JPS63502659A - 抱合化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抱合化合物 発明の分野 本発明は大環状りがンドと抗体からなる抱合化合物、抱合化合物の金属錯体、お よび金Ｉｉ４錯体を治療および診断に用いるためのこれらの製剤に関する。

発明の背景 金属原子を、試験管内および生体内両方を含めて、特定の型の組織にねらいをつ けるため抗体全会５ｒｙｘ子で標識することは公知でろる。このような標識した 抗体は、特定の組織の型を突き止める場合（その金Ｓ原子を何らかの方法で検出 することができる場合のコンピューターを用いた断層撮影技術を利用して）また 細胞障害の治療（例えば、金属原子が細胞毒の放射性核種である場合の哺乳動物 腫瘍の治療）Ｉｃ応用性をもつ。

従来、金属原子は抗体に共有結合させたりがンドからなる抱合化合物に錯体形成 されて来た。りがンドは、例えば非環式キレート、例えば置換ジエチレントリア ミン五酢酸（ＤＴＰＡ　）　（Ｇａｎｓｏｗ　Ｏ，Ａ、等、工ｎｏｒｇ、　Ｃｈ ｅｍ、　。

（１９８６）、２５．２７７２）あるいはエチレンジアミン四酢５　（ＥＤＴＡ 　）　（Ｍｅａｒｅａ、　Ｃ，Ｌ等、ＡＣＩＣ。

Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｓ、、（１９８４）、１７．　２０２）のこともある。しかし 、このような非環式錯体は、酸接触錯体破壊あるいは血清中のＣａ”＋やＺｎ” ＋による競合的キレート結合の結果として、あるいはトランスフェリンからの競 合の結果として生体内で不安定になり易い（Ｍｏｅｒｌｅｉｎ、　Ｓ、Ｍ、等、 工ｎｔ、　Ｊ、　Ｎｕｃ、　Ｍａｄ、　Ｂｉｏｌ、。

（１９８１）、８，２７７〕。この安定性欠如は体内に錯体を形成していない金 属原子を生ずる結果となり、こ２１″ｌは漣東な組織に細胞毒効果を及ぼすか、 イメージング技術のＳ／Ｎ比を着るしく低下させる。抗体の標識付けに大環状リ ガンドを使用することが、幅広い表現で水製されて来た（　Ｇａｎｓｏｗ、　Ｏ ，Ａ、等、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　Ｓ７ｍｐ、　Ｓｅｒ、、　（１９８４）、２４１＋　２１５；発行英 国特許頴第ＧＢ２１２２６４Ｉ　Ａ号明細書；Ｍｅａｒｅｓ、　Ｃ，Ｆ、等、Ａ ｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋　（１９８５）　＋１４８．２４９〜２５６〕。

本発明の目的は、生体内で安定な錯体を得るように金属を拘束できる大環状リガ ンドを含む改良抱合化合物を提供することにある。

発明の要約 本発明の第一の面によれば、次の構造二〔式中、 Ｒ１は−（ＣＨ２）　−Ｒ’−（ＣＨ２）（１−（式中、ｐとｑは同じかまたは 異なり、０，１または２でめり、Ｒ６は−（Ｃ％）ｎ−（ｎは０または１でめる ）、−ＮＨ−１−０−１−８−１１ｆｃは７＠ｒである）であり、そしてＲ１は 任意にアルキル置換されるが、ただし　Ｒ６が一〇Ｈ２−でない限りｐもｑも０ でないことを条件とし、 Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２−’Ｅたは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−で、任意にアルキル、 アルコキシアルキルまたけヒドロキシアルキル置換され、 Ｒ３は同じかまたは異なジ、そして−Ｈ１アルキル、ヒドロキシアルキル、アル コキシアルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアルキルエステル、ホスフェ ート、スルホネートまたはホスホネートであり、Ｒ４は で任意にアルキル置換されることがあり、そして上記式中ＯＲ２は−Ｈ１アルキ ル、ヒドロキシアルキル、またはアルコキシアルキルであるが、ただしＲ４が− ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−であるときはＲ３はカルボキシアルキルでないことを条 件とし、 Ｒ５はリンカ−でらり、そして Ａｂは抗体でるる〕 を有する抱合化合物が提供される。

本発明に係る抱合化合物は、金属、例えばＴｃ、　Ｃｏ。

Ｒｅ、　Ｃｕ、　ＡｕおよびＡｇ、　Ｐｂ、　Ｂｉ、工ｎおよびＧａの錯体を提 供し、これらは生体内イメージングおよび治療（（有用な試薬である。Ｔｃお− よびＣｕの錯体は特に適当である。

Ｒ１はなるぺ＜　−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ｊたは−ＣＩ（２ＣＨｒＯ−ＣＨ２Ｃ Ｈ２−がよい。基Ｒ２はなるべく同じであるのがよく、そして−〇Ｈ２ＣＨ，− でよい。各場合に、１個以上の水素原子をアルキル、ヒドロキシアルキルまたけ アルコキシアルキル基、例えば低級アルキル基、例えばメチルで置換できる。

Ｒ４中の芳香環（存在する場合）は、必要な環の大きさ（（より筐た化合物の調 製に採用された合成経路により、１，３．５置換のこともあれば１，３．４置換 のこともある。

Ｒ４はメチルのような低級アルキルで置換されることがある。Ｒ７はなるべ（− Ｈか低級アルキル（Ｃ１〜Ｃｓ）、例えばメチルがよいが、０４〜ＣＩ＋５アル キルのような高級アルキルでもよい。

リンカ−Ｒ５は、抗体の結合親和力および特異性が実質的に損なわれず、セして 抱合分子の大環状部分が金属、例えば遷移金属またはＢ−金属と配位できるよう に、抱合化合物の大環状部分に抗体をつなぐように適合された２価の基のいずれ でもよい。

抗体ＡＩ）は、完全な抗体分子のこともあれば、その７ラグメントのこともめれ ば、あるいはこれらのいずｎかの類似体のこともあるが、ただし抗体Ａｂは特異 的結合域、例えばＦａｂ’ｊたはＦ（ａｂ）２’部分を含むことを条件とする。

抗体Ａｂはポリクローンでもモノクローン抗体でも、あるいはその７ラグメント でもよい。

従って、抗体Ａｂはハイグリドーマ細胞系列から得られたり、他の動物細胞系列 から得ることもできる。なるべく抗体Ａｔ）は哺乳動ｖ１：Ｊ＠瘍に対して特異 性をもつのがよい。

本発明の第二の面においては、錯体形成金属原子を含む本発明抱合化合物が提供 される。この金属はなるぺ（ＴＯ，Ｒｅ、　Ｃｏ、　Ｃｕ、　Ａｕ、　ＡｇＩ　 Ｐｂ、　Ｂｉ、工ｎおよびＧａから選ばれた金属がよい。特に適当なものはＴｃ およびＣｕの錯体である。金属は放射性同位体が適当である。

テクネチウム（ＴＣ）およびレニウム（Ｒｅ）の放射性同位体はイメージングお よび治療に役立つ試薬を提供する。とりわけ９９　ｍＴＣは強いｒ−エミッター であり、それ自体ｒ−線線イメージダグ有用で６る。１８５／１８８Ｒｅは良好 なβ−エミッター、でラフ、β−粒子療法に有用である。両者共ＭＯ，陰イオン として発生器から入手容易であり、還元形で錯体形成させることにより体液中で 安定な錯体を与えることができる。

本発明の第一の面の特に適当な一形式では、構造：（式中　Ｒ３，Ｒ５およびＡ ｂは構造ＩＫ対して定義した通りであり、Ｒ３はなるべく−Ｈがよい）を有する 抱合化合物が提供さルる。

本発明の第二の面の特に選曲な形式１（おいては、テクニチウム、銅またはレニ ウム原子、なるべくは９９ｍＴ０．６）Ｃｕ、　６４Ｃｕｔ　’Ｊたは１８６／ １８８Ｒ，と錯体ヲつくらせた構造■の抱合化合物が提供される。本発明の第一 の面の更に一つの特に適当な形式においては、構造（式中、ｍは１から５でろり 、Ｒ３，Ｒ５およびＲ７は前記構造ＩＫ対して定義した通りでめる）を有する抱 合化合物が提供される。

構造■の抱合化合物は、Ｔｃ、　Ｃｕ、　Ｃｏ＋工ｎｔ　ＡｕおよびＡｇを含め である範囲の金属原子を錯体形成させるのに通し、最適の結合は環の大きさを選 定し、パラメーターｍを調節し、基Ｒ３の選択により潜在的配位数を調節するこ とにより達成さｎる。

本発明の更にもう一つの特に好ましい第二の面においては、テクニチウム、レニ ウム、銅または金原子、なるべくは９９ｍＴｏ、　６’Ｃｕ、　６４（ｕ、　１ ９９Ａｕ、　１８６／１８８Ｒ６と錯体を形成した構造■（式中、ｍは３、Ｒ３ は−Ｈまたけ−ＣＨ，である）の抱合化合物が提供される。

本発明の第二の面における抱合化合物は医薬品として、例えば哨乳動物の腫瘍の 治療に、らるいは診断試薬として生体内イメージングにトレーサーとして使用で きる。

第三の面においては、本発明は、本発明の第二の面における抱合化合物するいは その付加塩と製薬上容認しうる担体とからなる組成物を提供する。この組成物は 腫瘍の治療に、るるいは診断試薬として生体内イメージングに使用できる。

