JPWO2012124631A1 - シトルリンを含有するアジュバント組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]シトルリン類を含有するアジュバント組成物。
[2]前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、[1]に記載のアジュバント組成物。
[3]前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、[2]に記載のアジュバント組成物。
[4]前記シトルリン類が1mg/mL〜50mg/mLで含まれる、[1]から[3]のいずれかに記載のアジュバント組成物。
[5]アジュバント組成物が、ペプチド抗原用のアジュバント組成物である、[1]から[4]のいずれかに記載のアジュバント組成物。
[6]抗酸化物質をさらに含む、[1]から[5]のいずれかに記載のアジュバント組成物。
[7]前記抗酸化物質が、アスコルビン酸である、[6]に記載のアジュバント組成物。
[8]前記シトルリン類と抗酸化物質の重量比が1:2〜2:1である、[6]または[7]に記載のアジュバント組成物。
[9]前記抗酸化物質が1〜10mg/mLで含まれる、[6]から[8]のいずれかに記載のアジュバント組成物。
[10][1]から[9]のいずれかに記載のシトルリン類を含有するアジュバント組成物と抗原を含有するワクチン組成物。
[11]前記抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[10]に記載のワクチン組成物。
[12]前記抗原が、インフルエンザウイルス抗原である、[10]に記載のワクチン組成物。
[13]前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、マトリックス1(M1)、マトリックス2(M2)、および核タンパク(NP)からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上の抗原である、[12]に記載のワクチン組成物。
[14]前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)である、[13]に記載のワクチン組成物。
[15]前記インフルエンザウイルス抗原が、マトリックス2(M2)である、[13]に記載のワクチン組成物。
[16]前記インフルエンザウイルス抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが300以上である、[12]から[15]のいずれかに記載のワクチン組成物。
[17]前記抗原がペプチドである、[10]に記載のワクチン組成物。
[18]前記ペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[17]に記載のワクチン組成物。
[19]前記ペプチドが、M2eペプチド、M2eペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチド、またはM2eペプチドにシステインを含むペプチドが付加されたペプチドである、[17]に記載のワクチン組成物。
[20]前記ペプチドが、M2eペプチドにおいて、N末端から数えて20番目と21番目の間、21番目と22番目の間、および22番目と23番目の間にそれぞれシステイン残基を挿入した合成ペプチドである、[19]に記載のワクチン組成物。
[21]前記M2eペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが200以上である、[19]または[20]に記載のワクチン組成物。
[22]前記ペプチドが、アミロイドβ(Aβ)ペプチド、アミロイドβ(Aβ)ペプチドの一部のアミノ酸配列からなるペプチド、または前記ペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチドである、[17]に記載のワクチン組成物。
[23]前記ペプチドがアミロイドβ(Aβ)ペプチドのN末端より28個のアミノ酸からなるペプチドのC末端にシステイン残基を1個付加したペプチドである、[22]に記載のワクチン組成物。
[24]前記アミロイドβペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[22]または[23]に記載のワクチン組成物。
[25]前記抗原が配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4および配列番号5からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上のアミノ酸配列からなるペプチドである、[10]に記載のワクチン組成物。
[26]ワクチンにアジュバントとしてのシトルリン類を添加することからなる、該ワクチンに含まれる抗原に対する抗体産生能の増強したワクチンの製造方法。
[27]前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、[26]に記載の方法。
[28]前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、[27]に記載の方法。
[29]前記シトルリン類を1mg/mL〜50mg/mLで添加する、[26]から[28]のいずれかに記載の方法。
[30]前記抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[26]から[29]のいずれかに記載の方法。
[31]前記抗原が、インフルエンザウイルス抗原である、[26]から[29]のいずれかに記載の方法。
[32]前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、マトリックス1(M1)、マトリックス2(M2)および核タンパク(NP)からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上の抗原である、[31]に記載の方法。
[33]前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)である、[32]に記載の方法。
[34]前記インフルエンザウイルス抗原が、マトリックス2(M2)である、[32]に記載の方法。
[35]前記インフルエンザウイルス抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが300以上である、[31]から[34]のいずれかに記載の方法。
[36]前記抗原がペプチドである、[26]に記載の方法。
[37]前記ペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[36]に記載の方法。
[38]前記ペプチドが、M2eペプチド、M2eペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチド、またはM2eペプチドにシステインを含むペプチドが付加されたペプチドである、[36]に記載の方法。
[39]前記ペプチドが、M2eペプチドにおいて、N末端から数えて20番目と21番目の間、21番目と22番目の間、および22番目と23番目の間にそれぞれシステイン残基を挿入した合成ペプチドである、[38]に記載の方法。
[40]前記M2eペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが200以上である、[38]または[39]に記載の方法。
[41]前記ペプチドが、アミロイドβ(Aβ)ペプチド、アミロイドβ(Aβ)ペプチドの一部のアミノ酸配列からなるペプチド、または前記ペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチドである、[36]に記載の方法。
[42]前記ペプチドがアミロイドβ(Aβ)ペプチドのN末端より28個のアミノ酸からなるペプチドのC末端にシステイン残基を1個付加したペプチドである、[41]に記載の方法。
[43]前記アミロイドβペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、[41]または[42]に記載の方法。
[44]前記抗原が配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、および配列番号5からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上のアミノ酸配列からなるペプチドである、[26]に記載の方法。
[45]シトルリン類とともに抗酸化物質をも添加する、[26]から[44]のいずれかに記載の方法。
[46]前記抗酸化物質が、アスコルビン酸である、[45]に記載の方法。
[47]前記シトルリン類と抗酸化物質を重量比1:2〜2:1で添加する、[45]または[46]に記載の方法。
[48]前記抗酸化物質を1〜10mg/mLで添加する、[45]から[47]のいずれかに記載の方法。
[49]アジュバントとしてのシトルリン類の使用。
[50]前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、[49]に記載の使用。
[51]前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、[50]に記載の使用。
[52]1mg/mL〜50mg/mLの前記シトルリン類をワクチンに添加する、[49]から[51]のいずれかに記載の使用。
[53]抗酸化物質を併用する、[49]から[52]のいずれかに記載の使用。
[54]前記抗酸化物質が、アスコルビン酸である、[53]に記載の使用。
[55]前記シトルリン類と抗酸化物質を重量比1:2〜2:1でワクチンに添加する、[53]または[54]に記載の使用。
[56]1〜10mg/mLの前記抗酸化物質をワクチンに添加する、[53]から[55]のいずれかに記載の使用。
抗原として、インフルエンザウイルスHA抗原を作成した(株:A/ソロモン株、組成:1200μg/mL HA)。HA抗原を様々なシトルリン濃度となるよう混合して、表1の組成物1〜4を作成した(なお、組成物1はシトルリンを含まない)。比較対照として、HA抗原とAlumアジュバント(Imject Alum(PIERCE社)またはALHYDROGEL(BRENNTAG社))の混合液を作成した(表1の比較対照)。
上記の組成物1〜4、または比較対照を下記の方法にてマウス1匹あたり100μLで投与した(マウス1匹あたりの投与量は表1に記載)。BALB/cマウス6週齢の雌の体重を測定し、均等になるように1群3匹、4群に分けた。各個体はアニマルマーカーで個体識別した。被験物投与の当日、イソフルラン吸入麻酔下で眼窩静脈叢より、キャピラリーを用いて採血した。遠心分離後、血清をチューブに分取した。被験物はディスポーザブルの1mL用シリンジ(テルモ社製)に0.1mLとり、マウスの頸背部皮下に投与した。被験物投与後14日目にイソフルラン吸入麻酔下で開腹し、腹腔内後大静脈より全採血した。血液は室温で30分以上静置したのち、遠心して(3000rpm、10分間)血清を分離した。このようにして得られた血清中のHA抗原に対する抗体を下記のELISA法にて測定した。
(3)ELISAによる抗HA抗体価の測定
免疫した抗原と同じものを1μg/mL濃度で、ELISAプレートへ50μL/well投入し、自然吸着により4℃で一晩静置して固相化した。PBS(当日調製)にて3回洗浄後、BlockerTM Casein in PBS(Thermo社製)を200μL/wellで投入し、室温で1時間反応させた。PBSにて3回洗浄後、抗血清(day0、14)をBlockerTM Casein in PBSにて200倍希釈し、50μL/wellで投入し室温で2時間反応させた。抗マウスIgG−POD標識抗体(Thermo社製)をBlockerTM Casein in PBSで2000倍に希釈したものを50μL/well投入し、室温で1時間反応させた。PBSにて4回洗浄後、基質TMB(BioFX社製)を50μL/well投入し、室温で15分反応後、1N H2SO4を50μL/well投入し反応を停止させた。450nmの吸光度を測定した。
(4)結果
ELISAの結果を表1に示した。シトルリンと抗原を共に免疫した群において、特にシトルリンを100μg/body、1000μg/bodyにて投与した群では、抗原だけを免疫した群と比較して明らかにシトルリンのアジュバント効果が認められ、100μg/body投与群では約1.3倍、1000μg/body投与群では約1.9倍の抗体産生効果が認められた。特に、シトルリンを1000μg/body投与した群では、Alumアジュバントと同等程度のアジュバント効果が認められた。また、シトルリン投与量の増加に応じて抗体の増加も認められた。
(1)シトルリン含有組成物の調製
実施例1の調製方法と同様の方法にて、シトルリンの濃度が異なる組成物5〜10を作成した(表2;なお、組成物5はシトルリンを含まない)。
実施例1と同様の方法にて、マウス1匹あたりに組成物5〜10を100μL投与し、血清を回収した(マウス1匹当たりの投与量は表2に記載)。
実施例1のELISAと同様の方法で抗体価を測定した。
(4)結果
ELISAの結果を図1に示した。全てのシトルリン投与群においてアジュバント効果が認められ、この範囲内ではある程度の用量依存性が認められた。
抗原として、A型インフルエンザウイルスのM2タンパク質のうちウイルス表面に提示される23アミノ酸からなる領域(M2e、配列番号1:N末−SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD−C末)において、N末端から数えて20番目と21番目の間、21番目と22番目の間、および22番目と23番目の間にそれぞれシステイン残基を挿入した合成ペプチドM2eC212223(配列番号2:N末−SLLTEVETPIRNEWGCRCNCDCSCSD−C末)を使用した。
マウスへの免疫は次のように行った。BALB/cマウス7週齢の雌を1群5匹、2群に分けた。各個体はアニマルマーカーで個体識別した。被験物はディスポーザブルの1mL用シリンジ(テルモ社製)にとり、マウスの頸背部皮下に1匹あたり0.1mL投与した(マウス1匹当たりの投与量は表3に記載)。被験物を2週間間隔で2回投与し、2回目の投与から1週間後にソムノペンチル(共立製薬)麻酔下で開腹し、腹腔内後大静脈より全採血した。血清分離は実施例1と同様に行った。
(3)ELISAによる抗M2e抗体価の測定
血清中のM2eに対する抗体価を国際公開2011024748号(特許文献4)に記載した方法にて測定した。すなわち、M2eを0.1M Carbonate buffer,pH9.6で2μg/mLに希釈し、96−well plate(Nunc社、Immobilizer Amino)に100μL/well加え、4℃で一夜静置して固相化した。翌日、各wellを300μLの0.05%Tween20含有リン酸緩衝液(PBST)で3回洗浄し、0.1M Carbonate buffer,pH9.6で10mMに希釈したモノエタノールアミン(和光純薬)を300μL/wellずつ添加して、室温で1時間静置した。その後、10mMモノエタノールアミンを十分に除き、PBSTで検体を希釈して100μL/wellにて添加した(各検体ともduplicate)。室温、1時間の反応の後、添加した各希釈血清を捨て、300μL/wellのPBSTで3回洗浄した。洗浄後、well内の洗浄液を十分に除き、PBSTで2000倍希釈したHRP標識抗マウスIgGヤギ抗体(American Qualax社、A131PS)を100μL/well添加し、室温、1時間反応した。反応後、標識抗体希釈液を捨て、300μL/wellのPBSTで2回、同量の蒸留水で2回洗浄し、発色基質液TMB+(Dako社)を100μL/well添加して遮光下、室温で30分間反応した。その後、1N硫酸を100μL/well添加して発色を停止し、450nmの吸光度(OD450値)を測定した。
(4)結果
ELISAの結果を図2に示した。シトルリンをアジュバントとして使用した場合は、シトルリンを含まない場合と比べて、約14倍の抗体産生効果が認められた。これにより、シトルリンはインフルエンザウイルスHA抗原だけでなく、合成ペプチドであるM2eC212223に対してもアジュバント効果を示すことが確認できた。
抗原として、42アミノ酸残基からなるアミロイドβ(Aβ)ペプチド(配列番号3:N末−DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA−C末)のうち、N末端より28個のアミノ酸からなるペプチド(配列番号4:N末−DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK−C末)のC末端にシステイン残基を1個付加した合成ペプチド28AACys(配列番号5:N末−DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC−C末)を使用した。
マウスへの免疫は次のように行った。C57BL/6マウス7週齢の雄を1群4匹、8群に分けた。各組成物をマウス1匹あたり200μLずつ1mLツベルクリン用注射器(テルモ、SS−01T2613S)を用い、腹部皮下内に投与した(マウス1匹当たりの投与量は表4に示した)。マウスへの免疫は2週間隔で2回の免疫を行った。2回目免疫から14日目にペントバルビタールナトリウム(共立製薬、ソムノペンチル)麻酔下、腹部大静脈より採血して殺処分した。採取した血液はマイクロティナ(BECTON DICKINSON社)に移し、室温にて十分に凝固させた後、遠心分離した(5000回転、10分間)。分離した血清は各々0.5mLチューブ2本に分注し、測定まで−80℃にて保存した。血清中のAβペプチドに対する抗体を下記のELISA法にて測定した。
Aβペプチド(1−40のアミノ酸配列:N末−DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV(配列番号6)、北海道システム・サイエンス社合成)を0.1M Carbonate buffer,pH9.6で10μg/mLに希釈し、8well strips(Nalgen-Nunc社、Immobilizer Amino)に100μL/well加え、4℃で一夜静置して固相化した。翌日、各wellを300μLの0.05%Tween20含有PBS(PBST)で3回洗浄し、10mM ethanolamineを300μL/wellずつ添加して、室温で1時間静置した。その後、10mM ethanolamineを十分に除き、PBSTで検体を50倍〜10000倍に希釈して100μL/wellにて添加した(各検体ともduplicate)。室温で1時間の反応の後、添加した各希釈血清を捨て、300μL/wellのPBSTで3回洗浄した。洗浄後、well内の洗浄液を十分に除き、検体希釈液を用いて2000倍希釈したHRP標識抗マウスIgGヤギ抗体(American Qualax社、A131PS)を100μL/wellにて添加し、室温で1時間反応した。反応後、標識抗体希釈液を捨て、300μL/wellのPBSTで2回、同量の蒸留水で2回洗浄し、発色基質液TMB+(Dako社)を100μL/well添加して遮光下、室温で30分間反応した。その後、1N硫酸を100μL/well添加して発色を停止し、450nmの吸光度(OD450値)を測定した。
(4)結果
算出した各免疫群におけるマウス血清中の抗Aβ抗体価を表4に示した。シトルリンを添加した群(組成物13〜16、18)では、アジュバント未投与群(比較対照1)と比べて、抗体産生効果が増強していた。すなわち、アジュバント未投与群と比べて、1mg/body投与群で約11.6倍(組成物13)、2mg/body投与群で約42.2倍(組成物14)、4mg/body投与群で約125.8倍(組成物15)、8mg/body投与群で約141.7倍(組成物16)といった極めて顕著な抗体産生効果が認められた。
Claims (56)
- シトルリン類を含有するアジュバント組成物。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、請求項1に記載のアジュバント組成物。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、請求項2に記載のアジュバント組成物。
- 前記シトルリン類が1mg/mL〜50mg/mLで含まれる、請求項1から請求項3のいずれか一項に記載のアジュバント組成物。
- アジュバント組成物が、ペプチド抗原用のアジュバント組成物である、請求項1から請求項4のいずれか一項に記載のアジュバント組成物。
- 抗酸化物質をさらに含む、請求項1から請求項5のいずれか一項に記載のアジュバント組成物。
- 抗酸化物質が、アスコルビン酸である、請求項6に記載のアジュバント組成物。
- 前記シトルリン類と抗酸化物質の重量比が1:2〜2:1である、請求項6または請求項7に記載のアジュバント組成物。
- 前記抗酸化物質が1〜10mg/mLで含まれる、請求項6から請求項8のいずれか一項に記載のアジュバント組成物。
- 請求項1から請求項9のいずれか一項に記載のシトルリン類を含有するアジュバント組成物と抗原を含有するワクチン組成物。
- 前記抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、ワクチン組成物。
- 前記抗原が、インフルエンザウイルス抗原である、請求項10に記載のワクチン組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、マトリックス1(M1)、マトリックス2(M2)および核タンパク(NP)からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上の抗原である、請求項12に記載のワクチン組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)である、請求項13に記載のワクチン組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、マトリックス2(M2)である、請求項13に記載のワクチン組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが300以上である、請求項12から請求項15のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
- 前記抗原がペプチドである、請求項10に記載のワクチン組成物。
- 前記ペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、請求項17に記載のワクチン組成物。
- 前記ペプチドが、M2eペプチド、M2eペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチド、またはM2eペプチドにシステインを含むペプチドが付加されたペプチドである、請求項17に記載のワクチン組成物。
- 前記ペプチドが、M2eペプチドにおいて、N末端から数えて20番目と21番目の間、21番目と22番目の間、および22番目と23番目の間にそれぞれシステイン残基を挿入した合成ペプチドである、請求項19に記載のワクチン組成物。
- 前記M2eペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが200以上である、請求項19または請求項20に記載のワクチン組成物。
- 前記ペプチドが、アミロイドβ(Aβ)ペプチド、アミロイドβ(Aβ)ペプチドの一部のアミノ酸配列からなるペプチド、または前記ペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチドである、請求項17に記載のワクチン組成物。
- 前記ペプチドがアミロイドβ(Aβ)ペプチドのN末端より28個のアミノ酸からなるペプチドのC末端にシステイン残基を1個付加したペプチドである、請求項22に記載のワクチン組成物。
- 前記アミロイドβペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、請求項22または請求項23に記載のワクチン組成物。
- 前記抗原が配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4および配列番号5からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上のアミノ酸配列からなるペプチドである、請求項10に記載のワクチン組成物。
- ワクチンにアジュバントとしてのシトルリン類を添加することからなる、該ワクチンに含まれる抗原に対する抗体産生能の増強したワクチンの製造方法。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、請求項26に記載の方法。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、請求項27に記載の方法。
- 前記シトルリン類を1mg/mL〜50mg/mLで添加する、請求項26から28のいずれかに記載の方法。
- 前記抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、請求項26から29のいずれかに記載の方法。
- 前記抗原が、インフルエンザウイルス抗原である、請求項26から29のいずれかに記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、マトリックス1(M1)、マトリックス2(M2)および核タンパク(NP)からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上の抗原である、請求項31に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、ヘマグルチニン(HA)である、請求項32に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルス抗原が、マトリックス2(M2)である、請求項32に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルス抗原とシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが300以上である、請求項31から34のいずれかに記載の方法。
- 前記抗原がペプチドである、請求項26に記載の方法。
- 前記ペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、請求項36に記載の方法。
- 前記ペプチドが、M2eペプチド、M2eペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチド、またはM2eペプチドにシステインを含むペプチドが付加されたペプチドである、請求項36に記載の方法。
- 前記ペプチドが、M2eペプチドにおいて、N末端から数えて20番目と21番目の間、21番目と22番目の間、および22番目と23番目の間にそれぞれシステイン残基を挿入した合成ペプチドである、請求項38に記載の方法。
- 前記M2eペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが200以上である、請求項38または39に記載の方法。
- 前記ペプチドが、アミロイドβ(Aβ)ペプチド、アミロイドβ(Aβ)ペプチドの一部のアミノ酸配列からなるペプチド、または前記ペプチドに1もしくは数個のシステインが付加もしくは挿入されたペプチドである、請求項36に記載の方法。
- 前記ペプチドがアミロイドβ(Aβ)ペプチドのN末端より28個のアミノ酸からなるペプチドのC末端にシステイン残基を1個付加したペプチドである、請求項41に記載の方法。
- 前記アミロイドβペプチドとシトルリン類の重量比が1:Nであって、Nが100以上である、請求項41または42に記載の方法。
- 前記抗原が配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、および配列番号5からなる群より選ばれた少なくとも1種または2種以上のアミノ酸配列からなるペプチドである、請求項26に記載の方法。
- シトルリン類とともに抗酸化物質をも添加する、請求項26から44のいずれかに記載の方法。
- 前記抗酸化物質が、アスコルビン酸である、請求項45に記載の方法。
- 前記シトルリン類と抗酸化物質を重量比1:2〜2:1で添加する、請求項45または46に記載の方法。
- 前記抗酸化物質を1〜10mg/mLで添加する、請求項45から47のいずれかに記載の方法。
- アジュバントとしてのシトルリン類の使用。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリン、D−シトルリン、L−チオシトルリン、L−ホモチオシトルリン、S−メチル−L−チオシトルリンおよびS−エチル−L−チオシトルリンからなる群より選択される1種または2種以上である、請求項49に記載の使用。
- 前記シトルリン類が、L−シトルリンまたはD−シトルリンである、請求項50に記載の使用。
- 1mg/mL〜50mg/mLの前記シトルリン類をワクチンに添加する、請求項49から51のいずれかに記載の使用。
- 抗酸化物質を併用する、請求項49から52のいずれかに記載の使用。
- 前記抗酸化物質が、アスコルビン酸である、請求項53に記載の使用。
- 前記シトルリン類と抗酸化物質を重量比1:2〜2:1でワクチンに添加する、請求項53または54に記載の使用。
- 1〜10mg/mLの前記抗酸化物質をワクチンに添加する、請求項53から55のいずれかに記載の使用。
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