JPS60207594A - ヒトインタ−ロイキン３の製造方法 - Google Patents
ヒトインタ−ロイキン３の製造方法Info
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- JPS60207594A JPS60207594A JP6233584A JP6233584A JPS60207594A JP S60207594 A JPS60207594 A JP S60207594A JP 6233584 A JP6233584 A JP 6233584A JP 6233584 A JP6233584 A JP 6233584A JP S60207594 A JPS60207594 A JP S60207594A
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- cell
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
この発明はヒトインターロイキン３の製造法に関するも
のでおる。 インターロイキン３（以下１°ルー３」と配す。）は未
分化のＴ細胞に作用して２０α−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ（２０α−ｈｙｄｒｏｘｙ ａｔｅｒ
ｏｉｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ）を誘導し、成
熟Ｔ細胞へと分化させる特異な作用を有するリンホカイ
ンでめる。 またＩＬ−３は顆粒球、巨核球、マスト細胞、好塩基球
などの細胞の分化・増殖にも関与し１いるのみならず、
その生物活性は性ホルモンの代謝にまで及んでいること
が考えられ、その
のでおる。 インターロイキン３（以下１°ルー３」と配す。）は未
分化のＴ細胞に作用して２０α−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ（２０α−ｈｙｄｒｏｘｙ ａｔｅｒ
ｏｉｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ）を誘導し、成
熟Ｔ細胞へと分化させる特異な作用を有するリンホカイ
ンでめる。 またＩＬ−３は顆粒球、巨核球、マスト細胞、好塩基球
などの細胞の分化・増殖にも関与し１いるのみならず、
その生物活性は性ホルモンの代謝にまで及んでいること
が考えられ、その
【１】広い生物活性に非常なる興味が
注がれている。 （Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇｉｃａｌ、 Ｒ＠ｖ、 （１９８
２） ＋ ６３ ＊ ５−３２ ）従って、この様な生
物活性から免疫学的に欠陥または異常のめる疾患に対し
て汎〈有用であシ、ｐ為つ、免疫系疾患の臨床上の診断
に有用でめることが期待される免疫学的、生理学的機能
の重要な診断方法を提供するとともに、生物、医学全般
の研究試薬としても有用である。 この様なＩＬ−３は、マウス牌細胞からレクチン刺激に
よって、あるいはＷＥＨＩ −３などの腫瘍細胞株から
、その培養上清に生産されることが知られているｏ （
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ−（１９８２） 、 １２９．
１３７７−２１３８３）、Ｌかし、ヒト細胞においては
１１．−３意生細胞は知られておらず、また、ヒ）ＩＬ
−３の存在すら報告されていなかった。 最近ヒト正常Ｔ細胞をヒト成人型Ｔ白血病ウィルス（）
ＩＴＬＶ ）でトランスフオームすることにより、ヒト
ＩＬ−３’を韮生ずることが可能で多ることの報告がさ
れた（ ＢＣＬＥＮＣＥ ２２３．７０３ （１９８４
） ）。 こねに対し本発明者らは、ウィルス非感染ヒト悪性化細
胞よシヒトＸＬ−３の高い生産能を有する細施株を分離
することに成功した。即ちこの発明は、ヒトインターロ
イキン３産生能含有するウィルス非感染ヒト悪性化細胞
を培養し、細胞内又は培地中に蓄積されたヒトインター
ロイキン３を採取することを特徴とするヒトインターロ
イキン３の製造法で必る。 ウィルス非感染ヒト悪性化細胞は、すでに公知となった
ＨＴＬＶ等のウィルスによって形質転換されたものでは
ない。ヒ）Ｉｆ、−３産生能を有するウィルス非感染悪
性化細胞を具体的に示せば、ＣＣＲＦ”ＣＥＭ 、 （
ＡＴＣＣ，ＣＣＬ １１９ 、Ｃａｎｃｅｒ １８：
５２２−５２９゜（１９６５））、 ＨＰＢ−ＭＬＴ
（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ ＋旦１６６（１９７８）
）、 ＨＰＢ−ＡＬＬ Ｌ Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｅｅｒ
・２１．１６６（１９７７）ルＴＡＬＬ（Ｎａｔｕｒ
ｅ、 ２６７、８４３ （１９７７） ） 。 ＲＰＭＩ−８４０２（Ｊ、 Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎ５ｔ−５５＋ １１（１９７５））など、ウィル
ス非感染悪性化ＴＭＡ胞、および、Ｕ−９３７，（ＡＴ
ＣＣＣＲＬ １５９３）、 ＴＩ（Ｐ−１，（Ｉｎｔ。 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ、 ２６ 、１７１ （１９８０）
）など、ウィルス非感染悪性化ｎｏｎ Ｔ細胞などが
おる。尚、これらの細胞は容易に入手可能であシ、ｔた
、本発明はこれらの細胞に限定されるものではない。さ
らに、ＩＬ−３童生ヒト正常細胞とヒト悪性化細胞の融
合によシ、得られるヒトＩＬ−３産生ハイブリドーマも
当然これらに含まれる。 このようなヒトＩＬ−３産生能を有するウィルス非感染
ヒト悪性化細胞を培養して！Ｌ−３を生産せしめる方法
は、通常の培地を使用して通常の方法で培養すればよい
。即ち、培地としては、ローズウェル・パーク・メモリ
アル・インスティテ、−ト１６４０培地（Ｒｏａｗ＠ｌ
ｌ Ｐａｒｋ Ｍ＊ｍｏｒ１ｍｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ
１６４０、以下ＲＰＭＩ １６４０と略記する）が好適
であるが、他にダルベツコ変法イーグル培地（ＩＭｂ＠
ｃｅｏ’ｍＭｏｄｉｆｌｅｄ Ｅａｇｌ＠Ｍ＠ｄｌｕｍ
）、イーグル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕ
ｍ Ｗｓａｅｎｔｌａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）−クリック（
Ｃ１ｉｃｋ）培地など既知の細胞増殖用培地を挙げるこ
とができる。これら培地には、ＩＯ’％の胎児ウシ血清
（以下ＦＢ８と略記する）や新生児ウシ血清。 ウマ血清、ヒト血清を添加して用いる。適当な増殖促進
物質を使用すれば血清を含まなくともよい場合もちる。 例えば０．５ ％ ＢＡＡ 、ウシ血清アルブミンを含
むＲＩＴＣ無血清培地、あるいはＢＳＡ を含まないＲ
ＩＴＣ無血清培地でも、ＩＬ−３の産生効率は低下する
が可能である。 また、ＩＬ−３誘引物質を添加しなくともＩＬ−３は産
生される場合が多い。時には、ＩＬ−３誘引物質を含ま
ない培地ではＩＬ−３ｑ産生されないが、ＩＬ−３誘引
物質を添加することによりてＩＬ−３１産生ずる様にな
る株もある。また、ＩＬ−３誘引物質を添加しない培地
でＩＬ−３を産生ずる様な株についてもルー３誘引物質
を培地に添加しても、通常、ＩＬ−３産生能は低下しな
く、時には、それによってＩＬ−３産生能が高まること
もある。 ＩＬ−３誘引物質としては、ＣｏｎＡ ＋ ＰＨＡ等の
レクチン、ＰＭＡ等の７オルボールエステルがあるこれ
らを単独あるいは組み合せて培地に添加する。 ＩＬ−３誘引物質は、細胞密度１〜５×１０ 個／１１
Ｌ１以上の細胞液に添加することが好適である。 培養は通常、１〜５×１０ 個／ｄの細胞密度で３５〜
３８℃にて４チル６％炭酸ガス気流中で行う。かくして
、１〜４日間も培養すれば、培地中に著量のＩＬ−３が
産生される。 ＩＬ−３の活性測定法として、現在大別して２種類の方
法が行なわれている。その１つは、無胸腺ヌードマウス
の牌細胞の２０α−８ＤＨ発現誘導を指標とするもので
ある。即ち、ＩＬ−ａは２０α−８ＤＨを発現していな
い未分化なＴ細胞に２０α−８ＤＨＯ４現ｔ−誘導する
ものであることから、この性質を利用して！Ｌ−３を定
性及び定量分析するものである。 他の方法は、ＩＬ−３依存性細胞の増殖を指標としたも
のである。このＩＬ−３依存性細胞として良く知られた
ものにＣ３ＨｓｆｆＶ ＝ ３２ＤＣＬ 、ＦＤＣ−Ｐ
、Ｂ６Ｓｕｔなどの細胞かおる。これら細胞は細胞表
面上にいずれも２０α−８ＤＨｔ−表現している。これ
らＩＬ−３依存性細胞はＩＬ−３が増殖にとりて必須で
あることから、旬−チミジンを添加して、培養すると、
ＩＬ−３が存在する時のみ５Ｈ−チミジンの取シ込みが
おこる。本発明のＩＬ−３活性測定法は、ＩＬ−３依存
性細胞であるＦＤＣ−Ｐ細胞のＳＨ−チミジンの取シ込
みを指標にして行なりた。（実施例参照）ウィルス非感
染ヒト白血病Ｔ−細胞の培養培地よｆｉｌＬ−３を採取
するには塩析、ゲル濾過、アフィニイティクロマトグラ
フィティー、イオン交換クロマトダラフィー、調製等電
点電気泳動、高速液み合わせて行えばよい。 この様にして得られたヒトＩＬ−３は、ＬＩＬｔｔｉｎ
ｇ（Ｊ、 Ｅｘｐ０Ｍ＠ｄ、（１９８３）、１５７１０
７わらが報告しているマウスＮＣ細胞（ｎａｔｕｒａｌ
ｃｙＬｏｔｏｘｉｅ ｃｅｌｌ）を誘導し、同細胞株
を維持継代させた。ＮＯ細胞線ナチュラルキラー細胞同
様にＪ嵐瘍細胞に対して、非特異的傷害活性を保持して
いると考えられることから、ＩＬ−３が癌免疫ａｔ法の
治療薬として応用されることが期待できる〇 以下、本発明ｔ−実施例によシ、具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ ウィルス非感染ヒト悪性化Ｔ細胞株の培養上清について
、ルー３ｖｊ引物質添加無添加の培養上清中のＩＬ−３
活性測定の結果を第１表に示す。 ＣＣＲＦ −０１Ｍ細胞、８ｏｍｍａｒ細胞など各種腫
瘍細胞株をＲＰＨＩ −１６４０培地（１０嗟ＦＢ８含
有）に細胞濃度がｌＸｌ０ 個／ゴになる様に加え、２
４穴培養プレートで２４時間、３７℃にて、５ｓｃｏ□
インキ−ベーター内で培養した後、遠心分離にて、その
培養上清を採取し培地中に産生された！Ｌ−３産生量を
測定した。 尚、ＩＬ−３誘引物質として、Ｃ（１！ＩＡ ＊ ＰＨ
Ａ ＩＰＭＡなど、実施例１に示された濃度となる様に
添加し、同様に培養して培養上清を得た。 ＩＬ−３活性の測定は、以下の方法に従った。 ９６大組織培養プレートの個々の穴に、ＩＬ−３活性を
検定しようとする検体を１００μ）ずつ入れ、ＲＰＭＩ
１６４０＋１０％ ＦＢＳ培地にて２倍希釈を繰シ返
すＯそとに−Ｄｅｘｔ・１等樹立された１１．−３依存
性細胞株でおるＦＤＣ−Ｐ細胞を５Ｘ１０’個／１００
μｌの濃度として、各穴に１００μノずつ添加する。３
７℃。 ５９６ ＣＯ□下で１８時間培養後に、トリチウム化チ
ミジン１μＣ１を加え、６時間／ｌルスを行なった後、
この分野で良く知られた方法に従って細胞を集め、細胞
内に堰９込まれた放射線量を測定した。ＩＬ−３活性の
高い培養上清はど、ＦＤＣ−Ｐ細胞内に取シ込まれるト
リチウム化チミジン量が多いことから、培養上清中のＩ
Ｌ−３産生食を容易に知ることが出来るＯ 第１ｆｉに示す如く、実施したいずれの細胞の培養上清
中にも、ＩＬ−３誘引物質共存下、非共存下、いずれも
対照と比べて明らかに、組−チミジンの取シ込み量が上
昇していることがわかる。なお実施例には示してないが
、ＣｏｎＡ ＊ ＰＨＡ ＊ ＰＭＡなどＩＬ−３９引
物質だけではＦＤＣ−Ｐ細胞の５Ｈ−チミジンの取シ込
みにはなんら作用しないことが確かめられている。 このことは、実施例１に示したヒト細胞はいずれも、Ｉ
Ｌ−３をＩＩ、−３１Ｊ引物質共存下、非共存下濾生し
ていることを示している。 実施例２ ウィルス非感染悪性化非Ｔ細胞の培養上清について、Ｉ
Ｌ−３誌引物質添加、無嚇加の培養上清のＩＬ−３活性
測定の結果を第２表に示す。 ＴＨＰ−１、Ｕ−９３７のウィルス非感染悪性化非Ｔ細
胞を実施例１と同様に培養し、培養上清を得た。 第２表に示した如く、顆粒球白血病細胞であるＴＨＰ−
１、Ｕ−９３７の細胞においても、ルー３誘引物質共存
下非共存下、ＬＬ−３ｔ−産生じていることが理解され
る。
注がれている。 （Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇｉｃａｌ、 Ｒ＠ｖ、 （１９８
２） ＋ ６３ ＊ ５−３２ ）従って、この様な生
物活性から免疫学的に欠陥または異常のめる疾患に対し
て汎〈有用であシ、ｐ為つ、免疫系疾患の臨床上の診断
に有用でめることが期待される免疫学的、生理学的機能
の重要な診断方法を提供するとともに、生物、医学全般
の研究試薬としても有用である。 この様なＩＬ−３は、マウス牌細胞からレクチン刺激に
よって、あるいはＷＥＨＩ −３などの腫瘍細胞株から
、その培養上清に生産されることが知られているｏ （
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ−（１９８２） 、 １２９．
１３７７−２１３８３）、Ｌかし、ヒト細胞においては
１１．−３意生細胞は知られておらず、また、ヒ）ＩＬ
−３の存在すら報告されていなかった。 最近ヒト正常Ｔ細胞をヒト成人型Ｔ白血病ウィルス（）
ＩＴＬＶ ）でトランスフオームすることにより、ヒト
ＩＬ−３’を韮生ずることが可能で多ることの報告がさ
れた（ ＢＣＬＥＮＣＥ ２２３．７０３ （１９８４
） ）。 こねに対し本発明者らは、ウィルス非感染ヒト悪性化細
胞よシヒトＸＬ−３の高い生産能を有する細施株を分離
することに成功した。即ちこの発明は、ヒトインターロ
イキン３産生能含有するウィルス非感染ヒト悪性化細胞
を培養し、細胞内又は培地中に蓄積されたヒトインター
ロイキン３を採取することを特徴とするヒトインターロ
イキン３の製造法で必る。 ウィルス非感染ヒト悪性化細胞は、すでに公知となった
ＨＴＬＶ等のウィルスによって形質転換されたものでは
ない。ヒ）Ｉｆ、−３産生能を有するウィルス非感染悪
性化細胞を具体的に示せば、ＣＣＲＦ”ＣＥＭ 、 （
ＡＴＣＣ，ＣＣＬ １１９ 、Ｃａｎｃｅｒ １８：
５２２−５２９゜（１９６５））、 ＨＰＢ−ＭＬＴ
（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ ＋旦１６６（１９７８）
）、 ＨＰＢ−ＡＬＬ Ｌ Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｅｅｒ
・２１．１６６（１９７７）ルＴＡＬＬ（Ｎａｔｕｒ
ｅ、 ２６７、８４３ （１９７７） ） 。 ＲＰＭＩ−８４０２（Ｊ、 Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎ５ｔ−５５＋ １１（１９７５））など、ウィル
ス非感染悪性化ＴＭＡ胞、および、Ｕ−９３７，（ＡＴ
ＣＣＣＲＬ １５９３）、 ＴＩ（Ｐ−１，（Ｉｎｔ。 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ、 ２６ 、１７１ （１９８０）
）など、ウィルス非感染悪性化ｎｏｎ Ｔ細胞などが
おる。尚、これらの細胞は容易に入手可能であシ、ｔた
、本発明はこれらの細胞に限定されるものではない。さ
らに、ＩＬ−３童生ヒト正常細胞とヒト悪性化細胞の融
合によシ、得られるヒトＩＬ−３産生ハイブリドーマも
当然これらに含まれる。 このようなヒトＩＬ−３産生能を有するウィルス非感染
ヒト悪性化細胞を培養して！Ｌ−３を生産せしめる方法
は、通常の培地を使用して通常の方法で培養すればよい
。即ち、培地としては、ローズウェル・パーク・メモリ
アル・インスティテ、−ト１６４０培地（Ｒｏａｗ＠ｌ
ｌ Ｐａｒｋ Ｍ＊ｍｏｒ１ｍｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ
１６４０、以下ＲＰＭＩ １６４０と略記する）が好適
であるが、他にダルベツコ変法イーグル培地（ＩＭｂ＠
ｃｅｏ’ｍＭｏｄｉｆｌｅｄ Ｅａｇｌ＠Ｍ＠ｄｌｕｍ
）、イーグル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕ
ｍ Ｗｓａｅｎｔｌａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）−クリック（
Ｃ１ｉｃｋ）培地など既知の細胞増殖用培地を挙げるこ
とができる。これら培地には、ＩＯ’％の胎児ウシ血清
（以下ＦＢ８と略記する）や新生児ウシ血清。 ウマ血清、ヒト血清を添加して用いる。適当な増殖促進
物質を使用すれば血清を含まなくともよい場合もちる。 例えば０．５ ％ ＢＡＡ 、ウシ血清アルブミンを含
むＲＩＴＣ無血清培地、あるいはＢＳＡ を含まないＲ
ＩＴＣ無血清培地でも、ＩＬ−３の産生効率は低下する
が可能である。 また、ＩＬ−３誘引物質を添加しなくともＩＬ−３は産
生される場合が多い。時には、ＩＬ−３誘引物質を含ま
ない培地ではＩＬ−３ｑ産生されないが、ＩＬ−３誘引
物質を添加することによりてＩＬ−３１産生ずる様にな
る株もある。また、ＩＬ−３誘引物質を添加しない培地
でＩＬ−３を産生ずる様な株についてもルー３誘引物質
を培地に添加しても、通常、ＩＬ−３産生能は低下しな
く、時には、それによってＩＬ−３産生能が高まること
もある。 ＩＬ−３誘引物質としては、ＣｏｎＡ ＋ ＰＨＡ等の
レクチン、ＰＭＡ等の７オルボールエステルがあるこれ
らを単独あるいは組み合せて培地に添加する。 ＩＬ−３誘引物質は、細胞密度１〜５×１０ 個／１１
Ｌ１以上の細胞液に添加することが好適である。 培養は通常、１〜５×１０ 個／ｄの細胞密度で３５〜
３８℃にて４チル６％炭酸ガス気流中で行う。かくして
、１〜４日間も培養すれば、培地中に著量のＩＬ−３が
産生される。 ＩＬ−３の活性測定法として、現在大別して２種類の方
法が行なわれている。その１つは、無胸腺ヌードマウス
の牌細胞の２０α−８ＤＨ発現誘導を指標とするもので
ある。即ち、ＩＬ−ａは２０α−８ＤＨを発現していな
い未分化なＴ細胞に２０α−８ＤＨＯ４現ｔ−誘導する
ものであることから、この性質を利用して！Ｌ−３を定
性及び定量分析するものである。 他の方法は、ＩＬ−３依存性細胞の増殖を指標としたも
のである。このＩＬ−３依存性細胞として良く知られた
ものにＣ３ＨｓｆｆＶ ＝ ３２ＤＣＬ 、ＦＤＣ−Ｐ
、Ｂ６Ｓｕｔなどの細胞かおる。これら細胞は細胞表
面上にいずれも２０α−８ＤＨｔ−表現している。これ
らＩＬ−３依存性細胞はＩＬ−３が増殖にとりて必須で
あることから、旬−チミジンを添加して、培養すると、
ＩＬ−３が存在する時のみ５Ｈ−チミジンの取シ込みが
おこる。本発明のＩＬ−３活性測定法は、ＩＬ−３依存
性細胞であるＦＤＣ−Ｐ細胞のＳＨ−チミジンの取シ込
みを指標にして行なりた。（実施例参照）ウィルス非感
染ヒト白血病Ｔ−細胞の培養培地よｆｉｌＬ−３を採取
するには塩析、ゲル濾過、アフィニイティクロマトグラ
フィティー、イオン交換クロマトダラフィー、調製等電
点電気泳動、高速液み合わせて行えばよい。 この様にして得られたヒトＩＬ−３は、ＬＩＬｔｔｉｎ
ｇ（Ｊ、 Ｅｘｐ０Ｍ＠ｄ、（１９８３）、１５７１０
７わらが報告しているマウスＮＣ細胞（ｎａｔｕｒａｌ
ｃｙＬｏｔｏｘｉｅ ｃｅｌｌ）を誘導し、同細胞株
を維持継代させた。ＮＯ細胞線ナチュラルキラー細胞同
様にＪ嵐瘍細胞に対して、非特異的傷害活性を保持して
いると考えられることから、ＩＬ−３が癌免疫ａｔ法の
治療薬として応用されることが期待できる〇 以下、本発明ｔ−実施例によシ、具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ ウィルス非感染ヒト悪性化Ｔ細胞株の培養上清について
、ルー３ｖｊ引物質添加無添加の培養上清中のＩＬ−３
活性測定の結果を第１表に示す。 ＣＣＲＦ −０１Ｍ細胞、８ｏｍｍａｒ細胞など各種腫
瘍細胞株をＲＰＨＩ −１６４０培地（１０嗟ＦＢ８含
有）に細胞濃度がｌＸｌ０ 個／ゴになる様に加え、２
４穴培養プレートで２４時間、３７℃にて、５ｓｃｏ□
インキ−ベーター内で培養した後、遠心分離にて、その
培養上清を採取し培地中に産生された！Ｌ−３産生量を
測定した。 尚、ＩＬ−３誘引物質として、Ｃ（１！ＩＡ ＊ ＰＨ
Ａ ＩＰＭＡなど、実施例１に示された濃度となる様に
添加し、同様に培養して培養上清を得た。 ＩＬ−３活性の測定は、以下の方法に従った。 ９６大組織培養プレートの個々の穴に、ＩＬ−３活性を
検定しようとする検体を１００μ）ずつ入れ、ＲＰＭＩ
１６４０＋１０％ ＦＢＳ培地にて２倍希釈を繰シ返
すＯそとに−Ｄｅｘｔ・１等樹立された１１．−３依存
性細胞株でおるＦＤＣ−Ｐ細胞を５Ｘ１０’個／１００
μｌの濃度として、各穴に１００μノずつ添加する。３
７℃。 ５９６ ＣＯ□下で１８時間培養後に、トリチウム化チ
ミジン１μＣ１を加え、６時間／ｌルスを行なった後、
この分野で良く知られた方法に従って細胞を集め、細胞
内に堰９込まれた放射線量を測定した。ＩＬ−３活性の
高い培養上清はど、ＦＤＣ−Ｐ細胞内に取シ込まれるト
リチウム化チミジン量が多いことから、培養上清中のＩ
Ｌ−３産生食を容易に知ることが出来るＯ 第１ｆｉに示す如く、実施したいずれの細胞の培養上清
中にも、ＩＬ−３誘引物質共存下、非共存下、いずれも
対照と比べて明らかに、組−チミジンの取シ込み量が上
昇していることがわかる。なお実施例には示してないが
、ＣｏｎＡ ＊ ＰＨＡ ＊ ＰＭＡなどＩＬ−３９引
物質だけではＦＤＣ−Ｐ細胞の５Ｈ−チミジンの取シ込
みにはなんら作用しないことが確かめられている。 このことは、実施例１に示したヒト細胞はいずれも、Ｉ
Ｌ−３をＩＩ、−３１Ｊ引物質共存下、非共存下濾生し
ていることを示している。 実施例２ ウィルス非感染悪性化非Ｔ細胞の培養上清について、Ｉ
Ｌ−３誌引物質添加、無嚇加の培養上清のＩＬ−３活性
測定の結果を第２表に示す。 ＴＨＰ−１、Ｕ−９３７のウィルス非感染悪性化非Ｔ細
胞を実施例１と同様に培養し、培養上清を得た。 第２表に示した如く、顆粒球白血病細胞であるＴＨＰ−
１、Ｕ−９３７の細胞においても、ルー３誘引物質共存
下非共存下、ＬＬ−３ｔ−産生じていることが理解され
る。
Claims (1)
- （１） ヒトインターロイキン３産生能を有するウィル
ス非感染ヒト悪性化細胞を培養し、培地中に蓄積された
ヒトインターロイキン３ｔ−採取することを特徴とする
ヒトインターロイキン３の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6233584A JPS60207594A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ヒトインタ−ロイキン３の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6233584A JPS60207594A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ヒトインタ−ロイキン３の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60207594A true JPS60207594A (ja) | 1985-10-19 |
Family
ID=13197154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6233584A Pending JPS60207594A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | ヒトインタ−ロイキン３の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60207594A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988006161A1 (en) * | 1987-02-18 | 1988-08-25 | Schering Biotech Corporation | Human interleukin-3 and muteins thereof |
| EP0285429A2 (en) * | 1987-03-31 | 1988-10-05 | Ube Industries, Ltd. | Interleukin 3 producing cells and process for preparing interleukin 3 |
| JPS6452533A (en) * | 1987-08-20 | 1989-02-28 | Toyota Motor Corp | Double reflection type virtual image display |
| JPS6456239A (en) * | 1987-08-26 | 1989-03-03 | Toyota Motor Corp | Virtual image displaying means integrally incorporated with mirror |
| US4877729A (en) * | 1986-07-14 | 1989-10-31 | Genetics Institute, Inc. | Recombinant DNA encoding novel family of primate hematopoietic growth factors |
| WO1990001039A1 (en) * | 1988-07-20 | 1990-02-08 | Immunex Corporation | Nonglycosylated human interleukin-3 compositions |
| US4959455A (en) * | 1986-07-14 | 1990-09-25 | Genetics Institute, Inc. | Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions |
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-
1984
- 1984-03-30 JP JP6233584A patent/JPS60207594A/ja active Pending
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