、架橋が途中段階のPDMSでコートされたガラス基板を用いてもよい。架橋が途中段階のPDMSは、粘着性を有するため、リアクターアレイ1と重ね合わせることにより、リアクター2内の固相担体に固定されたDNAがPDMS上に凹版印刷される。これにより、後記工程(c)で合成・固定されるタンパク質又はペプチド7に対応する核酸を、位置情報を変更することなく、PDMS上にプリントすることができる。
更に、翻訳に必要な要素が独立に精製された因子のみからなる再構成型無細胞タンパク質合成系が挙げられる。再構成型無細胞タンパク質合成系は、従来の細胞抽出液を使用する場合よりもヌクレアーゼやプロテアーゼの混入を容易に防ぐことができるため、翻訳効率を高めることができる。
このような系を用いることにより、前記リアクター2内においてタンパク質又はペプチドが製造される。
また、簡便であることから、転写翻訳がカップルした系を用いてもよい。
ピューロマイシンリンカー20が、可逆的光連結性塩基を有する場合には、光照射によりリアクター2内に固定される。
一例として、工程(a)において、リアクターアレイ1のリアクター2に、必要な試薬や材料(核酸)を添加した後に、工程(b)において、リアクターアレイ1に封をし、密閉状態にする。工程(c)において、試薬を混ぜた先から、DNA→RNA→タンパク質又はペプチドの一連の転写/翻訳反応が進行し、さらに翻訳されたタンパク質又はペプチド7が、リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定されたタンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子6と結合する。
タンパク質又はペプチド7のリアクター2内への固定化の後、基材15又はオイルを除去して、リアクター2の密閉状態を解除することが好ましい。
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法は、
(a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、固相担体に固定されたDNAと無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記DNAからmRNAを転写し、前記核酸リンカーにハイブリダイズした前記mRNAからタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、、を有する。
以下、図2を参照しながら、本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法について具体的に説明する。図2において、図1の模式図に示されたものと同じ構成要素には、同一の符号を付して説明を省略する。
図2に示すように、ピューロマイシンリンカー20は、固相担体に固定されたDNA13を転写してなるRNA21とハイブリダイズし得る配列と、タンパク質又はペプチド7を捕捉するピューロマイシン誘導体20aを有する。
また、本実施形態に係る工程(a)では、固相担体に固定されたDNAを用いる。
図2に示すように、工程(b)として一例として、基板15をリアクターアレイ1と重ね合わせる工程が挙げられる。また、基板15に替えて、オイル等を用いて密閉してもよい。
前記工程(c)において、無細胞合成系9に用いられる核酸がDNA13であり、無細胞転写系もしくは無細胞転写翻訳系中のRNAポリメラーゼを用いて前記DNA13からRNA21を転写する工程が含まれる。RNA21は、DNA13から、RNAポリメラーゼにより転写させることにより得られる。RNAポリメラーゼとしては、例えばT7RNAポリメラーゼが挙げられる。
ピューロマイシンリンカー20が、可逆的光連結性塩基を有する場合には、光照射を行い、リアクター2内にピューロマイシンリンカー20−RNA21複合体を固定することが好ましい。
次いで、第1実施形態における工程(c)と同様に無細胞翻訳系により、ピューロマイシンリンカー20−RNA21複合体からタンパク質又はペプチド7の合成が行われ、合成されたタンパク質又はペプチド7が、リアクター内の壁面2a及び底面2bの少なくとも一部に固定されたピューロマイシンリンカー20と結合し、ピューロマイシンリンカー20−RNA21−タンパク質又はペプチド7複合体がリアクター2内に固定される。
タンパク質又はペプチド7のリアクター2内への固定化の後、基板15又はオイルを除去して、リアクター2の密閉状態を解除することが好ましい。
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法は、
(a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、DNAと無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記DNAからmRNAを転写し、前記核酸リンカーにハイブリダイズした前記mRNAからタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、を有する。
以下、図3を参照しながら、本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法について具体的に説明する。図3において、図1及び図2の模式図に示されたものと同じ構成要素には、同一の符号を付して説明を省略する。
リアクターにDNAを分配する方法は固相担体を用いる方法に限られず、1ウェル1分子になるようにDNAを限界希釈してリアクターに展開する方法等が挙げられる。
また、第1〜2実施形態と同様に、リアクターに配置した核酸の情報を予め得ておく必要がない。
本実施形態の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法は、(d)上述した製造方法を用いて製造されたタンパクアレイ又はペプチドアレイを用いて、機能性スクリーニングを行い、リアクターを特定する工程を有する。
以下、図1を参照しながら、本実施形態の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法について具体的に説明する。
機能性スクリーニング方法としては、リアクターアレイ上のリアクターから所望の特性を有するタンパク質を有するリアクターを特定するためのものであれば特に限定されない。
一例として、リアクター2内にタンパク質又はペプチド7及び核酸を保持したままリアクター2内の無細胞質合成系9を除去し、洗浄し、リアクター2内をタンパク質機能評価溶液で満たすことが好ましい。
次いで、基板15又はオイル等でリアクターを封止し、各リアクターを独立させ、タンパク質機能評価反応を行い、目的とする機能を有するタンパク質又はペプチドが固定化されているリアクターを特定することが好ましい。
工程(e)を有することにより、工程(d)において機能性スクリーニングの後に、特定したリアクター2に固定されたタンパク質又はペプチド7を同定することができ、リアクター2に配置した核酸の情報を予め得ておく必要がない。
また、リアクター2内に固定されたタンパク質又はペプチド7以外の夾雑物を取り除き、工程(d)に係る機能性スクリーニングの精度を高める観点からも、本実施形態において、工程(d)の前に核酸を回収する工程(e)を有することが好ましい。
また、工程(f)に替えて、特定されたリアクターに固定されたタンパク質又はペプチドを、プロテアーゼを用いてペプチド分解し、分解されたペプチドをマススペクトルにより分析して、タンパク質又はペプチドの同定をしてもよい。
以下、図2を参照しながら、本実施形態の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法について具体的に説明する。
本実施形態において、工程d)は、上述した第2実施形態の製造方法により得られたタンパクアレイ又はペプチドアレイを用いて、リアクター2内に固定された前記タンパク質又はペプチド7に対して、機能性スクリーニングを行い、リアクターを特定する工程である。
他の工程については、第1実施形態と同様であるため説明を省略する。
以下、図3を参照しながら、本実施形態の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法について具体的に説明する。
本実施形態において、工程(d)は、上述した第3実施形態の製造方法により得られたタンパクアレイ又はペプチドアレイを用いて、リアクター2内に固定された前記タンパク質又はペプチド7に対して、機能性スクリーニングを行い、リアクターを特定する工程である。
他の工程については、第1〜2実施形態と同様であるため説明を省略する。
[第1実施形態]
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、前記リアクター内に配置された、固相担体に固定された核酸及び該核酸にコードされるタンパク質又はペプチドと、を有するものである。
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記タンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を有する。
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、前記リアクター内に配置された、固相担体に固定されたDNA及び該DNAにコードされるタンパク質又はペプチドと、を有するものである。
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記DNAから合成されるmRNA及びタンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを有する。
本実施形態のタンパク質アレイ又はペプチドアレイは、特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、前記リアクター内に配置された、DNA及び該DNAにコードされるタンパク質又はペプチドと、を有するものである。
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記DNAから合成されるmRNA及びタンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを有する。
本実施形態の機能性タンパク質又は機能性ペプチド同定キットは、上述した第1実施形態の≪タンパク質アレイ又はペプチドアレイ≫と、前記固相担体との親和性を有する基板と、を備える。
≪機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法≫の第1実施形態で述べたように、固相担体との親和性を有する基板をリアクターアレイと重ね合わせることにより、核酸を前記基板上にプリントすることができる。
石英ガラスを濃硫酸(15.5%)・ 過酸化水素水(15.5%)混合液に浸漬し、200℃で15分間置き、石英ガラスをSPM洗浄した。超純水でリンス後、窒素ブローで石英ガラスを乾燥させた(図4(a)参照)。
スパッタリング装置(Cannon ANELVA SPF−430H)を用いて、Ar気流下で石英ガラスへCrをスパッタし、石英ガラス上へ厚さ約4μmの薄膜を形成した(図4(b)参照)。
次いで、ポジ型フォトレジスト AZP1350をCr薄膜上にスピンコートして、100℃90秒プリべイクし、フォトレジスト膜を形成した(図4(c)参照)。
次いで、紫外線露光装置マスクアライナー(Double−View Mask Aligner PEM−800, union)を用いて、マスクパターンを介してUV露光した(図4(d)参照)。
次いで、AZ Ddeveloperを用いて 60秒間現像し、超純水で洗浄後N2ドライし、120℃2minポストベイクし、パターンの現像をした(図4(e)参照)。
次いで、Crエッチング溶液(硝酸二アンモニウムセリウム 65.8g, 過塩素酸17.2ml, 超純水 400ml)を用いてCr薄膜のパターンエッチングを行った(図4(f)参照)。超純水に浸漬後、窒素ブローで乾燥させた。
次いで、アセトンに浸漬後、5分間超音波洗浄後してフォトレジストを除去し、窒素ブローで乾燥させた(図4(g)参照)。
次いで、C4F8/SF6プラズマを用いて、深さ60μmまで石英をドライエッチングした(図4(h)参照)。
次いで、Crエッチング溶液に240min浸漬し、石英ガラスを濃硫酸(46.5%) 過酸化水素水(15.5%)混合液に浸漬し、200℃で15分間置いてCr薄膜を除去した後、超純水でリンスし、深さ60μm、直径140μmのリアクターを有する石英ガラスリアクターを作製した(図4(i)参照)。
SPM洗浄した石英ガラスリアクターを1%3−アミノプルトリエトキシシラン(以下、APTESともいう。)水溶液に浸し、90℃60分反応させた。エタノールと超純水で洗浄した後、110℃で1分間キュアリングし、石英ガラスリアクターをアミノ基で修飾した(図5工程(B1)参照)。
次いで、石英ガラスリアクターを12.5%グルタルアルデヒド水溶液に60℃60分間浸し、アルデヒド修飾を行った(図5工程(B2)参照)。
次いで、石英ガラスリアクターをN−(5−Amino−1−carboxypentyl)iminodiacetic acid(AB−NTA)2mg/mlに60℃60分間浸し、NTA修飾を行った(図5工程(B3)参照)。
次いで、石英ガラスリアクターを14mg/ml L−Lysine に室温で60分間浸して、未反応アルデヒド基をブロッキングした。
次いで、10mg/ml NiSO4・6H2Oに60分間浸して、Niイオンを付加し、超純水で洗浄後、窒素ブローで乾燥させた(図5工程(B4)参照)。
配列番号1に記載のBGLおよびHisTagをコードしたDNA(1687bp)20ng、Fluorotect (Promega社)5μl、及び無細胞転写・翻訳システム(TNT(登録商標)Coupled Wheatgerm Extract System,Promega社)50μlを混合し、無細胞転写翻訳溶液を得た。
Ni−NTA修飾石英ガラスリアクター上に、上記無細胞転写翻訳溶液50μlを滴下し、この滴下表面に、プレス機を用いて、PDMS(東レ・ダウコーニング社)コートガラスを、30℃2時間圧着させた。
次いで、PDMSコートガラスを除去し、このリアクターを有する石英ガラスリアクターを0.1%(v/v)のTweem20を含むリン酸緩衝液で5分間洗浄した。洗浄後のガラスリアクター上に1xPBSを滴下し、カバーガラスを載せて共焦点レーザースキャン顕微鏡観察(Ex:488nm, Em:515BP30nm)を行った。共焦点レーザースキャン顕微鏡観察(Ex:488nm, Em:515BP30nm)を図6に示す。図6に示すように、石英ガラスリアクター上へのBGLの固定化を確認した。
これを30℃で保持し、共焦点レーザースキャン顕微鏡で経時観察した(Ex:561nm, Em:590BP40nm)。
酵素反応後の共焦点顕微鏡観察像を図7に示す。図6で示したBGLの固定が確認されているリアクター中に酵素反応の結果生じる蛍光が時間依存的に観察された。
図8に示すように、BGLを固定化したガラスマイクロウェルモールドでは、蛍光強度の上昇が時間依存的に上昇していることが観察された。
この結果から固定されたBGLが評価可能な酵素活性を有していることが確認された。
ガラスリアクターに磁気ビーズを配置した。次いで、ガラスリアクターに、架橋が途中段階のPDMS(東レ・ダウコーニング社)コートガラスをPDMS面がガラスリアクターと接する様に重ね合わせた。次いで、PDMS(東レ・ダウコーニング社)コートガラスをガラスリアクターから剥がした(図9参照)。
結果を図10に示す。(a)はガラスリアクターの顕微鏡像であり、(b)はPDMSの顕微鏡像である。(a)に示すように、ガラスリアクター内の磁気ビーズは消失した一方、(b)に示すようにPDMS上に磁気ビーズがガラスリアクターに応じて回収されていることが確認された。また、図10に示すように、複数のリアクターを有するリアクターアレイを用いた場合には、磁気ビーズはリアクターアレイの配列と対応してPDMS上に配置される。このことから、PDMS上の磁気ビーズに固定された核酸とリアクター内に固定されたタンパク質との位置関係が確認できる(番地付け)。また、PDMS上の磁気ビーズは再利用することができる。
Claims (15)
- (a)特定の開口形状を有したリアクターからなり、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に、タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を備えたリアクターアレイにおいて、前記リアクター内に、固相担体に固定された核酸と無細胞合成系を用意する工程と、
(c)前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記核酸からタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程と、
を有することを特徴とするタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。 - 前記固相担体に固定された核酸は、前記固相担体1個当たり1種類の核酸である請求項1に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。
- 前記固相担体は磁気ビーズである請求項1又は2に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。
- 前記タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子は、前記タンパク質又はペプチド中に存在するアミノ酸配列に親和性を有する分子である請求項1〜3のいずれか一項に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。
- 前記タンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子はタンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーであり、
前記リアクター内において、前記無細胞合成系を用いて前記DNAからmRNAを転写し、前記核酸リンカーにハイブリダイズした前記mRNAからタンパク質又はペプチドを合成し、前記タンパク質又はペプチドを前記リアクター内に固定する工程を有する請求項1〜4のいずれか一項に記載に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。 - 更に、(b)前記工程(a)と(c)の間に、前記リアクターを密閉する工程を有する請求項1〜5のいずれか一項に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイの製造方法を用いて製造されたことを特徴とするタンパク質アレイ又はペプチドアレイ。
- (d)請求項7に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイを用いて、機能性スクリーニングを行い、リアクターを特定する工程を有することを特徴とする機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法。
- 更に、(e)前記リアクター内の核酸を回収する工程を有する請求項8に記載の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法。
- 前記工程(e)は、固相担体との親和性を有する基板を前記リアクターアレイと重ね合わせることにより、核酸を前記基板上にプリントする工程である請求項9に記載の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法。
- 前記工程(e)は、光照射により前記リアクター内の核酸を回収する工程である請求項9に記載の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法。
- 更に、(f)前記工程(d)で特定されたリアクターに対応する核酸の塩基配列を解析する工程を有する請求項8〜11のいずれか一項に記載の機能性タンパク質又は機能性ペプチドの同定方法。
- 特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、
前記リアクター内に配置された、固相担体に固定された核酸及び該核酸にコードされるタンパク質又はペプチドと、を有し、
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記タンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質捕捉分子又はペプチド捕捉分子を有すること特徴とするタンパク質アレイ又はペプチドアレイ。 - 特定の開口形状を有したリアクターからなるリアクターアレイと、
前記リアクター内に配置された、DNA及び該DNAにコードされるタンパク質又はペプチドと、を有し、
前記リアクターは、該リアクター内の壁面及び底面の少なくとも一部に固定された、前記DNAから合成されるmRNA及びタンパク質又はペプチドを捕捉するタンパク質連結部分又はペプチド連結部分を有する核酸リンカーを有すること特徴とするタンパク質アレイ又はペプチドアレイ。 - 請求項13に記載のタンパク質アレイ又はペプチドアレイと、前記固相担体との親和性を有する基板と、を備えたことを特徴とする機能性タンパク質又は機能性ペプチド同定キット。
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