第四の面において、本発明は下記の一般構造：（式中、Ｒｌｔ　Ｒ”ｌ　Ｒ３オ ！びＲ４ハ前記構造［１’ｊして定義した通りで６　Ｄ　、Ｒ８はＲ’ＩＣ共有 結合で付いた反応性基からなる）を有する化合物を提供する。この反応性基は直 接に、あるいはリンカ−を介して抗体（Ａｂ　）に対する付着点を与える。Ｒ８ は−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ−Ａｒ−（ＣＨｚ）ｍ−ＮＨ２、− （ＣＨ２）ｎ−Ｃ○２Ｈ％−（ＣＨ２）ｎ−Ａｒ−ＣＯ２Ｈ，−（ＣＨ２ＣＨ２ ０）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−（ＣＥ（２）ｎ−ＮＣ８、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ ｒ−ＮＣ８Ｘ−または−（０％）、ＮＨＯ）Ｒ’（式中、ｎとｍはＤから４であ り、そして同じでも異なってもよ＜　％　Ｒ’　ａ−ＣＨ２Ｂｒのようなハロア ルキルでろる）からなる。

８から１０のｐＫａ　ｆもつ環外第一級アミンは、実質的に不利な副反応および 飽和環蓋素の存在から起こる重合を伴なわずに、本発明に係る大環状化合物にリ ンカ−全付着させる顕著な選択性を示すことが判った。

この選択性の効果は慎重な一調節により最適化される。

化合物■へのリンカ−の付着はＰＨ６からｐｉ（８で行なうのが適当でるる。第 一級アミンは、例えばリンカ−化合物上の活性化エステルのようなアシル化剤と 反応させるのが便利である。

リンカ−はＲ８との反応部位と抗体への付着部位を含む。抗体への付着部位はチ オール特異性基、例えば芳香族窯素複素環化合物と共役したマレイミド基または ビニル基（例えば、ビニルビリシン基）が適当である。

本発明の特に適当な面においては、第一級アミン基をマレイミドまたはビニルピ リジン含有リンカ−化合物に共有結合でつなぎ、その後これを抗体ｌたは修飾抗 体上のチオール基と反応させる。それ故にこの化合物は、本発明の第一０面わる いは第二の面による抱合化合物の製造において重要な中間体を与える。

本発明は更に記載の抱合化合物の付加塩全提供する。

本発明は更に本発明の第一の面における抱合化合物の製造法を提供するもので、 水沫は本発明の第四の面の化合物をリンカ−および抗体わるいは抗体７ラグメン トと共に反応させることからなる。

本発明は更に病細胞の治療法を提供するもので、この方法は本発明の第二の面に 係る抱合化合物、即ち病細胞（（対し特異性をもつ抗体と病細胞に対し福性をも つ金属を含んだ大環状化合物からなる抱合化合物の有効量を投与することからな る。この病細胞は、例えば哺乳動物腫瘍細胞のこともありうる。

本発明は更に本発明の第二の面における抱合化合物、即ち組織に対する抗体と検 知可能な金属を含む大環状化合物とからなる抱合化合物の有効量を投与すること からなる４瘍イメージング法を提供する。この組織は、例えば哺乳動物腫瘍細胞 のこともめジうる。

本発明を下記の例により説明する。

次の構造： ａ）　Ｒ＝−Ｈ を有する大環状化合物の合成を行なった。

乾燥エタノール（１００ｃｍ’）中ナトリウムエトキシド（０，０５１Ｍ　）の 溶液に、音素下で乾燥エタノール（３５ｃｒｔｔ”　）中マロン酸ジエチル（１ ６＆、１００ミリモル）を加え、混合物を室温でかきまぜた（ｏ、５時間）。冷 卸した溶液に、ジメチルホルムアミド（５０ｃｍ’）中α−グロモーパラトルニ トリル（１゜、ｙ、ｏ、ｏｓｉモル）の溶液を加え、混合物を還流した（２４時 間）。室温に冷却後、蒸留水（１５０ｃｆＩｒ５）を加え、混合物？濾過し、濾 液をジエチルエーテル（３ｘ　５０　ｃｒｔｔ３）で抽出した。エーテルを減圧 下に除去し、残留物を蒸留してｐ−シアノペンシルシェチルマロネート（６ｇ、 ４５％）、沸点１５０℃（０，０１ｒｎｘ　）を得た。

（δＨｃＤｃｚ３）　７．５９　（２Ｈ，ａ、　Ａｒ　）　；　７．３５　（２ Ｈ１ａ、Ａｒ）；４．１６（４Ｈ，ｍ、ＣＨ２０）、、５．（５３（ｉＨ。

ｔ、四””２　）　＋　３．２７　（２Ｈ，ｄ、　ＣＨ囲２）、１．２２（６Ｈ ｌ　ｔｏ　ＣＨ，、）。（δＣｃｐｃｚ、　）　１　６７−３（匹Ｅｔ）。

１　４３．３．　１　３２．１．　１　２９．５．　１　１　６．５　（Ａｒ） 。

ｉ　１Ｑ、５　（ＣＮ）　、６１．（５（ＣＨ２０）、、５３．０　（Ｃ，０２ ３Ｃｔ）２゜３４．４　（ＣＨ２−Ａｒ　）　、１　３．８　（ＣＨ３）。

乾燥エタノール（５０ｃｍ３）中１．４，８．１１−テトラアデウ／デカン（２ ，７７＆、　１７．３ミリモル）およびｐ−シアノペンシルジエチルマロ＄　− ）　（４，７５。

Ｆ、１７．３ミリモル）の混合物を５日間還流し、蒸発乾固し、残留物をシリカ ゲル（０，０６３０，２０！＋１゜Ｍθｒｃｋ　）上でクロマトグラフィーを行 なうが、このときアンモニア水／メタノール／ゾクロロメタン浴媒を用ｂ、その 組成乞最初１：１２：８７から最後に６＝４４；５０−１で変えて勾配溶離した 。目的とするジアミドは無色固体（１，１＃、１９チ）、融点２０９〜２１１℃ として単離された。（δＨｃＤｃｚ、　）　７．５６（２Ｈ，ｄ、　Ａｒ　）、 ７．３３（２Ｈ，６，ＡｒＨ）、６−６５（２Ｈ，ｂｒｓ、　ＮＨＣ○）ｌ　３ ．５０　（２Ｈ，ｍ、　ｃＨ２Ａｒ　）。

３−２５（４Ｈ２ｍ、　ＣＦ（２ＮＣＯ）、１．７８（２Ｈ，ｂｒｓ、　ＮＨ） 。

１．６５（２Ｈ，ｍ、　ｃ旦ｚＣ）。ｍ／ｅ　（イソグタンＤＣ工）３４４（ｍ ”＝１）。工Ｒ（ＫＢｒ）　ｖ　３２９０　（ＮＨ）。

２９１０．２８０５（ＣＨ）、２２２５（ＣミＮ）。

１６３８（Ｎ匹）、１５３０（ＮＨ）。Ｒｆ　（５ｉｎ２；　ＮＨ３水／　Ｍｅ ＯＨ／　ＣＨ２Ｃｌ２　）　（６；　４４　：　５０　）　０．２５゜テトラヒ ドコフラン（２Ｓｃ＆＞Ｆジアミド（０，９７＃、２．８ミリモル）に窒素下で ざラン−テトラヒドロフラン溶液（４７ｄ、１−口Ｍ）を注射器により加え、混 合物全還流した（２４時間）。メタノール（４ｃｒｙ？　）を注意深く加えて過 剰のボランを分解後、溶液を蒸発乾固Ｌ、残留物を塩酸（６ＭＮ　３０ｃｍ’　 ）で処理し、６時間還流した。冷えてから、浴ｆｆｋ水酸化ナトリウム（２，５ ｃｍ３）で塩基性にし、クロロホルム（３Ｘ　５０ｃＩＩ？）で抽出した。減圧 下に溶媒を除くと、無色残留物が得られ、こａｖｉ−）ルエ／から再結晶して望 むペンタミｙ　（Ｖａ）　ｋ　’Ｒ０固％（０，７５＃、８　！ｌチ）、融点１ ４９〜１５０℃として得た。（δＨｃＤｃｚ３）　７．２１（２Ｈ，ａ、　Ａｒ Ｈ）、７．１４（２Ｈ，ａ、　Ａｒａ）、！ｌ−８３（２Ｈｌ　（１１０Ｈ２Ａ ｒ　）＃　２−８〜２．４　（１９Ｈｌ　ｍ、　ＣＨ２Ａｒ＋ＣＨ２Ｎ　、）、 ２−２（６Ｈ，ｂｒｓ、　ＮＴ（）＋　１−７１　（２Ｈ１ｑｕｉｎｔ、　ＣＨ ２Ｃ）。ｒｔ￥ｅ　（イソブタン、ＤＣ工）３２０（ｍ”＝　１　）、３１９　 （Ｍ”）。（δＣＣＤＣ６３）　１４　Ｄ−９（ＡｒＣＨ２ｉアリール）、１３ ９．０　（ＣＨ２−２了り−ル）。

１２９．１．　１２７．０（ＡｒＣＨ）、５５．８．　５０．７．。

４９．６＊　４６−１　（ＣＨ２Ｎ）　、４０．８　（ＱＨ）　、３８−６（Ｃ Ｈ２−Ａｒ　）　ｙ　２９．３（ＣＨ２）。

ｐ−ジオキブン（５ｄ）中２−ビニル、６−メトキシ酢酸ピリジンのｐ−ニトロ フェニルエステル（３１，２η、０．１ミリモル）の溶液に、１，４−ピペラジ ンビス（エタンスルホン酸）（Ｐ工ＰＥＳ　）　Ｑ、５　Ｍ緩衝水（田６，８． ５−３）中ＶａＣ３１，９９，０，１ミリモル）の溶液を加え、溶液を２０゛Ｃ で３時間かき１ぜた。

このエステルをイオン交換ＨＰＬＣ）てより精製すると望ムエスフルＶｂ　（４ ４，５−ｖ、　９０％）が得られた。

ｒｎｌｅ　（速い原子衝撃、グリセリン／Ｈ２０）　ｄ９５　（Ｍ＋＋１　）、 ４９．４．３３（Ｍ”）、３０４．　２２４．　１８５゜１１５゜（δＨＤ２０ ．二酢酸塩として）　７．７６　（１Ｈ。

ｔ、　ｐ７（’Ｈ，Ｊ７．２Ｈｚ　）、７．４８　（Ｉ　Ｈ２ａ、ｐｙＣＨ）＋ ７．３０　（１Ｈｌｄ、１）７ＣＨ）　＋　７．１７　（３Ｈ，ｂｒｓ、　Ａｒ ＣＨ）。

６．７４　（Ｉ　Ｈ，ａａビニルＣＨ）、６．０３　（Ｉ　Ｈ，ａ、　、ｒｌ　 ７．７）、５．５０（Ｉ　Ｈ，ｄ、　、７１１．０）、４．６４（２Ｈ，ＣＯＣ Ｈ２０）、４−３３（２Ｈ３Ｓ３　Ｃｉ（ｇｏ　Ｌ　４１４ＣＨ２ＣＨ２Ｃ’１ （２）。

マレイミド官能基化した大環状化合物Ｖｃはｖｂについて記述した方法と同様に して、Ｎ−（４−カルボキシシクロヘキシルメチル）マレイミドのｐ−ニトロフ ェニルでたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｙａｍａｄａ等、Ｅｕｒ 、　、Ｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、（１９７９）　ｔｌｏｌ、３９５）を使用するこ とによジつくらｎる。

官能基化した大環状化合物全抗体と結合するには、先ず抗体ｋ　Ｔｒａｕｔ試薬 （２−イミノチオラン）と反応させて付着点とするための遊離チオール基を得る 。例えば、０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐ）（７，４）中Ｌｙｍ　−１（ ２”９　）の溶液を、５０　ｍＭ　トリエタ／−、＋Ｉ／アミｙ−ａｃｚ（ｐｌ （８）中２−イミノチオラン（２０ｍＭ　）　７５μａｍ’と混合し、β−チオ エタノール（６凪ｍ３）を加えた。４℃でインキュベーション後（１時間）、修 飾さｎた抗体’ｋＧ−１０セフアロースカラムで精製した。Ｐ）（６，８の抗体 溶液（ＰＩＰＥＳ緩衝液）にビニルピリジン抱合大環状化合物（ｖｂ）を加え、 室温で３時間反応を進めた。生じた大環状化合物−リンカー−抗体の結合体Ｔｈ Ｇ−１０セファロースカラムで精製した。

Ｖｌ）　’！たはＶｃとテクネチウムとの錯体形成は報告された文献法（’ｒｒ ｏｕｔｎｅｒ等、工ｎｔ、　Ｊ、　Ａｐｐｌ、　Ｒａｄｉａｔ法を使用し、酒石 酸第一スズの存在下Ｔｃ０４’−を用いて、そしてリン酸塩またはコノ・り酸塩 緩衝液を使用して還元テクネチウム（Ｖ）から大環状化合物へのＱＱｍＴ（２の 移励ヲ促進することにより行なった。

レニウムの錯体形成は等モル量のｖｂおよびＲｅ０Ｃｔ３（ＰＰＨ３）２　［： 　Ｊｏｈｎｓｏｎ等、：ｒ、　Ｃｈｅｍ、　ｓｏｃ、＋　（１９６４Ｌ１０５４ ）ｋクロロホルム中で反応させることにより行なった。２５°Ｃで５分後、ジエ チルエーテルを加え、Ｒｅ０Ｃ２（Ｖｂ）”＋錯体を沈殿させた。水溶液中でと の錯体は主としてＲ６０２（Ｖｂ）＋錯体として存在する。それはＲｅ−オキソ 結合に対してトランスの塩素が不安定だからである。

６４ＣｕＣ１２の溶液（３０ａｌ　）　ｋＸ６．０で０．１Ｍ酢酸ナトリウム中 または０．１Ｍコハク酸ナトリウム中大環状化合物結合体（約３ｍ９Ａｂ／ｄで ２００μＪ）Ｋ加えた。溶液を６５℃で０，５時間インキュベーションし、次に １ｃ１ｒＬ×６α寸法のセファデクスＧ−５０（微粒）グルカラム（タンパク質 の溶離に用いるＰＢＳ緩衝液中で６らかしめ一晩膨潤させたもの）でクロマトグ ラフィーを行ない、Ｑ　、５　ｍｌずつ集め、各フラクショ／の計数音調べて望 む銅結合抗体大環状化合物錯体を分離した。

例　２ 構造： を有する大環状化合物の合成を行なった。

６−７ミノクマリンからジアゾ化を経て次にシアン化第−銅との反応（Ｍｏｒｇ ａｎ　Ｋ、Ｔ、、等、Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ。

（１９０４）、１２３０）により調製した６−シアンクマリン（３，４６＆、２ ０ミリモル）ヲメタノール（２００ｃｍ３）中１，９−シアミノ−６，７−ジア デノナン（３，２０ｇ、２０ミリモル）の溶液に加え、混合物をＫｉｍｕｒａ　 （、Ｔ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　（ｉ　９８５）＋３３５〕 の方法に従いアルゴン下に６日間還流した。

メタノールの蒸発後、残留物を例１記載のようにシリカ上でクロマトグラフィー を行ない、得られたアミドを過剰のざラン−・テトラヒドロフランを用いて還元 してＶｔ−得、このもの全熱トルエンからの再結晶によるか、あるいは逆相ＨＰ ＬＣ法を用いることにより精製した。

この大環状化合物を例１記載のよう（（マレイミド筐たはビニルビリシンリンカ −ＶＣ結合させ、この官能基化した大環状化合物を上記のように抗体Ｆａｂ’る るいはＦ（ａｂ）２’　７ラグメントにつないだ。テクネチウムあるいはレニウ ム（Ｖ）の錯体形成は、例１記載の方法を用いて対応する塩から還元条件下で行 なった。

例　３ 構造： を有する大環状化合物の合成を行なった。

金属ナトリウム（１１５＊、５ミリモル）？乾燥メタノール（１００ｃｍ３）に 溶かし、Ｎ　＃　Ｎｌ　−３１７−テトラ（ｐ−）ルエンスルホニル）−３，７ −ゾアデノナンー１，９−シアミン（１，９５＆、　２．５１ミリモル）を固体 の１１加えた。混合物を窒素下に１時間還流し、溶媒を除去して固体二ナトリウ ム塩を得た。痕跡量のメタノールを真窒て除いた後、固体を乾燥ジメチルホルム アミド（５０ｃｍ３）　ＶＣ溶かし、溶液ヲ８０℃に加熱した。ジメチルホルム アミド（２０ｃｍ”　）　中６　。

６−ジブロモメチル−６−ニトロベンジン（７４７９，２，５ミＩＪモル）の溶 液を１時間にわたり加えた。８０℃で２時間かき１ぜた後、水（４０口３）を１ ５分にわたり加え、混合物を２０℃で１６時間かき１ぜた。生じた油状生成物を 分離し、ジクロロメタン（５０ｃｒＩｔｓ）に溶かし、水（３Ｘ１５ｃｍ’）で 洗浄し、溶媒を蒸発させた。この環状テトラトシレートｆ　ＣＨ２Ｃ４２／ヘキ サン（１：　４　ｖ／ｖ　）から沈殿させ、続いて中性カラム上ジクロロメタン ／メタノール（１％）で溶離するクロマトグラフィーにより精製しトシル化され た大環状化合物ｔ−無色ガラス状物質として得た。この大環状化合物に酢酸（４ ５％、１００Ｌニアｒ？）中７エノール（２ｙ）および臭化水素を加え、８０℃ で２４時間かき葦ぜることにより脱トシルを行なった。生じた混合物を冷却し、 溶媒を減圧下に除去するが、このとき酢酸除去を促進するためトルエンを添加し た。残留物を水（１００Ｃ７ＩＬ３）Ｉｃ溶かし、ジクｏ　ｏ　）ｔ　に’　７ 　（４Ｘ　５０ｃＩｒＬ３）で洗浄した。水相を蒸発させ、生成物を水（１００ ｄ）に再び溶かし、イオン交換樹脂（ＯＨ−形、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ工Ｒ４００ ）に通した。このようにして得た水溶液を蒸発させて生成物を得、このものをそ の塩酸塩としてエタノール／塩酸から結晶化させた。陰イオン交換カラムに通過 させてアミンを再生させると、アミンが淡黄色の油として得られた。芳香族ニト ロ基から対応するアミノ基への還元は、遊離アミン（６１８ダ、２ミリモル）′ ｆｃエタノールに溶かし、炭素上パラジウム（１００ダ、１０チ）ｔ−加え、３ ０℃２気圧で３時間水素化することにより行なった。濾過して廃触媒を除去した 後、溶媒を除いて化合物１１を得、これを窒素下に一３０℃で貯えた。

Ｒθの錯体形成金側１記載のように行なった。

例　４ 構造二 を有する大環状化合物の合ａｔ行なった。

この合成法は例３記載の大環状化合物■に対する方法と本質的に同じでろるが、 ただしＮ　Ｉ　Ｎｌ　−３１９−テトラ（ｐ−）ルエンスルホニル）−６−オキ サ−３，９−ゾアデデカンー１．１１−ジアミンの二ナトリウム塩を夏用しく　 Ｄｉｅｔｒｉｃｈ、　Ｍ、Ｗ、等、Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｉｍ。

Ａｃｔａ、（１９８３Ｌ　６６．１２６２）、芳香族ニトロ基の還元に先立ち遊 離アミンの環窒素原子にアセテート側鎖を加えた。

水（１０ｃｍ３）中水醒化ナトリウム（１，４Ｆ、　３７．５ミリモル？、５℃ 以下で水（１０ｄ）中ブロモ酢酸（２，４２ｇ、１７．５ミリモル）ＶＣ加えた 。！　夕／　−ル（１０工３）中遊離アミンを加え、温度を７０’Ｃに２時間保 持した。冷却後、溶液を塩酸で約ｐＨ３，５とすると、置換された大環状化合物 ■の白色沈殿が生じた。

これを濾過し、水から再結晶し、臭突で乾燥した。

ｐｂ”＋との錯体形成は、等モル濃度の硝酸鉛および大環状化合物を混合するこ とにより水性条件下で行な構造： 七Ｍする大環状化合物の合成を行なった。

６−ニトロクマリン（９，５５Ｍ、５０ミリモル）ｔ−メタノール（２００α３ ）中１，９−ジアミノ−３゜７−ジアデノナン（８，ｆ、５０ミリモル）の溶液 にアルゴン下で加え、混合物′ｔ−６日間還流した。メタノールを蒸発後、残留 物をシリカ上でクロマトグラフィーを行ない、ＣＨ２Ｃｌ２／　ＣＨ，ＯＨ／　 ＮＨ，ＯＨ（７０：　２７　：　３ｖ／ｖ　）で溶離して黄色の油を得、エタノ ール／塩酸からの再結晶により更ｌＣ精製して環状アミドの三基酸塩を得た。こ のアミドｆ：ｒラン−ジメチルスルフィドで還元し、フェノール性−〇Ｈ基のＯ −メチル化および例３記載のように炭素上パラジウムを用いた芳香族ニトロ基の 還元を行なって大環状化合物■を得た。

テクニチウムの錯体形成は文献に記載の技術を用いてＮａ２Ｓ２Ｏ４’Ｅたは酒 石酸第一スズの存在下（ＮＨ，）ＴＣＯ。

および大環状化合物全使用して行なった。

例　６ 構造二 を有する大環状化合物の合成を行なった。

この合成は大環状化合物■の合成と本質的に同じであるが、ただし例４記載のよ うに、芳香族ニトロ基の還元に先立ちアセテート側鎖を環窒素原子に加えた。

インジウムおよびガリウムの錯体形成は、大環状化合物ｆ、　０．０４　Ｍ　Ｈ Ｃ２中工ｎｃｔ３　’ＥたはＧａＣ２３と酢ｒＩＲ塩またはクエン酸塩緩衝剤を 用いて絹調節下に４５分間水中で反応させることにより行なう〔例えば、Ｂｕｃ ｋｌθｙ。

Ｒ，Ｇ、等、Ｆｅｂｓ、　Ｌｅｔｔ、＋　（１９８４Ｌ　１６６＊　２０２およ びＭｅａｒｅｓ＋　Ｃ，Ｆ、等ｓ　Ｊ　、Ｐｒ　Ｏｔ　ｅ　ｉ　ｎ　＋　Ｃｈｅ ｍ−ｒ　（１９８４）　＋３．２１５参照〕。

例１，２．３’！たは４でつくられた生成物は、金属との錯体形成の前後いずｎ かで、標準技術を用いて抗体またけ抗体フラグメントに共有結合で結合させるこ とができる。例えば、本発明に係るｔａｂ’−リンカ−大環状化合物結合体はモ デルの大環状化合物でらる１４−（５−アミノフェニル）−１，４，８，１１− テトラアゾシクロテトラデカン番で対して下に述べたように大体において調製で きる。

１４−（５−アミノフェニル）−１，４，８，１１−テトラアゾシクロテトラデ カン（１ミリモル）を０．２Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）ｉｃ溶かし、０． ２Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）Ｋ溶かしたヘテロ三官能性架橋試薬であるス クシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）グチレート（１ミリモル）で 室温において２時間処理した。生じた大環状化合物−リンカ−をＫｉｍｕｒａ等 （、Ｔｎｌ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｃｈｅｍ、　Ｃ０ｍｍ−＋　（１９８５ ）＋６８５頁〕により大要記述されているように、シリカゲルカラムクロマトグ ラフィーを用いて精製した。

モノクローン抗体を酵素ペプシンで処理してＦ　（ａｂ’　）２フラグメントを 発生させた。次に、このＦ　（ａｂ’　）２フラグメントを浸透クロマトグラフ ィーを用いて精製した。

精製されたＦ（ａｂ’）２７ラグメントラ次に還元剤ジチオトレイトール（１ミ リＭ）でｐ）（８において室温で３時間処理した。生じたＦａｂ’フラグメント ヲ次に酸性にし、０．１０セフアロースカラムに通過させて純粋なＦａｂ’フラ グメントを得た。生じたＦａｂ′（０−１ミリモル）を次に０．２Ｍリン酸塩緩 衝液（ｐＨ７゜４）−Ｐに溶かし、０．２Ｍ’）ン酸塩緩衝液（ｐｉ（７，４） 中太環状化合物−リンカー結合体（１ミリモル）の溶液に加えた。

次にこのＦａｂ’フラグメントおよび大環状化合物−リンカ−結合体をアルゴン 下ＩＣ室温で３時間反応させ、生じた大環状化合物−リンカー−Ｆａｂ’結合体 を０．１０セフアロースカラムで精製シた。

水元ＦＡを例としてのみ記述したので、細部の変更は本発明の範囲内で行ないう ることは明らがでめる。

手続補正書（自発） 昭和６２年１１月１３日

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．下記の構造： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ 〔式中、 Ｒ１は−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ６−（ＣＨ２）ｑ−（式中、ｐおよびｑは同じかまた は異なり、そして０，１または２であり、−Ｒ６−は−（ＣＨ２）ｎ−（ｎは０ か１である）、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−または▲数式、化学式、表等がありま す▼である）で、任意にアルキル置換されるが、たださもしＲ６が−ＣＨ２−で なければｐもｑも０でないことを条件とし、 Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−で、任意にアルキル、アル コキシアルキル、またはヒドロキシアルキル置換され、 Ｒ３は同じかまたは異なり、そして−Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アル コキシアルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアルキルエステル、ホスフエ ート、スルホネートまたはホスホネートであり、 Ｒ４は ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼▲数式 、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼で、任意 にアルキル置換され、そして式中のＲ７は−Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル 、またはアルコキシアルキルであるが、ただしＲ４が▲数式、化学式、表等があ ります▼であるときはＲ３はカルボキシアルキルでないことを条件とし、 Ｒ５はリンカーであり、そして Ａｂは抗体である〕 を有する抱合化合物。
2. ２．Ｒ１は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である、請求の範囲第１項記載の抱合化合物 。
3. ３．Ｒ１は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−である、請求の範囲第１項記載の抱 合化合物。
4. ４．Ｒ２は同じで−ＣＨ２ＣＨ２−である、請求の範囲第１項記載の抱合化合物 。
5. ５．Ｒ３は同じで−Ｈである、請求の範囲第１項記載の抱合化合物。
6. ６．Ｒ７は−ＨまたはＣ１からＣ３アルキルである、請求の範囲第１項記載の抱 合化合物。
7. ７．Ｒ５は、抗体の結合親和力と特異性が実質的に損なわれないように、また抱 合分子の大環状部分が金属と配位できるように、抱合化合物の大環状部分に抗体 をつなぐのに適合した２価の基である、請求の範囲第１項記載の抱合化合物。
8. ８．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、Ｒ３，Ｒ５およびＡｂは請求の 範囲第１項で定義した通りである） を有する、請求の範囲第１項記載の抱合化合物。
9. ９．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中、ｍは１から５であり、Ｒ３， Ｒ５およびＲ７は請求の範囲第１項で定義した通りである）を有する、請求の範 囲第１項記載の抱合化合物。
10. １０．錯体を形成した金属原子を含む、請求の範囲第１項記載の抱合化合物。
11. １１．錯体形成する金属原子をＴｃ、Ｒｅ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ａｕ、およびＡｇから 選ぶ、請求の範囲第８項記載の抱合化合物。
12. １２．請求の範囲第１項に定義された抱合化合物またはその付加塩と製薬上容認 しうる担体からなる組成物。
13. １３．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ（式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は 請求の範囲第１項で定義した通りであり、Ｒ８はＲ４に共有結合で付着した反応 基からなる）を有する化合物。
14. １４．Ｒ８は８から１０のｐＫａを有する環外アミンである、請求の範囲第１３ 項記載の化合物。
15. １５．Ｒ８は−ＣＨ２−Ａｒ−ＣＨ２ＮＨ２である、請求の範囲第１４項記載の 化合物。
16. １６．請求の範囲第１３項に定義された化合物をリンカーおよび抗体と反応させ ることからなる、請求の範囲第１項記載の抱合化合物の製造法。