JPS63502433A

JPS63502433A - リゾホスホリピドを用いる疎水性物質の可溶化

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Publication number: JPS63502433A
Application number: JP62501050A
Authority: JP
Inventors: チルコック，コリン，ピー，エス; クリス，ピ−タ−，ア−ル; ホ−プ，ミカエル，ジェ−; ジャノフ，アンドリュ−，エス
Original assignee: ザ　リポソ−ム　カンパニ−，インコ−ポレイテッド
Priority date: 1986-01-22
Filing date: 1987-01-22
Publication date: 1988-09-14
Anticipated expiration: 2011-10-16
Also published as: CA1303990C; DE3780100D1; US4923854A; WO1987004347A1; JP2533755B2; EP0256090A4; DE3780100T2; JPH0899907A; ATE77748T1; EP0256090B1; EP0256090A1; JP2543114B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】リゾホスホ１ピドを　いる　物　の可゛　ヒ充１Ｂ陀Ｗ月一本発明は疎水性物質の可溶化の分野に関する。特に、本発明は可溶化剤及び非− 毒性の引き渡しくＤｅｌｉｖｅｒｙ）媒体として成る種のりゾホスホリピドを用いることを記載している。

疎水性物質、特に生物活性物質の可溶化は一般に、デオキシコール酸ナトリウム又はプロピレングリコールのような表面活性剤を用いて達成されている。そのような表面活性剤は、それらの洗浄剤の性質のため、生物学的に相いれないものであり、そして、細胞に対する溶解（ｌｙｔｉｃ）作用のため、毒性である。それ故。

薬学的な使用のためには１表面活性剤のような毒性を有するものでない天然に生ずる物質を使用することが望ましい。

リゾホスホリピドは、従来、細胞に対する溶解作用のため製薬学的賦形剤の候補にはなりそうもないものであった０本発明者らはりゾホスファチドのための、殊にリゾホスファチジルエタノールアミン単独及び疎水性物質を可溶化するための不飽和リン脂質と組合わせたもののための方法及び組成物を記載している。

ペダーリン等のアーチ・バイオケミカル・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、）　１７９．２１８−２２８（１９７７）には、生物膜におけるＡＴＰアーゼ抑制剤としての、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）の性質が観察されており、これらは多分。

酵素の周りの薄膜中にＬＰＨの侵入のために流動性の少ない脂質環境を作る作用をする。リゾホスホリピド懸濁液は肪質細網の成分と混合され、ＡＴＰアーゼの活性の変化が分光光度分析を用いて記録された。しかしながら、リゾホスファチジルコリンと違って、ＬＰＥは、いかなる濃度においても生物膜を決して可溶化しなかった。

本発明は、疎水性物質のミセル可溶化及び非−毒性生成物の引き渡しを行なうために、リゾホスファチジルエタノールアミン類の相変化に依存しているｐＨ及び温度を開発するものである。

本Ｘ肌夏！豆本発明は、ＬＰＥ単独又は不飽和リン脂質と組合（結合さ）せたＬＰＥを用いる疎水性物質の可溶化に関するものである。

本発明のＬＰＥ類は次ぎの一般式を有するものである。

又は式中、Ｒは炭素原予約１１と２１の間、二重結合的Ｏと６の間。

そして好ましくは炭素原予約１３〜１９、更に好ましくは炭素原子１５〜１７および１〜３の二重結合を有する炭化水素鎖である。

好ましいＬＰＥは、上記一般式Ｉにおけるように、ＲＣＯ，が１−オレオイルであり、そのオレオイル基がその１位の炭素原子に結合されているものである。

ホスホリピド（リン脂質）はリン酸によりエステル化された１つのヒドロキシル基を有するグリセロール分子であり、そのリン酸はさらにアルコール成分によりエステル化されている。そして、その他のグリセロールのヒドロキシル基はカルボキシル化脂肪酸類によりエステル化されている０本発明で用いられる不飽和リン脂質は炭素原予約１２と２２の間及び二重結合的１から６個、好ましくは炭素原子約１６から２０及び二重結合１から３個を有する脂肪酸類の少なくとも１つを含有する。第２脂肪酸鎖は炭素原子約１２から２２及び二重結合的０から６個、好ましくは炭素原子１４から１８及び二重結合的０から２個、更に好ましくは二重結合Ｏ又は１個を含有するものである。それらに限定されるものではないが、適当なリン脂質はホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール又はホスファチジルクロリンを含む、好ましい不飽和リン脂質は卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリンスはジオレオイルホスファチジルコリンを含む。

そのリゾホスホリピド、ＬＰＥ　単独又はリン脂質との組合せ（結合）物は、疎水性物質と約１℃と９０℃の間の温度及び約８．５と１４．０の間のｐＨ１好ましくは約２５℃及び約ＰＨ８，５で水性媒体中で混合される。一方、さらに高不飽和のＬＰＥが用いられてもよい、この場合、その疎水性物質はその脂質及び水性媒体と約０℃と約９０℃の間の温度、好ましくは約２５℃及び約ｐＨ７，０で混合されてもよい、ついで、その懸濁液は０℃以下に低下させられる。

それらに限定されるものではないが、その疎水性物質は、薬剤。

ホルモン、蛋白質、染料、ビタミン又は映像剤（ｉｍａｇｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ）を含む生物活性剤からなることができる。その水性媒体はホウ酸塩、又はＮ− ２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸のような緩衝系であることができる。その結果、得られる懸濁液は積み重ねられたポリカーボネートフィルターのようなフィルター系を通して加圧下で通過させることができ、そして、その疎水性物質を更に分散するために、超音波で処理することができる。

図面の簡単な　日第１図は、ｐＨ７，０、−２０℃と９０℃の間の温度における１−オレオイルリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＯＰＥ、又は５ｎ−１−１８：　１ｃｉｓ−Ｐ　Ｅ）の水性分散液の８１ＭＨ２”Ｐ−ＮＭＲスペクトルである。

第２図は、ＬＯＰＥの多形相の作用（性質）　（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｐｈａｓｅ　ｂｅｈａｖｉｏｒ）に関するＰＨの変化に対する作用を示す３１Ｐ　− ＮＭＲスペクトルである。

第３図は、（Ａ）　５ｎ−１−１８：　２ｃｉｓ−ＰＥ及び（Ｂ）　５ｎ−１− １８：３　ｃｉｓ−Ｐ　Ｅの多形相の作用に関して、種々の温度の作用を示す３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルである。

第４図は、種々のリン脂質の溶血性特性を描写しているグラフである。

第５図は、種々のリン脂質の溶血性特性の拡大目盛でのグラフである。

明の詳細な　１１−オレオイルリゾホスファチジルエタノールアミンはで表わされる０式中、Ｒは〔１〕と呼ばれるような、１−位の炭素に付加されたオレオイル基であり、従って、１−オレオイルである。その（、ＯＨ）基は〔２〕の炭素に位置している。この脂質は、さらに、シス型の１つの二重結合の場合に、その二重結合の数を示す数に伴ってオレオイル基の１８個の炭素構造（組成）を示す５ｎ−１−１８：　１　ｃｉｓ−Ｐ　Ｅと表わされてもよい、さらに、学名命名法の実例として例えば、Ｒが１位にあって、二重結合が２又は３個及び炭素原子１７個を有するより高い不飽和のＬＰＥ類はそれぞれ５ｎ−１−１８：　２　ｃｉｓ−Ｐ　Ｅ及び５ｎ−１−１８：　３　ｃｉｓ−Ｐ　Ｅとして表わされる。そのカルボキシル化された炭素原子は第１８番目の炭素原子である。

本発明者らは、１−オレオイルリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＯＰＥ、又は５ｎ−１−１８：　１ｃｉｓ−ＰＥ）が生理学上のｐＨで、他のりゾホスホリピドのミセル（ｍｉｃｅｌｌａｒ）配列よりも大きいラメラ（ｌａｌｆｌｅｌｌａｒ）相を示すことを見出した。しがしながら、ＬＯＰＥは、そのような条件下で疎水性物質のミセル可溶化を促進するより高いｐＨ（即ち、８．５又はそれ以上）でミセル状態を示す、ミセルから二重層（ｂｉｌａｙｅｒ）状態への、この多形相作用は次の事によって実証される；　（ａ）リゾホスファチジルコリンとは対照をなして、ｐＨ７，−２０’Ｃがら９０”Ｃの間の温度でラメラ構造に相当する３１Ｐ−ＮＭＲスペクトル（第１図）：　（ｂ）ｘｉの散乱がラメラ組織を表わす等距離に空間リングを形成するＬＯＰＥ（ｉ’ｌＸ線回折パターン；　（ｃ）　ｐＨ７，ｏで生成するＬＵＶＥＴＳのユニラメラ（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ）特性を示す凍結破壊顕微鏡写真図およびミセル構造を示す、ｐＨ９，０における等方性運動平均を示す″１Ｐ−ＮＭＲスペクトル（第２図）、この多形相作用はｐＨ約８．５で疎水性物質のミセルの可溶化が行なわれ、そして。

より低いｐＨでは二重Ｎ（ｂｉｌａｙｅｒ）が形成されるものである。

本発明者らは、又、　５ｎ−１−１８：　２ｃｉｓ−ＰＥ及び５ｎ−１−１８：　３　ｃｉｓ−ＰＥのような二重結合２又は３個を有するリゾホスファチジルエタノールアミンが種々の温度変化に応じて多形相作用を示すことを見出した。０ ℃以下で、両方の脂質は、ピークに伴って低い肩の分野で示される全体のラメラ組織を示す３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルの立ち上がりを与える（第３図）　ｓ　５ｎ−１−１８：　２ｃｉｓ−ＰＥ及び５ｎ−１−１８：　３　ｃｉｓ−Ｐ　Ｅの両者はＯ−１℃で六角形構造を示す。

しかしながら、１０−２０”Ｃ及びそれ以上では、両脂質は（反転せる）ミセル又はＨエ　状態である。

本発明においては、脂質フィルムと疎水性物質とが水性媒体中で混合され、その結果、その疎水性物質の可溶化が得られる。この可溶化は、いくつかの方法で達成される。ＬＯＰＥが使用される可溶化脂質である場合には、その疎水性物質は、それを可溶化するに十分な量でＬＯＰＥと組合（結合）され１両者を容器中で有機溶媒から乾燥してフィルムとした。適当な有機溶媒は、種々の極性及び誘電特性を有するものであり、クロロボルム、アセトン、メチレンクロライド、ジエチル及び石油エーテル類、及びクロロホルムとメタノールの混合物を含有する。

上記溶媒のすべてがリン脂質を溶解するであろう、その後、その乾燥フィルムは約８．２と約１４．０の間のｐＨで水性媒体により水和される。一方、ＬＯＰＥの乾燥フィルムは、約８．２及び約１４．０の間のｐＨで水性媒体により水和され、ついで疎水性物質が付加される。最後に、疎水性物質を含有するｐＨ約８．２と約１４．０の間における、水性媒体はＬＯＰＥの乾燥フィルムを水和するのに用いられる。その疎水性物質は生物活性剤であることができる。

好ましい具体例として、脂質と疎水性物質が真空下でクロロボルムから薄いフィルムに乾燥される。ついで、その乾燥フィルムは、ｐＨ８，５〜１４．０の範囲、もっとも好ましくは約Ｐ　Ｈ８，５で、ボウ酸塩、ＨＥＰＥＳ、又はグルタル酸カリウム（Ｋ　Ｇ　１　ｕ　）のような水性緩衝剤で水和される０通常８．５〜１４．０のｐＨ領域で、リゾホスファチジルエタノールアミンはミセル状態になると推測される。約８．０及びそれ以下のｐＨでは、ＬＯＰＥはラメラ状態にある。その疎水性物質は、撹拌しながら及び／又は渦巻き混合により水性媒体中で、その脂質と共に再水和される。その疎水性物質の濃度は好ましくは緩衝剤の約５〜２５ＩＩＩｇ／ＩＩＱの範囲であることができる。そのＬＯＰＥ分散はミセル化に好都合とするため約４℃で２〜３時間行なわれる。ついで、この分散は任意に押出し装置を用いて約７００ｐ　ｓ　ｉの圧力下で約１０回繰り返し押出しを行なう；この方法及び”　Ｌ　Ｕ　Ｖ　Ｅ　Ｔ”装置は１９８４年７月２０日付で出願された出願中の出願番号（Ｓｅｒｉａｌ　Ｎｏ、）　６２２．６９０号、ピータ−アール、クリス等の　“ユニラメラ小胞体を製造するための押出し技術″、参考例でここに加入されている関連部分に記載されている。その試料は、沈殿がないことによって証明される完全な可溶化を確証するため、約２０〜３０℃、好ましくは約２５℃で１６〜１８時間静置された。その溶解された生成物は、人間のような哺乳動物を含む被験者に１例えば静脈内、筋肉内又は皮下に投与される注射し得る生成物として用いることができる。その生成物は。

生理溶液を作るために１例えば十分な塩類又はグルコースのような他の溶液を含有してもよい無菌の水溶液の形成に最もよく用いられる。

ｓｎ−１−１８：　２ｃｉｓ−Ｐ　Ｅ又は５ｎ−１−１８：　３ｃｉｓ−ＰＥ（類）が可溶化脂質として用いられる場合には、その疎水性物質は可溶化するために十分な量で、その脂質と組合わ（結合）され、両者は容器中で有機溶媒からフィルムになるまで乾燥される。ついで、その乾燥フィルムは、その脂質のラメラ相に好都合な約６．０と８．０の間のｐＨ及び約−９０℃から０℃までの温度で水性媒体により水和される。一方、乾燥脂質フィルムは、約６．０と８．０の間のｐＨで水性媒体で水和されてもよく、ついでその疎水性物質の付加又は組合わせが行なわれる。その可溶化生成物は、貯蔵寿命を高めるためにラメラ相脂質中に低温で貯蔵される。

腹！及墾友亘ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）はコンフリウス、ピー等のバイオフィジク・バイオケミカル・アクタ（跳動Ｈ，Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ａｃｔａ、、）　４８８．３６−４２（１９７７）により確立された方法によって、ジオレオイルＰＣからＨ４製された。リゾホスファチジルエタノールアミンは次の原案によって調製された；Ｄ　ＯＰ　Ｅ　５００　ｍｇを無水ジエチルエーテル５０＋ｓＱ中に溶解し、それに、０．５Ｍ　）−リス／ＨＣＱ緩衝液（ｐ　Ｈ７，４）１０ｍＱ、　２．５　ｍＭ　ＣａＣＱ、１０ｍＱ及び北米産のクロタルスアダマンテウス（Ｃｒｏｔａｌｕｓａｄａｍａｎｔｅｕｓ）の毒液（シグマケミカル社、セントルイスＭＯ）１００　ｍｇが加えられた。その反応容器は窒素で充満され、密封され、アルミニウムで覆われ、そして、室温で激しく撹拌された。その混合物はジエチルエーテルとクロロホルムメタノール２：１ｖ／Ｖで、続いてクロロホルムで抽出された水性相を除去するために、減圧下でロートエバポレーターにて蒸発処理された。その調製物は、ウォーターズプレプ（Ｗａｔｅｒｓ　Ｐｒｅｐ）　５００Ｌ　Ｃユニットを用いて液体クロマトグラフで精製された。純度は、さらにＨ−ＮＭＲで実証された。　本発明は次の実施例で例証するが１本発明の範囲はそれに限定されるものではない。

失凰孤よ２１−アセトキシプレグネノロン（シグマケミカル社、セントルイス、ＭＯ）５　ｍｇと組合（結合）されたＬＯＰＥ５０μｍｏｌを試験管の内部側面上にクロロホルムからの乾燥フィルムとするためにロート蒸発した。１−Ｑのホウ酸塩緩衝液（ｌｏＯｍＭＮａＨＣＯ，，５０ｍＭホウ酸塩）＋ｐＨ８，５がその試験管に加えられ、そしてその脂質が渦運動により分散された。渦運動による分散後、そのｒＡ製物は、１００　ｎｍポリカーボネートフィルターの２つを積重ねで装備されたＬＵＶＥＴ装置の圧力室中に移された。

正の圧力が、標準窒素シリンダーにより、５００　ｐｓｉにその加圧室に適用された。その圧力は、その膜フィルターが詰まることなく試料を完全に押出すことができる２００〜９００　ｐｓｉの範囲内に調節された。圧力を適用することにより、そのフィルターを通して、試料を押出すことができる。各試料は全十回で押出された。

上記操作は、２１−アセトキシプレグネノロン１０．１５．２０及び２５ｍｇを用いて繰り返された。

それらの試料は２５℃で１６〜１８時間静置され、その時間の後には、全ての試料は透明であり、２１−アセトキシプレグネノロン含有量が増加するにつれて粘度が増加するものであった。

失え匹又２１−アセトキシプレグネノロン１０　ｍｇを可溶化するため、ＬＯＰＥ及びＤＯＰＣを１＝１の割合で用い、実施例１の操作及び物質が使用された。ＬＵＶＥＴ処理に続いて、その溶液は２５℃で１６〜１８時間静置され、そして２００　ｐｓｉ圧力で５０ｎｍ　フィルターを用いるＬＵＶＥＴろ過がさらに行なわれた。この処理の後では。

特別の物質はそのフィルター上には観察されず、その調製物は半透明であった。

緩衝液１．Ｏｍ　Ｑ中にステロイド２０■ｇを可溶化する試みは不成功であった。

寒庭鮭ｙ１−オレオイルリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＯＰＥ）の溶血特性がｐＨ７，０及び８．５の両者で試験され、そして、１−オレオイルリゾホスファチジルコリン（ＬＯＰＣ）及びジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）のそれと比較すした。ＬＯＰＥ、ＬＯＰＣ及びＤＰＰＨの貯蔵溶液はｐＨ７，０及び８．５でホウ酸塩緩衝液５０ｍＭ中１２−１３　ｍｇ／ｖａＱを含む溶液で作られた。続いて、ヘパリン化された全血液の部分標本１．ＯｍＱに、これらの化合物の１つの貯蔵溶液０．１ｍＡを加え、溶血活性が５５０　ｎｍでの遠心分離上澄液の分光測光法測定により分析された。

第４図は、ＬＯＰＣと比較してｐＨ７，０と８．５の両者において、ＬＯＰＥの溶血活性が減少することを示す、ＬＯＰＣは、そのほとんどのヘモグロビンを解放して、大量の赤血球の溶解（崩壊）が生ずる。最小の溶解が生ずるＤＰＰＨに比して、高濃度のＬＯＰＥが溶解を生ぜしむる（第５図）。ｐＨ７，０と８．５の両者におけるホウ酸塩緩衝液単独での対照実験は赤血球の崩壊は生じなかった・ス】１」先２１−アセトキシプレグネノロン５　ｍｇと結合された５ｎ−１−１８：２ｃｉｓ−ＰＥ　５０μｍｏｌが試験管の内部側面上にクロロホルムから乾燥フィルムにロート蒸発される。ホウ酸塩緩衝液、ｐＨ７，０１ｍＱがその管に加えられ、そして、その脂質は渦巻き混合により分散された。分散後、その懸濁液は一２０ ℃に冷却され、ＬＵＶＥＴの圧力室に移され、実施例１の操作方法を用いて押出された。

第１図ｐＨ７におけるＬＯＰＥの３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルＰＰｒ” 第２図第３図光学密度５５０ｎｍ光学密度５５０．ｒｌｍ国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．次の工程を含む疎水性物質を可溶化する方法；（ａ）フィルムを得るために、次の一般式：Ｈ２Ｃ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３Ｉ又はＨ２Ｃ（ＯＨ）ＣＨ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３ＩＩで示されるリゾホスファチジルエタノールアミンの疎水性物質一可溶化有効量を含有する組成物が溶解されている有機溶媒を除去する工程；及び（ｂ）そのフィルムを約８．５及び約１４．０の間のｐＨで水性媒体により水和する工程；式中、Ｒは炭素原子１１及び２１個及び二重結合１個を有する炭化水素鎖である。
２．その組成物が疎水性物質を含有するものである請求の範囲第１項記載の方法。
３．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第２項記載による方法。
４．工程（ｂ）が続いて疎水性物質を加える工程を伴なうものである請求の範囲第１項記載の方法。
５．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第４項記載による方法。
６．その疎水性物質が、工程（ｂ）でそのフィルムを水和するより前に、水性媒体と組合（結合さ）せられるものである請求の範囲第１項記載の方法。
７．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第６項記載による方法。
８．その水性媒体がｐＨ約８．５のものである請求の範囲第１項記載による方法。
９．そのリゾホスファチジルーエタノールアミンが一般式Ｉのものである請求の範囲第１項記載による方法。
１０．式中、Ｒが炭素原子約１３から１９個の間のものである請求の範囲第９項記載による方法。
１１．式中、Ｒが炭素原子約１５から１７個の間及び二重結合１個を有するものである請求の範囲第９項記載による方法。
１２．式中、ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第９項記載による方法。
１３．式中、ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第１項記載による方法。
１４．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第１項記載による方法。
１５．その水性媒体が水性緩衝液を含有するものである請求の範囲第１項記載による方法。
１６．付加工程として：（ｃ）工程（ｂ）の生成物をろ過する工程を含有する請求の範囲第１項記載による方法。
１７．その工程（ｂ）の生成物を非経口的に投与する付加工程を含有する請求の範囲第１６項記載による方法。
１８．その組成物が付加的に不飽和リン脂質を含有する請求の範囲第１項記載による方法。
１９．その不飽和リン脂質が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合１から６個の不飽和脂肪酸鎖の少なくとも１つを含有する請求の範囲第１８項記載による方法。
２０．その不飽和リン脂質が炭素原子約１６から２０個の間及び二重結合１から３個を有するものである請求の範囲第１９項記載による方法。
２１．その不飽和リン脂質の第二脂肪酸鎖が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合０から６個を有するものである請求の範囲第１９項記載による方法。
２２．その不飽和リン脂質の第二脂肪酸鎖が炭素原子約１６と２０個の間及び二重結合１〜３個を有するものである請求の範囲第２１項記載による方法。
２３．その不飽和リン脂質が卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン及びジオレオイルホスファチジルコリンからなる群から選ばれるものである請求の範囲第１９項記載による方法。
２４．工程（ｂ）の生成物をろ過する付加工程を含有する請求の範囲第１９項記載による方法。
２５．そのろ過工程の生成物を哺乳動物に非経口的に投与する付加工程を含有する請求の範囲第２４項記載による方法。
２６．次の工程を含む疎水性物質を可溶化する方法：（ａ）フィルムを得るために、次の一般式：Ｈ２Ｃ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３Ｉ又はＨ２Ｃ（ＯＨ）ＣＨ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３ＩＩで示されるリゾホスファチジルエタノールアミンの疎水性一物質一可溶化有効量を含有する組成物が溶解されている有機溶媒を除去する工程；（ｂ）そのフィルムを約６．０と約８．０の間のｐＨで水性媒体により水和する工程；及び（ｃ）その水性媒体中に分散された脂質を約０℃以下の温度に冷却する工程；式中、Ｒは炭素原子約１１と２１個の間及び二重結合約２から６個を有する炭化水素鎖である。
２７．その組成物が疎水性物質を含有するものである請求の範囲第２６項記載の方法。
２８．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第２７項記載による方法。
２９．工程（ｂ）が続いてその疎水性物質を付加する工程を伴なうものである請求の範囲第２６項記載の方法。
３０．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第２９項記載による方法。
３１．疎水性物質が、工程（ｂ）におけるフィルムを水和する工程より前に水性媒体と組合（結合さ）せられるものである請求の範囲第２８項記載の方法。
３２．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第３１項記載による方法。
３３．その水性媒体が約ｐＨ７．０である請求の範囲第２６項記載による方法。
３４．そのリゾホスファチジルーエタノールアミンが一般式Ｉを有するものである請求の範囲第２６項記載による方法。
３５．式中、Ｒが炭素原子約１３から１９個を有する請求の範囲第３４項記載による方法。
３６．式中、Ｒが炭素原子約１５から１７個の間及び二重結合２又は３個を有する請求の範囲第３４項記載による方法。
３７．式中、ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第３４項記載による方法。
３８．式中、ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第２６項記載による方法。
３９．その水性媒体が水性緩衝液を含有するものである請求の範囲第２６項記載による方法。
４０．付加工程として：（ｄ）工程（ｃ）の生成物をろ過する工程を含有する請求の範囲第２６項記載による方法。
４１．その組成物が付加的に不飽和リン脂質を含有する請求の範囲第２６項記載による方法。
４２．その不飽和リン脂質が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合１から６個の不飽和脂肪酸鎖の少なくとも１つを含有する請求の範囲第４１項記載による方法。
４３．その不飽和リン脂質が炭素原子約１６から２０個の間及び二重結合１から３個を有するものである請求の範囲第４２項記載による方法。
４４．その不飽和リン脂質の第二脂肪酸鎖が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合０から６個を有するものである請求の範囲第４３項記載による方法。
４５．その不飽和リン脂質が炭素原子約１６と２０個の間及び二重結合１から３個を有するものである請求の範囲第４４項記載による方法。
４６．その不飽和リン脂質が卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、及びジオレオイルホスファチジルコリンからなる群から選ばれる請求の範囲第４５項記載による方法。
４７．工程（ｃ）の生成物をろ過する付加工程を含有する請求の範囲第４１項記載による方法。
４８．疎水性物質及び次の一般式のリゾホスホリピドのｐＨ約８．５から１４．０の間の水性溶液を含有する組成物：Ｈ２Ｃ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３Ｉ又はＨ２Ｃ（ＯＨ）ＣＨ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３ＩＩ式中、Ｒは炭素原子約１１と２１個の間及び二重結合１個を有する炭化水素鎖である。
４９．その水性溶液がｐＨ約８．５である請求の範囲第４８項記載による方法。
５０．そのリゾホスファチジルエタノールアミンが一般式Ｉを有するものである請求の範囲第４８項記載の組成物。
５１．式中、Ｒが炭素原子約１３から１９個の間を有するものである請求の範囲第４８項記載の組成物。
５２．式中、Ｒが炭素原子約１５から１７個の間を有するものである請求の範囲第４８項記載の組成物。
５３．式中、Ｒが二重結合１又は２個を有するものである請求の範囲第４８項記載の組成物。
５４．式中、ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第４８項記載の組成物。
５５．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第４８項記載の組成物。
５６．その水性溶液が水性緩衝液を含有する請求の範囲第４８項記載の方法。
５７．不飽和リン脂質を付加的に含有する請求の範囲第４８項記載による方法。
５８．その不飽和リン脂質が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合１から６個の不飽和脂肪酸鎖の少くとも１つを含有するものである請求の範囲第５７項記載の組成物。
５９．その不飽和リン脂質の第二脂肪酸鎖が炭素原子約１２と２２個の間及び二重結合０から６個を含むものである請求の範囲第５７項記載の方法。
６０．その不飽和リン脂質が炭素原子約１６から２０個の間及び二重結合１から３個を有するものである請求の範囲第５７項記載の組成物。
６１．その不飽和リン脂質が卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、及びジオレオイルホスファチジルコリンからなる群から選ばれるものである請求の範囲第５７項記載の組成物。
６２．疎水性物質及び次の一般式のリゾホスホリピドのｐＨ約６．０から８．０の間の水性溶液を含有する組成物：Ｈ２Ｃ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３Ｉ又はＨ２Ｃ（ＯＨ）ＣＨ（Ｏ２ＣＲ）ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３ＩＩ式中、Ｒは炭素原子約１１と２１個の間及び二重結合約２から６個を有する炭化水素鎖であり、そしてその組成物の温度が約−２０℃と約０℃の間にあるものである。
６３．その水性溶液がｐＨ約７．０である請求の範囲第６２項記載による組成物。
６４．そのリゾホスファチジルエタノールーアミンが一般式Ｉを有するものである請求の範囲第６２項記載の方法。
６５．式中、Ｒが炭素原子約１３から１９個の間を有するものである請求の範囲第６２項記載の組成物。
６６．式中、Ｒが炭素原子約１５と１７個の間及び二重結合２又は３個を有するものである請求の範囲第６２項記載の組成物。
６７．式中．ＲＣＯ２が１−オレオイルである請求の範囲第６２項記載の組成物。
６８．その疎水性物質が生物活性剤である請求の範囲第６２項記載の組成物。
６９．その水性溶液が水性緩衝液を含有するものである請求の範囲第６２項記載の組成物。
７０．不飽和リン脂質を付加的に含有する請求の範囲第７０項記載による組成物。
７１．その不飽和リン脂質が炭素原子１２と２２個の間及び二重結合１から６個の不飽和脂肪酸鎖の少なくとも１つを含有する請求の範囲第７０項記載の組成物。
７２．その不飽和リン脂質の第二脂肪酸鎖が炭素原子１２と２２個の間及び二重結合０から６個を含有する請求の範囲第７０項記載の組成物。
７３．その不飽和リン脂質が炭素原子約１６から２０個の間及び二重結合１から３個を有するものである請求の範囲第７０項記載の組成物。
７４．その不飽和リン脂質が卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、及びジオレオイルホスファチジルコリンからなる群から選ばれる請求の範囲第７０項記載の組成物。