CN110297048A - 一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，即在同时分离检测血红蛋白同系物HbA0、HbA1c和LHbA1c的基础上，按照[HbA1c]/([HbA0]+[HbA1c]+[LHbA1c])和[LHbA1c]/([HbA0]+[HbA1c]+[LHbA1c])比值分别计量HbA1c和LHbA1c的相对含量。与现有的糖化血红蛋白相对含量测定方法相比，本发明的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法具有抗各种异常血红蛋白、血红蛋白异常含量和血糖异常波动的影响，更能客观准确反映糖化血红蛋白在血液中的相对含量。

Description

一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法
技术领域
本发明涉及糖化血红蛋白含量测定计量领域，尤其是涉及一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法。
背景技术
糖化血红蛋白(Glycosylated hemoglobin，GHb)是血红蛋白的一种重要的存在形式，主要包括HbA1a、HbA1b、HbA1c和Labile HbA1c(LHbA1c)等。其中，HbA1c含量水平能够反映人体近125天血糖平均浓度的重要指标，同时也是血糖控制好坏的关键参数，而LHbA1c含量水平则可反映人体近2-6小时内血糖平均浓度，是反映短时期血糖的重要参数。
目前，糖化血红蛋白检测技术主要有硼酸亲和层析、抗原-抗体免疫学方法、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳和质谱技术等。前二种技术检测计量GHb绝对含量，受众多因素干扰，目前很少使用；而后三种技术则能够检测计量GHb相对含量，应用较广。例如，具有高精度、重复性好和操作简单的HPLC技术就是基于方程(1)和(2)来分别检测计量HbA1c和LHbA1c的相对含量：
在方程(1)和(2)中，i＝A0,A1a,A1b,A1c,A2,C,E,F,H,J,K,S,…等各种血红蛋白。由于以上特点，HPLC已被广泛使用，并于2010年被国际组织认证为HbA1c(包括LHbA1c)检测计量的金标准和金方法。但最近8年实践证明各种异常血红蛋白或血红蛋白异常含量能够显著影响HbA1c和LHbA1c计量结果。例如，在25％异常血红蛋白E或25％HbF异常含量存在条件下，现行HPLC测定方法将实际HbA1c和LHbA1c相对含量低估25％，引起很大负向计量偏差。
为此，有学者提出了另一种HbA1c相对含量的测定方法：
该测定方法能够有效解决方程(1)的计量缺陷，解决了异常血红蛋白或血红蛋白异常含量的干扰。但是，在很多条件下，HbA0能够快速转化成不稳定的HbA1c(LHbA1c)，造成基于方程(3)的HbA1c计量显著偏高。如正常成人一般含有1％-2％LHbA1c，但在5％LHbA1c异常增加的条件下HbA1c相对含量被高估3.5％左右，引起明显的正向计量偏差，并且方程(3)无法解决LHbA1c相对含量受异常血红蛋白或血红蛋白异常含量的干扰，例如在50％HbE存在条件下，现行LHbA1c测定方法将实际LHbA1c相对含量低估50％，引起很大负向计量偏差。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述血红蛋白相对含量的计量方程(1)和(2)带来的负向计量偏差和血红蛋白相对含量的计量方程(3)带来的正向计量偏差的问题而提供一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)分离待检测的血红蛋白同系物HbA0、HbA1c和LHbA1c，并确定含量；
(2)按以下计算公式计算HbA1c和LHbA1c的相对含量：
步骤(1)所述血红蛋白同系物HbA0、HbA1c和LHbA1c的含量为同一时刻在血液中的相对浓度或者绝对浓度。
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用HPLC技术分离糖化血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰，再利用公式(4)、(5)计算出HbA1c和LHbA1c占总血红蛋白的相对含量。
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用毛细管电泳分离糖化血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征条带，再利用公式(4)、(5)计算出HbA1c和LHbA1c占总血红蛋白的相对含量。
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用质谱技术分离血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰峰值，再利用公式(4)、(5)计算出HbA1c和LHbA1c占总血红蛋白的相对含量。
本发明基于HbA0与葡萄糖的糖化反应：
所产生的三种同系物HbA0、LHbA1c和HbA1c，以及三种同系物之间的总量平衡，提出以下待计量血红蛋白HbA1c和LHbA1c相对含量的计量新方法
本发明具有以下显著优点：
第一、能够有效解决基于方程(1)和(2)测定方法带来的各种异常血红蛋白干扰。人体存在各种异常血红蛋白，如Hb C、Hb E、Hb H、Hb J、Hb K和Hb S等各种血红蛋白，并且异常血红蛋白的含量高达10％-60％。在此条件下，基于计量方程(1)和(2)的测试结果会出现明显的负向计量偏差。例如，在25％-50％异常血红蛋白E(Hb E)存在条件下，现行HPLC测定方法将实际HbA1c或LHbA1c相对含量低估25％-50％。
第二、能够有效解决基于方程(1)和(2)测定方法带来的血红蛋白异常含量的影响。正常成人血液中含有80％-90％的HbA0。但在血红蛋白异常含量存在的条件下，基于计量方程(1)和(2)的HbA1c和LHbA1c相对含量显然出现显著的负向计量偏差。例如，正常人含有2％以下的Hb F，但在Hb F异常含量(25％-60％)的条件下，现行HPLC测定方法将实际HbA1c或LHbA1c相对含量低估25％-60％。
第三、能够有效避免基于方程(3)测定方法带来的LHbA1c的干扰。正常成人一般含有2％左右LHbA1c。在异常血糖升高的情况下，LHbA1c在数小时上升到5％甚至更高，造成HbA0相对含量降低，其降低值为：
Δ[LHbA1c]＝[LHbA1c]升高后-[LHbA1c]升高前 (6)
显然，基于计量方程(3)计算处理的结果将比基于方程(7)计算的HbA1c实际值高估3.5％左右，引起明显的正向计量偏差。
本发明的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法具有抗各种异常血红蛋白、血红蛋白异常含量和血糖异常波动的影响，更能客观准确反映糖化血红蛋白在血液中的相对含量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但绝不是对本发明的限制。
实施例1
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用HPLC技术分离某糖化血红蛋白获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰，计算出其占总血红蛋白的相对含量，再利用计量方程(4)和方程(5)分别计算HbA1c和LHbA1c的相对含量。根据文献A Diabetic Casewith Hemoglobin J-Meerut and LowHbA1C Levels中Figure 2中提供的数据，用本测定方法计算得到的HbA1c(％)和LHbA1c(％)值分别为：
实施例2
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用毛细管电泳分离某糖化血红蛋白获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征条带，计算出其占总血红蛋白的相对含量，再利用计量方程(4)和方程(5)分别计算HbA1c和LHbA1c的相对含量。根据文献Evaluation ofthe Sebia CAPILLARYS 2FlexPiercing for the Measurement of HbA1c on Venous andCapillary Blood Samples中Figure 2B所示，用本测定方法计算得到的HbA1c(％)和LHbA1c(％)值分别为：
实施例3
一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，利用质谱技术分离某血红蛋白获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰峰值，并计算出其占总血红蛋白的相对含量，再利用计量方程(4)计算HbA1c的相对含量。文献《探讨质谱MRM方法对于糖化血红蛋白准确测定的应用》中，HbA0(样品前处理过程中LHbA1c全部转化为HbA0)特征峰的质荷比(m/z)为348.2→110和HbA1c特征峰的m/z为429.2→245。根据特征峰的面积和建立的标准曲线，计算出HbA0(含LHbA1c)h和HbA1c的浓度，最后利用方程(4)计算HbA1c的相对含量。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分离待检测的血红蛋白同系物HbA0、HbA1c和LHbA1c，并确定含量；
(2)按以下计算公式计算HbA1c和LHbA1c的相对含量：
2.根据权利要求1所述的一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)所述血红蛋白同系物HbA0、HbA1c和LHbA1c的含量为同一时刻在血液中的相对浓度或者绝对浓度。
3.根据权利要求1所述的一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)利用HPLC技术分离糖化血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰。
4.根据权利要求1所述的一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)利用毛细管电泳分离糖化血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征条带。
5.根据权利要求1所述的一种抗干扰的糖化血红蛋白同系物相对含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)利用质谱技术分离血红蛋白，获得HbA0、HbA1c和LHbA1c特征峰峰值。
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