JPS6341557B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6341557B2 JPS6341557B2 JP11228485A JP11228485A JPS6341557B2 JP S6341557 B2 JPS6341557 B2 JP S6341557B2 JP 11228485 A JP11228485 A JP 11228485A JP 11228485 A JP11228485 A JP 11228485A JP S6341557 B2 JPS6341557 B2 JP S6341557B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- medium
- serum
- culture
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 48
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000016605 B-Cell Activating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、リンパ球又は白血病由来細胞を培養
する培地に関するものである。 〔従来の技術〕 近年、リンパ球又は白血病由来細胞を培養し
て、その培養上清液もしくは細胞から、有用な生
理活性物質を得ることを目的とした研究が活発化
しており、特にインターフエロン（IFN）やモノ
クロナール抗体の開発については、癌の予防、治
療への可能性を秘めていることからその進捗には
著しいものがある。しかしながら、細胞培養上清
液から生理活性物質を大量に得、それを精製して
利用するためには技術的に大きな問題がある。 その一つは、細胞培養培地に牛胎児血清
（FBS）などの血清を10％程度添加する必要があ
ることである。これらの血清は非常に高価であ
り、かつ原因不明のロツト差があるため、大量に
細胞を培養するには問題があつた。さらに、これ
らの血清は、多種類の異種蛋白を含むので、有用
活性物質を精製する際に大変な不都合が生じる。 これまでに、血清の代替として、インシユリ
ン，トランスフエリン，表皮性細胞増殖因子など
の各種の増殖因子や血清アルブミンなど性格が明
らかな蛋白を含む無血清培地が開発されてきた。
（D.Barnes，G.H.Sato，Cell，22巻，649頁、
1980年） しかしながら、これらの無血清培地では、糖源
としてグルコースが用いられているが、グルコー
スを用いたときには、多量のPH緩衝剤を培地に加
えないと、培養の間培地のPHが急激に低下し、良
好な結果が得られなかつた。 グルコースの代わりにガラクトースを用いた培
地（A.Laibovitz，Amer.J.Hyg.，78巻173頁1963
年；高岡聰子，組織培養，９巻，196頁，1983年）
あるいはフラクトースを用いた培地（C.
Wolfrom et al.Exp.Cell Res.149巻535頁1983
年）ではPHの急激な低下は生じないが、リンパ球
又は白血病由来細胞の無血清培養では良好な細胞
増殖は得られない。 〔本発明が解決しようとする問題点〕 従つてこの発明の目的は、リンパ球又は白血病
由来細胞がよく増殖し、かつPHの急激な低下が生
じない無血清培地を見い出すことにある。 〔問題点を解決するための手段〕 我々は、以上のような問題点を踏まえ、鋭意検
討した結果、グルコースを含まず0.5から５ｇ／
のマンノースを含有する無血清培地が上記の目
的を達成しうるものであることを見い出した。 本発明における実質的に血清を含まない培地と
は、RPMI1640培地、ハムＦ―12培地、ダルベツ
コMEM培地などの培地を単独または混合した培
地に、インシユリン、トランスフエリン、ステロ
イドホルモンなどの各種増殖因子や、アルブミン
などの血清蛋白成分を含有せしめた培地、例え
ば、イスコフ培地、RITC80―７培地、RITC57
―１培地、HB101培地など及びこれらの培地を
改変したものである。 マンノースの濃度範囲は、0.5から５ｇ／の
範囲であり、より好ましくは、通常の細胞増殖に
おいては、0.5から２ｇ／が、高密度細胞培養
（５×106個／ml以上）では２から５ｇ／であ
る。0.5ｇ／以下では、有意な効果が認められ
ず、５ｇ／以上では、乳酸産生速度が増大する
結果、PH低下速度が増大し、細胞毒性が認められ
る。糖源としてマンノースのほかにガラクトース
（0.5〜１ｇ／）や、その他の糖源ピルビン酸や
アミノ酸を併用して用いることもできる。 これらの培地は、培地を時々入れかえる交換培
養法に用いれば、５から106／mlの高密度細胞数
が得られる、所謂高密度培養法にも用いることが
できる。 本発明のリンパ球又は白血病由来細胞とは、ヒ
ト、マウス、ラツト、ウシ、ハムスターなどの哺
乳動物のリンパ球又は白血病由来細胞であつて、
初代培養細胞、リンパ腫、白血病、骨髄腫瘍由来
の細胞株、リンパ球を片方の親細胞とするハイブ
リドーマ、並びにウイルス等で変異した細胞株
が、これに含まれる。例えば、ヒト細胞では、
BALL―１細胞、UMCL細胞、ATL―２細胞、
CCR―CEM細胞、TALL―１細胞、RPMI1788
細胞、HL―60細胞、NALM―１細胞などがあげ
られ、動物細胞ではＸ―5563細胞、BW5147細
胞、FS―６細胞やNS―１細胞、SP―１細胞な
どを親株とするマウス脾臓リンパ球のハイブリド
ーマなどがあげられる。 本発明による培養方法は、通常の浮遊細胞培養
用の容器または装置を用いればよく、細胞増殖培
養では、細胞数１から５×105個／mlの細胞密度
で、37℃、５％CO2下、３から５日間培養する。
また、効率的な有用物質産生のための培養法とし
ては、連続培養法がある。 〔本発明の作用、効果〕 本発明の無血清培地を用いてリンパ球又は白血
病由来細胞を培養すると、充分な細胞増殖が得ら
れ、且つ培養の間、PHが低下する程度が少い。 実施例 １ 表１に示すグルコース、ガラクトース及びマン
ノースを含まず0.1％のウシ血清アルブミン
（BSA）を添加したRITC59―１培地を基礎培地
とし、これに表２に示す濃度の糖を添加した後、
培地の侵透圧を水またはNaClで290±0smに調整
した。ついで、0.22μmのメンブラン・フイルタ
ー（ミリポア社製）で濾過滅菌した。各々の培地
20mlをフアルコン社製3024フラスコに入れ、ヒト
臍帯血リンパ球をEpstain―Barr Virusで変異さ
せ、INFを自発産生するUMCL細胞又はBALL
―１細胞を、５×105個／mlの初発細胞濃度とな
るように加え、５％CO2，37℃にてUMCL細胞を
４日間、BALL―１細胞を５日間、培養した。
する培地に関するものである。 〔従来の技術〕 近年、リンパ球又は白血病由来細胞を培養し
て、その培養上清液もしくは細胞から、有用な生
理活性物質を得ることを目的とした研究が活発化
しており、特にインターフエロン（IFN）やモノ
クロナール抗体の開発については、癌の予防、治
療への可能性を秘めていることからその進捗には
著しいものがある。しかしながら、細胞培養上清
液から生理活性物質を大量に得、それを精製して
利用するためには技術的に大きな問題がある。 その一つは、細胞培養培地に牛胎児血清
（FBS）などの血清を10％程度添加する必要があ
ることである。これらの血清は非常に高価であ
り、かつ原因不明のロツト差があるため、大量に
細胞を培養するには問題があつた。さらに、これ
らの血清は、多種類の異種蛋白を含むので、有用
活性物質を精製する際に大変な不都合が生じる。 これまでに、血清の代替として、インシユリ
ン，トランスフエリン，表皮性細胞増殖因子など
の各種の増殖因子や血清アルブミンなど性格が明
らかな蛋白を含む無血清培地が開発されてきた。
（D.Barnes，G.H.Sato，Cell，22巻，649頁、
1980年） しかしながら、これらの無血清培地では、糖源
としてグルコースが用いられているが、グルコー
スを用いたときには、多量のPH緩衝剤を培地に加
えないと、培養の間培地のPHが急激に低下し、良
好な結果が得られなかつた。 グルコースの代わりにガラクトースを用いた培
地（A.Laibovitz，Amer.J.Hyg.，78巻173頁1963
年；高岡聰子，組織培養，９巻，196頁，1983年）
あるいはフラクトースを用いた培地（C.
Wolfrom et al.Exp.Cell Res.149巻535頁1983
年）ではPHの急激な低下は生じないが、リンパ球
又は白血病由来細胞の無血清培養では良好な細胞
増殖は得られない。 〔本発明が解決しようとする問題点〕 従つてこの発明の目的は、リンパ球又は白血病
由来細胞がよく増殖し、かつPHの急激な低下が生
じない無血清培地を見い出すことにある。 〔問題点を解決するための手段〕 我々は、以上のような問題点を踏まえ、鋭意検
討した結果、グルコースを含まず0.5から５ｇ／
のマンノースを含有する無血清培地が上記の目
的を達成しうるものであることを見い出した。 本発明における実質的に血清を含まない培地と
は、RPMI1640培地、ハムＦ―12培地、ダルベツ
コMEM培地などの培地を単独または混合した培
地に、インシユリン、トランスフエリン、ステロ
イドホルモンなどの各種増殖因子や、アルブミン
などの血清蛋白成分を含有せしめた培地、例え
ば、イスコフ培地、RITC80―７培地、RITC57
―１培地、HB101培地など及びこれらの培地を
改変したものである。 マンノースの濃度範囲は、0.5から５ｇ／の
範囲であり、より好ましくは、通常の細胞増殖に
おいては、0.5から２ｇ／が、高密度細胞培養
（５×106個／ml以上）では２から５ｇ／であ
る。0.5ｇ／以下では、有意な効果が認められ
ず、５ｇ／以上では、乳酸産生速度が増大する
結果、PH低下速度が増大し、細胞毒性が認められ
る。糖源としてマンノースのほかにガラクトース
（0.5〜１ｇ／）や、その他の糖源ピルビン酸や
アミノ酸を併用して用いることもできる。 これらの培地は、培地を時々入れかえる交換培
養法に用いれば、５から106／mlの高密度細胞数
が得られる、所謂高密度培養法にも用いることが
できる。 本発明のリンパ球又は白血病由来細胞とは、ヒ
ト、マウス、ラツト、ウシ、ハムスターなどの哺
乳動物のリンパ球又は白血病由来細胞であつて、
初代培養細胞、リンパ腫、白血病、骨髄腫瘍由来
の細胞株、リンパ球を片方の親細胞とするハイブ
リドーマ、並びにウイルス等で変異した細胞株
が、これに含まれる。例えば、ヒト細胞では、
BALL―１細胞、UMCL細胞、ATL―２細胞、
CCR―CEM細胞、TALL―１細胞、RPMI1788
細胞、HL―60細胞、NALM―１細胞などがあげ
られ、動物細胞ではＸ―5563細胞、BW5147細
胞、FS―６細胞やNS―１細胞、SP―１細胞な
どを親株とするマウス脾臓リンパ球のハイブリド
ーマなどがあげられる。 本発明による培養方法は、通常の浮遊細胞培養
用の容器または装置を用いればよく、細胞増殖培
養では、細胞数１から５×105個／mlの細胞密度
で、37℃、５％CO2下、３から５日間培養する。
また、効率的な有用物質産生のための培養法とし
ては、連続培養法がある。 〔本発明の作用、効果〕 本発明の無血清培地を用いてリンパ球又は白血
病由来細胞を培養すると、充分な細胞増殖が得ら
れ、且つ培養の間、PHが低下する程度が少い。 実施例 １ 表１に示すグルコース、ガラクトース及びマン
ノースを含まず0.1％のウシ血清アルブミン
（BSA）を添加したRITC59―１培地を基礎培地
とし、これに表２に示す濃度の糖を添加した後、
培地の侵透圧を水またはNaClで290±0smに調整
した。ついで、0.22μmのメンブラン・フイルタ
ー（ミリポア社製）で濾過滅菌した。各々の培地
20mlをフアルコン社製3024フラスコに入れ、ヒト
臍帯血リンパ球をEpstain―Barr Virusで変異さ
せ、INFを自発産生するUMCL細胞又はBALL
―１細胞を、５×105個／mlの初発細胞濃度とな
るように加え、５％CO2，37℃にてUMCL細胞を
４日間、BALL―１細胞を５日間、培養した。
【表】
【表】
ール酸抱接化合物
【表】
【表】
培養後生細胞密度とUMCL細胞については
INF活性、BALL―１については、IgM量を測定
した。 これらの結果を基礎培地に10％FBSを添加し
た培地を対照培地として用いた結果と比較して表
２に示す。この結果より、マンノースを糖源とす
る倍地が、最も細胞増殖及び物質生産に適してい
ることがわかる。 実施例 ２ 実施例１に示した培地20mlにUMCL細胞又は
BALL―１細胞を1.5×107個／mlになるように懸
濁し、５％CO2濃度の保温器中に設置したベルコ
社製ロツキングプレートにて15回／分の速度で
UMCL細胞は、40時間、BALL―１細胞は72時
間揺動培養した。培養後、実施例１と同様に各々
の生細胞密度及びIFN産生並びにIgM産生を計測
した。これらの結果を基礎培地に20％FBSを添
加した培地を対照培地として用いた結果と比較し
て表３に示す。
INF活性、BALL―１については、IgM量を測定
した。 これらの結果を基礎培地に10％FBSを添加し
た培地を対照培地として用いた結果と比較して表
２に示す。この結果より、マンノースを糖源とす
る倍地が、最も細胞増殖及び物質生産に適してい
ることがわかる。 実施例 ２ 実施例１に示した培地20mlにUMCL細胞又は
BALL―１細胞を1.5×107個／mlになるように懸
濁し、５％CO2濃度の保温器中に設置したベルコ
社製ロツキングプレートにて15回／分の速度で
UMCL細胞は、40時間、BALL―１細胞は72時
間揺動培養した。培養後、実施例１と同様に各々
の生細胞密度及びIFN産生並びにIgM産生を計測
した。これらの結果を基礎培地に20％FBSを添
加した培地を対照培地として用いた結果と比較し
て表３に示す。
【表】
これらの結果から、マンノースを主糖源とする
無血清培地は、細胞高密度培養において生細胞維
持率と物質産生を有意に増大せしめることが認め
られる。
無血清培地は、細胞高密度培養において生細胞維
持率と物質産生を有意に増大せしめることが認め
られる。
Claims (1)
- １ グルコースを含まず0.5から５ｇ／のマン
ノースを含有し、実質的に血清を含まないリンパ
球又は白血病由来細胞を培養するための無血清培
地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11228485A JPS61271984A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | 無血清培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11228485A JPS61271984A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | 無血清培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61271984A JPS61271984A (ja) | 1986-12-02 |
| JPS6341557B2 true JPS6341557B2 (ja) | 1988-08-17 |
Family
ID=14582839
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11228485A Granted JPS61271984A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | 無血清培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61271984A (ja) |
-
1985
- 1985-05-27 JP JP11228485A patent/JPS61271984A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61271984A (ja) | 1986-12-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1656446B1 (en) | Conditioned cell culture medium, method to obtain the same and use of it for maintenance, proliferation and differentiation of mammalian cells | |
| Nakabayashi et al. | Growth of human hepatoma cell lines with differentiated functions in chemically defined medium | |
| CA2115140A1 (en) | Proliferation of hepatocyte precursors | |
| US6136600A (en) | Method for cultivation of hepatocytes | |
| JPH114685A (ja) | 冬眠特異的タンパク質産生樹立細胞株およびその創製方法 | |
| CA1340698C (en) | Preparation and uses of interferon-gamma | |
| EP0163543A2 (en) | Marrow cell stimulator | |
| JPS6341557B2 (ja) | ||
| EP0132359A2 (en) | Natural human interleukin-2 and production thereof | |
| JPH0728732B2 (ja) | 動物細胞増殖促進剤及び無血清培地 | |
| WO1987006591A1 (en) | Immunosuppressive factor | |
| JPS60207594A (ja) | ヒトインタ−ロイキン３の製造方法 | |
| Lee et al. | Production of granulocyte-stimulating and bone cell-modulating activities from a neutrophilia hypercalcemia-inducing murine mammary cancer cell line | |
| JP3046415B2 (ja) | 浮遊細胞用無血清合成培地 | |
| JPS6321469B2 (ja) | ||
| JPS633787A (ja) | 改良された融合生成物 | |
| JPS5825440B2 (ja) | ヒトカルシトニンの製造方法 | |
| JPH0154991B2 (ja) | ||
| Pinson | Neonatal rat heart muscle cells | |
| JP2632849B2 (ja) | γ―インターフェロンの製造方法 | |
| JP2623319B2 (ja) | ハイブリドーマ細胞による抗体産生促進剤 | |
| JPS6163284A (ja) | 動物細胞の培養方法 | |
| JP2897043B2 (ja) | 完全合成培地 | |
| EP0498992A2 (en) | Serum-free culture medium containing lysozyme | |
| JP2850293B2 (ja) | γ−インターフェロン感受性疾患剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |