JPWO2012020744A1 - 糖化ヘモグロビンの測定方法 - Google Patents
糖化ヘモグロビンの測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2012020744A1 JPWO2012020744A1 JP2012528677A JP2012528677A JPWO2012020744A1 JP WO2012020744 A1 JPWO2012020744 A1 JP WO2012020744A1 JP 2012528677 A JP2012528677 A JP 2012528677A JP 2012528677 A JP2012528677 A JP 2012528677A JP WO2012020744 A1 JPWO2012020744 A1 JP WO2012020744A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- hemoglobin
- kit
- examples
- measurement
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims abstract description 144
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims abstract description 144
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 94
- VUWCWMOCWKCZTA-UHFFFAOYSA-N 1,2-thiazol-4-one Chemical class O=C1CSN=C1 VUWCWMOCWKCZTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 59
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 108010006172 fructosyl-peptide oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 224
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 100
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 97
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 39
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 39
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 33
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 27
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 26
- DMSMPAJRVJJAGA-UHFFFAOYSA-N benzo[d]isothiazol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NSC2=C1 DMSMPAJRVJJAGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 17
- -1 first Proteins 0.000 description 94
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 77
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 43
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 39
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 38
- CWLYDTVACYGEPD-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[[3,7-bis(dimethylamino)phenothiazine-10-carbonyl]amino]acetate Chemical compound [Na+].C1=C(N(C)C)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N(C(=O)NCC([O-])=O)C2=C1 CWLYDTVACYGEPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 38
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 34
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 30
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 25
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 25
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 description 25
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 17
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 15
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 15
- JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N octhilinone Chemical compound CCCCCCCCN1SC=CC1=O JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 101710171330 Peroxidase 40 Proteins 0.000 description 12
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 12
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 229920004896 Triton X-405 Polymers 0.000 description 10
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 10
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 10
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 8
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 8
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 8
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 8
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 8
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 8
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 8
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 7
- 125000004343 1-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical class C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 5
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 5
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 description 5
- WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 10H-phenothiazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3SC2=C1 WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PORQOHRXAJJKGK-UHFFFAOYSA-N 4,5-dichloro-2-n-octyl-3(2H)-isothiazolone Chemical compound CCCCCCCCN1SC(Cl)=C(Cl)C1=O PORQOHRXAJJKGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 125000001204 arachidyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 4
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000001196 nonadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000002958 pentadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 229950000688 phenothiazine Drugs 0.000 description 4
- 150000004714 phosphonium salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 125000002889 tridecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Natural products OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 3
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 3
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- 125000003493 decenyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000005066 dodecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCC)* 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 150000004693 imidazolium salts Chemical class 0.000 description 3
- AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N isoquinoline Chemical class C1=NC=CC2=CC=CC=C21 AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000005187 nonenyl group Chemical group C(=CCCCCCCC)* 0.000 description 3
- 125000005064 octadecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 3
- 125000004365 octenyl group Chemical group C(=CCCCCCC)* 0.000 description 3
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 125000005063 tetradecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 3
- 125000005065 undecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCC)* 0.000 description 3
- PYHRZPFZZDCOPH-QXGOIDDHSA-N (S)-amphetamine sulfate Chemical compound [H+].[H+].[O-]S([O-])(=O)=O.C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1.C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 PYHRZPFZZDCOPH-QXGOIDDHSA-N 0.000 description 2
- GKQHIYSTBXDYNQ-UHFFFAOYSA-M 1-dodecylpyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 GKQHIYSTBXDYNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003229 2-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-hydroxyethyl)azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)CS(O)(=O)=O XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyphenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 0 CCIIC*C1=C(C)SN(*C)C1=O Chemical compound CCIIC*C1=C(C)SN(*C)C1=O 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound NC(=O)CNCCS(O)(=O)=O DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCNC1CCCCC1 MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010064719 Oxyhemoglobins Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M decyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)C PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 2
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- MGIYRDNGCNKGJU-UHFFFAOYSA-N isothiazolinone Chemical compound O=C1C=CSN1 MGIYRDNGCNKGJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- CAVXVRQDZKMZDB-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[dodecanoyl(methyl)amino]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CCS([O-])(=O)=O CAVXVRQDZKMZDB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N triphenylmethane Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEFCKYIRXORTFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-thiazolidin-3-one Chemical compound O=C1CCSN1 UEFCKYIRXORTFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIRURAJAJIQZFG-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropane-1-sulfonic acid Chemical compound CCC(N)S(O)(=O)=O ZIRURAJAJIQZFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBODPHKDNYVCEJ-UHFFFAOYSA-M 1-benzyl-3-dodecyl-2-methylimidazol-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCN1C=C[N+](CC=2C=CC=CC=2)=C1C PBODPHKDNYVCEJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YCMFMSOTJOUSLI-UHFFFAOYSA-M 1-hexadecyl-4-methylpyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=C(C)C=C1 YCMFMSOTJOUSLI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- URVSXZLUUCVGQM-UHFFFAOYSA-M 1-methyl-3-octylimidazol-1-ium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCN1C=C[N+](C)=C1 URVSXZLUUCVGQM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZPGZNKGKCSYBGK-UHFFFAOYSA-N 1-n-[4-(dimethylamino)phenyl]-4-n,4-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1NC1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZPGZNKGKCSYBGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEIYCOMNTWABLV-XMXXDQCKSA-M 1-octadecyl-4-[(e)-2-phenylethenyl]pyridin-1-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=C[N+](CCCCCCCCCCCCCCCCCC)=CC=C1\C=C\C1=CC=CC=C1 FEIYCOMNTWABLV-XMXXDQCKSA-M 0.000 description 1
- HYSZWUPCSXTPSX-UHFFFAOYSA-N 2-(4-ethylpiperazin-1-yl)ethanol Chemical compound CCN1CCN(CCO)CC1 HYSZWUPCSXTPSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(N(C)C)C(O)=O XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJZNKFIBZHDKL-UHFFFAOYSA-N 2-[[3,7-bis(dimethylamino)phenothiazine-10-carbonyl]amino]acetic acid Chemical compound C1=C(N(C)C)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N(C(=O)NCC(O)=O)C2=C1 XUJZNKFIBZHDKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBXDKDRNXQVSGV-UHFFFAOYSA-M 2-dodecylisoquinolin-2-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC2=C[N+](CCCCCCCCCCCC)=CC=C21 WBXDKDRNXQVSGV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- KFJDQPJLANOOOB-UHFFFAOYSA-N 2h-benzotriazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC2=NNN=C12 KFJDQPJLANOOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INEWUCPYEUEQTN-UHFFFAOYSA-N 3-(cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CNC1CCCCC1 INEWUCPYEUEQTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALRHLSYJTWAHJZ-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropionic acid Chemical compound OCCC(O)=O ALRHLSYJTWAHJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXFBEEDAZHXDHB-UHFFFAOYSA-M 3-methyl-1-octylimidazolium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCN1C=C[N+](C)=C1 OXFBEEDAZHXDHB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNELNNAGJGJMLL-UHFFFAOYSA-N 4-amino-1-hydroxybutane-2-sulfonic acid Chemical compound NCCC(CO)S(O)(=O)=O YNELNNAGJGJMLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 description 1
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710184216 Cardioactive peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 102000003908 Cathepsin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000258 Cathepsin D Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- RUPBZQFQVRMKDG-UHFFFAOYSA-M Didecyldimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC RUPBZQFQVRMKDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SDKQRNRRDYRQKY-UHFFFAOYSA-N Dioxacarb Chemical compound CNC(=O)OC1=CC=CC=C1C1OCCO1 SDKQRNRRDYRQKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- SUZRRICLUFMAQD-UHFFFAOYSA-N N-Methyltaurine Chemical class CNCCS(O)(=O)=O SUZRRICLUFMAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004280 Sodium formate Substances 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N Sulfobutanedioic acid Chemical class OC(=O)CC(C(O)=O)S(O)(=O)=O ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035100 Threonine proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005501 Threonine proteases Proteins 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M cetyltrimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- HXWGXXDEYMNGCT-UHFFFAOYSA-M decyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)C HXWGXXDEYMNGCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M didecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960004670 didecyldimethylammonium chloride Drugs 0.000 description 1
- XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M didodecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCC XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WLCFKPHMRNPAFZ-UHFFFAOYSA-M didodecyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCC WLCFKPHMRNPAFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M dodecyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108091005996 glycated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000006038 hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N lucigenin Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.C12=CC=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C2)C2=C1C1=C(C=CC=C2)C2=[N+](C)C2=CC=CC=C12 KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077372 mast cell degranulating peptide Proteins 0.000 description 1
- JSABTPDNEXHNOQ-UHFFFAOYSA-N n-phenylaniline;sodium Chemical compound [Na].C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 JSABTPDNEXHNOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002828 nitro derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 description 1
- WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M potassium formate Chemical compound [K+].[O-]C=O WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M sodium formate Chemical compound [Na+].[O-]C=O HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019254 sodium formate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 150000008054 sulfonate salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- QVBRLOSUBRKEJW-UHFFFAOYSA-M tetraoctylphosphanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCC[P+](CCCCCCCC)(CCCCCCCC)CCCCCCCC QVBRLOSUBRKEJW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABJGUZZWSKMTEI-UHFFFAOYSA-M tributyl(dodecyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[P+](CCCC)(CCCC)CCCC ABJGUZZWSKMTEI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYVBINGWVJJDPU-UHFFFAOYSA-M tributyl(hexadecyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[P+](CCCC)(CCCC)CCCC RYVBINGWVJJDPU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UJMLRSWRUXXZEW-UHFFFAOYSA-M tributyl(octyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCC[P+](CCCC)(CCCC)CCCC UJMLRSWRUXXZEW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AISMNBXOJRHCIA-UHFFFAOYSA-N trimethylazanium;bromide Chemical compound Br.CN(C)C AISMNBXOJRHCIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
ヘモグロビン含有試料に、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成した過酸化水素を測定することを特徴とする、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法。本発明により、ヘモグロビンの影響を受けることなく、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを正確、かつ、高感度に測定する方法が提供される。
Description
本発明は、糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キットに関する。
糖化ヘモグロビンは、ヘモグロビンにグルコースが結合した糖化物である。ヘモグロビンはα鎖、β鎖からなる四量体の構造を取っているが、β鎖のＮ末端が糖化したものはヘモグロビンＡ１ｃと呼ばれ、血糖値が高い程、増加することから、糖尿病マーカーとして、臨床検査において測定されている。
糖化ヘモグロビンの測定方法としては、ＨＰＬＣ法等のクロマトグラフィ法、電気泳動法、ラテックス免疫凝集法など抗体を利用する免疫測定法、糖化タンパク質に作用する酵素と、糖化ペプチド及び／又は糖化アミノ酸に作用する酵素とを用いる酵素測定法等が知られている。
糖化ヘモグロビンの酵素測定法としては、先ず、ヘモグロビン含有試料中のヘモグロビンを変性剤により変性させ、変性したヘモグロビンにタンパク質分解酵素を作用させ、次いで生成した糖化ペプチドに糖化ペプチド酸化酵素を作用させ、生成した過酸化水素をペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の存在下に、酸化発色型色原体と反応させて色素に導き、生成した色素の吸光度から糖化ヘモグロビンを測定する方法（吸光度法）等が知られている。
しかしながら、この吸光度法による糖化ヘモグロビンの測定においては、試料中に大量に存在するヘモグロビンの干渉が問題となる。この課題に対する解決手段としては、例えば、カチオン性界面活性剤及び／又は両性界面活性剤を用いる方法（特許文献１）、スルホン化合物及び／又はニトロ化合物を用いる方法（特許文献２、特許文献３）、テトラゾリウム化合物を用いる方法（特許文献４）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩類等の特定の陰イオン系界面活性剤を用いる方法（特許文献５）等が知られている。
しかしながら、これらの方法においても、必ずしもヘモグロビンの影響が回避される訳ではなく、ヘモグロビンの影響を受けない、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの正確な測定方法が求められている。
本発明の目的は、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを、ヘモグロビンの影響を受けることなく、正確、かつ、高感度に測定するための方法及び試薬を提供することにある。
本発明者らは鋭意検討したところ、界面活性剤存在下に、ヘモグロビン含有試料にタンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成した過酸化水素を測定することにより、ヘモグロビンの影響を受けることなく、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを正確、かつ、高感度に測定できる、という知見を見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１５］に関する。
［１］ ヘモグロビン含有試料に、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成した過酸化水素を測定することを特徴とする、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法。
［２］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［１］記載の測定方法。
［２］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［１］記載の測定方法。
式中、Ａ１は、水素原子、又は、置換若しくは非置換のアルキルを表し、Ａ２とＡ３は、同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、ハロゲン原子を表すか、または、一緒になって環構造を形成する）
［３］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［２］記載の測定方法。
［４］ 過酸化水素の測定が、過酸化水素測定試薬により行われる、［１］〜［３］のいずれかに記載の測定方法。
［５］ 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である［４］記載の測定方法。
［３］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［２］記載の測定方法。
［４］ 過酸化水素の測定が、過酸化水素測定試薬により行われる、［１］〜［３］のいずれかに記載の測定方法。
［５］ 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である［４］記載の測定方法。
［６］ ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するための試薬であって、タンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定試薬。
［７］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［６］記載の測定試薬。
［７］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［６］記載の測定試薬。
式中、Ａ１は、水素原子、又は、置換若しくは非置換のアルキルを表し、Ａ２とＡ３は、同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、ハロゲン原子を表すか、または、一緒になって環構造を形成する）
［８］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［７］記載の測定試薬。
［９］ さらに、過酸化水素測定試薬を含む、［６］〜［８］のいずれかに記載の測定試薬。
［１０］ 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である［９］記載の試薬。
［８］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［７］記載の測定試薬。
［９］ さらに、過酸化水素測定試薬を含む、［６］〜［８］のいずれかに記載の測定試薬。
［１０］ 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である［９］記載の試薬。
［１１］ ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するためのキットであって、タンパク質分解酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素を含む第２試薬とを含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定キット。
［１２］ ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するためのキットであって、タンパク質分解酵素、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素、及び、イソチアゾリノン誘導体を含む第２試薬とを含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定キット。
［１３］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［１１］又は［１２］記載の測定キット。
［１２］ ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するためのキットであって、タンパク質分解酵素、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素、及び、イソチアゾリノン誘導体を含む第２試薬とを含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定キット。
［１３］ イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である［１１］又は［１２］記載の測定キット。
（式中、Ａ１は、水素原子、又は、置換若しくは非置換のアルキルを表し、Ａ２とＡ３は、同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、ハロゲン原子を表すか、または、一緒になって環構造を形成する）
［１４］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［１３］記載の測定キット。
［１５］ さらに、ペルオキシダーゼ及びロイコ型色原体が、それぞれ第１試薬と第２試薬、又は、第２試薬と第１試薬に含まれる、［１１］〜［１４］のいずれかに記載の測定キット。
［１４］ 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である［１３］記載の測定キット。
［１５］ さらに、ペルオキシダーゼ及びロイコ型色原体が、それぞれ第１試薬と第２試薬、又は、第２試薬と第１試薬に含まれる、［１１］〜［１４］のいずれかに記載の測定キット。
本発明により、ヘモグロビンの影響を受けることなく、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを正確、かつ、高感度に測定するための方法、試薬及びキットが提供される。
（１）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法
本発明の、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法は、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成する過酸化水素を測定する方法である。イソチアゾリノン誘導体は、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応に存在させても、タンパク質分解酵素を作用させる反応とフルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応の両方の反応に存在させてもよい。
具体的には、以下の工程を含む測定方法が例示される。
本発明の、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法は、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成する過酸化水素を測定する方法である。イソチアゾリノン誘導体は、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応に存在させても、タンパク質分解酵素を作用させる反応とフルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応の両方の反応に存在させてもよい。
具体的には、以下の工程を含む測定方法が例示される。
＜測定方法１＞
（１）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（２）工程（１）で得られる反応生成物に、イソチアゾリノン誘導体存在下に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（４）既知濃度の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン濃度との関係を表す検量線に基づき、工程（３）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン濃度を決定する工程。
（１）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（２）工程（１）で得られる反応生成物に、イソチアゾリノン誘導体存在下に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（４）既知濃度の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン濃度との関係を表す検量線に基づき、工程（３）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン濃度を決定する工程。
＜測定方法２＞
（１）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、イソチアゾリノン誘導体及び界面活性剤の存在下に、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（２）工程（１）で得られる反応生成物に、フルクトシルペプチド酸化酵素と反応させ、過酸化水素を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（４）既知濃度の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン濃度との関係を表す検量線に基づき、工程（３）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン濃度を決定する工程。
（１）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、イソチアゾリノン誘導体及び界面活性剤の存在下に、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（２）工程（１）で得られる反応生成物に、フルクトシルペプチド酸化酵素と反応させ、過酸化水素を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（４）既知濃度の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン濃度との関係を表す検量線に基づき、工程（３）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン濃度を決定する工程。
また、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法は、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量の総ヘモグロビン（すなわち、ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを合わせた総ヘモグロビン）量に対する割合を算出する方法をも包含する。この場合、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法は、具体的には、以下の工程を含む測定方法である。
＜測定方法３＞
（１）ヘモグロビン含有試料中の総ヘモグロビン（すなわち、ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを合わせた総ヘモグロビン）量を決定する工程；
（２）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（３）工程（２）で得られる反応生成物に、イソチアゾリノン誘導体存在下に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（４）工程（３）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（５）既知量の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン量との関係を表す検量線に基づき、工程（４）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量を決定する工程；及び、
（６）工程（１）で決定した総ヘモグロビン量と、工程（５）で決定した糖化ヘモグロビン量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量の総ヘモグロビン量に対する割合を算出する工程。
上記工程（１）の総ヘモグロビン量の決定は、工程（２）の後に行うこともできる。
（１）ヘモグロビン含有試料中の総ヘモグロビン（すなわち、ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを合わせた総ヘモグロビン）量を決定する工程；
（２）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、界面活性剤存在下、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（３）工程（２）で得られる反応生成物に、イソチアゾリノン誘導体存在下に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（４）工程（３）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（５）既知量の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン量との関係を表す検量線に基づき、工程（４）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量を決定する工程；及び、
（６）工程（１）で決定した総ヘモグロビン量と、工程（５）で決定した糖化ヘモグロビン量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量の総ヘモグロビン量に対する割合を算出する工程。
上記工程（１）の総ヘモグロビン量の決定は、工程（２）の後に行うこともできる。
＜測定方法４＞
（１）ヘモグロビン含有試料中の総ヘモグロビン（すなわち、ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを合わせた総ヘモグロビン）量を決定する工程；
（２）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、イソチアゾリノン誘導体と界面活性剤存在下、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（３）工程（２）で得られる反応生成物に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（４）工程（３）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（５）既知量の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン量との関係を表す検量線に基づき、工程（４）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量を決定する工程；及び、
（６）工程（１）で決定した総ヘモグロビン量と、工程（５）で決定した糖化ヘモグロビン量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量の総ヘモグロビン量に対する割合を算出する工程。
上記工程（１）の総ヘモグロビン量の決定は、工程（２）の後に行うこともできる。
（１）ヘモグロビン含有試料中の総ヘモグロビン（すなわち、ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを合わせた総ヘモグロビン）量を決定する工程；
（２）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、イソチアゾリノン誘導体と界面活性剤存在下、タンパク質分解酵素を作用させる工程；
（３）工程（２）で得られる反応生成物に、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させ、過酸化水素を生成させる工程；
（４）工程（３）で生成した過酸化水素を測定する工程；及び、
（５）既知量の糖化ヘモグロビンを用いて予め作成した、過酸化水素量と糖化ヘモグロビン量との関係を表す検量線に基づき、工程（４）で測定した過酸化水素量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量を決定する工程；及び、
（６）工程（１）で決定した総ヘモグロビン量と、工程（５）で決定した糖化ヘモグロビン量から、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン量の総ヘモグロビン量に対する割合を算出する工程。
上記工程（１）の総ヘモグロビン量の決定は、工程（２）の後に行うこともできる。
本発明の測定方法におけるヘモグロビン含有試料は、ヘモグロビンを含有し、本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法が適用可能な試料であれば特に制限はなく、例えば全血、血球、血球に血漿が混在した試料、これらの試料を溶血処理した試料等が挙げられる。溶血処理としては、全血、血球、血球に血漿が混在した試料を溶血させる処理であれば特に制限はなく、例えば物理的方法、化学的方法、生物学的方法等が挙げられる。物理的方法としては、例えば蒸留水等の低張液を用いる方法、超音波を用いる方法等が挙げられる。化学的方法としては、例えばメタノール、エタノール、アセトン等の有機溶媒を用いる方法、ポリオキシエチレン系界面活性剤を用いる方法等が挙げられる。生物学的方法としては、例えば抗体や補体を用いる方法等が挙げられる。
本発明における糖化ヘモグロビンは、ヘモグロビンにグルコース等の糖が結合して生成したものであり、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロビンＡ１ｃ等が挙げられ、ヘモグロビンＡ１ｃが好ましい。
本発明におけるイソチアゾリノン誘導体としては、本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法を可能とするイソチアゾリノン誘導体であれば特に制限はないが、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる化合物［以下、化合物（Ｉ）という］が挙げられる。
（式中、Ａ１は、水素原子、又は、置換若しくは非置換のアルキルを表し、Ａ２とＡ３は、同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、ハロゲン原子を表すか、または、一緒になって環構造を形成する）
化合物（Ｉ）におけるＡ１は置換若しくは非置換のアルキルを表し、Ａ２とＡ３は、同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、ハロゲン原子を表すか、または、一緒になって環構造を形成する。置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数１〜２０の直鎖アルキル、炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数１〜２０の直鎖アルキルとしては、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。炭素数３〜２０の分岐アルキルとしては、例えばイソプロピル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、イソヘプチル、イソオクチル、イソノニル、イソデシル、イソウンデシル、イソドデシル、イソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、イソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。置換アルキルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば前述のハロゲン原子等が挙げられる。
Ａ２とＡ３とが一緒になって形成される環構造としては、例えばベンゼン環、ナフタレン環等が挙げられる。
化合物（Ｉ）の具体例としては、例えば２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オン等が挙げられる。市販の化合物（Ｉ）としては、例えば２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン（東京化成社製）、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン（和光純薬工業社製）、４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン（ハイケム社製）等が挙げられる。
本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法において、イソチアゾリノン誘導体の反応液中の濃度としては、本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法を可能とする濃度であれば、特に制限はないが、通常０．００５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｍｏｌ／Ｌである。
本発明における界面活性剤としては、本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法を可能とする界面活性剤であれば特に制限はなく、例えば陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
陽イオン性界面活性剤としては、例えば第四級アンモニウム塩、ピリジニウム塩、ホスホニウム塩、イミダゾリウム塩、イソキノリニウム塩等が挙げられ、第四級アンモニウム塩、ピリジニウム塩、ホスホニウム塩が好ましい。
第四級アンモニウム塩としては、炭素数８〜２０の直鎖アルキルを少なくとも１つ有する第四級アンモニウム塩が好ましい。炭素数８〜２０の直鎖アルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。
第四級アンモニウム塩の具体例（製品）としては、例えばデシルトリメチルアンモニウム クロライド、デシルトリメチルアンモニウム ブロマイド（以下、Ｃ１０ＴＭＡと記す）、ドデシルトリメチルアンモニウム クロライド、ドデシルトリメチルアンモニウム ブロマイド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウム クロライド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウム ブロマイド、ジデシルジメチルアンモニウム クロライド、ジデシルジメチルアンモニウム ブロマイド、ジドデシルジメチルアンモニウム クロライド、ジドデシルジメチルアンモニウム ブロマイド（いずれも、東京化成社製）等が挙げられる。
ピリジニウム塩としては、以下の一般式（ＩＩ）で表わされるピリジニウム塩［以下、化合物（ＩＩ）という］が使用される。
式中、Ｒ１は、置換若しくは非置換のアルキル、又は置換若しくは非置換のアルケニル、Ｒａは、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、又は置換若しくは非置換のアルケニル、ｎは、１〜５の整数、Ｘ−は、１価のアニオンをそれぞれ表す。
Ｒ１において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数１〜２０の直鎖アルキル、炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられ、炭素数８〜２０の直鎖アルキル、炭素数８〜２０の分岐アルキルが好ましい。炭素数１〜２０の直鎖アルキルとしては、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。炭素数３〜２０の分岐アルキルとしては、例えばイソプロピル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、イソヘプチル、イソオクチル、イソノニル、イソデシル、イソウンデシル、イソドデシル、イソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、イソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル等が挙げられる。炭素数８〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の分岐アルキルとしては、例えばイソオクチル、イソノニル、イソデシル、イソウンデシル、イソドデシル、イソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、イソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル等が挙げられる。
Ｒ１において、置換若しくは非置換のアルケニルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数２〜２０のアルケニル等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルケニルが好ましい。炭素数２〜２０のアルケニルとしては、例えばビニル、プロペニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、オクタデセニル、オレイル、ノナデセニル、イコセニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えばオクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、オクタデセニル、オレイル、ノナデセニル、イコセニル等が挙げられる。
Ｒ１において、置換アルキル及び置換アルケニルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｒａにおいて、置換もしくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数１〜２０の直鎖アルキル、炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数１〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数１〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数３〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。
Ｒａにおいて、置換もしくは非置換のアルケニルにおけるアルケニルにとしては、例えば炭素数２〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数２〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数２〜２０の直鎖アルケニル等が挙げられる。
Ｒａにおいて、置換アルキル及び置換アルケニルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
ピリジン環上に２つ以上の置換基がある場合、置換基は同じであっても異なっていてもよい。化合物（ＩＩ）におけるＸ−は、１価のアニオンを表す。１価のアニオンとしては、例えばハロゲンイオン、OH-、PF6 -、BF4 -、CH3CH2OSO3 -、(CF3SO2)2N-等のアニオンが挙げられる。ハロゲンイオンとしては、例えばCl-、Br-、I-等が挙げられる。
化合物（ＩＩ）の具体例（製品）としては、例えば１−ドデシルピリジニウムクロライド（以下、Ｃ１２ｐｙと記す；東京化成社製）、１−セチルピリジニウムクロライド、１−セチル−４−メチルピリジニウムクロライド（東京化成社製）、Ｎ−オクタデシル−４−スチルバゾールブロミド（東京化成社製）等が挙げられる。
ホスホニウム塩としては、以下の一般式（ＩＩＩ）で表わされるホスホニウム塩［以下、化合物（ＩＩＩ）という］が使用される。
式中、Ｒ２〜Ｒ５は、同一又は異なって、置換若しくは非置換のアルキルを表わす、Ｙ−は、１価のアニオンをそれぞれ表す。
Ｒ２において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０の直鎖アルキル、炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。置換アルキルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｒ３〜Ｒ５において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数１〜２０の直鎖アルキル、炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数１〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数１〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数３〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。置換アルキルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｙ−は、１価のアニオンを表す。１価のアニオンとしては、例えばハロゲンイオン、OH-、PF6 -、BF4 -、CH3CH2OSO3 -、(CF3SO2)2N-、B(C6H5)4 -、ベンゾトリアゾレート等のアニオンが挙げられる。ハロゲンイオンとしては、例えばCl-、Br-、I-等が挙げられる。
化合物（ＩＩＩ）の具体例（製品）としては、例えばテトラオクチルホスホニウムブロマイド（東京化成社製）、トリブチルオクチルホスホニウムブロマイド（東京化成社製）、トリブチルドデシルホスホニウムブロマイド、トリブチルヘキサデシルホスホニウムブロマイド等が挙げられる。
イミダゾリウム塩としては、以下の一般式（ＩＶ）で表わされるイミダゾリウム塩［以下、化合物（ＩＶ）という］が使用される。
式中、Ｒ６とＲ８は同一又は異なって、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニルを表し、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０は、水素原子、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アルケニルを表し、Ｚ−は、１価のアニオンを表す。
Ｒ６において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０の直鎖アルキル、炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。
Ｒ６において、置換若しくは非置換のアルケニルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。
Ｒ６において、置換アルキル及び置換アルケニルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数１〜２０の直鎖アルキル、炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数１〜２０の直鎖アルキルとしては、前述の炭素数１〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数３〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数３〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０において、置換若しくは非置換のアルケニルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数２〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数２〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数２〜２０のアルケニル等が挙げられる。
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０において、置換アルキル及び置換アルケニルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｚ−は、１価のアニオンを表す。１価のアニオンとしては、例えばハロゲンイオン、OH-、PF6 -、BF4 -、CH3CH2OSO3 -、(CF3SO2)2N-、(CH3O)2P(=O)O-、B(C6H5)4 -、FeCl4 -、CF3BF3 -、CF3SO3 -、(NC)2N-、CH3(OCH2CH2)2OSO3 -、CH3CH2OSO3 -、HSO4 -、p-CH3C6H4SO3 -等のアニオンが挙げられる。ハロゲンイオンとしては、例えばCl-、Br-、I-等が挙げられる。
化合物（ＩＶ）の具体例（製品）としては、例えば１−メチル−３−オクチルイミダゾリウムブロマイド（東京化成社製）、１−メチル−３−オクチルイミダゾリウムクロライド（東京化成社製）、１−ドデシル−２−メチル−３−ベンジルイミダゾリウムクロライド等が挙げられる。
イソキノリニウム塩としては、以下の一般式（Ｖ）で表わされるイソキノリニウム塩［以下、化合物（Ｖ）という］が使用される。
式中、Ｒ１１は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニルを表し、Ｗ−は、１価のアニオンを表す。
Ｒ１１において、置換若しくは非置換のアルキルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０の直鎖アルキル、炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の直鎖アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の直鎖アルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０の分岐アルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０の分岐アルキル等が挙げられる。
Ｒ１１において、置換若しくは非置換のアルケニルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。
Ｒ１１において、置換アルキル及び置換アルケニルにおける置換基としては、例えばフェニル基、水酸基、スルホ基、シアノ基、ハロゲン原子等が挙げられる。フェニル基置換アルキルとしては、例えばベンジル、１−フェニルエチル等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｗ−は、１価のアニオンを表す。１価のアニオンとしては、例えばハロゲンイオン等のアニオンが挙げられる。ハロゲンイオンとしては、例えばCl-、Br-、I-等が挙げられる。
化合物（Ｖ）の具体例（製品）としては、例えばＮ−ラウリルイソキノリニウムクロライド（日油社製）、Ｎ−ラルリルイソキノリニウムブロマイド（日油社製）等が挙げられる。
陰イオン性界面活性剤としては、例えば硫酸エステル塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩、リン酸エステル塩、スルホコハク酸塩、Ｎ−メチルタウリン塩、Ｎ−アルカノイル−Ｎ−メチルタウリン塩等が挙げられる。
両性界面活性剤としては、例えば第三級アミンオキサイド、アルキルカルボキシベタイン等が挙げられる。
非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルケニルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、エチレンジアミンテトラポリオキシエチレン、ポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられ、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテルが好ましい。
ポリオキシエチレンアルキルアミンにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。
ポリオキシエチレンアルケニルアミンにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えばオクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、オクタデセニル、オレイル、ノナデセニル、イコセニル等が挙げられる。
ポリオキシエチレンアルキルエーテルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルキル等が挙げられる。
ポリオキシエチレンアルケニルエーテルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。
ポリオキシエチレンアルケニルエーテルにおけるアルケニルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルケニルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルケニル等が挙げられる。
ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８〜２０のアルキル等が挙げられる。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えば前述の炭素数８〜２０のアルキル等が挙げられる。
総ヘモグロビン量は、公知の方法、例えばシアンメトヘモグロビン法、オキシヘモグロビン法、ＳＬＳ−ヘモグロビン法等によって決定することができる。総ヘモグロビン量は、ヘモグロビン含有試料そのもののみならず、ヘモグロビン含有試料にイソチアゾリノン誘導体及び／又は界面活性剤を添加して得られる試料、ヘモグロビン含有試料にイソチアゾリノン誘導体及び／又は界面活性剤とタンパク質分解酵素とを添加して得られる試料に対して、シアンメトヘモグロビン法、オキシヘモグロビン法、ＳＬＳ−ヘモグロビン法を適用することによっても決定することができる。
ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに、上記界面活性剤存在下、タンパク質分解酵素を作用させる反応は、上記界面活性剤存在下にタンパク質分解酵素が糖化ヘモグロビンに作用し得る条件であれば、いかなる条件下でも行うことができる。ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンと、タンパク質分解酵素との反応は、水性媒体中で行われることが好ましい。水性媒体としては後述の水性媒体等が挙げられる。ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンと、タンパク質分解酵素との反応における反応温度は、通常１０〜５０℃であり、２０〜４０℃が好ましく、反応時間は、通常１分間〜３時間であり、２．５分間〜１時間が好ましい。タンパク質分解酵素の濃度としては、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンと、タンパク質分解酵素との反応が進行する濃度であれば特に制限はなく、通常５０〜２５０００ｋＵ／Ｌであり、好ましくは２５０〜１００００ｋＵ／Ｌである。
タンパク質分解酵素としては、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンに作用し、糖化ヘモグロビンから糖化ペプチドを生成させる酵素であれば特に制限はなく、例えばセリンプロテアーゼ（キモトリプシン、スブチリシン等）、システインプロテアーゼ（パパイン、カスパーゼ等）、アスパラギン酸プロテアーゼ（ペプシン、カテプシンＤ等）、メタロプロテアーゼ（サーモリシン等）、Ｎ−末端スレオニンプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ等が挙げられる。本発明においては、市販のタンパク質分解酵素も使用することができ、市販品としては例えばプロテアーゼＰ「アマノ」３Ｇ、プロテアーゼＫ「アマノ」（以上、天野エンザイム社製）、アクチナーゼＡＳ、アクチナーゼＥ（以上、科研ファルマ社製）、サーモリシン（大和化成社製）、スミチームMP(新日本化学工業社製)等が挙げられる。
上記タンパク質分解酵素を作用させる反応における界面活性剤の濃度としては、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンと、タンパク質分解酵素との反応が進行する濃度であれば特に制限はなく、通常０．０００１〜１０％であり、好ましくは０．０００５〜５％である。
ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンと、タンパク質分解酵素との反応により、糖化ペプチドを含む反応生成物が生成する。次いで、この反応生成物中の糖化ペプチドに、フルクトシルペプチド酸化酵素と反応し、過酸化水素が生成する。糖化ペプチドとフルクトシルペプチド酸化酵素との反応は、水性媒体中で行われることが好ましい。水性媒体としては後述の水性媒体等が挙げられる。
糖化ペプチドとフルクトシルペプチド酸化酵素との反応における反応温度は、通常１０〜５０℃であり、２０〜４０℃が好ましく、反応時間は、通常１分間〜３時間であり、２．５分間〜１時間が好ましい。フルクトシルペプチド酸化酵素の濃度としては、糖化ヘモグロビンとフルクトシルペプチド酸化酵素との反応が進行する濃度であれば特に制限はなく、通常０．１〜３０ｋＵ／Ｌであり、好ましくは０．２〜１５ｋＵ／Ｌである。
フルクトシルペプチド酸化酵素としては、糖化ペプチドに作用して過酸化水素を生成させる酵素であれば特に制限はなく、例えば糸状菌由来、酵母由来、放線菌由来、バクテリア由来、古細菌由来のフルクトシルペプチド酸化酵素等が挙げられる。本発明においては、市販のフルクトシルペプチド酸化酵素も使用することができ、市販品としては例えばＦＰＯＸ−ＣＥ（キッコーマン社製）、ＦＰＯＸ−ＥＥ（キッコーマン社製）、ＦＰＯＸ−ＣＥＴ（キッコーマン社製）等が挙げられる。
生成した過酸化水素の測定方法としては、例えば電極を用いる方法、過酸化水素測定用試薬を用いる方法等が挙げられ、過酸化水素測定用試薬を用いる方法が好ましい。過酸化水素測定用試薬は、過酸化水素を検出可能な物質に変換するための試薬である。検出可能な物質としては、例えば色素、光（発光）、蛍光等が挙げられ、色素が好ましい。
検出可能な物質が色素の場合、過酸化水素測定用試薬は、ペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質と酸化発色型色原体を含む試薬等が挙げられる。酸化発色型色原体としては、酸化カップリング型色原体、ロイコ型色原体等が挙げられ、ロイコ型色原体が好ましい。ロイコ型色原体としては、例えばフェノチアジン系色原体、トリフェニルメタン系色原体、ジフェニルアミン系色原体、ｏ−フェニレンジアミン、ヒドロキシプロピオン酸、ジアミノベンジジン、テトラメチルベンジジン等が挙げられ、フェノチアジン系色原体が好ましい。フェノチアジン系色原体としては、例えば１０−Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＣＣＡＰ）、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＭＣＤＰ）、１０−Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン ナトリウム塩（ＤＡ−６７）等が挙げられる。フェノチアジン系色原体の中でも、１０−Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン ナトリウム塩（ＤＡ−６７）が特に好ましい。トリフェニルメタン系色原体としては、例えばＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４’’−トリアミノトリフェニルメタン（ＴＰＭ−ＰＳ）等が挙げられる。ジフェニルアミン系色原体としては、例えばＮ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン ナトリウム塩（ＤＡ−６４）、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン、ビス〔３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル〕アミン（ＢＣＭＡ）等が挙げられる。
検出可能な物質が光（発光）の場合、過酸化水素測定用試薬は、ペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質と化学発光物質を含む試薬等が挙げられる。化学発光物質としては、例えばルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル等が挙げられる。
検出可能な物質が蛍光の場合、過酸化水素測定用試薬は、ペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質と蛍光物質を含む試薬等が挙げられる。蛍光物質としては、例えば４−ヒドロキシフェニル酢酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、クマリン等が挙げられる。
（２）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定試薬
本発明の、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定試薬は、タンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む試薬であり、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法に用いられる。本発明の測定試薬は、さらに、過酸化水素測定試薬を含んでいてもよい。
本発明の、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定試薬は、タンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む試薬であり、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法に用いられる。本発明の測定試薬は、さらに、過酸化水素測定試薬を含んでいてもよい。
本発明の測定試薬におけるタンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、界面活性剤、及び、過酸化水素測定試薬としては、例えば、それぞれ、前述のタンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、界面活性剤、及び、過酸化水素測定試薬等が挙げられる。
本発明の測定試薬におけるタンパク質分解酵素の濃度は、通常５０〜２５０００ｋＵ／Ｌであり、好ましくは２５０〜１００００ｋＵ／Ｌである。本発明の測定試薬におけるフルクトシルペプチド酸化酵素の濃度は、通常０．１〜３０ｋＵ／Ｌであり、好ましくは０．２〜１５ｋＵ／Ｌである。
本発明の測定試薬におけるイソチアゾリノン誘導体の濃度は、通常０．００５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｍｏｌ／Ｌである。
本発明の測定試薬における界面活性剤の濃度は、通常０．０００１〜１０％であり、好ましくは０．０００５〜５％である。
本発明の測定試薬には、必要に応じて、水性媒体、安定化剤、防腐剤、塩類、干渉物質消去剤、有機溶媒等が含有されてもよい。
水性媒体としては、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。
水性媒体としては、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。
水性媒体のｐＨは、例えばｐＨ４〜１０である。水性媒体として緩衝液を用いる場合には、設定するｐＨに応じた緩衝剤を用いることが望ましい。緩衝液に用いる緩衝剤としては、例えばトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、グッドの緩衝剤等が挙げられる。
グッドの緩衝剤としては、例えば２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−ヒドロキシ−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、３−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、３−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕プロパンスルホン酸〔（Ｈ）ＥＰＰＳ〕、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）等が挙げられる。
緩衝液の濃度は、通常０．００１〜２．０ｍｏｌ／Ｌであり、０．００５〜１．０ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
安定化剤としては、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、シュークロース、塩化カルシウム、酢酸カルシウム、硝酸カルシウム、フェロシアン化カリウム、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル等のポリオキシエチレン系界面活性剤等が挙げられる。防腐剤としては、例えばアジ化ナトリウム、抗生物質等があげられる。塩類としては、例えば塩化ナトリウム、硝酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム、硝酸カリウム、硫酸カリウム、炭酸カリウム、ギ酸カリウム、酢酸カリウム、等が挙げられる。干渉物質消去剤としては、例えばアスコルビン酸の影響を消去するためのアスコルビン酸オキシダーゼ等が挙げられる。有機溶媒としては、例えばロイコ型色原体の水性媒体への溶解補助剤のためのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、アセトン、メタノール、エタノール等が挙げられる。
（３）ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定キット
本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定試薬は、キットの形態で保存、流通及び使用されてよい。本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定キットは、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法に用いられる。本発明の測定キットとしては、例えば２試薬系のキット、３試薬系のキット等が挙げられ、２試薬系キットが好ましい。
本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定試薬は、キットの形態で保存、流通及び使用されてよい。本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定キットは、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法に用いられる。本発明の測定キットとしては、例えば２試薬系のキット、３試薬系のキット等が挙げられ、２試薬系キットが好ましい。
本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定キットは、本発明のヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビン測定方法を可能とするキットであれば、特に制限はなく、２試薬系キットの場合は、例えばタンパク質分解酵素を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む第２試薬とを含むキットや、タンパク質分解酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素を含む第２試薬とを含むキット等が挙げられる。
さらに、本発明の糖化ヘモグロビン測定キットとして、これらのキットの第１試薬、第２試薬のいずれか又は両方に過酸化水素測定試薬が含まれるキットが挙げられる。特に、過酸化水素測定試薬として、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬を用いる場合は、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とは別々の試薬に含まれることが好ましい。すなわち、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とが、それぞれ第１試薬と第２試薬に、又は、第２試薬と第１試薬に含まれることが好ましい。
本発明の測定キットを構成する試薬中のタンパク質分解酵素の濃度は、通常１００〜３００００ｋＵ／Ｌであり、好ましくは５００〜１００００ｋＵ／Ｌである。本発明の測定キットを構成する試薬中のフルクトシルペプチド酸化酵素の濃度は、通常０．５〜１００ｋＵ／Ｌであり、好ましくは１〜５０ｋＵ／Ｌである。
本発明の測定キットを構成する試薬中のイソチアゾリノン誘導体の濃度は、通常０．００５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｍｏｌ／Ｌである。
本発明の測定キットを構成する試薬中のイソチアゾリノン誘導体の濃度は、通常０．００５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは０．０１〜１０ｍｍｏｌ／Ｌである。
本発明の測定キットを構成する試薬中の界面活性剤の濃度は、通常０．０００１〜４０％であり、好ましくは０．０００５〜２０％である。
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を何ら限定するものではない。
尚、本実施例、比較例及び試験例においては、下記メーカーの試薬及び酵素を使用した。
尚、本実施例、比較例及び試験例においては、下記メーカーの試薬及び酵素を使用した。
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（同仁化学研究所社製）、ＡＤＡ（同仁化学研究所社製）、ＭＥＳ（同仁化学研究所社製）、塩化カルシウム２水和物（和光純薬工業社製）、酢酸カルシウム（和光純薬工業社製）、硝酸カルシウム（和光純薬工業社製）、ＤＡ−６７（和光純薬工業社製）、１−ドデシルピリジニウムクロライド（Ｃ１２ｐｙ）［化合物（ＩＩ）；東京化成社製］、デシルトリメチルアンモニウムブロマイド（Ｃ１０ＴＭＡ）（第四級アンモニウム塩；東京化成社製）、ＮＩＫＫＯＬ ＬＭＴ（ＬＭＴ）［Ｎ−アルカノイル−Ｎ−メチルタウリン塩（Ｎ−ラウロイル−Ｎ−メチルタウリン ナトリウム塩）；日光ケミカルズ社製］、アノンＢＬ［アルキルカルボキシベタイン（ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン）；日本油脂社製］、２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン（イソチアゾリノン誘導体；東京化成社製）、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン（イソチアゾリノン誘導体；和光純薬工業社製）、４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン（ハイオム社製）、サーモリシン（タンパク質分解酵素；大和化成社製）、アクチナーゼＥ（タンパク質分解酵素；科研ファルマ社製）、ＦＰＯＸ−ＣＥ（フルクトシルペプチド酸化酵素；キッコーマン社製）、ＦＰＯＸ−ＣＥＴ（フルクトシルペプチド酸化酵素；キッコーマン社製）、ペルオキシダーゼ（東洋紡績社製）、トリトンＸ−４０５（ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；シグマ−アルドリッチ社製）。
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．２ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．４ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．０４ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン ０．０４ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン
０．０４ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン
０．０４ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン ０．２ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン
０．０４ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
４，５−ジクロロ−２−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン
０．０４ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
ＨｂＡ１ｃ測定キットとして、実施例１のキットを、試料として、糖尿病が疑われる１０名の被験者由来の全血を用いて、以下の手順により、各試料におけるＨｂＡ１ｃ濃度（量）の総ヘモグロビン濃度（量）に対する割合［ＨｂＡ１ｃ（％）］を決定した。
（１）総ヘモグロビン濃度決定のための検量線の作成
測定キットとして、総ヘモグロビン測定用キットであるヘモグロビンＢ−テストワコー（ＳＬＳ−ヘモグロビン法）（和光純薬工業社製）を用いて、検体として、ヘモグロビンＢ−テストワコーに付属の標準品（ヘモグロビン濃度：１５．３ｍｇ／ｍＬ）を用いて、ヘモグロビン濃度と吸光度との関係を示す検量線を作成した。
測定キットとして、総ヘモグロビン測定用キットであるヘモグロビンＢ−テストワコー（ＳＬＳ−ヘモグロビン法）（和光純薬工業社製）を用いて、検体として、ヘモグロビンＢ−テストワコーに付属の標準品（ヘモグロビン濃度：１５．３ｍｇ／ｍＬ）を用いて、ヘモグロビン濃度と吸光度との関係を示す検量線を作成した。
（２）ＨｂＡ１ｃ濃度決定のための検量線の作成
ラテックス免疫凝集法と、血球画分の総ヘモグロビン値とから、ＨｂＡ１ｃ濃度が２．７７μｍｏｌ／Ｌ、６．３３μｍｏｌ／Ｌと値付けされた２つの血球画分について、実施例１のＨｂＡ１ｃ測定キットを用いて測定し、各血球画分に対する吸光度を測定した。当該血球画分の代わりに生理食塩水を用いて、生理食塩水に対するＨｂＡ１ｃ濃度を測定した。当該血球画分に対するそれぞれの吸光度から、生理食塩水に対する吸光度を差し引いて算出した値を、当該血球画分に対するブランク補正吸光度とした。当該血球画分に対するブランク補正吸光度と、生理食塩水に対するブランク補正吸光度（０ Ａｂｓ）とから、ＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と吸光度との間の関係を示す検量線を作成した。
ラテックス免疫凝集法と、血球画分の総ヘモグロビン値とから、ＨｂＡ１ｃ濃度が２．７７μｍｏｌ／Ｌ、６．３３μｍｏｌ／Ｌと値付けされた２つの血球画分について、実施例１のＨｂＡ１ｃ測定キットを用いて測定し、各血球画分に対する吸光度を測定した。当該血球画分の代わりに生理食塩水を用いて、生理食塩水に対するＨｂＡ１ｃ濃度を測定した。当該血球画分に対するそれぞれの吸光度から、生理食塩水に対する吸光度を差し引いて算出した値を、当該血球画分に対するブランク補正吸光度とした。当該血球画分に対するブランク補正吸光度と、生理食塩水に対するブランク補正吸光度（０ Ａｂｓ）とから、ＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と吸光度との間の関係を示す検量線を作成した。
（３）各血球画分におけるヘモグロビン濃度の決定
各試料に対して、２５℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、血球画分を得た。各血球画分について、ヘモグロビンＢ−テストワコーを用いて測定し、得られた測定値と（１）の検量線とから、各血球画分中のヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
各試料に対して、２５℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、血球画分を得た。各血球画分について、ヘモグロビンＢ−テストワコーを用いて測定し、得られた測定値と（１）の検量線とから、各血球画分中のヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
（４）各血球画分におけるＨｂＡ１ｃ濃度の決定
各血球画分について、実施例１の測定キットを用いて測定し、得られた測定値と（２）の検量線とから、各血球画分中のＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
各血球画分について、実施例１の測定キットを用いて測定し、得られた測定値と（２）の検量線とから、各血球画分中のＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
（５）ＨｂＡ１ｃ（％）（＝ＨｂＡ１ｃ濃度のヘモグロビン濃度に対する割合）の決定
上記（３）で決定した各血球画分におけるヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と、上記（４）で決定した各血球画分におけるＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）とから、以下の式により、日本糖尿病学会（Japan Diabetes Society；ＪＤＳ）値のＨｂＡ１ｃ（％）を算出した。
上記（３）で決定した各血球画分におけるヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と、上記（４）で決定した各血球画分におけるＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）とから、以下の式により、日本糖尿病学会（Japan Diabetes Society；ＪＤＳ）値のＨｂＡ１ｃ（％）を算出した。
（６）同一血球画分中のＨｂＡ１ｃ（％）の免疫測定法での決定
上記（５）でのＨｂＡ１ｃ（％）の決定に使用した血球画分と同一の血球画分を用いて、各血球画分中のＨｂＡ１ｃ（％）を、デタミナーＬ ＨｂＡ１ｃ（協和メデックス社製）を用いる免疫測定法により、デタミナーＬ ＨｂＡ１ｃの添付文書に記載の方法に従って決定した。
上記（５）でのＨｂＡ１ｃ（％）の決定に使用した血球画分と同一の血球画分を用いて、各血球画分中のＨｂＡ１ｃ（％）を、デタミナーＬ ＨｂＡ１ｃ（協和メデックス社製）を用いる免疫測定法により、デタミナーＬ ＨｂＡ１ｃの添付文書に記載の方法に従って決定した。
（７）本発明の測定方法と免疫測定法との相関
本発明の測定方法を用いて、上記（５）で決定したＨｂＡ１ｃ（％）と、免疫測定法を用いて、上記（６）で決定したＨｂＡ１ｃ（％）とから、本発明の測定方法と免疫測定法との間の相関関係を検証し、相関係数を決定した。
本発明の測定方法を用いて、上記（５）で決定したＨｂＡ１ｃ（％）と、免疫測定法を用いて、上記（６）で決定したＨｂＡ１ｃ（％）とから、本発明の測定方法と免疫測定法との間の相関関係を検証し、相関係数を決定した。
同様に、実施例１の測定キットの代わりに、実施例２〜２２の測定キットを用いて、デタミナーＬ ＨｂＡ１ｃ（協和メデックス社製）を用いた測定との間の相関係数を決定した。その結果を第１表に示す。
第１表に示す通り、実施例１〜２２の測定キットを用いる本発明の測定方法と、免疫測定法との間に良好な相関関係が認められた。従って、実施例１〜２２の測定キットを用いる本発明の測定方法により、試料中のＨｂＡ１ｃを正確、かつ、高感度に測定できることが明らかとなった。
［比較例１］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
［比較例２］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
［比較例３］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
［比較例４］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ４０ｋＵ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ６０μｍｏｌ／Ｌ
［比較例５］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例６］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１０ＴＭＡ １６ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例７］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＬＭＴ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例８］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
アノンＢＬ ５ｇ／Ｌ
塩化カルシウム２水和物 １０ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥ ６ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例９］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．０） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．２ｇ／Ｌ
酢酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ２．５ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例１０］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
サーモリシン １８００ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［比較例１１］
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
以下の第１試薬及び第２試薬からなるＨｂＡ１ｃ測定キットを調製した。
第１試薬
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃ１２ｐｙ １．６ｇ／Ｌ
硝酸カルシウム １０ｍｍｏｌ／Ｌ
硝酸ナトリウム １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アクチナーゼＥ ３４０ｋＵ／Ｌ
ＤＡ−６７ ２０μｍｏｌ／Ｌ
第２試薬
ＡＤＡ（ｐＨ７．０） ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＦＰＯＸ−ＣＥＴ ６ｋＵ／Ｌ
トリトンＸ−４０５ ７．１ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ １２０ｋＵ／Ｌ
［試験例１］ イソチアゾリノン誘導体の効果（１）
（１）溶血検体の調製
ヒト血液を遠心分離して得られた血球画分を、ヘモグロビン測定試薬であるネスコート ヘモキット−Ｎ（アルフレッサファーマ社製）を用いて測定し、該血球画分のヘモグロビン濃度を決定した。次いで、この値付けされた該血球画分を精製水で希釈して溶血させ、ヘモグロビン濃度が２ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの各溶血検体を調製した。
（１）溶血検体の調製
ヒト血液を遠心分離して得られた血球画分を、ヘモグロビン測定試薬であるネスコート ヘモキット−Ｎ（アルフレッサファーマ社製）を用いて測定し、該血球画分のヘモグロビン濃度を決定した。次いで、この値付けされた該血球画分を精製水で希釈して溶血させ、ヘモグロビン濃度が２ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬの各溶血検体を調製した。
（２）溶血検体に対する反応吸光度の測定
キットとして、実施例１のキットを用いて、検体として、生理食塩水（ヘモグロビン濃度が０ｍｇ／ｍＬ）及び（１）で調製した溶血検体を用いて、以下の方法により、各検体に対する反応吸光度を測定した。
キットとして、実施例１のキットを用いて、検体として、生理食塩水（ヘモグロビン濃度が０ｍｇ／ｍＬ）及び（１）で調製した溶血検体を用いて、以下の方法により、各検体に対する反応吸光度を測定した。
反応セルへ、検体９．６μＬと、実施例１のキットの第１試薬１２０μＬとを添加し、３７℃で５分間加温し（第一反応）、反応液の吸光度（Ｅ１）を主波長６６０ｎｍ、副波長８００ｎｍで測定し、次いでこの反応液に第２試薬４０μＬを添加しさらに３７℃で５分間加温し（第二反応）、反応液の吸光度（Ｅ２）を主波長６６０ｎｍ、副波長８００ｎｍで測定し、Ｅ２からＥ１を差し引いた吸光度差△Ｅ（＝Ｅ２−Ｅ１）を、各検体に対する反応吸光度とした。
キットとして、実施例１のキットの代わりに，実施例２及び比較例１の各キットを用いて、同様の方法により、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第１図に示す。
第１図から明らかな様に、イソチアゾリノン誘導体を含む実施例１及び２のキットを用いる本発明の測定方法においては、ヘモグロビン濃度に比例して反応吸光度が上昇したが、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例１のキットを用いる測定方法においては、ヘモグロビン濃度と反応吸光度との間に比例関係が認められなかった。測定に用いた溶血検体は、同一のヒト血液より調製されたものであるため、ＨｂＡ１ｃ濃度はヘモグロビン濃度に依存して高くなる。従って、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例１のキットを用いる測定方法は、ヘモグロビンの影響を強く受け、ＨｂＡ１ｃの正確な測定が困難であるのに対して、イソチアゾリノン誘導体を含む実施例１及び２のキットを用いる本発明の測定方法は、ヘモグロビンの影響を受けず、ＨｂＡ１ｃの正確な測定が可能であることが分かった。
さらに、キットとして、実施例１のキットの代わりに、実施例９、１０及び比較例５の各キットを用いて、同様の方法により、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第２図に示す。
第２図から明らかな様に、イソチアゾリノン誘導体を含む実施例９及び１０のキットを用いる本発明の測定方法においては、ヘモグロビン濃度に比例して反応吸光度が上昇したが、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例５のキットを用いる測定方法においては、ヘモグロビン濃度と反応吸光度との間に比例関係が認められなかった。測定に用いた溶血検体は、同一のヒト血液より調製されたものであるため、ＨｂＡ１ｃ濃度はヘモグロビン濃度に依存して高くなる。従って、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例５のキットを用いる測定方法は、ヘモグロビンの影響を強く受け、ＨｂＡ１ｃの正確な測定が困難であるのに対して、イソチアゾリノン誘導体を含む実施例９及び１０のキットを用いる本発明の測定方法は、ヘモグロビンの影響を受けず、ＨｂＡ１ｃの正確な測定が可能であることが分かった。
［試験例２］ イソチアゾリノン誘導体の効果（２）
キットとして、実施例１のキットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて測定を行い、得られた測定値を基に、実施例９の（２）で作成したＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と吸光度との間の関係を示す検量線から、各検体中のＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。一方、各検体中のヘモグロビン濃度を、ヘモグロビンＢ−テストワコーを用いて測定し、得られた測定値と実施例９の（１）で作成した検量線とから、各検体中のヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
キットとして、実施例１のキットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて測定を行い、得られた測定値を基に、実施例９の（２）で作成したＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）と吸光度との間の関係を示す検量線から、各検体中のＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。一方、各検体中のヘモグロビン濃度を、ヘモグロビンＢ−テストワコーを用いて測定し、得られた測定値と実施例９の（１）で作成した検量線とから、各検体中のヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を決定した。
決定した各検体中のＨｂＡ１ｃ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）とヘモグロビン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）とから、以下の式により、日本糖尿病学会（Japan Diabetes Society；ＪＤＳ）値のＨｂＡ１ｃ（％）を算出した。
キットとして、実施例１のキットの代わりに、実施例２〜１３、１５、１７〜２２及び比較例１〜１１の各キットを用いて同様の測定を行い、それぞれのキットに対して、各検体中のＨｂＡ１ｃ濃度（％）を測定した。ヘモグロビン濃度が６ｍｇ／ｍＬである検体でのＨｂＡ１ｃ濃度（％）を基準０とし、その基準からの各検体のＨｂＡ１ｃ濃度（％）の差［△ＨｂＡ１ｃ濃度（％）］を算出した。その結果を第２表に示す。
前述の通り、測定に用いた溶血検体は、同一のヒト血液より調製されたものであるため、総ヘモグロビンに対するＨｂＡ１ｃの割合（％）は、ヘモグロビン濃度に拠らず一定である。従って、△ＨｂＡ１ｃ濃度（％）が０に近い程、ＨｂＡ１ｃ測定方法がヘモグロビン濃度の影響を受けない、ということになる。第２表から明らかな通り、イソチアゾリノン誘導体を含む本発明のキットでは、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例のキットに比較して、ヘモグロビン濃度の影響を受けないことが判明した。
［試験例３］ イソチアゾリノン誘導体の効果（３）
キットとして、実施例７，８及び比較例４の各キットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて、試験例１と同様の方法により、それぞれのキットにおいて、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第３図に示す。
キットとして、実施例７，８及び比較例４の各キットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて、試験例１と同様の方法により、それぞれのキットにおいて、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第３図に示す。
同様に、キットとして、実施例１５、１６及び比較例８の各キットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて、試験例１と同様の方法により、それぞれのキットにおいて、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第４図に示す。
同様に、キットとして、実施例２１、２２及び比較例１１の各キットを、検体として、試験例１の（１）で調製した溶血検体を用いて、試験例１と同様の方法により、それぞれのキットにおいて、各検体に対する反応吸光度を測定した。その結果を第５図に示す。
第３図及び第４図から明らかな通り、本発明のキット及び比較例のキットのいずれのキットにおいても、ヘモグロビン濃度に比例して反応吸光度が上昇したが、イソチアゾリノン誘導体を含む本発明のキットを用いる場合は、イソチアゾリノンを含まない比較例のキットを用いる場合に比較して、同一濃度のヘモグロビンの検体（すなわち、同一濃度のＨｂＡ１ｃの検体）において、反応吸光度が高いことが判明した。
前述の通り、測定に用いた溶血検体は、同一のヒト血液より調製されたものであるため、ＨｂＡ１ｃ濃度はヘモグロビン濃度に依存して高くなる。同一濃度のＨｂＡ１ｃの検体においては、反応吸光度が高い程、ヘモグロビンの影響を受けず、測定データとしての信頼度が高いことになる。特に、低濃度のＨｂＡ１ｃの検体においては、高い反応吸光度が得られることが重要となる。実施例７及び８のキットを用いる場合は、比較例４のキットを用いる場合に比較して、同一濃度のＨｂＡ１ｃの検体において、高い反応吸光度が得られた。同様に、実施例１５及び１６のキットを用いる場合は、比較例８のキットを用いる場合に比較して、実施例２１及び２２のキットを用いる場合は、比較例１１のキットを用いる場合に比較して、同一濃度のＨｂＡ１ｃの検体において、高い反応吸光度が得られた。従って、イソチアゾリノン誘導体を含む本発明のキットを用いる測定方法は、イソチアゾリノン誘導体を含まない比較例のキットを用いる測定方法と比較して、ヘモグロビンの影響を受けず、かつ、高感度なＨｂＡ１ｃの測定が可能となることが判明した。
本発明により、糖尿病の診断に有用な糖化ヘモグロビンの測定等に有用な、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キットが提供される。
Claims (15)
- ヘモグロビン含有試料に、界面活性剤存在下に、タンパク質分解酵素を作用させた後、フルクトシルペプチド酸化酵素を作用させる反応において、当該反応をイソチアゾリノン誘導体存在下に行い、生成した過酸化水素を測定することを特徴とする、ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法。
- イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である請求項１記載の測定方法。
- 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である請求項２記載の測定方法。
- 過酸化水素の測定が、過酸化水素測定試薬により行われる、請求項１〜３のいずれかに記載の測定方法。
- 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である請求項４記載の測定方法。
- ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するための試薬であって、タンパク質分解酵素、フルクトシルペプチド酸化酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定試薬。
- イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である請求項６記載の測定試薬。
- 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である請求項７記載の測定試薬。
- さらに、過酸化水素測定試薬を含む、請求項６〜８のいずれかに記載の測定試薬。
- 過酸化水素測定試薬が、ペルオキシダーゼとロイコ型色原体とを含む試薬である請求項９記載の試薬。
- ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するためのキットであって、タンパク質分解酵素、イソチアゾリノン誘導体、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素を含む第２試薬とを含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定キット。
- ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンを測定するためのキットであって、タンパク質分解酵素、及び、界面活性剤を含む第１試薬と、フルクトシルペプチド酸化酵素、及び、イソチアゾリノン誘導体を含む第２試薬とを含むことを特徴とする糖化ヘモグロビン測定キット。
- イソチアゾリノン誘導体が、下記式（Ｉ）で表わされる化合物である請求項１１または１２記載の測定キット。
- 式（Ｉ）で表わされる化合物が、２−アルキル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン、及び、２−アルキル−４，５−ジハロゲノ−４−イソチアゾリン−３−オンからなる群より選ばれるイソチアゾリノン誘導体である請求項１３記載の測定キット。
- さらに、ペルオキシダーゼ及びロイコ型色原体が、それぞれ第１試薬と第２試薬、又は、第２試薬と第１試薬に含まれる、請求項１１〜１４のいずれかに記載の測定キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012528677A JP5871800B2 (ja) | 2010-08-11 | 2011-08-09 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010180562 | 2010-08-11 | ||
| JP2010180562 | 2010-08-11 | ||
| JP2012528677A JP5871800B2 (ja) | 2010-08-11 | 2011-08-09 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| PCT/JP2011/068103 WO2012020744A1 (ja) | 2010-08-11 | 2011-08-09 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2012020744A1 true JPWO2012020744A1 (ja) | 2013-10-28 |
| JP5871800B2 JP5871800B2 (ja) | 2016-03-01 |
Family
ID=45567707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012528677A Active JP5871800B2 (ja) | 2010-08-11 | 2011-08-09 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130171676A1 (ja) |
| EP (1) | EP2604698A4 (ja) |
| JP (1) | JP5871800B2 (ja) |
| KR (1) | KR20130107268A (ja) |
| CN (1) | CN103124793B (ja) |
| BR (1) | BR112013001398A2 (ja) |
| CA (1) | CA2806261A1 (ja) |
| WO (1) | WO2012020744A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150004635A1 (en) * | 2012-02-09 | 2015-01-01 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for suppressing the effects of ascorbic acid |
| EP3020825B1 (en) * | 2013-07-09 | 2020-02-19 | Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. | Method for measuring glycated hemoglobin |
| US10619183B2 (en) | 2013-08-09 | 2020-04-14 | Kikkoman Corporation | Modified amadoriase and method for producing the same, agent for improving surfactant resistance of amadoriase and composition for measuring HbA1c using the same |
| KR102228913B1 (ko) * | 2013-12-10 | 2021-03-17 | 삼성전자주식회사 | 미세유동장치 및 검사장치 |
| CN106461682B (zh) | 2014-05-06 | 2018-09-21 | 德赛诊断系统有限公司 | HbA1c的酶促测定 |
| JP7094655B2 (ja) | 2014-11-07 | 2022-07-04 | キッコーマン株式会社 | アニオン性界面活性剤耐性が向上したアマドリアーゼ |
| WO2016186521A1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Canterbury Scientific Limited | Haemolysis stabilising composition |
| CN109563534B (zh) * | 2016-07-29 | 2022-02-11 | 日立化成诊断系统株式会社 | 糖化血红蛋白的测定方法 |
| WO2018160216A1 (en) | 2017-03-03 | 2018-09-07 | Polymer Technology Systems, Inc. | Systems and methods for enzymatic a1c detection and quantification |
| US11703513B2 (en) | 2017-08-07 | 2023-07-18 | Polymer Technology Systems, Inc. | Systems and methods for enzymatic A1C detection and quantification |
| EP3724348B1 (en) * | 2017-12-12 | 2023-04-12 | Polymer Technology Systems, Inc. | Systems and methods for sample preparation for enzymatic a1c detection and quantification |
| WO2020041519A1 (en) * | 2018-08-22 | 2020-02-27 | Quest Diagnostics Investments Llc | Microsampling detection in diabetes |
| EP3887398A4 (en) * | 2018-11-29 | 2022-10-19 | Polymer Technology Systems, Inc. | SYSTEMS AND METHODS OF ELECTROCHEMICAL POINT OF HEMOGLOBIN DETECTION |
| CN110297048A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-10-01 | 上海交通大学 | 一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法 |
| CN110687306B (zh) * | 2019-10-30 | 2023-04-25 | 深圳上泰生物工程有限公司 | 一种直接机上溶血酶法双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006013921A1 (ja) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Asahi Kasei Pharma Corporation | プロテアーゼ反応促進剤及び／又は色素の安定化剤を含む試薬 |
| US20080102525A1 (en) * | 2006-10-26 | 2008-05-01 | Rannikko Minna A | Novel standard reference solutions |
| JP2009544315A (ja) * | 2006-07-25 | 2009-12-17 | ジェネラル アトミクス | 糖化ヘモグロビンのパーセントを定量するための方法 |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8530188D0 (en) * | 1985-12-06 | 1986-01-15 | Unilever Plc | Enzymatic liquid detergent composition |
| JPH0878B2 (ja) | 1989-06-09 | 1996-01-10 | 和光純薬工業株式会社 | 体液成分の測定方法 |
| US6174728B1 (en) * | 1998-04-03 | 2001-01-16 | Avl Medical Instruments Ag | Control or calibration standard for use with instruments for optical measurement of hemoglobin concentration in blood samples |
| JP4045322B2 (ja) | 1998-11-17 | 2008-02-13 | アークレイ株式会社 | 酸化還元反応を用いた測定方法 |
| US20020098589A1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Crews Harold Richardson | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells |
| JP3949854B2 (ja) * | 1999-10-01 | 2007-07-25 | キッコーマン株式会社 | 糖化蛋白質の測定方法 |
| US7354732B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-04-08 | Arkray, Inc. | Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound |
| JP2007147630A (ja) | 2002-06-14 | 2007-06-14 | Arkray Inc | スルホン酸化合物およびニトロ化合物を用いた測定方法 |
| KR20060123751A (ko) | 2003-11-19 | 2006-12-04 | 다이이치 가가쿠 야쿠힝 가부시키가이샤 | 헤모글로빈 함유 시료 중의 기질의 측정방법 |
| WO2005056823A1 (ja) * | 2003-12-12 | 2005-06-23 | Arkray, Inc. | 糖化アミンの測定方法 |
| WO2005088300A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-22 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Assay chip |
| EP1726660A4 (en) * | 2004-03-17 | 2009-08-05 | Daiichi Pure Chemicals Co Ltd | METHOD OF MEASURING GLYCOPROTEINS |
| US20080193482A1 (en) * | 2004-09-21 | 2008-08-14 | Woodward John R | Method of cancer screening; method of cancer treatment; and method of auto-immune disease treatment |
| US20100028326A1 (en) * | 2004-12-07 | 2010-02-04 | Ohio University | Diagnosis of hyperinsulinemia and type ii diabetes and protection against same based on proteins differentially expressed in serum |
| US7541190B2 (en) * | 2005-02-07 | 2009-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Method of measurement of cellular hemoglobin |
| US20090117660A1 (en) * | 2005-04-30 | 2009-05-07 | Oakville Hong Kong Co., Limited | Devices and methods for sample collection and analysis |
| US8062901B2 (en) * | 2005-04-30 | 2011-11-22 | Alere Switzerland Gmbh | Devices and methods for sample collection and analysis |
| US7893273B2 (en) * | 2006-04-03 | 2011-02-22 | Beijing Tianqing Chemicals Co. Ltd. | Preparation of N-substituted isothiazolinone derivatives |
| EP2032979B1 (en) * | 2006-06-06 | 2018-07-18 | Roche Diagnostics GmbH | Differential hemolysis of a whole blood sample |
| JP2011506442A (ja) * | 2007-12-11 | 2011-03-03 | コンジュケム バイオテクノロジーズ インコーポレイテッド | インスリン分泌性ペプチド結合体の製剤 |
| US7968279B2 (en) * | 2008-08-13 | 2011-06-28 | Beckman Coulter, Inc. | Reference control for cell by cell analysis |
| WO2010148130A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Maine Standards Company, Llc | Method for measuring lipoprotein-specific apolipoproteins |
| EP2629774A4 (en) * | 2010-10-19 | 2014-08-27 | Elcelyx Therapeutics Inc | THERAPIES BASED ON A CHIMIOSENSORIAL RECEPTOR LIGAND |
| WO2012054527A2 (en) * | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Elcelyx Therapeutics, Inc. | Chemosensory receptor ligand-based therapies |
-
2011
- 2011-08-09 BR BR112013001398A patent/BR112013001398A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-08-09 JP JP2012528677A patent/JP5871800B2/ja active Active
- 2011-08-09 KR KR1020137002549A patent/KR20130107268A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-08-09 EP EP11816408.6A patent/EP2604698A4/en not_active Withdrawn
- 2011-08-09 CN CN201180038629.XA patent/CN103124793B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-09 WO PCT/JP2011/068103 patent/WO2012020744A1/ja active Application Filing
- 2011-08-09 US US13/811,911 patent/US20130171676A1/en not_active Abandoned
- 2011-08-09 CA CA2806261A patent/CA2806261A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006013921A1 (ja) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Asahi Kasei Pharma Corporation | プロテアーゼ反応促進剤及び／又は色素の安定化剤を含む試薬 |
| JP2009544315A (ja) * | 2006-07-25 | 2009-12-17 | ジェネラル アトミクス | 糖化ヘモグロビンのパーセントを定量するための方法 |
| US20080102525A1 (en) * | 2006-10-26 | 2008-05-01 | Rannikko Minna A | Novel standard reference solutions |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CHEW, A.L., ET AL.: "1,2-Benzisothiazolin-3-one (Proxel): irritant or allergen? A clinical study and literature review.", CONTACT DERMATITIS, vol. 36, no. 3, JPN6011048744, March 1997 (1997-03-01), pages 131 - 136, XP055070562, ISSN: 0003224860, DOI: 10.1111/j.1600-0536.1997.tb00394.x * |
| HIROKAWA, K., ET AL.: "An enzymatic method for the determination of hemoglobinA1C.", BIOTECHNOL. LETT., vol. 27, no. 14, JPN6011048742, July 2005 (2005-07-01), pages 963 - 968, XP019230894, ISSN: 0003224858, DOI: 10.1007/s10529-005-7832-x * |
| SIGMA-ALDRICH, PROCLIN(R) PRESERVATIVE FOR DIAGNOSTIC REAGENTS, JPN6015028456, 2009, ISSN: 0003224856 * |
| THORMANN, J.: "Contact dermatitis to a new fungicide, 2-n-octyl-4-isothiazolin-3-one.", CONTACT DERMATITIS, vol. 8, no. 3, JPN6011048743, May 1982 (1982-05-01), pages 204, ISSN: 0003224859 * |
| 廣川 浩三: "糖尿病診断に用いる新規酵素の開発", BIO INDUSTRY, vol. 26, no. 1, JPN6011048741, 12 January 2009 (2009-01-12), pages 73 - 80, ISSN: 0003224857 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103124793A (zh) | 2013-05-29 |
| EP2604698A1 (en) | 2013-06-19 |
| KR20130107268A (ko) | 2013-10-01 |
| EP2604698A4 (en) | 2014-02-19 |
| BR112013001398A2 (pt) | 2016-05-24 |
| CN103124793B (zh) | 2014-12-31 |
| US20130171676A1 (en) | 2013-07-04 |
| JP5871800B2 (ja) | 2016-03-01 |
| CA2806261A1 (en) | 2012-02-16 |
| WO2012020744A1 (ja) | 2012-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5871800B2 (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
| JP6236318B2 (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キット | |
| JP5955220B2 (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
| JP7020413B2 (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
| JP6144208B2 (ja) | アスコルビン酸の影響抑制方法 | |
| JP7195847B2 (ja) | 糖化蛋白質の測定 | |
| US20200200769A1 (en) | Method for measuring glycated hemoglobin | |
| WO2021192465A1 (ja) | 異常ヘモグロビン含有試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
| WO2021192466A1 (ja) | ヘモグロビンの影響軽減方法、糖化ヘモグロビンの測定方法、糖化ヘモグロビン測定試薬、及び糖化ヘモグロビン測定キット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140526 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140526 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150713 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150903 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160105 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160112 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5871800 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |