JPS6342640B2

JPS6342640B2 -

Info

Publication number: JPS6342640B2
Application number: JP55082529A
Authority: JP
Inventors: Akira Ito; Sho Yamazaki; Fumio Ishii; Yoshio Koide; Yasuo Koyama; Nakao Ishida
Original assignee: KAYAKU KK
Current assignee: KAYAKU KK
Priority date: 1980-06-18
Filing date: 1980-06-18
Publication date: 1988-08-24
Also published as: JPS579749A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なアシル誘導体、更に詳細には、
次の一般式（） ―（NH―Ｒ）_o （）（式中、はネオカルチノスタチン残基を、Ｒ
は炭素数６〜18の飽和のアシル基を、ｎは１又は
２を示す）で表わされるアシル誘導体並びにその製造法に関
する。式（）中、Ｒが水素原子で表わされるネオカ
ルチノスタチンはストレプトミセス・カルチノス
タチカス・バリアントＦ―41クロヤ
（streptomyces carzinostaticus var Ｆ―
41Kuroya）の培養によつて産生される蛋白質性
抗癌物質であり（特公昭42−21752号、同54−
13516号）、現在臨床において広く使用されてい
る。そして、その一次構造はScience178，875〜
876頁（1972）に示されており、蛋白部分に２個
の遊離アミノ基を有する化合物である。更にまた、上記培養物中にはネオカルチノスタ
チン拮抗物質〔これはプレネオカルチノスタチン
とも称される：ジヤーナル・オブ・アンチビオテ
イクス，27巻，766頁（1974年９月）参照〕（特公
昭47−7356号）及びNCS―Ｃ物質（特願昭54―
130181号）が存在し、これらは同培養液から単離
収得される。更にまた、このプレネオカルチノス
タチンとNCS―Ｃ物質を反応せしめればネオカ
ルチノスタチンを与えることを見出し、先に特許
出願した（特願昭55−23865号）。そして、このプ
レネオカルチノスタチンはその構造中にネオカル
チノスタチンと同一の蛋白部分を有していること
が知られている〔ジヤーナル・オブ・バイオケミ
ストリー，81，25〜35頁（1977）〕。しかしながら、ネオカルチノスタチンは上述の
如く優れた抗癌作用を有し、特に胃癌、すい臓
癌、急性白血病等に高い治療効果をあげている
が、これは現在使用されている他の制癌剤と同様
に、毒性がけつして低いとはいえない。そこで、本発明者は、斯る点を改善せんと鋭意
研究を行つた結果、ネオカルチノスタチンの分子
中に存在する遊離アミノ基の１個又は２個をアシ
ル化した式（）のアシル誘導体はその抗癌効果
が損われることなく、毒性が低減されること、並
びに式（）の化合物はネオカルチノスタチンを
直接アシル化しても、またプレネオカルチノスタ
チンをアシル化し、これにNCS―Ｃ物質を反応
させても製造できることを見出し、本発明を完成
した。従つて、本発明は、毒性の低いネオカルチノス
タチンのアシル誘導体（）並びにその製造法を
提供するものである。本発明のアシル誘導体（）は、例えば次の反
応式に従つて、ネオカルチノスタチン（）にカ
ルボン酸（）又はその反応性誘導体を、縮合剤
の存在又は不存在下に反応せしめることによつて
製造される。（式中、、Ｒ及びｎは前記の意味を有する）カルボン酸としては炭素数６〜18の飽和脂肪
酸、特に炭素数12〜14のものが好ましく、その反
応性誘導体としては、酸ハロゲニド、無水物、混
合酸無水物、活性エステル、酸アジド等が挙げら
れる。カルボン酸の反応性誘導体を使用するとき
は、（）式の化合物の弱アルカリ性水溶液（PH
７〜９）に当該反応性誘導体を添加して、０〜40
℃で反応させる。反応中はアルカリ剤、例えばＮ
―苛性ソーダを加えて常に反応液が弱アルカリ性
になるようにする。カルボン酸を使用するとき
は、（）式の化合物とカルボン酸の弱アルカリ
性水溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド
（DCC）等の水溶性縮合剤を加えて、０〜40℃で
反応させる。このようにすると、反応条件、カルボン酸の量
によつても異なるが（）式の化合物のモノアシ
ル体及びジアシル体が得られるが、これらはカル
ボキシメチルセルロース等を用いるカラムクロマ
トグラフイー等によつて分離できる。また、式（）で表わされるネオカルチノスタ
チンのアシル誘導体は、次の反応式に従つて、プ
レネオカルチノスタチンのアシル誘導体（）に
NCS―Ｃ物質を反応せしめることによつても製
造される。（式中、はプレネオカルチノスタチン残基を
示し、、Ｒ及びｎは前記の意味を有する）式（）の化合物は新規化合物であり、例えば
次の反応式に従つて製造される。（式中、、Ｒ及びｎは前記の意味を有する）すなわち、プレネオカルチノスタチン（）に
カルボン酸（）又はその反応性誘導体を、縮合
剤の存在又は不存在下に反応せしめることによつ
て製造される。反応は前記ネオカルチノスタチン
のアシル化の場合と同様にして行なうことができ
るが、カルボン酸の反応性誘導体を適当な溶媒、
例えばアセトン、メタノール、エタノール、テト
ラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホルムア
ミド等の水溶性溶媒に溶解したものをプレネオカ
ルチノスタチンの弱アルカリ水溶液に滴下する方
法、あるいは酢酸エチル、エーテル、クロロホル
ム等の水不溶性溶媒に溶解したものを当該弱アル
カリ水溶液と混合接触させる方法も採用できる。 NCS―Ｃ物質もまた新規化合物であるが、例
えば特願昭54−130181号に記載の方法によつて、
ストレプトミセス属に属するNCS―Ｃ物質生産
菌を培養し、その培養液を酸性条件下水と混和し
ない極性有機溶媒で抽出することにより製造され
る。このNCS―Ｃ物質の理化学的性状は次のと
おりである。性状淡黄色〜褐色の粉末分解点 125℃ 比旋光度〔α〕²⁰ _D＝−171゜（ｃ＝1.4×10^-3、メタノール）元素分析値 C51.72，H4.94，N2.03，O31.00，
Cl10.31 分子量 686.5〜688.5 分子式 C₃₀H_33〜35Cl₂NO₁₃ 紫外線吸収スペクトル 240，265，274，290，305，330nm肩赤外線吸収スペクトル 3400，1780，1610，1400，1190，1080，
1010cm^-1に吸収を有する。呈色反応過マンガン酸反応、ジアゾカツプリ
ング反応は陽性、キサントプロテイン反
応、エールリツヒ反応、ニンヒドリン反
応、オルシノール反応、モーリツシユ反応
は陰性溶解性メタノール、エタノール、プロパノー
ル、ブタノールに易溶、アセトンに可溶、
クロロホルム、酢酸エチルにややとける、
水、エーテル、ベンゼンにとけ難い。本方法を実施するには、プレネオカルチノスタ
チンのアシル誘導体をPH３〜７の緩衝液に溶解
し、これに少量のメタノール、エタノール、プロ
パノール等の溶媒に溶解したNCS―Ｃ物質を加
えて反応させる。プレネオカルチノスタチンのア
シル誘導体とNCS―Ｃ物質の量はモル比で１：
１〜１：10が好ましい。反応は20〜60℃の温度で
12〜120時間撹拌下行うことによつて完結する。以上の如くして製造された化合物が式（）で
表わされるモノ―あるいはジ―アシル誘導体であ
ることは、例えば次の如くして証明される。すな
わち、モノ―アシル誘導体の場合には、トリニト
ロベンゼンスルホン酸（TNBS）発色法で測定
すると、このもの100μモルに対し遊離アミノ基
が109μモルで、ほぼモノ―アシル誘導体１モル
に対し１モルのアミノ基が遊離していることか
ら、またジ―アシル誘導体の場合には、これに重
炭酸ナトリウム溶液中で２，４―ジニトロフロロ
ベンゼンを反応させた後加水分解しても２，４―
ジニトロフエニル化アミノ酸が検出されないこと
及びニンヒドリン発色、TNBSによるアミノ基
の定量を行つてもアミノ基の存在が認められない
こと等から証明される。本発明アシル誘導体の毒性及び抗癌活性は次の
とおりである。急性毒性

【表】抗癌活性ドンリユウラツトの腹腔に吉田肉腫腹水癌細胞
10⁷個を移値し、移植72時間後に被検化合物を１
回腹腔に投与した。投与後24時間及び48時間に腹
腔穿刺を行い、癌細胞の変化を調べると共に、直
ちに解剖し、吉田肉腫の転移及び各臓器に対する
毒性を調べて最小有効量及び最大耐量を求め、こ
れらから化学療法係数を算出した。その結果は第
２表のとおりである。

【表】以上から明らかな如く、ネオカルチノスタチン
のアシル誘導体はネオカルチノスタチンに比較
し、毒性が1/1.5〜1/7.2に減少し、抗癌活性はモ
ノミリストイル―ネオカルチノスタチンの場合約
15倍も上昇した。本発明のネオカルチノスタチンのアシル誘導体
は、癌の原発部位、手術後の癌摘出部位等の局所
組織内、静脈、経口等による投与方法、あるいは
局所に塗布するとか坐薬等による投与方法によつ
て投与するのが好ましい。投与量は１回100〜500
mgを隔日又は週１〜２回投与するのが好ましい。
尚局所塗布、経口投与の場合には、更に投与量を
増加することもできる。次に実施例を挙げて説明する。実施例１ネオカルチノスタチン１ｇを0.2M重炭酸ナト
リウム水溶液100mlに溶解し、撹拌下これにミリ
スチン酸クロライド4.9ｇを１時間を要して加え
る。この間Ｎ―苛性ソーダを加えてPHを8.5に保
持する。これを更に20℃で３時間反応させた。反
応液を0.05M重炭酸ナトリウム水溶液で冷暗所に
て透析し、過剰のミリスチン酸ナトリウムを除去
する。母液のPHを3.0として沈澱物を除去し、
0.05M酢酸で平衡化したカルボキシメチルセルロ
ース（CMC）に吸着させ、0.1M酢酸―0.1M酢酸
ナトリウム緩衝液で溶出を行い、10mlずつ採取し
た。その溶出パターンは第１図のとおりである。
UV吸収280nmによつて活性分画を集めた。これ
らを凍結乾燥し、ゲル過（フアルマシア社、セ
フアデツクスＧ―25）で脱塩し、ジミリストイル
―ネオカルチノスタチン90mg及びモノミリストイ
ル―ネオカルチノスタチン700mgを得た。実施例２ (i) プレネオカルチノスタチン１ｇを0.2M重炭
酸ナトリウム水溶液100mlに溶解し、氷冷撹拌
下これにラウリン酸クロライド４ｇの無水アセ
トン溶液30mlを１時間を要して徐々に滴下す
る。この間Ｎ―苛性ソーダを加えてPHを8.0に
保持する。これを更に３時間反応させる。反応
液を実施例１と同様にしてCMCで処理してジ
ラウロイル―プレネオカルチノスタチン70mg及
びモノラウロイル―プレネオカルチノスタチン
800mgを得た。その溶出パターンは第２図のと
おりである。 (ii) 各物質を酢酸緩衝液（PH5.0）に溶解し、こ
れらに対し1/10重量のNCS―Ｃ物質のメタノ
ール溶液を加え、37℃で24時間反応させる。反
応液を凍結乾燥した後ゲル過（フアルマシア
社、セフアデツクスＧ―25）で脱塩し、モノラ
ウロイル―ネオカルチノスタチン650mg及びジ
ラウロイル―ネオカルチノスタチン50mgを得
た。上記実施例の如くして得られた本発明化合物の
物性値を第３表に示す。

【表】【図面の簡単な説明】

第１図はネオカルチノスタチンとミリスチン酸
クロライドの反応物をカルボキシメチルセルロー
スを用いるカラムクロマトグラフイーに付したと
きの溶出パターンを、第２図はプレネオカルチノ
スタチンとラウリン酸クロライドの反応物をカル
ボキシメチルセルロースを用いるカラムクロマト
グラフイーに付したときの溶出パターンを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１次の一般式（） ―（NH―Ｒ）_o （）（式中、はネオカルチノスタチン残基を、Ｒ
は炭素数６〜18の飽和のアシル基を、ｎは１又は
２を示す）で表わされるアシル誘導体。２一般式（） ―（NH₂）_o （）（式中、はネオカルチノスタチン残基を、ｎ
は１又は２を示す）で表わされるネオカルチノスタチンに一般式
（）、Ｒ―OH （）（式中、Ｒは炭素数６〜18の飽和のアシル基を
示す）で表わされるカルボン酸又はその反応性誘導体
を、縮合剤の存在又は不存在下に反応せしめるこ
とを特徴とする一般式（）、 ―（NH―Ｒ）_o （）（式中、，Ｒ及びｎは前記の意味を有する）
で表わされるアシル誘導体の製造法。３一般式（） ―（NH―Ｒ）_o （）（式中、はプレネオカルチノスタチン残基
を、Ｒは炭素数６〜18の飽和のアシル基を、ｎは
１又は２を示す）で表わされるプレネオカルチノスタチンのアシル
誘導体にNCS―Ｃ物質を反応せしめることを特
徴とする一般式（）、 ―（NH―Ｒ）_o （）（式中、はネオカルチノスタチン残基を示
し、Ｒ及びｎは前記の意味を有する）で表わされるネオカルチノスタチンのアシル誘導
体の製造法。