JPS63316735A - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は子嚢菌類（子嚢地衣類、Ａｓｃｏｍｖｃｃｔｅ
ｓ）に属するレカレラ目、スフエリア目、ビンボケ目、
ヒステリウムロ、グレオスベラロ又はミリアンギウム目
のコケから抽出される多糖体又は蛋白多糖体（以下、本
物質と略記することがある。）を有効成分とする抗ウィ
ルス剤に関するものである。

因みに、本発明における菌の分類は古村著「原色日本地
衣植物図鑑］（昭和５２年７月１日保育ｖ発と、近年法
々にウィルス病が話題の焦点となっている。ウィルス病
に対してはこれまでワクチンによる予防接種で対応し、
天然痘根絶をはじめ、黄熱、ポリオの制圧がなされてき
た。しかしＡＩＤＳなどのように持続感染や潜伏感染が
問題となる病気に対してはワクチンだけでは対抗できず
、安全ですぐれた効果を示す抗ウイルス感染症剤の開発
が期待されているのが現状である。そこで、本発明者ら
は各種の桑剤を鋭意検討したところ驚くべきことに、°
本発明の前記多糖体又は蛋白多糖体が抗ウイルス感染作
用の薬理効果を有していることを知見し、本発明に至っ
たものである。

本発明のコケから本発明の物質の抽出に際して含有する
水溶液から選択される１種又は２種以上の組合せよりな
るものである。有機溶媒としてはメタノール、エタノー
ル、イソプロピルアル」−ルなどが主として用いられる
。酸としては、塩酸、硫酸、酢酸などである。塩基とし
ては、アンモニ１７、苛性ソーダ、苛性ノノリ、炭酸ソ
ーダなどである。抽出は原料〈乾燥Ｘ５　ｔ￥）に対し
て５倍乃至２００倍ｍの抽出液を使用し、通常は４℃乃
至１２０℃で２０分乃至２０時間処理するものである。

精製処理工程とは、塩析、透析、限外紹過、逆滲透処理
、ゲル濾過、有機溶媒による沈澱処理などの１種又は２
種以上の方法の適用により低分子物を除去することを意
味するものである。工学的には加圧による膜分離法であ
る限外濾過払、逆滲透処理法の単独又は組合せが特に好
ま【ノい。又場合により塩析工程後これらの処理を行っ
てらよい。

塩析工程に用いる塩析剤は硫安、９塩、塩化力り、炭酸
バリウム等であるが、硫安の使用が最ら好ま［）い１．
又塩析工程の後処理として透析、限外濾過、ゲル濾過、
逆滲透処理等のいずれか１つ又はこれらの２以上の工程
の組合せが必要である。

透析は通常セロファン膜、］ロジオン膜なとの半透１模
を用いて実施されるものである。ゲル濾過はデ↑ストラ
ン又はポリアクリルアミドゲルなど→÷＋÷を充填した
カラムを用いて実施する。セファデックス、バイオゲル
の名称で販売せられている充填剤が通常用いられる。

限外濾過、逆７９透圧法はいずれも加圧下で膜を用いて
分画する方法である。前者は０．５・〜５に！７／ｃｄ
１後台は２０〜３５Ｋｇ／ｃｄで行うのが通常である。

有機溶媒による沈澱法はメタノール、ｘｒ、タノール、
イソプロパツール、アセトンなどを用いるのが一般的で
ある。又、上記操作に加えて必要に応じイオン交換処理
を行っても良い。

上記精製操作が終った後は噴霧乾燥、凍結乾燥などで水
分を除去した後製品化するものである。

又、本物′ζｌをジエチルアミンエチル（ＤＥΔＦ〉用
いたクロマトグラフィーで更に精製を行ナナ、イしい。

本発明の物質は、α−ナフトール硫酸反応、インドール
１ｉＡＦ１１ｆ反応、アンスロン＠酸反応、フェノ分析
の結果、炭素２０〜５５％、水素３〜９％、窒木０〜１
６０％を１成分として含有する。

赤外スペクトルを測定すると、３６００〜３２００Ｃ，
−’付近に水酸基の吸収及び又は、　１７００〜１６０
０ｃ、−１付近には、アミド基に由来する吸収を認める
ことが出来た。

本物質は水系溶媒に可溶で、有機溶媒に不溶である。水
系溶媒は水又は水を主体として水にｔＴＪ溶のアルコー
ル、酸、塩基等を含むものであり、有機溶媒はクロロホ
ルム、ベンピン、Ｔ−デル等を言う。

本物質は白色又は褐色で平均分子量はゲルを過クロマト
グラフィーにより１０３〜１０６ｔ’ある。

ラット（５童系）４〜５週令、体重１００〜１！＋０３
のものを用い、本物質を１０００η／　Ｋ９　Ｉ！　［
−１投！ラシ、７日間観察を行ったが全匹生存していた
。

本物質は゛その毒性が極めて低く口つ副管用も殆んど生
起しないなど安全な物質である。

一般にウィルスは、標的細胞に付着し、ウイルスの核酸
が、細胞内に注入され、さらに細胞のゲノムにインチグ
レートされる過程を経てウィルスが？８２製されること
が知られている。また、特にレトロウィルスについては
、細胞のゲノムにインチグレートされる前に、１クイル
ス由来の核酸であるＲＮＡから、逆転写酵素の作用によ
ってＤＮＡに転写される過程が必要である。

本発明者等は、本発明の多糖体又は蛋白多糖体が１」Ｉ
　Ｖ　（Ｈｕｍａｎ　ｌｍ１ｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃ
ｙ　Ｖｉｒｕｓ）のヒト由来リンパ系細胞への吸着およ
びそれに引き続く感染を阻害すること、および、逆転写
酵素活性を阻害することを見出した。すなわち、ＨＩ　
Ｖを５・−１０００埒／ｄのｍ度の本物質で０℃にて２
時間処理したｌｔ−１１Ｖを洗浄し、Ｍ　Ｔ　＝４細胞
に加えて感染させ、３日間培養後のＨＩＶ抗原陽性細胞
を測定する方法にて、本物質の効果を検討したところ、
本物質による前処理により、ＨＩＶ抗原陽性細胞がはと
ｌυど消失し、１」Ｉ　Ｖのヒト由来リンパ系細胞に対
する強い吸着阻害効果が認められた。

一方、本物質の逆転写酵素活性に及ぼす影響をラット肝
臓全メツセンジャーＲＮＡを鋳型として測定したところ
、本物質５００／＃／−の添加により強い逆転写酵素活
性の阻害がみられた。

これらのことは本物質がウィルスの感染を阻害する作用
をもつこと、特に逆転写酵素をもつしトロウィルスの感
染を阻害すること、就中、１」Ｉ　Ｖ感染によって引き
起こされるＡＩＤＳ−一渉一疹１＝ｅ−に碑４補軸ｌ綽
に有効であることを示すものである。

３′− 抗ウィルス剤としてすでに使用されてい牙うジドー３°
−アＡヤシチミジン（ＡＺＴ）の場合、正常細胞に対し
ても分裂阻害作用を示す副作用がみられるが、本発明の
多糖体又は蛋白多糖体は急性毒性も極めて低く、安全な
物質であり、ウィルス感染、特にレトロウィルス感染を
阻害する作用を示−づことより抗ウイルス感染症剤とし
て有用である。

即ち、ウィルス感染症、特にレトロウィルス感染症、就
中ＡＩＤＳに有効である。

本発明の多糖体又は蛋白多糖体は、抗ウイルス感染症剤
として用いる場合、任意の剤型にすることかできる。又
、投与も各経路で行なわれる。更に、本発明の薬剤は、
ウィルス感染症治療剤として用いられている前記のＡＺ
Ｔなどとの併用においてら効力を減することがなく、こ
れら他の薬剤との併用は有効な手段として使用し得る。

経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、
散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に製剤上一
般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊
剤、湿潤剤のような添加物を含有していてもよく、又経
日用液体製剤とし′（用いる場合は、内用水剤、振盪合
剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく
、又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であっ
てもよい。さらに、このような液体製剤は６通用いられ
る添加剤、保存剤のいずれを含有してもよい。

注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存
剤、等張化剤などの添加剤を含んでいてもよく、単位投
与量アンプル、又は多投５量容器中で提供される。なお
、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性または水性
ビヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方活
性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質
不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。

本発明の抗ウイルス感染症剤は人間及び動物に経口的ま
たは非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包
含する。非杼口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注
射、点滴などを含む。本発明の抗ウイルス感染症剤の投
与量は動物か人間ににより、また年齢、個人差、病状な
どに影響されるので、場合によっては下記範囲外の吊を
投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象とする場合
、本発明活性物質の経口投与値は体重ＩＫ９．１日当り
０．１〜１１０００ＩＲ、好ましくは１〜１００　＃Ｉ
！］を１回から３回に分けて投与覆る。

以下、実施例を示す。

実施例　ル カレラ目イワタケ科のイワタケ１００ｇを細片化し、容
ｌ１ｉ１３１のステンレス製タンクに入れ２００〇−の
水を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９５℃に保った。約
３時間抽出したのち、室温まで冷Ｆｌ’ｌた。

抽出スラリーを遠心分離機により抽出液と残漬とに分離
した。更に残漬に０．４Ｎ−Ｎａ０１１２０００　ｔｒ
ｔｌを加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのち、室
温まで冷却し、２Ｎ−ＨＣＩでｐＨを７．０に調整後、
遠心分離し抽出液と残漬に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４ＱＱｄまで濃縮し
、限外濾過により）脱塩１股凍結乾燥により乾燥し、２
６．０びの乾燥物をｉＦＪた。

実燕例　２ レカノラ目イワノリ科カワホリゴケ１００ｇを細片化し
、容量３避のステンレス製タンクに入れ２０００ｍの水
を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９５℃に保った。約３
時間抽出したのら、室温まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分１ｉｆｔ機により抽出液と残漬と
に分離した。更に残渣に０．４８−ＮａＯＨ２０００ｍ
を加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのら、室温ま
で冷却し、２Ｎ　−ＨｃｌでＩ’１１を７．０に調整後
、遠心分離し抽出液と残渣に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００ＩｎＩｌまで
Ｉｌｌ縮し、限外濾過により低分子吊物を除き、凍結乾
燥により乾燥し、１１．２９の乾燥物を得た。

実施例　３ ビンボケ目ビンゴヶ科オオビンゴケ１００ｇを細片化し
、容ケ３１のステンレス製タンクに入れ２０００ｄの水
を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９５℃に保った。約３
時間抽出したのら、室温まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分Ｍ機により抽出液と残漬とに分離
した。更に残漬に２０００ａ＆の水を加えて９０〜９５
℃にて３時間抽出したのち、室温まで冷却し、遠心分離
し抽出液と残漬に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００ｄまで濃縮し
、凍結乾燥により乾燥し、１４．３９の乾燥物を得た。

実施例　４ ヒステリウムロイワボシゴケ科イワボシゴケ１００　ｇ
を細片化し、容Ｍ　３１！のステンレス製タンクに入れ
２０００ｄの水を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９５℃
に保った。約３時間抽出したのち、室温まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分ｍｉにより抽出液と残渣とに分離
した。更に残渣に２０００７の水を加えて９０〜９５℃
にて３時間抽出したのち、室温まで冷却し、遠心分離し
抽出液と残漬に分離した。

抽出液は合し、減り濃縮装！により４００−まで濃縮し
、凍結乾燥により乾燥し、１０．２　ｇの乾燥物を得た
。

実施例　５ 実施例３で得られたオオビンゴケ熱水抽出乾燥物２グを
ｌＮ−Ｎａ０１１に溶解し、１２０℃、２０分間加熱処
理を行った。加熱処理終了後、室温に冷却し、６Ｎ　−
ＨＣＩでｐＨを７．０に調製したのら、不溶物は遠心分
離により分離した。１消は限外濾過により脱塩を行なっ
たのち凍結乾燥により乾燥し、乾燥物０．６ｇを１９だ
。

実施例１〜５で各種コケより新しく抽出された物質の物
理化学的性質を表１にまとめて示した。

木表において、フェノール硫酸呈色反応は糖類の存在を
示し、ローリイ・フォーリン法はペプチド結合の存在を
示している。分子量についてはゲルｅ適法によって平均
的に多く存在する両分を記載した。

実施例　６ 実施例１〜５で得られた物質について、レトロウィルス
が特異的に保持する逆転写酵素の阻？＆Ｆ度を以下の方
法により測定した。

被験物質はづべて凍結乾燥品１０ＩＩｇを滅菌蒸留水１
０ｄに溶解した（１１度：１１ＩＩＩ／ｄ）。

１ｇの２０慣ＨＯ，Ｔ、Ｔ、　（ジチオスレイトール：
シグマ社製）、５Ｊ１１の５倍濃度酵素反応液（２５０
１８ＴｒｉＳ−ｌＩＣ１ｌ（１）Ｈ８，３）−２５０１
１１８ＫＣｊ　−４０１８ＮｏＣ１！２　）、１薦の３
ｄ　ＮＴＰ溶液（１ｍＨｄＡＴＰ−１ｍＨＧＴＰ−１−
ＨｄＴＴＰ：シグマ社製）、２成の１００４　／　ｓｅ
オリゴ（ｄＴ）　　　　（ＰＩ−ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌｓ社！Ｊ）、１屑のメ１２〜１８ ラセンジャーＲＮＡ（正常ラット肝臓由来：１埒／成）
、０．５７ｄのＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　（１
Ｇ　ｕｎｉｔ／　ｐｌ　：宝酒造社製）と鷹の［α−３
”Ｐ　］　　ｄＣＴＰ（約８００Ｃｉ／ｍｎｏｌ　、　
１０μＣｉ／ｉ１１：アマジャムジャパン社製）を１．
５７容けの１ツペンドルフチユーブに加え、３７℃ウォ
ーターバス中においた。

５分後、先に調製した１１！ｇ／ｌ１１！濃度の被験物
質１２．５ｍを反応チューブに添加し、更に１ｐの逆転
写酵素（７コニツト／μ：宝酒造社製、ＲＯｔｌＳａｓ
ｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ由来）を加え、最終反応
液量を２５４として、３１℃で反応さゼた。

１時間侵５成の反応液を２　ｃｙａ　Ｘ　２　ａｓのＤ
ＥＡＥ紙（！ａ洋鑵紙社製）にしみこませ、風乾俊、＆
１紙１枚あたり１０ｍの０．５８−Ｎ　ａ　２８　Ｐ　
Ｏ４水溶液に浸し振盪しながら、濾紙上のＤＮＡ合成に
使用されなかった［α−３２Ｐ　１　　ｄＣＴＰを洗浄
した（この操作を５分間おきに５回実施した）。

その４１）１０Ｉｄの液体シンチレーションカクテル（
アマジャムジャパン社製）の入っているガラスバイヤル
瓶に上記ＤＥＡＥ紙を入れ、シンチレーションカウンタ
ー（７０力社製）にて１分間放射活性（Ｃ，Ｄ、１．）
をカウントした。

阻害率ｍは以下の式により求めた。

Ｃｏ−Ｃ５ Ｍ害率ｍ＝　　　　　　　　Ｘ１００ Ｏ Ｃｏ：被験物質非添加の放射活性 Ｃ８：被験物質添加の放射活性 各被験物質の逆転写酵素活性阻害効果を表２に示Ｖ。

表２　逆転写酵素活性阻害効果 ＋：２０％＜＞４０％、　　＋＋：４（１％＜＞８０％
　　、　　＋４４：８０％＜実施例　７ 被験物質によるＨＩＶ（ＡＩＤＳウィルス）のヒトリン
パ球への吸着阻害は以下の方法により実施した（尚、す
べての操作は無菌条ｆｌ″′Ｆで７１なった）。

１−（Ｉ　Ｖ　（ｌｌｕｍａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｄｃｆｉ
ｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）浮′ｙｒＬ液１ｄと被験物
質溶液（８００埒／ｄ）１ｍを試験管に入れ、水中に静
置した。２時間俊試験管から　１成のウィルス浮遊液を
とり、ヒトリンパ球由来細胞株ＭＴ−４［Ｊｐｎ、　Ｊ
、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　（Ｇａｎｎ）　、　２
８゜２１９−２２９　（１９８２）］に多多感感染度）
１．０．１．）勾２て゛ウィルスを吸着させた。遠心（
毎分２，０００回転。

１０分間）後、上清を１で、沈澱したＭ−ｒ−４！ＩＩ
胞を２０％ＦＣ８を含むＲＰ　Ｍ　Ｉ　１６４０（ＧＩ
ＢＣＯＬａｂｏｒａｔｏ−ｒｉＧＳ、ＮＹｌ中に、細胞
温度２ｘ１０”／瀬になるように〃遊させた。

９６穴プレートに上記ＭＴ−４細胞浮遊液を　１００７
Ｊづつ分注して、５％ＣＯ２，３７℃の条件下で培養し
た。培養３日口に間接蛍光抗体法により）−ＩＴＶネー
１〜結合「クサギ抗ヒトＩｇＧ（免疫グロブリン）と３
７℃で反応させた。

蛍光顕微鏡下で５００個のＭＴ−４細胞を１察し、蛍光
陽性細胞をＨＩ　Ｖ感染細胞として算出した。

被験物質のＨＩ　Ｖのヒトリンパ球への吸着阻害効果を
表３に示す。

表　３　　吸着阻害効果 実施例　８ 圧力式自動充填機を用い、ＯＤ硬カブ廿ルに本物質を３
３０Ｉｔｇ充填しカプセルを作成した。

手続補正書 １．事イゴの表示　　　昭和６２年特許願第１５２０９
１号２、発明の名称　　　抗ウィルス剤 ３、補正をする者 事例との関係　　特許出願人 名　称　　　　（１１０）呉羽化学工業株式会社４、代
　理　人　　　東京都新宿区新宿１丁目１番１４号　山
田ピル明　　　　細　　　　書 １、発明の名称 抗ウィルス剤 ２、特許請求の範囲 〈１）　　子嚢菌類（子嚢地衣類、＾５ＣＯＩｖＣｅｔ
ｅＳ）に属する菌より生産した多糖体又は蛋白多糖体を
有効成分とづる抗ウィルス剤。

■　子嚢菌類に属する菌がレカレラ目、スフエリアロ、
ビンゴケロ、ヒスチリウム目、プレオスベラ口又はミリ
アンギウム目から選ばれたちのである特許請求の範囲第
１項に記載の抗ウィルス剤。

■　イワタケ属、イワノリ属、イワボシゴケ属、ビンボ
ケ属より選ばれたものである特許請求の範囲第２項に記
載の抗ウィルス剤。

ω）　α−す゛フトール硫酸反応、インドール硫酸反応
、アンスロン硫酸反応、フェノール硫酸反応及び又はロ
ーリイーフォーリン法、塩酸加水分解後のニンヒドリン
反応で陽性又は微陽性を示し、元素分析値として炭素２
０〜５５％、水素３〜９％、窒素１６％未満を主成分と
して含有し、３６００〜３２００値−１付近に水酸暴の
赤外線吸収スペクトルの吸収及び又は１７００〜１６０
０ｃ、−１付近にアミド基に由来する赤外線吸収スペク
トルの吸収を有し、（ｉｌ＋は６０〜Ｉ５を示し、水系
溶媒に可溶で、有機溶媒に不溶であり、白色又は褐色で
平均分子量はゲルｅ過クロマトグラフィーにより１０　
〜３Ｘ１０６である特許請求の範囲第１項〜第３項のい
ずれかに記載の抗ウィルス剤。

■　特許請求の範囲第１項の多糖体又は蛋白多糖体を有
効成分とする抗レトロウィルス剤。

Ｓ）　特許請求の範囲第１項の多糖体又は蛋白多糖体を
有効成分とする抗エイズウィルス剤。

３、発明の詳細な説明 本発明は子嚢菌類（子嚢地衣類、八ｓｃｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ）に属づるレカレラ目、スフエリアロ、ビンゴケロ、
ヒステリウムロ、ブレオスペラ目又はミリアンギウム目
のコケから抽出される多糖体又は蛋白多糖体（以下、本
物質と略記する。）をイｉ効成分とする抗ウィルス剤に
関する乙のである。因みに、本発明における菌の分類は
古祠著［原色日本地衣植物図鑑Ｊ　　（ｌｖ７和５和洋
２年７月日保育社介ｂ　）に拠る。

イワタケ属、イワノリ属、イワボシゴケ属、ビンボケ属
が好ましい。

Ｂ型肝炎、成人下細胞白血病さらにはＡＩＤＳ（Ａｃｑ
ｕｉｒｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｃｎｃｙ　Ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ）と、近年法々にウィルス病が話題の焦点
となっている。

ウィルス病に対してはこれまでワクチンによる予防接穂
で対応し、天然痘根絶をはじめ、黄熱、ポリオの制圧が
なされてきた。しかしＡＩＤＳなどのように持続感染や
潜伏感染が問題となる病気に対してはワクチンだけでは
対抗できず、安全ですぐれた効果を示す抗ウィルス剤の
開発が期待されているのが現状である。そこで、本発明
者らは各種の薬剤を１２意検討したところ驚くべきこと
に、本物質が抗ウィルス作用の薬理効果を有しているこ
とを知見し、本発明に至ったものである。

本発明のコケから本物質の抽出に際して用いる水系溶媒
とは水又は水に可溶な有機溶媒、酸、塩基又は塩のいず
れかを少量、例えば１０％程度以下含有する水溶液から
選択される１種又は２種以Ｆの組合せよりなるものであ
る。有機溶媒としてはメタノール、エタノール、イソプ
ロピルアル」−ルなどが主として用いられる。酸として
は、ｉ！ｌ、硫酸、酢酸などである。塩基としては、ア
ンモニヤ、苛性ソーダ、苛性カリ、炭酸ソーダなどであ
る。抽出は原料（乾燥基型）に対して５倍乃至２００倍
吊０抽出液を使用し、通常は４℃乃至１２０℃で２０分
乃至２０時間処理するものである。

精製処理工程とは、塩析、透析、限外濾過、逆滲透処理
、ゲル濾過、有機溶媒による沈澱処理などの１種又は２
種以上の方法の適用により低分子物を除ムすることを意
味するものである。工学的には加圧による膜分離法であ
る限外ｅ適法、逆滲透処ｍ法の単独又は組合せが特に好
ましい。又場合により塩析工程後これらの処理を行って
もよい。

塩析■稈に用いる塩析剤は硫安、食塩、塩化カリ、炭酸
バリウム等であるが、硫安の使用が最し好よしい。又塩
析工程の後処理として透析、限外濾過、ゲル濾過、逆滲
透処理等のいずれか１つ又はこれらの２以上の工程の組
合せが必要である。

透析は通常ｔ？Ｏファン膜、コロジオン膜などの崖透膜
を用いて実施されるものである。グル紹過（よデｌスト
ラン又はポリアクリルアミドゲルなどを充填したカラム
を用いて実Ｘ−する。ゼフ７ｆツクス、バイオゲルの名
称で販売せられている充頃剤が通常用いられる。

限外濾過、逆滲透圧法はいずれも加圧下で膜を用いて分
画する方法である。館者は０．５〜５Ｋｇ／ｃｉ、後者
は２０〜３５に９／ｃｔｉで行うのが通常である。

有様溶媒による沈澱法はメタノール、エタノール、イソ
プロパツール、アセトンなどを用いるのが一般的である
。又、上記操作に加えて必要に応じイオン交換処理を行
っても良い。

Ｌ記聞製操作が終った後は噴霧乾燥、凍結乾燥などで水
分を除去した優製品化するものである。

又、本物質をジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−ヒル
ロース等のイオン交換ヒルロース等を用いたクロマトグ
ラフィーで更に精製を行ない、その吸着物質中塩、アル
カリ等で溶出させると、抗ウイルス効果が強いものが得
られるのでより好ましい。

本物質は、α−ナフトール硫酸反応、インドール硫酸反
応、アンスロン硫酸反応、ノＩノール硫酸反応及び又は
ローリイーフォーリン法、塩酸加水分解優のニンヒドリ
ン反応で陽性又は微陽性を示す。元素分析の結果、炭素
２０〜５５％、水素３〜９％、窒ｊｌｌ！ｉ１６％未満
を主成分として含有する。

赤外線吸収スペクトルを測定すると、３６００〜３２０
０ｃＩＩＩ−’付近に水Ｗ１基の吸収及び又４１７００
〜１６００ｃｍ−１付近には、アミド基に由来する吸収
を認めることが出来た。

ｐＨは６．０〜７．５を丞す。

本物質は水系溶媒に可溶で、有機溶媒に不溶である。水
系溶媒は水又は水を主体として水に可溶のアル１−ル、
酸、塩基等を含むものであり、有機溶媒はクロ０ボルム
、ベンゼン、エーテル等を言う。

本物質は白色又は褐色で平均分子量はゲル濾過り０マド
グラフイーにより１０　〜３Ｘ１０６である。

ラット（６竜系）４〜５週令、体重１００〜１５０りの
ものを用い、本物質を１１０００１ｎ／Ａｉ９経口投与
し、７日間観察を行ったが仝匹生存していた。

本物質はその毒性が極めて低くｄつ副作用も殆んど生起
しないなど安全な物質である。

一般にウィルスは、標的細胞に吸着し、ウィルスの核酸
が、細胞内に注入され、さらに細胞のゲノムにインチグ
レートされる過程を経てウィルスが複製されることが知
られている。また、特にレトロウィルスについては、細
胞のゲノムにインチグレートされる前に、ウィルス由来
の核酸であるＲＮＡから、逆転写酵素の作用によってＤ
ＮＡに転写される過程が必要である。

本発明者等は、本物質がＨ１（Ｈｕｌａｎｌｍｌｕｎｏ
ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）のヒト由来リンパ
系細胞への吸着およびそれに引き続く感染を阻害するこ
と、および、逆転写酵素活性を阻害することを見出した
。すなわら、ＨＩ　Ｖヲ５〜１０００／７９／ｄ（７）
濃度の本物質で０℃にて２時間処理した後ＨＩＶを洗浄
し、Ｍ　Ｔ−４１ｆｆｌ胞に加えＣ吸着させ、３日間培
ｔ＆後のＨＩＶ抗原陽性細胞を測定する方法にて、本物
質の効果を検討したところ、本物質による前処理により
、ＨＩＶ抗原Ｉｌｌ竹細胞がほとんど消失し、ＨＩ　Ｖ
のヒト由来リンパ系細胞に対する強い吸着阻害効果が認
められた。一方、本物質の逆転写酵素活性に及ぼす影響
をラット肝臓全メツセンジャーＲＮＡを鋳型として測定
したところ、本物質５００ｐｓ／　ｄの添加により強い
逆転写酵素活性の阻害がみられた。

これらのことは本物質がウィルスの感染を阻害する作用
をもつこと、特に逆転写酵素をもつレトロウィルスの感
染を阻害すること、就中、ＨＩＶ感染によって引き起こ
されるＡＩＤＳに有効であることを示ずものである。

抗ウィルス剤としてづでに使用されている３°−アジド
−３−デオキシチミジン（△ＺＴ）の場合、正常細胞に
対しても分裂阻害作用を示す副作用がみられるが、本物
質は急性毒性も極めて低く、安全な物質であり、ウィル
ス感染、特にレト［１ウイルス感染をｆｌｉｔ害づる作
用を示Ｊ−ことより抗ウィルス剤として有用である。即
ら、ウィルス感染症、特にしｉ−ロウイルス感染症、就
中ＡＩＤＳに有効である。

本物質は、抗ウィルス剤として用いる場合、任意の剤型
にすることができる。又、投与も各経路で行なわれる。

更に、本発明の薬剤は、抗ウィルス剤として用いられて
いる前記のへＺＴなどとのａｔ用に３３いても効力を減
することがなく、これら他の薬剤との併用は有効な手段
として使用し得る。

経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、
散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に製剤上一
般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊
剤、湿潤剤のような添加物を含有していてもよく、又経
口用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪合剤
、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく、
又使用する前に再溶解さける乾燥生成物の形態であって
しよい。さらに、このような液体製剤は普通用いられる
添加剤、保存剤のいずれを含有してもよい。

注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存
剤、等張化剤などの添加剤を含んでいて−ｂよく、単位
投与量アンプル、又は多投与吊容器中で提供される。な
お、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性または水
性ビヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方
活性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物
質不含の滅菌した水で再溶解さゼる粉末であってもよい
。

本発明の抗ウィルス剤は人間及び動物に杼口的または非
経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包含する
。非経口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注射、点
滴などを含む。本発明の抗ウィルス剤の投与聞は動物か
人間により、また年齢、個人差、病状などに影響される
ので、場合によっては下記範囲外のｍを投与する場合も
生ずるが、一般に人間を対像とする場合、本物質の経口
投与済は体＠　１に’Ｊ、１日当り０１〜１０００ｒＩ
！Ｆ１１好ましくは１〜＋ｏｏ　ｑを１回から３回に分
けて投与する。

以下、実施例を示す。

実施例　ル カレラロイワタケ科イワタケ属のイワタケ１００３を細
片化し、容量３１のステンレス製タンクに入れ２０００
ｄの水を加えて！０１７しつつ温度を９０〜９５℃に保
った。約３時間抽出したのら、室温まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分ｉｎにより抽出液と残渣とに分離
した。更に残渣に０．４Ｎ−ＮａＯＩＩ　２０００　’
ｔｒｔｌを加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのら
、室温まで冷却し、２Ｎ−ＨＣｌでｐＨを７０に調整後
、遠心分離し抽出液と残渣に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００ｄまで濃縮し
、限外濾過により脱塩後凍結乾燥により乾燥し、２６、
Ｏｇの乾燥物を得た。

実施例　２ レカノラ目イワノリ科イワノリ属のカワホリゴケ１００
９を細片化し、容ＦＰｉ３ｊ！のステンレス製タンクに
入れ２０００−の水を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９
５℃に保った。約３時間抽出したのら、室温まで冷却し
た。

抽出スラリーを遠心分１１１ｆｆｌｆｆにより抽出液と
残渣とに分離した。史に残渣に０．４Ｎ−ＮａＯＨ２０
００ｄを加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのち、
室温まで冷却し、２Ｎ〜１１０！でｐｌ＋を７．　Ｏｆ
、：調茎後、遠心分離し抽出液と残渣に分子Ｐｉｔ　し
た。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００＃１１！まで
濃縮し、限外濾過により低分子吊物を除き、凍結乾燥に
より乾燥し、１１．２９の乾燥物を得た。

実施例　３ ビンゴケロビンゴヶ羊１ピンゴケ属のオオビンゴケ１０
０ｇを細片化し、容量　３１２のステンレス製タンクに
入れ２０００ｄの水を加えて撹拌しつつ温度を９０〜９
５℃に保った。約３時間抽出したのら、室温まで冷却し
た。

抽出スラリーを遠心分Ｍ機により抽出液と残渣とに分離
した。更に残漬に２０００ｄの水を加えて９０〜９５℃
にて３時間抽出したのち、室温まで冷却し、速心分離し
抽出液と残渣に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００ｄまで濃縮し
、凍結乾燥により乾燥し、１４．３７の乾燥物を得た。

実施例　４ ヒスチリウム目イワボシゴケ科イワボシゴグ属イワボシ
ゴケ１００ｇを細片化し、容１ｉ３ｊ）のステンレス製
タンクに入れ２０００ｍの水を加えて撹拌しつつ温度を
９０〜９５℃に保った。約３時間抽出したのち、室温ま
で冷却した。

抽出スラリーを遠心分ｌ！１機により抽出液と残漬とに
分離した。更に残渣に２０００ｍの水を加えて９０〜９
５℃にて３時間抽出したのら、室温まで冷却し、遠心分
離し抽出液と残渣に分離した。

抽出液は合し、減圧濃縮装置により４００ｍｅまで濃縮
し、凍結乾燥により乾燥し、１０．２］の乾燥物を得た
。

実施例　５ 実施例３°で得られたオオビンゴケ熱水抽出乾燥物２ｇ
を１８−ＮａＯＨに溶解し、１２０℃、　２０分間加熱
処理を行った。加熱処理終了復、室温に冷却し、６Ｎ　
−１１１４）　Ｆ　ｐＨを７．０にｖＡ製したのち、不
溶物は遠心分離により分離した。上清は限外濾過により
鋭塩を行なったのち凍結乾燥により乾燥し、乾燥物０、
（ｉ　９を得た。

実施例１〜５で各種コケより新しく抽出された物質の物
理化学的性質を表１にまとめて示した。

木表において、フェノール硫酸呈色反応は糖類の存在を
示し、ローリイ・フォーリン法はペプチド結合の存在を
示している。分子Ｗについてはゲル濾過法によって平均
的に多く存在する両分を記載した。

実施例　６ 実施例１〜５で得られた物質について、レトロウィルス
が特異的に保持する逆転写酵素の阻害度を以下の方法に
より測定した。

本物質はすべて凍結乾燥品１０■を滅菌蒸留水１０ｍ１
に溶解したく濃度：１９／ｄ）。

１／７ｊ！の２０　ｍ）ｌ　Ｄ、Ｔ、Ｔ、　（ジヂオス
レイト−ル：シグマ社製）、５ρの５０濃度酵素反応液
（２５０ｍＨ丁ｒｉＳ−ＨＣｊ　　（１）Ｈ８，３）−
２５０ｍＨＫＣＩ　　−４０ｍＨＨｇＣ４２）　　、１
度の３ｄ　ＮＴＰ溶液（１ｍＨｄ＾ＴＰ−１ｍＨｄＧＩ
Ｐ−１ｍＨｄＴＴＰ：シグマ社製）、２ｍの１００〜／
ｄオリゴ（ｄＴ）１２〜１８（ＰＬ−ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌｓ社製）、１ｐｉのメッレンジャーＲＮＡ　（正
常ラット肝臓由来：１１１９７μｌ）、　０．５成のＲ
Ｎａｓｃ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　（１６ｕｎｉｔ／　ｐ
ｍｔ　：宝酒造社製）と１μの［α−３２Ｐ　］　ｄＣ
ＴＰ　（約８００Ｃｉ／ｍａ＋ｏｌ　、　１０．ｃｚｃ
ｉ／１１１：　ア？シｖムシャパン社製）を１．５７容
萌のエツベンドルフチューブに加え、３７℃つＡ−ター
バス中においた。

５分後、先に調製した１■／ｄ濶度の本物質１２．５ｐ
！！を反応チューブに添加し、更に１μの逆転写酵素〈
７ユニツト／１１１：宝酒造ネ１製、Ｒｏｕｓａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ由来）を加え、最終反応液Ｈ
１１を２５鱈として、３７℃で反応させた。

１時間４１５／Ｉｌｉの反応液を２　ｃｒｔｔ　Ｘ　２
　ａｔｒのＤＥＡＥ紙（東洋濾紙社製）にしみこませ、
風乾後、濾紙１枚あたり１０ｄの０．５８−Ｎ　ａ　２
１−Ｉ　Ｐ　０４水溶液に浸し振盪しながら、濾紙上の
ＤＮＡ合成に使用されなかった［α−”２Ｐ　］　　ｄ
ＣＴＰを洗浄した（この操作を５分間おきに５回実施し
た）。

その１１０ｍの液体シンチレーションカクテル（アマジ
ャムジャ′パン社製）の入っているガラスバイヤル瓶に
上記ＤＥＡＥ紙を入れ、シンブレーションカウンター（
アロカ社製）にて１分間放射活性（ｃ、　ｐ、　ｍ、　
）をカウントした。

逆転写酵素活性阻害率（ｘ）は以下の式により求めた。

逆転写酵素活性　　Ｇｏ−Ｃｓ ■害率ｆ％）＝　　　　　ｘｔＯＯ Ｏ ＣＯ：本物質非添加の放射活性 Ｃ５：重物質添加の放射活性 各本物質の逆転写酵素活性明方率を表２に示す。

表２　逆転写酵素活性阻害率 ＋：２０％＜＞４０％、　　＋＋：４０％＜＞８０％　
　、　　＋＋＋：８０％＜実施例　７ 本物質による１１１Ｖ（ＡＩＤＳウィルス）のヒトリン
パ球への吸着阻害は以下の方法により実施した（尚、す
べての操作は無菌条件下で行なった）。

ＨＩＶＥ”７１液１！ｄと本物質溶液（８００ｐ！ｉ／
ｍ）　１ｄを試験管に入れ、水中に静置した。２時間後
試験管から１ｊ！１！のウィルス浮遊液をとり、ヒトリ
ンパ球由来ＷＡ胞株Ｍ　Ｔ−４［Ｊｐｎ、　Ｊ、　Ｃａ
ｎｃｅｒ　Ｒｃｓ。

（Ｇａｎｎ）　、　２８．２１９−２２９　（１９８２
）］に多ｉ）感染度（Ｈ，０，１，）ζ２でウィルスを
吸着させた。遠心（毎分２，０００回転、１０分間〉後
、上澄液をすて、沈澱したＭＴ−４細胞を２０％ＦＣ８
を含むＲＰＭ１１６４０（ＧＩＢＣＯＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、　ＮＹ）中に、細胞濃度２ｘ１０５／ｄ’に
なるように浮遊させた。

９６穴プレートに上記Ｍ　Ｔ−４ＷＪ胞浮遊液を１００
度ずつ分注して、空気中５％ＣＯ２，３７℃の条件下で
培養した。培養３［１目に間接蛍光抗体法によりＨ［Ｖ
吸着細胞と非吸着ＩＱ１１を算出した。

ずなわちＭＴ−４細胞をメタノール処理により固定化し
、抗ＨＩＶ感染ｇＡ？！血清と３１℃で反応させた。３
０分後１’Ｒ８で細胞を洗浄し、フルオレッセインイン
チオシアネート結合ウサギ抗ヒト１（］Ｇ（免疫グロブ
リン）と３７℃で反応させた。

１３１１微鎮下ｒ　５００１１ｕ（７）ＭＴ−４１１１
１ｆａを観察し、蛍光陽性ｍ胞をＨＩＶ吸着１１Ｂ＆と
してｎ出した。

本物質のＨＩＶのヒトリンパ球への吸着阻害率を表３に
示す。

）ＨＩＶＭ着阻害率（％）は次式で求めた。

本物質のＨＩＶのヒトリンパ球への吸着阻害率を表３に
示す。

表　３　　吸着阻害率 実施例　８ 圧力式自動充填機を用い、０号硬カプセルに実施例１の
本物質を３３０＃＋９充填し、カプセルを作成した。。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）子嚢菌類（子嚢地衣類、Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ
   ）に属する菌より生産した多糖体又は蛋白多糖体を有効
   成分とする抗ウィルス剤。
2. （２）特許請求の範囲第１項の多糖体又は蛋白多糖体を
   有効成分とする抗レトロウィルス剤。
3. （３）特許請求の範囲第１項の多糖体又は蛋白多糖体を
   有効成分とする抗エイズウィルス剤。