JPWO2014017493A1 - ワクチン - Google Patents
ワクチン Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2014017493A1 JPWO2014017493A1 JP2014526942A JP2014526942A JPWO2014017493A1 JP WO2014017493 A1 JPWO2014017493 A1 JP WO2014017493A1 JP 2014526942 A JP2014526942 A JP 2014526942A JP 2014526942 A JP2014526942 A JP 2014526942A JP WO2014017493 A1 JPWO2014017493 A1 JP WO2014017493A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- virus
- nucleic acid
- protein
- acid sequence
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 89
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 123
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 65
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 54
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 42
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 claims abstract description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 142
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 121
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 72
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 71
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 65
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 37
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 claims description 30
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 29
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 claims description 28
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 claims description 28
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 27
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 18
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 18
- 241001136816 Bombus <genus> Species 0.000 claims description 13
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 6
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 claims description 3
- 108700008783 Hepatitis C virus E1 Proteins 0.000 claims 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 claims 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 claims 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 86
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 82
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 82
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 82
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 82
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 74
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 68
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 57
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 54
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 51
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 41
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 38
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 37
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 37
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 37
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 25
- 238000013461 design Methods 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 24
- 241001641732 Aythya fuligula Species 0.000 description 22
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 22
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 22
- 238000011161 development Methods 0.000 description 22
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 22
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 21
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 19
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 17
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 16
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 15
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 15
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 14
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 14
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 13
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 13
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 12
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 12
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 11
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 description 8
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 8
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 7
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241001279686 Allium moly Species 0.000 description 6
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 101710201734 E3 protein Proteins 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 3
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 208000004739 Egg Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 2
- 229940124868 Japanese encephalitis virus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 2
- 229940124861 Rabies virus vaccine Drugs 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N Arg-Glu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NXDXECQFKHXHAM-HJGDQZAQSA-N Arg-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NXDXECQFKHXHAM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 241000191386 Bombax Species 0.000 description 1
- 241000255791 Bombyx Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000256054 Culex <genus> Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N FLAG peptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 108700039791 Hepatitis C virus nucleocapsid Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 1
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- JWGNVPPLJRNLOQ-UHFFFAOYSA-O O=C1NC(NC(NC2=O)=[S+]C3=CC=CC=C3)=C2N1 Chemical compound O=C1NC(NC(NC2=O)=[S+]C3=CC=CC=C3)=C2N1 JWGNVPPLJRNLOQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710132593 Protein E2 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 201000006449 West Nile encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005200 bud stage Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011257 definitive treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 201000010860 egg allergy Diseases 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 1
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229940124737 hepatitis-C vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
- A01K67/0333—Genetically modified invertebrates, e.g. transgenic, polyploid
- A01K67/0335—Genetically modified worms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/70—Invertebrates
- A01K2227/703—Worms, e.g. Caenorhabdities elegans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/00041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/00043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32111—Aphthovirus, e.g. footandmouth disease virus
- C12N2770/32134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/026—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a baculovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
このように、これまでの発育鶏卵を使用するワクチン生産の技術には、コスト、生産量の限界があり、さらに、有効成分のHAだけでの生産には、コストと精製技術の大きな問題がある。これを乗り越えるためには、新たなHAタンパク質の量産技術が必要である。
[1]ウイルスに対するワクチンをボンビュクス・モリ(Bombyx mori)で産生するための、ボンビュクス・モリにおける発現にコドン最適化された該ウイルスの核酸配列を含む核酸、
[2]ウイルスが、インフルエンザウイルス、C型肝炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、西ナイルウイルス、MERSコロナウイルス、および口蹄疫ウイルスからなる群より選択される、[1]に記載の核酸、
[3]ウイルスが、A型インフルエンザウイルスである、[2]に記載の核酸、
[4]ウイルスが、H5型およびH7型からなる群より選択される、[3]に記載の核酸、
[5]核酸配列が、インフルエンザウイルスのHAタンパク質をコードする、[4]に記載の核酸、
[6]核酸配列が、弱毒化遺伝子改変を有する、[5]に記載の核酸、
[7]核酸配列が、配列番号4、配列番号12、配列番号18からなる群より選択される核酸配列である、[1]〜[6]のいずれかに記載の核酸、
[8]ウイルスが、C型肝炎ウイルスである、[2]に記載の核酸、
[9]核酸配列が、C型肝炎ウイルスのE1タンパク質、E2タンパク質および/または核タンパク質をコードする、[8]に記載の核酸、
[10]核酸配列が、C型肝炎ウイルスのE1タンパク質、E2タンパク質および核タンパク質をコードする、[8]に記載の核酸、
[11]核酸配列が、配列番号15である、[10]に記載の核酸、
[12]核酸配列が、配列番号4、12、15、18、21、24、27、30、または33である、[2]に記載の核酸、
[13][1]〜[12]のいずれかに記載の核酸を含む、ベクター、
[14][13]に記載のベクターを用いて産生された組み換え体バキュロウイルス、
[15][1]〜[12]のいずれかに記載の核酸、[13]に記載のベクター、または[14]に記載の組み換え体バキュロウイルスを含む、ボンビュクス・モリ、
[16][1]〜[12]のいずれかに記載の核酸がコードするアミノ酸配列からなる、ポリペプチド、
[17][1]〜[12]のいずれかに記載の核酸、[13]に記載のベクター、[14]に記載の組み換え体バキュロウイルス、または[15]に記載のボンビュクス・モリを使用する、ワクチンの生産方法、
[18]以下の工程:
1)[1]〜[12]のいずれかに記載の核酸、[13]に記載のベクター、または[14]に記載の組み換え体バキュロウイルスを得る工程
2)[1]〜[12]のいずれかに記載の核酸、[13]に記載のベクター、または[14]に記載の組み換え体バキュロウイルスをボンビュクス・モリに導入する工程;および
3)ボンビュクス・モリからタンパク質を回収する工程
を含む、[17]に記載のワクチンの生産方法、
[19]ウイルスの感染に対する、動物のワクチン接種のための、[16]に記載のポリペプチドを含むか、または[17]もしくは[18]に記載の生産方法に従って生産される、ワクチン、
[20]ウイルス様粒子構造である、[19]に記載のワクチン、
[21]ウイルス様粒子構造の直径が50nm〜150nmである、[20]に記載のワクチン、
[22]ウイルスの感染に対するワクチンを、動物に接種する方法であって、[16]に記載のポリペプチドを含むかまたは[17]もしくは[18]に記載の生産方法に従って生産されるワクチンの有効量を、前記動物に投与することを含む方法、
[23]ウイルスに対する免疫応答を、動物に誘導する方法であって、[16]に記載のポリペプチドを含むかまたは[17]もしくは[18]に記載の生産方法により生産されるワクチンの有効量を、前記動物に投与することを含む方法
である。
1)本発明に係る核酸またはベクターを得る工程
2)本発明に係る核酸、ベクター、または組み換え体バキュロウイルスをボンビュクス・モリに導入する工程;および
3)ボンビュクス・モリからタンパク質を回収する工程
を含む。
2011年に野生のカモで発見された高病原性トリインフルエンザウイルス A/tufted duck/Fukushima/16/2011(H5N1)のHA遺伝子情報を次のように設計変更した。
上記設計したコドン最適化HA遺伝子の配列情報を基に、DNAの全合成をタカラバイオ株式会社に依頼した。合成したコドン最適化HA遺伝子DNAをトランスファーベクターであるpBm−8(バキュロテクノロジー社製)にIn−Fusion法(クロンテック社)を用いて挿入し、pBm−8HAを作製した。
pBm−8HAとバキュロウイルスより抽出したDNAとをボンビュクス・モリ細胞に同時に導入することにより、細胞上清中にワクチン生産用の組換え体バキュロウイルスを得た。この組換え体バキュロウイルスを、ボンビュクス・モリの蛹に接種した。すなわち、ウイルス力価1×108pfu/ml以上のウイルス原液を昆虫細胞用培地 TC−100で10倍に希釈した。この希釈液50μlを脱皮2日目のボンビュクス・モリの蛹腹部に注射により接種し、その後、蛹を26℃のインキュベーターで飼育した。72時間後、氷上で蛹をハサミにより半分に切り開き中腸をピンセットで取り除いた後、ポッター型ホモジナイザーを用い、フェニールチオ尿酸含有PBS中で破砕乳化した。乳化液にPBSを50mlになるように加え、さらに最終0.01%になるようホルマリンを5μl加えてボンビュクス・モリの蛹乳剤を得た。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤をソニケーター(UR−20P、トミー精工製)で5分間超音波処理し、これに固定ニワトリ赤血球を加えてHAタンパク質を回収した。さらにDEAEイオン交換クロマトグラフで精製することにより、タンパク質レベルで、95%以上に精製することができた。精製タンパク質を、ウェスタンブロッティング(1次抗体:抗FLAGマウスモノクローナル抗体、2次抗体:抗マウスIgGウサギポリクローナル抗体)により発現を確認した。図6に示す様に、65kDa付近にバンドが確認された。
インフルエンザウイルスは様々な動物の赤血球と混和すると凝集する性質があり、これは赤血球凝集反応と呼ばれ、ウイルス表面のヘマグルチニン(Haemagglutinin:HA)が赤血球の糖鎖と結合し、複数の赤血球同士を架橋させて大きな凝集体を作ることによる。この性質を利用して、ウイルスを階段希釈したときにどこまで凝集するかを調べることで、原液に含まれるウイルス濃度(HA活性)を算出できるため、インフルエンザウイルスの定量に用いられる。具体的には、96穴のマイクロプレートを用いて、被検体50μlをPBS(リン酸緩衝生理食塩水)50μlで階段希釈した後に、0.5%に調整したニワトリ赤血球を等量加えてよく混和し、30分〜60分間室温に静置する。被検体にHA活性があれば赤血球と凝集塊を形成するが、ウイルスが存在しない場合は、凝集塊ができず、プレートの底に日の丸のように沈んでしまう。この日の丸が形成される前の希釈点の倍率を以て、HA凝集活性としてのHA価を表現する。
得られたHAタンパク質溶液を上記条件で評価した。その結果、HA活性は2,097,152のHA活性を示した。その結果、30頭のボンビュクス・モリ蛹で産生された総HA活性は、2,097,152×50ml=104,857,600となり、蛹1頭当たりのHA活性量は3,495,253となった。組換え体のボンビュクス・モリ1頭のHA活性量のこの値は、1998年にヒト由来の高病原性トリインフルエンザウイルスA/HK/483/97(H5N1)のHA遺伝子をボンビュクス・モリで発現させた時のボンビュクス・モリ1頭の307,160のHA活性のおよそ11.4倍となり、さらに1個の発育鶏卵から産生されるHA活性10,240の、およそ340倍という驚異的なHA活性量の増大ということになる。
上記のHAタンパク質溶液を用いて、ニワトリを免疫化した。HA活性を4,096〜8,192の間に調整した0.5mlのHAタンパク質溶液を、16日間隔で2回、ニワトリに脚部筋肉接種した。初回接種から33日後、40日後、47日後、および50日後にニワトリから5mlずつ採血した。
上記ニワトリ血液をそれぞれ、室温で放置し、その後室温で遠心分離することにより、ニワトリ血清を得た。各々のニワトリ血清の赤血球凝集抑制活性(HI活性)を、以下の方法で検討した。まず、96ウェルプレートを用い、各ウェル25μlを含む、血清の1/2段階希釈列を作製した。次に、各ウェルに25μlの上記HAタンパク質(PBSで8HAに調製したもの)を加えた。プレートを室温で30分間静置後、0.5%/PBSのニワトリ赤血球50μlを各ウェルに加えた。1時間後に、赤血球凝集パターンを観察し、赤血球の凝集がみられる最大の希釈倍率を、HI活性値とした。初回接種後33日後の血清は、8,192のHI活性を示した。
また、初回接種40日後のニワトリ血清を用いて、種々のインフルエンザウイルスに対するHI活性の有無を検討した。A/chicken/Legok/2004(H5N1)、A/chicken/West Java/2009(H5N1)の各ウイルスを用いて、上記と同様の条件でHI活性を測定した。結果を図7に示す。ニワトリ血清は、全てのウイルスに対して、HI活性を示した。
また、HAタンパク質溶液を、ショ糖密度勾配法により分画した。各分画液のHA活性を、上記と同様の方法で検討した。その結果を図8に示す。天然のウイルスの1.18g/lの浮遊密度である分画4はHA活性を示さなかった。一方、より小さい浮遊密度を示す分画7〜9において、HA活性が認められた。
上記のショ糖密度勾配の分画7を、電子顕微鏡で観察した。その結果を図9に示す。スパイクを有する球形で、粒子径が60nm〜120nmであるウイルス粒子様構造が認められた。天然のウイルスは、原則として60〜150nmの球形、100〜1000nmの細長い繊維状、又、80〜200nmの環状の形態をしている。これに対し、ボンビュクス・モリ由来のHAタンパク質は図10に示すように、天然ウイルス同様に多彩な形態を示し、球形のものは60〜150nm、繊維状が200nm前後、そして環状が60〜150nmの形をしていることが本研究で初めて明らかになった。この形態学特徴が、HAタンパク質の、これまでに見られなかった上記強い免疫力に反映されていると考えられる。
結論としては、この度の、設計変更をしたDNAによる、ボンビュクス・モリを利用したワクチン生産の意義の第一は、ボンビュクス・モリの蛹1頭で、発育鶏卵340個分のワクチン量を生産することである。
そこで、本発明者らは、C型肝炎ウイルスワクチンを開発するために、C型肝炎ウイルスの核(Core)タンパク質−E1タンパク質−E2タンパク質の融合タンパク質発現のための遺伝子情報を設計した。ここで融合タンパク質を設計したのは、同時に発現させることによりウイルス粒子様タンパク質が合成できることを期待したからであった。まず、GenbankにAccession No.ACK28185で登録されているHCV遺伝子のアミノ酸配列中の、Coreタンパク質から、E1タンパク質、E2タンパク質までのアミノ酸配列(配列番号13)に、FLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる融合タンパク質のアミノ酸配列を得た(配列番号14)。この融合タンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、コドン最適化Core−E1−E2融合タンパク質の核酸配列を設計した(配列番号15)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図12に示す。
設計したコドン最適化Core−E1−E2融合タンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8Core−E1−E2を作成した。
実施例1と同様にしてpBm−8Core−E1−E2を用いてバキュロウイルス組み換え体を得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得た。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤をソニケーター(UR−20P、トミー精工製)で5分間超音波処理後、蔗糖密度勾配遠心法(蔗糖濃度10−50%、100,000G、24時間)により、Core−E1−E2融合タンパク質を精製した。精製したCore−E1−E2融合タンパク質を実施例1と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認した。図13に示す様に、60kDa付近にバンドが確認された。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
Core−E1−E2融合タンパク質が連結して発現したとすると83kダルトン以上の分子量を示すことが予想され、従って60kダルトンの分子サイズは Core−E1−E2が細胞内でプロテアーゼによるプロセッシングを受け成熟したE2が合成されたことが示唆された。この事実は、紛れもなくDNAで設計したワクチン用タンパク質が寸分の違いもなく産生されたことを示すもので、タンパクのバンドの濃さから見ても、C型肝炎用ワクチンが効率よく合成されたことが示唆された。
そこで、本発明者らは、日本脳炎ウイルスワクチンを開発するために、日本脳炎ウイルスのEタンパク質発現のための遺伝子情報を設計した。まず、GenbankにAccession No.ABQ52691で登録されているアミノ酸配列中のpreMタンパク質から、Mタンパク質、Eタンパク質までのアミノ酸配列(配列番号19)にFLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる日本脳炎ウイルスPreM−M−E融合タンパク質のアミノ酸配列を得た(配列番号20)。この日本脳炎ウイルスPreM−M−E融合タンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、日本脳炎ウイルスコドン最適化PreM−M−E融合タンパク質の核酸配列を設計した(配列番号21)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図16に示す。
設計した日本脳炎コドン最適化PreM−M−E融合タンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8JevpMMEを作成する。
実施例1と同様にしてpBm−8JevpMMEを用いて組み換え体バキュロウイルスを得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得る。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤を実施例3と同様に超音波処理し、精製する。精製した日本脳炎ウイルスEタンパク質を実施例3と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認した(図17)。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
そこで、本発明者らは、狂犬病ウイルスワクチンを開発するために、狂犬病ウイルスのGタンパク質発現のための遺伝子情報を設計する。まず、GenbankにAccession No.ABX46657で登録されているアミノ酸配列(配列番号22)にFLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる狂犬病ウイルスGタンパク質のアミノ酸配列を得た(配列番号23)。この狂犬病ウイルスGタンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、狂犬病ウイルスコドン最適化Gタンパク質の核酸配列を設計した(配列番号24)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図18に示す。
設計した狂犬病ウイルスコドン最適化Gタンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8rvGを作成する。
実施例1と同様にしてpBm−8rvGを用いてバキュロウイルス組み換え体を得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得る。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤を実施例3と同様に超音波処理し生成する。精製した狂犬病ウイルスGタンパク質を実施例3と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認する。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
そこで、本発明者らは、西ナイルウイルスワクチンを開発するために、西ナイルウイルスのPreM−M−E融合タンパク質発現のための遺伝子情報を設計する。まず、GenbankにAccession No.AAT95390で登録されているアミノ酸配列中のpreMタンパク質から、Mタンパク質、Eタンパク質までのアミノ酸配列(配列番号25)にFLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる西ナイルウイルスPreM−M−E融合タンパク質のアミノ酸配列を得た(配列番号26)。この西ナイルウイルスPreM−M−E融合タンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、西ナイルウイルスコドン最適化PreM−M−E融合タンパク質の核酸配列を設計した(配列番号27)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図19に示す。
設計した西ナイルウイルスコドン最適化PreM−M−E融合タンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8wnvpMMEを作成する。
実施例1と同様にしてpBm−8wnvpMMEを用いてバキュロウイルス組み換え体を得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得る。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤を実施例3と同様に超音波処理し生成した。精製した西ナイルウイルスPreM−M−E融合タンパク質を実施例3と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認する。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
本発明者らは、MERSコロナウイルスワクチンを開発するために、MERSコロナウイルスのSタンパク質発現のための遺伝子情報を設計する。まず、GenbankにAccession No.AGN52936で登録されているアミノ酸配列(配列番号28)にFLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる西ナイルウイルスEタンパク質のアミノ酸配列を得た(配列番号29)。このMERSコロナウイルスSタンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、MERSコロナウイルスコドン最適化Sタンパク質の核酸配列を設計した(配列番号30)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図20に示す。
設計したMERSコロナウイルスコドン最適化Sタンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8mcvSを作成する。
実施例1と同様にしてpBm−8mcvSを用いてバキュロウイルス組み換え体を得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得る。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤を実施例3と同様に超音波処理し生成した。精製したMERSコロナウイルスSタンパク質を実施例3と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認する。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
本発明者らは、口蹄疫ウイルスワクチンを開発するために、口蹄疫ウイルスのVP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質発現のための遺伝子情報を設計する。まず、GenbankにAccession No.HV940030で登録されている核酸配列から予想される、アミノ酸配列中のVP4、Vp2、VP1、2A、3Cタンパク質のアミノ酸配列をN末端側からC末端側にむけて結合したアミノ酸配列(配列番号31)にFLAGタグ配列(配列番号5)を付加して、核酸設計の基となる口蹄疫ウイルスのアミノ酸配列を得た(配列番号32)。この口蹄疫ウイルスVP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質のアミノ酸配列を基に、実施例1と同様にして、口蹄疫ウイルスコドン最適化VP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質の核酸配列を設計した(配列番号33)。設計したキメラ合成DNAの核酸配列とアミノ酸配列の対応を図21に示す。
設計した口蹄疫ウイルスコドン最適化VP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質遺伝子の核酸配列を基に、実施例1と同様に全長遺伝子DNAを合成し、pBm−8ベクターに挿入し、pBM−8fmdvPを作成する。
実施例1と同様にしてpBm−8fmdvPを用いてバキュロウイルス組み換え体を得、ボンビュクス・モリの蛹に接種し、ボンビュクス・モリ蛹乳剤を得る。
得られたボンビュクス・モリの蛹乳剤を実施例3と同様に超音波処理し生成した。精製した口蹄疫ウイルスVP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質を実施例3と同様にウェスタンブロッティングによって発現を確認する。
タンパクの生産量より、免疫反応が予想でき、これによって産生された抗体による中和試験での効果を推定する。
1)危険なウイルスを取り扱うことなく、人工合成したDNAを用いることで危険なウイルス由来のタンパク質も得られる。(P4やP3施設を必要とせず、危険なウイルスを取り扱わないので、ウイルスが人に感染したり衣服に付着したりすることで外部に漏れ出る可能性は無く、安全である)。
2)最初から、バイオインフォマティクスに基づき、病原性の低いアミノ酸配列を設計できること。
3)最初から、バイオインフォマティクスおよび進化解析により、将来のアミノ酸変異を予測し設計できること。
4)アミノ酸配列より遺伝子配列を求めており、アミノ酸配列では、例えばHAタンパク質においては、強毒部位とFLAGタグを除いては、元のアミノ酸配列と全く同じであるが、遺伝子配列にすると、そのホモロジーは77%に過ぎない(例えば図5参照)ため、ウイルス遺伝子とは容易に区別が可能である。
5)C末にFLAGタグ配列をつけているため、万一、ウイルスが細胞に感染したとしても、ウイルスのRNPあるいはM1タンパクと相互作用することはないので安全性が高い。
6)ボンビュクス・モリ細胞に最適化したCodon Usageを用いて遺伝子配列を人工的に設計し、ベクターに組み込んでいるため、ボンビュクス・モリ細胞での発現量が、ウイルス遺伝子由来の配列を用いたものより顕著に高い発現量となり、かつ、抗原性は元のウイルスと全く同じである。
7)ボンビュクス・モリ細胞を用いているため、糖鎖構造は複雑でなく、糖鎖による抗原性のマスキング作用は非常に弱い。そのため、ワクチンとしての抗体価上昇は、鶏卵で増殖させたウイルス由来の精製HAタンパク質の340倍の活性量と、遥かに高い結果となった。
8)FLAGタグを用いることで、発現の確認や精製が容易となる。
配列番号2:A/tufted duck/Fukushima/16/2011(H5N1) トリインフルエンザウイルスのHAアミノ酸配列
配列番号3:A/tufted duck/Fukushima/16/2011(H5N1)トリインフルエンザウイルスの改変HAアミノ酸配列
配列番号4:A/tufted duck/Fukushima/16/2011(H5N1)トリインフルエンザウイルスのコドン最適化HA遺伝子DNA配列
配列番号5:FLAGタグアミノ酸配列
配列番号6:FLAGタグDNA配列
配列番号7:高病原性アミノ酸配列
配列番号8:低病原性アミノ酸配列
配列番号9:A/chicken/Sukabumi/2008(H5N1)トリインフルエンザウイルスのHA遺伝子DNA配列
配列番号10:A/chicken/Sukabumi/2008(H5N1)トリインフルエンザウイルスのHAアミノ酸配列
配列番号11:A/chicken/Sukabumi/2008(H5N1)トリインフルエンザウイルスの改変HAアミノ酸配列
配列番号12:A/chicken/Sukabumi/2008(H5N1)トリインフルエンザウイルスのコドン最適化HA遺伝子DNA配列
配列番号13:C型肝炎ウイルスのCore−E1−E2融合タンパク質アミノ酸配列
配列番号14:C型肝炎ウイルスの改変Core−E1−E2融合タンパク質アミノ酸配列
配列番号15:C型肝炎ウイルスのコドン最適化Core−E1−E2遺伝子DNA配列
配列番号16:A/Shanghai/02/2013(H7N9)インフルエンザウイルスのHAアミノ酸配列
配列番号17:A/Shanghai/02/2013(H7N9)インフルエンザウイルスの改変HAアミノ酸配
配列番号18:A/Shanghai/02/2013(H7N9)インフルエンザウイルスのコドン最適化HA遺伝子DNA配列
配列番号19:日本脳炎ウイルスのPreM−M−E融合タンパク質アミノ酸配列
配列番号20:日本脳炎ウイルスのPreM−M−E融合タンパク質+FLAGタグアミノ酸配列
配列番号21:日本脳炎ウイルスコドン最適化PreM−M−E融合タンパク質遺伝子DNA配列
配列番号22:狂犬病ウイルスのGタンパク質アミノ酸配列
配列番号23:狂犬病ウイルスのGタンパク質+FLAGタグアミノ酸配列
配列番号24:狂犬病ウイルスコドン最適化Gタンパク質遺伝子DNA配列
配列番号25:西ナイルウイルスのPreM−M−E融合タンパク質アミノ酸配列
配列番号26:西ナイルウイルスのPreM−M−E融合タンパク質+FLAGタグアミノ酸配列
配列番号27:西ナイルウイルスコドン最適化PreM−M−E融合タンパク質遺伝子DNA配列
配列番号28:MERSコロナウイルスのSタンパク質アミノ酸配列
配列番号29:MERSコロナウイルスのSタンパク質+FLAGタグアミノ酸配列
配列番号30:MERSコロナウイルスコドン最適化Sタンパク質遺伝子DNA配列
配列番号31:口蹄疫ウイルスのVP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質アミノ酸配列
配列番号32:口蹄疫ウイルスのVP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質+FLAGタグアミノ酸配列
配列番号33:口蹄疫ウイルスコドン最適化VP4−VP2−VP3−VP1−2A−3C融合タンパク質遺伝子DNA配列
Claims (21)
- ウイルスに対するワクチンをボンビュクス・モリ(Bombyx mori)で産生するための、ボンビュクス・モリにおける発現にコドン最適化された該ウイルスの核酸配列を含む核酸。
- ウイルスが、インフルエンザウイルス、C型肝炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、西ナイルウイルス、MERSコロナウイルス、および口蹄疫ウイルスからなる群より選択される、請求項1に記載の核酸。
- ウイルスが、A型インフルエンザウイルスである、請求項2に記載の核酸。
- ウイルスが、H5型およびH7型からなる群より選択される、請求項3に記載の核酸。
- 核酸配列が、インフルエンザウイルスのHAタンパク質をコードする、請求項4に記載の核酸。
- 核酸配列が、弱毒化遺伝子改変を有する、請求項5に記載の核酸。
- 核酸配列が、配列番号4、配列番号12、配列番号18からなる群より選択される核酸配列である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の核酸。
- ウイルスが、C型肝炎ウイルスである、請求項2に記載の核酸。
- 核酸配列が、C型肝炎ウイルスのE1タンパク質、E2タンパク質および/または核タンパク質をコードする、請求項8に記載の核酸。
- 核酸配列が、C型肝炎ウイルスのE1タンパク質、E2タンパク質および核タンパク質をコードする、請求項8に記載の核酸。
- 核酸配列が、配列番号15である、請求項10に記載の核酸。
- 核酸配列が、配列番号4、12、15、18、21、24、27、30、または33である、請求項2に記載の核酸。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項13に記載のベクターを用いて産生された組み換え体バキュロウイルス。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸、請求項13に記載のベクター、または請求項14に記載の組み換え体バキュロウイルスを含む、ボンビュクス・モリ。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸がコードするアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸、請求項13に記載のベクター、請求項14に記載の組み換え体バキュロウイルス、または請求項15に記載のボンビュクス・モリを使用する、ワクチンの生産方法。
- 以下の工程:
1)請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸、請求項13に記載のベクター、または請求項14に記載の組み換え体バキュロウイルスを得る工程
2)請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸、請求項13に記載のベクター、または請求項14に記載の組み換え体バキュロウイルスをボンビュクス・モリに導入する工程;および
3)ボンビュクス・モリからタンパク質を回収する工程
を含む、請求項17に記載のワクチンの生産方法。 - ウイルスの感染に対する、動物のワクチン接種のための、請求項16に記載のポリペプチドを含むか、または請求項17もしくは18に記載の生産方法に従って生産される、ワクチン。
- ウイルス様粒子構造である、請求項19に記載のワクチン。
- ウイルス様粒子構造の直径が50nm〜150nmである、請求項20に記載のワクチン。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012162413 | 2012-07-23 | ||
JP2012162413 | 2012-07-23 | ||
PCT/JP2013/069935 WO2014017493A1 (ja) | 2012-07-23 | 2013-07-23 | ワクチン |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014017493A1 true JPWO2014017493A1 (ja) | 2016-07-11 |
JP6205359B2 JP6205359B2 (ja) | 2017-09-27 |
Family
ID=49997302
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014526942A Active JP6205359B2 (ja) | 2012-07-23 | 2013-07-23 | ワクチン |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9555094B2 (ja) |
EP (1) | EP2876161B1 (ja) |
JP (1) | JP6205359B2 (ja) |
WO (1) | WO2014017493A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103930435A (zh) | 2011-09-30 | 2014-07-16 | 麦迪卡格公司 | 增加植物中病毒样颗粒的产率 |
US11390878B2 (en) | 2011-09-30 | 2022-07-19 | Medicago Inc. | Increasing protein yield in plants |
WO2014017493A1 (ja) * | 2012-07-23 | 2014-01-30 | 有限会社生物資源研究所 | ワクチン |
SG11201502189UA (en) * | 2012-09-23 | 2015-04-29 | Univ Erasmus Medical Ct | Human betacoronavirus lineage c and identification of n-terminal dipeptidyl peptidase as its virus receptor |
RU2705555C2 (ru) | 2013-03-28 | 2019-11-07 | Медикаго Инк. | Получение вирусоподобных частиц вируса гриппа в растениях |
CN105939730B (zh) * | 2013-11-29 | 2020-09-11 | 宾夕法尼亚大学理事会 | MERS-CoV疫苗 |
US11441150B2 (en) | 2014-01-10 | 2022-09-13 | Medicago Inc. | CPMV enhancer elements |
WO2015119291A1 (ja) * | 2014-02-10 | 2015-08-13 | 有限会社生物資源研究所 | ウイルス様粒子 |
ES2744565T3 (es) * | 2014-04-25 | 2020-02-25 | Genethon | Tratamiento de la hiperbilirrubinemia |
WO2016179099A1 (en) * | 2015-05-04 | 2016-11-10 | Epivax, Inc. | Modified h7 hemagluttinin glycoprotein of the influenza a/shanghai/2/2013 h7 sequence |
CN114340637A (zh) | 2019-07-03 | 2022-04-12 | 阿伊里斯株式会社 | 用于治疗流感病毒感染症的药物组合物 |
CN114432435B (zh) * | 2022-01-25 | 2024-05-17 | 苏州大学 | 一种基于多角体纳米结构的SARS-Cov-2疫苗及其制备方法和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03108480A (ja) * | 1989-09-20 | 1991-05-08 | Kokuritsu Yobou Eisei Kenkyusho | Ha蛋白の製造法 |
JP2000230931A (ja) * | 1998-12-07 | 2000-08-22 | Katakura Industries Co Ltd | 家畜インフルエンザウイルスに対する抗体の検出方法およびこれに用いるキット |
WO2005068495A1 (ja) * | 2004-01-13 | 2005-07-28 | Toray Industries, Inc. | クモ糸タンパク質を含む絹糸および該絹糸を産生するカイコ |
JP2010500034A (ja) * | 2006-08-09 | 2010-01-07 | メッドイミューン バクシーンズ,インコーポレイティド | インフルエンザ赤血球凝集素変異体およびノイラミニダーゼ変異体 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5547871A (en) * | 1993-01-25 | 1996-08-20 | American Cyanamid Company | Heterologous signal sequences for secretion of insect controlling proteins |
WO2007046439A1 (ja) | 2005-10-18 | 2007-04-26 | National Institute Of Agrobiological Sciences | 抗体を産生するトランスジェニックカイコとその製造方法 |
CN102304529B (zh) | 2011-08-31 | 2013-12-25 | 中国农业科学院生物技术研究所 | 一种兔出血热病毒空衣壳抗原的制备方法 |
CN102321634B (zh) | 2011-08-31 | 2014-02-12 | 中国农业科学院生物技术研究所 | 一种水貂肠炎细小病毒空衣壳抗原粒子的制备方法 |
WO2014017493A1 (ja) * | 2012-07-23 | 2014-01-30 | 有限会社生物資源研究所 | ワクチン |
-
2013
- 2013-07-23 WO PCT/JP2013/069935 patent/WO2014017493A1/ja active Application Filing
- 2013-07-23 US US14/413,700 patent/US9555094B2/en active Active
- 2013-07-23 JP JP2014526942A patent/JP6205359B2/ja active Active
- 2013-07-23 EP EP13822848.1A patent/EP2876161B1/en not_active Not-in-force
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03108480A (ja) * | 1989-09-20 | 1991-05-08 | Kokuritsu Yobou Eisei Kenkyusho | Ha蛋白の製造法 |
JP2000230931A (ja) * | 1998-12-07 | 2000-08-22 | Katakura Industries Co Ltd | 家畜インフルエンザウイルスに対する抗体の検出方法およびこれに用いるキット |
WO2005068495A1 (ja) * | 2004-01-13 | 2005-07-28 | Toray Industries, Inc. | クモ糸タンパク質を含む絹糸および該絹糸を産生するカイコ |
JP2010500034A (ja) * | 2006-08-09 | 2010-01-07 | メッドイミューン バクシーンズ,インコーポレイティド | インフルエンザ赤血球凝集素変異体およびノイラミニダーゼ変異体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9555094B2 (en) | 2017-01-31 |
EP2876161B1 (en) | 2018-12-05 |
WO2014017493A9 (ja) | 2014-12-04 |
WO2014017493A1 (ja) | 2014-01-30 |
EP2876161A1 (en) | 2015-05-27 |
JP6205359B2 (ja) | 2017-09-27 |
EP2876161A4 (en) | 2016-03-23 |
US20150140103A1 (en) | 2015-05-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6205359B2 (ja) | ワクチン | |
WO2021159648A1 (zh) | 一种β冠状病毒抗原、其制备方法和应用 | |
KR101782451B1 (ko) | 인간 엔테로바이러스에 대한 백신 | |
CN102574897B (zh) | 嵌合蛋白 | |
EP1996711B1 (en) | Novel plant virus particles and methods of inactivation thereof | |
KR20150043516A (ko) | 프라젤린 융합 단백질 및 사용 방법 | |
TWI695842B (zh) | 類黃熱病毒粒子 | |
JP7382634B2 (ja) | 交差免疫抗原ワクチン及びその調製方法 | |
JP2023511444A (ja) | 安定化されたnaを有する組換えインフルエンザウイルス | |
WO2018000708A1 (zh) | 一种番鸭细小病毒亚单位疫苗 | |
WO2011014416A2 (en) | High yield yellow fever virus strain with increased propagation in cells | |
WO2015119291A1 (ja) | ウイルス様粒子 | |
RU2358981C2 (ru) | Универсальная вакцина против вируса гриппа птиц | |
CN104804099B (zh) | 一种重组h9n2亚型禽流感加强型多表位疫苗 | |
CN114409803B (zh) | 流感病毒三聚体亚单位疫苗及其应用 | |
CN114717205A (zh) | 一种冠状病毒RBDdm变异体及其应用 | |
KR20150139528A (ko) | 피코르나바이러스 단백질의 증가된 발현 | |
CN108676078B (zh) | 引起坦布苏病毒抗体依赖增强作用的抗原的应用 | |
CN113827714A (zh) | 一种h7n9亚型禽流感病毒样颗粒疫苗制剂及制备和应用 | |
CN115867662A (zh) | 形成三聚体的新型冠状病毒肺炎(covid-19)重组刺突蛋白、在植物中大量产生重组刺突蛋白的方法和基于其制备疫苗组合物的方法 | |
TWI359867B (en) | Iridovirus vaccine | |
TW201139668A (en) | Method for producing recombinant virus | |
JP6432896B2 (ja) | 日本脳炎ウイルス用ワクチン及び、その製造方法 | |
Venkataraman et al. | Recently patented viral nucleotide sequences and generation of virus-derived vaccines | |
CN114409802B (zh) | 禽流感病毒三聚体亚单位疫苗及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160721 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170418 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170613 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170829 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170904 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6205359 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |