JPWO2011111824A1 - マイクロrnaを用いた心筋細胞の増殖方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1-1)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNA。
(1-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(1-1)に記載のmiRNA。
(1-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(1-1)又は(1-2)に記載のmiRNA。
(1-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(1-3)に記載のmiRNA。
(1-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(1-3)に記載のmiRNA。
(2-a-1)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を含む、心臓疾患治療用医薬組成物。
(2-a-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-a-1)に記載の医薬組成物。
(2-a-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(2-a-1)又は(2-a-2)に記載の医薬組成物。
(2-a-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-a-3)に記載の医薬組成物。
(2-a-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-a-3)に記載の医薬組成物。
(2-a-6)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入及び発現させるための発現ベクター又はリポソームとして含む、上記(2-a-1)〜(2-a-5)のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(2-a-7)ベクターが、ウイルスベクター又は非ウイルス性発現ベクターである、上記(2-a-6)に記載の医薬組成物。
(2-a-8)ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、日本血球凝集性ウイルス(HVJ;別名、センダイウイルス)ベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ニワトリポックスウイルスベクター、パポバウイルスベクターから選択されるものである、上記(2-a-7)に記載の医薬組成物。
(2-a-9)miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、上記(2-a-1)〜(2-a-8)のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(2-a-10)心臓疾患が、心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎又は慢性心不全である、上記(2- a-1)〜(2-a-9)のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(2-b-1)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、個体の心臓の障害部位に導入することにより、当該部位において心筋細胞を増殖させることを特徴とする心臓疾患の治療方法。
(2-b-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-b-1)に記載の治療方法。
(2-b-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(2-b-1)又は(2-b-2)に記載の治療方法。
(2-b-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-b-3)に記載の治療方法。
(2-b-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-b-3)に記載の治療方法。
(2-b-6)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸の、個体の心臓の障害部位への導入を発現ベクター又はリポソームにより行う、上記(2-b-1)〜(2-b-5)のいずれか1項に記載の治療方法。
(2-b-7)ベクターが、ウイルスベクター又は非ウイルス性発現ベクターである、上記(2-b-6)に記載の治療方法。
(2-b-8)ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、日本血球凝集性ウイルス(HVJ;別名、センダイウイルス)ベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ニワトリポックスウイルスベクター、パポバウイルスベクターから選択されるものである、上記(2-b-7)に記載の治療方法。
(2-b-9)miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、上記(2-b-1)〜(2-b-8)のいずれか1項に記載の治療方法。
(2-b-10)心臓疾患が、心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎又は慢性心不全である、上記(2-b-1)〜(2-b-9)のいずれか1項に記載の治療方法。
(2-c-1)心臓疾患治療用医薬組成物の製造のための心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸の使用。
(2-c-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-c-1)に記載の使用。
(2-c-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(2-c-1)又は(2-c-2)に記載の使用。
(2-c-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-c-3)に記載の使用。
(2-c-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-c-3)に記載の使用。
(2-c-6)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入及び発現させるための発現ベクター又はリポソームとして含む、上記(2-c-1)〜(2-c-5)のいずれか1項に記載の使用。
(2-c-7)ベクターが、ウイルスベクター又は非ウイルス性発現ベクターである、上記(2-c-6)に記載の使用。
(2-c-8)ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、日本血球凝集性ウイルス(HVJ;別名、センダイウイルス)ベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ニワトリポックスウイルスベクター、パポバウイルスベクターから選択されるものである、上記(2-c-7)に記載の使用。
(2-c-9)miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、上記(2-c-1)〜(2-c-8)のいずれか1項に記載の使用。
(2-c-10)心臓疾患が、心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎又は慢性心不全である、上記(2- c-1)〜(2-c-9)のいずれか1項に記載の使用。
(2-d-1)心臓疾患の治療において使用するための心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸。
(2-d-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-d-1)に記載の核酸。
(2-d-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(2-d-1)又は(2-d-2)に記載の核酸。
(2-d-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-d-3)に記載の核酸。
(2-d-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(2-d-3)に記載の核酸。
(2-d-6)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入及び発現させるための発現ベクター又はリポソームとして含む、上記(2-d-1)〜(2-d-5)のいずれか1項に記載の核酸。
(2-d-7)ベクターが、ウイルスベクター又は非ウイルス性発現ベクターである、上記(2-d-6)に記載の核酸。
(2-d-8)ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、日本血球凝集性ウイルス(HVJ;別名、センダイウイルス)ベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ニワトリポックスウイルスベクター、パポバウイルスベクターから選択されるものである、上記(2-d-7)に記載の核酸。
(2-d-9)miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、上記(2-d-1)〜(2-d-8)のいずれか1項に記載の核酸。
(2-d-10)心臓疾患が、心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎又は慢性心不全である、上記(2- d-1)〜(2-d-9)のいずれか1項に記載の核酸。
(3-1)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入して発現させることを特徴とする心筋細胞の増殖方法。
(3-2)miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(3-1)に記載の方法。
(3-3)miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、上記(3-1)又は(3-2)に記載の方法。
(3-4)SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(3-3)に記載の方法。
(3-5)SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、上記(3-3)に記載の方法。
(3-6)心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、発現ベクター又はリポソームを用いて心筋細胞へ導入することを含む、上記(3-1)〜(3-5)のいずれか1項に記載の方法。
(3-7)ベクターが、ウイルスベクター又は非ウイルス性発現ベクターである、上記(3-6)に記載の方法。
(3-8)ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、日本血球凝集性ウイルス(HVJ;別名、センダイウイルス)ベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ニワトリポックスウイルスベクター、パポバウイルスベクターから選択されるものである、上記(3-7)に記載の方法。
(3-9)miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、上記(3-1)〜(3-8)のいずれか1項に記載の方法。
本発明に係る方法を用いて増殖させる対象とする心筋細胞は、一般に、成体型心筋細胞、幼体型心筋細胞、並びに胎児型心筋細胞のすべての発生段階の心筋細胞を含んでもよい。そして、本発明においては、哺乳動物の心臓組織内に存在する心筋細胞を直接の対象とすることができるが、本発明の第1の態様及び第3の態様においては、生体外の培養心筋細胞等を使用することもできる。
本発明は、心筋細胞の増殖促進作用を有するマイクロRNA(miRNA)を提供する。本発明に係るmiRNAとしては、心筋細胞の増殖を促進するものであれば、どのようなmiRNAであってもよく、上記心筋細胞を増殖させるために使用することができる。
本発明者らは、心筋細胞に導入した際に顕著なBrdUの取り込み能力を示すか否かに基づいて、成熟型miRNAのライブラリーを検索したところ、心筋細胞の増殖促進作用を有する成熟型miRNAとして、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)、及びmiR-373(SEQ ID NO: 9)等を見出し、これらをさらなる実験に使用した。
miR-148b:ucagugcaucacagaacuuugu(SEQ ID NO: 5)
miR-152:ucagugcaugacagaacuugg(SEQ ID NO: 7)。
ヒトmir-148b:caagcacgau uagcauuuga ggugaaguuc uguuauacac ucaggcugug gcucucugaa agucagugca ucacagaacu uugucucgaa agcuuucua(SEQ ID NO: 6)
ヒトmir-152:uguccccccc ggcccagguu cugugauaca cuccgacucg ggcucuggag cagucagugc augacagaac uugggcccgg aaggacc(SEQ ID NO: 8)。
なお、本発明に係るmiRNAは、正常細胞の株化細胞であるMRC-5(ヒト胎児肺由来)細胞、WI-38(ヒト胎児肺由来)細胞及びMC3T3-E1(マウス頭蓋冠由来)細胞等に対しては、有意な増殖促進活性を示さなかった。
本発明の別の態様として、本発明の実施に用いる、ウイルスベクター又は非ウイルス性ベクターなどの発現ベクターであって心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を含むもの(以下、単に「遺伝子発現ベクター」という)、好ましくはウイルスベクター、更に好ましくはアデノウイルスベクター又はHVJベクター、AAVベクター、レンチウイルスベクター等を含む、遺伝子治療用医薬組成物が提供される。遺伝子発現ベクター中に含まれるmiRNAを規定する核酸は、既に説明した「具体的なmiRNAの取得」の項において説明されたmiRNAを規定する核酸であればどのようなものであってもよい。この遺伝子治療用医薬組成物は、心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を含むことから、miRNAの作用により、心筋再生薬又は心臓疾患治療薬として用いることができる。治療の対象となる心臓疾患としては、心筋細胞の衰弱、機能停止又は死滅を伴うものであれば特にこれを限定しないが、具体例としては心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎、慢性心不全等を挙げることができる。
本発明に係る方法により増殖させた心筋細胞は、引き続き、公知の方法による細胞回収、分離、精製法を用いることにより、高純度の心筋細胞を効率的かつ多量に得ることができる。この様にして得られた心筋細胞を以下、本発明により調製された心筋細胞と呼ぶ。
生後2〜4日目のラット(Wistar系、清水実験材料株式会社より入手)から心臓を摘出し、コラゲナーゼ処理により得られた細胞群からパーコール濃度勾配遠心分離(細胞を懸濁した密度1.082 g/mLのパーコール溶液を密度1.050 g/mL、1.060 g/mLのパーコール溶液に重層し、4℃、3000 rpm(2000 G)25分遠心)により心筋細胞画分を回収した。このようにして得た心筋細胞は、5%子牛血清(FCS;SAFC Bioscience社)を添加したイーグル最小培地(ナカライテスク社)に懸濁後、培養用ディッシュに播種し、炭酸ガスインキュベータ中、37℃で培養した。このようにして調製した心筋細胞(96 wellプレートあたり15,000 cells/well)に対して、Pre-miRTM miRNA Precursor Library-HumanV2(Ambion:miRBase Sequence Database Version 8.0に収載の328個のヒト成熟型miRNAをミミックするようにデザインされたライブラリー)各2 pmolをLipofectamineTM RNAiMAX(Invitrogen)を用いてトランスフェクションし、2日後に細胞増殖ELISA、BrdU化学発光キット(Roche)を用いてBrdUの取り込み量を測定し、陰性対照であるPre-miRTM miRNA Precursor Molecule−Negative control #1(Ambion)添加群におけるBrdUの取り込み量と比較して、顕著に高いBrdUの取り込み効果を呈したものを、DNAの合成能を顕著に促進する候補miRNAとして選択した。当該試験において、上記の候補miRNAの例として、miR-148a、miR-148b、miR-152及びmiR-373を選抜することができた。
心筋細胞(24 wellプレートあたり100,000 cells/well)に対して、実施例1で得られた候補miRNA、miR-148a、miR-148b、miR-152及びmiR-373のヒト成熟型miRNAをミミックするようにデザインされたPre-miRTM miRNA Precursor Moleculeと陰性対照のNegative control #1(全てAmbion)1 pmolをLipofectamineTMRNAiMAX(Invitrogen)を用いてトランスフェクションし、トランスフェクション2〜4日後に細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定した。
miR-148a、miR-152、miR-373を発現させるためのアデノウイルスベクターとしては、ViraPowerTM Adenoviral Expression System(Invitrogen社)を用いて作製した。即ち、それぞれのmiRNAの前駆体配列及び隣接した数百ヌクレオチドを含むヒトゲノムDNA断片を、ヒトゲノムDNAを鋳型として以下に示すプライマーを用いたPCRにより増幅した。
hsa-miR-148a-R:5’-gttcccatttacagggtttaaccca-3’(SEQ ID NO: 12)
hsa-miR-152-F:5’-caccgtcccagactcggctcccatca-3’(SEQ ID NO: 13)
hsa-miR-152-R:5’-actcgaggtggacaccctgtgt-3’(SEQ ID NO: 14)
hsa-miR-373-F:5’-caccgtgaccaaggggctgtatgca-3’(SEQ ID NO: 15)
hsa-miR-373-R:5’-ctgcccaccccagaatatgcca-3’(SEQ ID NO: 16)。
実施例2と同様の方法で、miR-148a、miR-148b、miR-152、miR-373及び陰性対照としてNegative control #1を心筋細胞にトランスフェクションした。また、実施例3と同様の方法でAd-miR-148a、Ad-miR-152及びAd-miR-373と陰性対照のAd-LacZを、心筋細胞に添加した。それぞれ、添加後2〜3日後に細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定した。
miR-148a、miR-152、miR-373の発現が、生体内における心筋細胞の増殖を起こすかどうかを確認するために、実施例3で調製した組換えウイルスAd-miR-148a、Ad-miR-152及びAd-miR-373(それぞれ1×109pfu/mL)を、Wistar系ラット(250〜300g)を開胸して目視にて心尖部(apical region)の計4ヵ所に30G注射針を用いて総量200μL注入した。陰性対照としては、miR-141を使用することとし、目的とする配列を、実施例3の方法にしたがって、ヒトゲノムDNAを鋳型として以下に示すプライマー:
hsa-miR-141-F:5’-caccgcagggatcctgggcctga-3’(SEQ ID NO: 17)
hsa-miR-141-R:5’-cgggaagacaatggaggtgcct-3’(SEQ ID NO: 18)
を用いたPCRにより増幅し、このPCR産物を実施例3に記載の通りに用いてAd-miR-141を作製し、Ad-miR-141(1×109pfu/mL)を、Wistar系ラット(250〜300g)を開胸して目視にて心尖部(apical region)の計4ヵ所に30G注射針を用いて総量200μL注入した。
SEQ ID NO: 2:miR-373ファミリーの5’側に共通のシード配列;
SEQ ID NO: 11:miR-148a遺伝子のコード領域を増幅するためのフォワードプライマー、hsa-miR-148a-F;
SEQ ID NO: 12:miR-148a遺伝子のコード領域を増幅するためのリバースプライマー、hsa-miR-148a-R;
SEQ ID NO: 13:miR-152遺伝子のコード領域を増幅するためのフォワードプライマー、hsa-miR-152-F;
SEQ ID NO: 14:miR-152遺伝子のコード領域を増幅するためのリバースプライマー、hsa-miR-152-R;
SEQ ID NO: 15:miR-373遺伝子のコード領域を増幅するためのフォワードプライマー、hsa-miR-373-F;
SEQ ID NO: 16:miR-373遺伝子のコード領域を増幅するためのリバースプライマー、hsa-miR-373-R;
SEQ ID NO: 17:miR-141遺伝子のコード領域を増幅するためのフォワードプライマー、hsa-miR-141-F;
SEQ ID NO: 18:miR-141遺伝子のコード領域を増幅するためのリバースプライマー、hsa-miR-141-R;
その他の配列については、表1を参照。
Claims (20)
- 心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を含む、心臓疾患治療用医薬組成物。
- miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項1に記載の医薬組成物。
- miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、請求項1又は2に記載の医薬組成物。
- SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)、及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項3に記載の医薬組成物。
- SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項3に記載の医薬組成物。
- 心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入及び発現させるための発現ベクターとして含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- ベクターが、ウィルスベクターである、請求項6に記載の医薬組成物。
- miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 心臓疾患が、心筋梗塞、虚血性心疾患、うっ血性心不全、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎又は慢性心不全である請求項1〜8のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、個体の心臓の障害部位に導入することにより、当該部位において心筋細胞を増殖させることを特徴とする心臓疾患の治療方法。
- 心臓疾患治療用医薬組成物の製造のための心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸の使用。
- 心臓疾患の治療において使用するための心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸。
- 心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、心筋細胞に導入して発現させることを特徴とする心筋細胞の増殖方法。
- miRNAが、成熟型miRNA及び当該miRNAの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項13に記載の方法。
- miRNAが、SEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質である、請求項13又は14に記載の方法。
- SEQ ID NO: 1からなるシード配列を含む物質が、miR-148a(SEQ ID NO: 3)、miR-148b(SEQ ID NO: 5)、miR-152(SEQ ID NO: 7)、及びそれらの前駆体、並びにそれらの変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項15に記載の方法。
- SEQ ID NO: 2からなるシード配列を含む物質が、miR-373(SEQ ID NO: 9)及びその前駆体、並びにその変異体及び類似物質からなる群から選択される物質である、請求項15に記載の方法。
- 心筋細胞の増殖促進作用を有するmiRNAを規定する核酸を、発現ベクターを用いて心筋細胞へ導入することを含む、請求項13〜17のいずれか1項に記載の方法。
- ベクターが、ウィルスベクターである、請求項18に記載の方法。
- miRNAが、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも一つの修飾糖部分、少なくとも一つの修飾塩基、又はこれらの組合せを含む、miRNA誘導体である、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法。
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