PT91499B

PT91499B - Processo para a preparacao de derivados de mitomicina tendo reduzida toxicidade relativamente a medula ossea

Info

Publication number: PT91499B
Application number: PT91499A
Authority: PT
Inventors: Abdolhossen Talebian; Dianna Green; Charles Hammer; Philip S Schein
Original assignee: Univ Georgetown
Priority date: 1988-08-23
Filing date: 1989-08-21
Publication date: 1995-07-06
Also published as: NO910662L; KR900701269A; IE892691L; DK29691D0; AU628846B2; CA1327037C; AU4065089A; GR1000785B; CN1040593A; ZA896025B; GR890100514A; PT91499A; JPH04500513A; NO910662D0; WO1990001931A1; IE63036B1; NZ230343A; NO177673C; EP0431008A4; IL91332A0

Description

MEMÓRIA DESCRITIVA

Resumo

D presente invento diz respeito preparação de certos derivados de mitcmicir p.s.-~a o tratamento de infecções bacterianj crescimento de células cancerígenas. Esstes c‘. LbT/ pT jCÇSSO p?. Γ3. ct a A e C , c] u ε s 3. o ú teis s e para suprimir o conipostos apresen tam, por exemplo, s. fórmula:

v_.·

em que n é 0 ou 1; Y é seleccionado de entre o grupo que consiste

OíTi g1icopi ra ηo s i1í ga1actopi ranosi1 o.

manopiranosi1o, xilopiranosilo, celobiosilo, lactcsilo, g 1 icofuranosilo, maltosilo, e 2-amino—1,3-ciclo-hexanodiol, ou seus derivados acetato protegidos no hidroxilo; R é hidrogénio; R^ é hidrogénio, alquilo

C^-C^ ou alquilo C^-C^ substituído por fenilo, hidroxifeni1o, indolilo, mercapto, alquil C.-C^-tio, hidroxi., carboxi, amino, 1 , i

guanídino, imidazole ou carbamilo; ou R e R formam um anel de cinco ou seis membros contendo azoto.

processo para a preparação destes compostos consiste, por exemplo, em se fazer reagir mitomicina A com um composto amino, sob condiçoes básicas, num solvente orgânico polar, de modo a obter—se a mitomicina substituída em Γ4' .

CAMPO DQ INVENTO:

O invento situa-se no campo dos agentes faraiaceuticos e das suas utilizações.

ANTECEDENTES DO INVENTO

Houtras as des como e iqnaçoe sTi i t oo i c i nas A , s t a b e1ec id o na s X, Y e Z as

B e C est ã o Tabela 1 a da fó rmula I relacionadas umas com as equir apresentada, sendo

TABELA 1

Mitomic ina	X Y	7
A	-OCH,	-OCH,	-H
B	-OCH.,	-OH	-CH,
c	-NH„	-OCH,	-H

As mitomicinas são derivadas de compostos mitosano tendo o seguinte esqueleto (II):

Os mitosanos são formados durante a cultura do microorganismo Streptomvces caesoi tosus num meio nutriente líquido sob condições artificialmente controladas. Após separação do micélio resultante, as várias mitomicinas podem ser isoladas a partir deste último por adsorção por carbono activo ou, de preferência, por resina de permuta não iónica, por extracção com solvente ou por cromatografia sobre alumina, como revelado na Patente dos E.U.A. No. 3,660,578, de Ha ta. et al .

Embora os mitcsanos sejam excelentes antibióticos, eles

t.'êin utilidade limitada devido à. sua sangue humano.(ver Patente dos E.U.A. a 1 .. ) . A natureza relativamente alta estimulado a investigação relativamen que aumentem a actividade antibiótica toxicidade relativamente ao No. 3,450,705 de Matsui et da toxina dos compostos tem te a derivados de mitomicina e diminuam a toxicidade.

Por exemplo, Matsui et a 1., Patente dos E.U.A. No. 3,450,705, revelam compostos de mitomicina substituídos na posição 7 com amino, alquil inferior—amino, fenilamino, ou piridilo, e substituídos na. posição la com haloalcanoilo, ha.lobenzoilo, nitrofaenzoi1o, alquenoilo, aceti 1-g1ici1o, sorboilo, ou ac o t. i 1 -me t i on i 1 o

κ.

Matsu.i et -al . , Patente dos E.U.A. No. 3,553,651, revelam derivados de mitosano compreendendo compostos la-acii-7-aci1oxi—9a-metoxi,

Certas mitomicinas e derivados de mitomicína possuem et a_l_. , Ga.nn 53:515-521 3 (1367); Natsui et al, te Japonesa No. 63 06 627 :33336 k (1363)); e C heng também actividade anti-tumoral. Oboshi ( 1 '767 ) ; LJsubuchi et a 1 . , Ga.nn 53 :5é7~51 J. Antibiotics XXI:183-133 (1363); Paten de ílatsui e 1 al . (Chemical Abstracts 63 el al., J, Med.Chem. 20:767-770 (1377).

Embora a mitomicína C seja activa contra um espectr relativamente grande de tumores experimentais, a sua toxicidade e efeitos mie 1ossupressores limitam o seu uso na prática clínica (Mitomycin C: Current Status and New Deve1opments, Cárter et al (eds.)., Academic Press, new York (1373))- Em estudos clínicos e pré-clínicos, a mitomicína C tem mostrado actividade contra uma variedade de neoprasmas murinos e humanos, mas tem também mostrado toxicidade severa, e prolongada relativamente à medula óssea. Goldin, a., et al - , NCIECPTC Symposium on Mytc.mic.in C, Brussels, Bélgica (1331).

Em outros estudos, a combinação de 5-fluorouraci1, adriamicina e mitomicína C, mostrou-se eficaz para o tratamento de pacientes com cancro gátrico e colo-rectal avançado. Este regime incorporava a administração num programa de dose única, de dois em dois meses, para diminuir os efeitos prolongados mielossupressores do composto, limitativos do tratamento. Schein, P.S., et al „ Mitomycin C: Current Status -and New Deve1opments, pp. 133-143, Cárter et al . (eds.), Academic Press, new York (1373).

T'a'm sido preparados numerosos derivados sintéticos de mitomicína C, na esperança da se obter compostos com propriedades terapêuticas melhoradas Estes derivados incluem substituição no anel aziridina, substituição do grupo carbamoilo, ou acilo na cadeia lateral de hidroximeti lo,'“e substituição do substituinte na posição 7 do anel de quinona com outros grupos funcionais, espacialmente amnas substituídas. Contudo, como revelado por Reuters, na Patente dos E.U.A. No. 4,268,676, nenhum destes análogos se apesentou como agente clínico, com a possível excepção do análogo 7-hidroxi da mitomicina C, que foi incluído num recente estudo no Japão. Este análogo é apresentado como sendo menos leucopênicos que a mitomicina C, mas é também menos potente. São também revelados por Remers, supra, análogos de mitomicina totalmente sintéticos do tipo mitosano (Mott et al., J. Med. Chem. 21:493 (1978)), preparados principalmente enm virtude da sua actividade antibacteriana.

		Kinoshita, S., et	al ,
rev	e lam	vários derivados de	mi tom
1 a,	7, e	9a. Em particular.	foram
dos	n a	posição la com sul	f on i 1 o

derivados acilo.

□snzo i □cs compostos .t., nas posiçses ;ubst i tuí- su bs t i tu í d o , e lyengar, ί (1981), revelam uma ,S,, et ai . série de 31

4:875-931 análogos de mitomicina C e porfiromicina com vários substituintes nas posiçSes 7 e la. Ds substituintes mais activos na posição 7 incluíam aziridina, 2—meti1 aziridina, propalgilamina, furfurilamina,, glicinato de metilo e 3-aminopiridina.

lyengar, 3-, et ai-, J. Med. Chem,. 26:16-20 (1933) revelam uma série de derivados 7-substituídos de mitomicina C porf iromicina e o seu resultado em sistemas anti-tumorais padrão Os autores referem que a posição 7 controla a. redução de do ane quinona, sugerindo, deste modo, que poderia ser possível

].

alterar

a substituição na posição 7, a fim de aumentar a selectividade entre as células normais e certas células cancerosas.

f...

Iyengar, B.S., et ai-, J. Med._Chem. 26:1453-1457 (1983), revelam 20 análogos de mitomicina C substituídos com aminas secundárias na posição 7. Onze destes análogos eram mais activos do que a mitomicina C contra a leucemia murina F'3BS e dois destes onze eram significativamente menos Ieucopénicos. Os autores· referem que não era evidente· nenhuma correlação quantitativa de entre a actividade anti-tumoral e as propriedades físico-químicas dos análogos, embora a. relativa facilidade da redução da quinona possa estar relacionada com a actividade.

Iyengar, B.S., et al . .

Med. Chem.

29:1864-1B68 (1986) revelam a preparação de amino-1,2-aziridinomitosenos

7-substituídos. Os autores revelam que um grupo metilo no azoto da aziridina origina uma um aumento da potência.

Sami, S., et al., J. Med 'hem

27:701-708 (1984), revelam uma série de 30 análogos de mitomicina C substituídos em Nr7 com fenilo» Dois destes compostos;, tendo substituintes pirazoilo ou aminopiridilo na posição 7, f oramreve.lados com clarsnisnte superiores. à mitomicina C na actividade contra a leucemia murina 8333.

J, Med» Chem. 22:247-250 (1979) também revelam derivados n-(2-c1oroeti1)-N-nitrosocarbamoilo de glicosaminas, incluindo tr'ã's derivados dissacarídeo que exibiram forte actividade anti-tumoralo contra a leucemia 12.10 em ratinhos·;» Além disso, os derivados glicopiranose de N-nitrosoureias possuem propriedades imunogénicas e protectoras da medula.

cance

Research o5:761ι-anasc i al., J. Clin. Invest. 64:1103-1111 (1979) revelados

em que R a partir do grupo que consiste em NH, alcoxi ~ é seleccionado a partir de hidrogénio, alquilo C.,-C,, e um resíduo glicosilo, com a condição de ou R. mas não ambos, conter um grupo glicosilo.

e um resíduo glicosilo; e '1 s ou R^, fórmula III tem exceít; e s m o tempo, poss u e m

ÍJs compostos representados pela lente actividade anti-neoplástica e, ao toxicidade reduzida relativamente à medula óssea e menor toxicidade qlobal.

mencionados, derivados de anti-neoplástica a q 1 o b a I .

Não obstante os derivados de mitomicina anteriormente existir necessidade relativamente a melhorados tendo boas toxicidade relativamente á continua a mitomicina e baixa propriedades medula óssea

SUMÁRIO DO

O invento diz tendo a seguinte fórmula /».4

respeito a geral (IV):

um d e r i v -a d u de mitomicina

So' em que, n é 0 o li. 1 ;

Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopiranosilo, ga1actopiranosi1 o, manopiranosi1 o, xilopiranosilo, ce1obiosi1 o, lactosilo, g1icofuranosilo, maltcsilo, e 2-amino-1,3~cic1 o—hexanodiol, ou seus derivados peracetato protegidos no h.t dro;; i 1 o;

R é hidrogénio;

R¹ é hidrogénio, alquilo C -C. ou alquilo C,-C. substituído 18- 14 por fenilo, hidroxifeni1o, indolilo, mercapto, alquil C^C^-tio, hidroxi, carboxi, amino, guanídino, imidazole ou carbamilo; ou

R e R^ formam um anel de cinco ou. seis membros contendo azoto;

□ invento diz também respeito a um derivado de mitomicina tendo a fórmula geral (V):

em que n, R, ou CH-,0--.	R¹ e Y	São	como definidos	'Tk anteriormente e R	é NH^-
0	invento	diz	também respeito	a. um derivado de	mi tomi-

cina tendo a fórmu.la geral (VI):

em gue

O

R é como anteriormente definido; e

R é um 2-(3-ciano-4-morfolini1)-2-desoxipiranosi1-sacarí— deo ou. um 2-( 4-morf ol in i 1 ) -2-deso;;ip i ranosi 1 -sacar ídeo .

invento diz também respeito a um processo para a preparação de um derivado de mitomicina tendo a fórmula geral ΐ,ί'ζ

IV em que η

é 0 du 1 ;

é seleccionado a partir de grupo que consiste em g1icopiranosilo, galactopiranosilo, manopiranosiio, i 1 opi ranosi 1 o , celobiosilo, lactosilo, glicofuranosilo, maltosilo, e 2-amino-l,3-ciclo-hexanodiol-2-ilo, ou seus derivados peracetato protegidos no hidroxilo; é hidrogénio;

é hidrogénio, alquilo C^-C^ ou alquilo C^-C^ substituído por fenilo, hidroxifeni1 o, indolilo, mercapto, c arbo xi, amino, quamamo, alquil Cj-C_s-tio, hidroxi, imidazole ou carbamilo; oo

R' formam um azoto;

anel de cinco ou seis membros contendo que consiste em:

(a) se condensar um amino-ácido n-protegido com um álcool, na presença de um reagente de desidratação, de modo a obter-se um è s t a r a eti. v ado, (b) se condensar o éster activado obtido no passo (a.) com um composto amino de modo a obter-se um conjugado de amino-ácido protegido-composto amino,

(c) se remover o grupo protector do amino-ácido do conjugado de amino-ácido protegido-composto amino obtido no passo (b) de modo a obter-se u.m conjugado de amino-ácido-composto amino, e (d) se condensar o conjugado de amino-ácido-composto amino obtido no passo (c) com mitomicina A de modo a obter-se o derivado de mitomicina .

invente

diz também respeite um processo para preparar (VI ) :

um derivada de mitomicina tendo a fórmula geral

e ítí q u e ,

RÚ é MH,- ou CH,D~; e

R'' é 2-(3-cia.no-4-morf οI ini 1 )-2-desoxi-sacarí deo;

(a.) se condensar éter bis(acetaldeído-2-ί1ico) com um 2-amino—2—desoxi-sacarídeo na presença de um sal de cianoboro-hidreto de modo a obter-se um 2-desoxi-2-(3-ciano-4-morfolinil)-sacarídeo e um 2-descxi-4-morfolini1—sacarídeo;

l O; se ieparar o 2-desoxi-2-(3-ciano—4-morfolini1)—sacarídeo

4-morfolinii-sacarídeo obtidos no passo (a>;

(o) se fszer reagir o 2-desoxi-2-(3-ciano-4-morfolinil)-sacarídeo obtido no passo (c) um haleto de acetilo de modo a obter-se um 2-desoxi-l-halo-2-(3-ciano-4-morfolinil)peracetil-sacarídeo;

(d) se tratar □ 2-desoxi-l-halo-2-(3-ciano-4-morfolinil)peraceti 1—.sacar ídeo obtido no passo (c) com tiocianato de prata de modo a obter-se um sacarídeo-1-tiocianato;

(e) se fazer reagir α sacarídeo-1-tiocianato obtido no passo (d) coo mitomicina C ou mitamicina A de modo a obter-se uma mitomicina C- ou mitomicina A-carboticamida de peracetato de a C tf Γ1 JJ t?

	< f )	se hidrolisar os	grupos acetato	da.	mitomicina C-perace-
tato	de	sacarídeo obtida	no passo Ce>	de	iiiodo a obter-se um
d e r iv	a d o	de mitomicina.

□ invento diz também respeito a um processo para a preparação de um derivado de mitomicina tendo a fórmula qeral (71):

em que, é NH, cu e

R' é (4-morfolini1)-2-desoxi-sacarídeo:

que consiste em:

(a) se condensar éter bis(acetaldeido-2-ί1ico) com um 2-amiriO-2-deso>;i-sacarídeo ria presença de um sal de cianoboro-hidreto de modo a obter-se um 2-desc:<i-2-(3-ciano-4-morf ol ini 1 )-sacarídeo e um 2-deso:;i —2-(4-morfol ini 1 ) -sacarídeo;

(b) se separar o referido 2-desoxi—2-(4-morfolini1)-sacarídeo do referido 2-deso;; i-2-(. 3-c iano-4-morf α 1 in i 1 ) -sacar ideo obtidos no passo (a);

(c) se fazer reagir o 2-deso;< í-2- \ 4—morf ol in i 1 ) -sacarídeo obtido no passo (c> um haleto de acetilo de modo a obter-se um 2-deso;:i-l-halo-2- ( 4-morfol ini 1 ) peraceti 1 -sacarídeo;

(d) se tratar o 2-desoxi-l-halo-2-<4-morfolinil)peraceti1-sacarídeo obtido no passo (c) com tiocianato dí obter-se um sacarídeo-1-tiocianato;

jrata de modo a (e) se fazer reagir o sacarídeo-1-tiocianato obtido no passo (d) com mitomicina A ou C de modo a obter-se uma mitomicina. C- ou. mitomicina A-carbotioamida de peracetato de sacarídeo; e (f) tato de derivado p;u preparação de um derivado de mitomicina tendo a fórmula geral (V ) _: se hidrolisar os grupos acetato da mitomicina C-peracesacarídeo obtida no passo (e) de modo a obter-se um de mitomicina..

□ invento diz também resositc a u.m orocesso nara a

5ιΤ que ,

Γ;

Ϋ ê 0 cu 1 ; é seleccionado

4· i quu consiste em g1icopiranosilo, ga1actopirancsi1 o, manopiranosi1 o, ;-:i 1 opi ranosi 1 o, celobiosilo, lactosilo, g1icofuranosilo, maltosilo, e 1,3-c.ic1o-hexanodiol-2-i1α;

é hidrogénio;

é hidrogénio, alquilo C,-C. cu alquilo C-C substituí1 Η· 1 mercapto, guanidino,

Ι-< e

R do par -fenilo, hidrox if eni 1 o, indolilo, alquil C^~C„~tio, hidroxi, carboxi, amino, imicazole ou carbamilo; ou formam u.m anel de cinco ou seis membros contendo azoto; é NI-L-;

que consiste em (a) se condensar mitomicina Ç com anidrido succínicc· de modo a obter-se éster de mitomicina; C de ácido la-succínico;

(b) se condensar o éster de mitomicina C de ácido la-succínico obtido no passo (a) com um composto de Fórmula (VII) .1

Λ'*· (Y.' ^Η^<Η-ϋ)_η-ΝΗ-γΡ R Rl

VII

A. Γ* em que R, R e n são como anteriormente definidos e Y é um sacarídeo protegido no hidraxilo seleccionado a partir do grupo que consiste em derivados protegidos no hidroxilo de g1icopirano— silo, qalactopiranosilo, manapiranosilo, xilopiranosilo, celobiosilo, latosilo, g1iccfuranosilo, maltosilo, 1,3-cic1o-hexanodiol-2-ilo; e (c) se remover os grupos protectores do hidroxilo demodo a obtei—se o derivado de mitomicina.

invento diz também respeito a um processo para a preparação de um derivado de mitomicina tendo a fórmula geral

O

II

ί íi f

-CH2-CH2-C-(-N-CH-C)-NH-Y

I >i

R R¹ (2 iTi U U. >-· ,, n

& 'J ou 1 ή é seleccionado g 1 i c o p i r a η o s i 1 o, xi1opi ranosi1 o, lo, maltosilo partir do grupo qu.e consiste em ga. 1 ac topi ranosi 1 o , manopiranosi 1 o , .osilo., lactosilo, qlicofurai e 1,3-cic1o-hexanodiol-2~i1o;

1051-

R é hidrogénio;

Η^Λ é hidrogénio, alquilo C,-C. ou alquilo C,-(J_n substituí1 14 do por fenilo, hidroxifenilc, indolilo, mercapto, alquil C,-C,-tio, hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole au. carbamilo; ou

R e F·/ formam um anel de cinc Ό O*_l Stx* j. ’Έ· ίΓιE? ín bros contendo azoto;

F7 é CFL.O-;

que onnsiste em :

\a) se condensar mitomicina C com anidrido succínico de modo a obter-se éster de mitomicina C de ácido la-succíriico;

(b) se condensar o éster de mitomicina C de ácido la-succínico obtido no passo (a) com um composto de Fórmula (VII):

H(N-CH-C)_n-NH-Y^p VII ¹ >1 R R¹ em que R, f/ e n sao como anteriormente definidos e V^P é um sacarídeo protegido no hidroxilo seleccionado a partir do grupo que consiste em derivados protegidos no hidroxilo de glicopirano— silo, ga1actopiranosi1 o, manopiranosilo, xi1opiranosilo, celobio— silo, latosilo, q 1 icof uranosi 1 o, maltosilo, 1,3~ciclo-hexanodiol-2-ilo;

(c) se remover os qrupos protectores do hidroxilo demodo a obter—se o derivado de mitomicina invento também diz respeito a um processo para a preparação de composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de dos derivados de mitomicina do invento, juntamente com um veiculo farmaceuticamente aceitável.

invento também diz respeito a métodos para o tratamento de infecçSes bacterianas compreendendo a administração das composiçoes farmacêuticas do invento a um animal.

□ invento também diz respeito a métodos para o tratamento do cancro por supressão do crescimento de células cancerosas susceptíveis à supressão do crescimento compreendendo a administração das composições farmacêuticas do invento a um animal.

DESCRIÇÃO DOi

MODELOS DE REALIZAÇÃO RREEER

A preparação sintética dos derivados de mitomicina do invento tem, como seu ponto de partida, a mitomicina C. A mitcmicina C pode ser preparada de acordo com os métodos revelados na generalidade em Cheng et ai . , J, Med. Ch?-.. 20:767:770 (1977). A1 ternativamente, a mitomicina C pode ser obtida, a partir mitomicina A por tratamento da mitomicina A com uma solução amoníaco metanólica coma descrito por Matsui , ΓΊ. , et al , Antibiotics XXI:189 (1968).

da de

J .

Os derivados podem ser obtidos A (VIII), com o q 11c o samina (Y—NH orgânico polar d ~7 substituído e® N' de mitomicina de Fórmula IV, em por deslocamento do grupo metoxi qrupo amino de um composto amino, _o; (.IX)) sob condições básicas modo a obter-se ;q:.iema

que n-0 (X), da mitomicina por exemplo, num solvente de mitomicina .X·;.' η

Os compostos amino que podem ser substituídos na posição 7 incluem, mas não estão limitados a, glicosamina, galactosamina, manosamina, xilosamina, celobiosamina, maltosamina e 2-amino-l,3-ciclo-hexanodiol e os seus derivados peracetato protegidos no hidrexilo. De preferencia, o sacarídeo que compreende o gru.poY estã substituído na posição 2 com α grupo amino. Os solventes orgânicos polares que podem ser usados na prática do invento incluem metanol, etanol, propanol, dimetil-sulfóxido, e dimeti1-formamida. As bases adequadas para fornecerem as condições básicas da reacção incluem aIqui1aminas tais como alquil C^—C-.—aminas, di-isopropi1-eti1amina, 1,8—diazabici— c loíu. 4 . õlundec-7-eno (DBU) e dimetilaminopir idina (DMAF’1 . em geral, a mitoraicina A e o derivado amino estão presentes numa proporção molar de 1:1, embora possa estar presente um excesso de derivado amino. Está presente, na mistura reaccional, base suficiente para assegurar que a reacção permaneça básica do princípio ao fim.

nosi 1 miei n

Os derivados de mitomicina tendo a Fórmula X incluem -desoxig 1icopi ranosi1)mi tomicina C, N' — (2—desox iga1ac topira) mi tomicina C , N‘ tetra-aceti 1 -2-desox ig 1 icopiranosi 1 ) mi to— a C, e N^z-( te t ra-e.ee t i 1-2-desox iga 1 ac top i ranosi 1 ) mi tomic ina

- -

Esquema I

Mitomycin C

Mitomycin A VIII

X ί~ΐ.mitomicina ligados ao amino-ácido de podem serpreparados (Esquema II) a de _ Ι fórmula IV, em que n omicina A por condensação do amino-ácido N-protegiderivado ri-benziloxicarbonilo (XI), com um álcool tal como ri-hidroxi-succinamida, que ê capaz de gerar um éster activado, e um reagente de desidratação de modo a obter-se (XII). Os reagentes de desidratação que podem processo incluem, mas não estão limitados a, dicic1o-hexi1carbadi-imida (DCC) dietilazodicarboxilato (DEAD) e tr i. f eni 1 f osf ina. 0 tratamento do éster activado (XII) com qualquer dos compostos amino anteriormente mencionados (IX) deu origem ao conjugado amino-ácido protegido-composto amino (XIII).

do

IV, . r de m ;or exemplo, o α éster activado ser usados neste

A remoção do grupo proteotor grupo N-benzi1oxicarboni1 o, (XIV). 0 composto (XIV) pode A (VIII) por deslocamento de modo a obter-se o derivado (IV).

, por exemplo, por hidrogenólise do deu origem ao derivado amino livre depois ser condensado com mitomicina -OCH-. como descrito anteriormente de de mitomicina ligado ao amino—ácido

Os deriv em qu.e n--l,

d e íTí i t om, i c i n a t en d o H e R = H incluem a Fórmula (IV) preferi⁷- Ε E E(2-desoxi-2-glicopiranosi 1 ) amirtolcarboni 1 Imeti 1 Imitomicins C e N^z-E C E (tetra-acet.í 1 -2-desox i-2-g 1 icopiranosi 1 ) amino 3 car boni 1 3 me ti 1 3 mi tom ic ina C.

Esquema II

'Τ’*7'

IV mitomicina tendo a Fórmula (V), em que a (XV), adiante referida), podem ser por condensação de mitomicina C (XVI) modo a obter-se a amida (XVII) que pode

Os derivados de R⁴ é NH_? e n é 0 (Fórmu preparados (Esquema III) com anidrido succínico de em seguida ser condensada com o derivado amino protegido no

hidroxilo (XVIII) utilizando qualquer dos desidratação anteriormente mencionados, seguido de de modo a obter-se (XV). Cs grupos de protecção relativamente ao derivado amino incluem, mas não estão limitados a, ésteres de acilo C_,-C. .

reagentes de desprotecção,

Ds derivados de mitomicina preferidos tendo a Fórmula (XV) incluem N C E2-C C(2-desox i-2-g1icopi ranosi1)aminolcarboni13eti1IcarbonilJmitomicina C.

Esquema III

XV

,*^σ

V

-QCÍ0 (Fórmula (XIX),

pref!

me té cina rados (Esquema tratar adiante referida) ito de mitomicina ido de sódio em etanol absoluto de modo octerA (VIII), seguido por condensação com anidrido (V), em que , podem ser C (XVI) com se a initomisuccínico a fim de se obter o éster de (XX). A condensação do grupo o derivado amino protegido anteriormente descrito, seg (XIX) .

mitomicina A do á.cido la—succínico

ácidq carboxílico de	(XX) com da com
no hidroxila Y^-NH^	(XVIII), como
u. ido d e d e s ρ r o t e c ç ã o ,	deu origem a

Os derivados de mitomicina preferidos tendo a Fórmula (XVIII) incluem 1^-112-11(2 nilletillcarbem i11m i tom i c i na desc:;i-2-g 1 icopi ranosi 1 ) aminolcarboA.

( '-ι Δ

Χ_Ι_/

esquema IV

XX

Os derivados de mitomicina de Fórmula VI podem ser preparados de acordo com a sequência apresentada no Esquema V, 0 tratamento do 3,4-di-hidroxi-tetra-hidrafurano (XXI) com periodato de sódio aquoso num solvente orgânico polar deu origem ao éter bis(acetaldeido-2-ί1ico) (XXII), que pode ser condensado com um 2-amino-2-desoxi-sacarídeo (XXIII), na presença de um sal de cianoboro-hidreto de modo a obter-se uma mistura de 2-deso;;i-2- (3-c iano-4-morfol ino) sacarí deo ((XXIVa). 3 = -CM) , e 2-deso::i-4-morfolini1-sacarídeo (CXXIVb). Q - -H) que pode ser separada, por exemplo, por cromatografia de coluna. Os sais de cianoboro-hidreto podem incluir qualquer dos sais de metal alcalino de cianoboro-hidreto, de preferência cianoboro-hidreto de sódio. □ tratamento do derivado sacarídeo (XXIVa) com um haleto de acetiio, dá origem ao 2-desoxi-1-halo-(4-morfo 1iniI)-peraceti1-sacarídeo que pode ser feito reagir com tiocianato de prata de modo a obter-se um i-tiocianato-sacarídeo (XXV). A condensação do tiocianato (XXV) com mitomicina C (XVI) dá origem á carbotioamida «le ta to mitomicina C'-sacarídeí

). A desacilação de por exemplo, com amoníaco metan o riaina (VI ) •CM ou H ) ,

Os derivados de mitomicina preferidos tendo a Fórmula VI inc luem 2- (3-ciano-4-morfol in i 1 ) -2-desox ig 1 icopiranosi 1-mi tomicina-la-carbotioa.mida e 2-(3-ciano—4-morfolini1 )-2-desox.iga 1 a.c — to ρ i ranos i1-m i tom ic in a-1a-ca rbo tioam ida, ^Nai°4

XXI _XCB₂-CBO o'

THj-CHO

XXII

1. AcBr

2. AgSCN

XXVI

VI

Os compostos do invento podem estar presentes sob a fornia de sais farmaceuticamente aceitáveis. Entre os contra iSesaniónicos preferidos estão os dos haletos (derivados dos ácidos halídricos), tais como cloreto, brometo ou fluoreto. Outros aniSes incluem sulfonato ou ρ-tolueno-sulfonato.

Como antibiótico, os compostos do presente invento são úteis contra todos os microorganismos susceptíveis à acção anti-bacteriana dos compostos progenitores, incluindo estes microorganismos, mas não estando limitados a, Pseudomonas, 81 a p h/1 ococcus , Sarc in i a , Diplococous , Streptococcus , Corvnebacterium, Hemophilus, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shiqella, Bruce 11 a., Myc o bac ter i um, Nocard ia., Sac c ha r om y c es, Candida, Penici11ium e Asperqilus. Os microorganismos que podem ser tratados com os compostos do presente invento incluem Pseudomonas aeruqinosa, S ta ρ hy 1ococcus aureus, Staphylococcus albus, Staphvlccoccus citreus, Sarcina lutea, Diρ1ococcus pneumoniae, 51 r ep to c o c c u s h e m o 1 y t i c u s , Streptecoccus lactis , C o r y n ebacteri u in diphtheriae, Hemophilus pgrtussis, Escherichia coli, K1ebsie1 la

Sa1monel1 a

Brucei 1 a Micobacte, Nocardia Pen ici1 — pneumoniae , Proteus vuIqaris , Salmonel la typhosa , paratvphi, Shiqella dysenteriae, Brucella abortus, meqatheriu.iTi, Brucella mycoides, Brucella anthracius, rium ATCC bQ'7, Micobac terium avium, Micobacterium phlei as teroidss, Saccharomyces cervisiae, Cand i d a a1b icans, 1 iuiTi qlacum e AspergiIlus niqer .

Os derivados de mitomicina do presente invento são úteis in vitro como antissépticos, isto é, para desinfecção. Os compostos são também úteis topicamente e internamente como agentes terapêuticos no combate a bactérias patogénicas, por exemplo, nos casos de estafilodermatite, pneumonia bacteriana, 1eptospirose, rickettsiose, salmonelose e infecções similares.

c?.Si

Tipicamente, relativamente a administracção tópica, mitamicinas deste invento são aplicadas em composições tendo concentrações na gama de 0,01 a 1000 pg/ml.

Como agentes antineoplásticos, os compostos do presente invento são úteis no tratamento de uma variedade de cancros, incluindo, mas não estando limitados a, os cancros susceptíveis à supressão do crescimento das células pelos compostos progenitores. 0s tratamentos dos cancros com os compostos progenitores estão descritos nas seguintes referências:

Driscoll, J.S. et al . , Câncer Chemotherapy Rep. 4:1 (1974).

Kojima, R., et a 1. , Câncer Chemotherapy Rep. 3:111 (1972)

Sugiura, K., Câncer Res. 19:438 (1959) □boshi, 3-, et al., Gsnn 53:315 (1967)

Suqiura, K. ,Câncer Chemotherapy

3:51 (19Ó1).

Vendi11i, J . ΙΊ . , et a 1., Advances in Câncer Chemotherapy, ρp. 201-209 (1973) Editores: H. Umezawa et al . , Japan Soc. Press, Tokyo/Univ. Park Press, Baltimore.

Usubuchi, I., et al., Sann 58:307 Í19Ó7).

Cancros típicos tratados pelos derivados de mitomicina deste invento incluem, mias não estão limitados a, neoplasmas gástricos e pancreáticos (Schein, P.S. et a 1 , in Nitomycin C; Current Status and New Developments, ρ ρ. 133-143, Cárter et al. Eds., Academic Press, New York (1979)). Outros cancros podem ser tratados usando os compostos do invento incluindo o cancro do

pulmão, da mama, anal, colo-rectal, da cabeça a do pescoço, melanoma.

Ds compostos do invento são também activos contra os seguintes sistemas tumorais: Leucemia L-1210, Leucemia F'38S, Leucemia F'1534, Leucemia de Virus Friend, Leucemia L4946, linfosarcoma de Mecca, linfosarcoma de Gardrter, sarcoma Osteogénico de Ridgway, sarcoma 180 (ascites), sarcoma osteogénico de Wagner, sarcoma T241, carcinoma pulmonar de Lewis, Carcinoma 755, CD8F, Carcinoma mamário, Colon 33, Carcinoma 1025, carcinoma de Ehrlich (ascites e sólido), carcinoma de Krubs 2 (ascites), carcinoma de Bashford 63, Adenocarcinoma E 0771, Melanoma Bló, melanoma de Hardin-Pa.ssey, Giloma 26, adenocarc irtoma de Miyona, carcinosarcoma de Walker 25ó, carcinoma Flsxner—Jobling, sarcoma de Jensen, sarcoma de Iglesias, tumor ovárico de Iglesias, linfosarcoma de Murphy-Sturn, sarcoma de Yoshída, leucemia de Dunning, sarcoma em frangos de Rou.s e sarcoma em hamsters de Crabb.

As composiçoes farmacêuticas do presente invento podem ser administradas por quaisquer meios para conseguir os seus fins propostos. Por exemplo, a administração pode ser por vias parentérica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitonial, transdérmica ou bucal. Alternativamente ou concorrentemente a administração pode ser por via oral .. A dosagem administrada, dependerá da idade, da saúde e do peso do receptor, do tipo de tratamento concorrente se existir, da frequência do tratamento e da natureza do efeito desejado»

As composiçoes dentro do âmbito deste invento incluem todas as composiçoes em gue o derivado da mitomicina está contido numa quantidade eficaz para produzir o efeito proposto. Embora as necessidades individuais variem, a determinação das gamas óptimas das quantidades eficazes de cada componente é com o perito nesta técnica. As formas de dosagem típicas contem 10 a 300 pmole/Kg de animal do derivado de mitomicína, du uma quantidade equivalente do seu sal farmaceuticamente aceitável.

Em adição aos compostos farmaco1ogicamente activos, as novas preparações farmacêuticas podem conter veículos farmaceuticamente aceitáveis adequados que compeendem excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos activos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. De preferencia. as preparações, particularmente aquelas preparações que podem ser admimistradas oralmente e que podem ser usadas para o tipo preferido de administração, tais como comprimidos, drageias e cápsulas e também preparações que podem administradas rectalmente, tal como supositórios, bem como soluções administração por injecção ou oralmente, contêm 0,01 a 8? por cento, de preferência desde cerca adequadas para desde cerca de de 25 a 75 por to de composto(s) activo(s), juntamente com o excipiente,

As preparações farmacêuticas do presente invento podem ser produzidas duma maneira em si mesmo conhecida, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, granulação, fabrico de drageias, dissolução ou liofilização. Assim, as preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas por combinação do composto activo com excipientes sólidos, facultativamente com trituração da mistura resultante e processamento da mistura de grânulos, seguido de adição de auxiliares adequados, se desejado ou necessário, de modo a obter comprimidos ou núcleos ds drageias.

Excipientes adequados são, em particular, agentes de enchimento, tais como sacarídeos, por exemplo lactose ou sacarose, manitol ou sorbitol, preparações de celulose e/ou fosfa.tos de cálcio, por exemplo, fosfato tricálcico ou hidrogenofosfato da

cálcio, bem como agentes ds ligação, usando por exemplo, amido de milho, arroz, amido de batata, gelatina, hidroxipropi1-meti1-celulose, carbox tais como, amido de pasta de amido, trigo, amido de tragacanto, meti. 1-ce lulose, imeti1-celulose de sódio, e/ou polivini1-pirrolidona. Se se desejar, agentes de integração podem ser adicionados tais como os amidos anteriormente mencionados e também carboximeti1-amido, polivini1-pirrolidona de ligação cruzada, agar, ou ácido algínico ou um seu sal, tal como alginato de sódio. Auxiliares podem ser, antes de mais nada, agentes reguladores de fluxo e lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárica ou seus sais, tais como estearato de magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polietileno-g1icol. Ds núcleos de drageias são fornecidos com revestimentos adequados que, se desejado, são resistentes aos sucos gástricos. Para este fim, soluções de sacarídeo concentradas podem ser usadas, as quais podem facu 1 tativamente conter goma arábica, talco, polivini1-pir— rolidona, polietileno-g1icol e/ou dióxido de titSnio, soluções de laca e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. A fim de produzir revestimentos resistentes aos sucos gástricos, soluções de preparações de celulose adequadas tais como, ftalato de hidroxipropi 1-meti1-celulose corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos comprimidos ou aos revestimentos das drageias, por exemplo, para identificação ou a fim de caracterizar combinações de doses de compostos activos.

de acetil-celulose ou ftalato podem ser utilizadas. Materiais

Dutras preparações farmacêuticas que podem ser oralmente incluem cápsulas de ajustamento à pressão -f.i. t ) , feitas de oelatina. bem como cáosulas moles usadas (pus bisel adas feitas de gelatina e um plastificador, tal como, glicerol ou sorbitol. As cápsulas push-fit podem conter os compostos activos na forma de grânulos que podem ser misturados com agentes de enchimento, tais como lactose, agentes de ligação, tais como

amidos e/ou lubrificantes, tais como talco ou estearato de magnésio e, facultativamente, estabilizadores. Nas cápsulas moles, os compostos activos são de preferência dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos gordos ou parafinas líquidas. Além disso podem ser adicionados estabilizadores .

As preparações farmacêuticas possíveis que podem ser usadas reotalmente incluem, por exemplo, supositórios, que consistem numa combinação do composto activo com uma base para supositório. Bases adequadas para supositórios são, por exemplo, triglicerídeos naturais ou sintéticos, ou hidrocarbonetos parafínicos. Além disso é possível usar cápsulas de gelatina rectais que consistem numa combinação dos compostos activos com uma base. Materiais de base possíveis incluem, por exemplo, trig1icerídeos líquidos, polietileno-g1icois, ou hidrocarbonetos parafínicos.

Formulações adequadas para incluem soluções aquosas dos compostos na água, por exemplo, sais solúveis n·; ser administradas suspensões dos compoí ad m i n i s t ac t i vos água.

cos acti .ração parentêrica numa forma solúvel Além disso, podem vos, por exemplo, suspensões para injecção em óleo. Solventes lipofílicos ou veículos adequados incluem óleos gordos, por exemplo, óleo de sésamo ou ésteres de ácidos gordos sintéticos, por exemplo, oleato de etilo ou trig1icerídeos. As suspensões aquosas para injecção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão e incluem , por exemplo, carboximeti1-celulose de sódio, sorbitol, e/ou dextrano. Facu1 tativamente, a suspensão pode também conter estabilizadores.

Os seguintes exemplos são ilustrativos, mas não limitativos, do método e composição do presente invento. Outras modificações adequadas e adaptações da variedade de condições e parâmetros normalmente encontrados na terapia clínica e que são óbvios para os peritos nesta técnica, estão dentro do espírito e Smbito do invento.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Preparação de Mitomici.n·:

(st/

Mitomicina C (50mg, 0,15mmol) foi dissolvida em 3 ml de uma solução de 50'/. metanol e 50/. de NaOH 0,1 N e agitada, à temperatura ambiente, durante 1B horas. Depois de completada a reacção (TLC , CHC1 : MeOH , 10:1), a mistura reaccional foi arrefecida bruscamsnte com dióxido de carbono sólido até neutralizar o hidróxido de sódio. A mistura foi depois seca por congelação in vácuo, e o composto mitosano foi removido com metanol. A solução de metanol foi concentrada in vácuo até à secura, e o resíduo foi refisso 1vido numa quantidade mínima de metanol e depois precipitado com éter de modo a obter—se 20mg de um pó verme1ho—purpúreo. Este foi dissolvido em 15ml de acetato de etilo e arrefecido até 5'^:'C, tratado com diazometano (a solução etérea de diazometano foi preparadade acordo com o procedimento de de Arndt, Qrq. Synthesis, Collective Volume II, pp. 165-167), e agitado durante 20 minutos (TLC, CHC1 _,:MeOH, 10:1). Depois de completada a reacção, o solvente foi primeiro removido sob pressão reduzida com aspirador de água e depois seco in vacu.o. 0 resíduo foi recristalizado 3, partir de éter de modo a obter-se IBmg ds agulhas avermelhadas, p.f. 159-160'^:’C. CCF (EtOAc:acetona, 1:1) deu origem a u.ma mancha e (acetona:benzeno, 4:1) uma mancha R = 0,48. UV (metanol) 216 e 358nm. RMN (acetona d,, pico médio de acetona em

O

5,94 (dd, ÍH);

(t, 1H); 4,07 (s,

3H ) ; 3,96 í d , 3,25 (s , 3Η ) ;

( d

1Η)5 3,54 (dd, 1H); 3,41 (d, 1H); 3,35 (d, 1H) :,99-2,264 (mmm); 2,B7 ís); 1,640 (ε, 3H) .

Exemplo

Preparação de M'-(2-desoxiq1icopiranosiI)mitomicina C avermelhado até evaporação com

A uma solução de mitomicina A (lOmg, 0,02Smmol) em etanol absoluto foi adicionada uma solução metanólica de qlicosamina-HCl (70mg, 0,325mmol5 e di-isopropiletilamina ίΙΟΟμΙ). Esta mistura foi agitada sob atmosfera de N_o, á temperatura ambiente, até a reacção estar completa por CCF (EtOAc:acetona 1:1), tempo ao fim do qual (10 horas) a solução tinha mudado de cor desde púrpura, escuro. A solução foi concentrada por uma corrente de N_, e cromatografada sobre uma placa de sílica preparativa eluída com acetona-acetato de etilo (1:1) banda purpúrea que permaneceu próxima da origem foi removida por raspagem e aluida com metanol. Purificação posterior por CL.PE (coluna semi-prepa.rativa, de fase reversa C , metaI o nol:tampão fosfato O,1N, 1:1) deu origem a um pó púrpura, RMN (D^O) 5 5,32 (d, 1H, H anomérico do sacarídeo); 3,85 (s, 3h, 9a,-001-1-.5 ; e o desaparecimento do singeleto em 4,09 (flatsui, M. , e t al . „ J, Antibiot. 21:189 (1968); Cheng, L. , e Remers, W.A., J. Med. Chem. 2(1:767 (1977); Vyas, D.M., et ai-, J. Org. Chem. 51:4307 (1986)).

Exemplo 3: Preparação de N-(2,6—Di-hidroxiciclo-hexi1)qlicinamida

A uma solução de N-benzi1oxicarbonilg1icina (3g, 14,3mmol) em dioxano foi adicionada N-hidroxissuccinimida (l,65g, 14,3mmol) e N, N-d ic ic 1 o-hex i 1 car bodi-imida. (2,96g, 14,3mmol) com arrefecimento. A mistura, reaccional foi agitada, a 0-5°C durante u.ma hora e deixada a repousar sob refrigeração de u.m dia. para o outro. 0 precipitado de ureia foi removido por filtração por sucção e o filtrado foi concentrado in vacuo até â secura. 0 resídua amarelada foi recristalizado a partir de acetato de etilo-éter de modo a obter-se um rendimento de 847 do éster activado de glicina, p.f. 112-114*8. RMN (CHCl^).

□ éster activado de glicina anteriormente preparado (25g, 0,008mol) foi dissolvido em 15ml de DMF (dimeti1-formamida) seca, arrefecido até abaixa de 5*8, e adicionou-se, gota a gota, 2-amino-í,3-ciclo-hexanodiol (2,18q, 0,01ómol) em DMF, com agitação, sob atmosfera de N_?. Depois de completada a reacção (CCF, CHCl_.:MeOH, 10:1), a DMF foi removida sob pressão reduzida e o resíduo sólido resultante foi cristalizado a partir de acetato de etilo de modo a obter-se cristais brancos , com 847 de rendimento, p.f. 170-172*8. RMN (D^O): S 7,45 (s, 5H, H aromático); 5,20 (s, 2H, CH^, benzílico); 3,95 (s, 2H, -CQ-CH^-NH^) ; 3,6 (t, 1H, 8 H de anel de ciclo-hexano)j 3,45 ím, 2H, C„H e 8, de 1 z. o anel de ciclo-hexano) ; 2,0, 1,8 e 1,35 ím,;n,m, 2 para 1 para 3H; hidrogénios em C-,, e C,_ de ciclo-hexano! . 0 produto consiste no derivado benziloxicarbonilo N-proteqido de N-(2,ó-di-hidroxicΐc1o-he x i1)g1ic i πamida.

A benzi loxicar boni 1-N- ( 2„6-di-hidroxic ic lo-hexi 1) g 1 icinamida N-protegida (3g, 0,093mol) foi dissolvida em lÕOml de etanol absoluto com um equivalente molar de HC1 a 107. A hidroge— nólise com Pd a 57/8 a 30 psi (2,1 kgf/cm'”), remoção do catalisador sobre celite, e subsequente evaporação de solventes in vacuo produziu, um sólido acastanhado pálido que foi triturado com éter e scristalizado a partir de acetato de etilo e éter, p.f. 207— -210*8. RMN (D_OD) 6, 3,65 (t, 3H, C^H de anel de ciclo-hexano); 3,55 (rn , 2H, C^H e C,H de ciclo-hexano); 3,4 (s, 2H, -80-8H„-NN^); 2,05, 1,80 e 1,38 (m,m,m, 2 para 1 para 3H, hidrogénios de

C-.„ 8. e C_ de ciclo-hexano).

ν' 4 o

Exemplo 4

Estudos em animais □ composto N^/-(2-desoxiglicopiranosilímitomicina C, preparado de acordo co o Exemplo 2, foi avaliado relativamente à actividade anti—tumoral em leucemias- F’388 murinas e à toxicidade para a medula óssea em ratinhos normais.

A. Determinação da actividade anti-tumoral murina sistema de leucemia P383 murina, mantido intraperitonealmente em ratinhos fêmea DBA/2, foi usado para avaliar a actividade anti-tumoral. Este tumor foi seleccionado devidoà sua conhecida sensibilidade relativamente aos compostos progenitores, mitomicina C (Driscoll et al . , Câncer Chemotherapy Reports 4:1 (1974)). A N^— (2—desoxig1icopiranosi1)mitomicina C foi dissolvida em água estéril (a 4*0 imediatamente antes da administração. A mitomicina C foi dissolvida em etanol, e a solução resultante foi ajustada para 57. de etanol, 957. de água.

Cada composto foi administrado intraperitonealmente a grupos de ratinhos macho CD2F no Dia 1 após a implantação intraperitoneal de 1 x 10 células de leucemia F'3BS. A actividade anti-leucémica P388 do composto do teste foi avaliada pela média dos dias de sobrevivência e pelo aumento do tempo de vida (ILS) em percentagem. 0 ILS em percentagem foi calculado como se segue:

7.ILS = (T-O/C x 100;

onde T é a média dos dias de sobrevivência dos ratinhos tratados e C é a média dos dias de sobrevivência dos ratinhos não tratados.

A actividade anti-tumoral F'333 para a N^{3 * * * 7}(2-desoxig 1 icopiranosi1)mitomicina C, em comparação com a mitomicina C progenitora, está resu.mido na Tabela 2:

Tabela 2

Actividade Anti-tumoral Contra a Leucemia P5S8

Droga

N⁷-í 2-deso;; ig1icopiranosi1)mitomicina C

Mitomicina C

Con trô1o^C

Dose (mg/kg)

4,5'

71ILÍ

427.

617.

817.

lobrevivãncia !*!édia

14,2

16,1

13,1

10,0

^U&·’ ³ Dose LD_f

Dose LDj₍._} aproximada ^L Tratado com veículo da droga

B. Determinarão dos efeitos do N^z-<2-desaxiq1icopiranosil)mitomicina C sobre o sistema hematopoético em ratinhos

A determinação do usando uma amostra de tal obtido a partir de seguir à administração i ranosi. 1 ) mi tomicina C ou do total e leucócitos (WBC) foi realiza20 μΐ de sangue da cavidade retro-orbiratos macho CD2F^ normais no Dia 3 a .p. de 13,5mq/kq de N - (2--deso;:iq 1 icopi4,5mg/kg de mitomicina C» As amostras de sangue obtidas foram diluídas em 9.98ml de Isoton (uma solução tampão isotónica, neutra) e contadas num contador Coulter após lise com Zapoglobin (uma solução de enzima que lisa os glóbulos vermelhos, mas não os glóbulos brancos. Os totais de WBC são expressas como uma percentagem dos valores dos ratinhos de contrôlc que receberam só veículo da. droga. Os resultados estão resumidos na tabela que se segue:

Tabela 3

Depressão WBC Mu ri, na in vivo

Droga

Dose

N'-í2-desoxi- 13,5 mg/kg q 1 icopi ranosi 1 ) mitomicina C

Total de WBC no Dia 3 (como percentagem do contrSlo)

947.

Mitomicina C

4,5 mg/kg >5—óó7.

Em resumo, estes estudos in vivo demonstram que a N^-íD-desoxi-g.licopiranosi 1 )mitomicina C tem actividade significativa contra o sistema tumoral F'333 murino, em doses que não produzem toxicidade significativa para a medula óssea, como determinado por depressão do total de leucócitos periféricos

4Í

Exemplo 5: Actividade antibacteriana

A n7-(2-desoxigl icopiranosi 1 }mitomicina C foi avaliada relativamente à actividade contra bactérias gram-negativas, num estudo comparativo com a mitomicina C progenitora. A concentração inibitória mínima (M.I.C.) contra uma estirpe de bactérias gram-negativas (HB101) foi calculada pelo método de diluição, com concentrações graduadas de droga adicionadas a agar a 37~40*C. A “7

N'-(2-desoxig1icopiranosi1>mitomicina C foi dissolvida em 507 de água estéril-507. de etanol a 4°C, e a mitomicina C foi dissolvida em etanol. 0 agar, contendo a droga, solidificou rapidamente á temperatura ambiente, e as bactérias foram pastas em placas imediatamente. Após 24 horas a 37^C'C, as placas de agar foram observados relativamente á inibição do crescimento de bactérias. Os resultados estão resumidos na. Tabela 4.

Tabela 4 kwiposto

M.I.C.

Bactérias Sram-negativa;

N‘-(2-desoxig1icopi ranosi1) mitomicina C

1,60-3,3 mcg/ml

Mitomicina C

0,3 -0,5 mcg/ml

Tendo agora descrito completamente o invento, deverá ser compreendido por aqueles que são peritos nesta técnica que d mesmo pode ser realizado dentro de uma gama larga e equivalente

de condições, formulações e outros; parâmetros sem afectar o Smbito do invento ou qualquer um dos seus modelos de realização.

Claims

Reivindicações ia. - Processo para mitomicina tendo a fórmula: a preparação de um derivado de em que, n é 0 ou 1; Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopiranosilo, galactopiranorilo, manopiranosilo, xilopiranosilo, celobiosilo, lactosilo, glicofuranosilo, maltosilo, e 2-amino-l,3-ciclo-hexanodiol, ou seus derivados acetato protegidos no hidroxilo; R é hidrogénio; R1 é hidrogénio, alquilo C1~C4 ou alquilo C^-C^ substituído por fenilo, hidroxifenilo, indolilo, mercapto, alquil C1~Cj-tio, hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole ou carbamilo; ou R e R1 formam um anel de cinco ou seis membros contendo azoto; caracterizado por: (A) para a preparação de um derivado de mitomicina, 7 substituída em N , anteriormente referido em que, n é 0; * 2A?> . é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopiranosilo, galactopiranosilo, manopiranosilo, xilopiranosilo, celobiosilo, lactosilo, g1icofuranosilo, maltosila, e 2—amino-1,3-cicla-hexanodiol—2-i1 o, ou seus derivados peracetato protegidos no hidroxilo; se fazer reagir mitomicina A com um composto amino, sob condições básicas, num solvente orgânico polar, de -T modo a obter-se a mitomicina substituída em N' ; ou (B> para a preparação de um derivado de mitomicina anteriormente referido em que, n é 1 ; Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopiranosilo, galactopiranosilo, manopiranosilo, xilopiranosi1o, celobiosilo, lactosilo, g1icofuranosi1o, maltosilo, e 2-amino-1,3-ciclo-hexanodiol-2-ilo, ou o seu derivado peracetilo protegido no hidroxilo; R é hid rogéni o; r/ é hidrogénio, alquilo C^-C^ ou alquilo C^-C^ substituído por fenilo, hidroxifeni1 o, indolilo, mercapto, alquil Cj-C^-tio, hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole ou carbamilo; ou R e R formam um anel de cinco ou seis membros contendo azoto; (a) se condensar um amino-ácido n-proteqido com um álcool, na presença de um reagente de desidratação, de modo a obter-se um éster activado, (b) se condensar o éster activado obtido no passo (a.) com um composto amino de modo a obter-se um conjugada de amino-ácido protegido-composto amino, (c) se remover o grupo protector do amino-ácido do conjugado de amino-ácido protegido-composto amino obtido no passo (b) de modo a obter-se um conjugado de amino-ácido-composto amino, e (d) se condensar o conjugado de amino-ácido-composto amino obtido no passo (c) com mitomicina A de modo a obter-se o derivado de mitomicina. 23- Processo de acordo com a reivindicação 1(A), caracterizado por o referida composto amino ser seleccionada a partir do grupo que consiste em qlicosamina, qalactosamina, manosamina, xilosamina, celobiosamina, maltosamina, e 2-amino-1 ,,3-ciclo-hexanodiol . 3:3. - Processo de acordo com a reivindicação 1(B), caracterizado por o composto amino-ácido N-protegido ser seleccionada a partir do grupoque consiste nos derivados N-benziloxicarbonilo de alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano, metionina, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutSmico, lisina, arginina e histidina. 43. - Processo de acordo com a reivindicação 1(B>, caracterizado por o grupo protector do amino-ácido ser removido por hidroqenólise. A t 53. - Processo de acordo com a reivindicação 1(B), caracterizado por o derivado baloprotegido no hidroxilo ser o derivado 1-bromo, 1-iodo, ou 1-cloro de peracetato de glicopiranose, peracetato de g1icofuranose, peracetato de galactopiranose, peracetato de manopiranose, peracetato de xi1opiranose, peracetato de celobiose, peracetato de lactose ou peracetato de maltose. 63. - Processo de acordo com a reivindicação 1(B), caracterizado por a amina estereoquimicamente impedida ser seleccionada a partir de di-isopropi1 eti1amina, uma tri-alquil C -C7-amina, DBU ou DMAP. 4Ó 7â. - Processo de acordo com a reivindicação 1., carac terizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N'- (2-deso;:i g1icopiranosi1)—mitomicina C. 35. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac terizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N7-(2-desoxi qal.actopiranosi 1 )-mitomicina C. 95. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac terizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N7-(tetra-ace ti .l-2~deso:-:igl icopi ranosi 1)-mitomicina C. 105. - Processa de acordo com a reivindicação 1, carac terizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N7-(tetra-ace til-2-deso:'igalactopiranosi 1 )-mitomicina C. 115. - Processo de acorda com a reivindicação 1 caracterizado por o derivado mitomicina obtido ser a N7~ECE(te tra-aceti1-2-desoxi-2-g1icopi ranosi1)aminolcarboni13meti 13-mi tomi c i n a C. 125. - Processo de acordo com a reivindicação 1 —r caracterizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N'-EEE(2 -desoxig1icopiranosi1)amino3carboni13meti 13-mitomicina C. 135. - Processo para a preparação de um derivado d mitomocina tendo a fórmula: em que, η έ O ou 1 ; Y é seleccionado a. partir do grupo que consiste em glicopiranosilQ, galactopiranosi1 o, manopiranosi 1 o, xilopiranosilo, celobiosilo, lactosilo, g1icofuranosi1 o, maltosilo, e 2-amino-1,3~ciclo-bexanodiol, ou seus derivados acetato protegidos no hidroxilo; R é hidrogénio; R1 é hidrogénio, alquilo C-C„ ou alquilo C,-C„ substituído 14 14 por fenilo, hidró;; i f en i 1 o, indolilo, mercapto, alquil C -C.-tic-,

1 *r hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole ou carbamilo; ou

R e R formam um anel de cinco ou seis membros contendo azoto; e

R^Z é NH_O~ ou OLO-;

caracterizado por:

(A) para a preparação de um derivado de mitomicina anteriormente referido em que, n é 0;

Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopi— ranosilo, galactopiranosilo, manopiranosilo, xilopiranosilo, celobiosilo, lactosilo, q1icofuranosi1 o, maltosilo, e 2-amino-1,3-ciclo-hexanodiol-2-ilo;

R é hidrogénio;

R¹ é hidrogénio, alquilo C^-C^ ou alquilo Cj-C^ substituído por fenilo, hidro;·: i fen i lo, indolilo, mercapto, alquil C,-C~tio, 1 4 hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole ou carbamilo; ou

R e R^ formam, um anel de cinco ou seis membros contendo azoto; e

R² é NH,-,- ou CH-.O-;

(a) se condensar mitomicina C com anidrido succínico de modo a obter-se éster de mitomicina C de ácido la-succínico;

(b) se condensar o éster de mitomicina C de ácido la-succínico obtido no passo (a) com um derivado amino protegido no hidroxilo seleccionado a partir do grupo que consiste em glicosamina, ga1actosamina, manosamina, xilosamina, celobiosamina, maltosamina, e 2-amino-í,3-cic1 o—hexanDdiol; e (c) se remover os grupos protectores do hidroxilo demodo a obter-se o derivado de mitomicina; ou

EO para. a preparação de um derivado de mitomicina anteriormente referido em que, n é í ;

Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicopiranosilo, ga1actopiranosi1o, manopi ra.nosi 1 o, i 1 opiranosi 1 d , celobiosilo, lactosilo, g 1 icof uranosi 1 o , ma.ltosilo, e 2-amino-1,3-cic1o-bexanodiol-2~i1 o;

R é hidrogénio;

r! á hidrogénio, alquilo C^-C^ ou alquilo C^-C^ substituído por fenilo, hidroxifenilo, indolilo, mercapto, alquil C^-C^-tio, hidroxi, carboxi, amino, guanidino, imidazole ou carbamilo; ou

R e pl formam um anel de cinco ou seis membros contendo azoto;

R² é NH_O- ou CH,O~;

(a) se condensar mitomicina A com anidrido succínico de modo a obter-se éster de mitomicin

A de ácidc la-succ x ηίco (b) se condensar o éster de mitomicina A de ácido la-succínico obtido no passo (a) com um conjugado de amino-ácido protegido no hidroxi lo—sacarídeo da. fórmula:

)_η-ΝΗγΡ em que R, R e π são como anteriormente definidos e Y é um sacarídeo protegido no hidroxilo seleccionado a partir do grupo que consiste em derivados protegidos no hidroxilo de glicopiranosilo, galactopiranosilo, manopi ranosi 1 o , xi1opiranosilo, celobiosilo, latosilo, g1icofuranosi1o, maltosilo, 1,3-ciclo-hexanodiol-2-ilo; e (c) se remover os grupos protectores do hidroxilo de modo a obter—se o derivado de mitomicina.

14d. - Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N^-EE2~EE(2-desoxig1icopi ranosi1)aminolcarboni1 Deti 1karbonil3-mi tomiy c i n a C.

15ê. - Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por o derivado de mitomicina obtido ser a N^-EE2— — CC(2-desoxig1icopiranosi1)aminoJcarboni13eti13carbon i13-mi tomi— cina A.

k 1óê. - Processo para a preparação de um derivado de mitomicina tendo a fórmula:

R é 3-ciano-4-morfolini1—2—desoxipiranosi1-sacarídeo ou um 4-morfolini1-2-desoxipiranosi1-sacarídeo;

caracterizado por:

tí»;· (A) para a preparação de um derivado de mitomicina anteriormente referido em que,

R² é NH_,- ou CH..D-; e

R’ é 2- (3-ciano-4-morf ol in i 1-2-desox.i )-sacar ídeo;

(a) se condensar éter bis(aceta1de£do-2~í1ico) com um 2-amino-2-desoxi-sacarídeo na presença, de um sal de cianoboro—hidreto de modo a obter-se um 2-desoxi-2-(3-ciano-4-morfolini1)-sacarídeo e um 2-desoxi— 4-morfc<l ini 1-sacarídeo;

(b) se separar o 2-desoxi~2-(3-cisno-4-morfolini1)-sacarídeo do 2-desoxi-4—morf ol ini 1-sacarídec· obtidos no passo (a);

(c) se fazer reagir o 2-desoxi-2-(3-ciano-4-morfolinil)-sacarídeo obtido no passo (c) um haletc de acetilo de modo a obter-se um 2-desoxi-1-ha1o-2-(3-ciano—4-morfolini1)peraceti 1-sac a r í deo;

(d) se tratar o 2-desoxi-l-halo-2-(3-ciano-4-morfolini1>per— aceti1—sacarídeo obtido no passo (c) com tiocianato de prata de modo a obter-se um sacarídeo-l-tiocianato;

.«♦Ζ (e) se fazer reagir o sacarídeo-l-tiocianato obtido no passo (d) com mitomicina C ou mitomicina A de modo a obter-se uma mitomicina C- ou mitomicina A-carbotioamida de peracetato ds sacarídeo; e (f) se hidrolisar os grupos acetato da mitomicina C-peracetato de sacarídeo obtida no passo (e) de modo a obter-se um derivado de mitomicina; ou (B) para a preparação de um derivado de mitomicina anteriormente referido em que,

R é NH^- ou e

R é (4-morfo1ini1)-2-desoxi-sacarídeo;

(a) se condensar éter bis(acetaldeído-2-í1ico) com um 2-amino-2-desoxi-sacarídeo na presença de um sal de cianc-boro-hidreto de modo a obter-se um 2-desoxi-2-(3-ciano-4-morfolini1)-sacarídeo e um 2-desoxi-2-(4-morfolini1)-sacarídeo;

(b) se separar o referida 2-desoxi-2-(4-morfolini1)-sacarídeo do referido 2—desoxi-2-(3-ciano—4-morfolini1)-sacarídeo obtidos no passo ia);

(c) se fazer reagir o 2-desoxi-2-(4-morfolini1)-sacarídeo obtido no passo ic) um haleto de acetilo de modo a obter-se um 2-desoxi-l-halo-2-(4-morfolini1)peraceti1—sacarídeo;

(d) se tratar o 2-desoxi-1-halo-2-(4-morfolini1)peraceti1-sacarídeo obtido no passo (c) com tiocianato de prata de modo a obter-se um sacarídeo-l-tiocianato;

(e) se fazer reagir o sacarídeo-l-tiocianato obtido no passo (d) com mitomicina A ou C de modo a obter-se uma mitomicina C- ou mitomicina A-carbotioamida de peracetato de sacarídeo; e (f) se hidrolisar os grupos acetato da mitomicina C—peracetato de sacarídeo obtida no passo (e) de modo a obter-se um derivado de mitomicina.

caracterizado seleccionado a ga1ac tosamina,

- Processo de acordo com a reivindicação 16, por o referido 2-amino—2-desoxi-sacarídeo ser partir do grupo que consiste em gicosamina, manosamina, xilcsamina, celobiosamina e maltosami18â. — Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por o referido derivado de mitomicina obtida ser

2- C 3-c iano—4-morfoi in i 1 ) -2-deso::ig 1 icopi ranosi 1-mi tomic ina-1 a-carbotioamida.

IPâ. - Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por o referido derivado de mitomicina obtida ser 2- ( 3-c iano-4-morf ol ini 1 )-2-deso:< i ga 1 ac topi ranosi 1-mi tomic ina-1 a— carbotioamida.

20ê. - Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por o referido derivado de mitomicina obtido ser 2- ( 4-morfol ini 1 ) -2-deso:< ig 1 icopi ranosi 1 -mi tomic ina-1a-carbotioamida.

21ã·. - Processo para a preparação ds uma composição farmacêutica, caracterizado par se incluir na referida composição um derivado de mitomicina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 13 ou 16, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.

22ê. - Método para o tratamento de infecções bacterianas, caracterizado por compreender a administração a um animal de uma composição farmacêutica contendo uma quantidade antibacteriana do derivado de mitomicina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 13 ou 16, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável senda a gama de dosagem de composto activo de 10 a 300pmole por quilograma de animal,

23ã. - Método de acordo com a reivindicação 22, caracterizado por as infecçSes bacterianas serem causadas por uma bactéria seleccionada a partir do grupo que consiste em Escheric hia , F'seudomonas, 5a. 1 maneia , Staphylococcus , Klebsiel 1 a e Listeria.

24ê. - Método para o tratamento do cancro através da supressão do crescimento de células cancerígenas susceptíveis á supressão do crescimento, caracterizado por compreender a administração a um animal de uma composição farmacêutica contendo uma quantidade supressora do crescimento de células cancerígenas do derivada de mitomicina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 13 ou ló, juntamente com um veículo farmaeeuticamente aceitável sendo a gama de dosagem de composto activo de 10 a

300μmo1e por quilograma cie anima. 1.

25â. - Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por o referidC' cancro ser seleccionadc- a partir do grupo que consiste em leucemia, melanoma, sarcoma e carcinoma.